JP2017520533A - 抗ｈｅｒ２抗体−メイタンシンコンジュゲート及びその方法 - Google Patents

抗ｈｅｒ２抗体−メイタンシンコンジュゲート及びその方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、抗ＨＥＲ２抗体−メイタンシンコンジュゲート構造を提供する。本開示は、また、かかるコンジュゲートの生成方法、ならびにその使用方法を包含する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
米国特許法第１１９条（ｅ）に従って、本出願は、２０１４年６月６日に出願された米国仮出願第６２／００８，９８０号出願日に対する優先権を主張するものであり、本出願の開示は参照として本明細書に全体が組み込まれる。
序論
タンパク質−小分子治療用コンジュゲートの分野は、非常に進歩し、多くの臨床的に利益のある薬剤が提供され、今後、さらに多くのものが提供される見込みがある。タンパク質−コンジュゲート治療薬剤は、いくつかの利点をもたらすことができ、例えば、特異性、機能の多様性及びオフターゲット作用の比較的少なさのため、副作用が少なくなる。タンパク質の化学修飾が、これらの利点をさらに強力、安定的、または多様にすることによって、これらの利点を拡張する可能性がある。
タンパク質に翻訳後修飾を生成し、操作するために、多くの標準化学変換が、一般に用いられる。選択的に特定のアミノ酸の側鎖を修飾することができる多くの方法がある。例えば、水溶性カルボジイミド試薬による初期作用及びアミンによる次の反応により、カルボン酸側鎖（アスパルテート及びグルタメート）を標的としてよい。同様に、活性化エステルまたはイソチオシアネートを使用することによって、リジンを標的とすることができ、マレイミド及びα−ハロ−カルボニルにより、システインチオールを標的とすることができる。
化学的に変化したタンパク質治療薬剤または試薬の生成に対する１つの重要な障害が、生物学的活性がある均質形態でのタンパク質の生成である。薬剤または検出可能標識をポリペプチドに共役するのを制御することが困難である可能性があり、その結果、結合される薬剤分子の数及び化学共役の位置が異なるコンジュゲートの異質混合物となる。いくつかの例では、ポリペプチド上の化学結合の正確かつ選択的形成に向けた合成有機化学の道具を用いて、共役の部位及び／またはポリペプチドに共役される薬剤または検出可能標識を制御することが好ましい可能性がある。
概要
本開示は、抗ＨＥＲ２抗体−メイタンシンコンジュゲート構造を提供する。本開示は、また、かかるコンジュゲートの生成方法、ならびにその使用方法を包含する。
本開示の態様が、式（Ｉ）の少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含むコンジュゲートを含む。
Figure 2017520533
 式中、
Ｑ１が、ＣまたはＮであり、Ｑ１が、Ｎである場合、Ｙ１は、ない；
Ｙ１が、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｒ１が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｒ２及びＲ３それぞれが、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される、またはＲ２及びＲ３が、任意で、環状結合し、５または６員環ヘテロシクリルを形成する；
Ｌが、−（Ｔ１−Ｚ１）ａ−（Ｔ２−Ｚ２）ｂ−（Ｔ３−Ｚ３）ｃ−（Ｔ４−Ｚ４）ｄ−を含むリンカーであり、式中、ａ、ｂ、ｃ及びｄそれぞれが、独立して０または１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、１〜４である；
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４それぞれが、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択され、式中、ＥＤＡが、エチレンジアミン部分であり、ＰＥＧが、ポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコールであり、ＡＡが、アミノ酸残基であり、式中、ｗが、１〜２０の整数であり、ｎが、１〜３０の整数であり、ｐが、１〜２０の整数であり、ｈが、１〜１２の整数である；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４それぞれが、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から独立して選択され、式中、ｑが、１〜６の整数である；
各Ｒ１３が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールから独立して選択される；
各Ｒ１５が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される；
Ｗ１が、マイタンシノイドである；及び
Ｗ２が、抗ＨＥＲ２抗体である。
特定の実施形態では、
Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル及び置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルから選択される；
Ｔ２、Ｔ３及びＴ４それぞれが、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択される；及び
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４それぞれが、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から独立して選択される；
式中、
（ＰＥＧ）ｎが、
Figure 2017520533
 であり、ｎが、１〜３０の整数である；
ＥＤＡが、以下の構造：
Figure 2017520533
 を有するエチレンジアミン部分であり、ｙが、１〜６の整数であり、ｒが、０または１である；
ピペリジン−４−アミノが、
Figure 2017520533
 である；及び
Ｒ１２及びＲ１５それぞれが、水素、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分、アリール及び置換アリールから独立して選択され、式中、任意の２つの隣接Ｒ１２基が、環状結合して、ピペラジニル環を形成する。
特定の実施形態では、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４及びＺ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４が、以下の表から選択される。
Figure 2017520533
Figure 2017520533
特定の実施形態では、Ｌが、以下の構造のうちの１つから選択される。
Figure 2017520533
Figure 2017520533
Figure 2017520533
式中、
各ｆが、独立して、０または１〜１２の整数である；
各ｙが、独立して、０または１〜２０の整数である；
各ｎが、独立して、０または１〜３０の整数である；
各ｐが、独立して、０または１〜２０の整数である；
各ｈが、独立して、０または１〜１２の整数である；
各Ｒが、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルである；及び
各Ｒ’が、独立して、Ｈ、アミノ酸の側鎖基、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルである。
特定の実施形態では、マイタンシノイドが、以下の式であり、
Figure 2017520533
Figure 2017520533
 が、マイタンシノイド及びＬ間の結合点を示す。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：／／のアミノ酸５２９−６２５内のエピトープを結合する。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：／／のアミノ酸５６１−６２５内のエピトープを結合する。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：／／（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）及び配列番号：／／（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ）の軽鎖ＣＤＲを含む抗体との結合と競合する。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：／／（ＤＴＹＩＨ）、配列番号：／／（ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ）、及び配列番号：／／（ＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖を有する抗体との結合と競合する。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：／／（ＤＴＹＩＨ）、配列番号：／／（ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ）、及び配列番号：／／（ＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖及び配列番号：／／（ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ）、配列番号：／／（ＳＡＳＦＬＥＳ）、及び配列番号：／／（ＱＱＨＹＴＴＰＰＴ）のＣＤＲを含む軽鎖を含む。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：／／（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：／／（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ）に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８である。
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、式（ＩＩ）の配列を含む。
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１が存在してよい、または存在しなくてよく、存在する場合、配列が、コンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が、存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、独立して、任意のアミノ酸である。
特定の実施形態では、配列が、Ｌ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲである。
特定の実施形態では、
Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択される；
Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択される；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される。
特定の実施形態では、修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖不変領域のＣ−末端に位置する。
特定の実施形態では、重鎖不変領域が、式（ＩＩ）の配列を含む。
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１が存在してよい、または存在しなくてよく、存在する場合、配列が、コンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が、存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、独立して、任意のアミノ酸であり、及び
配列が、アミノ酸配列ＳＬＳＬＳＰＧへのＣ−末端である。
特定の実施形態では、重鎖不変領域が、配列ＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含む。
特定の実施形態では、
Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択される；
Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択される；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される。
特定の実施形態では、修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖不変領域に位置する。
特定の実施形態では、軽鎖不変領域が、式（ＩＩ）の配列を含む。
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０（ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１が存在してよい、または存在しなくてよく、存在する場合、配列が、コンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が、存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、独立して、任意のアミノ酸であり、及び
配列が、配列ＫＶＤＮＡＬへのＣ−末端である、及び／または、配列ＱＳＧＮＳＱへのＮ−末端である。
特定の実施形態では、軽鎖不変領域が、配列ＫＶＤＮＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱを含む。
特定の実施形態では、
Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択される；
Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択される；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される。
特定の実施形態では、修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ１領域に位置する。
特定の実施形態では、重鎖ＣＨ１領域が、式（ＩＩ）の配列を含む。
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である；
Ｘ１が存在してよい、または存在しなくてよく、存在する場合、配列が、コンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が、存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、独立して、任意のアミノ酸であり、
配列が、アミノ酸配列ＳＷＮＳＧＡへのＣ−末端である、及び／またはアミノ酸配列ＧＶＨＴＦＰへのＮ−末端である。
特定の実施形態では、重鎖ＣＨ１領域が、配列ＳＷＮＳＧＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＶＨＴＦＰを含む。
特定の実施形態では、
Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択される；
Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択される；及び
Ｘ２及びＸ３それぞれが、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される。
特定の実施形態では、修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ２領域に位置する。
特定の実施形態では、修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ３領域に位置する。
本開示の態様が、本開示のコンジュゲート、及び製剤的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を含む。
本開示の態様が、被験者に有効量の本開示のコンジュゲートを投与することを含む方法を含む。
本開示の態様が、被験者の癌の治療方法を含み、当該方法が、治療有効量の本開示のコンジュゲートを含む医薬組成物を被験者に投与することを含み、当該投与が、被験者の癌を治療するのに有効である。
本開示の態様が、被験者の標的部位への薬剤の送達方法を含み、当該方法が、本開示のコンジュゲートを含む医薬組成物を被験者に投与することを含み、当該投与が、被験者の標的部位で当該コンジュゲートから治療有効量の薬剤を放出するのに有効である。
図１のパネルＡは、標準分子生物学技術を用いて、抗体主鎖の所望の位置に挿入されたホルミルグリシン−生成酵素（ＦＧＥ）認識配列を示す。発現時、真核生物細胞内部から生じるＦＧＥが、コンセンサス配列内でＣｙｓのホルミルグリシン残基（ＦＧｌｙ）への変換に触媒作用を及ぼす。図１のパネルＢは、ヒドラジノ−イソ−ピクテ−スペングラー（ＨＩＰＳ）リンカー及びペイロードと反応し、部位−特異的に共役されたＡＤＣを生成するアルデヒド部分（１抗体当たり２つ）を保持する抗体を示す。図１のパネルＣは、中間ヒドラゾニウムイオンを介して進み、続いて、求核インドールで分子内アルキル化が進み、安定したＣ−Ｃ結合を生成するＨＩＰＳ化学を示す。 図２（上部）は、軽鎖（ＬＣ）中の１つの位置及び重鎖中の７つの位置（ラベルＡ〜Ｇ）でのアルデヒドタグを示す。これらのタグを保持する抗体が生成され、異なる部位で共役されたＡＤＣを生成する最初のステップで分析された。図２（下部）は、これらの試験に用いられるＡＤＣのリンカー及び細胞傷害性ペイロードとして役割を果たすＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシン２０の構造を示す。 ＬＣ−、ＣＨ１−、及びＣＴ−標識抗体の均質ＡＤＣへの変換についての疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）分析のグラフを示す。非共役抗体が１つのピークとして抽出された。ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンへの共役後、ＡＤＣがジ−共役物質（右）として抽出された。非共役物質から共役されたこのクリーン分離により、コンジュゲート濃縮及び薬物抗体比（ＤＡＲ）の単純測定が可能となった。 ホモサピエンスＨＥＲ２受容体のアミノ酸配列を提供する。 図５Ａ及び５Ｂは、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体のＶＨ（図５Ａ）及びＶＬ（図５Ｂ）領域のアミノ酸配列を提供する。 図５Ａ及び５Ｂは、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体のＶＨ（図５Ａ）及びＶＬ（図５Ｂ）領域のアミノ酸配列を提供する。 図６Ａ〜Ｅは、抗ＨＥＲ２抗体の野生型（ＷＴ）及び修飾された重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を提供する。太字の残基が、ＶＨ及びＶＬ領域である。太字で、下線を引いたＬＣＴＰＳＲ残基が、ＦＧｌｙに変換されるシステインを含む。 図６Ａ〜Ｅは、抗ＨＥＲ２抗体の野生型（ＷＴ）及び修飾された重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を提供する。太字の残基が、ＶＨ及びＶＬ領域である。太字で、下線を引いたＬＣＴＰＳＲ残基が、ＦＧｌｙに変換されるシステインを含む。 図６Ａ〜Ｅは、抗ＨＥＲ２抗体の野生型（ＷＴ）及び修飾された重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を提供する。太字の残基が、ＶＨ及びＶＬ領域である。太字で、下線を引いたＬＣＴＰＳＲ残基が、ＦＧｌｙに変換されるシステインを含む。 図６Ａ〜Ｅは、抗ＨＥＲ２抗体の野生型（ＷＴ）及び修飾された重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を提供する。太字の残基が、ＶＨ及びＶＬ領域である。太字で、下線を引いたＬＣＴＰＳＲ残基が、ＦＧｌｙに変換されるシステインを含む。 図６Ａ〜Ｅは、抗ＨＥＲ２抗体の野生型（ＷＴ）及び修飾された重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を提供する。太字の残基が、ＶＨ及びＶＬ領域である。太字で、下線を引いたＬＣＴＰＳＲ残基が、ＦＧｌｙに変換されるシステインを含む。 サイズ排除クロマトグラフ分析のグラフを示し、さまざまな位置でアルデヒドタグを保持するαＨＥＲ２ ＡＤＣの調製物中の最小凝集を示す。ＳＥＣによって、指示された位置で標識を付けられた非共役及びＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシン共役ＡＤＣを分析した。全凝集は、すべての場合で≦５％であった。 図８Ａ及び８Ｂは、ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−ＡＦ４８８及びＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシン構造の比較を示し、これらが、ペイロード結合の点で異なる化学結合を有することを示す。図８Ａは、アリールアミド結合によりＰＥＧ２部分に結合されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８を示す。 図８Ａ及び８Ｂは、ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−ＡＦ４８８及びＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシン構造の比較を示し、これらが、ペイロード結合の点で異なる化学結合を有することを示す。図８Ｂは、エステル結合によりＰＥＧ２部分に結合されるメイタンシンを示す。 図９Ａ及び９Ｂは、アルデヒド標識ＨＩＰＳコンジュゲートが、３７℃で、血しょう中で安定していたが、ペイロード結合が、役割を演じることを示しているグラフを示す。ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２を用いて、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）（図９Ａ）、またはメイタンシン（図９Ｂ）のいずれかに共役されるＬＣ−、ＣＨ１−、及びＣＴ−標識抗体の血しょう安定性を試験した。ラット血しょう中で、３７℃で、最長１３日間、コンジュゲートをインキュベートした。ＥＬＩＳＡによって総ペイロード及び総抗体を分析した場合、ＡＦ４８８コンジュゲートでは、タグ配置にかかわらず、総抗体シグナルに対する総ペイロードシグナルの損失が観察されなかった。メイタンシンコンジュゲートでは、経時的に３７℃で、いくつかの脱共役が生じた証拠が観察された。安定性は、タグ配置に応じて異なり、ＣＴ−タグが、ペイロード−対−抗体シグナルの最も高い保存性（８４％）を示し、続いて、ＣＨ１（７２％）、及びＬＣ（６５％）であった。 図９Ａ及び９Ｂは、アルデヒド標識ＨＩＰＳコンジュゲートが、３７℃で、血しょう中で安定していたが、ペイロード結合が、役割を演じることを示しているグラフを示す。ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２を用いて、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（ＡＦ４８８）（図９Ａ）、またはメイタンシン（図９Ｂ）のいずれかに共役されるＬＣ−、ＣＨ１−、及びＣＴ−標識抗体の血しょう安定性を試験した。ラット血しょう中で、３７℃で、最長１３日間、コンジュゲートをインキュベートした。ＥＬＩＳＡによって総ペイロード及び総抗体を分析した場合、ＡＦ４８８コンジュゲートでは、タグ配置にかかわらず、総抗体シグナルに対する総ペイロードシグナルの損失が観察されなかった。メイタンシンコンジュゲートでは、経時的に３７℃で、いくつかの脱共役が生じた証拠が観察された。安定性は、タグ配置に応じて異なり、ＣＴ−タグが、ペイロード−対−抗体シグナルの最も高い保存性（８４％）を示し、続いて、ＣＨ１（７２％）、及びＬＣ（６５％）であった。 ペイロード位置が、ＮＣＩ−Ｎ８７標的細胞に対するアルデヒド標識αＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ力価に影響を及ぼさないことを示しているグラフを示す。６日間アッセイで、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性の標的として、ＨＥＲ２を過剰発現するＮＣＩ−Ｎ８７細胞を用いた。陽性対照として、遊離型メイタンシンが含まれ、特異性を示すために陰性対照としてイソタイプ対照ＡＤＣを用いた。軽鎖（ＬＣ）、または重鎖のＣＨ１もしくはＣ−末端（ＣＴ）領域上にアルデヒドタグを保持するαＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣが、同等の活性を示した。下記のとおり、ＩＣ５０値（遊離型薬剤の場合を除いて、抗体濃度を反映している）を測定した：遊離型メイタンシン、２１４ｐＭ；イソタイプ対照ＡＤＣは、測定できなかった；ＬＣ ＡＤＣ、８７ｐＭ；ＣＨ１ ＡＤＣ、１３２ｐＭ；ＣＴ ＡＤＣ、１１４ｐＭ。 図１１Ａ及び１１Ｂは、ペイロード配置が、マウスのＮＣＩ−Ｎ８７異種移植に対するアルデヒド標識αＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を変えたことを示しているグラフを示す。ＮＣＩ−Ｎ８７細胞をＣＢ．１７ＳＣＩＤマウス（８／群）の尾の付け根にインプラントした。腫瘍が、約１１３ｍｍ３に達したとき、単一５ｍｇ／ｋｇ用量のトラスツズマブだけ、軽鎖（ＬＣ）、または重鎖のＣＨ１もしくはＣ−末端（ＣＴ）領域のいずれかに共役されたイソタイプＡＤＣ、またはαＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣを動物に与えた。対照薬としてαＨＥＲ２−ＤＭ１が含まれた。図１１Ａは、１週間に２回、モニターした腫瘍成長についての平均腫瘍容積（ｍｍ３）対投与後日数のグラフを示す。図１１Ｂは、生存曲線に反映された試験したタグ配置間の有効性の差のグラフを示す。腫瘍が８００ｍｍ３に達したときに、動物を安楽死させた。 図１１Ａ及び１１Ｂは、ペイロード配置が、マウスのＮＣＩ−Ｎ８７異種移植に対するアルデヒド標識αＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を変えたことを示しているグラフを示す。ＮＣＩ−Ｎ８７細胞をＣＢ．１７ＳＣＩＤマウス（８／群）の尾の付け根にインプラントした。腫瘍が、約１１３ｍｍ３に達したとき、単一５ｍｇ／ｋｇ用量のトラスツズマブだけ、軽鎖（ＬＣ）、または重鎖のＣＨ１もしくはＣ−末端（ＣＴ）領域のいずれかに共役されたイソタイプＡＤＣ、またはαＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣを動物に与えた。対照薬としてαＨＥＲ２−ＤＭ１が含まれた。図１１Ａは、１週間に２回、モニターした腫瘍成長についての平均腫瘍容積（ｍｍ３）対投与後日数のグラフを示す。図１１Ｂは、生存曲線に反映された試験したタグ配置間の有効性の差のグラフを示す。腫瘍が８００ｍｍ３に達したときに、動物を安楽死させた。 αＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣが、タグ配置にかかわらずｉｎ ｖｉｖｏで、非常に安定していたことを示しているグラフを示す。軽鎖（ＬＣ）、または重鎖のＣＨ１もしくはＣ−末端（ＣＴ）領域のいずれかに共役された５ｍｇ／ｋｇのアルデヒド標識αＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣをＢＡＬＢ／ｃマウスに投与した。対照薬としてαＨＥＲ２−ＤＭ１が含まれた。示した時点で血しょうを採取し、ＥＬＩＳＡによってアッセイした。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて、曲線下面積（ＡＵＣ）を測定した。総ＡＤＣ ＡＵＣ／総抗体ＡＵＣの比は、パーセンテージとして示されている。 本開示の実施形態に従って、αＨＥＲ ＡＤＣの％生存性対Ｌｏｇ ＡＤＣ濃度（ｎＭ）のグラフを示す。 図１４Ａは、本開示の実施形態に従って、ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍モデル中のアルデヒド標識αＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性へのリンカー組成物の作用を示しているグラフを示す。 図１４Ｂは、本開示の実施形態に従って、ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍モデル中のアルデヒド標識αＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性へのリンカー組成物の作用を示しているグラフを示す。 本開示の実施形態に従って、マウス体重（ｇ）対処置後日数のグラフを示す。ＨＩＰＳ化学を用いて、リンカー−メイタンシンペイロードに共役された５ｍｇ／ｋｇのαＨＥＲ２ ＡＤＣでＳＣＩＤマウスを処置したが、体重に影響を及ぼさなかった。 図１６Ａは、本開示の実施形態に従って、小さな腫瘍（１８０ｍｍ３）に対する複数用量の有効性試験のための平均腫瘍容積（ｍｍ３）対時間（日）のグラフを示す。 図１６Ｂは、大きな腫瘍（４００ｍｍ３）に対する複数用量の有効性試験のための平均腫瘍容積（ｍｍ３）対時間（日）のグラフを示す。 図１７Ａは、アルデヒド標識を付けられたＩｇポリペプチドの生成のための修飾可能性がある部位を示している部位マップを示す。上の配列が、ＩｇＧ１軽鎖ポリペプチド（配列番号：／／）の保存領域のアミノ酸配列であり、Ｉｇ軽鎖中の修飾可能性がある部位を示す；下の配列が、Ｉｇ重鎖ポリペプチド（配列番号：／／；ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＡＧ００９０９）の保存領域のアミノ酸配列であり、Ｉｇ重鎖中の修飾可能性がある部位を示す。重鎖及び軽鎖ナンバリングは、完全長重鎖及び軽鎖に基づいている。 図１７Ｂは、ＩｇＧ１（配列番号：／／）、ＩｇＧ２（配列番号：／／）、ＩｇＧ３（配列番号：／／）、ＩｇＧ４（配列番号：／／）、及びＩｇＡ（配列番号：／／）の免疫グロブリン重鎖不変領域のアラインメントを示し、免疫グロブリン重鎖中にアルデヒドタグを提供することができる修飾部位を示している。重鎖及び軽鎖ナンバリングは、完全長重鎖及び軽鎖に基づいている。 図１７Ｃは、免疫グロブリン軽鎖不変領域（配列番号Ｓ：／／）のアラインメントを示し、免疫グロブリン軽鎖中にアルデヒドタグを提供することができる修飾部位を示している。 本開示の実施形態に従って、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）分析のグラフを示す。粗薬物抗体比（ＤＡＲ）を測定し、ＨＩＣによって１．６４であった。 本開示の実施形態に従って、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）分析のグラフを示す。最終薬物抗体比（ＤＡＲ）を測定し、ＨＩＣによって１．８６であった。 本開示の実施形態に従って、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の例のポリマー逆相（ＰＬＲＰ）クロマトグラフィー分析のグラフを示す。最終薬物抗体比（ＤＡＲ）を測定し、ＰＬＲＰによって１．８４であった。 本開示の実施形態に従って、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の例の分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析のグラフを示す。 本開示の実施形態に従って、ＣＴで、３７℃で、ラット血しょう中で、１４日間、ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンに共役されたαＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性を測定するための抗−メイタンシンシグナル／抗−ヒトＦｃシグナル（正規化）のグラフを示す。 本開示の実施形態に従って、さまざまな分析対象物質濃度（ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン及びメイタンシンに共役されたαＨＥＲ２ ＡＤＣ）の％生存性対分析対象物質濃度（ｎＭ）のグラフを示し、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞に対するαＨＥＲ２ ＣＴ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンのｉｎ ｖｉｔｒｏ力価を示している。 本開示の実施形態に従って、吸光度（Ａ．Ｕ．）対濃度（ｎｇ／ｍＬ）のグラフを示し、野生型αＨＥＲ２と比べてαＨＥＲ２ ＣＴ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンの抗原結合を示している。 本開示の実施形態に従って、腫瘍容積対日数のグラフを示し、ＮＣＩ−Ｎ８７異種移植モデルに対するαＨＥＲ２ ＣＴ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示している。
定義
以下の用語は、特に指示がない限り、以下の意味を有する。未定義の用語はいずれも、その技術分野で認識される意味を有する。
「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子、例えば、１〜６個の炭素原子、または１〜５個、または１〜４個または１〜３個の炭素原子を有する一価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。本用語は、例えば、直鎖及び分岐鎖ヒドロカルビル基、例えば、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、及びネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）を含む。
用語「置換アルキル」は、本明細書に定義されるとおり、アルキル鎖（Ｃ１炭素原子を除く）中の１個以上の炭素原子が、任意で、ヘテロ原子、例えば、−Ｏ−、−Ｎ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎが、０〜２である）、−ＮＲ−（Ｒが、水素またはアルキルである）で置換されるアルキル基を指し、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び−ＮＲａＲｂ（Ｒ’及びＲ’’が、同じ、または異なってよく、水素、任意で、置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロサイクリックから選択される）からなる群から選択される１〜５個の置換基を有するヘテロ原子で置換されるアルキル基を指す。
「アルキレン」は、好ましくは、１〜６個の炭素原子、さらに好ましくは、１〜３個の炭素原子を有する二価脂肪族ヒドロカルビル基を指し、当該炭素原子が、直鎖または分岐鎖のいずれかであり、任意で、−Ｏ−、−ＮＲ１０−、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−などから選択される１個以上の基で中断されている。本用語は、例えば、メチレン（−ＣＨ２）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などを含む。
「置換アルキレン」は、以下の「置換」の定義に炭素について記載したとおり、置換基で置換された１〜３個の水素を有するアルキレン基を指す。
用語「アルカン」は、本明細書に定義されるとおり、アルキル基及びアルキレン基を指す。
用語「アルキルアミノアルキル」、「アルキルアミノアルケニル」及び「アルキルアミノアルキニル」は、基、Ｒ’ＮＨＲ’’−を指し、Ｒ’は、本明細書に定義されるとおり、アルキル基であり、Ｒ’’は、本明細書に定義されるとおり、アルキレン、アルケニレンまたはアルケニレン基である。
用語「アルカリール」または「アラルキル」は、基、−アルキレン−アリール及び置換アルキレン−アリールを指し、アルキレン、置換アルキレン及びアリールは、本明細書に定義されている。
「アルコキシ」は、基、−Ｏ−アルキルを指し、アルキルは、本明細書に定義されるとおりである。アルコキシとしては、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシなどが挙げられる。用語「アルコキシ」は、また、基、アルケニル−Ｏ−、シクロアルキル−Ｏ−、シクロアルケニル−Ｏ−、及びアルキニル−Ｏ−を指し、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びアルキニルは、本明細書に定義されるとおりである。
用語「置換アルコキシ」は、基、置換アルキル−Ｏ−、置換アルケニル−Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｏ−、置換シクロアルケニル−Ｏ−、及び置換アルキニル−Ｏ−を指し、置換アルキル、置換アルケニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル及び置換アルキニルは、本明細書に定義されるとおりである。
用語「アルコキシアミノ」は、基、−ＮＨ−アルコキシを指し、アルコキシは、本明細書に定義されるとおりである。
用語「ハロアルコキシ」は、基、アルキル−Ｏ−を指し、アルキル基上の１個以上の水素原子が、ハロ基で置換され、基、例えば、トリフルオロメトキシなどを含む。
用語「ハロアルキル」は、上記に記載したとおり、置換アルキル基を指し、アルキル基上の１個以上の水素原子が、ハロ基で置換されている。かかる基の例としては、フルオロアルキル基、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロエチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
用語「アルキルアルコキシ」は、基、−アルキレン−Ｏ−アルキル、アルキレン−Ｏ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｏ−アルキル、及び置換アルキレン−Ｏ−置換アルキルを指し、アルキル、置換アルキル、アルキレン及び置換アルキレンは、本明細書に定義されるとおりである。
用語「アルキルチオアルコキシ」は、基、−アルキレン−Ｓ−アルキル、アルキレン−Ｓ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｓ−アルキル及び置換アルキレン−Ｓ−置換アルキルを指し、アルキル、置換アルキル、アルキレン及び置換アルキレンは、本明細書に定義されるとおりである。
「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは、２〜４個の炭素原子を有し、二重結合不飽和の少なくとも１個、好ましくは、１〜２個の部位を有する直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を指す。本用語は、例えば、ビ−ビニル、アリル、及びブト−３−エン−１−イルを含む。本用語には、シス及びトランス異性体、またはこれらの異性体の混合物が含まれる。
用語「置換アルケニル」は、本明細書に定義されるとおり、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基、または１〜３個の置換基を有するアルケニル基を指す。
「アルキニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは、２〜３個の炭素原子を有し、三重結合不飽和の少なくとも１個、好ましくは、１〜２個の部位を有する直鎖または分岐鎖一価ヒドロカルビル基を指す。かかるアルキニル基の例としては、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。
用語「置換アルキニル」は、本明細書に定義されるとおり、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基、または１〜３個の置換基、を有するアルキニル基を指す。
「アルキニルオキシ」は、基、−Ｏ−アルキニルを指し、アルキニルは、本明細書に定義されるとおりである。アルキニルオキシとしては、例えば、エチニルオキシ、プロピニルオキシなどが挙げられる。
「アシル」は、基、Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−、及び置換ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−を指し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。例えば、アシルとしては、「アセチル」基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−が挙げられる。
「アシルアミノ」は、基、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキル、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロサイクリック、及び−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換ヘテロサイクリックを指し、Ｒ２０が、水素またはアルキルであり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「アミノカルボニル」または用語「アミノアシル」は、基、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２を指し、Ｒ２１及びＲ２２が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックからなる群から独立して選択され、Ｒ２１及びＲ２２が、任意で、窒素に結合し、窒素とともに結合され、ヘテロサイクリックまたは置換ヘテロサイクリック基を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「アミノカルボニルアミノ」は、基、−ＮＲ２１Ｃ（Ｏ）ＮＲ２２Ｒ２３を指し、Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３が、水素、アルキル、アリールまたはシクロアルキルから独立して選択される、または、２個のＲ基が結合され、ヘテロシクリル基を形成する。
用語「アルコキシカルボニルアミノ」は、基、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲを指し、各Ｒが、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは、本明細書に定義されるとおりである。
用語「アシルオキシ」は、基、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−を指し、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは、本明細書に定義されるとおりである。
「アミノスルホニル」は、基、−ＳＯ２ＮＲ２１Ｒ２２を指し、Ｒ２１及びＲ２２が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、置換ヘテロサイクリックからなる群から独立して選択され、Ｒ２１及びＲ２２が、任意で、窒素に結合し、窒素とともに結合され、ヘテロサイクリックまたは置換ヘテロサイクリック基を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「スルホニルアミノ」は、基、−ＮＲ２１ＳＯ２Ｒ２２を指し、Ｒ２１及びＲ２２が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックからなる群から独立して選択され、Ｒ２１及びＲ２２が、任意で、原子に結合し、原子とともに結合され、ヘテロサイクリックまたは置換ヘテロサイクリック基を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「アリール」または「Ａｒ」は、単環（例えば、フェニル基中に存在する）または多縮合環（かかる芳香族環系の例としては、ナフチル、アントリル及びインダニルが挙げられる）を有する環系を有する６〜１８個の炭素原子の一価芳香族炭素環式基を指し、縮合環は、結合点が、芳香族環の原子を介しているという条件で、芳香族としてよい、または芳香族でなくてもよい。本用語は、例えば、フェニル及びナフチルを含む。アリール置換基の定義によって特に束縛されない限り、かかるアリール基は、任意で、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール及びトリハロメチルから選択される１〜５個の置換基、または１〜３個の置換基で置換することができる。
「アリールオキシ」は、基、−Ｏ−アリールを指し、アリールは、本明細書に定義されるとおりであり、例えば、フェノキシ、ナフトキシなどを含み、任意で、また、本明細書に定義されるとおり、置換アリール基を含む。
「アミノ」は、基、−ＮＨ２を指す。
用語「置換アミノ」は、基、−ＮＲＲを指し、少なくとも１個のＲが、水素ではないという条件で、各Ｒが、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から独立して選択される。
用語「アジド」は、基、−Ｎ３を指す。
「カルボキシル」、「カルボキシ」または「カルボキシレート」は、−ＣＯ２Ｈまたはこれらの塩を指す。
「カルボキシルエステル」または「カルボキシエステル」または用語「カルボキシアルキル」または「カルボキシルアルキル」は、基、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロサイクリック、及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロサイクリックを指し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「（カルボキシルエステル）オキシ」または「カーボネート」は、基、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロサイクリック、及び−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロサイクリックを指し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「シアノ」または「ニトリル」は、基、−ＣＮを指す。
「シクロアルキル」は、縮合、橋かけ、及びスピロ環系を含む単一または複数の環状環を有する３〜１０個の炭素原子の環状アルキル基を指す。好適なシクロアルキル基の例としては、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどが挙げられる。かかるシクロアルキル基としては、例えば、単環構造、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなど、または多環構造、例えば、アダマンタニルなどが挙げられる。
用語「置換シクロアルキル」は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基、または１〜３個の置換基を有するシクロアルキル基を指す。
「シクロアルケニル」は、単一環または複数環を有する、少なくとも１つの二重結合、好ましくは、１〜２つの二重結合を有する３〜１０個の炭素原子の非芳香族環状アルキル基を指す。
用語「置換シクロアルケニル」は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基、または１〜３個の置換基を有するシクロアルケニル基を指す。
「シクロアルキニル」は、単一環または複数環を有し、少なくとも１つの三重結合を有する５〜１０個の炭素原子の非芳香族シクロアルキル基を指す。
「シクロアルコキシ」は、−Ｏ−シクロアルキルを指す。
「シクロアルケニルオキシ」は、−Ｏ−シクロアルケニルを指す。
「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードを指す。
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、基、−ＯＨを指す。
「ヘテロアリール」は、１〜１５個の炭素原子、例えば、１〜１０個の炭素原子の芳香族基を指し、環内に酸素、窒素、及び硫黄からなる群から選択される１〜１０個のヘテロ原子を有する。かかるヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジニル、イミダゾリルまたはフリル）または環系（例えば、インドリジニル、キノリニル、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾリルまたはベンゾチエニルなどの基中）中の多縮合環を有することができ、結合点が、芳香族環の原子を介しているという条件で、環系内の少なくとも１つの環が、芳香族であり、環系内の少なくとも１つの環が、芳香族である。特定の実施形態では、ヘテロアリール基の窒素及び／または硫黄環原子（単数及び複数）が、任意で、酸化され、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル、またはスルホニル部分がもたらされる。本用語は、例えば、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、及びフラニルを含む。ヘテロアリール置換基の定義によって特に束縛されない限り、かかるヘテロアリール基は、任意で、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及び−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルから選択される１〜５個の置換基、または１〜３個の置換基で置換することができる。
用語「ヘテロアラルキル」は、基、−アルキレン−ヘテロアリールを指し、アルキレン及びヘテロアリールは、本明細書に定義されている。本用語は、例えば、ピリジルメチル、ピリジルエチル、インドリルメチルなどを含む。
「ヘテロアリールオキシ」は、−Ｏ−ヘテロアリールを指す。
「複素環」、「ヘテロサイクリック」、「ヘテロシクロアルキル」、及び「ヘテロシクリル」は、縮合、橋かけ、及びスピロ環系を含む単環または多縮合環を有し、１〜１０個のヘテロ原子を含む３〜２０個の環原子を有する飽和または不飽和基を指す。これらの環原子は、窒素、硫黄、または酸素からなる群から選択され、縮合環系では、結合点が、非芳香族環を介しているという条件で、１個以上の環は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールとすることができる。特定の実施形態では、ヘテロサイクリック基の窒素及び／または硫黄原子（単数及び複数）が、任意で、酸化され、Ｎ−オキシド、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−部分がもたらされる。
複素環及びヘテロアリールの例としては、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも称される）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
ヘテロサイクリック置換基の定義によって特に束縛されない限り、かかるヘテロサイクリック基は、任意で、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び縮合複素環から選択される１〜５個、または１〜３個の置換基で置換することができる。
「ヘテロシクリルオキシ」は、基、−Ｏ−ヘテロシクリルを指す。
用語「ヘテロシクリルチオ」は、基、ヘテロサイクリック−Ｓ−を指す。
用語「ヘテロサイクレン」は、本明細書に定義されるとおり、複素環から形成されるジラジカル基を指す。
用語「ヒドロキシアミノ」は、基、−ＮＨＯＨを指す。
「ニトロ」は、基、−ＮＯ２を指す。
「オキソ」は、原子（＝Ｏ）を指す。
「スルホニル」は、基、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−置換アルキル、ＳＯ２−アルケニル、ＳＯ２−置換アルケニル、ＳＯ２−シクロアルキル、ＳＯ２−置換ｃｙｌｃｏアルキル、ＳＯ２−シクロアルケニル、ＳＯ２−置換ｃｙｌｃｏアルケニル、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−置換アリール、ＳＯ２−ヘテロアリール、ＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＳＯ２−ヘテロサイクリック、及びＳＯ２−置換ヘテロサイクリックを指し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。スルホニルとしては、例えば、メチル−ＳＯ２−、フェニル−ＳＯ２−、及び４−メチルフェニル−ＳＯ２−が挙げられる。
「スルホニルオキシ」は、基、−ＯＳＯ２−アルキル、ＯＳＯ２−置換アルキル、ＯＳＯ２−アルケニル、ＯＳＯ２−置換アルケニル、ＯＳＯ２−シクロアルキル、ＯＳＯ２−置換ｃｙｌｃｏアルキル、ＯＳＯ２−シクロアルケニル、ＯＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＯＳＯ２−アリール、ＯＳＯ２−置換アリール、ＯＳＯ２−ヘテロアリール、ＯＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＯＳＯ２−ヘテロサイクリック、及びＯＳＯ２置換ヘテロサイクリックを指し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロサイクリック、及び置換ヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
用語「アミノカルボニルオキシ」は、基、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲを指し、各Ｒが、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロサイクリックであり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロサイクリックは、本明細書に定義されるとおりである。
「チオール」は、基、−ＳＨを指す。
「チオキソ」または用語「チオケト」は、原子（＝Ｓ）を指す。
「アルキルチオ」または用語「チオアルコキシ」は、基、−Ｓ−アルキルを指し、アルキルは、本明細書に定義されるとおりである。特定の実施形態では、硫黄を酸化させ、−Ｓ（Ｏ）−としてよい。スルホキシドは、１つ以上の立体異性体として存在してよい。
用語「置換チオアルコキシ」は、基、−Ｓ−置換アルキルを指す。
用語「チオアリールオキシ」は、基、アリール−Ｓ−を指し、アリール基は、本明細書に定義されるとおりであり、また、本明細書に定義されるとおり、任意で置換アリール基を含む。
用語「チオヘテロアリールオキシ」は、基、ヘテロアリール−Ｓ−を指し、ヘテロアリール基は、本明細書に定義されるとおりであり、また、本明細書に定義されるとおり、任意で置換アリール基を含む。
用語「チオヘテロシクロオキシ」は、基、ヘテロシクリル−Ｓ−を指し、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義されるとおりであり、また、本明細書に定義されるとおり、任意で置換ヘテロシクリル基を含む。
本明細書の開示に加えて、用語「置換」は、また、特定の基または遊離基を修飾するために用いられる場合、特定の基または遊離基の１個以上の水素原子それぞれが、互いに独立し、以下に定義されるとおり、同じ、または異なる置換基で置換することができる。
本明細書の個々の用語に関して開示された基に加えて、特定の基または遊離基中の飽和炭素原子の１個以上の水素（単一炭素の２個の水素のいずれかを＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２または＝Ｓで置換することができる）を置換するための置換基は、特に指示がない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＳＯ２ＯＲ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳＯ２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、Ｒ６０が、任意で、置換アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、各Ｒ７０が、独立して水素またはＲ６０である；各Ｒ８０が、独立してＲ７０または代わりに、２個のＲ８０’であり、それらが結合する窒素原子とともに取られ、５−、６−または７−員環ヘテロシクロアルキルを形成し、ヘテロシクロアルキルが、任意で、１〜４個の同じ、または異なる追加のＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を含んでよく、ヘテロ原子Ｎのヘテロシクロアルキルが、−ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキル置換を有してよい；及び各Ｍ＋が、正味の単一正電荷を有する対立イオンである。各Ｍ＋は、独立して、例えば、アルカリイオン、例えば、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋；アンモニウムイオン、例えば、＋Ｎ（Ｒ６０）４；またはアルカリ土類イオン、例えば、［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５、または［Ｂａ２＋］０．５（下付きの０．５は、かかる二価アルカリ土類イオンの対立イオンの一方が、本発明の化合物のイオン化形態とすることができ、他方が、典型的対立イオン、例えば、クロリドとすることができる、または本明細書に開示された２個のイオン化化合物が、かかる二価アルカリ土類イオンの対立イオンとして役割を果たすことができる、または本発明の二重イオン化化合物が、かかる二価アルカリ土類イオンの対立イオンとして役割を果たすことができることを意味する）。特定の例として、−ＮＲ８０Ｒ８０が、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペラジニル、４Ｎ−メチル−ピペラジン−１−イル及びＮ−モルホリニルを含むことを意味する。
本明細書の開示に加えて、「置換」アルケン、アルキン、アリール及びヘテロアリール基中の不飽和炭素原子での水素の置換基は、特に指示がない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３ −Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ３ −Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３ −２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２ −Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０及びＭ＋が、置換アルケンまたはアルキンの場合、置換基が、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、または−Ｓ−Ｍ＋ではないという条件で、前記に定義されたとおりである。
本明細書の個々の用語に関して開示された基に加えて、「置換」ヘテロアルキル及びシクロヘテロアルキル基中の窒素原子での水素の置換基は、特に指示がない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０及びＭ＋が、前記に定義されたとおりである。
本明細書の開示に加えて、特定の実施形態では、置換される基が、１、２、３、または４個の置換基、１、２、または３個の置換基、１または２個の置換基、または１個の置換基を有する。
前記で定義された全置換基では、置換基をさらに置換基で定義することによってそれ自体に達するポリマー（例えば、置換基として置換アリール基を有する置換アリールが、置換アリール基で、それ自体に置換される、置換アリール基によってさらに置換される、など）が、本明細書に含まれることを意図しないと理解される。かかる場合では、かかる置換の最大数が、３である。例えば、本明細書で検討される置換アリール基の連続置換は、特に、置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに限定される。
特に指示がない限り、本明細書で明示的に定義されない置換基の名称は、官能基の末端部分、続いて結合点に向かって隣接した官能基に名をつけることによって、つけられる。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」は、基、（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−を指す。
１個以上の置換基を含有する本明細書に開示される基のいずれかに関して、言うまでもなく、かかる基は、立体配置的に実行不可能である、及び／または合成的に実行不可能である置換または置換パターンのいずれも含有しないと理解される。また、対象の化合物は、これらの化合物の置換により生じる全立体化学的異性体を含む。
用語「製剤的に許容可能な塩」は、患者、例えば、哺乳動物への投与に許容可能である塩を意味する（所与の投与計画に許容可能な哺乳動物の安全性を有する対立イオンを有する塩）。かかる塩は、製剤的に許容可能な無機または有機塩基及び製剤的に許容可能な無機または有機酸から誘導することができる。「製剤的に許容可能な塩」は、化合物の製剤的に許容可能な塩を指し、当該塩は、当技術分野でよく知られているさまざまな有機及び無機対立イオンから誘導され、例にすぎないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどを含む；分子が塩基性官能基を含有する場合、有機または無機酸の塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、蟻酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、蓚酸塩などである。
用語「これらの塩」は、酸のプロトンが、カチオン、例えば、金属カチオンまたは有機カチオンなどによって置換される場合に形成される化合物を意味する。これに当てはまる場合、当該塩は、製剤的に許容可能な塩であり、これは、患者への投与を意図しない中間化合物の塩では必要とされない。例えば、本化合物の塩は、当該化合物が、無機または有機酸によってプロトン化され、塩の陰イオン成分としての無機または有機酸の共役塩基とともにカチオンを形成する塩を含む。
「溶媒和物」は、溶質の分子またはイオンと溶媒分子の組み合わせによって形成される複合物を指す。溶媒は、有機化合物、無機化合物、または両者の混合物とすることができる。溶媒のいくつかの例としては、メタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は、水和物である。
「立体異性体」及び「立体異性体」は、同じ原子結合性を有するが、空間に異なる原子配置を有する化合物を指す。立体異性体は、シス−トランス異性体、Ｅ及びＺ異性体、光学異性体、及びジアステレオマーを含む。
「互変異性体」は、原子の電子結合及び／またはプロトンの位置だけが異なる分子の別の形態を指し、例えば、エノール−ケト及びイミン−エナミン互変異性体、または−Ｎ＝Ｃ（Ｈ）−ＮＨ−環原子配置を含有するヘテロアリール基の互変異性体形態、例えば、ピラゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、トリアゾール、及びテトラゾールである。当業者であれば、他の互変異性体の環原子配置が可能であると認識する。
用語「またはこれらの塩もしくは溶媒和物もしくは立体異性体」は、塩、溶媒和物及び立体異性体の全ての順序の交換、例えば、対象の化合物の立体異性体の製剤的に許容可能な塩の溶媒和物を含むことを意図すると理解される。
「薬剤的に有効な量」及び「治療的に有効な量」は、特定の障害もしくは疾患または１つ以上のその症状を治療する、及び／または疾患または障害の発症を予防するのに十分な化合物の量を指す。腫瘍形成性増殖障害に関して、薬剤的にまたは治療的に有効な量は、特に、腫瘍を縮小させる、または腫瘍の成長速度を減少させるのに十分な量を含む。
「患者」は、ヒト及び非ヒト被験者、特に哺乳動物の被験者を指す。
用語「治療する」または「治療」は、本明細書に用いる場合、患者、例えば、哺乳動物（特にヒト）の疾患または医学的状態を治療すること、またはこれの治療を意味し、（ａ）疾患または医学的状態が生じることを予防すること、例えば、被験者の予防的治療；（ｂ）疾患または医学的状態を改善すること、例えば、患者の疾患または医学的状態を除去することまたは後退させること；（ｃ）例えば、患者の疾患または医学的状態の発症を遅らせること、または抑えることによって、疾患または医学的状態を抑制すること；または（ｄ）患者の疾患または医学的状態の症状を軽減することを含む。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、本明細書に交換可能で用いられ、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指す。特に指示がない限り、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、遺伝子的にコード化されたアミノ酸及びコード化されていないアミノ酸、化学的に、または生化学的に修飾された、または誘導体化されたアミノ酸、及び修飾されたペプチド主鎖を有するポリペプチドを含むことができる。本用語は、融合タンパク質を含み、これらに限定されないが、異種アミノ酸配列との融合タンパク質、異種及び同種リーダー配列との融合、少なくとも１つのＮ−末端メチオニン残基（例えば、遺伝子組み換え細菌性宿主細胞中での生成を促進するため）を含有するタンパク質；免疫学的に標識を付けられたタンパク質などを含む。
「天然アミノ酸配列」または「親アミノ酸配列」は、本明細書に交換可能で用いられ、修飾アミノ酸残基を含む修飾前のポリペプチドのアミノ酸配列を指す。
用語「アミノ酸類似体」、「非天然アミノ酸」、などは、交換可能で用いてよく、一般に天然タンパク質にみられる１個以上のアミノ酸と構造及び／または全体形状がほぼ同じであるアミノ酸−様化合物を含む（例えば、ＡｌａまたはＡ、ＣｙｓまたはＣ、ＡｓｐまたはＤ、ＧｌｕまたはＥ、ＰｈｅまたはＦ、ＧｌｙまたはＧ、ＨｉｓまたはＨ、ＩｌｅまたはＩ、ＬｙｓまたはＫ、ＬｅｕまたはＬ、ＭｅｔまたはＭ、ＡｓｎまたはＮ、ＰｒｏまたはＰ、ＧｌｎまたはＱ、ＡｒｇまたはＲ、ＳｅｒまたはＳ、ＴｈｒまたはＴ、ＶａｌまたはＶ、ＴｒｐまたはＷ、ＴｙｒまたはＹ）。アミノ酸類似体は、また、修飾された側鎖または主鎖を有する天然アミノ酸を含む。アミノ酸類似体は、また、アミノ酸類似体の天然Ｄ体、ならびにＬ体と同じ立体化学を有するアミノ酸類似体を含む。いくつかの例では、アミノ酸類似体が、１個以上の天然アミノ酸の主鎖構造、及び／または側鎖構造を共有し、差（単数及び複数）は、分子中の１個以上の修飾された基である。かかる修飾は、関連原子（例えば、Ｓ）の原子（例えば、Ｎ）の置換、基（例えば、メチル、またはヒドロキシルなど）または原子（例えば、ＣｌまたはＢｒなど）の付加、基の欠失、共有結合（二重結合などの単結合）の置換など、またはこれらの組み合わせを含んでよいが、これらに限定されない。例えば、アミノ酸類似体は、α−ヒドロキシ酸、及びα−アミノ酸などを含んでよい。
単糖、二糖、オリゴ糖、及び多糖の、モノマー単位及び／またはポリマーを意味するために用語「炭水化物」などを用いてよい。低分子炭水化物、例えば、単糖、二糖を意味するために用語、糖を用いてよい。用語「炭水化物誘導体」は、対象の炭水化物の１個以上の官能基が、置換されている（任意の好適な置換基によって置換されている）、修飾されている（任意の好適な化学を用いて、別の基に変換されている）または、ない（例えば、Ｈによって除去されている、または置換されている）化合物を含む。さまざまな炭水化物及び炭水化物誘導体があり、対象の化合物及びコンジュゲートに用いるために適合させてよい。
用語「抗体」は、最も広い意味に用いられ、単クローン性抗体（完全長単クローン性抗体を含む）、多クローン性抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）などを含む。抗体は、標的抗原を結合することができる。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ （２００１） Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、１つ以上の結合部位を有することができ、この部位はエピトープとも呼ばれ、抗体の１つ以上の可変領域によって形成される相補性決定領域（ＣＤＲ）によって認識される。
用語「天然抗体」は、抗体の重鎖及び軽鎖が、多細胞生物の免疫系によって生成され、一組にされている抗体を指す。脾臓、リンパ節、骨髄及び血清が、天然抗体を生成する組織の例である。例えば、抗原で免疫性を与えた第１の動物から分離された抗体生成細胞によって生成される抗体が、天然抗体である。
用語「ヒト化抗体」または「ヒト化免疫グロブリン」は、ヒト抗体に由来する対応する位置のアミノ酸で置換されている１個以上のアミノ酸（例えば、フレームワーク領域、不変領域またはＣＤＲ中）を含有する非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体を指す。一般に、ヒト化抗体は、同じ抗体の非ヒト化バージョンと比べて、ヒト宿主中の免疫反応が低下する。例えば、ＣＤＲ−グラフティング（ＥＰ２３９，４００；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；５，５３０，１０１号；及び５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェイシング（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９４））、及び鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む当技術分野で知られているさまざまな技術を用いて、抗体をヒト化することができる特定の実施形態では、特定の位置のフレームワーク残基を特定するための抗原結合及び配列比較に重要なフレームワーク残基を特定するために、フレームワーク置換が、ＣＤＲ及びフレームワーク残基の相互作用のモデリングによって特定される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）を参照）。さらに、本発明に用いるために検討されたヒト化抗体の方法が、米国特許第５，７５０，０７８号；５，５０２，１６７号；５，７０５，１５４号；５，７７０，４０３号；５，６９８，４１７号；５，６９３，４９３号；５，５５８，８６４号；４，９３５，４９６号；及び４，８１６，５６７号、及びＰＣＴ公開ＷＯ９８／４５３３１及びＷＯ９８／４５３３２に記載されている。特定の実施形態では、米国特許第２００４００８６９７９号及び米国特許第２００５００３３０３１号に記載された方法に従って、対象のウサギ抗体をヒト化してよい。したがって、当技術分野でよく知られている方法を用いて、前記に記載された抗体をヒト化してよい。
用語「キメラ抗体」は、通常、異なる種に属する抗体可変及び不変領域遺伝子から遺伝子工学によって、軽鎖及び重鎖遺伝子が形成されている抗体を指す。例えば、マウス単クローン性抗体からの遺伝子の可変セグメントをヒト不変セグメント、例えば、ガンマ１及びガンマ３に結合してよい。治療用キメラ抗体の例は、マウス抗体からの可変または抗原−結合ドメイン及びヒト抗体からの不変またはエフェクタードメインからなるハイブリッドタンパク質であり、他の哺乳動物種からのドメインを用いてよい。
免疫グロブリンポリペプチド免疫グロブリン軽または重鎖可変領域は、３つの超可変領域によって中断されるフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、また、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と称される。フレームワーク領域及びＣＤＲの範囲が定義されている（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｅ．Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９９１を参照）。抗体のフレームワーク領域は、構成要素である軽鎖及び重鎖が結合されたフレームワーク領域であり、ＣＤＲの位置を決め、ＣＤＲを整列する役割を果たす。ＣＤＲは、基本的に抗原のエピトープへの結合を担う。
本開示全体を通して、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に記載のとおりであり、参照により本明細書に明確に組み入れられる。
「親Ｉｇポリペプチド」は、本明細書に記載したとおり、アルデヒド標識の不変領域を欠くアミノ酸配列を含むポリペプチドである。親ポリペプチドは、天然配列の不変領域を含んでよい、または、既存のアミノ酸配列修飾（例えば、付加、欠失及び／または置換）を有する不変領域を含んでよい。
Ｉｇポリペプチドの文脈では、用語「不変領域」は、当技術分野でよく理解され、Ｉｇ重鎖、またはＩｇ軽鎖のＣ−末端領域を指す。Ｉｇ重鎖不変領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン（及び、重鎖がμまたはε重鎖であるＣＨ４ドメイン）を含む。天然Ｉｇ重鎖では、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３（及び、存在する場合、ＣＨ４）ドメインが、（Ｃ−末端へ）重鎖可変（ＶＨ）領域の直後に始まり、それぞれ、長さが約１００アミノ酸〜約１３０アミノ酸である。天然Ｉｇ軽鎖では、不変領域が、（Ｃ−末端へ）軽鎖可変（ＶＬ）領域の直後に始まり、長さが約１００アミノ酸〜１２０アミノ酸である。
本明細書に用いる場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの可変領域内にみられる非接触抗原の結合部位を意味することを意図する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）に記載されており、定義は、互いに比較される場合、アミノ酸残基のオーバーラッピングまたはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはグラフト抗体またはこれらの変異体のＣＤＲを指す定義のいずれかの適用では、本明細書で定義され、用いられるとおりの用語の範囲内であることを意図する。前記に記載した参照のそれぞれによって定義されるとおりのＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、比較として以下の表１に記載されている。
Figure 2017520533
ポリペプチド、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列に関して用いられるとおり、「遺伝子的にコード化可能な」は、アミノ酸配列が、アミノ酸配列をコードする核酸の転写及び翻訳によって生成することができるアミノ酸残基からなることを意味し、転写及び／または翻訳は、細胞中または無細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ転写／翻訳系で生じさせてよい。
用語「制御配列」は、特定の発現系発現、例えば、哺乳動物細胞、細菌性細胞、無細胞合成などで、作動可能に結合されたコード配列の発現を促進するＤＮＡ配列を指す。原核生物系に好適な制御配列は、例えば、プロモーター、任意でオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞系では、プロモ−ター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを用いてよい。
核酸がもう１つの核酸配列と機能的関係に置かれている場合、核酸は、「作動可能に結合」されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に結合される；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に結合される；またはリボソーム結合部位は、翻訳の開始を促進するように位置する場合、コード配列に作動可能に結合される。一般に、「作動可能に結合」は、結合されるＤＮＡ配列が、隣接しており、分泌リーダーの場合、隣接し、リーディングフレーム中にあることを意味する。リゲーションによって、または増幅反応によって、結合が実現される。従来の実施に従って、結合配列に合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを用いてよい。
用語「発現カセット」は、本明細書に用いる場合は、核酸に挿入することができる（例えば、対象の構成体にリゲーションと適合する制限部位を使用するによって、または、対象の構成体または宿主細胞ゲノムへの相同組み換えによって）核酸のセグメント、通常、ＤＮＡのセグメントを指す。一般に、核酸セグメントは、対象のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、カセット及び制限部位は、転写及び翻訳のための好適なリーディングフレームにカセットを挿入するのを促進するように設計される。発現カセットは、また、宿主細胞中の対象のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を促進するエレメントを含むことができる。これらのエレメントは、プロモ−ター、最小プロモ−ター、エンハンサー、応答エレメント、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、などを含んでよいが、これらに限定されない。
本明細書に用いる場合、用語「分離した」は、対象の化合物が、天然に生じる環境とは異なる環境にあることを示すことを意味する。「分離した」とは、化合物が、対象の化合物のために実質的に富化されている試料内にあること、および／または、化合物が、対象の化合物が部分的にまたは実質的に精製されている試料内にあることを含むことを意味する。
本明細書に用いる場合、用語「実質的に精製した」は、その天然の環境から除去されており、天然に関係している他の成分が、少なくとも６０％含まれない、少なくとも７５％含まれない、少なくとも８０％含まれない、少なくとも８５％含まれない、少なくとも９０％含まれない、少なくとも９５％含まれない、少なくとも９８％含まれない、または９８％以上含まれない化合物を指す。
用語「生理学的条件」は、生きている細胞と適合する条件、例えば、生きている細胞と適合する主として温度、ｐＨ、塩分濃度などの水溶液条件を包含することを意味する。
「反応パートナー」は、反応生成物を生成するために、特に別の反応パートナーと反応する分子または分子部分を意味する。例示的な反応パートナーとしては、スルファターゼモチーフのシステインまたはセリン及びホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）が挙げられ、ＦＧＥは、反応して、モチーフ中のシステインまたはセリンの代わりにホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）を含有する変換アルデヒドタグの反応生成物を形成する。他の例示的な反応パートナーとしては、変換アルデヒドタグのｆＧｌｙ残基のアルデヒド（例えば、反応性アルデヒド基）及び「アルデヒド反応性反応パートナー」が挙げられる。これは、アルデヒド反応性基及び対象の部分を含み、反応して、修飾されたｆＧｌｙ残基を介して修飾ポリペプチドに共役される対象の部分を有する修飾されたアルデヒド標識ポリペプチドの反応生成物を形成する。
「Ｎ−末端」は、非−Ｎ−末端アミノ酸残基中のアミン基が、通常、ポリペプチドの共有結合主鎖の部分を形成する無アミン基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を指す。
「Ｃ−末端」は、非−Ｃ−末端アミノ酸残基中のカルボキシル基が、通常、ポリペプチドの共有結合主鎖の部分を形成する無カルボキシル基を有するポリペプチドの末端アミノ酸残基を指す。
「内部部位」は、ポリペプチドのポリペプチドまたはアミノ酸配列に関して用いられるとおり、Ｎ−末端またはＣ−末端ではないポリペプチドの領域を意味する。
さらに本発明を記載する前に、本発明は、記載した特定の実施形態に限定されず、例えば、言うまでもなく、変えることができるものと理解しなければならない。さらに、本発明の範囲は、添付したクレームだけによって限定されるため、本明細書に用いられる専門用語は、特定の実施形態だけを記載する目的のためにあり、限定することを意図しないものと理解しなければならない。
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限値と下限値の間の各中間値、文脈が明白に記載をしない限り、下限値の単位の１０分の１まで、及びその示した範囲内の他の示した値または中間値が、本発明内に包含されるものとすると理解される。これより狭い範囲の上限値及び下限値は、独立してより狭い範囲に含んでよく、これも、示した範囲内の明確に除外したいずれかの境界値に従う限り、本発明内に包含される。示した範囲が境界値の一方または両方を含む場合、含まれる境界値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
明確さのために、個々の実施形態の文脈に記載される本発明の特定の特徴は、単一の実施形態と組み合わせて、提供してよいと理解される。反対に、簡潔のために、単一の実施形態の文脈に記載される本発明のさまざまな特徴は、別個にまたは好適な副組み合わせで、提供してよい。本発明に関係する実施形態の全組み合わせは、明確に本発明に包含され、かかる組み合わせが、例えば、化合物が安定した化合物（すなわち、生成し、分離し、特徴づけ、及び生物活性を試験することができる化合物）であるという構成要件を含む程度まで、あたかも組み合わせのそれぞれ及びすべてが、個々に及び明示的に開示されるように本明細書に開示される。また、さまざまな実施形態及びその要素（例えば、かかる変化を示す実施形態に記載された化学基の要素）の全副組み合わせも明確に本発明に包含され、あたかもかかる副組み合わせのそれぞれ及びすべてが、本明細書に個々に及び明示的に開示されるように本明細書に開示される。
特に定義しない限り、本明細書に用いられる全専門用語及び科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般的に理解される意味と同じである。本発明の実施または試験では、本明細書に記載したものとほぼ同じまたは等しい任意の方法及び材料を用いることもできるが、ここに好適な方法及び材料を記載する。本明細書に記載した全出版物は、出版物が記載されているところに関係して、方法及び／または材料を開示及び記載するために参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書及び添付したクレームに用いる場合、文脈が明らかに別段の指示をしない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は複数の指示物を含むことを明記しなければならない。さらに、クレームを記載して、任意の要素を除外してよいことを示す。こうして、本明細書は、先行詞として、クレームの要素の列挙、または「否定的な」限定の使用と関連して、「単独で」、「唯一の」などのような除外用語を用いることを意図している。
明確さのために、個々の実施形態の文脈に記載される本発明の特定の特徴は、単一の実施形態と組み合わせて、提供してよいと理解される。反対に、簡潔のために、単一の実施形態の文脈に記載される本発明のさまざまな特徴は、別個にまたは好適な副組み合わせで、提供してよい。
本明細書に記載した出版物は、本出願の出願日の前に開示されたものだけが提供される。本明細書には、本発明が、以前の発明によってかかる出版物に先行する権利がないと容認するものとして解釈されるものはない。さらに、提供された出版物の日付は、別々に確認する必要があると思われる実際の出版物の日付と異なるものとしてよい。
詳細説明
本開示は、抗ＨＥＲ２抗体−メイタンシンコンジュゲート構造を提供する。本開示は、また、かかるコンジュゲートの生成方法、ならびにその使用方法を包含する。以下のセクションに、それぞれの実施形態が、さらに詳細に記載される。
コンジュゲート
本開示は、コンジュゲートを提供する。「コンジュゲート」は、第２の部分と安定して結合している第１の部分を意味する。「安定して結合した」は、標準条件下で別の部分または構造に結合している部分を意味する。特定の実施形態では、第１の部分及び第２の部分が、互いに１つ以上の共有結合によって結合されている。
特定の実施形態では、コンジュゲートが、第２の部分に共役されたポリペプチドを含むポリペプチドコンジュゲートである。特定の実施形態では、ポリペプチドに共役される部分は、対象のさまざまな部分のいずれかとすることができ、例えば、これらに限定されないが、検出可能標識、薬剤、水溶性ポリマー、または膜または表面へのポリペプチドの固定化のための部分である。ポリペプチドのいずれかの所望の部位で対象の部分をポリペプチドに共役することができる。このため、本開示は、例えば、ポリペプチドのＣ−末端の部位、またはこれの近くの部位で共役される部分を有する修飾ポリペプチドを提供する。他の例としては、ポリペプチドのＮ−末端の部位、またはこれの近くの部位で共役される部分を有する修飾ポリペプチドが挙げられる。また、この例としては、ポリペプチドのＣ−末端及びＮ−末端の間の位置で（例えば、ポリペプチドの内部部位で）共役される部分を有する修飾ポリペプチドが挙げられる。前記の組み合わせも可能であり、修飾ポリペプチドが２つ以上の部分に共役される。
本開示の実施形態では、ポリペプチドが、１つ以上の部分、例えば、２つの部分、３つの部分、４つの部分、５つの部分、６つの部分、７つの部分、８つの部分、９つの部分、または１０以上の部分に共役されているコンジュゲートを含む。当該部分は、ポリペプチド中の１つ以上の部位でポリペプチドに共役させてよい。例えば、１つ以上の部分をポリペプチドの単一アミノ酸残基に共役させてよい。いくつかの場合では、１つの部分が、ポリペプチドのアミノ酸残基に共役されている。他の実施形態では、２つの部分をポリペプチドの同じアミノ酸残基に共役させてよい。他の実施形態では、第１の部分が、ポリペプチドの第１のアミノ酸残基に共役されており、第２の部分が、ポリペプチドの第２のアミノ酸残基に共役されている。また、前記の組み合わせが、可能であり、例えば、ポリペプチドが、第１のアミノ酸残基で第１の部分に共役されており、第２のアミノ酸残基で２つの他の部分に共役されている。また、他の組み合わせが、可能であり、例えば、これらに限定されないが、第１のアミノ酸残基で第１及び第２の部分に共役され、第２のアミノ酸残基で第３及び第４の部分に共役されたポリペプチドなどである。
１つ以上の部分に共役されているポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはこれらの組み合わせとしてよい。例えば、コンジュゲートは、ポリペプチドの天然アミノ酸残基に共役された部分を含んでよい。他の例では、コンジュゲートは、ポリペプチドの非天然アミノ酸残基に共役された部分を含んでよい。前記に記載したとおり、単一天然または非天然アミノ酸残基で、１つ以上の部分をポリペプチドに共役させてよい。本明細書に記載したとおり、ポリペプチド中の１つ以上の天然または非天然アミノ酸残基を部分または部分に共役させてよい。例えば、ポリペプチド中の２つ（以上）のアミノ酸残基（例えば、天然または非天然アミノ酸残基）それぞれを１つまたは２つの部分に共役してよく、その結果、ポリペプチド中の複数の部位が修飾される。
本明細書に記載したとおり、ポリペプチドを１つ以上の部分に共役させてよい。特定の実施形態では、対象の部分が、化学成分、例えば、薬剤または検出可能標識である。例えば、薬剤を、ポリペプチドに共役させてよく、または他の実施形態では、検出可能標識をポリペプチドに共役させてよい。このため、例えば、本開示の実施形態としては、ポリペプチド及び薬剤のコンジュゲート；ポリペプチド及び検出可能標識のコンジュゲート；２つ以上の薬剤及びポリペプチドのコンジュゲート；２つ以上の検出可能標識及びポリペプチドのコンジュゲートなどが挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、ポリペプチド及び対象の部分が、カップリング部分を介して共役される。例えば、ポリペプチド及び対象の部分それぞれをカップリング部分に結合（例えば、共有結合）させてよく、この結果、ポリペプチド及び対象の部分がともにカップリング部分を介して、間接的に結合される。いくつかの場合では、カップリング部分が、ヒドラジニル−ピロロ化合物またはヒドラジニル−ピロロ化合物の誘導体を含む。例えば、ヒドラジニル−ピロロカップリング部分（例えば、ヒドラジノ−イソ−ピクテ−スペングラー（ＨＩＰＳ）カップリング部分）を介して、ポリペプチドに対象の部分をカップリングする一般的スキームが、以下の一般的反応スキームに示されている。
Figure 2017520533
前記の反応スキームでは、Ｒ’’’は、ポリペプチドに共役されている対象の部分としてよい。本明細書に記載したとおり、部分は、さまざまな部分のいずれか、例えば、これらに限定されないが、化学成分、例えば、検出可能標識、または薬剤（例えば、マイタンシノイド）とすることができる。Ｒ’及びＲ’’それぞれは、独立して、任意の所望の置換基、例えば、これらに限定されないが、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルとしてよい。Ｑ１０、Ｑ２０、Ｑ３０及びＱ４０は、ＣＲ１１、ＮＲ１２、Ｎ、ＯまたはＳとしてよく、Ｑ１０、Ｑ２０、Ｑ３０及びＱ４０の１つは、任意であり、Ｒ１１及びＲ１２は、任意の所望の置換基としてよい。
特定の実施形態では、ポリペプチドを対象の部分に共役させてよく、ポリペプチドは、対象の部分への共役前に修飾される。ポリペプチドの修飾では、対象の部分への共役に好適な１つ以上の反応性基を含有する修飾ポリペプチドを生成させてよい。いくつかの場合では、１つ以上のアミノ酸残基でポリペプチドを修飾し、対象の部分（例えば、前記に記載したとおり、カップリング部分を含む部分、例えば、ヒドラジニル−ピロロカップリング部分）への共役に好適な１つ以上の反応性基をもたらしてよい。例えば、反応性アルデヒド基（例えば、反応性アルデヒド）を含むようにポリペプチドを修飾してよい。反応性アルデヒドが、「アルデヒドタグ」または「ａｌｄ−タグ」中に含まれてよく、このタグは、本明細書に用いる場合、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によって変換され、２−ホルミルグリシン残基（本明細書では「ＦＧｌｙ」と称する）を含有するスルファターゼモチーフ（例えば、Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲ）から誘導されるアミノ酸配列を指す。また、ＦＧＥによって生成されるＦＧｌｙ残基は、「ホルミルグリシン」と称してよい。別様に示すと、用語「アルデヒドタグ」は、「変換された」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリン残基が、ＦＧＥ、例えば、Ｌ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲの作用によってＦＧｌｙに変換されるスルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列を指すように本明細書に用いられる。変換されたスルファターゼモチーフは、「未変換」スルファターゼモチーフ（すなわち、システインまたはセリン残基が、ＦＧＥによってＦＧｌｙに変換されないが、変換することができるスルファターゼモチーフ、例えば、配列：Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲを有する未変換スルファターゼモチーフ）を含むアミノ酸配列から誘導してよい。「変換」は、スルファターゼモチーフでのホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用の文脈で用いられる場合、スルファターゼモチーフ中のシステインまたはセリン残基のホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基（例えば、ＣｙｓからＦＧｌｙへ、またはＳｅｒからＦＧｌｙへ）への生化学的修飾を指す。さらに、アルデヒドタグ及び部位特異的タンパク質修飾でのアルデヒドタグの使用の態様が、米国特許第７，９８５，７８３号及び米国特許第８，７２９，２３２号に記載されており、これらの各開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの場合では、化合物（例えば、前記に記載したとおり、ヒドラジニル−ピロロカップリング部分を含有する化合物）とＦＧｌｙの反応によって、ＦＧｌｙ残基を含有する修飾ポリペプチドを対象の部分に共役させてよい。例えば、反応パートナーを含有する薬剤とＦＧｌｙ含有ポリペプチドを、当該薬剤を当該ポリペプチドに共役させるのに好適な条件下で、接触させてよい。いくつかの例では、反応パートナーを含有する薬剤は、前記に記載したとおり、ヒドラジニル−ピロロカップリング部分を含んでよい。
特定の実施形態では、本開示のコンジュゲートが、少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を有するポリペプチド（例えば、抗体、例えば、抗ＨＥＲ２抗体）を含む。前記に記載したとおり、ヒドラジニル−ピロロ部分を含有する薬剤に、ポリペプチドの修飾アミノ酸残基を結合させてよい。特定の実施形態では、ポリペプチド（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）の修飾アミノ酸残基は、前記に記載したとおり、ＦＧｌｙ残基に変換されるシステインまたはセリン残基から誘導してよい。特定の実施形態では、ＦＧｌｙ残基が、前記に記載したとおり、ヒドラジニル−ピロロ部分を含有する薬剤に共役され、薬剤がヒドラジニル−ピロロ部分を介してポリペプチドに共役されている本開示のコンジュゲートがもたらされる。本明細書に用いる場合、用語ＦＧｌｙ’は、対象の部分（例えば、薬剤、例えば、マイタンシノイド）に結合されているポリペプチド（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）の修飾アミノ酸残基を指す。
特定の実施形態では、コンジュゲートが、式（Ｉ）の少なくとも１つの修飾アミノ酸残基を含む。
Figure 2017520533
 式中、
Ｑ１が、ＣまたはＮであり、Ｑ１が、Ｎである場合、Ｙ１は、ない；
Ｙ１が、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｒ１が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される；
Ｒ２及びＲ３それぞれが、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される、またはＲ２及びＲ３が、任意で、環状結合し、５または６員環ヘテロシクリルを形成する；
Ｌが、−（Ｔ１−Ｚ１）ａ−（Ｔ２−Ｚ２）ｂ−（Ｔ３−Ｚ３）ｃ−（Ｔ４−Ｚ４）ｄ−を含むリンカーであり、式中、ａ、ｂ、ｃ及びｄそれぞれが、独立して０または１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、１〜４である；
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４それぞれが、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択され、式中、ＥＤＡが、エチレンジアミン部分であり、ＰＥＧが、ポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコールであり、ＡＡが、アミノ酸残基であり、式中、ｗが、１〜２０の整数であり、ｎが、１〜３０の整数であり、ｐが、１〜２０の整数であり、ｈが、１〜１２の整数である；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４それぞれが、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から独立して選択され、式中、ｑが、１〜６の整数である；
各Ｒ１３が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールから独立して選択される；
各Ｒ１５が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される；
Ｗ１が、マイタンシノイドである；及び
Ｗ２が、抗ＨＥＲ２抗体である。
特定の実施形態では、Ｑ１が、ＣまたはＮであり、Ｑ１が、Ｎである場合、Ｙ１は、ない。特定の実施形態では、Ｑ１が、Ｃである。特定の実施形態では、Ｑ１が、Ｎであり、Ｙ１が、ない。
特定の実施形態では、Ｙ１が、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｙ１が、水素である。特定の実施形態では、Ｙ１が、ハロゲン、例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アルキルまたは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６置換アルキル、またはＣ１−４アルキルまたはＣ１−４置換アルキル、またはＣ１−３アルキルまたはＣ１−３置換アルキルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アルケニルまたは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルまたはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルまたはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アルキニルまたは置換アルキニルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アルコキシまたは置換アルコキシである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アミノまたは置換アミノである。特定の実施形態では、Ｙ１が、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アシルまたはアシルオキシである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アシルアミノまたはアミノアシルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。特定の実施形態では、Ｙ１が、スルホニルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、チオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。特定の実施形態では、Ｙ１が、アリールもしくは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールもしくはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールもしくはＣ５置換アリール、またはＣ６アリールもしくはＣ６置換アリールである。特定の実施形態では、Ｙ１が、ヘテロアリールもしくは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールもしくはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロ
アリールもしくはＣ５置換ヘテロアリール、またはＣ６ヘテロアリールもしくはＣ６置換ヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｙ１が、シクロアルキルもしくは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルもしくはＣ３−８置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはＣ３−６置換シクロアルキル、またはＣ３−５シクロアルキルもしくはＣ３−５置換シクロアルキルである。特定の実施形態では、Ｙ１が、ヘテロシクリルもしくは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルもしくはＣ３−８置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはＣ３−６置換ヘテロシクリル、またはＣ３−５ヘテロシクリルもしくはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
特定の実施形態では、Ｒ１が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ１が、水素である。特定の実施形態では、Ｒ１が、アルキルもしくは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６置換アルキル、またはＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４置換アルキル、またはＣ１−３アルキルもしくはＣ１−３置換アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１が、アルケニルもしくは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルもしくはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルもしくはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ１が、アルキニルもしくは置換アルキニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルもしくはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルもしくはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ１が、アリールもしくは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールもしくはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールもしくはＣ５置換アリール、またはＣ６アリールもしくはＣ６置換アリールである。特定の実施形態では、Ｒ１が、ヘテロアリールもしくは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールもしくはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールもしくはＣ５置換ヘテロアリール、またはＣ６ヘテロアリールもしくはＣ６置換ヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒ１が、シクロアルキルもしくは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルもしくはＣ３−８置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはＣ３−６置換シクロアルキル、またはＣ３−５シクロアルキルもしくはＣ３−５置換シクロアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１が、ヘテロシクリルもしくは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルもしくはＣ３−８置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはＣ３−６置換ヘテロシクリル、またはＣ３−５ヘテロシクリルもしくはＣ３−５置換ヘテロシク
リルである。
特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３それぞれが、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される、またはＲ２及びＲ３が、任意で、環状結合し、５または６員環ヘテロシクリルを形成する。
特定の実施形態では、Ｒ２が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ２が、水素である。特定の実施形態では、Ｒ２が、アルキルもしくは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６置換アルキル、またはＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４置換アルキル、またはＣ１−３アルキルもしくはＣ１−３置換アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アルケニルもしくは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルもしくはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルもしくはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アルキニルまたは置換アルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アルコキシまたは置換アルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アミノまたは置換アミノである。特定の実施形態では、Ｒ２が、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アシルまたはアシルオキシである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アシルアミノまたはアミノアシルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。特定の実施形態では、Ｒ２が、スルホニルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、チオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ２が、アリールもしくは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールもしくはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールもしくはＣ５置換アリール、またはＣ６アリールもしくはＣ６置換アリールである。特定の実施形態では、Ｒ２が、ヘテロアリールもしくは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールもしくはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールもしくはＣ５置換ヘテロアリール、またはＣ６ヘテロアリールもしく
はＣ６置換ヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒ２が、シクロアルキルもしくは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルもしくはＣ３−８置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはＣ３−６置換シクロアルキル、またはＣ３−５シクロアルキルもしくはＣ３−５置換シクロアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２が、ヘテロシクリルもしくは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはＣ３−６置換ヘテロシクリル、またはＣ３−５ヘテロシクリルもしくはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
特定の実施形態では、Ｒ３が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ３が、水素である。特定の実施形態では、Ｒ３が、アルキルもしくは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６置換アルキル、またはＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４置換アルキル、またはＣ１−３アルキルもしくはＣ１−３置換アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アルケニルもしくは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルもしくはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルもしくはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アルキニルまたは置換アルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アルコキシまたは置換アルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アミノまたは置換アミノである。特定の実施形態では、Ｒ３が、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アシルまたはアシルオキシである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アシルアミノまたはアミノアシルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。特定の実施形態では、Ｒ３が、スルホニルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、チオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ３が、アリールもしくは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールもしくはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールもしくはＣ５置換アリール、またはＣ６アリールもしくはＣ６置換アリールである。特定の実施形態では、Ｒ３が、ヘテロアリールもしくは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールもしくはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールもしくはＣ５置換ヘテロアリール、またはＣ６ヘテロアリールもしく
はＣ６置換ヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒ３が、シクロアルキルもしくは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルもしくはＣ３−８置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはＣ３−６置換シクロアルキル、またはＣ３−５シクロアルキルもしくはＣ３−５置換シクロアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３が、ヘテロシクリルもしくは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルもしくはＣ３−８置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはＣ３−６置換ヘテロシクリル、またはＣ３−５ヘテロシクリルもしくはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３が、任意で、環状結合し、５または６−員環ヘテロシクリルを形成する。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３が、環状結合し、５または６−員環ヘテロシクリルを形成する。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３が、環状結合し、５−員環ヘテロシクリルを形成する。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３が、環状結合し、６−員環ヘテロシクリルを形成する。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物が、リンカー、Ｌを含む。リンカーを用いて、カップリング部分を１つ以上の対象の部分及び／または１つ以上のポリペプチドに結合させてよい。いくつかの実施形態では、リンカーが、カップリング部分をポリペプチドまたは化学成分のいずれかに結合させる。リンカーを好適な位置でカップリング部分（例えば、本明細書に記載したとおり）に結合（例えば、共有結合）させてよい。
特定の実施形態では、Ｌが、カップリング部分をＷ１に結合させ、この結果、カップリング部分が、リンカーＬを介して間接的にＷ１に結合される。
対象のコンジュゲート及び化合物に任意の好適なリンカーを用いてよい。特定の実施形態では、Ｌが、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換アルキルアミド、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アルキルまたは置換アルキル基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アルケニルまたは置換アルケニル基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アルキニルまたは置換アルキニル基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アルコキシまたは置換アルコキシ基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アミノまたは置換アミノ基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、カルボキシルまたはカルボキシルエステル基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アシルアミノ基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アルキルアミドまたは置換アルキルアミド基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、アリールまたは置換アリール基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、シクロアルキルまたは置換シクロアルキル基を含む。特定の実施形態では、Ｌが、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリル基を含む。
特定の実施形態では、Ｌが、ポリマーを含む。例えば、ポリマーは、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールホモポリマー、ポリプロピレングリコールホモポリマー、エチレングリコールのプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、ホモポリマー及びコポリマーが、置換されていない、または１つの末端でアルキル基で置換されている）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエチルエーテル、ポリビニルピロリドン、これらの組み合わせなどを含むポリアルキレングリコール及びこれらの誘導体を含んでよい。特定の実施形態では、ポリマーが、ポリアルキレングリコールである。特定の実施形態では、ポリマーが、ポリエチレングリコールである。以下にさらに詳細に記載したコンジュゲート及び化合物に示したとおり、他のリンカーも可能である。
いくつかの実施形態では、Ｌが、式−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−によって記載されたリンカーであり、式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４それぞれが、独立してリンカー単位であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄそれぞれが、独立して、０または１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、１〜４である。
特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、１である。特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、２である。特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、３である。特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、４である。特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄそれぞれが、１である。特定の実施形態では、ａ、ｂ及びｃそれぞれが、１であり、ｄが、０である。特定の実施形態では、ａ及びｂそれぞれが、１であり、ｃ及びｄが、０である。特定の実施形態では、ａが、１であり、ｂ、ｃ及びｄが、０である。
特定の実施形態では、Ｌ１が、ヒドラジニル−ピロロ部分（例えば、前記の式（Ｉ）に示したとおり）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ２が、存在する場合、Ｗ１に結合される。特定の実施形態では、Ｌ３が、存在する場合、Ｗ１に結合される。特定の実施形態では、Ｌ４が、存在する場合、Ｗ１に結合される。
対象のリンカーに任意の好適なリンカー単位を用いてよい。対象のリンカー単位としては、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリエチレン及びポリアクリレート、アミノ酸残基（単数及び複数）、炭水化物ベースポリマーまたは炭水化物残基及びこれらの誘導体、ポリヌクレオチド、アルキル基、アリール基、ヘテロサイクリック基、これらの組み合わせ、及びこれらの置換バージョンの単位が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４（存在する場合）のそれぞれが、ポリエチレングリコール、修飾されたポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基、及びジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む結合基）から独立して選択される１つ以上の基を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１（存在する場合）が、ポリエチレングリコール、修飾されたポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基、またはジアミンを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１が、ポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１が、修飾されたポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１が、アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１が、アルキル基または置換アルキルを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１が、アリール基または置換アリール基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１が、ジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む結合基）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２（存在する場合）が、ポリエチレングリコール、修飾されたポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基、またはジアミンを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２が、ポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２が、修飾されたポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２が、アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２が、アルキル基または置換アルキルを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２が、アリール基または置換アリール基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２が、ジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む結合基）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ３（存在する場合）が、ポリエチレングリコール、修飾されたポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基、またはジアミンを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ３が、ポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ３が、修飾されたポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ３が、アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ３が、アルキル基または置換アルキルを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ３が、アリール基または置換アリール基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ３が、ジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む結合基）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ４（存在する場合）が、ポリエチレングリコール、修飾されたポリエチレングリコール、アミノ酸残基、アルキル基、置換アルキル、アリール基、置換アリール基、またはジアミンから独立して選択される基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ４が、ポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ４が、修飾されたポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ４が、アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ４が、アルキル基または置換アルキルを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ４が、アリール基または置換アリール基を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ４が、ジアミン（例えば、アルキレンジアミンを含む結合基）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌが、−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−を含むリンカーであり、式中、
−（Ｌ１）ａ−が、−（Ｔ１−Ｚ１）ａ−である；
−（Ｌ２）ｂ−が、−（Ｔ２−Ｚ２）ｂ−である；
−（Ｌ３）ｃ−が、−（Ｔ３−Ｚ３）ｃ−である；及び
−（Ｌ４）ｄ−が、−（Ｔ４−Ｚ４）ｄ−であり、
式中、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４が、存在する場合、テザー基である；
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４が、存在する場合、共有結合または結合官能基である；及び
ａ、ｂ、ｃ及びｄそれぞれが、独立して０または１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、１〜４である。
前記に記載したとおり、特定の実施形態では、Ｌ１が、ヒドラジニル−ピロロ部分（例えば、前記の式（Ｉ）に示したとおり）に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ１が、ヒドラジニル−ピロロ部分（例えば、前記の式（Ｉ）に示したとおり）に結合される。特定の実施形態では、Ｚ１が、Ｗ１に結合される。特定の実施形態では、Ｌ２が、存在する場合、Ｗ１に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ２が、存在する場合、Ｗ１に結合される、またはＺ２が、存在する場合、Ｗ１に結合される。特定の実施形態では、Ｌ３が、存在する場合、Ｗ１に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ３が、存在する場合、Ｗ１に結合される、またはＺ３が、存在する場合、Ｗ１に結合される。特定の実施形態では、Ｌ４が、存在する場合、Ｗ１に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ４が、存在する場合、Ｗ１に結合される、またはＺ４が、存在する場合、Ｗ１に結合される。
テザー基、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４に関して、対象のリンカーに任意の好適なテザー基を用いてよい。いくつかの実施形態では、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４それぞれが、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択される１つ以上の基を含み、式中、ｗが、１〜２０の整数であり、ｎが、１〜３０の整数であり、ｐが、１〜２０の整数であり、ｈが、１〜１２の整数である。
特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、２であり、Ｔ１−Ｚ１、Ｔ２−Ｚ２、Ｔ３−Ｚ３、またはＴ４−Ｚ４の１つが、（ＰＥＧ）ｎ−ＣＯである場合、ｎが、６ではない。例えば、いくつかの例では、リンカーが、以下の構造を有してよい。
Figure 2017520533
 式中、ｎが、６ではない。
特定の実施形態では、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、２であり、Ｔ１−Ｚ１、Ｔ２−Ｚ２、Ｔ３−Ｚ３、またはＴ４−Ｚ４の１つが、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル−ＮＲ１１である場合、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルが、Ｃ５−アルキルではない。例えば、いくつかの例では、リンカーが、以下の構造を有してよい。
Figure 2017520533
 式中、ｇが、４ではない。
特定の実施形態では、テザー基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及び／またはＴ４）が、エチレンジアミン（ＥＤＡ）部分、例えば、ＥＤＡ含有テザーを含む。特定の実施形態では、（ＥＤＡ）ｗが、１つ以上のＥＤＡ部分を含み、例えば、式中、ｗが、１〜５０の整数であり、例えば、１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば、１、２、３、４、５または６である）。任意で、１つ以上の好適な位置で、任意の好適な置換基、例えば、アルキル、置換アルキル、アシル、置換アシル、アリールまたは置換アリールで結合エチレンジアミン（ＥＤＡ）部分を置換してよい。特定の実施形態では、ＥＤＡ部分が、以下の構造によって記載されている。
Figure 2017520533
 式中、ｙが、１〜６の整数であり、ｒが、０または１であり、各Ｒ１２が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される。特定の実施形態では、ｙが、１、２、３、４、５または６である。特定の実施形態では、ｙが、１であり、ｒが、０である。特定の実施形態では、ｙが、１であり、ｒが、１である。特定の実施形態では、ｙが、２であり、ｒが、０である。特定の実施形態では、ｙが、２であり、ｒが、１である。特定の実施形態では、各Ｒ１２が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールから独立して選択される。特定の実施形態では、ＥＤＡの２つの隣接したＲ１２基のいずれかが、環状結合して、例えば、ピペラジニル環を形成してよい。特定の実施形態では、ｙが、１であり、２つの隣接したＲ１２基が、アルキル基であり、環状結合して、ピペラジニル環を形成する。特定の実施形態では、ｙが、１であり、隣接したＲ１２基が、水素、アルキル（例えば、メチル）及び置換アルキル（例えば、低級アルキル−ＯＨ、例えば、エチル−ＯＨまたはプロピル−ＯＨ）から選択される。
特定の実施形態では、テザー基が、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）部分（また、本明細書では、４−アミノ−ピペリジン、４ＡＰと称される）を含む。４ＡＰ部分は、任意で、１つ以上の好適な位置で、任意の好適な置換基、例えば、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分、アシル、置換アシル、アリールまたは置換アリールで置換してよい。特定の実施形態では、４ＡＰ部分が、以下の構造によって記載されている。
Figure 2017520533
式中、Ｒ１２が、水素、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分（例えば、ポリエチレングリコールまたは修飾されたポリエチレングリコール）、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ１２が、ポリエチレングリコール部分である。特定の実施形態では、Ｒ１２が、カルボキシ修飾されたポリエチレングリコールである。特定の実施形態では、Ｒ１２が、以下の構造によって示してよい式：（ＰＥＧ）ｋによって記載されるポリエチレングリコール部分を含む。
Figure 2017520533
 式中、ｋが、１〜２０の整数であり、例えば、１〜１８、または１〜１６、または１〜１４、または１〜１２、または１〜１０、または１〜８、または１〜６、または１〜４の整数、または１もしくは２、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。いくつかの例では、ｋが、２である。特定の実施形態では、Ｒ１７が、ＯＨ、ＣＯＯＨ、またはＣＯＯＲから選択され、式中、Ｒが、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ１７が、ＣＯＯＨである。
特定の実施形態では、テザー基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及び／またはＴ４）が、（ＰＥＧ）ｎであり、式中、（ＰＥＧ）ｎが、ポリエチレングリコールまたは修飾されたポリエチレングリコール結合単位である。特定の実施形態では、（ＰＥＧ）ｎが、以下の構造によって記載されている。
Figure 2017520533
 式中、ｎが、１〜５０の整数であり、例えば、１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。いくつかの例では、ｎが、３である。いくつかの例では、ｎが、６である。いくつかの例では、ｎが、１２である。
特定の実施形態では、テザー基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及び／またはＴ４）が、（ＡＡ）ｐを含み、式中、ＡＡが、アミノ酸残基である。任意の好適なアミノ酸を用いてよい。対象のアミノ酸としては、Ｌ−及びＤ−アミノ酸、天然アミノ酸、例えば、２０一次α−アミノ酸及びβ−アラニン、非−天然アミノ酸（例えば、アミノ酸類似体）、例えば、非−天然α−アミノ酸または非−天然β−アミノ酸などのいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ｐが、１である。特定の実施形態では、ｐが、１〜５０の整数であり、例えば、１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。
特定の実施形態では、テザー基（例えば、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及び／またはＴ４）が、式−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−によって記載される部分を含み、式中、ｈが、０であり、またはｎが、１〜５０の整数であり、例えば、１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１２または１〜６の整数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。特定の実施形態では、Ｒ１３が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ１３が、水素である。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アルキルもしくは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６置換アルキル、またはＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４置換アルキル、またはＣ１−３アルキルもしくはＣ１−３置換アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アルケニルもしくは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルもしくはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルもしくはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アルキニルまたは置換アルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アルコキシまたは置換アルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アミノまたは置換アミノである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アシルまたはアシルオキシである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アシルアミノまたはアミノアシルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、スルホニルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、チオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、アリールもしくは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリー
ルもしくはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールもしくはＣ５置換アリール、またはＣ６アリールもしくはＣ６置換アリールである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、ヘテロアリールもしくは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールもしくはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールもしくはＣ５置換ヘテロアリール、またはＣ６ヘテロアリールもしくはＣ６置換ヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、シクロアルキルもしくは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルもしくはＣ３−８置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはＣ３−６置換シクロアルキル、またはＣ３−５シクロアルキルもしくはＣ３−５置換シクロアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１３が、ヘテロシクリルもしくは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルもしくはＣ３−８置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはＣ３−６置換ヘテロシクリル、またはＣ３−５ヘテロシクリルもしくはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
特定の実施形態では、Ｒ１３が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールから選択される。これらの実施形態では、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールが、Ｒ１３について前記に記載したとおりである。
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４に関して、対象のリンカーに任意の好適な結合官能基を用いてよい。結合官能基の対象としては、アミノ、カルボニル、アミド、オキシカルボニル、カルボキシ、スルホニル、スルホキシド、スルホニルアミノ、アミノスルホニル、チオ、オキシ、ホスホ、ホスホラミデート、チオホスホラミデートなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４それぞれが、独立して共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−であり、式中、ｑが、１〜６の整数である。特定の実施形態では、ｑが、１〜６（例えば、１、２、３、４、５または６）の整数である。
いくつかの実施形態では、各Ｒ１５が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される。特定の実施形態では、Ｒ１５が、水素である。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アルキルもしくは置換アルキル、例えば、Ｃ１−６アルキルもしくはＣ１−６置換アルキル、またはＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４置換アルキル、またはＣ１−３アルキルもしくはＣ１−３置換アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アルケニルもしくは置換アルケニル、例えば、Ｃ２−６アルケニルもしくはＣ２−６置換アルケニル、またはＣ２−４アルケニルもしくはＣ２−４置換アルケニル、またはＣ２−３アルケニルもしくはＣ２−３置換アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アルキニルまたは置換アルキニルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アルコキシまたは置換アルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アミノまたは置換アミノである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、カルボキシルまたはカルボキシルエステルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アシルまたはアシルオキシである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アシルアミノまたはアミノアシルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アルキルアミドまたは置換アルキルアミドである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、スルホニルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、チオアルコキシまたは置換チオアルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、アリールもしくは置換アリール、例えば、Ｃ５−８アリールもしくはＣ５−８置換アリール、例えば、Ｃ５アリールもしくはＣ５置換アリール、またはＣ６アリールもしくはＣ６置換アリールである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、ヘテロアリールもしくは置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５−８ヘテロアリールもしくはＣ５−８置換ヘテロアリール、例えば、Ｃ５ヘテロアリールもしくはＣ５置換ヘ
テロアリール、またはＣ６ヘテロアリールもしくはＣ６置換ヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、シクロアルキルもしくは置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−８シクロアルキルもしくはＣ３−８置換シクロアルキル、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルもしくはＣ３−６置換シクロアルキル、またはＣ３−５シクロアルキルもしくはＣ３−５置換シクロアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１５が、ヘテロシクリルもしくは置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−８ヘテロシクリルもしくはＣ３−８置換ヘテロシクリル、例えば、Ｃ３−６ヘテロシクリルもしくはＣ３−６置換ヘテロシクリル、またはＣ３−５ヘテロシクリルもしくはＣ３−５置換ヘテロシクリルである。
特定の実施形態では、各Ｒ１５が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択される。これらの実施形態では、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリル置換基が、Ｒ１５について前記に記載したとおりである。
いくつかの実施形態では、対象のリンカー中で、
Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル及び置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルから選択される；
Ｔ２、Ｔ３及びＴ４それぞれが、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択される；及び、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４それぞれが、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から独立して選択され、式中、ｑが、１〜６の整数である；
式中、
（ＰＥＧ）ｎが、
Figure 2017520533
 であり、ｎが、１〜３０の整数である；
ＥＤＡが、以下の構造：
Figure 2017520533
 を有するエチレンジアミン部分であり、
式中、ｙが、１〜６の整数であり、ｒが、０または１である；
ピペリジン−４−アミノが、
Figure 2017520533
 である；
ＡＡが、アミノ酸残基であり、式中、ｐが、１〜２０の整数である；及び、
各Ｒ１１及びＲ１２が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール及び置換アリールから独立して選択され、式中、任意の２つの隣接したＲ１２基が、環状結合して、ピペラジニル環を形成する；及び、
Ｒ１３が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールから選択される。
特定の実施形態では、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４及びＺ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４が、以下の表、例えば、以下の表の１つの列から選択される。
Figure 2017520533
Figure 2017520533
特定の実施形態では、Ｌが、−（Ｌ１）ａ−（Ｌ２）ｂ−（Ｌ３）ｃ−（Ｌ４）ｄ−を含むリンカーであり、式中、−（Ｌ１）ａ−が、−（Ｔ１−Ｚ１）ａ−である；−（Ｌ２）ｂ−が、−（Ｔ２−Ｚ２）ｂ−である；−（Ｌ３）ｃ−が、−（Ｔ３−Ｚ３）ｃ−である；及び−（Ｌ４）ｄ−が、−（Ｔ４−Ｚ４）ｄ−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ３が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ４が、−ＣＯ−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が存在せず、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が存在せず、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１１−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−ＳＯ２−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ３が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ４が、−ＣＯ−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＳＯ２−であり、Ｔ２が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ２が存在せず、Ｔ３が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ３が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が、−ＮＲ１５−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ３が、−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が存在せず、Ｔ３が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ３が存在せず、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ３が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ４が、−ＣＯ（ＡＡ）ｐ−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ２が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ２が、−ＮＲ１５−であり、Ｔ３が存在せず、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ４が、−ＮＲ１５−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、（ＥＤＡ）ｗであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（ＣＲ１３ＯＨ）ｈであり、Ｚ３が、−ＣＯＮＲ１５−であり、Ｔ４が、（ＰＥＧ）ｎであり、Ｚ４が、−ＣＯ（ＡＡ）ｐ−である。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、４ＡＰであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が、（ＡＡ）ｐであり、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ１が、−ＣＯ−であり、Ｔ２が、４ＡＰであり、Ｚ２が、−ＣＯ−であり、Ｔ３が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルであり、Ｚ３が、−ＣＯ−であり、Ｔ４が存在せず、Ｚ４が存在しない。
特定の実施形態では、リンカーが、以下の構造のうちの１つによって記載される。
Figure 2017520533
Figure 2017520533
Figure 2017520533
前記記載のリンカー構造の特定の実施形態では、各ｆが、独立して、０または１〜１２の整数である；各ｙが、独立して、０または１〜２０の整数である；各ｎが、独立して、０または１〜３０の整数である；各ｐが、独立して、０または１〜２０の整数である；各ｈが、独立して、０または１〜１２の整数である；各Ｒが、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルである；及び各Ｒ’が、独立して、Ｈ、アミノ酸の側鎖、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルである。前記記載のリンカー構造の特定の実施形態では、各ｆが、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；各ｙが、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；各ｐが、独立して、０、１、２、３、４、５または６である；及び各ｈが、独立して、０、１、２、３、４、５または６である。前記記載のリンカー構造の特定の実施形態では、各Ｒが、独立して、Ｈ、メチルまたは−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨであり、式中、ｍが、１、２、３または４（例えば、２）である。
特定の実施形態では、Ｗ１が、マイタンシノイドである。以下のセクションに、マイタンシノイドが、さらに詳細に記載される。
特定の実施形態では、Ｗ２が、抗ＨＥＲ２抗体である。以下のセクションに、抗ＨＥＲ２抗体が、さらに詳細に記載される。
対象の化合物及びコンジュゲートに用いるのに、前記の構造に記載した化学成分、リンカー及びカップリング部分のいずれかを適合させてよい。
さらに、ヒドラジニル−インドール化合物及びコンジュゲートの生成方法に関する開示が、２０１３年３月１１日に出願された米国特許出願第１３／７９４，１５９号にみられ、本出願の開示は参照として本明細書に全体が組み込まれる。
抗ＨＥＲ２抗体
前記に記載したとおり、対象のコンジュゲートが、置換基Ｗ２として２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基を含むように修飾された抗ＨＥＲ２抗体を含むことができる。本明細書に用いる場合、アミノ酸を、その標準名称、その３文字の標準略名及び／またはその１文字の標準略名で呼んでよい。例えば、アラニンまたはＡｌａまたはＡ；システインまたはＣｙｓまたはＣ；アスパラギン酸またはＡｓｐまたはＤ；グルタミン酸またはＧｌｕまたはＥ；フェニルアラニンまたはＰｈｅまたはＦ；グリシンまたはＧｌｙまたはＧ；ヒスチジンまたはＨｉｓまたはＨ；イソロイシンまたはＩｌｅまたはＩ；リジンまたはＬｙｓまたはＫ；ロイシンまたはＬｅｕまたはＬ；メチオニンまたはＭｅｔまたはＭ；アスパラギンまたはＡｓｎまたはＮ；プロリンまたはＰｒｏまたはＰ；グルタミンまたはＧｌｎまたはＱ；アルギニンまたはＡｒｇまたはＲ；セリンまたはＳｅｒまたはＳ；トレオニンまたはＴｈｒまたはＴ；バリンまたはＶａｌまたはＶ；トリプトファンまたはＴｒｐまたはＷ；及びチロシンまたはＴｙｒまたはＹである。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のドメインＩ内のエピトープ、例えば、図４に示されたＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２３〜２１７内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ、例えば、図４に示されたＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のドメインＩＩＩ内のエピトープ、例えば、図４に示されたＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸３４２〜５１０内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ、例えば、図４に示されたＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープを結合する。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、図４に示されたとおり、配列番号：／／のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、図４に示されたとおり、配列番号：／／のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープを結合する。
いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、第２の抗ＨＥＲ２抗体を有するＨＥＲ２内のエピトープへの結合と競合する、及び／または、第２の抗ＨＥＲ２抗体として、ＨＥＲ２内の同じエピトープを結合する。いくつかの場合では、第２の抗ＨＥＲ２抗体を有するＨＥＲ２内のエピトープへの結合と競合する抗ＨＥＲ２抗体が、また、第２の抗ＨＥＲ２抗体としてエピトープに結合する。いくつかの場合では、第２の抗ＨＥＲ２抗体を有するＨＥＲ２内のエピトープへの結合と競合する抗ＨＥＲ２抗体が、第２の抗ＨＥＲ２抗体によって結合されたエピトープ内でオーバーラッピングしているエピトープに結合する。
対象のコンジュゲートに用いるのに好適な抗ＨＥＲ２抗体が、いくつかの場合では、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を抑制し、当該抑制は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両者で生じる。例えば、いくつかの場合では、対象のコンジュゲートに用いるのに好適な抗ＨＥＲ２抗体が、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または８０％以上、例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を抑制する。
いくつかの場合では、対象のコンジュゲートに用いるのに好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のＨＥＲ３及び／または他のＥＧＦＲ受容体への二量体化を抑制する。いくつかの場合では、対象のコンジュゲートに用いるのに好適な抗ＨＥＲ２抗体が、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または８０％以上、例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％、ＨＥＲ２のＨＥＲ３及び／または他のＥＧＦＲ受容体への二量体化を抑制する。
４Ｄ５
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、図４に示されたとおり、配列番号：／／のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、図４に示されたとおり、配列番号：／／のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、図４に示されたとおり、配列番号：／／のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープを結合する。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）及びＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）及びＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＨ領域中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＬ領域中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）中に存在するＶＨ ＣＤＲ及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）；及びＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖不変領域が、ＦＧｌｙ残基を含むように修飾されているＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖不変領域が、ＦＧｌｙ残基を含むように修飾されているＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む。
ヒト化２Ｃ４
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ、例えば、図４に示されたアミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む；及び軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む；及び軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＲＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む；及び軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＲＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＨ領域中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＬ領域中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＨ領域中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む；及び以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＬ領域中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含むＶＨ領域を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含むＶＬ領域を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含むＶＨ領域を含む；及びアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含むＶＬ領域を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖不変領域が、ＦＧｌｙ残基を含むように修飾されているアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含むＶＨ領域を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖不変領域が、ＦＧｌｙ残基を含むように修飾されているアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含むＶＬ領域を含む。
Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ抗ＨＥＲ２
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号：／／）、ＧＦＮＩＫＤＩＦ（配列番号：／／）、ＧＹＴＦＴＮＹＷ（配列番号：／／）、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号：／／）、ＧＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号：／／）、ＧＹＴＦＴＳＨＷ（配列番号：／／）、ＧＹＴＦＴＧＹＷ（配列番号：／／）、ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号：／／）、及びＧＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号：／／）から選択されるＶＨ ＣＤＲ１；及び／またはＩＳＧＧＧＳＹＴ（配列番号：／／）、ＩＤＰＡＮＤＮＰ（配列番号：／／）、ＩＨＰＳＤＳＤＶ（配列番号：／／）、ＩＮＰＮＮＧＧＴ（配列番号：／／）、ＩＮＴＡＴＧＥＰ（配列番号：／／）、ＩＮＰＳＮＧＧＴ（配列番号：／／）、ＩＬＰＧＳＧＳＴ（配列番号：／／）、ＩＨＰＮＳＧＳＩ（配列番号：／／）、ＩＬＰＧＧＹＴ（配列番号：／／）、及びＩＤＰＹＮＧＧＴ（配列番号：／／）から選択されるＶＨ ＣＤＲ２；及び／またはＣＡＲＫＧＮＹＧＮＹＧＫＬＡＹＷ（配列番号：／／）、ＣＡＧＧＰＡＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）、ＣＡＫＳＹＹＤＳＡＭＤＹＷ（配列番号：／／）、ＣＶＰＧＧＬＲＳＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）、ＣＴＡＷＡＹＥＰＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）、ＣＡＲＡＹＹＤＦＳＷＦＶＹＷ（配列番号：／／）、ＣＡＲＷＧＤＧＳＦＡＹＷ（配列番号：／／）、ＣＡＧＹＧＮＧＰＭＤＹＷ（配列番号：／／）、ＣＡＲＧＳＳＧＹＰＹＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＧＡＧＹＡＬＤＹＷ（配列番号：／／）から選択されるＶＨ ＣＤＲ1を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＥＮＩＹＳＮ（配列番号：／／）、ＱＤＶＩＡＡ（配列番号：／／）、ＫＳＶＴＴＳＧＹＳＹ（配列番号：／／）、ＱＤＶＳＡＡ（配列番号：／／）、ＱＤＶＦＴＡ（配列番号：／／）、ＱＤＩＳＮＹ（配列番号：／／）、ＱＮＶＧＴＡ（配列番号：／／）、ＳＳＶＳＹ（配列番号：／／）、及びＱＤＶＧＴＡ（配列番号：／／）から選択されるＶＬ ＣＤＲ１；及び／またはＡＡＴ、ＷＡＳ、ＶＡＳ、ＳＡＳ、ＩＳ、ＳＴＳ、ＲＴＳ、及びＬＴＳから選択されるＶＬ ＣＤＲ２；及び／またはＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦ（配列番号：／／）、ＣＨＨＳＲＥＬＰＷＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＨＦＧＩＰＷＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＧＮＴＬＰＬＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＹＲＳＹＰＦＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＹＨＮＹＰＬＴＦ（配列番号：／／）、ＣＱＱＹＳＳＹＰＹＭＹＴＦ（配列番号：／／）、及びＣＱＱＷＳＳＴＰＹＴＦ（配列番号：／／）から選択されるＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、下記のとおり、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号：／／）、ＩＳＧＧＧＳＹＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＫＧＮＹＧＮＹＧＫＬＡＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＦＮＩＫＤＩＦ（配列番号：／／）、ＩＤＰＡＮＤＮＰ（配列番号：／／）、及びＣＡＧＧＰＡＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＮＹＷ（配列番号：／／）、ＩＨＰＳＤＳＤＶ（配列番号：／／）、及びＣＡＫＳＹＹＤＳＡＭＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号：／／）、ＩＮＰＮＮＧＧＴ（配列番号：／／）、及びＣＶＰＧＧＬＲＳＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号：／／）、ＩＮＴＡＴＧＥＰ（配列番号：／／）、及びＣＴＡＷＡＹＥＰＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＳＨＷ（配列番号：／／）、ＩＮＰＳＮＧＧＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＡＹＹＤＦＳＷＦＶＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＧＹＷ（配列番号：／／）、ＩＬＰＧＳＧＳＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＷＧＤＧＳＦＡＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号：／／）、ＩＨＰＮＳＧＳＩ（配列番号：／／）、及びＣＡＧＹＧＮＧＰＭＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＴＦＴＮＹＷ（配列番号：／／）、ＩＬＰＧＧＹＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＧＳＳＧＹＰＹＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ配列ＧＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号：／／）、ＩＤＰＹＮＧＧＴ（配列番号：／／）、ＣＡＲＧＡＧＹＡＬＤＹＷ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。前記の実施形態のいずれかでは、抗体をヒト化することができる。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、下記のとおり、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＥＮＩＹＳＮ（配列番号：／／）、ＡＡＴ、及びＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＱＤＶＩＡＡ（配列番号：／／）、ＷＡＳ、及びＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＫＳＶＴＴＳＧＹＳＹ（配列番号：／／）、ＶＡＳ、及びＣＨＨＳＲＥＬＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＱＤＶＳＡＡ（配列番号：／／）、ＷＡＳ、及びＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＱＤＶＦＴＡ（配列番号：／／）、ＳＡＳ、及びＣＱＱＨＦＧＩＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＱＤＩＳＮＹ（配列番号：／／）、ＩＳ、及びＣＱＱＧＮＴＬＰＬＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＱＮＶＧＴＡ（配列番号：／／）、ＳＴＳ、及びＣＱＱＹＲＳＹＰＦＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＳＳＶＳＹ（配列番号：／／）、ＲＴＳ、及びＣＱＱＹＨＮＹＰＬＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＱＤＶＧＴＡ（配列番号：／／）、ＷＡＳ、及びＣＱＱＹＳＳＹＰＹＭＹＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ配列ＳＳＶＳＹ（配列番号：／／）、ＬＴＳ、及びＣＱＱＷＳＳＴＰＹＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。前記の実施形態のいずれかでは、抗体をヒト化することができる。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、下記のとおり、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号：／／）、ＩＳＧＧＧＳＹＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＫＧＮＹＧＮＹＧＫＬＡＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＥＮＩＹＳＮ（配列番号：／／）、ＡＡＴ、及びＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＦＮＩＫＤＩＦ（配列番号：／／）、ＩＤＰＡＮＤＮＰ（配列番号：／／）、及びＣＡＧＧＰＡＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＱＤＶＩＡＡ（配列番号：／／）、ＷＡＳ、及びＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＮＹＷ（配列番号：／／）、ＩＨＰＳＤＳＤＶ（配列番号：／／）、及びＣＡＫＳＹＹＤＳＡＭＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＫＳＶＴＴＳＧＹＳＹ（配列番号：／／）、ＶＡＳ、及びＣＨＨＳＲＥＬＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号：／／）、ＩＮＰＮＮＧＧＴ（配列番号：／／）、及びＣＶＰＧＧＬＲＳＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＱＤＶＳＡＡ（配列番号：／／）、ＷＡＳ、及びＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号：／／）、ＩＮＴＡＴＧＥＰ（配列番号：／／）、及びＣＴＡＷＡＹＥＰＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＱＤＶＦＴＡ（配列番号：／／）、ＳＡＳ、及びＣＱＱＨＦＧＩＰＷＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＳＨＷ（配列番号：／／）、ＩＮＰＳＮＧＧＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＡＹＹＤＦＳＷＦＶＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＱＤＩＳＮＹ（配列番号：／／）、ＩＳ、及びＣＱＱＧＮＴＬＰＬＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＧＹＷ（配列番号：／／）、ＩＬＰＧＳＧＳＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＷＧＤＧＳＦＡＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＱＮＶＧＴＡ（配列番号：／／）、ＳＴＳ、及びＣＱＱＹＲＳＹＰＦＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号：／／）、ＩＨＰＮＳＧＳＩ（配列番号：／／）、及びＣＡＧＹＧＮＧＰＭＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＳＳＶＳＹ（配列番号：／／）、ＲＴＳ、及びＣＱＱＹＨＮＹＰＬＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＴＦＴＮＹＷ（配列番号：／／）、ＩＬＰＧＧＹＴ（配列番号：／／）、及びＣＡＲＧＳＳＧＹＰＹＹＦＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＱＤＶＧＴＡ（配列番号：／／）、ＷＡＳ、及びＣＱＱＹＳＳＹＰＹＭＹＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号：／／）、ＩＤＰＹＮＧＧＴ（配列番号：／／）、ＣＡＲＧＡＧＹＡＬＤＹＷ（配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＳＳＶＳＹ（配列番号：／／）、ＬＴＳ、及びＣＱＱＷＳＳＴＰＹＴＦ（配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２ポリペプチド中のエピトープへの結合と競合する。前記の実施形態のいずれかでは、抗体をヒト化することができる。
Ａｌｐｅｒ ＢｉｏＴｅｃｈ ２ＨＥ
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２ポリペプチドのドメインＩＩ内のエピトープ、例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸ＬＶＴＹＮＴＤＴＦＥ内、アミノ酸ＳＭＰＮＰＥＧＲＹＴ内、またはアミノ酸ＹＮＹＬＳＴＤＶＧＳ内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２ポリペプチドのドメインＩＩＩ内のエピトープ、例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸ＥＴＬＥＥＩＴＧＹＬ内、アミノ酸ＹＩＳＡＷＰＤＳＬＰ内、またはアミノ酸ＹＳＬＴＬＱＧＬＧＩ内のエピトープを結合する。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２ポリペプチドのドメインＩＶ内のエピトープ、例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸ＰＲＥＹＶＮＡＲＨＣ内、アミノ酸ＡＤＱＣＶＡＣＡＨＹ内、またはアミノ酸ＰＳＧＶＫＰＤＬＳＹ内のエピトープを結合する。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＧＦＳＬＴＳＹＶ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＩＷＴＧＧＧＴ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＳＳＶＳＹ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＤＴＳ（ＶＬ ＣＤＲ２）、及びＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＦＳＬＴＳＹＶ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＩＷＴＧＧＧＴ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ ＳＳＶＳＹ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＤＴＳ（ＶＬ ＣＤＲ２）、及びＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＦＳＬＴＳＹＶ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＩＷＴＧＧＧＴ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＳＳＶＳＹ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＤＴＳ（ＶＬ ＣＤＲ２）、及びＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープへの結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＦＳＬＴＳＹＶ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＩＷＴＧＧＧＴ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ ＳＳＶＳＹ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＤＴＳ（ＶＬ ＣＤＲ２）、及びＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＧＦＳＬＴＳＹＶ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＩＷＴＧＧＧＴ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含み、ＶＬ ＣＤＲ ＳＳＶＳＹ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＤＴＳ（ＶＬ ＣＤＲ２）、及びＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のＶＨアミノ酸配列：ＧＰＧＬＡＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＶＩＳＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＴＧＧＧＴＮＹＮＳＡＬＫＳＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＳＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＲＹＹＣＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴ（配列番号：／／）中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のＶＬアミノ酸配列：ＩＬＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：／／）中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のＶＨアミノ酸配列：ＧＰＧＬＡＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＶＩＳＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＴＧＧＧＴＮＹＮＳＡＬＫＳＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＳＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＲＹＹＣＡＳＬＳＹＤＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴ（配列番号：／／）中に存在するＶＨ ＣＤＲを含み、以下のＶＬアミノ酸配列：ＩＬＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号：／／）中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。
修飾された不変領域配列
前記に記載したとおり、抗ＨＥＲ２抗体のアミノ酸配列が、ｉｎ ｖｉｖｏ（例えば、細胞中のａｌｄタグを含有するタンパク質の翻訳時）またはｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、無細胞系でａｌｄタグを含有するタンパク質をＦＧＥと接触させることによって）のいずれかで、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）の作用によって、２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基に変換（酸化）することができるセリンまたはシステイン残基を含有するスルファターゼモチーフを含むように修飾される。また、本明細書では、かかるスルファターゼモチーフをＦＧＥ−修飾部位と称してよい。
スルファターゼモチーフ
アルデヒドタグの最小のスルファターゼモチーフは、通常、５または６のアミノ酸残基の長さであり、通常、６のアミノ酸残基の長さのみである。Ｉｇポリペプチド中にもたらされるスルファターゼモチーフは、少なくとも５または６のアミノ酸残基であり、例えば、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８または７未満のアミノ酸残基の長さのスルファターゼモチーフと定義されるように、５〜１６、６〜１６、５〜１５、６〜１５、５〜１４、６〜１４、５〜１３、６〜１３、５〜１２、６〜１２、５〜１１、６〜１１、５〜１０、６〜１０、５〜９、６〜９、５〜８、または６〜８のアミノ酸残基の長さとすることができる。
特定の実施形態では、対象のポリペプチドが、天然アミノ酸配列と比較して、１つ以上のアミノ酸残基、例えば、２以上の、または３以上の、または４以上の、または５以上の、または６以上の、または７以上の、または８以上の、または９以上の、または１０以上の、または１１以上の、または１２以上の、または１３以上の、または１４以上の、または１５以上の、または１６以上の、または１７以上の、または１８以上の、または１９以上の、または２０以上のアミノ酸残基が、挿入され、除去され、置換（置換され）たポリペプチドを含み、ポリペプチド中のスルファターゼモチーフの配列が提供される。特定の実施形態では、ポリペプチドが、ポリペプチドの天然アミノ酸配列と比較して、アミノ酸配列の２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３または２未満のアミノ酸残基の修飾（挿入、付加、欠失、及び／または置換／置き換え）を含む。式中、ポリペプチド由来のアミノ酸配列（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）が、所望のスルファターゼモチーフの１つ以上の残基を含有する場合、例えば、天然アミノ酸残基をフランキングするアミノ酸残基の部位特定修飾（挿入、付加、欠失、置換／置き換え）によって残基の修飾の総数を減らし、所望のスルファターゼモチーフの配列をもたらすことができる。特定の実施形態では、挿入、除去、置換（置き換え）、または付加（例えば、Ｎ−末端またはＣ−末端に）されるアミノ酸残基の数を最小化するように、標的抗ＨＥＲ２ポリペプチドの天然アミノ酸配列の修飾の範囲が、最小化される。標的抗ＨＥＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列修飾の範囲の最小化では、かかる修飾が抗ＨＥＲ２機能及び／または構造に与える可能性がある影響を最小化してよい。
特定の対象のアルデヒドタグが、少なくとも最小のスルファターゼモチーフ（また、「コンセンサススルファターゼモチーフ」と称される）を含むアルデヒドタグであることを留意すべきであり、より長いアルデヒドタグが、本開示によって検討され、包含され、本開示の組成物及び方法に用いることができると容易に理解される。このため、アルデヒドタグは、５または６の残基の最小のスルファターゼモチーフを含むことができる、または、より長くすることができ、追加のアミノ酸残基によってモチーフのＮ−末端及び／またはＣ−末端側でフランキングすることができる最小のスルファターゼモチーフを含むことができる。例えば、５または６のアミノ酸残基のアルデヒドタグが、検討され、ならびに、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上のアミノ酸残基のより長いアミノ酸配列が、検討される。
アルデヒドタグが、Ｉｇ重鎖のＣ−末端に、またはＣ−末端の近くに存在することができる；例えば、アルデヒドタグが、天然野生型Ｉｇ重鎖のＣ−末端の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸内に存在することができる。アルデヒドタグが、Ｉｇ重鎖のＣＨ１ドメイン内に存在することができる。アルデヒドタグが、Ｉｇ重鎖のＣＨ２ドメイン内に存在することができる。アルデヒドタグが、Ｉｇ重鎖のＣＨ３ドメイン内に存在することができる。アルデヒドタグが、Ｉｇ軽鎖不変領域中に、例えば、カッパ軽鎖不変領域またはラムダ軽鎖不変領域中に存在することができる。
特定の実施形態では、用いられるスルファターゼモチーフを以下の式によって記載してよい。
Ｘ１Ｚ１０Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （Ｉ’）
式中、
Ｚ１０が、システインまたはセリン（また、（Ｃ／Ｓ）によって示すことができる）である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基（また、（Ｐ／Ａ）によって示すことができる）のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、例えば、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである；
Ｘ１が、存在する、または存在しない。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えば、Ｌ、Ｍ、ＳまたはＶとすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３は、独立して、通常、脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または硫黄を含有するアミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧであるが、任意のアミノ酸とすることができる。
抗ＨＥＲ２重鎖及び／または軽鎖のアミノ酸配列は、少なくとも５の式Ｘ１Ｚ１０Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０のアミノ酸の配列がもらされるように修飾することができ、式中、
Ｚ１０が、システインまたはセリンである；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基である；
Ｚ３０が、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸である；
Ｘ１が、存在するまたは存在しない。存在する場合、異種スルファターゼモチーフが、ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が、存在するという条件で、任意のアミノ酸である；
Ｘ２及びＸ３それぞれが、独立して、任意のアミノ酸であり、
配列は、Ｉｇ不変領域の溶媒接触可能ループ領域内にある、または隣接しており、配列は、Ｉｇ重鎖のＣ−末端にない。
スルファターゼモチーフは、一般に、選択されるＦＧＥ、例えば、アルデヒドの標識を付けたポリペプチドが、発現する宿主細胞中に存在するＦＧＥ、または無細胞ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法でアルデヒドの標識を付けたポリペプチドと接触されるＦＧＥによって、変換することができるように選択される。
例えば、ＦＧＥが、真核生物ＦＧＥ（例えば、ヒトＦＧＥを含む哺乳動物ＦＧＥ、）である場合、スルファターゼモチーフは、以下の式のものとすることができる。
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３０ （Ｉ’’）
式中、
Ｘ１が、存在してよい、または存在しなくてよい。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、ＳまたはＶとすることができる；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧとすることができる；及び
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、例えば、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである。
スルファターゼモチーフの特定の例が、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号：１７）、ＭＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）、ＶＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）、ＬＣＳＰＳＲ（配列番号：／／）、ＬＣＡＰＳＲ（配列番号：／／）、ＬＣＶＰＳＲ（配列番号：／／）、ＬＣＧＰＳＲ（配列番号：／／）、ＩＣＴＰＡＲ（配列番号：／／）、ＬＣＴＰＳＫ（配列番号：／／）、ＭＣＴＰＳＫ（配列番号：／／）、ＶＣＴＰＳＫ（配列番号：／／）、ＬＣＳＰＳＫ（配列番号：／／）、ＬＣＡＰＳＫ（配列番号：／／）、ＬＣＶＰＳＫ（配列番号：／／）、ＬＣＧＰＳＫ（配列番号：／／）、ＬＣＴＰＳＡ（配列番号：／／）、ＩＣＴＰＡＡ（配列番号：／／）、ＭＣＴＰＳＡ（配列番号：／／）、ＶＣＴＰＳＡ（配列番号：／／）、ＬＣＳＰＳＡ（配列番号：／／）、ＬＣＡＰＳＡ（配列番号：／／）、ＬＣＶＰＳＡ（配列番号：／／）、及びＬＣＧＰＳＡ（配列番号：／／）を含む。
ＦＧｌｙを含有する配列
修飾された抗ＨＥＲ２重鎖及び／または軽鎖上のＦＧＥの作用により、スルファターゼモチーフ中のセリンまたはシステインが、ＦＧｌｙに修飾される。このため、ＦＧｌｙを含有するスルファターゼモチーフは、以下の式のものとすることができ、
Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （Ｉ’’’）
式中、
ＦＧｌｙが、ホルミルグリシン残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基（また、（Ｐ／Ａ）によってによって示すことができる）のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである；
Ｘ１が、存在してよい、または存在しなくてよい。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えば、Ｌ、Ｍ、またはＶとすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧとすることができる。
前記に記載したとおり、ＦＧｌｙ残基を含有する修飾ポリペプチドを、薬剤（例えば、前記に記載したとおり、ヒドラジニル−ピロロカップリング部分を含有する薬剤）とＦＧｌｙの反応によって、薬剤（例えば、マイタンシノイド）に共役させ、ＦＧｌｙ’を含有するスルファターゼモチーフを生成してよい。本明細書に用いる場合、用語ＦＧｌｙ’は、薬剤、例えば、マイタンシノイド（例えば、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基）に結合されるスルファターゼモチーフの修飾アミノ酸残基を指す。このため、ＦＧｌｙ’を含有するスルファターゼモチーフは、以下の式のものとすることができ、
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基（また、（Ｐ／Ａ）によって示すことができる）のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである；
Ｘ１が、存在してよい、または存在しなくてよい。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えば、Ｌ、Ｍ、またはＶとすることができる；及び
Ｘ２及びＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧとすることができる。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖不変領域のＣ−末端に位置する。いくつかの例では、重鎖不変領域が、式（ＩＩ）の配列を含む：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基（また、（Ｐ／Ａ）によって示すことができる）のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである；
Ｘ１が、存在してよい、または存在しなくてよい。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えば、Ｌ、Ｍ、またはＶとすることができる；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧとすることができる；及び
配列が、アミノ酸配列ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＳへのＣ−末端であり、配列が、天然野生型重Ｉｇ鎖不変領域中に存在しない１、２、３、４、５、または５〜１０のアミノ酸を含んでよい。
特定の実施形態では、重鎖不変領域が、例えば、天然ＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：／／）配列の代わりに、Ｉｇ重鎖のＣ−末端で、配列ＳＬＳＬＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含む。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖不変領域に位置する。特定の実施形態では、軽鎖不変領域が、式（ＩＩ）の配列を含む：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基（また、（Ｐ／Ａ）によって示すことができる）のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである；
Ｘ１が、存在してよい、または存在しなくてよい。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えば、Ｌ、Ｍ、またはＶとすることができる；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧとすることができる；及び
配列が、アミノ酸配列ＫＶＤＮＡＬ（配列番号：／／）へのＣ−末端である、及び／またはアミノ酸配列ＱＳＧＮＳＱ（配列番号：／／）へのＮ−末端である。
特定の実施形態では、軽鎖不変領域が、配列ＫＶＤＮＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱ（配列番号：／／）を含む。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基が、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ１領域に位置する。特定の実施形態では、重鎖ＣＨ１領域が、式（ＩＩ）の配列を含む。
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
式中、
ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基である；
Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基（また、（Ｐ／Ａ）によって示すことができる）のいずれかである；
Ｚ３０が、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、リジン（Ｋ）またはヒスチジン（Ｈ）、通常、リジンとしてよい）、または脂肪族アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、またはプロリン（Ｐ）、例えば、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩである；
Ｘ１が、存在してよい、または存在しなくてよい。存在する場合、スルファターゼモチーフが、標的ポリペプチドのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、例えば、Ｌ、Ｍ、またはＶとすることができる；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、任意のアミノ酸、例えば、脂肪族アミノ酸、硫黄を含有するアミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧとすることができる；及び
配列が、アミノ酸配列ＳＷＮＳＧＡ（配列番号：／／）へのＣ−末端である、及び／またはアミノ酸配列ＧＶＨＴＦＰ（配列番号：／／）へのＮ−末端である。
特定の実施形態では、重鎖ＣＨ１領域が、配列ＳＷＮＳＧＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＶＨＴＦＰ（配列番号：／／）を含む。
修飾の部位
前記に記載したとおり、抗ＨＥＲ２抗体のアミノ酸配列が、ｉｎ ｖｉｖｏ（例えば、細胞中のａｌｄタグを含有するタンパク質の翻訳時）またはｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、無細胞系でａｌｄタグを含有するタンパク質をＦＧＥと接触させることによって）のいずれかで、ＦＧＥの作用によって、ＦＧｌｙ残基に変換（酸化）することができるセリンまたはシステイン残基を含有するスルファターゼモチーフを含むように修飾される。抗ＨＥＲ２ポリペプチドが、用いられ、少なくともＩｇ不変領域、例えば、Ｉｇ重鎖不変領域（例えば、少なくともＣＨ１ドメイン；少なくともＣＨ１及びＣＨ２ドメイン；ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン；またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン）、またはＩｇ軽鎖不変領域を含む本開示のコンジュゲートが生成される。かかるＩｇポリペプチドは、本明細書では、「標的Ｉｇポリペプチド」または「標的抗ＨＥＲ２抗体」または「標的抗ＨＥＲ２ Ｉｇポリペプチド」と称される。
スルファターゼモチーフが、導入される抗ＨＥＲ２抗体の部位は、任意の好適な部位とすることができる。前記に記載したとおり、いくつかの例では、挿入、除去、置換（置き換え）、及び／または付加（例えば、Ｎ−末端またはＣ−末端に）されるアミノ酸残基の数を最小化するように、標的抗ＨＥＲ２ポリペプチドの天然アミノ酸配列の修飾の範囲が、最小化される。標的抗ＨＥＲ２ポリペプチドのアミノ酸配列修飾の範囲の最小化では、かかる修飾が抗ＨＥＲ２機能及び／または構造に与える可能性がある影響を最小化してよい。
抗ＨＥＲ２抗体重鎖不変領域は、任意の重鎖イソタイプのＩｇ不変領域、非天然Ｉｇ重鎖不変領域（コンセンサスＩｇ重鎖不変領域を含む）を含むことができる。Ｉｇ不変領域は、Ｉｇ不変領域の溶媒接触可能ループ領域中に存在する、またはこの領域に隣接して存在するアルデヒドタグを含むように修飾することができる。Ｉｇ不変領域は、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列が生成されるように、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６アミノ酸、または１６以上のアミノ酸の挿入及び／または置換によって、修飾することができる。
いくつかの場合では、アルデヒド標識抗ＨＥＲ２抗体が、アルデヒド標識Ｉｇ重鎖不変領域（例えば、少なくともＣＨ１ドメイン；少なくともＣＨ１及びＣＨ２ドメイン；ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメイン；またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン）を含む。アルデヒド標識Ｉｇ重鎖不変領域は、ＦＧｌｙが修飾されたＩｇポリペプチドが生成されるようにＦＧＥによって修飾することができる少なくとも１つのスルファターゼモチーフを含むように修飾されたＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４イソタイプ重鎖の重鎖不変領域配列、またはこれらのアロタイプ変異体、例えば、ヒト重鎖不変領域配列もしくはマウス重鎖不変領域配列、ハイブリッド重鎖不変領域、合成的重鎖不変領域、またはコンセンサス重鎖不変領域配列などを含むことができる。Ｉｇ重鎖のアロタイプ変異体は、当技術分野で知られている。例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ及びＬｅｆｒａｎｃ（２００９）ＭＡｂｓ１：４を参照。
いくつかの場合では、アルデヒド標識抗ＨＥＲ２抗体が、アルデヒド標識Ｉｇ軽鎖不変領域を含む。アルデヒド標識Ｉｇ軽鎖不変領域は、ＦＧｌｙが修飾された抗ＨＥＲ２抗体ポリペプチドが生成されるようにＦＧＥによって修飾することができる少なくとも１つのスルファターゼモチーフを含むように修飾されたカッパ軽鎖、ラムダ軽鎖の不変領域配列、例えば、ヒトカッパもしくはラムダ軽鎖不変領域、ハイブリッド軽鎖不変領域、合成的軽鎖不変領域、またはコンセンサス軽鎖不変領域配列などを含むことができる。例示的な不変領域は、ヒトガンマ１及びガンマ３領域を含む。スルファターゼモチーフを除いて、修飾された不変領域は、野生型アミノ酸配列を有してよい、または野生型アミノ酸配列と少なくとも７０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一）であるアミノ酸配列を有してよい。
いくつかの実施形態では、スルファターゼモチーフが、Ｉｇポリペプチド重鎖のＣ−末端以外の位置にある、またはこの位置に加えて存在する。前記に記載したとおり、分離したアルデヒド標識抗ＨＥＲ２ポリペプチドは、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２ポリペプチド重鎖不変領域の表面接触可能ループ領域中にある、または、この領域に隣接しており、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾された重鎖不変領域を含むことができる。
いくつかの例では、標的抗ＨＥＲ２免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１２２−１２７；２）アミノ酸１３７−１４３；３）アミノ酸１５５−１５８；４）アミノ酸１６３−１７０；５）アミノ酸１６３−１８３；６）アミノ酸１７９−１８３；７）アミノ酸１９０−１９２；８）アミノ酸２００−２０２；９）アミノ酸１９９−２０２；１０）アミノ酸２０８−２１２；１１）アミノ酸２２０−２４１；１２）アミノ酸２４７−２５１；１３）アミノ酸２５７−２６１；１４）アミノ酸２６９−２７７；１５）アミノ酸２７１−２７７；１６）アミノ酸２８４−２８５；１７）アミノ酸２８４−２９２；１８）アミノ酸２８９−２９１；１９）アミノ酸２９９−３０３；２０）アミノ酸３０９−３１３；２１）アミノ酸３２０−３２２；２２）アミノ酸３２９−３３５；２３）アミノ酸３４１−３４９；２４）アミノ酸３４２−３４８；２５）アミノ酸３５６−３６５；２６）アミノ酸３７７−３８１；２７）アミノ酸３８８−３９４；２８）アミノ酸３９８−４０７；２９）アミノ酸４３３−４５１；及び３０）アミノ酸４４６−４５１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、図１７Ｂに示したとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。
いくつかの例では、標的抗ＨＥＲ２免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（ヒトＩｇＧ１不変領域；図１７Ｂに示した配列に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。
ＩｇＧ１重鎖の例示的な表面接触可能ループ領域が、図１７Ａ及び１７Ｂに示したとおり、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号：／／）；２）ＫＳＴＳＧＧＴ（配列番号：／／）；３）ＰＥＰＶ（配列番号：／／）；４）ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号：／／）；５）ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬ（配列番号：／／）；６）ＱＳＳＧＬ（配列番号：／／）；７）ＶＴＶ；８）ＱＴＹ；９）ＴＱＴＹ（配列番号：／／）；１０）ＨＫＰＳＮ（配列番号：／／）；１１）ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号：／／）；１２）ＦＰＰＫＰ（配列番号：／／）；１３）ＩＳＲＴＰ（配列番号：／／）；１４）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号：／／）；１５）ＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号：／／）；１６）ＤＧ；１７）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号：／／）；１８）ＨＮＡ；１９）ＱＹＮＳＴ（配列番号：／／）；２０）ＶＬＴＶＬ（配列番号：／／）；２１）ＧＫＥ；２２）ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号：／／）；２３）ＳＫＡＫＧＱＰＲＥ（配列番号：／／）；２４）ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号：／／）；２５）ＰＰＳＲＫＥＬＴＫＮ（配列番号：／／）；２６）ＹＰＳＤＩ（配列番号：／／）；２７）ＮＧＱＰＥＮＮ（配列番号：／／）；２８）ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ（配列番号：／／）；２９）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：／／）；及び３０）ＳＬＳＰＧＫ（配列番号：／／）を含む。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１３−２４；３）アミノ酸３３−３７；４）アミノ酸４３−５４；５）アミノ酸５８−６３；６）アミノ酸６９−７１；７）アミノ酸７８−８０；８）８７−８９；９）アミノ酸９５−９６；１０）１１４−１１８；１１）１２２−１２６；１２）１３４−１３６；１３）１４４−１５２；１４）１５９−１６７；１５）１７５−１７６；１６）１８４−１８８；１７）１９５−１９７；１８）２０４−２１０；１９）２１６−２２４；２０）２３１−２３３；２１）２３７−２４１；２２）２５２−２５６；２３）２６３−２６９；２４）２７３−２８２；２５）アミノ酸２９９−３０２の１つ以上に対応するＩｇＧ２重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（ヒトＩｇＧ２；図１７Ｂにも示した）に示されたアミノ酸配列のナンバリングに基づいている。
ＩｇＧ２重鎖の例示的な表面接触可能ループ領域が、図１７Ｂに示したとおり、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号：／／）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ（配列番号：／／）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号：／／）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ（配列番号：／／）；５）ＱＳＳＧＬＹ（配列番号：／／）；６）ＶＴＶ；７）ＴＱＴ；８）ＨＫＰ；９）ＤＫ；１０）ＶＡＧＰＳ（配列番号：／／）；１１）ＦＰＰＫＰ（配列番号：／／）；１２）ＲＴＰ；１３）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号：／／）；１４）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号：／／）；１５）ＦＮ；１６）ＶＬＴＶＶ（配列番号：／／）；１７）ＧＫＥ；１８）ＮＫＧＬＰＡＰ（配列番号：／／）；１９）ＳＫＴＫＧＱＰＲＥ（配列番号：／／）；２０）ＰＰＳ；２１）ＭＴＫＮＱ（配列番号：／／）；２２）ＹＰＳＤＩ（配列番号：／／）；２３）ＮＧＱＰＥＮＮ（配列番号：／／）；２４）ＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳ（配列番号：／／）；２５）ＧＮＶＦ（配列番号：／／）；及び２６）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：／／）を含む。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１３−２２；３）アミノ酸３３−３７；４）アミノ酸４３−６１；５）アミノ酸７１；６）アミノ酸７８−８０；７）８７−９１；８）アミノ酸９７−１０６；９）１１１−１１５；１０）１４７−１６７；１１）１７３−１７７；１６）１８５−１８７；１３）１９５−２０３；１４）２１０−２１８；１５）２２６−２２７；１６）２３８−２３９；１７）２４６−２４８；１８）２５５−２６１；１９）２６７−２７５；２０）２８２−２９１；２１）アミノ酸３０３−３０７；２２）アミノ酸３１３−３２０；２３）アミノ酸３２４−３３３；２４）アミノ酸３５０−３５２；２５）アミノ酸３５９−３６５；及び２６）アミノ酸３７２−３７７の１つ以上に対応するＩｇＧ３重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（ヒトＩｇＧ３；図１７Ｂにも示した）に示されたアミノ酸配列のナンバリングに基づいている。
ＩｇＧ３重鎖の例示的な表面接触可能ループ領域が、図１７Ｂに示したとおり、１）ＡＳＴＫＧＰ（配列番号：／／）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴ（配列番号：／／）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号：／／）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ（配列番号：／／）；５）Ｖ；６）ＴＱＴ；７）ＨＫＰＳＮ（配列番号：／／）；８）ＲＶＥＬＫＴＰＬＧＤ（配列番号：／／）；９）ＣＰＲＣＰＫＰ（配列番号：／／）；１０）ＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号：／／）；１１）ＦＰＰＫＰ（配列番号：／／）；１２）ＲＴＰ；１３）ＤＶＳＨＥＤＰＥＶ（配列番号：／／）；１４）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号：／／）；１５）ＹＮ；１６）ＶＬ；１７）ＧＫＥ；１８）ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号：／／）；１９）ＳＫＴＫＧＱＰＲＥ（配列番号：／／）；２０）ＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮ（配列番号：／／）；２１）ＹＰＳＤＩ（配列番号：／／）；２２）ＳＳＧＱＰＥＮＮ（配列番号：／／）；２３）ＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳ（配列番号：／／）；２４）ＧＮＩ；２５）ＨＥＡＬＨＮＲ（配列番号：／／）；及び２６）ＳＬＳＰＧＫ（配列番号：／／）を含む。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−５；２）アミノ酸１２−２３；３）アミノ酸３２−３６；４）アミノ酸４２−５３；５）アミノ酸５７−６２；６）アミノ酸６８−７０；７）アミノ酸７７−７９；８）アミノ酸８６−８８；９）アミノ酸９４−９５；１０）アミノ酸１０１−１０２；１１）アミノ酸１０８−１１８；１２）アミノ酸１２２−１２６；１３）アミノ酸１３４−１３６；１４）アミノ酸１４４−１５２；１５）アミノ酸１５９−１６７；１６）アミノ酸１７５−１７６；１７）アミノ酸１８５−１８６；１８）アミノ酸１９６−１９８；１９）アミノ酸２０５−２１１；２０）アミノ酸２１７−２２６；２１）アミノ酸２３２−２４１；２２）アミノ酸２５３−２５７；２３）アミノ酸２６４−２６５；２４）２６９−２７０；２５）アミノ酸２７４−２８３；２６）アミノ酸３００−３０３；２７）アミノ酸３９９−４１７の１つ以上に対応するＩｇＧ４重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（ヒトＩｇＧ４；図１７Ｂにも示した）に示されたアミノ酸配列のナンバリングに基づいている。
ＩｇＧ４重鎖の例示的な表面接触可能ループ領域が、図１７Ｂに示したとおり、１）ＳＴＫＧＰ（配列番号：／／）；２）ＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡ（配列番号：／／）；３）ＦＰＥＰＶ（配列番号：／／）；４）ＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰ（配列番号：／／）；５）ＱＳＳＧＬＹ（配列番号：／／）；６）ＶＴＶ；７）ＴＫＴ；８）ＨＫＰ；９）ＤＫ；１０）ＹＧ；１１）ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳ（配列番号：／／）；１２）ＦＰＰＫＰ（配列番号：／／）；１３）ＲＴＰ；１４）ＤＶＳＱＥＤＰＥＶ（配列番号：／／）；１５）ＤＧＶＥＶＨＮＡＫ（配列番号：／／）；１６）ＦＮ；１７）ＶＬ；１８）ＧＫＥ；１９）ＮＫＧＬＰＳＳ（配列番号：／／）；２０）ＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰ（配列番号：／／）；２１）ＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮ（配列番号：／／）；２２）ＹＰＳＤＩ（配列番号：／／）；２３）ＮＧ；２４）ＮＮ；２５）ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ（配列番号：／／）；２６）ＧＮＶＦ（配列番号：／／）；及び２７）ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号：／／）を含む。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−１３；２）アミノ酸１７−２１；３）アミノ酸２８−３２；４）アミノ酸４４−５４；５）アミノ酸６０−６６；６）アミノ酸７３−７６；７）アミノ酸８０−８２；８）アミノ酸９０−９１；９）アミノ酸１２３−１２５；１０）アミノ酸１３０−１３３；１１）アミノ酸１３８−１４２；１２）アミノ酸１５１−１５８；１３）アミノ酸１６５−１７４；１４）アミノ酸１８１−１８４；１５）アミノ酸１９２−１９５；１６）アミノ酸１９９；１７）アミノ酸２０９−２１０；１８）アミノ酸２２２−２４５；１９）アミノ酸２５２−２５６；２０）アミノ酸２６６−２７６；２１）アミノ酸２９３−２９４；２２）アミノ酸３０１−３０４；２３）アミノ酸３１７−３２０；２４）アミノ酸３２９−３５３の１つ以上に対応するＩｇＡ重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（ヒトＩｇＡ；図１７Ｂにも示した）に示されたアミノ酸配列のナンバリングに基づいている。
ＩｇＡ重鎖の例示的な表面接触可能ループ領域が、図１７Ｂに示したとおり、１）ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬ（配列番号：／／）；２）ＱＰＤＧＮ（配列番号：／／）；３）ＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬ（配列番号：／／）；４）ＳＧＱＧＶＴＡＲＮＦＰ（配列番号：／／）；５）ＳＧＤＬＹＴＴ（配列番号：／／）；６）ＰＡＴＱ（配列番号：／／）；７）ＧＫＳ；８）ＹＴ；９）ＣＨＰ；１０）ＨＲＰＡ（配列番号：／／）；１１）ＬＬＧＳＥ（配列番号：／／）；１２）ＧＬＲＤＡＳＧＶ（配列番号：／／）；１３）ＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰ（配列番号：／／）；１４）ＧＣＹＳ（配列番号：／／）；１５）ＣＡＥＰ（配列番号：／／）；１６）ＰＥ；１７）ＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬ（配列番号：／／）；１８）ＡＲＧＦＳ（配列番号：／／）；１９）ＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹ（配列番号：／／）；２０）ＡＶ；２１）ＡＡＥＤ（配列番号：／／）；２２）ＨＥＡＬ（配列番号：／／）；及び２３）ＩＤＲＬＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ（配列番号：／／）を含む。
スルファターゼモチーフは、Ｉｇ重鎖のかかる修飾部位のこれらの１つ以上のアミノ酸配列内に、またはこの配列に隣接して提供することができる。例えば、これらの修飾部位に隣接して及びこれらの修飾部位へのＮ−末端及び／またはこれらの修飾部位に隣接して及びこれらの修飾部位へのＣ−末端にスルファターゼモチーフをもたらすように、これらの１つ以上のアミノ酸配列で、Ｉｇ重鎖ポリペプチドを修飾（例えば、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む）することができる。代わりに、または加えて、Ｉｇ重鎖修飾部位の任意の２つの残基の間にスルファターゼモチーフをもたらすように、これらの１つ以上のアミノ酸配列で、Ｉｇ重鎖ポリペプチドを修飾（例えば、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む）することができる。いくつかの実施形態では、２つのモチーフを含むようにＩｇ重鎖ポリペプチドを修飾してよく、これは、互いに隣接してよい、または１、２、３、４つ以上（例えば、約１〜約２５、約２５〜約５０、または約５０〜約１００、これ以上）のアミノ酸によって分離してよい。代わりに、または加えて、天然アミノ酸配列が、スルファターゼモチーフ配列の１つ以上のアミノ酸残基を提供する場合、修飾部位でスルファターゼモチーフをもたらすように、Ｉｇ重鎖ポリペプチドアミノ酸配列の修飾部位の選択したアミノ酸残基を修飾（例えば、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む）することができる。
このため、スルファターゼモチーフがもたらされるように、表面接触可能ループ領域のアミノ酸配列を修飾することができ、修飾は、挿入、欠失、及び／または置換を含むことができる。例えば、修飾が、ＣＨ１ドメイン中にある場合、表面接触可能ループ領域が、アミノ酸配列ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号：／／）を有することができ、アルデヒド標識配列は、例えば、ＮＳＧＡＬＣＴＰＳＲＧ（配列番号：／／）とすることができ、例えば、ＮＳＧＡＬＴＳＧ（配列番号：／／）配列の「ＴＳ」残基が、「ＣＴＰＳＲ」（配列番号：／／）で置換される場合には、その結果、スルファターゼモチーフが、配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）を有する。もう１つの例として、修飾が、ＣＨ２ドメイン中にある場合、表面接触可能ループ領域が、アミノ酸配列ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号：／／）を有することができ、アルデヒド標識配列は、例えば、ＮＬＣＴＰＳＲＡＰ（配列番号：／／）とすることができ、例えば、ＮＫＡＬＰＡＰ（配列番号：／／）配列の「ＫＡＬ」残基が、「ＬＣＴＰＳＲ」（配列番号：／／）で置換される場合には、その結果、スルファターゼモチーフが、配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）を有する。もう１つの例として、修飾が、ＣＨ２／ＣＨ３ドメイン中にある場合、表面接触可能ループ領域が、アミノ酸配列ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号：／／）を有することができ、アルデヒド標識配列は、例えば、ＫＡＫＧＬＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）とすることができ、例えば、ＫＡＫＧＱＰＲ（配列番号：／／）配列の「ＧＱＰ」残基が、「ＬＣＴＰＳ」（配列番号：／／）で置換される場合には、その結果、スルファターゼモチーフが、配列ＬＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）を有する。
前記に記載したとおり、分離したアルデヒド標識抗ＨＥＲ２ Ｉｇポリペプチドは、スルファターゼモチーフが、Ｉｇポリペプチド軽鎖不変領域の表面接触可能ループ領域中にある、または、この領域に隣接しており、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾された軽鎖不変領域を含むことができる。軽鎖不変領域の表面接触可能ループ領域の例示例が、図１７Ａ及び１７Ｃに示されている。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１３０−１３５；２）アミノ酸１４１−１４３；３）アミノ酸１５０；４）アミノ酸１６２−１６６；５）アミノ酸１６３−１６６；６）アミノ酸１７３−１８０；７）アミノ酸１８６−１９４；８）アミノ酸２１１−２１２；９）アミノ酸２２０−２２５；１０）アミノ酸２３３−２３６の１つ以上に対応するＩｇ軽鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、図１７Ｃに示したとおり、ヒトカッパ軽鎖のアミノ酸ナンバングに基づいている。いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇ軽鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（ヒトカッパ軽鎖；図１７Ｃに示したアミノ酸配列）に基づいている。
Ｉｇ軽鎖の例示的な表面接触可能ループ領域（例えば、ヒトカッパ軽鎖）が、図１７Ａ及び１７Ｃに示したとおり、１）ＲＴＶＡＡＰ（配列番号：／／）；２）ＰＰＳ；３）Ｇｌｙ（例えば、図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖配列の位置１５０のＧｌｙを参照）；４）ＹＰＲＥＡ（配列番号：／／）；５）ＰＲＥＡ（配列番号：／／）；６）ＤＮＡＬＱＳＧＮ（配列番号：／／）；７）ＴＥＱＤＳＫＤＳＴ（配列番号：／／）；８）ＨＫ；９）ＨＱＧＬＳＳ（配列番号：／／）；及び１０）ＲＧＥＣ（配列番号：／／）を含む。
Ｉｇラムダ軽鎖の例示的な表面接触可能ループ領域が、図１７Ｃに示したとおり、ＱＰＫＡＡＰ（配列番号：／／）、ＰＰＳ、ＮＫ、ＤＦＹＰＧＡＶ（配列番号：／／）、ＤＳＳＰＶＫＡＧ（配列番号：／／）、ＴＴＰ、ＳＮ、ＨＫＳ、ＥＧ、及びＡＰＴＥＣＳ（配列番号：／／）を含む。
いくつかの例では、標的免疫グロブリンが、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸１２１−２２；４）アミノ酸３１−３７；５）アミノ酸４４−５１；６）アミノ酸５５−５７；７）アミノ酸６１−６２；８）アミノ酸８１−８３；９）アミノ酸９１−９２；１０）アミノ酸１０２−１０５の１つ以上に対応するラットＩｇ軽鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：１０（図１７Ｃに示した配列）に示されたとおり、ラット軽鎖のアミノ酸ナンバリングに基づいている。
いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２重鎖不変領域のＣＨ１領域に導入される。いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２重鎖のＣ−末端に、またはＣ−末端の近く（例えば、１〜１０のアミノ酸内）に導入される。いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、軽鎖不変領域に導入される。
いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２重鎖不変領域のＣＨ１領域、例えば、図６Ａに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−２１９内に導入される。例えば、いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、アミノ酸配列：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ（配列番号：／／）に導入される。例えば、これらの実施形態のいくつかでは、アミノ酸配列ＧＡＬＴＳＧＶＨ（配列番号：／／）が、ＧＡＬＣＴＰＳＲＧＶＨ（配列番号：／／）に修飾され、スルファターゼモチーフが、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）である。１つの非限定実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、スルファターゼモチーフを含む重鎖不変領域を含み、重鎖不変領域が、図６Ｃに示したアミノ酸配列を含み、例えば、重鎖不変領域が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３を含む。
いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２重鎖のＣ−末端に、またはＣ−末端の近くに導入され、例えば、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２重鎖のＣ−末端の１アミノ酸、２アミノ酸（ａａ）、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａ内に導入される。１つの非限定例として、抗ＨＥＲ２重鎖のＣ−末端リジン残基は、アミノ酸配列ＳＬＣＴＰＳＲＧＳ（配列番号：／／）で置換することができる。１つの非限定実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、スルファターゼモチーフを含む重鎖不変領域を含み、重鎖不変領域が、図６Ｄに示したアミノ酸配列を含み、例えば、重鎖不変領域が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８を含む。
いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖の不変領域に導入される。１つの非限定例として、いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖の不変領域に導入され、スルファターゼモチーフが、ＫＶＤＮＡＬ（配列番号：／／）へのＣ−末端である、及び／または、ＱＳＧＮＳＱ（配列番号：／／）へのＮ−末端である。例えば、いくつかの場合では、スルファターゼモチーフが、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号：／／）であり、抗ＨＥＲ２軽鎖が、アミノ酸配列ＫＶＤＮＡＬＬＣＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱ（配列番号：／／）を含む。１つの非限定例として、抗ＨＥＲ２軽鎖が、図６Ｅに示したとおり、アミノ酸配列を含むスルファターゼモチーフを含み、例えば、軽鎖不変領域が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９を含む。
例示的な抗ＨＥＲ２抗体
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される重鎖ＣＤＲを含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１２２−１２７；２）アミノ酸１３７−１４３；３）アミノ酸１５５−１５８；４）アミノ酸１６３−１７０；５）アミノ酸１６３−１８３；６）アミノ酸１７９−１８３；７）アミノ酸１９０−１９２；８）アミノ酸２００−２０２；９）アミノ酸１９９−２０２；１０）アミノ酸２０８−２１２；１１）アミノ酸２２０−２４１；１２）アミノ酸２４７−２５１；１３）アミノ酸２５７−２６１；１４）アミノ酸２６９−２７７；１５）アミノ酸２７１−２７７；１６）アミノ酸２８４−２８５；１７）アミノ酸２８４−２９２；１８）アミノ酸２８９−２９１；１９）アミノ酸２９９−３０３；２０）アミノ酸３０９−３１３；２１）アミノ酸３２０−３２２；２２）アミノ酸３２９−３３５；２３）アミノ酸３４１−３４９；２４）アミノ酸３４２−３４８；２５）アミノ酸３５６−３６５；２６）アミノ酸３７７−３８１；２７）アミノ酸３８８−３９４；２８）アミノ酸３９８−４０７；２９）アミノ酸４３３−４５１；及び３０）アミノ酸４４６−４５１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、図１７Ｂに示したとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）及びＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２エピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５１１〜６３６内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５２９〜６２５内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸５６１〜６２５内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨ ＣＤＲ ＤＴＹＩＨ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）及びＶＬ ＣＤＲ ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）、ＳＡＳＦＬＥＳ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）、及びＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＨ領域中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＬ領域中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）中に存在するＶＨ ＣＤＲ及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＶＨアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）；及びＶＬアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ（配列番号：／／）を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。
いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列を含む重鎖を含み、図６Ｅに示したアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列を含む重鎖を含み、図６Ｅに示したアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
さらに例示的な抗ＨＥＲ２抗体
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）から選択される軽鎖ＣＤＲを含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む；及び軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む抗体を有するＨＥＲ２中のエピトープ（例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩ内のエピトープ；例えば、図４に示したＨＥＲ２アミノ酸配列のアミノ酸２１８〜３４１内のエピトープ）への結合と競合する。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ、式中、Ｘが、ＤまたはＳである（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む；及び軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３、式中、Ｘ１が、ＲまたはＬであり、Ｘ２が、ＹまたはＥであり、Ｘ３が、ＴまたはＳである（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＲＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖ＣＤＲ ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む；及び軽鎖ＣＤＲ ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（ＶＬ ＣＤＲ１；配列番号：／／）；ＳＡＳＹＲＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ２；配列番号：／／）；及びＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（ＶＬ ＣＤＲ３；配列番号：／／）を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＨ領域中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＬ領域中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、以下のアミノ酸配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＨ領域中に存在するＶＨ ＣＤＲを含む；及び以下のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含む抗ＨＥＲ２ ＶＬ領域中に存在するＶＬ ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含むＶＨ領域を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含むＶＬ領域を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含むＶＨ領域を含む；及びアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含むＶＬ領域を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、重鎖不変領域が、ＦＧｌｙ残基を含むように修飾されているアミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＤＹＴＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧＲＦＴＬＳＶＤＲＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：／／）を含むＶＨ領域を含む。いくつかの場合では、好適な抗ＨＥＲ２抗体が、軽鎖不変領域が、ＦＧｌｙ残基を含むように修飾されているアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＩＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：／／）を含むＶＬ領域を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、ヒト化される。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む。特定の実施形態では、スルファターゼモチーフが、１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１６−２２；３）アミノ酸３４−４７；４）アミノ酸４２−４９；５）アミノ酸４２−６２；６）アミノ酸３４−３７；７）アミノ酸６９−７１；８）アミノ酸７９−８１；９）アミノ酸７８−８１；１０）アミノ酸８７−９１；１１）アミノ酸１００−１２１；１２）アミノ酸１２７−１３１；１３）アミノ酸１３７−１４１；１４）アミノ酸１４９−１５７；１５）アミノ酸１５１−１５７；１６）アミノ酸１６４−１６５；１７）アミノ酸１６４−１７２；１８）アミノ酸１６９−１７１；１９）アミノ酸１７９−１８３；２０）アミノ酸１８９−１９３；２１）アミノ酸２００−２０２；２２）アミノ酸２０９−２１５；２３）アミノ酸２２１−２２９；２４）アミノ酸２２−２２８；２５）アミノ酸２３６−２４５；２６）アミノ酸２１７−２６１；２７）アミノ酸２６８−２７４；２８）アミノ酸２７８−２８７；２９）アミノ酸３１３−３３１；及び３０）アミノ酸３２４−３３１の１つ以上に対応するＩｇＧ１重鎖不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｂに示したヒトＩｇＧ１不変領域）に示されたとおり、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸ナンバリングに基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｃに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５３に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｄに示したアミノ酸配列のアミノ酸１２１−４５８に示されたとおり、重鎖不変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの例では、抗ＨＥＲ２抗体が、前記に記載したとおり、スルファターゼモチーフを含むように修飾され、修飾が、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、欠失、及び／または置換を含む；例えば、スルファターゼモチーフが、：１）アミノ酸１−６；２）アミノ酸１２−１４；３）アミノ酸２１；４）アミノ酸３３−３７；５）アミノ酸３４−３７；６）アミノ酸４４−５１；７）アミノ酸５７−６５；８）アミノ酸８３−８３；９）アミノ酸９１−９６；１０）アミノ酸１０４−１０７の１つ以上に対応するＩｇカッパ不変領域の領域内にある、または、この領域に隣接している；アミノ酸ナンバリングは、配列番号：／／（図１７Ｃに示したヒトカッパ軽鎖；アミノ酸配列）に基づいている。いくつかの場合では、抗ＨＥＲ２抗体が、図６Ｅに示したアミノ酸配列のアミノ酸１０８−２１９に示されたとおり、軽鎖不変領域アミノ酸配列を含む。
ポリペプチドへの共役のための薬剤
本開示は、薬剤−ポリペプチドコンジュゲートを提供する。薬剤の例としては、小分子薬剤、例えば、癌化学療法薬が挙げられる。例えば、ポリペプチドが、腫瘍細胞への特異性を有する抗体（またはこれらのフラグメント）である場合、本明細書に記載したとおり、その後、癌化学療法薬、例えば、微小管に影響を及ぼす薬剤に共役することができる修飾されたアミノ酸を含むように抗体を修飾することができる。特定の実施形態では、薬剤が、抗増殖活性を有する微小管に影響を及ぼす薬剤、例えば、マイタンシノイドである。特定の実施形態では、薬剤が、以下の構造を有するマイタンシノイドである。
Figure 2017520533
 式中、
Figure 2017520533
 が、マイタンシノイド及びリンカー、式（Ｉ）中のＬ間の結合点を示す。「結合点」は、マイタンシノイドのＮ及びリンカー、式（Ｉ）中のＬ間の結合を示す記号を意味する。例えば、式（Ｉ）中のＷ１が、マイタンシノイド、例えば、マイタンシノイド及びリンカー、Ｌ間の結合点を示す前記構造のマイタンシノイドである。
特定の実施形態では、Ｌ１が、ヒドラジニル−ピロロ部分（例えば、前記の式（Ｉ）に示したとおり）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ２が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ３が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ４が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。
前記に記載したとおり、特定の実施形態では、Ｌ１が、ヒドラジニル−ピロロ部分（例えば、前記の式（Ｉ）に示したとおり）に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ１が、ヒドラジニル−ピロロ部分（例えば、前記の式（Ｉ）に示したとおり）に結合される。特定の実施形態では、Ｚ１が、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ２が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ２が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される、またはＺ２が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ３が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ３が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される、またはＺ３が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。特定の実施形態では、Ｌ４が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。したがって、特定の実施形態では、Ｔ４が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される、またはＺ４が、存在する場合、Ｗ１（マイタンシノイド）に結合される。
本開示の実施形態では、ポリペプチド（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）が、１つ以上の薬剤部分（例えば、マイタンシノイド）、例えば、２つの薬剤部分、３つの薬剤部分、４つの薬剤部分、５つの薬剤部分、６つの薬剤部分、７つの薬剤部分、８つの薬剤部分、９つの薬剤部分、または１０以上の薬剤部分に共役されているコンジュゲートを含む。当該薬剤部分は、本明細書に記載したとおり、ポリペプチド中の１つ以上の部位でポリペプチドに共役させてよい。特定の実施形態では、コンジュゲートが、０．１〜１０、または０．５〜１０、または１〜１０、例えば、１〜９、または１〜８、または１〜７、または１〜６、または１〜５、または１〜４、または１〜３、または１〜２の範囲の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）（モル比）を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートが、平均ＤＡＲ１〜２、例えば、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートが、１．７の平均ＤＡＲを有する。特定の実施形態では、コンジュゲートが、平均ＤＡＲ３〜４、例えば、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９または４を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートが、３．４の平均ＤＡＲを有する。平均は、算術平均を意味する。
配合物
本開示のコンジュゲート（抗体コンジュゲートを含む）は、さまざまな異なる方法で配合することができる。一般に、コンジュゲートが、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートである場合、コンジュゲートは、ポリペプチドに共役された薬剤、治療される状態、及び用いられる投与経路と適合する方法で配合される。
コンジュゲート（例えば、ポリペプチド−薬剤コンジュゲート）は、任意の好適な形態で、例えば、製剤的に許容可能な塩の形態で提供することができ、任意の好適な投与経路、例えば、経口、局所または非経口投与のために配合することができる。コンジュゲートが、注入可能な液体（例えば、これらの実施形態では、それらが静脈内に、または組織に直接、投与される）として提供される場合、コンジュゲートは、使用準備済剤形として、または再構成可能貯蔵安定粉末もしくは製剤的に許容可能なキャリア及び賦形剤からなる液体として提供することができる。
コンジュゲートの配合方法は、容易に利用できる方法から適合させることができる。例えば、コンジュゲートは、治療的に有効量のコンジュゲート及び製剤的に許容可能なキャリア（例えば、生理食塩水）を含む医薬組成物中に提供することができる。医薬組成物が、任意で、他の添加剤（例えば、緩衝剤、安定剤、防腐剤など）を含んでよい。いくつかの実施形態では、配合物が、哺乳動物への投与に好適であり、例えば、ヒトへの投与に好適な配合物である。
治療方法
本開示のポリペプチド−薬剤コンジュゲートは、親薬剤（すなわち、ポリペプチドへの共役前の薬剤）の投与による治療に適している被験者の状態または疾患の治療に用いられる。「治療」は、少なくとも、宿主を苦しめる状態に関連した症状の改善が実現することを意味し、改善は、広い意味で、少なくとも、パラメーターの大きさ、例えば、治療される状態に関連した症状が減少することを指すように用いられる。したがって、治療が、また、病理的状態、または少なくともそれに関連した症状が、完全に抑制され、例えば、発症が防止され、または停止され、例えば、中断され、その結果、宿主が、状態、または少なくとも状態を特徴づける症状にもはや苦しまない状況を含む。このため、治療が、（ｉ）予防、すなわち、臨床的症状が発現しないようにすること、例えば、有害な状態に疾患が進行するのを防止することを含む臨床的症状の発現のリスクを低下させること；（ｉｉ）抑制、すなわち、臨床的症状が発現する、またはさらに発現するのを阻止すること、例えば、活動性疾患を軽減することまたは完全に抑制すること；及び／または（ｉｉｉ）緩和、すなわち、臨床的症状を後退させることを含む。
癌の文脈では、用語「治療する」が、固体腫瘍の成長を低下させること、癌細胞の複製を抑制すること、全体の腫瘍負担を低下させること及び癌に関連した１つ以上の症状を改善することのいずれか、または全てを含む。
治療される被験者は、治療が必要な者とすることができ、治療される宿主が、親薬剤を用いた治療に適している者である。したがって、さまざまな被験者が、本明細書に開示されるポリペプチド−薬剤コンジュゲートを用いた治療に適している可能性がある。一般に、かかる被験者が、「哺乳動物」であり、対象となるヒトを含む。他の被験者としては、ペット（例えば、イヌ及びネコ）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ、など）、げっ歯類動物（例えば、マウス、モルモット、及びラット、例えば、疾患の動物モデル）、ならびに非ヒト霊長動物（例えば、チンパンジー、及びサル）を挙げることができる。
投与されるポリペプチド−薬剤コンジュゲートの量は、最初に、親薬剤の用量及び／または投与計画のガイダンスに基づいて決定することができる。一般に、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートは、標的デリバリー及び／または結合薬剤の血清半減期の向上をもたらし、このため、投与計画で用量の減少または投与の減少の少なくとも１つをもたらすことができる。このため、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートは、本開示のポリペプチド−薬剤コンジュゲート中に共役される前の親薬剤と比較して、投与計画で用量の減少及び／または投与の減少をもたらすことができる。
さらに、前記に記載したとおり、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートが、薬剤デリバリーのストイキオメトリーの制御をもたらすことができるため、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートの投与量は、１ポリペプチド−薬剤コンジュゲート主剤当たりに提供される薬剤分子の数に基づいて計算することができる。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートの複数の用量が投与される。ポリペプチド−薬剤コンジュゲートの投与の頻度は、さまざまな因子、例えば、症状の重症度、被験者の状態、などのいずれかに応じて変えることができる。例えば、いくつかの実施形態では、ポリペプチド−薬剤コンジュゲートが、１ヶ月当たり１回、１ヶ月当たり２回、１ヶ月当たり３回、隔週（ｑｏｗ）、１週間当たり１回（ｑｗ）、１週間当たり２回（ｂｉｗ）、１週間当たり３回（ｔｉｗ）、１週間当たり４回、１週間当たり５回、１週間当たり６回、隔日（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日当たり２回（ｑｉｄ）、または１日当たり３回（ｔｉｄ）、投与される。
癌の治療方法
本開示は、癌を有する個体に癌化学療法薬を送達する方法を提供する。本方法は、癌腫、肉腫、白血病、及びリンパ腫を含む幅広い癌を治療するのに有用である。
対象の方法を用いて治療することができる癌腫としては、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌（皮膚癌の形態）、扁平細胞癌（さまざまな組織）、膀胱癌、（移行細胞癌（膀胱の悪性新生物）を含む）、気管支原生癌、結腸癌、大腸癌、胃癌、肺癌（肺の小細胞癌及び非−小細胞癌を含む）、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、腎細胞癌、ｉｎ ｓｉｔｕの腺管癌または胆管癌、絨毛膜癌、セミノーマ、胎生性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、骨原性癌腫、上皮癌腫、及び鼻咽頭癌などが挙げられるが、これらに限定されない。
対象の方法を用いて治療することができる肉腫としては、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊椎腫、骨原性肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、悪性滑膜、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横絞筋肉腫、及び他の軟部組織肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。
対象の方法を用いて治療することができる他の固体腫瘍としては、グリオーマ、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上皮腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経鞘腫、乏突起細胞腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経細胞腫、及び網膜芽腫が挙げられるが、これらに限定されない。
対象の方法を用いて治療することができる白血病としては、ａ）慢性脊髄増殖性症候群（多能性造血幹細胞の腫瘍性障害）；ｂ）急性骨髄性白血病（分化能が制限された多能性造血幹細胞または造血細胞の腫瘍性転化；ｃ）慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ；免疫学的に未成熟で機能的に能力のない小リンパ球のクローン増殖）（Ｂ−細胞ＣＬＬ、Ｔ−細胞ＣＬＬ前リンパ球性白血病、及び有毛細胞白血病を含む）；及びｄ）急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽球の蓄積によって特徴づけられる）が挙げられるが、これらに限定されない。対象の方法を用いて治療することができるリンパ腫としては、Ｂ−細胞リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）；ホジキンリンパ腫；非ホジキンＢ細胞リンパ腫；などが挙げられるが、これらに限定されない。
以下の実施例は、本発明の実施方法及び使用方法の包括的な開示及び説明を当業者に提供するために記載され、発明者が、発明と考えるものの範囲を制限することを意図せず、以下の実験が、実施した全実験または唯一の実験であることを示すことも意図しない。用いられる数（例えば、量、温度など）に関して正確さを確保するために努力がなされてきたが、いくつかの実験誤差および偏差の責任を負わなければならない。特に指示がないかぎり、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または近大気圧である。平均は、算術平均を意味する。例えば、ｂｐ、塩基対（単数及び複数）；ｋｂ、キロベース（単数及び複数）；ｐｌ、ピコリットル（単数及び複数）；ｓまたはｓｅｃ、秒（単数及び複数）；ｍｉｎ、分（単数及び複数）；ｈまたはｈｒ、時間（単数及び複数）；ａａ、アミノ酸（単数及び複数）；ｋｂ、キロベース（単数及び複数）；ｂｐ、塩基対（単数及び複数）；ｎｔ、ヌクレオチド（単数及び複数）；ｉ．ｍ．、筋肉内の（筋肉内で）；ｉ．ｐ．、腹腔内の（腹腔内で）；ｓ．ｃ．、皮下の（皮下で）；などの標準略語を用いてよい。
一般的合成方法
開示された化合物を合成するのに有用な一般に公知の化学合成的スキーム及び条件を提供するための多くの一般的文献が、利用可能である（例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００１；またはＶｏｇｅｌ，Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｌｏｎｇｍａｎ，１９７８を参照）。
本明細書に記載したとおりの化合物は、クロマトグラフィー、例えば、ＨＰＬＣ、分取薄層クロマトグラフィー、フラッシュカラムクロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーを含む当技術分野で知られている任意の精製プロトコールによって精製することができる。順相及び逆相ならびにイオン樹脂を含む任意の好適な固定相を用いることができる。特定の実施形態では、開示された化合物が、シリカゲル及び／またはアルミナクロマトグラフィーによって精製される。例えば、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ｌ．Ｒ．Ｓｎｙｄｅｒ ａｎｄ Ｊ．Ｊ．Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９７９；及びＴｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｅｄ Ｅ．Ｓｔａｈｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６９を参照。
対象の化合物の調製のためのプロセスのいずれかの間に、関係する分子のいずれかの感受性基または反応性基を保護することが必要である、及び／または好ましい可能性がある。これは、例えば、Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ．「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９７３，ｉｎ Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９９９，ｉｎ 「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」；Ｖｏｌｕｍｅ ３（ｅｄｉｔｏｒｓ：Ｅ．Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８１，ｉｎ「Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ」，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１５／ｌ，Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９７４，ｉｎ Ｈ．−Ｄ．Ｊａｋｕｂｋｅ ａｎｄ Ｈ．Ｊｅｓｃｈｅｉｔ，「Ａｍｉｎｏｓａｕｒｅｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎｅ」，Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ Ｂｅａｃｈ，ａｎｄ Ｂａｓｅｌ １９８２，ａｎｄ／ｏｒ ｉｎ Ｊｏｃｈｅｎ Ｌｅｈｍａｎｎ，「Ｃｈｅｍｉｅ ｄｅｒ Ｋｏｈｌｅｎｈｙｄｒａｔｅ：Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｅ」，Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９７４の標準作業に記載されたとおり、従来の保護基の手段によって実現してよい。保護基は、当技術分野で公知の方法を用いて、好適な次の工程で除去してよい。
対象の化合物は、市販されている出発物質及び／または従来の合成方法によって調製された出発物質を用いて、さまざまな異なる合成経路によって、合成することができる。本明細書に開示された化合物を合成するのに用いることができる合成経路のさまざまな例が、以下のスキームに記載されている。
実施例１
部位特異的に共役される抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を生成するために実験が実施された。部位特異的ＡＤＣ生成には、タンパク質配列へのホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、非天然アミノ酸の組込みが含まれる。ＦＧｌｙを組み込むために（図１）、短いコンセンサス配列、ＣＸＰＸＲ（Ｘが、セリン、トレオニン、アラニン、またはグリシンである）が、標準分子生物学クローニング技術を用いて、抗体重鎖または軽鎖の保存領域中の所望の位置に挿入された。この「標識を付けられた」構成体は、同時翻訳でタグ内のシステインをＦＧｌｙ残基に変換し、アルデヒド官能基（また、本明細書では、アルデヒドタグと称される）を生成するホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を同時発現する細胞中に遺伝子組換えで生成された。アルデヒド官能基は、原生物共役のための化学的ハンドルとしての役割を果たした。ＦＧｌｙにペイロード（例えば、薬剤、例えば、サイトトキシン）を結合し、その結果、サイトトキシンペイロード及び抗体間に安定した共有結合Ｃ−Ｃ結合を形成するため、ヒドラジノ−イソ−ピクテ−スペングラー（ＨＩＰＳ）リゲーションが、用いられた。このＣ−Ｃ結合は、循環及びＦｃＲｎ再利用中にＡＤＣによって現れる生理的に関係のある変化、例えば、プロテアーゼ、低ｐＨ、及び還元剤に対して安定していると予測された。アルデヒドタグを有する抗体は、さまざまな位置に生成してよい。軽鎖中の１つの部位及び重鎖中の７つの部位にアルデヒドタグを挿入する作用を試験するために実験を実施した。ＨＩＰＳリンカーを介したメイタンシンペイロードへの共役によって生成され、得られた３つのＡＤＣで生物物理学及び機能的特性解析を実施した。結合部位を調節することには、抗体有効性及びＰＫへの有意な効果があった。
実験方法
一般
マウス抗−メイタンシン抗体を生成し、試験所内で確認した。Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）からウサギ抗−ＡＦ４８８抗体を購入した。Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）からヤギ抗−ヒトＩｇＧ−特異的抗体及びヤギ抗−ヒトＦａｂ−特異的抗体、及びロバ抗−ウサギ、ヤギ抗−マウスＩｇＧサブクラスＩ−特異的、及びヤギ抗−ヒトＦｃ−特異的ＨＲＰ−コンジュゲートを購入した。
標識を付けられた抗体のクローニング、発現、及び精製
標準分子生物学技術を用いて、軽鎖及び重鎖コンセンサス領域中のさまざまな点にアルデヒドタグ配列を挿入した。小規模生成では、ヒトＦＧＥ発現構成体で、ＣＨＯ−Ｓ細胞をトランスフェクトし、抗体の過渡的生成にＦＧＥを過剰発現している細胞のプールを用いた。大規模生成では、ヒトＦＧＥを過剰発現しているクローン細胞株（ＧＰＥｘ）を生成するために、ＧＰＥｘ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｔａｌｅｎｔ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）を用いた。その後、抗体を発現している細胞の大量で安定したプールを生成するためにＦＧＥクローンを用いた。タンパク質Ａクロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）を用いて、条件付き培地から抗体を精製した。精製した抗体を急速冷凍し、さらに使用するまで−８０℃で、保存した。
バイオコンジュゲーション、精製、及びＨＰＬＣ分析
７２時間、３７℃で、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．８５％ＤＭＡ及び０．０８５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有する５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ５．５中で、アルデヒド標識抗体（１５ｍｇ／ｍＬ）をＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシン（薬剤と抗体が等量の８モル）に共役させた。タンジェント流ろ過を用いて、遊離型薬剤を除去した。移動相Ａ：１．０Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、及び移動相Ｂ：２５％イソプロパノール、１８．７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０で、分取スケール疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ １７−５１９５−０１）を用いて、非共役抗体を除去した。非共役物質を溶離させるために３３％Ｂの無勾配を用い、続いて、単共役及び二共役種を溶離させるために４１〜９５％Ｂの直線勾配を用いた。最終生成物のＤＡＲを測定するために、移動相Ａ：１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、及び移動相Ｂ：２５％イソプロパノール、１８．７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０で、分析用ＨＩＣ（Ｔｏｓｏｈ＃１４９４７）によってＡＤＣを検討した。凝集を測定するために、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．８の移動相で、分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ；Ｔｏｓｏｈ＃０８５４１）を用いて、試料を分析した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性
約１ｐｍｏｌ（ペイロード）／ｍＬで、ラット血しょうに抗体−発蛍光団及び抗体−薬剤コンジュゲートを加えた。試料を採取し、使用するまで−８０℃で、保存した。指示された時間、５％ＣＯ２下で、３７℃で、アリコットを置き、その後、抗−メイタンシン及び抗−Ｆａｂシグナルを評価するためにＥＬＩＳＡによって分析した。分析のための第１のステップとして、分析対象物質濃度が、アッセイのリニアレンジ内（２０〜４０ｎｇ／ｍＬ）であることを確実にするために１％ウシ血清アルブミン中への分析対象物質の連続希釈を実施した。一度、好適な希釈を測定してから、インキュベーターから試料を除去し、試験した。共役の参照開始値として新鮮解凍アリコットを用いた。時点間での比較が可能になるように１つのプレート上で、全分析対象物質をともに測定した。抗−ヒトＦａｂ−特定の抗体で被覆したプレート上で分析対象物質を捕捉した。その後、ペイロードを、抗−ＡＦ４８８または抗−メイタンシン抗体のいずれかで、検出し、続いて、ＨＲＰ−共役二次抗体で検出した；全抗体を、直接共役された抗−ヒトＦｃ−特異的抗体で、検出した。ＴＭＢ基質で結合二次抗体を視覚化した。Ｈ２ＳＯ４で比色反応を停止させ、プレートリーダーを用いて、４５０ｎｍで、吸光度を測定した。Ｅｘｃｅｌでデータ分析を実施した。４連で、各試料を分析し、平均値を用いた。抗体共役の尺度として、抗−メイタンシンシグナルと抗−Ｆａｂシグナルとの比を用いた。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
ＡＴＣＣからＨＥＲ２−陽性乳癌細胞株、ＮＣＩ−Ｎ８７を入手し、１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）及びＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補ったＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）中に維持した。平板培養前の２４時間、対数期成長を確実にするために細胞を通過させた。平板培養の日に、１０ＩＵペニシリン及び１０μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補った９０μＬ正常成長培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ）中の９６−ウェルプレート上に５０００細胞／ウェルを播種した。１０μＬの希釈した分析対象物質と、さまざまな濃度で、細胞を処置し、３７℃で、５％ＣＯ２の雰囲気中で、プレートをインキュベートした。６日後、１００μＬ／ウェルの細胞Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を添加し、モレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを用いて、発光を測定した。ＩＣ５０計算を含むデータ分析のためにＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いた。
異種移植試験
５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ中の１ｘ１０７ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍細胞をメスＣ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤマウスの尾の付け根に接種した。腫瘍が、平均１１２ｍｍ３に達した場合、動物に単一５ｍｇ／ｋｇ用量のＡＤＣ、トラスツズマブ抗体（標識を付けられていない）、またはビヒクルだけを与えた。１週間に２回、体重及び腫瘍サイズについて動物をモニターした。以下の式を用いて、腫瘍容積を計算した。
腫瘍容積（ｍｍ３）＝（ｗ２ｘｌ）／２
式中、ｗ＝腫瘍幅、及びｌ＝腫瘍長
４つの群のマウスの腫瘍成長速度曲線を平均することによって腫瘍倍加時間を得た。その後、以下の式を用いて、ｌｏｇ１０細胞殺傷を推定した。
ｌｏｇ１０細胞殺傷＝（治療群ＴＴＥ−対照群ＴＴＥ）／（３．３２ｘ腫瘍倍加時間）
ＰＫ分析
単一５ｍｇ／ｋｇボーラスの抗体コンジュゲートをオスＢＡＬＢ／ｃマウスの静脈内に投与した。投与後、１時間、８時間及び２０時間、及び２、４、６、８、１０、１４、２１、及び２８日に、時点ごとに３匹の動物の血しょうを採集した。１週間ごとに２回以上、単一の動物を採取しなかった。−８０℃で、血しょう試料を保存し、ＥＬＩＳＡによって全抗体及び全ＡＤＣの濃度を定量化した。前者について、抗−ヒトＩｇＧ−特異的抗体で、コンジュゲートを捕捉し、ＨＲＰ−共役抗−Ｆｃ−特異的抗体でコンジュゲートを検出した。後者について、抗−ヒトＦａｂ−特異的抗体で、コンジュゲートを捕捉し、マウス抗−メイタンシン一次抗体で、コンジュゲートを検出し、続いて、ＨＲＰ−共役抗−マウスＩｇＧ−サブクラス１−特異的二次抗体で、コンジュゲートを検出した。Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ＥＬＩＳＡ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いて、結合二次抗体を検出した。硫酸で反応をクエンチ後、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフトウエアを備えたモレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ Ｍ５プレートリーダーで、４５０ｎｍで、吸光度を取ることによってシグナルを読んだ。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いて、データを分析した。以下の式によるＹ値（１／Ｙ２によって加重した）の平均の非線形回帰によって、経時的に測定した濃度を２−コンパートメントモデルにフィットさせた。
Figure 2017520533
得られた指数的減弱定数（τβ）を用いて、ｔ１／２を計算した。
熱蛍光
ＦｃＲＮ
ＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ、＃２１３３６）を用いて、製造者の指示書に従って、ＦｃＲｎ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、＃ＣＴ００９−Ｈ０８Ｈ）をビオチン化した。「キネティックバッファー」：２０ｍＭホスフェート、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．０５％ナトリウムアジド、０．１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン中でＦｃＲｎアッセイのための全希釈及び結合ステップを行った。バッファーは、別段の記載を除いてｐＨ６．０であった。黒色９６ウェルプレート中で、１０分間、２００μＬのキネティックバッファー中で、ＳＡバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、＃１３０５２９１）を事前に水和反応させた。その後、チップをＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄバイオセンサーに入れ、１分間、ベースラインシグナルを設定した。その後、１．５μｇ／ｍＬビオチン化ＦｃＲｎ中にチップを置き、３２０秒間、捕捉した。さらに２回の１分間、ベースラインステップ後、５分間、ＩｇＧ（１００ｎＭ）を結合させた。最後に、ｐＨ７．３のキネティックバッファーを含有するウェルにチップを移動し、５分間、解離をモニターした。
免疫原性
ｉＴｏｐｅ（商標）を用いて、タグを含有する領域にまたがるオーバーラッピング９ｍｅｒで、標識配列及び非標識配列の分析を実施し、３４ヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子のそれぞれに対して試験した。ポテンシャル「フィット」及びＭＨＣクラスＩＩ分子による相互作用に基づいて各９ｍｅｒにスコアを付与した。ソフトウエアによって計算したペプチドスコアは、０〜１の間にある。高平均結合スコア（ｉＴｏｐｅ（商標）スコアリング機能で＞０．５５）を得たペプチドを強調した。ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドの≧５０％（すなわち、３４対立遺伝子のうち１７を越える）では、高結合親和性（スコア＞０．６）がみられ、かかるペプチドを「乱雑高親和性」と定義した。スコア＞０．５５である対立遺伝子のＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチド結合≧５０％を「乱雑中等度親和性」と定義した。また、配列を用いて、以前に特定されたＴ細胞エピトープとの同一性または高配列相同性を確認するために、ＢＬＡＳＴサーチによってＴＣＥＤ（商標）（Ｔ細胞エピトープデータベース）に照会した。
ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンの合成
Figure 2017520533
（Ｓ）−５−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）−１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３，６−ジオキソ−２，１０，１３−トリオキサ−４，７−ジアザヘキサデカン−１６−オイック酸（３）の調製
スターラーバーを含有する２０ｍＬガラスシンチレーションバイアルにアミン２（７１０．３ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）、及びＮａ２ＣＯ３（６３７．９ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）を添加した。水（１０．０ｍＬ）を添加し、２０℃で、５分間、溶液を撹拌し透明で無色の溶液が得られた。分離２０ｍＬガラスシンチレーションバイアルにペンタフルオロフェニルエステル１（１１８５．７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、１０．０ｍＬの１，４−ジオキサン中に溶解した。前記の調製した溶液に滴下添加され、透明で無色の溶液を得ているバイアルを１分間、ボルテックスさせ、白色沈殿物が得られた。２０℃で、４時間、反応物を撹拌し、７０ｍＬの水に添加し、１ＭのＨＣｌの滴下添加によってｐＨ３まで酸性にし、２ｘ５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機フラクションを濾過し、蒸発させ、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。高真空下で、精製した生成物を乾燥させ、粘着性で吸湿性の白色固体として１１３７．３ｍｇ（９７％）の化合物３が得られた。
（Ｓ）−７−アミノ−２，２−ジメチル−４，８−ジオキソ−３，１２，１５−トリオキサ−９−アザオクタデカン−１８−オイック酸（４）の調製
アミン化合物３（２６３８．７ｍｇ、４．５１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８．９２ｍＬ）中のピペリジン（２．２３ｍＬ、２２．５７ｍｍｏｌ）溶液（２０％ｖ／ｖピペリジン）中に溶解し、２０℃で、１時間、撹拌した。白色沈殿物が形成された。反応物を濾過し、透明で淡黄色の溶液が得られた。溶液を蒸発させ、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。高真空下で、分離した生成物を乾燥させ、透明で粘性の油として８１３．１ｍｇ（５０％）の化合物４が得られた。
Figure 2017520533
（Ｓ）−７−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンアミド）−２，２−ジメチル−４，８−ジオキソ−３，１２，１５−トリオキサ−９−アザオクタデカン−１８−オイック酸（６）の調製
乾燥させたスターラーバーを含有する乾燥させた２０ｍＬガラスシンチレーションバイアルにアミン化合物４（５８２．４ｍｇ、１．６０７ｍｍｏｌ）を添加した。無水ＤＭＦ（５ｍＬ）及び（ｉ−Ｐｒ）２ＮＥｔ、（０．８４ｍＬ、４．８２ｍｍｏｌ）を添加し、２０℃で、５分間、溶液を撹拌し、透明で非常に淡黄色の溶液が得られた。少量ずつ、５分以上で、エステル５（１２５３．７ｍｇ、１．９３０ｍｍｏｌ）を添加し、２０℃で、２時間、反応物を撹拌した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって、さらにワークアップなしで、反応混合物を精製した。高真空下で、精製した生成物を乾燥させ、白色フィルムとして４０６．３ｍｇ（４９％）の化合物６が得られた。
Figure 2017520533
２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−インドール（８）
オーブン乾燥フラスコに、インドール−２−メタノール，７，（１．５８１ｇ，１０．７４ｍｍｏｌ），ＴＢＳＣｌ（１．７８９ｇ、１１．８７ｍｍｏｌ）、及びイミダゾール（２．１９７ｇ、３２．２７ｍｍｏｌ）を装填し、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ、無水）中に懸濁させた。１６時間後、オレンジ色残基に反応混合物を濃縮した。粗混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）中に溶かし、水性ＡｃＯＨ（５％ｖ／ｖ、３ｘ５０ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。混合有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、さらに精製しないで用いられた結晶質固体として、２．７８９ｇ（９９％）の化合物８が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ０．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ − ７．１４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１２ − ７．０７ （ｍ， １Ｈ）， ６．３２ （ｄ， Ｊ ＝ １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８９ （ｓ， ２Ｈ）， ０．９５ （ｓ， ９Ｈ）， ０．１２ （ｓ， ６Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １３８．３， １３６．０， １２８．６， １２１．７， １２０．５， １１９．８， １１０．９， ９９．０， ５９．４， ２６．１， １８．５， −５．２．Ｃ１５Ｈ２４ＮＯＳｉ［Ｍ＋Ｈ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２６２．１６２７；実測値：２６２．１６２５．
メチル３−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（１０）
ＣＨ３ＣＮ（２５ｍＬ）中のインドール８（２．７８９ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ）の溶液にメチルアクリレート、９、（４．８０ｍＬ、５３．３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８００μＬ，５．３５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を還流させた。１８時間後、溶液を冷却し、シリカゲルクロマトグラフィー（９：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製されたオレンジ色油に濃縮し、無色油として３．５４３ｇ（９６％）の化合物１０が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２３ − ７．１８ （ｍ， １Ｈ）， ７．１２ − ７．０７（ｍ， １Ｈ）， ６．３８ （ｓ， １Ｈ）， ４．８４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５４ − ４．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８９ − ２．８４ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９１ （ｓ， ９Ｈ）， ０．１０ （ｓ， ６Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７２．０， １３８．５， １３７．１， １２７．７， １２２．０， １２１．０， １１９．８， １０９．３， １０１．８， ５８．２， ５１．９， ３９．５， ３４．６， ２６．０， １８．４， −５．２．Ｃ１９Ｈ３０ＮＯ３Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：３４８．１９９５；実測値：３４８．１９９６．
メチル３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（１１）
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物１０（１．２８３ｇ、３．６９２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、ＴＨＦ（３．９０ｍＬ、３．９０ｍｍｏｌ）中のテトラブチルアンモニウムフルオリドの１．０Ｍ溶液を添加した。１５分後、Ｅｔ２Ｏ（２０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶性、３ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、薄緑色油に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（２：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって油を精製し、白色結晶質固体として８２２ｍｇ（９５％）の化合物１１が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７ − ７．２３ （ｍ， １Ｈ）， ７．１６ − ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．４４ （ｓ， １Ｈ）， ４．７７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６４ （ｓ， １Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７２．３， １３８．５， １３７．０， １２７．６， １２２．２， １２１．１， １１９．９， １０９．３， １０２．３， ５７．１， ５２．０， ３９．１， ３４．３．Ｃ１３Ｈ１５ＮＮａＯ３［Ｍ＋Ｎａ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２５６．０９５０；実測値：２５６．０９４６．
メチル３−（２−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（１２）
デス−マーチンペルヨージナン（５．１９５ｇ、１２．２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）及びピリジン（２．７０ｍＬ、３３．５ｍｍｏｌ）の混合物中に懸濁させた。５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のメチル３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（化合物１１；２．６１１ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）の溶液に得られた白色懸濁液を移し、赤茶色懸濁液が得られた。１時間後、チオ硫酸ナトリウム（１０％水溶液、５ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、５ｍＬ）で反応物をクエンチした。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ２０ｍＬ）で抽出し；混合抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、茶色油に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５〜５０％ＥｔＯＡｃ）による精製の結果、無色油として２．１６５ｇ（８４％）の化合物１２が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．８７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．１， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．４０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．９， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １８２．５２， １７１．７５， １４０．１２， １３５．１０， １２７．２０， １２６．３９， １２３．４６， １２１．１８， １１８．５５， １１０．６２， ５１．８３， ４０．５６， ３４．９７．Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２５４．０７９３；実測値：２５４．０７８６．
３−（２−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンオイック酸（１３）
ジオキサン（１００ｍＬ）中に溶解したインドール１２（２．３６９ｇ、１０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＯＨ（４Ｍ水溶液、７．６８ｍＬ、３０．７３ｍｍｏｌ）を添加した。濃白色沈殿物が、数時間の間に次第に形成された。２１時間後、ＨＣｌ（１Ｍ水溶液、３０ｍＬ）を滴下添加し、ｐＨ＝４の溶液が得られた。溶液を濃縮し、得られた薄茶色油をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に溶解し、水（２ｘ５０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、オレンジ色固体に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（０．１％酢酸とヘキサン中の１０〜５０％ＥｔＯＡｃ）による精製の結果、淡黄色固体として１．９９４ｇ（８４％）の化合物１３が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．８９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．１， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８ − ７．４３ （ｍ， １Ｈ）， ７．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．９， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １８２．６５， １７６．９６， １４０．１２， １３５．０２， １２７．３３， １２６．４２， １２３．５３， １２１．２７， １１８．７６， １１０．５５， ４０．１９， ３４．８２．Ｃ１２Ｈ１０ＮＯ３［Ｍ−Ｈ］−のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２１６．０６６６；実測値：２１６．０６６５．
３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンオイック酸（１５）
１，２−ジクロロエタン（無水、２５ｍＬ）中の化合物１３（１．１９３ｇ、５．４９２ｍｍｏｌ）及び（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチルヒドラジンカルボキシレート、１４、（２．１４７ｇ、７．６０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．２７３ｇ、６．００６ｍｍｏｌ）を添加した。２時間、得られた黄色懸濁液を撹拌し、その後、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、１０ｍＬ）でクエンチし、続いて、ＨＣｌ（１Ｍ水溶液）を添加し、ｐＨ４にした。有機層を分離し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２（５ｘ１０ｍＬ）で抽出した。プールした有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、オレンジ色油に濃縮した。Ｃ１８シリカゲルクロマトグラフィー（水中の２０〜９０％ＣＨ３ＣＮ）による精製の結果、蝋様ピンク色固体として１．６５６ｇ（６２％）の化合物１５が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７０ − ７．４７ （ｂｒ ｍ， ３Ｈ）， ７．４２ − ７．１６ （ｂｒ ｍ， ６Ｈ）， ７．１２ − ７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３７ （ｓ， ０．６Ｈ）， ６．０５ （ｓ， ０．４Ｈ）， ４．７５ − ４．３０ （ｂｒ ｍ， ４Ｈ）， ４．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．５５ （ｂｒ ｄ， １Ｈ）， ３．１１ − ２．６９ （ｍ， ５Ｈ）， ２．５７ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ２．０９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７４．９０， １５５．６５， １４３．８１， １４１．４２， １３６．９８， １３４．６４， １２７．７５， １２７．４８， １２７．１２， １２４．９２， １２２．００， １２０．７３， １２０．０１， １１９．７５， １０９．１９， １０３．７４， ６７．３３， ６６．８０， ５１．３９， ４７．３０， ３９．５８， ３９．３２， ３５．２３， ３２．１０．Ｃ２９Ｈ３０Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：４８４．２２３６；実測値：４８４．２２２２．
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチル−２−（（１−（３−オキソ−３−（ペルフルオロフェノキシ）プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ヒドラジン−１−カルボキシレート（５）
乾燥させたスターラーバーを含有する乾燥させた１００ｍＬの２首丸底フラスコに化合物１５（５．００６ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を添加した。シリンジによって無水ＥｔＯＡｃ、４０ｍＬを添加し、２０℃で、５分間、溶液を撹拌し、透明で薄い黄色〜緑色の溶液が得られた。氷水浴中で溶液を０℃に冷却し、３ｍＬの無水ＥｔＯＡｃ中のペンタフルオロフェノール（２０９８．８ｍｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で、５分間、溶液を撹拌した。シリンジによってゆっくりと７ｍＬの無水ＥｔＯＡｃ中のＤＣＣ（２３４８．０ｍｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で、５分間、溶液を撹拌し、その後、水浴から除去し、２０℃に温めた。２時間、反応物を撹拌し、０℃に冷却し、濾過し、透明で薄い黄色〜緑色の溶液が得られた。溶液を５０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、２ｘ２５ｍＬのＨ２Ｏ、１ｘ２５ｍＬの５ＭのＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発させ、高真空下で、乾燥させ、緑色〜白色固体として、６５５２．５ｍｇ（９７％）の化合物５が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７８０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４５−７．２２ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１４ （ｄｄ（ａｐｐｔ． ｔ）， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４２ ＆ ６．１０ （２ ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．７４ （ｄｄ（ａｐｐｔ． ｔ）， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６５−３．１８ （ｂｒ， ３Ｈ）， ３．０８ ＆ ２．６５ （２ ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ２．８８ （ｓ， ３Ｈ）．
Figure 2017520533
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチルヒドラジン−１−カルボキシレート（１４）
ＭｅＮＨＮＨＭｅ・２ＨＣｌ，化合物１６、（５．０ｇ、３７．６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（８０ｍＬ）中に溶解した。Ｅｔ３Ｎ（２２ｍＬ、１５８ｍｍｏｌ）を添加し、濾過によって形成された沈殿物を除去した。ＭｅＮＨＮＨＭｅの残りの溶液に、２．５時間以上、−２０℃で、ＦｍｏｃＣｌ（０．４９ｇ、１８．９ｍｍｏｌ、０．５当量）の溶液を滴下添加した。その後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮した。シリカ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３：２）上でフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製し、３．６ｇ（３４％）の化合物１４が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．７５−７．３７ （ｍ， ８Ｈ）， ４．４８ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．２７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．５５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）．
Figure 2017520533
マイタンシノール３−（２Ｓ，１５Ｒ）−１９−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−１５−（２−（ｔ−ブトキシカルボニル）エチル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（１８）
ＨＡＴＵ（０．２７７ｇ、０．７２９ｍｍｏｌ）を添加しながら、室温で、３．０ｍＬのＤＭＦ中のマイタンシノール３−（Ｓ）−α−Ｎ−メチルアミノプロピオネート（化合物１７）（０．４２６ｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）、カルボン酸６（０．５９７ｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）、及び（ｉ−Ｐｒ）２ＮＥｔ（０．３５ｍＬ、２．００ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。２．５時間、反応混合物を撹拌し、ロータリー蒸発によって濃縮した。０〜１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２勾配を用いて、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離した。生成物を含有するフラクションを混合し、濃縮し、０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で再度、フラッシュクロマトグラフィーにかけ、白色固体として０．７２１ｇ（７５％）のマイタンシノイド１８が生成された。
Ｃ７５Ｈ９５ＣｌＮ８Ｏ１７［Ｍ＋Ｎａ］＋のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１４５８．７；実測値：１４８１．８．
マイタンシノール３−（２Ｓ，１５Ｒ）−１９−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−１５−（２−（カルボキシ）エチル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（１９）
ＣＨ２Ｃｌ２（０．３７８ｍＬ、０．３７８ｍｍｏｌ）中のＳｎＣｌ４の１．０Ｍ溶液を滴下添加しながら、０℃で、１．０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中のマイタンシノイド１８（１１０．５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。黄色沈殿物が形成された。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２０勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって、さらにワークアップなしで、反応混合物を精製し、白色フィルムとして６５．６ｍｇ（６２％）のマイタンシノイド１９が得られた。
Ｃ７３Ｈ９１ＣｌＮ８Ｏ１８［Ｍ−Ｈ］−のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１４０１．６ 実測値１４０１．１．
マイタンシノール３−（２Ｓ，１５Ｒ）−１９−（２−（２−（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−１５−（２−（カルボキシ）エチル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（２０）
マイタンシノイド１９（６４．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加しながら、室温で、４５３．６ｍＬのＤＭＡ中のピペリジン（９０．７μＬ、０．９２ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。２０分間、反応混合物を撹拌した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２０勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって、さらにワークアップなしで、反応混合物を精製し、白色フィルムとして４９．１ｍｇ（９０％）のマイタンシノイド２０が得られた。
Ｃ５８Ｈ８２ＣｌＮ８Ｏ１６［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１１８１．６ 実測値１１８１．３．
結果及び考察
抗体タグ−配置ライブラリーの開発及び最初のスクリーニング
重鎖及び軽鎖不変領域内の露出した比較的非構造化部分を特定するために、ヒトＩｇＧ１結晶構造を調査した。最小に天然ＩｇＧ構造を混乱させるが、共役に接触可能のままである位置にタグを挿入した。アルデヒドタグ配置のために８つの部位を選択した。一度、重鎖または軽鎖のいずれかに各タグを組み入れ、その結果、各抗体が、２つのアルデヒド基を含む。軽鎖中の１つの内部部位及び重鎖中の７つの部位を選択した：ＣＨ１中の３つ、ＣＨ２中の２つ、ＣＨ３中の１つ、及びＣ−末端の１つ（図２、上部）。Ｎ−末端からＣ−末端への順序に従って、アルファベット順にこれらの部位に名前を付けた（すなわち、タグＡ〜Ｇ）。軽鎖タグを「ＬＣ」と示した。プロトタイプヒトＩｇＧ１重鎖及びカッパ軽鎖の不変領域に選択されたタグ部位をクローンした。コンセンサス配列内でＣｙｓのＦＧｌｙへの有効な変換を確実にするために、ヒトＦＧＥを過剰発現している細胞の大量プール中に過渡的にタンパク質を生成した。タンパク質Ａを用いて、抗体を精製し、ＰＢＳ中に保存した。
ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ分析によって免疫原性についてアルデヒド標識抗体を試験するために実験を実施した。公知のＭＨＣクラスＩＩペプチド結合モチーフ（ｉＴｏｐｅ（商標））及び事前に特定された免疫原性配列（ＴＣＥＤ（商標））の両者を組み入れたソフトウエアを用いて、高及び中等度親和性を有する多くのＭＨＣコンテクストで乱雑に結合する可能性があるペプチドを特定した。この分析に基づいて、免疫原性である可能性があるペプチドを生成するためにタグＢを決定した。次に、タグ配置の抗体安定性への作用を扱うために、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって凝集を分析した。標識を付けられた抗体のうち６つが、凝集なし〜極めて凝集が少ないを示した（表２）。ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン中のタグＤ及びＦを含有する２つの抗体が、それぞれ、有意な凝集を示した。
Figure 2017520533
抗体トラスツズマブ及びサイトトキシンペイロードメイタンシンが含まれた部位特異的ＡＤＣを生成するために実験を実施した。ＬＣ、タグＣ、またはタグＧ位置にアルデヒドタグでトラスツズマブを発現させ、抗体ドメイン全体に分散した共役部位を示した。これらのタグ配置は、よい抗体力価を示し、凝集が少なく、容易に共役し、クロマトグラフ分析、ならびに生物物理学及び機能試験によって測定したとおり、挙動のよいＡＤＣを生成した。また、実験の対照薬として用いるために、従来のリジン化学によりＳＭＣＣ−ＤＭにトラスツズマブを共役することによって、ＡＤＣ（αＨＥＲ２−ＤＭ１）を生成した。
細胞傷害性ペイロードの安定したＡＤＣを生成したアルデヒド標識αＨＥＲ２抗体上の３つの異なる位置への部位特異的共役
ヒトホルミルグリシン−生成酵素（ＦＧＥ）を過剰発現する細胞の大量プール中に、軽鎖（ＬＣ）、ＣＨ１ドメイン（タグＣ）のいずれか、または重鎖Ｃ−末端（ＣＴ、タグＧ）にアルデヒドタグを含有するように修飾されたトラスツズマブ抗体を生成した。ＬＣ、ＣＨ１、またはＣＴそれぞれで標識を付けられた抗体のために１６５、５４６、及び６６０ｍｇ／ＬのＵＴｉｔｅｒを入手した。ＣｙｓからｆＧｌｙへの変換有効性に関して、質量分析法によって測定したとおり、ＬＣ、ＣＨ１、及びＣＴそれぞれでの８６％、９２％、及び９８％変換を得た。３７℃で、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．８５％ＤＭＡ及び０．０８５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有する５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ５．５中のＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンでｆＧｌｙ標識抗体を処置することによって共役反応を実施し、分析用疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって反応の進行を追跡した。完了時に、タンジェント流ろ過によって過剰ペイロードを除去し、分取ＨＩＣによって非共役抗体を除去した。これらの反応により、ＣＨ１及びＣＴタグ部位で、ＨＩＰＳリンカーペイロードのｆＧｌｙへの＞９０％共役有効性を示し、ＬＣタグ部位で、７５％共役有効性を示した。最終生成物のＨＩＣ分析が、図３に示されている。コンジュゲートのＳＥＣ分析では、最小凝集を示した（図７）。ＳＥＣによって、指示された位置で標識を付けられた非共役及びＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシン共役ＡＤＣを分析した。全凝集は、すべての場合で≦５％であった。
抗体構造へのタグ組込みの作用を評価するために、熱蛍光によってこれらの抗体の熱安定性を検討した。非標識配列ならびにＬＣ、ＣＨ１、またはＣＴ位置に標識を付けられた抗体を含む試験したαＨＥＲ２抗体（範囲６７．６〜６８℃）の間では、Ｔｍ１（最も低く観察された熱転移）で検出可能な差はなかった（表３）。
Figure 2017520533
ＣＴ標識抗体のＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンとの共役では、Ｔｍ１で軽微な作用があり、非標識抗体と比べて１度だけ融解温度が減少した。次に、表面プラスモン共鳴分析によってタグ配置及びペイロード共役のＦｃＲｎ結合への作用を測定した。ＦｃＲｎが、抗体薬物動態学で重要な役割を演じる可能性があり、ｐＨ６．０での会合及びｐＨ７．３での解離の両者が抗体の循環半減期と関係しており、後者の値は、前者より大きな影響を有する。両パラメーターを測定した（表４）。
Figure 2017520533
対照には、非標識αＨＥＲ２及びαＨＥＲ２−ＤＭ１が含まれた。ｐＨ６．０でのＦｃＲｎ ＫＤでアルデヒドタグ配置またはペイロード共役の作用がみられなかった。逆に、ｐＨ７．３での解離は、５秒後に結合を残した抗体のパーセントで差を示した。トラスツズマブの抗体の保持が、最小量であり、アルデヒドタグの包含物が、わずかに保持を増加させたが、有意でなかった。抗体の共役が、ｐＨ７．３での解離に影響を及ぼし、アルデヒド標識ＡＤＣの受けた影響は、αＨＥＲ２−ＤＭ１と比べて少なかった。後者のコンジュゲートの保持は、他の測定した全分析対象物質と有意な差があった。これらの傾向は、抗体へのアルデヒドタグの挿入が、ＦｃＲｎ結合を有意に調節せず、アルデヒド−媒介部位特異的ＡＤＣ生成により、非特異的に共役されたαＨＥＲ２−ＤＭ１と比べて、野生型抗体とほぼ同じであるＦｃＲｎ解離特性を有するＡＤＣが生成されたことを示した。
さらにＬＣ、ＣＨ１、及びＣＴタグの免疫原性プロファイルを検討するために、ｅｘ ｖｉｖｏヒトＴ−細胞アッセイ（ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標））を実施し、ＨＬＡアロタイプの世界母集団を表している５０人の健康なドナーからの白血球とこれらの構成体の非共役バージョン及びＡＤＣバージョンの両者をインキュベートした。増殖及びＩＬ−２サイトカイン分泌を評価することによって、Ｔ−細胞反応を測定した。この機能的測定によると、ＬＣ−、ＣＨ１−、及びＣＴ−標識抗体の非共役バージョン及びＡＤＣバージョンは、免疫原性が低かった（表５）。分析対象物質は、陽性対照（比較的免疫原性であり、臨床的免疫原性データが利用できる単クローン性抗体のヒト化Ａ３３）によって誘発された試料では、２２％で増殖したのと比べて、ドナー白血球の２〜１０％だけでＴ−細胞増殖を誘発した。
Figure 2017520533
異なる抗体主鎖であるが、同じ３つのタグ配置を用いた実験の平行セットでは、血しょう中で３７℃で、アルデヒド標識ＨＩＰＳコンジュゲートの安定性を試験した。発蛍光団（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、ＡＦ４８８）またはサイトトキシンペイロード（メイタンシン）のいずれかに結合されたＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２リンカーを保持している抗体を試験した。リンカーへのペイロード結合の差（例えば、エステル対アリールアミド結合、図８Ａ及び８Ｂを参照）がどれくらい安定性に影響を及ぼすかを測定するために実験を実施した。結果は、ＨＩＰＳ化学が、高く安定していることを示した。ＡＦ４８８コンジュゲートでは、タグ配置にかかわらず、１２ｄで、３７℃で、ラット血しょう中で、ペイロードシグナルの損失はみられなかった（図９Ａ）。しかし、この安定性は、完全にメイタンシンコンジュゲートに移らず、経時的にペイロードシグナルのいくつかの損失を示した（図９Ｂ）。ペイロード損失の量は、タグ配置に応じて異なっていた、ＣＴ部位が、最も大きな安定性を示し、続いて、ＣＨ１及びＬＣ部位が安定性を示した。ＡＦ４８８及びメイタンシンコンジュゲート間の安定性の差は、リンカーのＰＥＧ２部分にペイロードを結合する異なる結合に関係する可能性がある（図８Ａ及び８Ｂ）。ＡＦ４８８は、安定したアリールアミド結合によってＰＥＧ２に結合され、一方、メイタンシンペイロードを結合したエステル結合は、高ｐＨで化学的に不安定であった。したがって、３つのＡＤＣの安定性にみられた差は、３つの結合部位でｐＨ作用を含む別々の局所環境を反映している可能性がある。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで、腫瘍標的に対して強力な活性を示したＬＣ−、ＣＨ１−、及びＣＴ−標識ＡＤＣ
有効性を測定するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＨＥＲ２を過剰発現している細胞株、ＮＣＩ−Ｎ８７に対して、ＡＤＣを試験した。対照薬として遊離型メイタンシンを用いた。３つのαＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣコンジュゲートの全てが、ｐＭ活性を示し、遊離型メイタンシンと同等であった（図１０）。ＩＣ５０測定値は、これらの分析対象物質の間で有意な差がなかった。逆に、イソタイプ対照ＣＴ標識コンジュゲートが、本質的に活性を示さなかった。
ＳＣＩＤマウスのＮＣＩ−Ｎ８７異種移植モデルを用いて、ＬＣ−、ＣＨ１−、及びＣＴ−標識αＨＥＲ２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を評価した。陰性対照として、トラスツズマブだけ及びイソタイプ対照ＣＴ−標識ＨＩＰＳ−Ｇｌｕ−ＰＥＧ２−メイタンシンＡＤＣを用い、対照薬としてαＨＥＲ２−ＤＭ１（ＤＡＲ３．４）が含まれた。試験の開始時に、単一５ｍｇ／ｋｇ用量として全化合物を投与した。トラスツズマブまたはイソタイプ対照ＡＤＣのいずれかで処置したマウスでは、腫瘍が、成長し続け、一方、単一用量のαＨＥＲ２−標的ＡＤＣが、治療した動物で、約３０日間で腫瘍成長を停止するのに十分であった（図１１Ａ）。腫瘍が、結局、再び成長し始めた場合、腫瘍サイズは、ＬＣ−またはＣＴ−標識ＡＤＣで処置した動物と比べて、ＣＨ１−標識ＡＤＣまたはαＨＥＲ２−ＤＭ１のいずれかで処置した動物の方が大きかった。この作用を調査するために、さまざまな治療により投与した腫瘍について、ｌｏｇ１０細胞殺傷を測定した（表６）。結果は、ＣＨ１−標識ＡＤＣによる処置の方が、他のＡＤＣによる治療と比べて、腫瘍細胞の殺傷が少なかったを示した。ＣＴ−標識ＡＤＣが、最も高いｌｏｇ１０細胞殺傷が得られ、最も有効なコンジュゲートであると思われた。この力価の増大は、ＣＴ−標識ＡＤＣで処置した動物に有意な生存優位性があると解釈された（図１１Ｂ）。
Figure 2017520533
別々の薬物動態学を示した抗体上の異なる位置にペイロードを保持しているＡＤＣ
ＡＤＣのＰＫプロファイルを評価するために実験を実施した。マウスに、５ｍｇ／ｋｇのＬＣ−、ＣＨ１−、またはＣＴ−標識ＡＤＣ、または対照薬としてトラスツズマブもしくはαＨＥＲ２−ＤＭ１を投与した。マウスから血しょうを採集し、総ＡＤＣ及び総抗体濃度を定量するためにＥＬＩＳＡによって分析した。総ＡＤＣを測定するために、分析対象物質を抗−ヒトＦａｂ−特異的抗体で捕捉し、抗−メイタンシン抗体で検出した。総抗体を測定するために、分析対象物質を抗−ヒトＩｇＧ−特異的抗体で捕捉し、抗−ヒトＦｃ−特異的抗体で検出した。半減期を測定するために、非線形回帰によって、経時的に測定した濃度を２−コンパートメントモデルにフィットさせた（表７）。各アルデヒド標識ＡＤＣの総抗体半減期は、トラスツズマブと同じ、またはトラスツズマブより長く、アルデヒドタグ挿入及びＨＩＰＳ共役が、抗体の塩基性ＰＫ特性を変化させなかったことを示している。逆に、αＨＥＲ２−ＤＭ１コンジュゲートの総抗体半減期の方が有意に短く、非−特異的共役化学（過剰共役された種となる）が、ＰＫに陰性作用があったことを示している。また、共役された抗体（総ＡＤＣ）半減期を測定し、ＣＴ−標識ＡＤＣでは、担腫瘍マウスに最も大きな生存利益を与え、また、総ＡＤＣ半減期が最長であったことを示した。αＨＥＲ２−ＤＭ１、及びＣＨ１−及びＬＣ−標識ＡＤＣのコンジュゲート半減期の方が、ＣＴ−標識コンジュゲートより短かった。これらの数は、共役部位が、ＡＤＣ半減期を制御するのに重要な役割を演じたことを示した。全ての場合で、アルデヒド標識コンジュゲートが循環中で安定しており、総ＡＤＣと総抗体濃度とのパーセント曲線下面積比が、７６〜８１％の範囲であった（図１２）。αＨＥＲ２−ＤＭ１コンジュゲートの比は、７２％であった。
Figure 2017520533
ＡＤＣ構造−活性関係性マッピング
実験を実施し、細胞傷害性ペイロードの抗体重鎖及び軽鎖への部位特異的コンジュゲートに、ＨＩＰＳ化学で結合されたアルデヒドタグを用いることができることを示した。実験には、内部、ならびにＮ−またはＣ−末端部位での共役配置を変化させることが含まれ、ＳＡＲ空間を検討すること及びＡＤＣ構造を最適化することに関して柔軟性を許容した。このアプローチにより、ＰＫが改善し、従来のコンジュゲートと比べて薬剤負荷の低下による同等の有効性、または向上した有効性を有するＡＤＣを生成した。アルデヒド標識ＡＤＣは、また、ＰＫ実験で試験した総ＡＤＣと総抗体濃度との高い曲線下面積比によって示したとおり、ｉｎ ｖｉｖｏで非常に安定していた。この観察された安定性は、ＨＩＰＳ化学によるものと思われ、抗体及びペイロード間のＣ−Ｃ結合が得られた。
別々の抗体ドメイン中に共役部位を有する３つのアルデヒド標識ＡＤＣを試験し、ＣＴ−標識ＡＤＣの方が、ＣＨ１−及びＬＣ−標識ＡＤＣと比べて、ＰＫ及びｉｎ ｖｉｖｏ有効性が優れていることが観察された。３つのタグ位置で観察されたＡＤＣ安定性の差は、リンカー／ペイロードを抗体に結合するＨＩＰＳ化学ではなく、ＰＥＧ２リンカーにメイタンシンを結合するエステル結合の作用による可能性がある。エステル結合は、高ｐＨで開裂しやすい可能性がある；そのため、ＬＣ、ＣＨ１、及びＣＴ位置で共役されたメイタンシンの安定性の差は、これらの部位の局所ｐＨ作用の変化を反映している可能性がある。例えば、１）安定したアリールアミド結合によってＰＥＧ２に結合されたＡＦ４８８コンジュゲートが、タグ配置にかかわらず、ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性アッセイで、ペイロードの損失がないことを示したこと；及び２）最も安定した共役部位、ＣＴタグが、最も露出した溶媒であると予測され、このため、これは、局所タンパク質の影響を受けたｐＨ作用より、周囲溶媒のｐＨを受けやすいと思われることが、観察された。
実施例２
リンカー部分で変化させた抗ＨＥＲ２ ＡＤＣを生成した。メイタンシンペイロードへのヒドラジニル−イソ−ピクテ−スペングラー（ＨＩＰＳ）リゲーションを用いて、共役されたアルデヒド標識抗ＨＥＲ２タンパク質を用いて、ＡＤＣを生成した。得られたＡＤＣは、均質であり、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって評価したとおり、明確な薬物抗体比（ＤＡＲ）がみられた。リンカーデザインの差が、単一及び複数用量の有効性異種移植試験で、これらのコンジュゲートの有効性に影響を及ぼした。
化学修飾のため、タンパク質を部位特異的に機能化させるためにアルデヒドタグを用いた。遺伝子的にコードされたタグには、ホルミルグリシン−生成酵素（ＦＧＥ）によって特異的に認識されたペンタペプチド配列（ＣＸＰＸＲ）が含まれた。細胞中のタンパク質発現の間、配列中のシステイン残基が、ＦＧＥによって認識され、翻訳と共役してホルミルグリシンに酸化された。リゲーションのための原生物化学的ハンドルとして、得られたアルデヒドを用いた。２−（（１、２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール末端のリンカーが、イソ−ピクテ−スペングラー反応によってアルデヒドと反応し、アザカルボリンを形成し、抗体及びペイロードを結合する安定したＣ−Ｃ結合が得られた。
メイタンシンを含有する薬剤−リンカー構成体の構造
Figure 2017520533
 一般的合成スキーム
Figure 2017520533
リンカー組成物を変化させる作用を検討するために、アルデヒド標識αＨＥＲ２抗体のＣ−末端に共有結合した５つの異なるメイタンシンコンジュゲートを調製した。ＡＤＣは、前記の化合物１０１〜１０５の構造に示したとおり、そのリンカー組成物に関して変化した。溶解度を助ける官能基が含まれた。リンカー構成体１０１、１０２、１０３、及び１０４が、ＰＥＧ２スペーサーを含有し、リンカー１０５にＣ３スペーサーを用いた。リンカーは、反応性２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）インドール（ＨＩＰＳ）（１０１，１０２，１０３，及び１０５）または２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（ＡｚａＨＩＰＳ）（１０４）のいずれかの末端にあった。リンカーには、陰性荷電側鎖または中性側鎖のいずれかを有するアミノ酸が含まれた。リンカーの代表的な合成が、前記の一般的合成スキーム、スキーム６に示されている。当該例では、リンカー１０１を示し、ペンタフルオロフェニルエステル１０９にペグ化され保護されたアミノ酸を結合した。その後、ＨＡＴＵを用いて、Ｎ−デアセチルメイタンシンに生成物、１１０、を結合し、続いて、ｔｅｒｔ−ブチルエステルを加水分解し、ピペリジンでＦｍｏｃ−保護基を除去した。
３７℃で、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．８５％ＤＭＡ及び０．０８５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有する５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ５．５中の８〜１０等量のリンカー−メイタンシンで抗体を処置することによって、薬剤／リンカーのＣ−末端標識αＨＥＲ２抗体への共役を実施し、分析用疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって反応の進行を観察した。完了時に、タンジェント流ろ過によって過剰ペイロードを除去し、分取ＨＩＣによって非共役抗体を除去した。これらの反応では、＞９０％共役有効性であった。精製後，ＡＤＣは、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって測定したとおり、平均薬物抗体比（ＤＡＲ）１．７を含有した（データは示していない）。調製物は、サイズ排除クロマトグラフィーによって評価したとおり、≧９５％モノマーであった（データは示していない）。
抗−ペイロードと抗−Ｆｃシグナルとの比を比較するＥＬＩＳＡベースの方法を用いることによって、１４日間、３７℃で、血しょう中のＨＩＰＳ−連結ＡＤＣの安定性を測定した。群として、コンジュゲートが、高程度の安定性を示し、差はわずかにすぎなかった（表８を参照）。ＨＥＲ２を過剰発現している細胞株、ＮＣＩ−Ｎ８７に対して、ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を試験した。全ＡＤＣに、ピコモル活性があり（図１３）、ＩＣ５０値が、遊離型メイタンシンで処置後に観察された値とほぼ同じ、または、この値より優れていた。
６日間アッセイで、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性の標的として、ＨＥＲ２を過剰発現するＮＣＩ−Ｎ８７細胞を用いた。陽性対照として、遊離型メイタンシンが含まれ、特異性を示すために陰性対照としてイソタイプ対照ＡＤＣを用いた。下記のとおり、ＩＣ５０値（遊離型薬剤の場合を除いて抗体濃度を反映している）を測定した：遊離型メイタンシン、２５０ｐＭ；リンカー１０１、１７０ｐＭ；リンカー１０２、１６０ｐＭ；リンカー１０３、１１０ｐＭ；リンカー１０４、９６ｐＭ；リンカー１０５、１２０ｐＭ；イソタイプ対照ＡＤＣは測定できなかった。図１３を参照。
Figure 2017520533
ＳＣＩＤマウスのマウスＮＣＩ−Ｎ８７異種移植モデルを用いて、ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を評価した。試験の開始時に、単一５ｍｇ／ｋｇ用量として化合物を投与した。腫瘍成長が阻止され、いくつかの腫瘍では、αＨＥＲ２ ＡＤＣによる処置後のサイズが減少したが（図１４Ａ）、イソタイプ対照ＡＤＣによる処置後のサイズは減少しなかった（リンカー１０１を用いて、共役された）。結局、腫瘍が、全動物で再成長し始め、処置に用いられたＡＤＣに応じて、いくつかの群では、他より早かった。投与後６０〜７０日まで、αＨＥＲ２ ＡＤＣで処置した群間に平均腫瘍容積の差はなかった；特異的に、平均腫瘍容積が、第６０日に２４９〜４８７の範囲であった（図１４Ａ）。さまざまな処置で投与された腫瘍のｌｏｇ１０細胞殺傷を測定した（表９）。結果は、リンカー１０１及び１０４に共役されたＡＤＣによる処置の方が、他のＡＤＣによる処置と比べて多くの腫瘍細胞を殺傷したことを示した。これらの２つのリンカーは、リゲーション中に形成されたアザカルボリン中の窒素基によって互いに異なっていた。この力価の増大の結果、リンカー１０１または１０４に共役されたＡＤＣで処置した動物に有意な生存優位性がみられた（図１４Ｂ）。リンカー１０１及び１０４と比べて、リンカー１０５の有効性が低下し、それはグルタミン酸部分を共有していた。この一連のリンカーの結果は、この文脈では、Ｃ３スペーサーが含まれるとＰＥＧ２スペーサーと比べて力価が低下することを示した。異なるアミノ酸を組み入れた他の２つのリンカーでは、有効性が変化していた。リンカー１０２が、中間のｌｏｇ１０細胞殺傷値（試験全体を通じて殺傷された細胞を反映している）を示したが、試験の最初の１０日に最も高いｉｎ ｖｉｖｏ有効性があり、他の処置より腫瘍容積の減少が大きかった（図１４Ａ）。リンカー１０３が、ｉｎ ｖｉｖｏ有効性が最も低く、また、その結果、ＩＣ５０値が１１０ｐＭであってもｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＮＣＩ−Ｎ８７標的細胞の不完全殺傷となった。全ＡＤＣが、優れた耐容性を示し、処置後４０日までに、＞１５％の体重損失を示した動物はいなかった（図１５）。第０日に、単一５ｍｇ／ｋｇボーラスのＡＤＣをマウスに投与し、最初の５日間は毎日、その後は、２週間ごとに体重をモニターした（図１５）。ＨＩＰＳ化学を用いて、リンカー−メイタンシンペイロードに共役された５ｍｇ／ｋｇのαＨＥＲ２ ＡＤＣでＳＣＩＤマウスを処置したが、体重に影響を及ぼさなかった。
ＮＣＩ−Ｎ８７細胞をＣＢ．１７ ＳＣＩＤマウス（８／群）の尾の付け根にインプラントした。腫瘍が約１１３ｍｍ３に達したとき，動物にリンカー１０１〜１０５に共役された単一５ｍｇ／ｋｇ用量のαＨＥＲ２リンカー、またはリンカー１０１に共役された同用量のイソタイプ対照抗体を与えた。図１４Ａは、１週間に２回、モニターした腫瘍成長のグラフを示す。図１４Ｂは、生存曲線のグラフを示し、試験したタグ配置間の有効性の差を示す。腫瘍が８００ｍｍ３に達した場合、または試験の第１１２日に、どちらが最初になっても、動物を安楽死させた。
Figure 2017520533
複数用量の有効性試験に２つのリンカーを用いた。腫瘍成長、ｌｏｇ１０細胞殺傷、及び生存によって測定したとおり、その全力価のために、リンカー１０１を用いた。最も早い初期腫瘍減少を示したため、リンカー１０２を用い、複数用量セッティングで、有効性の増大という結果となった可能性がある。複数用量試験では、ＳＣＩＤマウスのＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍を用いた。４週間、１週間に１回、動物に投与した（５ｍｇ／ｋｇ）。実験に２つの群を用い、腫瘍の平均容積が、１８０または４００ｍｍ３のいずれかに達した場合、投与を開始した。リンカー１０１及び１０２の両者で生成されたαＨＥＲ２ ＡＤＣが、より小さな腫瘍に対する活性が高く（図１６Ａ）、その結果、腫瘍対照とほぼ同じレベルであった。より大きな腫瘍に対しては、リンカー１０２で生成したαＨＥＲ２ ＡＤＣの方が、大きな有効性を示し、その結果、リンカー１０１で生成したＡＤＣと比べて、腫瘍抑制のレベルが大きかった（図１６Ｂ）。第４２日に、処置した／対照の腫瘍容積が、リンカー１０１及び１０２でそれぞれ、０．３９及び０．２６であった。
前記に記載したとおり、異なるリンカーを保持するＣ−末端−共役αＨＥＲ２ ＡＤＣのパネルが生成され、リンカー中の構造変化により、ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍モデルに対して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両者で、ＡＤＣ力価に有意な差が生じることが観察された。
実験方法
バイオコンジュゲーション、精製、及びＨＰＬＣ分析
７２時間、３７℃で、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．８５％ＤＭＡ及び０．０８５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有する５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ５．５中で、アルデヒド標識抗体（１５ｍｇ／ｍＬ）をメイタンシンを含有する薬剤リンカー（薬剤と抗体が等量の８モル）に共役させた。タンジェント流ろ過を用いて、遊離型薬剤を除去した。移動相Ａ：１．０Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、及び移動相Ｂ：２５％イソプロパノール、１８．７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０で、分取スケール疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ １７−５１９５−０１）を用いて、非共役抗体を除去した。非共役物質を溶離させるために３３％Ｂの無勾配を用い、続いて、単共役及び二共役種を溶離させるために４１〜９５％Ｂの直線勾配を用いた。最終生成物のＤＡＲを測定するために、移動相Ａ：１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、及び移動相Ｂ：２５％イソプロパノール、１８．７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０で、分析用ＨＩＣ（Ｔｏｓｏｈ ＃１４９４７）によってＡＤＣを検討した。凝集を測定するために、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．８の移動相で、分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ；Ｔｏｓｏｈ＃ ０８５４１）を用いて、試料を分析した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性
約１ｐｍｏｌ（ペイロード）／ｍＬで、ラット血しょうにＡＤＣを添加した。試料を採取し、使用するまで−８０℃で、保存した。指示された時間、５％ＣＯ２下で、３７℃で、アリコットを置き、その後、抗−メイタンシン及び抗−Ｆａｂシグナルを評価するためにＥＬＩＳＡによって分析した。共役の参照開始値として新鮮解凍アリコットを用いた。時点間での比較が可能になるように１つのプレート上で、全分析対象物質をともに測定した。最初に、ブロッキングバッファー中で、分析対象物質を２０ｎｇ／ｍＬ（アッセイのリニアレンジ内）に希釈した。その後、抗−ヒトＦａｂ−特定の抗体で被覆したプレート上で分析対象物質を捕捉した。次に、ペイロードを、抗−メイタンシン抗体で検出し、続いて、ＨＲＰ−共役二次抗体で検出した；全抗体を、直接共役された抗−ヒトＦｃ−特異的抗体で検出した。ＴＭＢ基質で結合二次抗体を視覚化した。Ｈ２ＳＯ４で比色反応を停止させ、モレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを用いて、４５０ｎｍで、吸光度を測定した。Ｅｘｃｅｌでデータ分析を実施した。４連で、各試料を分析し、平均値を用いた。抗体共役の尺度として、抗−メイタンシンシグナルと抗−Ｆａｂシグナルとの比を用いた。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
ＡＴＣＣからＨＥＲ２−陽性乳癌細胞株、ＮＣＩ−Ｎ８７を入手し、１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補ったＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ）中に維持した。平板培養前の２４時間、対数期成長を確実にするために細胞を通過させた。平板培養の日に、１０ＩＵペニシリン及び１０μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補った９０μＬ正常成長培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ）中の９６−ウェルプレート上に５０００細胞／ウェルを播種した。１０μＬの希釈した分析対象物質と、さまざまな濃度で、細胞を処置し、３７℃で、５％ＣＯ２の雰囲気中で、プレートをインキュベートした。６日後、１００μＬ／ウェルの細胞Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、モレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを用いて、発光を測定した。ＩＣ５０計算を含むデータ分析のためにＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いた。
異種移植試験
５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ中の１ｘ１０７ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍細胞をメスＣ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤマウスの尾の付け根に接種した。腫瘍が、平均１１２ｍｍ３に達した場合、動物に単一５ｍｇ／ｋｇ用量のＡＤＣ、トラスツズマブ抗体（標識を付けられていない）、またはビヒクルだけを与えた。１週間に２回、体重及び腫瘍サイズについて動物をモニターした。以下の式を用いて、腫瘍容積を計算した。
腫瘍容積（ｍｍ３）＝（ｗ２ｘｌ）／２
式中、ｗ＝腫瘍幅、及びｌ＝腫瘍長
４つの群のマウスの腫瘍成長速度曲線を平均することによって腫瘍倍加時間を得た。その後、以下の式を用いて、ｌｏｇ１０細胞殺傷を推定した。
ｌｏｇ１０細胞殺傷＝（治療群ＴＴＥ−対照群ＴＴＥ）／（３．３２ｘ腫瘍倍加時間）
合成方法
Figure 2017520533
（Ｓ）−５−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）−１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−３，６−ジオキソ−２，１０，１３−トリオキサ−４，７−ジアザヘキサデカン−１６−オイック酸（１１０）の調製
スターラーバーを含有する２０ｍＬガラスシンチレーションバイアルにアミン１０９（７１０．３ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）、及びＮａ２ＣＯ３（６３７．９ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）を添加した。水（１０.０ｍＬ）を添加し、２０℃で、５分間、溶液を撹拌し、透明で無色の溶液が得られた。分離２０ｍＬガラスシンチレーションバイアルにペンタフルオロフェニルエステル１０８（１１８５．７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加し、１０．０ｍＬの１，４−ジオキサン中に溶解した。前記の調製した溶液に滴下添加され、透明で無色の溶液を得ているバイアルを１分間、ボルテックスさせ、白色沈殿物が得られた。２０℃で、４時間、反応物を撹拌し、７０ｍＬの水に添加し、１ＭのＨＣｌの滴下添加によってｐＨ３まで酸性にし、２ｘ５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機フラクションを濾過し、蒸発させ、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。高真空下で、精製した生成物を乾燥させ、粘着性で吸湿性の白色固体として１１３７．３ｍｇ（９７％）の化合物１１０が得られた。
（Ｓ）−７−アミノ−２，２−ジメチル−４，８−ジオキソ−３，１２，１５−トリオキサ−９−アザオクタデカン−１８−オイック酸（１１１）の調製
化合物１１０（２６３８．７ｍｇ、４．５１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８．９２ｍＬ）中のピペリジン（２．２３ｍＬ、２２．５７ｍｍｏｌ）溶液（２０％ｖ／ｖピペリジン）中に溶解し、２０℃で、１時間、撹拌した。白色沈殿物が形成された。反応物を濾過し、透明で淡黄色の溶液が得られた。溶液を蒸発させ、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。高真空下で、分離した生成物を乾燥させ、透明で粘性の油として８１３．１ｍｇ（５０％）の化合物１１１が得られた。
（Ｓ）−７−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンアミド）−２，２−ジメチル−４，８−ジオキソ−３，１２，１５−トリオキサ−９−アザオクタデカン−１８−オイック酸（１１３）の調製
乾燥させたスターラーバーを含有する乾燥させた２０ｍＬガラスシンチレーションバイアルに化合物１１１（５８２．４ｍｇ、１．６０７ｍｍｏｌ）を添加した。無水ＤＭＦ（５ｍＬ）及び（ｉ−Ｐｒ）２ＮＥｔ、（０．８４ｍＬ、４．８２ｍｍｏｌ）を添加し、２０℃で、５分間、溶液を撹拌し、透明で非常に淡黄色の溶液が得られた。少量ずつ、５分以上で、エステル１１２（１２５３．７ｍｇ、１．９３０ｍｍｏｌ）を添加し、２０℃で、２時間、反応物を撹拌した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって、さらにワークアップなしで、反応混合物を精製した。高真空下で、精製した生成物を乾燥させ、白色フィルムとして４０６．３ｍｇ（４９％）の化合物１１３が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．７８ （ｄ，Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２ （ｍ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄｄ （ａｐｐ． ｔ）， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ （ｍ， １Ｈ）， ７．１０ （ｄｄ （ａｐｐ． ｔ）， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０６ （ｍ， １Ｈ）， ４．７６ （ｍ， １Ｈ）， ４．７０−４．４２ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２６ （ｍ， １Ｈ）， ４．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０−３．４２ （ｍ， ９Ｈ）， ３．３７（ｍ， １Ｈ）， ２．８１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．７０−２．４８ （ｍ， ５Ｈ）， ２．２５−１．８０ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）．
Figure 2017520533
２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−インドール（１１５）
オーブン乾燥フラスコに、インドール−２−メタノール，１１４，（１．５８１ｇ，１０．７４ｍｍｏｌ），ＴＢＳＣｌ（１．７８９ｇ、１１．８７ｍｍｏｌ）、及びイミダゾール（２．１９７ｇ、３２．２７ｍｍｏｌ）を装填し、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ、無水）中に懸濁させた。１６時間後、オレンジ色残基に反応混合物を濃縮した。粗混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）中に溶かし、水性ＡｃＯＨ（５％ｖ／ｖ、３ｘ５０ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。混合有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、さらに精製しないで用いられた結晶質固体として、２．７８９ｇ（９９％）の化合物１１５が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ０．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ − ７．１４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１２ − ７．０７ （ｍ， １Ｈ）， ６．３２ （ｄ， Ｊ ＝ １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８９ （ｓ， ２Ｈ）， ０．９５ （ｓ， ９Ｈ）， ０．１２ （ｓ， ６Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １３８．３， １３６．０， １２８．６， １２１．７， １２０．５， １１９．８， １１０．９， ９９．０， ５９．４， ２６．１， １８．５， −５．２．Ｃ１５Ｈ２４ＮＯＳｉ［Ｍ＋Ｈ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２６２．１６２７；実測値：２６２．１６２５．
メチル３−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（１１７）
ＣＨ３ＣＮ（２５ｍＬ）中のインドール１１５（２．７８９ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ）の溶液にメチルアクリレート、１１６、（４．８０ｍＬ、５３．３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（８００μＬ，５．３５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を還流させた。１８時間後、溶液を冷却し、シリカゲルクロマトグラフィー（９：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製されたオレンジ色油に濃縮し、無色油として３．５４３ｇ（９６％）の化合物１１７が生成された。
１Ｈ−ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２３ − ７．１８ （ｍ， １Ｈ）， ７．１２ − ７．０７（ｍ， １Ｈ）， ６．３８ （ｓ， １Ｈ）， ４．８４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５４ − ４．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８９ − ２．８４ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９１ （ｓ， ９Ｈ）， ０．１０ （ｓ， ６Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７２．０， １３８．５， １３７．１， １２７．７， １２２．０， １２１．０， １１９．８， １０９．３， １０１．８， ５８．２， ５１．９， ３９．５， ３４．６， ２６．０， １８．４， −５．２．Ｃ１９Ｈ３０ＮＯ３Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：３４８．１９９５；実測値：３４８．１９９６．
メチル３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（１１８）
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物１１７（１．２８３ｇ、３．６９２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、ＴＨＦ（３．９０ｍＬ、３．９０ｍｍｏｌ）中のテトラブチルアンモニウムフルオリドの１．０Ｍ溶液を添加した。１５分後、Ｅｔ２Ｏ（２０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶性、３ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、薄緑色油に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（２：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって油を精製し、白色結晶質固体として８２２ｍｇ（９５％）の化合物１１８が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ０．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７ − ７．２３ （ｍ， １Ｈ）， ７．１６ − ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．４４ （ｓ， １Ｈ）， ４．７７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６４ （ｓ， １Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７２．３， １３８．５， １３７．０， １２７．６， １２２．２， １２１．１， １１９．９， １０９．３， １０２．３， ５７．１， ５２．０， ３９．１， ３４．３．Ｃ１３Ｈ１５ＮＮａＯ３［Ｍ＋Ｎａ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２５６．０９５０；実測値：２５６．０９４６．
メチル３−（２−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（１１９）
デス−マーチンペルヨージナン（５．１９５ｇ、１２．２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）及びピリジン（２．７０ｍＬ、３３．５ｍｍｏｌ）の混合物中に懸濁させた。５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のメチル３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノエート（化合物１１８；２．６１１ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）の溶液に得られた白色懸濁液を移し、赤茶色懸濁液が得られた。１時間後、チオ硫酸ナトリウム（１０％水溶液、５ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、５ｍＬ）で反応物をクエンチした。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ２０ｍＬ）で抽出し；混合抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、茶色油に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５〜５０％ＥｔＯＡｃ）による精製の結果、無色油として２．１６５ｇ（８４％）の化合物１１９が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．８７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．１， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ − ７．４０ （ｍ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．９， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６２ （ｓ， ３Ｈ）， ２．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １８２．５２， １７１．７５， １４０．１２， １３５．１０， １２７．２０， １２６．３９， １２３．４６， １２１．１８， １１８．５５， １１０．６２， ５１．８３， ４０．５６， ３４．９７．Ｃ１３Ｈ１３ＮＯ３Ｎａ［Ｍ＋Ｎａ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２５４．０７９３；実測値：２５４．０７８６．
３−（２−ホルミル−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンオイック酸（１２０）
ジオキサン（１００ｍＬ）中に溶解したインドール１１９（２．３６９ｇ、１０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＯＨ（４Ｍ水溶液、７．６８ｍＬ、３０．７３ｍｍｏｌ）を添加した。濃白色沈殿物が、数時間の間に次第に形成された。２１時間後、ＨＣｌ（１Ｍ水溶液、３０ｍＬ）を滴下添加し、ｐＨ＝４の溶液が得られた。溶液を濃縮し、得られた薄茶色油をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に溶解し、水（２ｘ５０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、オレンジ色固体に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（０．１％酢酸とヘキサン中の１０〜５０％ＥｔＯＡｃ）による精製の結果、淡黄色固体として１．９９４ｇ（８４％）の化合物１２０が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．８９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．１， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８ − ７．４３ （ｍ， １Ｈ）， ７．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．９， １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １８２．６５， １７６．９６， １４０．１２， １３５．０２， １２７．３３， １２６．４２， １２３．５３， １２１．２７， １１８．７６， １１０．５５， ４０．１９， ３４．８２．Ｃ１２Ｈ１０ＮＯ３［Ｍ−Ｈ］−のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：２１６．０６６６；実測値：２１６．０６６５．
３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンオイック酸（１２２）
１，２−ジクロロエタン（無水、２５ｍＬ）中の１２０（１．１９３ｇ、５．４９２ｍｍｏｌ）及び（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチルヒドラジンカルボキシレート、１２１、（２．１４７ｇ、７．６０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．２７３ｇ、６．００６ｍｍｏｌ）を添加した。２時間、得られた黄色懸濁液を撹拌し、その後、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液、１０ｍＬ）でクエンチし、続いて、ＨＣｌ（１Ｍ水溶液）を添加し、ｐＨ４にした。有機層を分離し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２（５ｘ１０ｍＬ）で抽出した。プールした有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、オレンジ色油に濃縮した。Ｃ１８シリカゲルクロマトグラフィー（水中の２０〜９０％ＣＨ３ＣＮ）による精製の結果、蝋様ピンク色固体として１．６５６ｇ（６２％）の化合物１２２が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７０ − ７．４７ （ｂｒ ｍ， ３Ｈ）， ７．４２ − ７．１６ （ｂｒ ｍ， ６Ｈ）， ７．１２ − ７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３７ （ｓ， ０．６Ｈ）， ６．０５ （ｓ， ０．４Ｈ）， ４．７５ − ４．３０ （ｂｒ ｍ， ４Ｈ）， ４．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．５５ （ｂｒ ｄ， １Ｈ）， ３．１１ − ２．６９ （ｍ， ５Ｈ）， ２．５７ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ２．０９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７４．９０， １５５．６５， １４３．８１， １４１．４２， １３６．９８， １３４．６４， １２７．７５， １２７．４８， １２７．１２， １２４．９２， １２２．００， １２０．７３， １２０．０１， １１９．７５， １０９．１９， １０３．７４， ６７．３３， ６６．８０， ５１．３９， ４７．３０， ３９．５８， ３９．３２， ３５．２３， ３２．１０．Ｃ２９Ｈ３０Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋のＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値：４８４．２２３６；実測値：４８４．２２２２．
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチル−２−（（１−（３−オキソ−３−（ペルフルオロフェノキシ）プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ヒドラジン−１−カルボキシレート（１１２）
乾燥させたスターラーバーを含有する乾燥させた１００ｍＬの２首丸底フラスコに化合物１２２（５．００６ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を添加した。シリンジによって無水ＥｔＯＡｃ、４０ｍＬを添加し、２０℃で、５分間、溶液を撹拌し、透明で薄い黄色〜緑色の溶液が得られた。氷水浴中で溶液を０℃に冷却し、３ｍＬの無水ＥｔＯＡｃ中のペンタフルオロフェノール（２０９８．８ｍｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で、５分間、溶液を撹拌した。シリンジによってゆっくりと７ｍＬの無水ＥｔＯＡｃ中のＤＣＣ（２３４８．０ｍｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で、５分間、溶液を撹拌し、その後、水浴から除去し、２０℃に温めた。２時間、反応物を撹拌し、０℃に冷却し、濾過し、透明で薄い黄色〜緑色の溶液が得られた。溶液を５０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、２ｘ２５ｍＬのＨ２Ｏ、１ｘ２５ｍＬの５ＭのＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発させ、高真空下で、乾燥させ、緑色〜白色固体として、６５５２．５ｍｇ（９７％）の化合物１１２が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７８０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４５−７．２２ （ｍ， ６Ｈ）， ７．１４ （ｄｄ（ａｐｐｔ． ｔ）， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４２ ＆ ６．１０ （２ ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．７４ （ｄｄ（ａｐｐｔ． ｔ）， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６５−３．１８ （ｂｒ， ３Ｈ）， ３．０８ ＆ ２．６５ （２ ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ２．８８ （ｓ， ３Ｈ）．
Figure 2017520533
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチルヒドラジン−１−カルボキシレート（１２１）
ＭｅＮＨＮＨＭｅ・２ＨＣｌ，化合物１２３、（５．０ｇ、３７．６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（８０ｍＬ）中に溶解した。Ｅｔ３Ｎ（２２ｍＬ、１５８ｍｍｏｌ）を添加し、濾過によって形成された沈殿物を除去した。ＭｅＮＨＮＨＭｅの残りの溶液に、２．５時間以上、−２０℃で、ＦｍｏｃＣｌ（０．４９ｇ、１８．９ｍｍｏｌ、０．５当量）の溶液を滴下添加した。その後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮した。シリカ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３：２）上でフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製し、３．６ｇ（３４％）の化合物１２１が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．７５−７．３７ （ｍ， ８Ｈ）， ４．４８ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．２７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．５５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）．
Figure 2017520533
マイタンシノール３−（２Ｓ，１５Ｒ）−１９−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−１５−（２−（ｔ−ブトキシカルボニル）エチル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（１２５）
ＨＡＴＵ（０．２７７ｇ、０．７２９ｍｍｏｌ）を添加しながら、室温で、３．０ｍＬのＤＭＦ中のマイタンシノール３−（Ｓ）−α−Ｎ−メチルアミノプロピオネート（化合物１２４）（０．４２６ｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）、カルボン酸１１３（０．５９７ｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）、及び（ｉ−Ｐｒ）２ＮＥｔ（０．３５ｍＬ、２．００ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。２．５時間、反応混合物を撹拌し、ロータリー蒸発によって濃縮した。０〜１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２勾配を用いて、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離した。生成物を含有するフラクションを混合し、濃縮し、０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で再度、フラッシュクロマトグラフィーにかけ、白色固体として０．７２１ｇ（７５％）のマイタンシノイド１２５が生成された。
Ｃ７５Ｈ９５ＣｌＮ８Ｏ１７［Ｍ＋Ｎａ］＋のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１４５８．７；実測値：１４８１．８．
マイタンシノール３−（２Ｓ，１５Ｒ）−１９−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−１５−（２−（カルボキシ）エチル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（１２６）
ＣＨ２Ｃｌ２（０．３７８ｍＬ、０．３７８ｍｍｏｌ）中のＳｎＣｌ４の１．０Ｍ溶液を滴下添加しながら、０℃で、１．０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中のマイタンシノイド１２５（１１０．５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。黄色沈殿物が形成された。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって、さらにワークアップなしで、反応混合物を精製し、白色フィルムとして６５．６ｍｇ（６２％）のマイタンシノイド１２６が得られた。
Ｃ７３Ｈ９１ＣｌＮ８Ｏ１８［Ｍ−Ｈ］−のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１４０１．６；実測値：１４０１．１．
マイタンシノール３−（２Ｓ，１５Ｒ）−１９−（２−（２−（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−１５−（２−（カルボキシ）エチル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（１０１）
マイタンシノイド１２６（６４．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加しながら、室温で、４５３．６ｍＬのＤＭＡ中のピペリジン（９０．７μＬ、０．９２ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。２０分間、反応混合物を撹拌した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって、さらにワークアップなしで、反応混合物を精製し、白色フィルムとして４９．１ｍｇ（９０％）のリンカー１０１が得られた。
Ｃ５８Ｈ８２ＣｌＮ８Ｏ１６［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１１８１．６実測値１１８１．３．
Figure 2017520533
（２Ｓ，１５Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−１５−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンアミド）−２，３−ジメチル−１，４，１４−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３−ジアザヘプタデカン−１７−オイック酸（１０２）
０．７ｍＬ（７．０９ｍｍｏｌ）のピペリジンを添加しながら、室温で、３．０ｍＬのＤＭＦ中の０．４９２ｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の化合物１２７の溶液を撹拌した。１時間、反応混合物を撹拌し、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、薄黄色固体として０．３３５ｇ（８１％）のリンカー１０２が得られた。
Ｃ５７Ｈ７９ＣｌＮ８Ｏ１６［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１１６７．５；実測値：１１６７．０；［Ｍ＋Ｎａ］＋：１１８９．５，実測値１１８９．０．
Figure 2017520533
（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル（２Ｓ，１５Ｓ）−１９−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−２，３−ジメチル−４，１４，１７−トリオキソ−１５−（４−（ホスホノオキシ）ベンジル）−７，１０−ジオキサ−３，１３，１６−トリアザノナデカノエート（１０３）
０．１４１ｇ（０．１ｍｍｏｌ）の化合物１２８を添加しながら、室温で、０．８ｍＬのＤＭＡ中の０．２ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）のピペリジンの溶液を撹拌した。２０分間、反応混合物を撹拌し、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色フィルムとして０．１０８ｇ（９０％）のリンカー１０３が得られた。
Ｃ６２Ｈ８４ＣｌＮ８Ｏ１８Ｐ［Ｍ−Ｈ］−のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１２９３．５；実測値：１２９３．１．
Figure 2017520533
（＋／−）−３−（（２Ｓ，３Ｒ）−４−（（２−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンアミド）エチル）アミノ）−２，３−ビス（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−４−オキソブタンアミド）プロパンオイック酸（１３０）の合成
室温で、１時間、５ｍＬのＤＭＡ中の０．２０６ｇ（０．３ｍｍｏｌ）のインドール１１２、０．２３６ｇ（０．５ｍｍｏｌ）の化合物１２９、及び０．１３４ｇ（１．６ｍｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３の溶液を撹拌した。反応混合物を水に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントした。ロータリー蒸発によって溶媒を除去し、０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ−１８上で残基を精製し、白色固体として０．２３ｇのカルボン酸１３０（７６％）が得られた。
Ｃ５０Ｈ７２Ｎ６Ｏ９Ｓｉ２［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：９５７．５；実測値：９５７．０；［Ｍ＋Ｎａ］＋：９７９．５，実測値９７９．５．
Figure 2017520533
（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル（２Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ）−１８−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−９，１０−ビス（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２，３−ジメチル−４，８，１１，１６−テトラオキソ−３，７，１２，１５−テトラアザオクタデカノエート（１３１）の合成
室温で、３時間、０．５ｍＬのＤＭＡ中の０．１２９ｇ（０．１ｍｍｏｌ）のカルボン酸１３０及び０．０９６ｇ（０．１ｍｍｏｌ）のＮ−デアセチルメイタンシン１２４、０．０５２ｇ（０．１ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵ、及び０．０３６ｍＬ（０．３ｍｍｏｌ）のヒューニッヒ塩基の溶液を撹拌した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離した。分離物の分析では、＜９０％の純度を示した。シリカゲル上で０〜１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２勾配を用いて、材料を第２のフラッシュクロマトグラフィーにかけ、白色固体として０．１０３ｇ（４８％）の化合物１３１が得られた。
Ｃ８２Ｈ１１４ＣｌＮ９Ｏ１７Ｓｉ２［Ｍ＋Ｎａ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１６１０．８，実測値１６１０．７．
Figure 2017520533
（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル（２Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ）−１８−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）−９，１０−ジヒドロキシ−２，３−ジメチル−４，８，１１，１６−テトラオキソ−３，７，１２，１５−テトラアザオクタデカノエート（１０６）
ＴＨＦ中の０．２２５ｍＬ（０．２３ｍｍｏｌ）の１．０ＭのＴＢＡＦ溶液を添加しながら、０℃で、０．６ｍＬのＴＨＦ中の０．１０２ｇ（０．０６ｍｍｏｌ）の化合物１３１の溶液を撹拌した。３５分後、溶離液として０〜７５％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって反応混合物を分離し、オフホワイトの固体として０．０４５ｇ（６０％）のリンカー１０６が得られた。
Ｃ５５Ｈ７６ＣｌＮ９Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１１３８．５；実測値：１１３８．３；［Ｍ＋Ｎａ］＋：１１６０．５，実測値１１６０．５．
Figure 2017520533
（Ｓ）−５−（（４−（（（Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）アミノ）−４−オキソブチル）アミノ）−４−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンアミド）−５−オキソペンタンオイック酸（１０５）
０．０４９ｇ（０．０４ｍｍｏｌ）の化合物１３２を添加しながら、室温で、０．４ｍＬのＤＭＡ中の０．１ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）のピペリジンの溶液を撹拌した。２０分間、反応混合物を撹拌し、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色フィルムとして０．０４０ｇ（９９％）のリンカー１０５が得られた。
Ｃ５５Ｈ７５ＣｌＮ８Ｏ１４［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１１０７．５；実測値：１１０７．３；［Ｍ＋Ｎａ］＋：１１２９．５，実測値１１２９．４．
Figure 2017520533
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−エチル２−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１，２−ジカルボキシレート（１３４）
マグネチックスターラーを備えた２Ｌの３つ首フラスコ中に、（３−メチル−ピリジン−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物１３３；６０ｇ、２８８ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＴＨＦ（９００ｍＬ）を入れ、窒素雰囲気下で維持した。−７８℃以下の温度に維持しながら、ｔ−ＢｕＬｉ（６００ｍＬ、１．３Ｍ、７７７ｍｍｏｌ、２．７当量）を滴下添加した。１時間、−４５℃で、撹拌後、乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中のジエチルオキサレート（１２６．５ｇ、８６５ｍｍｏｌ、３．０当量）の−８０℃の温度で維持した溶液に、このために入手したリチウム化誘導体を添加した。２時間、反応培地を−５０℃に温め、その後、室温に温め、一晩、撹拌した。水を添加し、混合物をＥＡで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、シリカ（ＰＥ／ＥＡ＝４０：１−２：１）上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、黄色油として、化合物１３４（１９．３ｇ、２２％）が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．２５−４．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３５ （ｄ， Ｊ ＝ １７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１４ （ｄ， Ｊ ＝ １７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４９ （ｓ， ９Ｈ）， １．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）．
エチル１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（１３５）
５０℃で、２時間、ＨＣｌ（５０ｍＬ、６Ｎ）の溶液中の化合物１３４（９．７ｇ、３１．４ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を撹拌し、室温で、一晩、撹拌した。固体Ｋ２ＣＯ３でｐＨ１３に反応混合物を調節し、ＥＡで抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させ、化合物１３５（６．０ｇ、１００％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １１．１２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｓ， １Ｈ）， ７．１８−７．１５ （ｍ， １Ｈ）， ４．４６ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４４ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）．
（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル）メタノール（１３６）
０℃で、Ｎ２下で、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のエステル１３５（９ｇ、４７．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液にＬｉＡＩＨ４（３．０ｇ、７８．９ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと添加し、１時間、室温に温めた。懸濁液を水でクエンチし、濾過によって白色沈殿物を除去した。濾液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。シリカ（ＰＥ／ＥＡ＝９：１）上でフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製し、わずかに黄色の固体として、化合物１３６（６．５ｇ、９３％）が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．４７ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．４， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２７ （ｓ， １Ｈ）， ５．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）．
２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１３７）
オーブン乾燥フラスコに、化合物１３６（７．５ｇ、５０．６ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＴＢＳＣｌ（８．４ｇ、５５．７ｍｍｏｌ、１．１当量）、及びイミダゾール（１０．３ｇ、１５２．０ｍｍｏｌ、３．０当量）を装填し、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中に懸濁させた。１６時間後、オレンジ色残基に反応混合物を濃縮した。粗混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）中に溶かし、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、結晶質固体（化合物１３７；１１．８ｇ、８９％）が得られ、さらに精製しないで用いた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．５６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．２５ （ｓ， １Ｈ）， ７．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２７ （ｓ， １Ｈ）， ４．９０ （ｓ， ２Ｈ）， ０．９３ （ｓ， ９Ｈ）， ０．１１ （ｓ， ６Ｈ）．
メチル３−（２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパノエート（１３８）
アセトニトリル（１２０ｍＬ）中のアザインドール１３７（１１．５ｇ、４３．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液にメチルアクリレート（１８．９ｇ、２２０ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加し、続いて、１、８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ、３３５μＬ、２２ｍｍｏｌ、０．５０当量）を添加し、１８時間、得られた混合物を還流させた。溶液を冷却し、オレンジ色油に濃縮し、シリカ（ＰＥ／ＥＡ＝９：１）上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、化合物１３８（１５ｇ、９８％）として無色油が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３３ （ｓ， １Ｈ）， ４．８７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．９８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ０．９１ （ｓ， ９Ｈ）， ０．１０ （ｓ， ６Ｈ）．
メチル３−（２−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパノエート（１３９）
０℃で、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の化合物１３８（１５ｇ、４３．１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ、４５．６ｍＬ、４５．６ｍｍｏｌ、１．０６当量）を添加した。１５分後、反応混合物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水性ＮａＨＣＯ３で洗浄し、油残留物に濃縮し、シリカ（ＰＥ／ＥＡ＝４：１）上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体（８ｇ、８０％）として化合物１３９が生成された。
ＬＣ−ＭＳ：２３５（Ｍ＋１）．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．８，１．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．８， ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４０ （ｓ， １Ｈ）， ４．８５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．０３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）．
メチル３−（２−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパノエート（１４０）
２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１．１７１ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の化合物１３９の溶液を滴下添加しながら、室温で、４０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の２．３３５ｇ（５．５ｍｍｏｌ）のデス−マーチンペルヨージナン及び１．２１ｍＬ（１５．０ｍｍｏｌ）のピリジンの溶液を撹拌した。１時間、反応混合物を撹拌し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３の２０ｍＬの１０％水溶液及びＮａＨＣＯ３の２０ｍＬの１．２Ｍ水溶液の混合物でクエンチした。層を分離し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。ロータリー蒸発によって溶媒を除去し、溶離液として３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンを用いて、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、薄黄色の油として１．００５ｇ（８７％）の化合物１４０が得られた。
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル２−（（１−（３−メトキシ−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル）メチル）−１，２−ジメチルヒドラジン−１−カルボキシレート（１４１）
室温で、３．０ｍＬのＤＣＥ中の０．１２９ｇ（０．５６ｍｍｏｌ）のアルデヒド１４０の溶液に０．２２８ｇ（０．８１ｍｍｏｌ）のヒドラジン１２１を添加し、続いて、０．１２９ｇ（０．６０ｍｍｏｌ）のＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈを少量ずつ添加した。２４時間、反応混合物を撹拌し、１０ｍＬのＨ２Ｏの添加によりクエンチした。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、０．１９７ｇ（７３％）の化合物１４１が得られた。
３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパンオイック酸（１４２）
ＬｉＯＨの０．５１ｍＬの１．０Ｍ水溶液を滴下添加しながら、０℃で、１．５４ｍＬのＴＨＦ中の２６９．７ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）の化合物１４１の溶液を撹拌した。１時間、反応混合物を撹拌し、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接クロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色フィルムとして１２４．５ｍｇ（５０％）の化合物１４２が得られた。
Figure 2017520533
１８−（ｔｅｒｔ−ブチル）１−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｒ，３３Ｒ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）（２Ｓ，１５Ｓ）−１５−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパンアミド）−２，３−ジメチル−４，１４−ジオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３−ジアザオクタデカンジオエート（１４４）
０．２ｍＬの無水ＤＭＦ中の６４．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）の化合物１４３の溶液を滴下添加しながら、室温で、０．３ｍＬの無水ＤＭＦ中の６９．４ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）のＰｙＡＯＰ及び０．６５ｍＬ（３．７ｍｍｏｌ）のジイソプロピルエチルアミンの溶液を撹拌した。２時間後、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２０勾配を用いて、Ｃ１８上で直接クロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色フィルムとして１３３．２ｍｇ（７４％）の化合物１４４が得られた。
Figure 2017520533
（２Ｓ，１５Ｓ）−１５−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパンアミド）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，１４−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３−ジアザオクタデカン−１８−オイック酸（１４６）
ＣＨ２Ｃｌ２中のＳｎＣｌ４の０．４５６ｍＬ（０．４６ｍｍｏｌ）の１．０Ｍ溶液を滴下添加しながら、０．１３３ｇ（０．０９ｍｍｏｌ）の化合物１４５の溶液を１．０ｍＬの無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、０℃で、撹拌した。黄色沈殿物が形成された。Ｎ２下で、１時間、反応混合物を撹拌した。溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接クロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色固体として０．１１２ｇ（８７％）の化合物１４６が得られた。
Figure 2017520533
（２Ｓ，１５Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−１５−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−１−イル）プロパンアミド）−２，３−ジメチル−１，４，１４−トリオキソ−７，１０−ジオキサ−３，１３−ジアザオクタデカン−１８−オイック酸（１０４）
０．０４８ｇ（０．０４ｍｍｏｌ）の化合物１４７を添加しながら、室温で、０．４ｍＬのＤＭＡ中の０．１ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）のピペリジンの溶液を撹拌した。２０分間、反応混合物を撹拌し、溶離液として０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色フィルムとして０．０３４ｇ（８５％）のリンカー１０４が得られた。
Ｃ５７Ｈ８０ＣｌＮ９Ｏ１６［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１１８２．６；実測値：１１８２．５；［Ｍ＋Ｎａ］＋：１２０４．５，実測値１２０４．５．
Figure 2017520533
２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）エタンアミン（１４９）
乾燥ＤＣＭ（１Ｌ）中の２−アミノエタノール（５０ｇ、０．８２モル）、トリエチルアミン（１２４ｇ、１．２３モル）、及びＤＭＡＰ（２ｇ）の撹拌溶液にＴＢＳＣｌ（１３５ｇ、０．９０１６モル）を添加した。一晩、室温で、反応混合物を撹拌し、水性ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。混合物をＤＣＭ（３ｘ）で抽出した。混合有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。減圧下で、溶媒を除去し残留物が得られ、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、３０．５ｇ（２２％）の化合物１４９が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ３．６ （ｔ， Ｊ＝５．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７４ （ｔ， Ｊ＝５．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３６ （ｂｒｓ， １Ｈ）， ０．８７ （ｓ， ９Ｈ）， ０．０４ （ｓ， ６Ｈ）．
ベンジル３−（（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（１５１）
０℃で、メタノール（２５ｍＬ）及びＴＨＦ（２５ｍＬ）中のリチウムクロリド（２０ｍｇ）及び２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）エタンアミン（１．０ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１０分間以上、アクリレート１５０（１．０ｇ、６．２８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を次第に室温に温め、室温で、一晩、撹拌した。減圧下で、反応混合物を濃縮し、乾燥状態にし、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）、及びブライン（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、乾燥状態にした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｐｅｔ．エーテル：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜０：１）によって残留物を精製し、化合物１５１（０．７ｇ、３７％）が得られた。
ベンジル３−（２−ブロモ−Ｎ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエート（１５３）
窒素下で、０℃で、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物１５１（０．７ｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１．２当量、０．２５ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）及びブロミド１５２（１．２当量、０．５ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で、１時間、撹拌後、得られた混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過した。ＥｔＯＡｃで固体を洗浄し、濾液を濃縮し、ｉｎ ｖａｃｕｏで乾燥させ、粗ブロモアセチルアミド１５３が生成され、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜５：１）によって精製し、純粋化合物１５３（０．３ｇ、３１％）が得られた。
ＭＳ＋：４５９［Ｍ＋Ｈ］＋．
ベンジル１０−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）−２，２，３，３−テトラメチル−９−オキソ−４−オキサ−７，１０−ジアザ−３−シラトリデカン−１３−オエート（１５４）
０℃で、窒素下で、ＴＨＦ（３５０ｍＬ）中の化合物１５３（３６．８ｇ、８０．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１６．３ｇ、１６０．７ｍｍｏｌ、２当量）及び２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）エタンアミン（２８．１ｇ、１６０．７ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。室温で、一晩、撹拌後、得られた混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、濾過した。ＥｔＯＡｃで固体を洗浄し、濾液を濃縮し、ｉｎ ｖａｃｕｏで乾燥させ、粗アミンが生成され、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｐｅｔ．エーテル：ＥｔＯＡｃ＝３：１）によって精製し、化合物１５４（２７ｇ、６０％）が得られた。
ベンジル７−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）グリシル）−１０−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）−２，２，３，３−テトラメチル−９−オキソ−４−オキサ−７，１０−ジアザ−３−シラトリデカン−１３−オエート（１５６）
０℃で、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＣｂｚ−グリシン（２．５ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（２．５ｇ、１３ｍｍｏｌ）ＨＯＢＴ（１．７５ｇ、１３ｍｍｏｌ）の溶液に、ｉＰｒ２ＮＥｔ（４．２ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で、３０分間、混合物を撹拌した。溶液にアミン１５４（６ｇ、１１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。室温で、一晩、混合物を撹拌し、蒸発させ、乾燥状態にし、ＤＣＭ中に懸濁させた。混合物を濾過し、濾液を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製し、化合物１５６（３．０１ｇ、３８％）が得られた。
１０−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）−７−グリシル−２，２，３，３−テトラメチル−９−オキソ−４−オキサ−７，１０−ジアザ−３−シラトリデカン−１３−オイック酸（１５７）
Ｈ２（５０ｐｓｉ）下で、室温で、一晩、Ｐａｒｒシェーカー中で、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中の化合物１５６（１．９ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（５００ｍｇ）の混合物を撹拌した。Ｃｅｌｉｔｅのパッドを介して混合物を濾過し、濃縮し、化合物１５７（７３０ｍｇ、５５％）が得られた。
ＬＣ−ＭＳ：５２０（Ｍ＋１）．
Figure 2017520533
７−（（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）グリシル）−１０−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）−２，２，３，３−テトラメチル−９−オキソ−４−オキサ−７，１０−ジアザ−３−シラトリデカン−１３−オイック酸（１５８）の合成
０．１２０ｇ（１．４ｍｍｏｌ）のＮａＨＣＯ３を添加しながら、室温で、５．０ｍＬのＤＭＡ中の０．２２０ｇ（０．３ｍｍｏｌ）のインドール１１２及び０．２６４ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のペプトイド１５７の溶液を撹拌した。６時間後、反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントした。ロータリー蒸発によって溶媒を除去した。０〜１００％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上でフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色固体として０．１８４ｇ（５５％）のカルボン酸１５８が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄｄ（ａｐｐ． ｔ）， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２２ （ｍ， １Ｈ）， ７．１０ （ｍ， １Ｈ）， ４．７２−４．３０（ｍ， ５Ｈ）， ４．２９−４．０８ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９５−３．６６ （ｍ， ７Ｈ）， ３．６２−３．４１ （ｍ， ５Ｈ）， ２．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６３ （ｍ， ６Ｈ）， ２．１１（ｍ， １Ｈ）， ０．９０ （ｍ， １８Ｈ）， ０．６０ （ｍ， １２Ｈ）．
Figure 2017520533
（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル（Ｓ）−７−（（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）グリシル）−１０−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）−２，２，３，３，１４，１５−ヘキサメチル−９，１３−ジオキソ−４−オキサ−７，１０，１４−トリアザ−３−シラヘキサデカン−１６−オエート（１５９）の合成
室温で、３時間、０．８ｍＬのＤＭＡ中の０．１８０ｇ（０．２ｍｍｏｌ）カルボン酸１５８及び０．１２３ｇのＮ−デアシルメイタンシン１２４（０．２ｍｍｏｌ）、０．０７２ｇ（０．２ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵ、及び０．０５１ｍＬ（０．４ｍｍｏｌ）のヒューニッヒ塩基の溶液を撹拌した。０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接フラッシュクロマトグラフィーによって生成物を分離し、白色固体として０．２３５ｇ（８０％）の化合物１５９が得られた。
Ｃ８４Ｈ１１８ＣｌＮ９Ｏ１７Ｓｉ２［Ｍ＋Ｎａ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１６３８．８，実測値１６３８．８．
Figure 2017520533
（１４Ｓ，１６Ｓ，３２Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イルＮ−（３−（２−（２−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド）プロパノイル）−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニネート（１０７）の合成
１０分間、０．５ｍＬのＴＨＦ中の０．１１４ｇ（０．０７ｍｍｏｌ）の化合物１５９の溶液を、窒素で分散させた。ＴＨＦ（０．３０ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）中の１．０Ｍ ＴＢＡＦの溶液を添加し、１時間、反応混合物を撹拌した。０〜１００％ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ勾配を用いて、Ｃ１８上で直接クロマトグラフィーによって生成物を分離し、オフホワイトの固体として、０．０４１７ｇ（５１％）のリンカー１０７が得られた。
Ｃ５７Ｈ８０ＣｌＮ９Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｚ）計算値：１１６６．６；実測値：１１６６．４；［Ｍ＋Ｎａ］＋：１１８８．５，実測値１１８８．４．
実施例３
以下に示したスキーム２５に従って、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）基を含有するリンカーを合成した。
Figure 2017520533
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（２００）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する１００ｍＬ丸底フラスコに、ピペリジン−４−オン塩酸塩一水和物（１．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃクロリド（２．５８ｇ、１０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３．１８ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ジオキサン（２０ｍＬ）、及び水（２ｍＬ）を添加した。室温で、１時間、反応混合物を撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（１ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で、濃縮した。ｉｎ ｖａｃｕｏで、得られた物質を乾燥させ、白色固体（３．０５ｇ、９５％収率）として化合物２００が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ７．７８ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．６）， ７．５９ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ７．４３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ７．３７ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ４．６０ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０）， ４．２８ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０）， ３．７２ （ｂｒ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｂｒ， ２Ｈ）， ２．３９ （ｂｒ， ２Ｈ）， ２．２８ （ｂｒ， ２Ｈ）．
Ｃ２０Ｈ２０ＮＯ３のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３２２．４；実測値３２２．２．
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシレート（２０１）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、ピペリジノン２００（６４２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ２−ＣＯ２ｔ−Ｂｕ（５６０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ（活性化粉末、５００ｍｇ）、及び１，２−ジクロロエタン（５ｍＬ）を添加した。１時間、室温で、混合物を撹拌した。反応混合物に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８４５ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を添加した。５日間、室温で、混合物を撹拌した。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（１ｘ５０ｍＬ）、及びブライン（１ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、油として化合物２０１が生成され、さらに精製しないで持ち越された。
１３−（１−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−オイック酸（２０２）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、前のステップからのＮ−Ｆｍｏｃ−ピペリジン−４−アミノ−ＰＥＧ２−ＣＯ２ｔ−Ｂｕ（２０１）、無水コハク酸（２７０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）、及びジクロロメタン（５ｍＬ）を添加した。１８時間、室温で、混合物を撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ及び飽和ＮａＨＣＯ３に分割した。水性層をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。ＨＣｌ（１Ｍ）で、ｐＨ約３まで水性層を酸性にした。水性層をＤＣＭ（３ｘ）で抽出した。混合有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で、濃縮した。反応混合物をＣ１８フラッシュクロマトグラフィー（０．１％酢酸を含む溶離液１０〜１００％ＭｅＣＮ／水）によって精製した。減圧下で、生成物を含有するフラクションを濃縮し、その後、トルエン（３ｘ５０ｍＬ）と共沸し、残留酢酸を除去し、白色固体として、５３４ｍｇ（４２％、２つのステップ）の化合物２０２が得られた。
１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．９６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．８９ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ７．６３ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ７．４２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ７．３４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２）， ４．２５−４．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７０−４．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５９ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０）， ３．３９ （ｍ， ５Ｈ）， ３．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２１ （ｂｒ， １Ｈ）， ２．７９ （ｂｒ， ２Ｈ）， ２．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４２ （ｑ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ６．０）， １．４９ （ｂｒ， ３Ｈ）， １．３７ （ｓ， ９Ｈ）．
Ｃ３５Ｈ４７Ｎ２Ｏ９のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６３９．３；実測値６３９．２．
（２Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−８−（ピペリジン−４−イル）−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−オイック酸（２０３）の合成
２ｍＬのＤＭＦ中のエステル２０２（２２７ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１７４μＬ、１．０６５ｍｍｏｌ）、Ｎ−デアセチルメイタンシン１２４（２３１ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｙＡＯＰ（１８５ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）を添加した。３０分間、溶液を撹拌した。反応混合物にピペリジン（０．５ｍＬ）を添加し、さらに２０分間、撹拌した。０〜１００％アセトニトリル：水の勾配を用いて、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーによって粗反応混合物を精製し、２０３．２ｍｇ（５５％、２つのステップ）の化合物２０３が得られた。
１７−（ｔｅｒｔ−ブチル）１−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−４，７−ジオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカンジオエート（２０４）の合成
３０分間、１ｍＬのＤＭＦ中のピペリジン２０３（２０３．２ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）、エステル５（１２６．５ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（７７μＬ、０．５８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＡＴ（２６．４ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌した。０〜１００％アセトニトリル：０．１％ギ酸を含む水の勾配を用いて、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーによって粗反応物を精製し、２８０．５ｍｇ（９７％収率）の化合物２０４が得られた。
Ｃ８１Ｈ１０６ＣｌＮ８Ｏ１８のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値１５１３．７；実測値１５１４．０．
（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−オイック酸（２０５）の合成
５００μＬ無水ＤＣＭ中の化合物２０４（１０８ｍｇ、０．０７１４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ中の３５７μＬの１Ｍの溶液ＳｎＣｌ４を添加した。１時間、異質混合物を撹拌し、その後、０〜１００％アセトニトリル：０．１％ギ酸を含む水の勾配を用いて、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーによって精製し、７８．４ｍｇ（７５％収率）の化合物２０５が得られた。
Ｃ７７Ｈ９６ＣｌＮ８Ｏ１８のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｈ］−計算値１４５５．７；実測値１４５５．９．
実施例４
以下に示したスキーム２６に従って、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）基を含有するリンカーを合成した。
Figure 2017520533
ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（２１０）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する１００ｍＬ丸底フラスコに、ピペリジン−４−オン塩酸塩水和物（１．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（２．３９ｇ、１１ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１．２２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）、ジオキサン（１０ｍＬ）、及び水（１ｍＬ）を添加した。室温で、１時間、反応混合物を撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。ブラインで混合した有機層を洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濾過および濃縮した。ｉｎ ｖａｃｕｏで、得られた物質を乾燥させ、白色固体として１．７４ｇ（８７％）の化合物２１０が生成された。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ３．７３ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ６．０）， ２．４６ （ｔ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ６．０）， １．５１ （ｓ， ９Ｈ）．
Ｃ１０Ｈ１８ＮＯ３のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値２００．３；実測値２００．２．
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシレート（２１１）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（３９９ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ２−ＣＯＯｔ−Ｂｕ（５５０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ（活性化粉末、２００ｍｇ）、及び１，２−ジクロロエタン（５ｍＬ）を添加した。１時間、室温で、混合物を撹拌した。反応混合物に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８４５ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を添加した。３日間、室温で、混合物を撹拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ及び飽和水性ＮａＨＣＯ３に分割した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、粘性油として８５０ｍｇの化合物２１１が得られた。
Ｃ２１Ｈ４１Ｎ２Ｏ６のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４１７．３；実測値４１７．２．
１３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−オイック酸（２１２）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（２−（２−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）アミノ）ピペリジン−１−カルボキシレート２１１（２２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（５５ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、及びジクロロメタン（３ｍＬ）を添加した。２４時間、室温で、混合物を撹拌した。フラッシュクロマトグラフィー（溶離液５０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって、反応混合物を部分的に精製し、透明油として１１７ｍｇの化合物２１２が生成され、さらに特性付けしないで持ち越された。
Ｃ２５Ｈ４５Ｎ２Ｏ９のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５１７．６；実測値５１７．５．
１７−（ｔｅｒｔ−ブチル）１−（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）（２Ｓ）−８−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−４，７−ジオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカンジオエート（２１３）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、１３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２，２−ジメチル−４，１４−ジオキソ−３，７，１０−トリオキサ−１３−アザヘプタデカン−１７−オイック酸２１２（５５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−デアシルメイタンシン１２４（６５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１ｍＬ）、及びジクロロメタン（０．５ｍＬ）を添加した。８時間、室温で、混合物を撹拌した。Ｃ１８フラッシュクロマトグラフィー（溶離液５〜１００％ＭｅＣＮ／水）によって、反応混合物を直接精製し、白色フィルムとして１８ｍｇ（１６％）の化合物２１３が得られた。
Ｃ５７Ｈ８７ＣｌＮ５Ｏ１７のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値１１４８．６；実測値１１４８．７．
（２Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−８−（ピペリジン−４−イル）−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−オイック酸（２１４）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、マイタンシノイド２１３（３１ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（１ｍＬ）を添加した。溶液を０℃に冷却し、スズ（ＩＶ）テトラクロリド（ジクロロメタン中の１．０Ｍ溶液、０．３ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。１時間、０℃で、反応混合物を撹拌した。Ｃ１８フラッシュクロマトグラフィー（溶離液５〜１００％ＭｅＣＮ／水）によって、反応混合物を直接精製し、白色固体（１６ｍｇ、６０％収率）として１６ｍｇ（６０％）の化合物２１４が生成された。
Ｃ４８Ｈ７１ＣｌＮ５Ｏ１５のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値９９２．５；実測値９９２．６．
（２Ｓ）−８−（１−（３−（２−（（２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−オイック酸（２１５）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、マイタンシノイド２１４（１６ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル１，２−ジメチル−２−（（１−（３−オキソ−３−（ペルフルオロフェノキシ）プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ヒドラジン−１−カルボキシレート（５）（１３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（８μＬ、０．０５ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１ｍＬ）を添加した。１８時間、室温で溶液を撹拌した。Ｃ１８フラッシュクロマトグラフィー（溶離液５〜１００％ＭｅＣＮ／水）によって、反応混合物を直接精製し、白色固体として１８ｍｇ（７７％）の化合物２１５が生成された。
Ｃ７７Ｈ９８ＣｌＮ８Ｏ１８のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値１４５７．７；実測値１４５７．９．
（２Ｓ）−１−（（（１４Ｓ，１６Ｓ，３３Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，１０Ｅ，１２Ｅ，１４Ｒ）−８６−クロロ−１４−ヒドロキシ−８５，１４−ジメトキシ−３３，２，７，１０−テトラメチル−１２，６−ジオキソ−７−アザ−１（６，４）−オキサジンアナ−３（２，３）−オキシラナ−８（１，３）−ベンゼナシクロテトラデカファン−１０，１２−ジエン−４−イル）オキシ）−８−（１−（３−（２−（（１，２−ジメチルヒドラジニル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−４−イル）−２，３−ジメチル−１，４，７−トリオキソ−１１，１４−ジオキサ−３，８−ジアザヘプタデカン−１７−オイック酸（２１６）の合成
マグネチックスターラーバーを含有する乾燥させたシンチレーションバイアルに、マイタンシノイド２１５（１８ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）、ピペリジン（２０μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１ｍＬ）を添加した。２０分間、室温で溶液を撹拌した。Ｃ１８フラッシュクロマトグラフィー（溶離液１〜６０％ＭｅＣＮ／水）によって反応混合物を直接精製し、白色固体として、１５ｍｇ（９８％）の化合物２１６（本明細書では、ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンまたはＨＩＰＳ−４−アミノ−ピペリジン−メイタンシンとも称される）が生成された。
Ｃ６２Ｈ８８ＣｌＮ８Ｏ１６のＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値１２３５．６；実測値１２３６．０．
実施例５
バイオコンジュゲーション、精製、及びＨＰＬＣ分析
方法：
７２時間、３７℃で、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．８５％ＤＭＡを含有する５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ５．５中で、Ｃ−末端アルデヒド標識αＨＥＲ２抗体（１５ｍｇ／ｍＬ）をＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン（実施例４を参照）（薬剤と抗体が等量の８モル）に共役させた。移動相Ａ：１．０Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、及び移動相Ｂ：２５％イソプロパノール、１８．７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０で、分取スケール疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ １７−５１９５−０１）を用いて、非共役抗体を除去した。非共役物質を溶離させるために３３％Ｂの無勾配を用い、続いて、単共役及び二共役種を溶離させるために４１〜９５％Ｂの直線勾配を用いた。最終生成物のＤＡＲを測定するために、移動相Ａ：１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０、及び移動相Ｂ：２５％イソプロパノール、１８．７５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０で、分析用ＨＩＣ（Ｔｏｓｏｈ＃１４９４７）によって、抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を検討した。凝集を測定するために、３００ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ６．８の移動相で、分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ；Ｔｏｓｏｈ＃０８５４１）を用いて、試料を分析した。
結果：
重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）にアルデヒドタグを含有するように修飾されたαＨＥＲ２抗体を、前記に記載したとおり、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカーに結合されたメイタンシンペイロードに共役させた。完了時に、分取ＨＩＣによって非共役抗体を除去し、タンジェント流ろ過によってバッファー交換中に残りの遊離型薬剤を除去した。これらの反応は、収率が高く、≧８４％共役有効性及び＞５０％総収率であった。得られたＡＤＣの薬物抗体比（ＤＡＲ）が、１．６〜１．９であり、モノマーが優位であった。図１８〜２１は、ＨＩＣ及び逆相ＰＬＲＰクロマトグラフィーによって測定したとおり、粗反応物及び精製したＡＤＣの例からのＤＡＲを示し、ＳＥＣによって測定したとおり、モノマー結合性を示す。
図１８は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の例の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）分析のグラフを示す。粗生成物薬物抗体比（ＤＡＲ）を測定し、ＨＩＣによって１．６４であった。
図１９は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の例の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）分析のグラフを示す。最終生成物薬物抗体比（ＤＡＲ）を測定し、ＨＩＣによって１．８６であった。
図２０は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の例のポリマー逆相（ＰＬＲＰ）クロマトグラフィー分析のグラフを示す。最終生成物薬物抗体比（ＤＡＲ）を測定し、ＰＬＲＰによって１．８４であった。
図２１は、ＨＩＰＳ−４ＡＰリンカー（実施例４を参照）に結合されたメイタンシンペイロードに共役された重鎖Ｃ−末端（ＣＴ）標識αＨＥＲ２抗体の例の分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析のグラフを示す。分析用ＳＥＣでは、最終生成物が、９８．５％モノマーを示した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性
方法：
４０μｇ／ｍＬで、ラット血しょうに、抗体−薬剤コンジュゲートを加えた。試料を採取し、使用するまで−８０℃で、保存した。指示された時間、５％ＣＯ２下で、３７℃で、アリコットを置き、その後、抗−メイタンシン及び抗−Ｆｃシグナルを評価するためにＥＬＩＳＡによって分析した。共役の参照開始値として新鮮解凍アリコットを用いた。アッセイ（２０〜４０ｎｇ／ｍＬ）のリニアレンジ内となるように、ブロッキングバッファー（カゼインバッファー、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で、試料を希釈した。時点間での比較が可能になるように１つのプレート上で、全分析対象物質をともに測定した。上部４列上に抗−ヒトＦａｂ−特異的抗体（抗−メイタンシンリードアウトのため）で被覆し、下部４列上に抗−ヒトＩｇＧ−特異的抗体（抗−Ｆｃリードアウトのため）で被覆したプレート上で、分析対象物質を捕捉した。その後、ペイロードを、抗−メイタンシン抗体（試験所内で生成され、確認された）で検出し、続いて、ＨＲＰ−共役二次抗体で検出した；全抗体を、直接共役された抗−ヒトＦｃ−特異的抗体で、検出した。Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ＥＬＩＳＡ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で、結合二次抗体を視覚化した。Ｈ２ＳＯ４で比色反応を停止させ、モレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを用いて、４５０ｎｍで、吸光度を測定した。Ｅｘｃｅｌでデータ分析を実施した。４連で、各試料を分析し、平均値を用いた。抗体共役の尺度として、抗−メイタンシンシグナルと抗−Ｆｃシグナルとの比を用いた。
結果：
ＣＴで、ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンに共役されたαＨＥＲ２ ＡＤＣの安定性を試験した。７日間に、血しょう中で、３７℃で、脱共役の証拠が観察されず、同じ条件下で１４日後に、ペイロードの最小（５％）の損失だけが観察された（図２２）。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
方法：
ＡＴＣＣからＨＥＲ２−陽性胃癌細胞株、ＮＣＩ−Ｎ８７を入手し、１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補ったＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ）中に維持した。平板培養前の２４時間、対数期成長を確実にするために細胞を通過させた。平板培養の日に、１０ＩＵペニシリン及び１０μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補った９０μＬ正常成長培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ）中の９６−ウェルプレート上に５０００細胞／ウェルを播種した。１０μＬの希釈した分析対象物質（ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン及びメイタンシンに共役されたαＨＥＲ２ ＡＤＣ）と、さまざまな濃度で、細胞を処理し、３７℃で、５％ＣＯ２の雰囲気中で、プレートをインキュベートした。６日後、１００μＬ／ウェルの細胞Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、モレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを用いて、発光を測定した。データ分析のためにＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いた。
結果：
αＨＥＲ２ ＣＴ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンが、遊離型メイタンシンと比べて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞に対してきわめて強力な活性を示した（図２３）。ＡＤＣ及び遊離型薬剤それぞれのＩＣ５０濃度が、０．０３２及び０．３５ｎＭであった。
直接ＥＬＩＳＡ ＨＥＲ２抗原結合
方法：
ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのヒトＨＥＲ２−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、一晩、４℃で、Ｍａｘｉｓｏｒｐ９６−ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）を被覆した。カゼインバッファー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で、プレートをブロックし、その後、２００ｎｇ／ｍＬで開始する１１−ステップ連続の２倍希釈液中で、αＨＥＲ２野生型抗体及びＡＤＣを培養した。室温で、２時間、振り混ぜながら、プレートをインキュベートした。ＰＢＳ ０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０中で洗浄後、ロバ抗−ヒトＦｃ−γ−特異的ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−共役二次抗体で、結合分析対象物質を検出した。Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ（Ｐｉｅｒｃｅ）で、シグナルを視覚化し、２ＮＨ２ＳＯ４でクエンチした。モレキュラーデバイスＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを用いて、４５０ｎｍで、吸光度を測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて、データを分析した。
結果：
図２４に示したとおり、アルデヒドタグ配置またはＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン共役の作用が、抗原結合上に観察されなかった。野生型及び４ＡＰ共役抗体それぞれのこれらのデータから計算されたＥＣ５０濃度は、６．０及び５．３ｎｇ／ｍＬであった。
異種移植試験
方法：
４．５ｘ１０６ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍細胞をオスＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの尾の付け根に接種した。腫瘍が平均２６９ｍｍ３に達したときに処置が開始され、その時、動物の静脈内にＣＴ−標識αＨＥＲ２ ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシン（３または６ｍｇ／ｋｇ）またはＣＴ−標識イソタイプ対照ＨＩＰＳ−４ＡＰ−メイタンシンコンジュゲート（６ｍｇ／ｋｇ）を投与した。４週間、１週間に１回、投与を進めた。１週間に２回、体重及び腫瘍サイズについて動物をモニターした。腫瘍が１５００ｍｍ３に達したときに、動物を安楽死させた。
結果：
処置の１８日後、αＨＥＲ２ ＡＤＣが投与された動物の全腫瘍が、薬剤に反応した（図２５）。６ｍｇ／ｋｇで投与された動物で、成長の最も大きな減少が、観察され、腫瘍成長抑制比が２５％（Ｔ／Ｃ）であった。イソタイプ対照ＡＤＣが投与された動物は、ビヒクルで処置された対照（９５％Ｔ／Ｃ比）とほぼ同じ腫瘍成長を示した。
特定の実施形態を参照して本発明を記載すると同時に、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、さまざまな変更を実施してよく、均等物を置き換えることができると当業者は理解しなければならない。また、特定の状況、材料、物質の組成物、工程、工程ステップ（単数及び複数）が、本発明の目的、趣旨及び範囲に適合するように多くの変更を実施してよい。かかる全変更は、本明細書に添付したクレームの範囲内であることを意図する。

Claims (29)

  1. 式（Ｉ）の少なくとも１つの修飾されたアミノ酸残基を含むコンジュゲートであって、
    Figure 2017520533
     式中、
    Ｑ１が、ＣまたはＮであり、Ｑ１がＮである場合には、Ｙ１は存在せず；
    Ｙ１が、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択され；
    Ｒ１が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択され；
    Ｒ２及びＲ３がそれぞれ、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３が、任意で、環状結合し、５または６員環ヘテロシクリルを形成し；
    Ｌが、−（Ｔ１−Ｚ１）ａ−（Ｔ２−Ｚ２）ｂ−（Ｔ３−Ｚ３）ｃ−（Ｔ４−Ｚ４）ｄ−を含むリンカーであり、式中、ａ、ｂ、ｃ及びｄがそれぞれ、独立して０または１であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄの合計が、１〜４であり；
    Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４がそれぞれ、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択され、式中、ＥＤＡが、エチレンジアミン部分であり、ＰＥＧが、ポリエチレングリコールまたは修飾ポリエチレングリコールであり、ＡＡが、アミノ酸残基であり、式中、ｗが、１〜２０の整数であり、ｎが、１〜３０の整数であり、ｐが、１〜２０の整数であり、ｈが、１〜１２の整数であり；
    Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４がそれぞれ、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から独立して選択され、式中、ｑが、１〜６の整数であり；
    各Ｒ１３が、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、及び置換アリールから独立して選択され；
    各Ｒ１５が、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから独立して選択され；
    Ｗ１が、マイタンシノイドであり；及び
    Ｗ２が、抗ＨＥＲ２抗体である、コンジュゲート。
  2. 式中、
    Ｔ１が、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル及び置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキルから選択され；
    Ｔ２、Ｔ３及びＴ４がそれぞれ、（ＥＤＡ）ｗ、（ＰＥＧ）ｎ、（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、置換（Ｃ１−Ｃ１２）アルキル、（ＡＡ）ｐ、−（ＣＲ１３ＯＨ）ｈ−、ピペリジン−４−アミノ（４ＡＰ）、アセタール基、ヒドラジン、及びエステルから独立して選択され；及び
    Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＺ４がそれぞれ、共有結合、−ＣＯ−、−ＮＲ１５−、−ＮＲ１５（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＲ１５（Ｃ６Ｈ４）−、−ＣＯＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ１５−、−ＮＲ１５ＳＯ２−及び−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−からなる群から独立して選択され；
    式中、
    （ＰＥＧ）ｎが、
    Figure 2017520533
     であり、ｎが、１〜３０の整数であり；
    ＥＤＡが、以下の構造：
    Figure 2017520533
     を有するエチレンジアミン部分であり、ｙが、１〜６の整数であり、ｒが、０または１であり；
    ピペリジン−４−アミノが、
    Figure 2017520533
     であり；及び
    Ｒ１２及びＲ１５がそれぞれ、水素、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分、アリール及び置換アリールから独立して選択され、式中、任意の２つの隣接Ｒ１２基が、環状結合して、ピペラジニル環を形成する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. Ｔ１，Ｔ２，Ｔ３，及びＴ４及びＺ１，Ｚ２，Ｚ３，及びＺ４が、下記表から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
    Figure 2017520533
    Figure 2017520533
  4. 式中、Ｌが、以下の構造の１つから選択され、
    Figure 2017520533
    Figure 2017520533
    Figure 2017520533
    式中、
    各ｆが、独立して、０または１〜１２の整数であり；
    各ｙが、独立して、０または１〜２０の整数であり；
    各ｎが、独立して、０または１〜３０の整数であり；
    各ｐが、独立して、０または１〜２０の整数であり；
    各ｈが、独立して、０または１〜１２の整数であり；
    各Ｒが、独立して水素、アルキル、置換アルキル、ポリエチレングリコール部分、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルであり；及び
    各Ｒ’が、独立して、Ｈ、アミノ酸の側鎖基、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルである、請求項１に記載のコンジュゲート。
  5. 式中、マイタンシノイドが、以下の式
    Figure 2017520533
     であり、
    Figure 2017520533
     が、マイタンシノイドとＬとの結合点を示す、請求項１に記載のコンジュゲート。
  6. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２のドメインＩ、ドメインＩＩ、ドメインＩＩＩ、またはドメインＩＶ内のエピトープを結合する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  7. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、アミノ酸５６１−６２５内または配列番号：／／のアミノ酸５２９−６２５内のエピトープを結合する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  8. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８である、請求項１に記載のコンジュゲート。
  9. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、式（ＩＩ）の配列を含み、
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    式中、
    ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基であり；
    Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり；
    Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸であり；
    Ｘ１が存在しても、存在しなくてもよく、存在する場合は、前記配列がコンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができ；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、独立して、任意のアミノ酸である、請求項１に記載のコンジュゲート。
  10. 前記配列が、Ｌ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲである、請求項９に記載のコンジュゲート。
  11. 式中、
    Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択され；
    Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択され；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される、請求項９に記載のコンジュゲート。
  12. 前記修飾されたアミノ酸残基が、前記抗ＨＥＲ２抗体の重鎖不変領域のＣ−末端に位置する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  13. 前記重鎖不変領域が、式（ＩＩ）の配列を含み、
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    式中、
    ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基であり；
    Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり；
    Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸であり；
    Ｘ１が存在しても、存在しなくてもよく、存在する場合は、前記配列がコンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができ；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、独立して、任意のアミノ酸であり、
    前記配列が、アミノ酸配列ＳＬＳＬＳＰＧへのＣ−末端である、請求項１２に記載のコンジュゲート。
  14. 前記重鎖不変領域が、配列ＳＰＧＳＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＳを含む、請求項１３に記載のコンジュゲート。
  15. 式中、
    Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択され；
    Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択され；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される、請求項１３に記載のコンジュゲート。
  16. 前記修飾されたアミノ酸残基が、前記抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖不変領域に位置する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  17. 前記軽鎖不変領域が、式（ＩＩ）の配列を含み、
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    式中、
    ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基であり；
    Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり；
    Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸であり；
    Ｘ１が存在しても、存在しなくてもよく、存在する場合は、前記配列がコンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができ；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、独立して、任意のアミノ酸であり、
    前記配列が、配列ＫＶＤＮＡＬへのＣ−末端である、及び／または、配列ＱＳＧＮＳＱへのＮ−末端である、請求項１６に記載のコンジュゲート。
  18. 前記軽鎖不変領域が、配列ＫＶＤＮＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＱＳＧＮＳＱを含む、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  19. 式中、
    Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択され；
    Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択され；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  20. 前記修飾されたアミノ酸残基が、前記抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ１領域に位置する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  21. 前記重鎖ＣＨ１領域が、式（ＩＩ）の配列を含み、
    Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２０Ｘ３Ｚ３０ （ＩＩ）
    式中、
    ＦＧｌｙ’が、式（Ｉ）の修飾アミノ酸残基であり；
    Ｚ２０が、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり；
    Ｚ３０が、塩基性アミノ酸または脂肪族アミノ酸であり；
    Ｘ１が存在しても、存在しなくてもよく、存在する場合、前記配列がコンジュゲートのＮ−末端にある場合、Ｘ１が存在するという条件で、任意のアミノ酸とすることができ；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、独立して、任意のアミノ酸であり、
    前記配列が、アミノ酸配列ＳＷＮＳＧＡへのＣ−末端であり、及び／または、アミノ酸配列ＧＶＨＴＦＰへのＮ−末端である、請求項２０に記載のコンジュゲート。
  22. 前記重鎖ＣＨ１領域が、配列ＳＷＮＳＧＡＬ（ＦＧｌｙ’）ＴＰＳＲＧＶＨＴＦＰを含む、請求項２１に記載のコンジュゲート。
  23. 式中、
    Ｚ３０が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、及びＰから選択され；
    Ｘ１が、Ｌ、Ｍ、Ｓ、及びＶから選択され；及び
    Ｘ２及びＸ３がそれぞれ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、及びＣから独立して選択される、請求項２１に記載のコンジュゲート。
  24. 前記修飾されたアミノ酸残基が、前記抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ２領域に位置する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  25. 前記修飾されたアミノ酸残基が、前記抗ＨＥＲ２抗体の重鎖ＣＨ３領域に位置する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  26. 請求項１から２５のいずれかに記載のコンジュゲートと、製剤的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
  27. 有効量の請求項１から２５のいずれかに記載のコンジュゲートを被験者に投与すること含む方法。
  28. 被験者の癌の治療方法であって、
    治療有効量の請求項１から２５のいずれかに記載のコンジュゲートを含む医薬組成物を被験者に投与することを含み、
    前記投与が、前記被験者の癌を治療するのに効果的である、方法。
  29. 被験者の標的部位に薬剤を送達する方法であって、
    請求項１から２５のいずれかに記載のコンジュゲートを含む医薬組成物を被験者に投与することを含み、
    前記投与が、前記被験者の前記標的部位で、前記コンジュゲートから治療有効量の薬剤を放出するのに効果的である、方法。
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