JP2017518064A - N−アセチルシステインを含む細胞培養方法および培地 - Google Patents
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Abstract
Description
本願ととともに出願されたASCIIテキストファイルで電子的に提出された配列表の内容(名称:IL13−310P1_SL.txt;サイズ:15,073バイト;および作成日:2014年6月11日)は、その全体が参照により本明細書中に援用される。
表1は、本実施形態で参照される特定の配列のリストを提供する。
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語が最初に定義される。追加的な定義は、詳細な説明全体を通じて示される。
I.細胞培地
細胞培養は、動物から摘出される細胞、組織、または器官を、その生存、成長、および/または増殖を促進する人工的環境に配置する方法である。細胞が最適に成長するための基本的な環境的要件は、好適な容器、栄養分(限定はされないが、アミノ酸、炭水化物、ビタミン、ミネラル、成長因子、ホルモンなどの少なくとも1つを含む)を供給するための細胞培養/増殖培地、および(例えば、pH、浸透圧、温度、O2、CO2などを制御するための)制御された物理化学的環境を含む。一部の細胞は、足場依存性であり、固体または半流動基材(接着性または単層培養)に付着された状態で培養されなければならない一方、それ以外は培地中(懸濁培養)に浮遊した状態で成長され得る。細胞培養における1つのステップは、適切な増殖培地を選択することである。本明細書に開示される実施形態に従う細胞培地または細胞培養方法は、N−アセチルシステインを含む、細胞増殖を支持するのに十分な細胞培地を含む。一実施形態では、細胞培地は無血清および動物性タンパク質不含培地である。一実施形態では、細胞培地は合成培地である。別の実施形態では、N−アセチルシステインは市販の細胞培地に添加される。一実施形態では、市販の細胞培地は、NS0細胞用のEX−CELL(登録商標)NS0無血清培地(Sigma−Aldrichから入手可能、カタログ番号H4281)、EX−CELL(登録商標)CDハイブリドーマ培地(Sigma−Aldrich、カタログ番号H4409)、ハイブリドーマ細胞用のEx−Cell 620−HSF無血清培地(Sigma−Aldrich、カタログ番号14621C)、NS0用のEx−Cell NS−無血清培地(Sigma−Aldrich、カタログ番号14650C)、DMEM(Sigma−Aldrich、カタログ番号D567)、イスコフ改変ダルベッコ培地(IMDM)(Sigma−Aldrichから入手可能、カタログ番号I3390)、RPMI−1640培地(Sigma−Aldrich、カタログ番号R8005)、Hybridoma−SFM(Life Technologies、カタログ番号12045076)、CD Hybridoma AGT培地(Life Technologies、カタログ番号12372025)、CDハイブリドーマ培地(Life Technologiesから入手可能、カタログ番号11278023)、PFHM−IIタンパク質不含ハイブリドーマ培地(Life Technologies、カタログ番号12040077)、Nutridoma−SP(Roche、カタログ番号11011374001)、UltraDOMA−PFハイブリドーマ培地(Lonza、カタログ番号12−727F)、UltradDOMA無血清ハイブリドーマ培地(Lonza、カタログ番号12−723B)、Hyclone PF−Mab培地(GE Life Sciences,SH30138.05)、Hyclone SFM4MAb培地(GE Life Sciences SH30391.02)、Hyclone SFM4Mab−ユーティリティ培地(utility media)(GE Life Sciences、カタログ番号SH30382.02)、Hyclone ADCF−Mab培地(GE Life Sciences、カタログ番号SH30349.02)、Hyclone CCM1培地(GE Life Sciences,SH30043.03)、HyClone CCM4MAb培地(GE Life Sciences,SH30800.06)、Hyclone CDM4NS0培地(GE Life Sciences,SH30478.06)などである。別の実施形態では、N−アセチルシステインは、培地における基礎として滅菌脱イオン水を伴う構成成分から調製される細胞培地に添加される。
N−アセチルシステインは、細胞生存度、細胞増殖速度を増加させ、および/または細胞倍加時間を短縮するため、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法に添加される。何らかの特定の理論によって限定されないが、N−アセチルシステインは、細胞を遊離基から保護し、細胞膜分解を阻止し、および/または、限定はされないが脂質(コレステロールなど)を含む他の細胞培地成分の酸化を阻止することにより、培養中の細胞増殖に対して便益をもたらすと考えられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、炭素源、窒素源、および/または亜リン酸源をさらに含む。これらは、同じ成分または異なる成分によって提供され得る。一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、炭素源、窒素源、亜リン酸源、および/または無機塩をさらに含む。本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した炭素源は、炭水化物(糖など)またはアミノ酸、例えばL−グルタミンおよび/またはピルビン酸またはそれらの任意の組み合わせを含む。一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、炭水化物およびアミノ酸をさらに含む。一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、塩、ビタミン、代謝前駆体、成長因子、ホルモン、および微量元素のうちの少なくとも1つをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、アミノ酸、ビタミン、無機塩、および炭素源、例えばグルコースを含有する基本培地をさらに含む。
本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的な炭水化物は、グルコース、ガラクトース、トレハロース、グルコサミン、マンノース、ラフィノース、フルクトース、リボース、グルクロン酸、ラクトース、マルトース、スクロース、ツラノース、当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他の炭水化物、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一態様では、炭水化物は、グルコースまたはガラクトースであってもよい。
本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的なアミノ酸は、1つ以上の必須アミノ酸(すなわち、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、および/またはバリン)、ならびに/または1つ以上の非必須アミノ酸(すなわち、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、セリン、チロシン、およびアスパラギン)、ならびに/またはそれらの必須および非必須アミノ酸の任意の組み合わせ、を含む。特定の細胞においては、一部の非必須アミノ酸は、細胞がそのアミノ酸を合成する能力を有しないことから必須アミノ酸である。例えば、NS0細胞は内因性グルタミン合成酵素を欠如しているかまたは極めて低レベルで含有し、それ故、グルタミン合成酵素が異種タンパク質における発現系に含まれない限り、グルタミンはNS0細胞における必須アミノ酸である。
一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、脂質をさらに含む。本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的な脂質は、コレステロール、アラキドン酸、酢酸トコフェロール、リノール酸、リノレン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、ステアリン酸、リン脂質(ホスファチジルコリンなど)、当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他の脂質、またはそれらの任意の組み合わせ、のうちの1つ以上を含む。膜リン脂質の構成成分としてのイノシトールもまた、任意選択的に含まれてもよい。合成または植物由来脂質もまた、培地が動物由来成分を含まない状態で維持されることが所望される用途では、任意選択的に用いてもよい。脂質は、シクロデキストリンに基づく脂質サプリメントに添加してもよい。シクロデキストリンは、脂質ならびに/または脂溶性ビタミンおよびホルモンなどの他の成分を可溶化するのに用いてもよい。
一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は塩をさらに含む。本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的な塩は、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硝酸カリウム、当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他の塩、またはそれらの任意の組み合わせ、のうちの少なくとも1つを含む。
一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、ビタミンをさらに含む。本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的なビタミンは、脂溶性ビタミン、ビタミンA、D、E、K、B1(チアミン)、B2(リボフラビン)、B3(ニコチンアミド)、B5(パントテン酸)、B6(ピリドキサル、ピリドキサミン、および/またはピリドキシン)、B9(葉酸)、当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他のビタミン、またはそれらの任意の組み合わせ、を含む。
一実施形態では、少なくとも1つのホルモンを、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法に添加してもよい。一実施形態では、ホルモンは、デキサメタゾン、エリスロポエチン、エストラジオール、ヒドロコルチゾン、インスリン、プロゲステロン、ソマトスタチン、チロキシン(T4)、トリヨードチロニン(T3)、アクチビン、BMP4、BMP7、BMPR1A、Cripto、FLT3リガンド、HGF、IGF、EGF、FGF、PDGF、IGFBP4、カリクレイン、LEFTY−A、NGF、TGFβ、VEGF、または当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他のホルモンもしくは成長因子のうちの少なくとも1つから選択してもよい。
一実施形態では、少なくとも1つの微量元素は、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法に添加してもよい。一実施形態では、微量元素は、亜鉛、鉄、銅、セレン、マグネシウム、マンガン、モリブデン、スズ、ニッケル、または当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他の微量元素のうちの少なくとも1つであってもよい。
別の実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、少なくとも1つの界面活性剤をさらに含む。本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的な界面活性剤は、ツイーン−80、プルロニックF−68、または当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他の界面活性剤を含む。
別の実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、少なくとも1つのpH緩衝剤をさらに含む。本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法での使用に適した例示的な緩衝剤は、重炭酸ナトリウム、ホウ酸、クエン酸、ジチオトレイトール、エタノールアミン、グリセロリン酸塩(glycerophosphate)、クエン酸カリウム、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、コムギ由来デンプン、ヘペス、塩化カルシウム、MOPS、または当該技術分野で一般に公知の細胞培養に適した任意の他の緩衝剤(buffering agent cell)、またはそれらの任意の組み合わせ、を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の細胞培地または細胞培養方法は、非動物起源の加水分解物をさらに含む。例えば、植物または酵母加水分解物は、アミノ酸、短いペプチド、炭水化物、ビタミン、ヌクレオシド、およびミネラルを含むタンパク質消化物(digests)を提供し、種々の栄養補助物を培地に提供する。例えば、イーストレート、酵母加水分解物は利用してもよい。イーストレートは、ペプチド、アミノ酸、炭水化物、脂質、金属およびビタミンの混合物である。それは、別々に提供される成分に加えてまたはそれに代えて添加してもよい。一実施形態では、細胞培地は1g/Lのイーストレートを含む。
A.細胞型
種々の細胞型、例えばコレステロール栄養要求性細胞、骨髄腫細胞、およびハイブリドーマ細胞は、N−アセチルシステインを含む本開示の細胞培地で培養してもよい。一実施形態では、培養中の細胞は、哺乳動物に由来し、限定はされないが、マウス、ラット、ヒト、サル、ハムスター、ウサギなどに由来する細胞を含む。
一実施形態では、N−アセチルシステインを含む本開示の細胞培地での培養に適した細胞(例えば、コレステロール栄養要求株、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ、例えばNS0細胞)は、組換えまたは異種タンパク質を誘導し、かつ/または発現することなく培養される。一実施形態では、N−アセチルシステインを含む本開示の細胞培地での培養に適した細胞(例えば、コレステロール栄養要求株、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ、例えばNS0細胞)は、異種核酸(限定はされないが、cDNA、プラスミド、ベクター、プロモーターに作動可能に連結された核酸、および/あるいは異種核酸を一過性に発現するかまたは異種核酸を細胞株のゲノムに組み込む核酸を含む)で形質転換される。別の方法では、細胞は組換えまたは異種タンパク質を発現する。一方法では、細胞は組換えまたは異種タンパク質を過剰発現する。多種多様な異種配列を発現する細胞株は、本細胞培地および本方法から利益を得る場合がある。
一実施形態では、細胞培養方法は、細胞増殖を支持するのに十分な、N−アセチルシステインを含む細胞培地を提供するステップと、コレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマである細胞を細胞培地中で培養するステップと、を含む。一実施形態では、本方法は、N−アセチルシステインを含む細胞増殖を支持するのに十分な細胞培地を提供し;またコレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマである細胞を細胞培地中で培養することにより、細胞生存度を増加させ、細胞増殖速度を増加させ、および/または細胞の細胞倍加時間を短縮する方法である。
本細胞培養方法および/または培地は、複数の利点を提供し得る。一例として、それは、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて、細胞(例えば、コレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマ、例えばNS0細胞)が容器(バイオリアクターなど)内で成長するのに必要とされる時間を、少なくとも約10%〜少なくとも約50%(例えば、少なくとも約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、または約50%)短縮する。一実施形態では、これは所望される細胞数/体積に至るのに必要とされる期間を算出することによって決定される。
後の継代時の解凍回復、細胞生存度、細胞増殖および細胞倍加時間に対するN−アセチルシステインの役割を検討するため、以下の方法を用いた。1〜3の異なる動物性タンパク質フリー(「APF」)培地中で培養した3つの異なるNS0細胞株に対して、バイアル解凍時および通常の細胞増殖中の細胞増殖に対するN−アセチルシステイン(NAC)の効果を試験することを検討した。細胞株の一つは、組換えタンパク質を発現するように形質転換されていないNS0ヌル宿主細胞(NS0ヌル細胞株)であった。他の2つのNS0細胞株、すなわち(抗IL−9抗体を発現する)NS0細胞株1および(BAK502G9、抗IL−13抗体を発現する)NS0細胞株2は、治療用組換えタンパク質を発現するように操作した。NS0細胞株1を、1.5mM〜2.5mMの範囲の様々な濃度のNACを添加した2つの異なるAPF培地(APF培地1またはAPF培地2)に解凍し、展開した。NS0細胞株2を、0.5mM〜2.5mMの範囲のNACを添加した3つの異なるAPF培地(APF培地1、APF培地2または市販のNS0細胞培地(Invitrogen/Gibco製のCDハイブリドーマ+コレステロール))に解凍し、展開する一方、非形質転換宿主細胞株(NS0ヌル細胞株)を、0.5mM〜1.5mMの範囲のNACを添加したAPF培地2に解凍した。NACは、Sigmaから入手し、培地に直接添加するか、または、適切な濃度で培地に添加する前、水に100mMの濃度で溶解した。3つすべての培地(APF培地1、APF培地2、およびInvitrogen/Gibco製のCDハイブリドーマ+コレステロール)は、図1〜12に図示のとおり、NS0細胞の成長を支持した。APF培地1およびAPF培地2は、アミノ酸、ビタミン、脂質、糖、小ペプチド、pH緩衝剤、微量金属、無機塩、ヌクレオチド、ヌクレオチド前駆体、界面活性剤、還元剤、コレステロール、脂質および抗酸化剤を含む標準の細胞培養成分を含有する。
モノクローナル抗体(すなわち、BAK502G9、抗IL−13抗体)を発現するNS0細胞(すなわちNS0細胞株2)は凍結保存状態であった。実施例1に記載のとおり、凍結NS0細胞株2細胞を、様々な濃度のN−アセチルシステイン(NAC)を添加した動物性タンパク質不含(APF)培地(すなわち、APF培地1、APF培地2またはコレステロール(1×Invitrogen Cholesterol Lipid Concentrate)を添加したCDハイブリドーマ培地(Gibco))に解凍し、指数増殖期中の生細胞密度を、平均細胞倍加時間を算出するために用いた。
異種タンパク質を形質導入していないNS0細胞(すなわちNS0ヌル細胞株)は凍結保存状態であった。実施例1に記載のとおり、凍結NS0ヌル細胞株細胞を、様々な濃度のN−アセチルシステイン(NAC)を添加した動物性タンパク質不含(APF)培地(すなわちAPF培地2)に解凍し、指数増殖期中の生細胞密度を、平均細胞倍加時間を算出するために用いた。
抗IL−9モノクローナル抗体を発現するNS0細胞(すなわちNS0細胞株1)を、動物性タンパク質不含(APF)培地(すなわちAPF培地1またはAPF培地2)中で培養した。実施例1に記載のバイアル解凍試験で用いた細胞を、同じ培地(様々な濃度のN−アセチルシステインを添加したAPF培地1またはAPF培地2)に分けて、後の継代において継代間で一貫した倍加時間が得られるまで回復させておいた。実施例1に記載のとおり、回復後の指数増殖期中の生細胞密度を、平均細胞倍加時間を算出するために用いた。
モノクローナル抗体(すなわち、BAK502G9、抗IL−13抗体)を発現するNS0細胞(すなわちNS0細胞株2)を、動物性タンパク質不含(APF)培地(すなわち、APF培地1、APF培地2またはコレステロール(1×Invitrogen Cholesterol Lipid Concentrate)を添加したCDハイブリドーマ培地(Gibco))中で培養した。実施例2に記載のバイアル解凍試験で用いた細胞を、様々な濃度のN−アセチルシステインを添加した同じ培地(APF培地1、APF培地2またはCDハイブリドーマ培地+コレステロール)に分けて、後の継代において継代間で一貫した倍加時間が得られるまで回復させておいた。実施例1に記載のとおり、回復後の指数増殖期中の生細胞密度を、平均細胞倍加時間を算出するために用いた。
異種タンパク質を形質導入していないNS0細胞(すなわちNS0ヌル細胞株)を、動物性タンパク質不含(APF)培地(すなわちAPF培地2)中で培養した。実施例3に記載のバイアル解凍試験で用いた細胞を、同じ培地(様々な濃度のN−アセチルシステインを添加したAPF培地2)に分けて、後の継代において継代間で一貫した倍加時間が得られるまで回復させておいた。実施例1に記載のとおり、回復後の指数増殖期中の生細胞密度を、平均細胞倍加時間を算出するために用いた。
前述の記載された明細書は、当業者が本実施形態を実施することを可能にするのに十分であるように考慮されている。前述の説明および実施例は、特定の実施形態を詳述し、かつ発明者によって熟慮されたベストモードを記述する。しかし、前述をいかに詳細にテキストで表示し得るとしても、本実施形態を多くの方法で実施することができ、かつ特許請求の範囲がその任意の均等物を含むことは理解されるであろう。
Claims (65)
- a.細胞増殖を支持するのに十分な、N−アセチルシステインを含む細胞培地を提供するステップと;
コレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマである細胞を前記細胞培地中で培養するステップと、
を含む、細胞培養方法。 - a.細胞増殖を支持するのに十分な、N−アセチルシステインを含む細胞培地を提供するステップと;
b.コレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマである細胞を前記細胞培地中で培養するステップと、
を含む、細胞生存度を増加させる方法。 - a.細胞増殖を支持するのに十分な、N−アセチルシステインを含む細胞培地を提供するステップと;
b.コレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマである細胞を前記細胞培地中で培養するステップと、
を含む、細胞増殖速度を増加させる方法。 - a.細胞増殖を支持するのに十分な、N−アセチルシステインを含む細胞培地を提供するステップと;
b.コレステロール栄養要求株、骨髄腫、またはハイブリドーマである細胞を前記細胞培地中で培養するステップと、
を含む、細胞倍加時間を短縮する方法。 - 前記細胞が凍結保存から解凍される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が増殖期にある、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が無血清および動物性タンパク質不含培地である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が合成培地である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記培地が脂質を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が哺乳動物由来である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記哺乳類細胞が、マウス、ハムスター、ラット、サル、またはヒトである、請求項10に記載の方法。
- 前記細胞が、NS0、NS1、U937、M19、SRD−12B、SRD−13A、CHO−215、X63Ag8、Sp2/0、J558L、U266、P3U1、XG−1、XG−2、XG−3、XG−4、XG−5、XG−6、XG−7、XG−8、XG−9、U266、RPM1−8226、LP1、L363、OPM1、OPM2、およびNCLH929細胞からなる群から選択される、請求項10に記載の方法。
- 前記細胞が、NS0、NS1、U937、M19、SRD−12B、SRD−13A、CHO−215、X63Ag8、Sp2/0、J558L、U266、P3U1、XG−1、XG−2、XG−3、XG−4、XG−5、XG−6、XG−7、XG−8、XG−9、U266、RPM1−8226、LP1、L363、OPM1、OPM2、またはNCLH929細胞に由来する、請求項12に記載の方法。
- 前記細胞がNS0細胞である、請求項12に記載の方法。
- 前記細胞がコレステロール栄養要求株であるように操作される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が、炭素源、必須および非必須アミノ酸源、ビタミン、無機塩、微量金属、pH緩衝剤、界面活性剤、抗酸化剤、脂質、およびコレステロールを含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約0.25mM〜約3mMの濃度で含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約0.5〜約2.5mMの濃度で含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約1.0〜約1.5mMの濃度で含む、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約1mMまたは約1.5mMの濃度で含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地がイーストレートを含む、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞培地が1g/Lのイーストレートを含む、請求項21に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が、N−アセチルシステインを排除した対照培地での細胞培養の場合よりも短い、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも約10%短縮する、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも15%短縮する、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも20%短縮する、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも25%短縮する、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも50%短縮する、請求項23に記載の方法。
- 前記平均細胞倍加時間が60時間以下である、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が42時間以下である、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が34時間以下である、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が30時間以下である、請求項23に記載の方法。
- 前記平均倍加時間が約29時間以下である、請求項23に記載の方法。
- 前記細胞生存度が、N−アセチルシステインを排除した対照培地での細胞培養に対して増加する、請求項1〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞生存度が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも約5%増加する、請求項34に記載の方法。
- 前記細胞生存度が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも7%増加する、請求項34に記載の方法。
- 前記細胞生存度が、N−アセチルシステインを含まない細胞培地と比べて少なくとも10%増加する、請求項34に記載の方法。
- 前記細胞生存度が少なくとも約90%である、請求項34に記載の方法。
- 前記細胞生存度が少なくとも92%である、請求項34に記載の方法。
- 前記細胞生存度が少なくとも93%である、請求項34に記載の方法。
- 前記細胞が異種タンパク質を発現しない、請求項1〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が異種タンパク質を発現する、請求項1〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が異種核酸で形質転換される、請求項1〜40および42のいずれか一項に記載の方法。
- 前記異種核酸が、cDNA、ベクター、プラスミド、プロモーターに作動可能に連結された核酸、および/または前記ゲノム中に組み込まれる核酸である、請求項43に記載の方法。
- 前記異種タンパク質が一過性に発現される、請求項42に記載の方法。
- 前記異種タンパク質が安定に発現される、請求項42に記載の方法。
- 前記異種タンパク質が抗体またはその抗原結合断片である、請求項42、45、または46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体またはその抗原結合断片がIL−13抗体である、請求項47に記載の方法。
- 前記抗体がBAK502G9またはその抗原結合断片である、請求項48に記載の方法。
- 前記抗体または抗原結合断片が、配列番号1、9、17、または25のいずれか1つに対して少なくとも約80%同一である配列を含む重鎖可変領域、および配列番号2、10、18、または26のいずれか1つに対して少なくとも約80%同一である配列を含む軽鎖可変領域を有する、請求項48に記載の方法。
- 前記抗体または抗原結合断片が、
a. i.配列番号3、11、19、または27から選択される配列と比べて1つの突然変異を有するHC CDR1;
ii.配列番号4、12、20、および28から選択される配列と比べて1つもしくは2つの突然変異を有するHC CDR2;および
iii.配列番号5、13、21、および29から選択される配列と比べて1つもしくは2つの突然変異を有するHC CDR3
を含む重鎖可変領域、ならびに
b. i.配列番号6、14、22、および30から選択される配列と比べて1つの突然変異を有するLC CDR1;
ii.配列番号7、15、23、および31から選択される配列と比べて1つもしくは2つの突然変異を有するLC CDR2;および
iii.配列番号8、16、24、および32から選択される配列と比べて1つもしくは2つの突然変異を有するLC CDR3
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項48に記載の方法。 - 前記細胞がコレステロール栄養要求株である、請求項1〜52のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が骨髄腫細胞である、請求項1〜53のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞がハイブリドーマ細胞である、請求項1〜53のいずれか一項に記載の方法。
- N−アセチルシステイン、炭水化物源、アミノ酸源、およびコレステロール源を含む細胞培地。
- 前記炭水化物源および前記アミノ酸源が異なる、請求項55に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が無血清および動物性タンパク質不含培地である、請求項55〜56のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が合成培地である、請求項55〜57のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記培地が脂質をさらに含む、請求項55〜58のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約0.25mM〜約3mMの濃度で含む、請求項55〜59のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約0.5〜約2.5mMの濃度で含む、請求項55〜59のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約1.0〜約1.5mMの濃度で含む、請求項55〜59のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が、N−アセチルシステインを約1mMまたは1.5mMの濃度で含む、請求項55〜59のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地がイーストレートをさらに含む、請求項55〜63のいずれか一項に記載の細胞培地。
- 前記細胞培地が1g/Lのイーストレートを含む、請求項64に記載の細胞培地。
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