JP2016509866A - 細胞培養においてアンモニアの生成を制御するための、トリカルボン酸(tca)中間体の使用 - Google Patents
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Abstract
Description
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のトリカルボン酸(「TCA」)中間体組成物を接触させ又は投与するステップ、を含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップを含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップ、を含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップ、を含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のトリカルボン酸(「TCA」)中間体組成物を接触させ又は投与するステップ、を含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップを含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップ、を含む前記方法に関する。
細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップ、を含む前記方法に関する。
1)通常グルコース等の炭水化物の形態の、エネルギー源、
2)全ての必須アミノ酸、及び通常20のアミノ酸の基本セット及びシステイン、
3)ビタミン及び/又は低濃度で必要とされる他の有機化合物、
4)遊離の脂肪酸、及び
5)微量元素(微量元素は、典型的に非常に低い濃度、通常マイクロモル濃度の範囲で必要とされる無機化合物又は天然の元素として定義される)。
1)ホルモン及び他の増殖因子、例えば、インスリン、トランスフェリン、及び上皮増殖因子等、
2)塩及びバッファー、例えば、カルシウム、マグネシウム、及びホスフェート等、
3)ヌクレオシド及び塩基、例えば、アデノシン、チミジン、及びヒポキサンチン等、並びに
4)タンパク質及び組織加水分解物。
幾つかのTCAサイクル中間体を用量応答実験のために商業的入手性に基づいて選択し、酸又はその塩をSigma Aldrichから購入し、本試験において用いるためのストック溶液供給物を調製した。選択した化合物は、ピルビン酸、クエン酸、α−ケトグルタル酸、フマル酸、リンゴ酸(又はその塩)、及びオキサロ酢酸(ナトリウム塩は利用可能でない)であった。
全ての選択した成分の相互作用を試験するための実験を、二ブロックで実施した。ブロックのそれぞれを、中間点及び対照振盪フラスコ(いかなる成分も添加しないバッチ培養)を含むようにデザインした。第一のブロックでは、ピルビン酸、α−ケトグルタル酸、フマル酸及びオキサロ酢酸の相互作用を試験した。第二のブロックでは、ピルビン酸、α−ケトグルタル酸、フマル酸、オキサロ酢酸及びリンゴ酸の相互作用を試験した。図2は、ブロック#1の実験設定を示し、図3は、ブロック#2の実験設定を示す。全ての条件を二連で試験した。振盪フラスコの実施条件を表2に示す。
パラメーターの計算
生存細胞濃度の積分(IVC)
生存細胞濃度の積分を、VCCデータを用いて、以下の式に従う台形公式を利用して計算した:
tは、培養時間(=日)、
VCCは、生存細胞密度(=106 cells/mL)、
niは、培養を通して採取されたサンプルの数、計算のためにはi=4、
実験を三つのブロックに分けた。第一のブロックでは、ピルビン酸、クエン酸、α−ケトグルタル酸及びフマル酸を試験した。第二のブロックでは、オキサロ酢酸を試験し、第三のブロックではリンゴ酸を試験した。
用量応答試験から、ピルビン酸、リンゴ酸、オキサロ酢酸、フマル酸、及びα−ケトグルタル酸を相互作用の試験に進めた。中間体のそれぞれの濃度を、用量応答実験の間に反応を示した濃度で選択した。幾つかの場合には、選択した濃度は、用量応答実験中に実際に試験した二つの値の間であった。
図12a、12b及び12cは、対照培養と比べたピルベートの用量応答を示す。NH4 +の濃度は、用量に依存するが、効果はわずか数日しか続かなかった。ピルベートが消費されると、NH4 +の生産は再開する(図12b)。図は、順番に、(a)生存細胞濃度、(b)培養時間の関数としてのNH4 +蓄積、及び(c)細胞比NH4 +生産を示す。図(c)では、曲線の傾きが細胞比生産又は消費速度を示している。
Claims (23)
- 哺乳動物細胞培養においてアンモニウムイオン濃度を低減する方法であって、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のトリカルボン酸(「TCA」)中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのオキサロ酢酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 哺乳動物細胞培養において細胞の生産性を維持又は増加させる方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのオキサロ酢酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 哺乳動物細胞培養において細胞増殖を維持又は増加させる方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのオキサロ酢酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 細胞培養において抗体のグリコシル化パターンに対するアンモニウムイオン蓄積の影響を低減する方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのオキサロ酢酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 細胞比生産性もまた維持される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- TCA中間体組成物が、約3mM〜約45mMのオキサロ酢酸を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 約0.1mM〜約100mMのオキサロ酢酸を含む、細胞培養培地。
- 細胞比生産性もまた維持される、請求項7に記載の細胞培養培地。
- 約3mM〜約45mMのオキサロ酢酸を含む、請求項7又は8に記載の細胞培養培地。
- 哺乳動物細胞培養においてアンモニウムイオン濃度を低減する方法であって、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のトリカルボン酸(「TCA」)中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのリンゴ酸及び約0.1 mM〜約100mMのピルビン酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 哺乳動物細胞培養において細胞の生産性を維持又は増加させる方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのリンゴ酸及び約0.1 mM〜約100mMのピルビン酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 哺乳動物細胞培養において細胞増殖を維持又は増加させる方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのリンゴ酸及び約0.1 mM〜約100mMのピルビン酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 細胞培養において抗体のグリコシル化パターンに対するアンモニウムイオン蓄積の影響を低減する方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのリンゴ酸及び約0.1 mM〜約100mMのピルビン酸を含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 細胞比生産性もまた維持される、請求項10〜13のいずれか一項に記載の方法。
- TCA中間体組成物が、約3mM〜約45mMのリンゴ酸及び約3mM〜約45mMのピルビン酸を含む、請求項10〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 約0.1mM〜約100mMのリンゴ酸及び約0.1mM〜約100mMのピルビン酸を含む、細胞培養培地。
- 細胞比生産性もまた維持される、請求項16に記載の細胞培養培地。
- 約3mM〜約45mMのリンゴ酸及び約3mM〜約45mMのピルビン酸を含む、請求項16又は17に記載の細胞培養培地。
- 哺乳動物細胞培養においてアンモニウムイオン濃度を低減する方法であって、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のトリカルボン酸(「TCA」)中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのα−ケトグルタレートを含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - 細胞培養において抗体のグリコシル化パターンに対するアンモニウムイオン蓄積の影響を低減する方法であって、アンモニウムイオンの生成が低減され、
a)細胞培養培地において細胞を増殖させるステップ、及び
b)細胞培養培地に、有効量のTCA中間体組成物を接触させ又は投与するステップであって、前記TCA中間体組成物が約0.1mM〜約100mMのα−ケトグルタレートを含む前記ステップ、
を含む、前記方法。 - TCA中間体組成物が、約3mM〜約45mMのα−ケトグルタレートを含む、請求項19又は20に記載の方法。
- 約0.1mM〜約100mMのα−ケトグルタレートを含む細胞培養培地。
- 約3mM〜約45mMのα−ケトグルタレートを含む、請求項22に記載の細胞培養培地。
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