JP2017501997A - mIgA−Bリンパ球の溶解及びIgA生産の減少が可能な抗ヒトmIgA抗体 - Google Patents
mIgA−Bリンパ球の溶解及びIgA生産の減少が可能な抗ヒトmIgA抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017501997A JP2017501997A JP2016536853A JP2016536853A JP2017501997A JP 2017501997 A JP2017501997 A JP 2017501997A JP 2016536853 A JP2016536853 A JP 2016536853A JP 2016536853 A JP2016536853 A JP 2016536853A JP 2017501997 A JP2017501997 A JP 2017501997A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- migis
- miga
- antibody
- lymphocytes
- iga
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 101100291267 Drosophila melanogaster Miga gene Proteins 0.000 title claims abstract 18
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 99
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 78
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims abstract description 13
- 101500025942 Homo sapiens M-alpha Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 4
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 18
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 claims description 18
- 208000015446 immunoglobulin a vasculitis Diseases 0.000 claims description 17
- 201000004331 Henoch-Schoenlein purpura Diseases 0.000 claims description 15
- 206010019617 Henoch-Schonlein purpura Diseases 0.000 claims description 15
- 208000031814 IgA Vasculitis Diseases 0.000 claims description 15
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 14
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 4
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 4
- 101150026046 iga gene Proteins 0.000 description 52
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 26
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 20
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 14
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 8
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 8
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 8
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 7
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 3
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 3
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- YZOUYRAONFXZSI-SBHWVFSVSA-N (1S,3R,5R,6R,8R,10R,11R,13R,15R,16R,18R,20R,21R,23R,25R,26R,28R,30R,31S,33R,35R,36R,37S,38R,39S,40R,41S,42R,43S,44R,45S,46R,47S,48R,49S)-5,10,15,20,25,30,35-heptakis(hydroxymethyl)-37,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49-dodecamethoxy-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29,32,34-tetradecaoxaoctacyclo[31.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26.228,31]nonatetracontane-36,38-diol Chemical compound O([C@@H]([C@H]([C@@H]1OC)OC)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H]([C@@H](O[C@@H]3[C@@H](CO)O[C@@H]([C@H]([C@@H]3O)OC)O[C@@H]3[C@@H](CO)O[C@@H]([C@H]([C@@H]3OC)OC)O[C@@H]3[C@@H](CO)O[C@@H]([C@H]([C@@H]3OC)OC)O[C@@H]3[C@@H](CO)O[C@@H]([C@H]([C@@H]3OC)OC)O3)O[C@@H]2CO)OC)[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@H]3[C@@H](CO)O1 YZOUYRAONFXZSI-SBHWVFSVSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101100107610 Arabidopsis thaliana ABCF4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 1
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 101100068078 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GCN4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102400001107 Secretory component Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007822 cytometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010831 paired-sample T-test Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940093430 polyethylene glycol 1500 Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
- C07K14/395—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts from Saccharomyces
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/73—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing coiled-coiled motif (leucine zippers)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
この出願は、2013年12月5日に出願の米国仮出願第61/912,395号の優先権を主張し、それらの全てを引用によって本願明細書に組み込まれる。
本発明は、抗体、特に、ヒトmIgA発現B細胞に対する結合が可能な抗体に関する。
(a) CDR-H1は、配列番号:17の残基26-33、
(b) CDR-H2は、配列番号:17の残基51-57、
(c) CDR-H3は、配列番号:17の残基96-104、
(d) CDR-L1は、配列番号:18の残基27-32、
(e) CDR-L2は、配列番号:18の残基50-52、
(f) CDR-L3は、配列番号:18の残基89-97。
膜結合IgA(mIgA)は、mIgA発現B細胞上のB細胞受容体(BCR)複合体として、Igα/Igβと関連する。mIgA(mα)のα鎖は、IgA(α)のα鎖と比較してC末端膜-アンカーペプチドを更に含み、細胞外、膜貫通及び細胞内セグメントを含む。mIgアイソタイプ特異的セグメント(migis-α)と称される細胞外セグメント又はmαの細胞外膜近位ドメインは、mαに特異的であり、抗体(米国特許第5,079,334号)によるmIgA発現B細胞のアイソタイプ特異的標的に適した特異的抗原性サイトであることが提案されてきたが、かかる抗体は、今まで作成されなかった。
(a) CDR-H1は、配列番号:17の残基26-33、
(b) CDR-H2は、配列番号:17の残基51-57、
(c) CDR-H3は、配列番号:17の残基96-104、
(d) CDR-L1は、配列番号:18の残基27-32、
(e) CDR-L2は、配列番号:18の残基50-52、
(f)CDR-L3は、配列番号:18の残基89-97。
組換えmigisα含有タンパク質の構造及び発現
マウスを免疫化するためのマウス/ヒトキメラmigis-αL含有タンパク質(配列番号: 1)を調製するために、ヒトIgA1.Fc部をマウスIgA.Fcと取り替え、膜貫通領域を親水性GCN4ロイシンジッパーと取り替えた(図1)。このキメラタンパク質をエンコードしているDNA配列は、遺伝子合成(GeneArt)によって合成した。マウスカッパー鎖リーダーペプチド、ポリHisタグ及びリンカーペプチドをエンコードしている追加DNA配列は、配列の5'末端に組み込んだ。合成した配列は、pcDNA3.1ベクター(Invitrogen)にクローンした。キメラタンパク質は、FreeStyleTM 293 Expression System(Invitrogen)を用いて発現させた。大規模な細胞トランスフェクションのために、20mlの無血清DMEMに希釈した1.2mgのプラスミドDNAを、20mlの9g/LのNaCl溶液に希釈した3.6mgの線状ポリエチレンイミン(Polysciences)と混合した。混合物を、10分間室温でインキュベートし、160mlの新鮮なFreeStyleTM 293発現培地を含む培養フラスコに再懸濁した2X109のFreeStyleTM 293F細胞にゆっくりと加えた。細胞を37℃で4時間振盪して、600mlの新鮮なFreeStyleTM 293発現培地を更なる培養のためにフラスコに加えた。5日間の細胞生育の後、培地を遠心分離して、上清をProtino(登録商標)Ni-NTAアガロース(MACHEREY-NAGEL)を用いてタンパク質精製をした。精製手順は製造業者のマニュアルに従い、精製されたタンパク質はPBSに保存した。酵素結合抗体免疫吸着アッセイ(ELISA)スクリーニング及びハイブリドーマクローンの検査に用いられる組換えタンパク質を調製するために、ヒトmigisα含有タンパク質の様々なアイソフォーム及びアロフォームをエンコードしているDNA配列(それぞれ、mα1.Fc(配列番号:2)及びmα1.FcS-LZ(配列番号:3)、mα1.FcL-456S-LZ(配列番号:4)及びFcL-456C-LZ(配列番号:5))は、PCRによって、ヒトPMBC又はIgA発現B細胞株であるDAKIKI細胞(ATCC)のmRNAから調整されたcDNAからクローンした。増幅されたDNA断片は、上述の改良pcDNA3.1ベクターに更に結合させた。これらの構築物のための細胞トランスフェクション、タンパク質発現及びタンパク質精製は、上記の通りに従った。
mIgA発現B細胞に有意に結合することができる新規の抗migis-αmAbの同定
50マイクログラムのキメラタンパク質を用いて、2週間の間隔を開けて4-5回皮下に各Balb/cマウスを免疫化した。細胞融合の3日前に、10マイクログラムのキメラタンパク質を各マウスに静脈内に注入した。免疫化されたマウスから単離した脾細胞を、ポリエチレングリコール1500(Roche)を用いて、マウスミエローマ細胞FOと融和させた。融合処置の後、細胞を10-12日間HAT選択培地にて生育させ、培養した培地をELISAスクリーニング(詳細は次の章)のために移した。組換えタンパク質mα1.FcL-456S-LZ及びmα1.Fcを、それぞれ、陽性抗原及び陰性抗原として扱った。mα1.FcL-LZと反応するがmα1.Fcと反応しない抗体を生産するハイブリドーマクローンを、ELISAの西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)-共役ヤギ抗マウスIgG.Fc抗体(Jackson ImmunoResearch)を使用して、候補として同定した。mIgA発現B細胞に対するハイブリドーマ候補の結合を更に試験するために、2×105のDAKIKI細胞を、30分間氷上で、100μlの培養した培地と共にインキュベートした。細胞を、染色緩衝液[2%のウシ胎児血清(FBS、インビトロゲン)及び0.05%のアジ化ナトリウムを有するPBS]で洗浄して、30分間氷上で、FITC標識ラビットF(ab)'2抗マウスIgG抗体(AbD Serotech)を1:400で染色緩衝液にて希釈したものと共にインキュベートした。洗浄後、細胞を200μlの染色緩衝液にて再懸濁して、フローサイトメトリー解析を行った。この例では、DAKIKI細胞に有意に結合することができる新規の抗migis-αハイブリドーマ8G7を同定した。ハイブリドーマサブクローンを、細胞クローニング手順によって更に取得して特徴づけた。
抗migis-αmAbの結合反応性及び相対的結合親和性の検査
抗migis-αmAb 8G7(Igγ2b、κ)及び29C11(Igγ1、κ)を、プロテインAセファロースCL-4B培地(GE Healthcare)を用いて、ハイブリドーマ培養培地から精製した。精製されたmAbを、1mg/mlの濃度で、PBS中に保存した。マウス抗ヒトIgA1.Fc mAb 3C10(Igγ1、Abcam)及びマウス総IgG(Sigma-Aldrich)を、ポジティブコントロール及びネガティブコントロールとしてそれぞれ使用した。様々なmigisα含有組換えタンパク質及びいくつかの無関係なタンパク質をELISAにおいて試験した。タンパク質を、4℃で一晩、0.05Mの炭酸塩/重炭酸塩緩衝液中で、ELISAプレートに1μg/mlでコートした。プレートを、PBST(0.05%のTween(登録商標)20を有するPBS)で洗浄して、室温で1時間、PBS/BSA(1%のBSAを有するPBS)を用いてブロックした。PBSTでの洗浄の後、PBS/BSA中で1μg/mlのmAbを、プレートに加えて、室温で1時間インキュベートした。プレートをPBSTで洗浄して、HRP共役ヤギ抗マウスIgG.Fc抗体を1:10,000にPBS/BSAで希釈したものをプレートに加えた。室温で1時間のインキュベーション及びPBSTでの洗浄の後、テトラメチルベンジジン基質(Clinical Scientific Products)を、比色測定のためにプレートに加えた。図2は、8G7がmigis-αセグメントと特異的に反応することを示している。
Y = Bmax * X / (Kd + X)
Y=Bottom + (Top-Bottom) / (1+10(X-LogIC50))
mIgA発現B細胞に対する抗migis-αmAbのフローサイトメトリー解析
ハイブリドーマスクリーニングにおいて使用するDAKIKI細胞は、mα1鎖の長い及び短いアイソフォームを発現するものであり、定量的に精製されたmAbによって検討した。個々のmα1アイソフォームに対する結合を更に試験するために、mα1.FcL-456C(配列番号:6)又はmα1.FcS(配列番号:7)を安定して発現しているヒトB細胞株Ramos(IgM+ Bリンパ球、ATCC)(それぞれ、Ramos/mα1.FcL-456C及びRamos/mα1.FcSと称する)を作成した。手短に言えば、5×106のRamos細胞を、15μgの構成DNAを含む300μlの無血清RPMI 1640培地(Invitrogen)に再懸濁して、その後、Gene Pulser Xcell Electroporation Systems(BioRad)によって230V/950μFでショックを与えた。直ちに、細胞を、完全RPMI培地(10%のFBS及びペニシリン/ストレプトマイシンを加えたRPMI)に移した。2日間の生育の後、細胞を、安定した形質導入体を選択するために、1mg/mlのG418(Merck)を加えた完全RPMI培地に移した。mα1.FcL-456C及びmα1.FcSを発現している安定細胞クローンを、それぞれ、FITC標識ヤギ抗ヒトIgA抗体を用いたフローサイトメトリー解析によって採集し、0.5mg/mlのG418を加えた完全RPMI培地に維持した。
mIgA発現B形質転換細胞の抗migis-αmAb 8G7によるアポトーシスの誘導
mIgA受容体複合体の架橋がアポトーシスシグナルを誘導することができるか否かを試験するために、Ramos形質転換細胞、Ramos/mα1.FcL-456C及びRamos/mα1.FcSを、それぞれ、抗体処理のために用いた。96ウエルプレートにおいて、105の細胞を、条件ごとに3通り、200μlの完全RPMI1640培地に播種した。一連のmAb希釈物をウェルに加えて、37℃で1時間インキュベートした。架橋のために使用するヤギF(ab')2抗マウスIgG(Jackson ImmunoResearch)を10μg/mlの終濃度でウェルに加え、細胞を37℃で24時間培養した。次に、処理細胞を、5mlのポリスチレンチューブに移して、PBSで二回洗浄した。アポトーシスを検出するために、細胞を、2μgのヨウ化プロピジウム(PI、シグマアルドリッチ)及びの1μlのアネキシンV-FITC(Biovision)を含む100μlの結合緩衝液[10mMのHepes/NaOH(pH 7.4)、140mMのNaCl、2.5mMのCaCl2]で染色した。室温で20分間のインキュベーションの後、400μlの結合緩衝液をチューブに加えて、その後、細胞をフローサイトメトリー解析した。アポトーシス細胞は、アネキシンV+/PI-とアネキシンV+/PI+とで規定する。図8は、それぞれ、最大濃度(1.5μg/ml)の3C10及び8G7がRamos/mα1.FcL-456Cにおいて73.67%及び66.68%のアポトーシスを誘導することを示している。同じ濃度において、3C10及び8G7は、それぞれ、Ramos/mα1.FcS細胞において89.70%及び49.45%のアポトーシスを誘導することができる(図8)。この濃度範囲の中で、29C11は、マウスIgGコントロールの結果と比較して、これらの2つのRamos形質転換細胞においていかなる有意なアポトーシス効果も誘導しない。これらの2つの形質転換細胞とのアポトーシス誘導効率を比較して、8G7は、Ramos/ma1.FcSによりもRamos/mα1.FcL-456Cに強いアポトーシスを誘導する。
マウス/ヒトキメラ抗migis-αmAb c8G7によるヒトPBMCの抗体依存性細胞障害(ADCC)の誘発
ADCCは、抗体でコートされた標的細胞を破壊する、Fcγ受容体提示エフェクター細胞(例えばナチュラルキラー(NK)細胞及びマクロファージ)を補充する抗体の有効機構の1つである。この例では、2つのヒトmIgA1形質転換細胞(それぞれ、Ramos/mα1.FcL-456C及びRamos/mα1.FcS)を標的細胞として使用し、血液バンク(台北、台湾)から得た白血球濃縮物から単離したヒトPBMCをエフェクター細胞として用いた。ヒト血液サンプルの操作は、Biomedical Science ResearchのInstitutional Research Board(アカデミアシニカ、台湾)の承認中であった。マウス/ヒトキメラmAbは、遺伝子工学によって、マウスγ及びκ定常領域をそれぞれのヒト相当物(γ1及びκ)に置き換えることによって作成し、をFreeStyleTM 293Expression Systemにて発現させた。キメラの8G7及び29C11は、それぞれ、c8G7及びc29C11を指す。gp120タンパク質と反応するマウス/ヒトキメラmAb cBAT123を、実験のネガティブコントロールとして使用した。
標的細胞溶解の% = {([生標的細胞の%]mAb無処理 = [生標的細胞の%]mAb処理)/[生標的細胞の%]mAb無処理}* 100
インビトロでのマウス/ヒトキメラ抗migis-αmAb c8G7で処理したヒトPBMCによるIgA生産の減少
22人の健常なドナー由来のPBMCを、以前の実施例に記載されている手順によって作成した。細胞を、2 x 106/mlの濃度で、完全IMDM(Invitrogen)に再懸濁し、200μlの細胞を、96ウェル培養プレートの各ウェルに移した。次に、抗体を、5μg/mlの終濃度でウェルに加えた。培養の5日後に、細胞を400x gで5分間遠心沈殿させ、上清(ウェルごと150μl)を等量の1%BSA/PBSと混合した。IgA及びIgMレベルを、それぞれ、ヒトIgA及びIgM ELISAキット(Bethyl Laboratories, Inc)を用いて数量化して、添付マニュアルに記載されている手順に従った。この例では、ヒト膜結合IgEと特異的に反応したマウス/ヒトキメラ抗体4B12をコントロールmAbとして使用し、各抗体処理グループに関する実験は、3回繰り返した。測定値間のデータ相関は、対応のあるサンプルt検定によって算出した。
抗migis-αmAb 8G7で処理されたマウスに移植されたmIgA発現B形質転換細胞の成長阻害
mα1.FcL-456S(配列番号:8)又はmα1.FcS(配列番号:7)(それぞれ、A20/mα1.FcL-456S及びA20/mα1.FcSと称する)を安定して発現しているマウスB細胞株A20(IgG+ Bリンパ球、ATCC)は、以前の実施例でのRamos形質転換細胞を作成するのと同じように、細胞エレクトロポレーション及び薬物選択手順によって作成した。mα1.FcL-456S及びmα1.FcSを発現する安定細胞クローンを、それぞれ、FITC標識ヤギ抗ヒトIgA抗体を用いてフローサイトメトリー分析によって採集し(図11A)、0.5mg/mlのG418を含む完全RPMI培地に維持した。2つの形質転換細胞のマウスB細胞マーカーCD19、CD45R及びCD79bは、それぞれ、FITC標識ラット抗マウスCD19、PE標識ラット抗マウスCD45R及びFITC標識ハムスター抗マウスCD79(BD Biosciences)を用いたフローサイトメトリーアッセイによっても検討した(図11A)。
Claims (14)
- Bリンパ球上のmIgAに結合することができ、それによって、mIgA発現Bリンパ球の溶解を引き起こす、及び/又は、IgA分泌Bリンパ球によるIgA生産を減少させる、ヒトmα鎖のmigis-αに特異的な抗migis-α抗体又はその断片。
- F(ab)'2、Fab、Fv、又は、抗migis-α抗体の単鎖Fv断片を含むかそのものである、請求項1に記載の抗migis-α抗体又はその断片。
- 前記抗体又は断片は、以下の相補性決定領域(CDR)であって、
CDR-H1は、配列番号:17の残基26-33である、
CDR-H2は、配列番号:17の残基51-57である、
CDR-H3は、配列番号:17の残基96-104である、
CDR-L1は、配列番号:18の残基27-32である、
CDR-L2は、配列番号:18の残基50-52である、
CDR-L3は、配列番号:18の残基89-97である、CDRを有する、請求項1又は2に記載の抗migis-α抗体又はその断片。 - 前記抗体又は前記断片は、配列番号:17に記載のVH及び配列番号:18に記載のVLを含む、請求項1から3のいずれかに記載の抗migis-α抗体又はその断片。
- 前記抗体は、mAb 8G7である、請求項1から4のいずれかに記載の抗migis-α抗体又はその断片。
- 前記抗体又は前記断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、若しくはヒト抗体又はその断片である、請求項1から5のいずれかに記載の抗migis-α抗体又はその断片。
- 請求項1から6のいずれかに記載の抗migis-α抗体又はその断片及び医薬的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
- 前記医薬組成物は、mIgA発現細胞の除去又は免疫系のIgA抗体の減少から利益を得ることができる対象における疾患を治療するために使われる、請求項7に記載の医薬組成物。
- 前記疾患は、IgAリンパ球(lymphoctyes)、IgA腎症(IgAN)、ヘノッホシェーンライン紫斑病(HSP)及びセリアック病からなる群より選択される、請求項8に記載の医薬組成物。
- Bリンパ球上のmIgAに結合することができ、それによって、mIgA発現Bリンパ球の溶解を引き起こし、IgA分泌Bリンパ球によるIgA生産を減少させる、ヒトmα鎖のmigis-αに特異的な抗体又はその断片を対象に使用するステップを含む、インビトロ又はインビボで対象におけるmIgA発現Bリンパ球を溶解して、IgA生産を減少させる方法。
- Bリンパ球上のmIgAに結合することができ、それによって、mIgA発現Bリンパ球を溶解し、対象の免疫系におけるIgA生産を減少させる、ヒトmα鎖のmigis-αに特異的な抗体又はその断片を対象に投与するステップを含む、対象における疾患を治療する方法。
- 前記疾患は、IgAリンパ球(lymphoctyes)、IgA腎症(IgAN)、ヘノッホシェーンライン紫斑病(HSP)及びセリアック病からなる群より選択される、請求項11に記載の方法。
- mIgA発現細胞の除去及び免疫系におけるIgA抗体の減少から利益を得ることができる対象の疾患を治療するための、請求項1から6のいずれかに記載の抗migis-α抗体及びその断片の使用。
- 前記疾患は、IgAリンパ球(lymphoctyes)、IgA腎症(IgAN)、ヘノッホシェーンライン紫斑病(HSP)及びセリアック病からなる群より選択される、請求項13に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361912395P | 2013-12-05 | 2013-12-05 | |
US61/912,395 | 2013-12-05 | ||
PCT/CN2014/001097 WO2015081613A1 (en) | 2013-12-05 | 2014-12-05 | ANTI-HUMAN mIgA ANTIBODIES CAPABLE OF LYSING mIgA-B LYMPHOCYTES AND DECREASING IgA PRODUCTION |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017501997A true JP2017501997A (ja) | 2017-01-19 |
JP6316966B2 JP6316966B2 (ja) | 2018-04-25 |
Family
ID=53272802
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016536853A Active JP6316966B2 (ja) | 2013-12-05 | 2014-12-05 | mIgA−Bリンパ球の溶解及びIgA生産の減少が可能な抗ヒトmIgA抗体 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9688776B2 (ja) |
EP (1) | EP3077000A4 (ja) |
JP (1) | JP6316966B2 (ja) |
CN (1) | CN106029092B (ja) |
TW (1) | TWI603979B (ja) |
WO (1) | WO2015081613A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201900213A (zh) * | 2017-05-27 | 2019-01-01 | 美商免疫醫療公司 | 免疫球蛋白a陽性細胞的調節 |
JP7453090B2 (ja) | 2020-08-17 | 2024-03-19 | 戸田建設株式会社 | 円筒型プレキャストコンクリート部材の補強装置及びこれを用いた浮体式洋上風力発電設備におけるコンクリート製浮体構造 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04504424A (ja) * | 1989-06-21 | 1992-08-06 | タノックス バイオシステムズ インコーポレイテッド | 膜結合IgAに存在するが分泌IgAに存在しない抗原エピトープ |
JPH05503687A (ja) * | 1989-09-15 | 1993-06-17 | タノックス バイオシステムズ インコーポレイテッド | 自己免疫疾患の治療 |
US5281699A (en) * | 1990-06-01 | 1994-01-25 | Tanox Biosystems, Inc. | Treating B cell lymphoma or leukemia by targeting specific epitopes on B cell bound immunoglobulins |
US5484907A (en) * | 1989-06-21 | 1996-01-16 | Tanox Biosystems, Inc. | Nucleotides coding for the extracellular membrane-bound segment of IgA |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5342924A (en) * | 1987-12-31 | 1994-08-30 | Tanox Biosystems, Inc. | Extracellular segments of human ε immunoglobulin anchoring peptides and antibodies specific therefor |
US5079344A (en) * | 1989-06-21 | 1992-01-07 | Tanox Biosystems, Inc. | Antigenic epitopes present on membrane-bound but not secreted IgA |
US5254671A (en) * | 1990-04-27 | 1993-10-19 | Tanox Biosystems, Inc. | Extracellular segments of human e immunoglobulin anchoring peptides and antibodies specific therefor |
CA2074089C (en) * | 1990-01-23 | 2001-04-10 | Tse-Wen Chang | Extracellular segments of human e immunoglobulin anchoring peptides and antibodies specific therefor |
US5298420A (en) * | 1990-08-03 | 1994-03-29 | Tanox Biosystems, Inc. | Antibodies specific for isotype specific domains of human IgM and human IgG expressed or the B cell surface |
WO1992007574A1 (en) * | 1990-10-25 | 1992-05-14 | Tanox Biosystems, Inc. | Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells |
EP1941275B1 (en) * | 2005-09-29 | 2013-07-24 | Medimmune, Inc. | Method of identifying membrane lg specific antibodies and use thereof for targeting immunoglobulin-producing precursor cells |
EP1972640A1 (en) * | 2007-03-23 | 2008-09-24 | Biomay AG | Apoptosis inducing antibodies |
SG174161A1 (en) * | 2009-02-25 | 2011-11-28 | Tsewen Chang | ANTI-CemX ANTIBODIES CAPABLE OF BINDING TO HUMAN mIgE ON B LYMPHOCYTES |
US20130059318A1 (en) * | 2009-12-28 | 2013-03-07 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Anti-iga1 antibody |
-
2014
- 2014-12-05 EP EP14867022.7A patent/EP3077000A4/en not_active Withdrawn
- 2014-12-05 CN CN201480066447.7A patent/CN106029092B/zh active Active
- 2014-12-05 TW TW103142495A patent/TWI603979B/zh active
- 2014-12-05 JP JP2016536853A patent/JP6316966B2/ja active Active
- 2014-12-05 WO PCT/CN2014/001097 patent/WO2015081613A1/en active Application Filing
-
2016
- 2016-06-03 US US15/172,170 patent/US9688776B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04504424A (ja) * | 1989-06-21 | 1992-08-06 | タノックス バイオシステムズ インコーポレイテッド | 膜結合IgAに存在するが分泌IgAに存在しない抗原エピトープ |
US5484907A (en) * | 1989-06-21 | 1996-01-16 | Tanox Biosystems, Inc. | Nucleotides coding for the extracellular membrane-bound segment of IgA |
JPH05503687A (ja) * | 1989-09-15 | 1993-06-17 | タノックス バイオシステムズ インコーポレイテッド | 自己免疫疾患の治療 |
US5281699A (en) * | 1990-06-01 | 1994-01-25 | Tanox Biosystems, Inc. | Treating B cell lymphoma or leukemia by targeting specific epitopes on B cell bound immunoglobulins |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
BRIT. J. CANCER, vol. Vol.98, JPN6017018226, 2008, pages 1675 - 1681 * |
J. ALLERGY CLIN. IMMUNOL., vol. Vol.99, No.1, Part 2, JPN6017018222, 1997, pages p.S286 * |
J. IMMUNOL., vol. Vol.186, Issue 1 Supplement, 52.19, JPN6017018221, 2011 * |
MOL. IMMUNOL., vol. Vol.48, JPN6017018220, 2011, pages 1975 - 1982 * |
MOL. IMMUNOL., vol. Vol.52, JPN6017018223, 2012, pages 279 - 288 * |
MOL. IMMUNOL., vol. Vol.53, JPN6017018224, 2013, pages 187 - 197 * |
PROC. NATL. ACAD. SCI. U. S. A., vol. 102, no. 21, JPN6017018225, 2005, pages 7718 - 7723 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6316966B2 (ja) | 2018-04-25 |
CN106029092B (zh) | 2019-11-19 |
US9688776B2 (en) | 2017-06-27 |
CN106029092A (zh) | 2016-10-12 |
EP3077000A4 (en) | 2017-06-14 |
TW201609815A (zh) | 2016-03-16 |
EP3077000A1 (en) | 2016-10-12 |
TWI603979B (zh) | 2017-11-01 |
WO2015081613A1 (en) | 2015-06-11 |
US20160289339A1 (en) | 2016-10-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11512129B2 (en) | TIGIT antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical use thereof | |
US10604576B2 (en) | Antibodies and immunocytokines | |
WO2018113258A1 (zh) | 抗pd-1抗体及其用途 | |
US11555077B2 (en) | 4-1BB antibody and preparation method and use thereof | |
AU2018370279B2 (en) | Antibodies to a-synuclein and uses thereof | |
AU2006254333B2 (en) | Anti-IL2 antibodies | |
WO2021058000A1 (zh) | 抗人Claudin18.2抗体及其应用 | |
KR20200061320A (ko) | 세포독성 t-림프구-관련 단백질 4 (ctla-4)에 대한 신규의 단일클론 항체 | |
JP7053479B2 (ja) | IL7受容体細胞外ドメインα鎖に対する非拮抗性抗体及び癌治療におけるそれらの使用 | |
CN107108734B (zh) | 单克隆抗gpc-1抗体和其用途 | |
US20230192861A1 (en) | Anti-pd-l1/anti-b7-h3 multispecific antibodies and uses thereof | |
JP6316966B2 (ja) | mIgA−Bリンパ球の溶解及びIgA生産の減少が可能な抗ヒトmIgA抗体 | |
IL298894A (en) | Human antibodies against GRP94 and uses | |
RU2807484C2 (ru) | Антитело к pd-1, его антигенсвязывающий фрагмент и его фармацевтическое применение | |
WO2024012513A1 (en) | Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof | |
JP2024502091A (ja) | Pd-1結合分子およびその使用 | |
CN117843781A (zh) | Cd138抗体及其应用 | |
KR20210158693A (ko) | 항 pcsk9 항체 및 이의 용도 | |
CN114573703A (zh) | 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用 | |
JP2020007315A (ja) | モノクローナル抗gpc−1抗体およびその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170523 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20170607 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170609 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170823 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171020 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20171020 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180306 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180328 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6316966 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |