JP2017501722A - タグ付けされたdna断片の生成 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、分子生物学の分野に、より具体的にはDNA断片の生成に、および、特に、標的DNAの複数のタグ付けされたDNA断片、または標的DNAのタグ付けされたDNA断片のライブラリーの生成にそれぞれ関する。
タグ付けされたDNA断片は、現代の分子生物学の技術における多くの適用のために必要とされる。例えば、次世代シークエンシング(NGS)のような適用において、シークエンシング(sequence)されるDNAは、最終的にシークエンシング反応のための基質であるクラスターの増幅前に、断片化された形態で提供されなければならない。さらに、アダプター配列は、インデックス付加、断片の増幅およびシークエンシングプライマーに特異的な配列の提供を確実にするために、テンプレートの両末端に付加されなければならない。
本発明は、これらおよび他の需要を満たす。
(i)該標的DNAと、インテグラーゼと、インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子とを接触させて、反応混合物を得る工程、
(ii)該少なくとも1つのアダプター分子の3’プロセシングおよび鎖転移反応が該インテグラーゼによって触媒される条件下で該反応混合物をインキュベートする工程であって、ここで、
(a)該標的DNAが断片化されて、複数の標的DNA断片を生成し、および
(b)該少なくとも1つのDNAアダプター分子が、該複数の該標的DNA断片のそれぞれの少なくとも1つの末端に連結される、工程
を含み、該標的DNAの複数のタグ付けされたDNA断片を生成する、方法を提供する。
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択される。
(iii)前記標的DNAの前記複数のタグ付けされたDNA断片を精製する工程
をさらに含む。
(i)インテグラーゼ、および
(ii)インテグラーゼ認識サイド(side)を含む少なくとも1つのDNAアダプター分子
を含む。
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択される。
配列番号1 + 配列番号2:アダプター1
配列番号3 + 配列番号2:アダプター2
配列番号6 + 配列番号2:アダプター3
配列番号7 + 配列番号2:アダプター4
配列番号8 + 配列番号4:アダプター5
配列番号9 + 配列番号4:アダプター6
配列番号8 + 配列番号5:アダプター7
配列番号9 + 配列番号5:アダプター8
配列番号14 + 配列番号15:アダプター9
配列番号10 + 配列番号11:アダプター10
配列番号12 + 配列番号13:アダプター11
実験スケジュールは以下の通りである:
組み込み複合体を形成するための、37℃で10分間のインキュベーション。
アッセイ
37℃で10分間インキュベートする。
実験の設定:
QHIN_1貯蔵緩衝液
D:Dar−緩衝液
25mM Tris−HCl pH7.4
1M NaCl
7.5mM CHAPS
1mM DTT
50% グリセロール
W:Wang50−緩衝液
20mM HEPES pH7.35
1M NaCl
1mM DTT
50% グリセロール
2種類のマスターミックス(MMX)は、0.2μMアダプターを使用して調製された。
PCR設定を以下の表に記載する:
図4は、全試料の電気泳動図を表す:
1:D 100 1;Dar−緩衝液/100ng gDNA/1.サイクリング
2:W 100 1;Wang50−緩衝液/100ng gDNA/1.サイクリング
3:D 100 2;Dar−緩衝液/100ng gDNA/2.サイクリング
4:W 100 2;Wang50−緩衝液/100ng gDNA/2.サイクリング。
3:1.IN1;INアダプター1/プライマーミックス1
1:1.N1_0;INアダプター1/プライマーミックス1_テンプレートなしの対照
7:2.IN1;INアダプター1/プライマーミックス2
5:2.N1_0;INアダプター1/プライマーミックス2_テンプレートなしの対照
4:1.IN2;INアダプター2/プライマーミックス1
2:1.N2_0;INアダプター2/プライマーミックス1_テンプレートなしの対照
8:2.IN2;INアダプター2/プライマーミックス2
6:2.N2_0;INアダプター2/プライマーミックス2_テンプレートなしの対照
A:
1:30;30℃での標的DNAとのINアダプター_2複合体のインキュベーション
3:37;37℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
5:40;40℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
7:45;45℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
B:
1:37;37℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
3:50;50℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
5:55;55℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
7:60;60℃での標的DNAとのIN/アダプター2複合体のインキュベーション
本発明は、分子生物学の分野に、より具体的にはDNA断片の生成に、および、特に、標的DNAの複数のタグ付けされたDNA断片、または標的DNAのタグ付けされたDNA断片のライブラリーの生成にそれぞれ関する。
タグ付けされたDNA断片は、現代の分子生物学の技術における多くの適用のために必要とされる。例えば、次世代シークエンシング(NGS)のような適用において、シークエンシング(sequence)されるDNAは、最終的にシークエンシング反応のための基質であるクラスターの増幅前に、断片化された形態で提供されなければならない。さらに、アダプター配列は、インデックス付加、断片の増幅およびシークエンシングプライマーに特異的な配列の提供を確実にするために、テンプレートの両末端に付加されなければならない。
ることである。
本発明は、これらおよび他の需要を満たす。
(i)該標的DNAと、インテグラーゼと、インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子とを接触させて、反応混合物を得る工程、
(ii)該少なくとも1つのDNAアダプター分子の3’プロセシングおよび鎖転移反応が該インテグラーゼによって触媒される条件下で該反応混合物をインキュベートする工程であって、ここで、
(a)該標的DNAが断片化されて、複数の標的DNA断片を生成し、および
(b)該少なくとも1つのDNAアダプター分子が、該複数の該標的DNA断片のそれぞれの少なくとも1つの末端に連結される、工程
を含み、該標的DNAの複数のタグ付けされたDNA断片を生成する、方法を提供する。
NAの一部分または断片またはセグメントを意味する。
moloney murine leukemia virus cDNA into
the host chromosomes,J.Virol.84(16),p.8250−8261;Goodarzi et al.(1995),Concerted
integration of retrovirus−like DNA by human immunodeficiency virus type 1 integrase,J.Virol.69(10),p.6090−6097;Ellison et al.(1994),A stable complex between integrase and viral DNA ends mediates human immunodeficiency virus integration in vitro,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91(15),p.7316−7320;Yoshinaga et al.(1995),Different
roles of bases within the integration signal sequence of human immunodeficiency
virus type 1 in vitro,J.Virol.69(5),p.3233−3236;Quashie et al.(2012),Novel therapeutic strategies targeting HIV integrase,BMC Med. 10,p.34;Pruss et al.(1994),Human immunodeficiency virus integrase directs integration to sites of severe DNA
distortion within the nucleosome core,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91(13),p.5913−5917;Tsuruyama et al.(2010),In vitro HIV−1 selective integration into the target sequence and decoy−effect of the modified sequence,PLoS One.5(11),e13841;Hansen et al.(1999),Integration complexes derived from HIV vectors for rapid assays in vitro,Nat.Biotechnol.17(6),p.578−582;Delelis et al.(2008),Integrase and integration:biochemical activities of HIV−1 integrase,Retrovirology 5,p.114。
vivo,Biotechniques 35(5),p.1072−1078。
LTR−retrotransposon,PLoS One.3(9),e3185。
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択される。
(iii)前記標的DNAの前記複数のタグ付けされたDNA断片を精製する工程
をさらに含む。
(i)インテグラーゼ、および
(ii)インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子
を含む。
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択される。
配列番号1 + 配列番号2:アダプター1
配列番号3 + 配列番号2:アダプター2
配列番号6 + 配列番号2:アダプター3
配列番号7 + 配列番号2:アダプター4
配列番号8 + 配列番号4:アダプター5
配列番号9 + 配列番号4:アダプター6
配列番号8 + 配列番号5:アダプター7
配列番号9 + 配列番号5:アダプター8
配列番号14 + 配列番号15:アダプター9
配列番号10 + 配列番号11:アダプター10
配列番号12 + 配列番号13:アダプター11
特定の実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
標的DNAのタグ付けされたDNA断片を生成するための方法であって、
(i)該標的DNAと、インテグラーゼと、インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子とを接触させ、反応混合物を得る工程、
(ii)該少なくとも1つのアダプター分子の3’プロセシングおよび鎖転移反応が該インテグラーゼによって触媒される条件下で該反応混合物をインキュベートする工程であって、ここで、
(a)該標的DNAが断片化されて、複数の標的DNA断片を生成し、および
(b)該少なくとも1つのDNAアダプター分子が、該複数の該標的DNA断片のそれぞれの少なくとも1つの末端に連結される、工程
を含み、該標的DNAの複数のタグ付けされたDNA断片を生成する、方法。
(項目2)
工程(ii)(b)において、前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、前記複数の前記標的DNA断片のぞれぞれの両末端に連結されることを特徴とする、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトをさらに含み、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成されることを特徴とする、項目1または2に記載の方法。
(項目4)
工程(ii)の後に、以下の工程:
(ii)’前記標的DNAの前記複数のタグ付けされたDNA断片をPCRに供し、前記少なくとも1つのDNAアダプター分子に、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトを加える工程であって、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成される工程
をさらに含む、項目1または2に記載の方法。
(項目5)
前記インテグラーゼが、HIVインテグラーゼを包含するレトロウイルスインテグラーゼ、およびレトロウイルスインテグラーゼ由来のインテグラーゼからなる群から選択されることを特徴とする、前記項目のいずれかに記載の方法。
(項目6)
前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、2つの核酸分子からなり、該2つの核酸分子が、相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ互いに特異的にハイブリダイズされ、以下の群:
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択されることを特徴とする、前記項目のいずれかに記載の方法。
(項目7)
工程(ii)および/または工程(ii)’の後に、以下の工程:
(iii)前記標的DNAの前記複数のタグ付けされたDNA断片を精製する工程
をさらに含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
(項目8)
前記方法が1つの反応容器内で行われることを特徴とする、前記項目のいずれかに記載の方法。
(項目9)
標的DNAのタグ付けされたDNA断片を生成するためのキットであって:
(i)インテグラーゼ、および
(ii)インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子
を含む、キット。
(項目10)
PCR反応において、前記少なくとも1つのDNAアダプター分子に、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトを加えるように構成される、少なくとも1つのPCRプライマー対をさらに含み、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成される、項目9に記載のキット。
(項目11)
前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトをさらに含み、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成されることを特徴とする、項目9に記載のキット。
(項目12)
前記インテグラーゼが、HIVインテグラーゼを包含するレトロウイルスインテグラーゼ、およびレトロウイルスインテグラーゼ由来のインテグラーゼからなる群から選択されることを特徴とする、前記の項目のいずれかに記載のキット。
(項目13)
前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、2つの核酸分子からなり、該2つの核酸分子が、相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ互いに特異的にハイブリダイズされ、以下の群:
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択されることを特徴とする、前記項目のいずれかに記載のキット。
(項目14)
標的DNAのタグ付けされたDNA断片のライブラリー生成のためのインテグラーゼの使用であって、好ましくは、該タグ付けされたDNA断片のライブラリーが、好ましくは次世代シークエンシングを介する、DNAシークエンシングのために使用されるライブラリーである、使用。
(項目15)
配列番号1〜15からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子。
ドナーDNA;2)3’プロセシング;3〜4)ループ形成(3)および平滑末端DNAの生成(4)からなる5’プロセシング;5)鎖転移;6)修復された鎖転移生成物。
実験スケジュールは以下の通りである:
ジチオトレイトール、0.1% Nonidet P40、1mM CHAPS、40mM NaCl。
組み込み複合体を形成するための、37℃で10分間のインキュベーション。
アッセイ
ジチオトレイトール、0.1% Nonidet P40、1mM CHAPS、40mM NaCl。
37℃で10分間インキュベートする。
実験の設定:
QHIN_1貯蔵緩衝液
D:Dar−緩衝液
25mM Tris−HCl pH7.4
1M NaCl
7.5mM CHAPS
1mM DTT
50% グリセロール
W:Wang50−緩衝液
20mM HEPES pH7.35
1M NaCl
1mM DTT
50% グリセロール
2種類のマスターミックス(MMX)は、0.2μMアダプターを使用して調製された。
PCR設定を以下の表に記載する:
XP Beadsを使用して除去し、そしてAgilent DNAチップを使用し、キャピラリー電気泳動を介してプローブを分析した。
図4は、全試料の電気泳動図を表す:
1:D 100 1;Dar−緩衝液/100ng gDNA/1.サイクリング
2:W 100 1;Wang50−緩衝液/100ng gDNA/1.サイクリング3:D 100 2;Dar−緩衝液/100ng gDNA/2.サイクリング
4:W 100 2;Wang50−緩衝液/100ng gDNA/2.サイクリング。
よび生成された断片がプライマーP1およびプライマーP2を使用して増幅され得たことを意味する。
3:1.IN1;INアダプター1/プライマーミックス1
1:1.IN1_0;INアダプター1/プライマーミックス1_テンプレートなしの対照
7:2.IN1;INアダプター1/プライマーミックス2
5:2.IN1_0;INアダプター1/プライマーミックス2_テンプレートなしの対照
4:1.IN2;INアダプター2/プライマーミックス1
2:1.IN2_0;INアダプター2/プライマーミックス1_テンプレートなしの対照
8:2.IN2;INアダプター2/プライマーミックス2
6:2.IN2_0;INアダプター2/プライマーミックス2_テンプレートなしの対照
A:
1:30;30℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
3:37;37℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
5:40;40℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
7:45;45℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
B:
1:37;37℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
3:50;50℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
5:55;55℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
7:60;60℃での標的DNAとのINアダプター2複合体のインキュベーション
Claims (15)
- 標的DNAのタグ付けされたDNA断片を生成するための方法であって、
(i)該標的DNAと、インテグラーゼと、インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子とを接触させ、反応混合物を得る工程、
(ii)該少なくとも1つのアダプター分子の3’プロセシングおよび鎖転移反応が該インテグラーゼによって触媒される条件下で該反応混合物をインキュベートする工程であって、ここで、
(a)該標的DNAが断片化されて、複数の標的DNA断片を生成し、および
(b)該少なくとも1つのDNAアダプター分子が、該複数の該標的DNA断片のそれぞれの少なくとも1つの末端に連結される、工程
を含み、該標的DNAの複数のタグ付けされたDNA断片を生成する、方法。 - 工程(ii)(b)において、前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、前記複数の前記標的DNA断片のぞれぞれの両末端に連結されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトをさらに含み、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成されることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- 工程(ii)の後に、以下の工程:
(ii)’前記標的DNAの前記複数のタグ付けされたDNA断片をPCRに供し、前記少なくとも1つのDNAアダプター分子に、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトを加える工程であって、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成される工程
をさらに含む、請求項1または2に記載の方法。 - 前記インテグラーゼが、HIVインテグラーゼを包含するレトロウイルスインテグラーゼ、およびレトロウイルスインテグラーゼ由来のインテグラーゼからなる群から選択されることを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、2つの核酸分子からなり、該2つの核酸分子が、相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ互いに特異的にハイブリダイズされ、以下の群:
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択されることを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載の方法。 - 工程(ii)および/または工程(ii)’の後に、以下の工程:
(iii)前記標的DNAの前記複数のタグ付けされたDNA断片を精製する工程
をさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。 - 前記方法が1つの反応容器内で行われることを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載の方法。
- 標的DNAのタグ付けされたDNA断片を生成するためのキットであって:
(i)インテグラーゼ、および
(ii)インテグラーゼ認識サイトを含む少なくとも1つのDNAアダプター分子
を含む、キット。 - PCR反応において、前記少なくとも1つのDNAアダプター分子に、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトを加えるように構成される、少なくとも1つのPCRプライマー対をさらに含み、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成される、請求項9に記載のキット。
- 前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、オリゴヌクレオチドにアニーリングするためのサイトをさらに含み、好ましくは、オリゴヌクレオチドにアニーリングするための該サイトが、PCRプライマーおよび/またはシークエンシングプライマーにアニーリングするように構成されることを特徴とする、請求項9に記載のキット。
- 前記インテグラーゼが、HIVインテグラーゼを包含するレトロウイルスインテグラーゼ、およびレトロウイルスインテグラーゼ由来のインテグラーゼからなる群から選択されることを特徴とする、前記の請求項のいずれかに記載のキット。
- 前記少なくとも1つのDNAアダプター分子が、2つの核酸分子からなり、該2つの核酸分子が、相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ互いに特異的にハイブリダイズされ、以下の群:
アダプター1(配列番号1 + 配列番号2)、
アダプター2(配列番号3 + 配列番号2)、
アダプター3(配列番号6 + 配列番号2)、
アダプター4(配列番号7 + 配列番号2)、
アダプター5(配列番号8 + 配列番号4)、
アダプター6(配列番号9 + 配列番号4)、
アダプター7(配列番号8 + 配列番号5)、
アダプター8(配列番号9 + 配列番号5)、
アダプター9(配列番号14 + 配列番号15)、
アダプター10(配列番号10 + 配列番号11)、
アダプター11(配列番号12 + 配列番号13)
から選択されることを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載のキット。 - 標的DNAのタグ付けされたDNA断片のライブラリー生成のためのインテグラーゼの使用であって、好ましくは、該タグ付けされたDNA断片のライブラリーが、好ましくは次世代シークエンシングを介する、DNAシークエンシングのために使用されるライブラリーである、使用。
- 配列番号1〜15からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子。
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