JP2017128522A - 創傷治癒促進組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】腸内環境改善と創傷治癒とが因果関係を有するという観点から、腸内環境を改善させることによって創傷治癒を促進させる組成物を提供することを目的とする。【解決手段】乳酸菌と、酪酸菌と、糖化菌とを含むことを特徴とする創傷治癒促進組成物。【選択図】なし

Description

本発明は、腸内環境の改善がもたらす創傷治癒促進作用を好適に引き起こす組成物に関する。

従来、乳酸菌と酪酸菌、糖化菌を含有する組成物が腸絨毛を伸長させて消化吸収を向上させる効果を有することが知られている（例えば、特許文献１参照）。また、乳酸菌やビフィズス菌においては、その摂取が創傷や褥瘡の治癒促進に有用であることが知られている（例えば、特許文献２、３参照）。

特許文献１には、乳酸菌と、酪酸菌、糖化菌を含有する組成物が腸絨毛を伸長させる効果は記載されているものの、その組成物が創傷の治癒促進に有用であるかどうかについては検討されていない。また、特許文献２、３では、乳酸菌やビフィズス菌の創傷・褥瘡治癒促進に関する効果については検討されているものの、腸内環境改善効果との因果関係については検討されていない。そのため、これまで腸内環境改善効果を有するものとして知られてきた細菌が、創傷や褥瘡の治癒促進にも効果を有するか否かは未だに分かっていない。

特開２０１４−１３３７３６号公報 特開２０１１−１７８６８３号公報 特開２０１５−１２０６４６号公報

そこで本発明は、腸内環境改善と創傷治癒とが因果関係を有するという観点から、腸内環境を改善させることによって創傷治癒を促進させる組成物を提供することを目的とする。

本発明の創傷治癒促進組成物はかかる課題を解決するためになされたもので、乳酸菌と、酪酸菌と、糖化菌とを含むことを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記乳酸菌がエンテロコッカス属であることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記エンテロコッカス属がエンテロコッカス・フェカリスであることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記エンテロコッカス・フェカリスがエンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株であることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記酪酸菌がクロストリウジウム・バチリカムであることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記クロストリウジウム・バチリカムがクロストリウジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株であることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記糖化菌がバチルス・メセンテリカスであることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記バチルス・メセンテリカスがバチルス・メセンテリカスＴＯ−Ａ株であることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株であり、前記酪酸菌がクロストリウジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株であり、前記糖化菌がバチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株であることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、さらに食物繊維を含むことを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、前記食物繊維が水溶性食物繊維であることを特徴とする。
また、本発明の創傷治癒促進組成物は、経腸投与もしくは経口投与によって投与されるものであることを特徴とする。

本発明の創傷治癒促進組成物によれば、腸内環境を改善させることによって創傷治癒を促進させることができる。

創面積比の推移を示すグラフであり、（ａ）は以下に記載する実施例１の結果を、（ｂ）は実施例２の結果を示す。 上皮化率の推移を示すグラフである。 糞便検査の結果を示すグラフであり、（ａ）は腸内細菌叢の割合、（ｂ）は短鎖脂肪酸の割合を示す。 腸管組織における組織学的所見を示すグラフであり、（ａ）は小腸粘膜、（ｂ）は大腸粘膜の様子を示す。 参考試験例における創面積比の推移を示すグラフである。

本発明の創傷治癒促進組成物は、乳酸菌と、酪酸菌と、糖化菌の３種類の細菌を含む。３種類の細菌を共生させると、それぞれの細菌の増殖性が向上するため、高い腸内環境改善効果、並びに創傷治癒促進効果が得られるからである。なお、本明細書において、「腸内環境の改善」とは主に、小腸の絨毛や、大腸の腸管粘膜の萎縮が抑制されることや、腸内細菌叢が是正されることをいう。また、一般的に「創傷」とは、外的、内的要因によって起こる体表組織の物理的損傷を指すが、本明細書における「創傷」とは、切創、割創といった開放性損傷の他、擦過傷や挫傷といった非開放性の損傷、または褥瘡（例えば、「床ずれ」）の少なくとも何れか１つを含む皮膚組織の損傷をいうものとする。

創傷の治癒過程は、好中球やマクロファージといった免疫細胞による貪食処理が行われる「炎症期」、線維芽細胞が肉芽を増殖させる「増殖期」、上皮細胞が上皮を形成する「成熟期」の３段階よりなる。小腸には腸管関連リンパ組織（gut-associated lymphoid tissue;ＧＡＬＴ）と呼ばれる生体内で最大級の免疫組織が存在するため、腸内環境が改善されると、免疫細胞が賦活化し、「炎症期」の期間が短縮されうる。また、バランスのとれた腸内細菌叢は健全な腸管免疫系の形成に有効である。さらに、腸内環境が改善されると創傷治癒に必要な各栄養素の吸収が良好に行われるため、結果として創傷治癒が促進される可能性がある。

本発明の創傷治癒促進組成物に使用される乳酸菌は特に制限されず、例えば、エンテロコッカス属、ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属に属するものが挙げられる。このうち、エンテロコッカス属に属する乳酸菌を用いることが好ましく、エンテロコッカス・フェカリスを用いるのがより好ましい。さらに、エンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株を用いるのが特に好ましい。エンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株は、胃酸、胆汁酸に対して抵抗性があり、小腸下部から大腸にかけて活発に増殖し、乳酸を産生することで腸管内のｐＨを酸性に傾け有害菌の発育を抑制するためである。また、酪酸菌の増殖を促す働きもある。

本発明の創傷治癒促進組成物に使用される酪酸菌とはクロストリジウム属に属する細菌をいう。このうち、クロストリジウム・バチリカムを用いるのが好ましく、クロストリジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株を用いるのが特に好ましい。クロストリジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株は、芽胞を形成して、熱・酸・アルカリに対しての抵抗性があり、大腸で増殖し、酪酸、酢酸などの短鎖脂肪酸を産生することでｐＨを酸性に傾け、有害菌の発育を抑制するためである。これらの短鎖脂肪酸は腸管粘膜の栄養素となり、腸内環境を改善する。

本発明の創傷治癒促進組成物に使用される糖化菌とはバチルス属に属する細菌をいう。このうち、バチルス・メセンテリカスを用いるのが好ましく、バチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株を用いるのが特に好ましい。バチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株は、既に腸内に生息するビフィズス菌の助長作用および分裂促進作用を有するためである。すなわち、バチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株を投与すると腸内に元から存在するビフィズス菌が増殖し、腸内環境改善効果がもたらされる。また、バチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株により増殖したビフィズス菌は、ビタミンＢ１２および葉酸を産生する。産生されたビタミンＢ１２および葉酸は、血中のヘモグロビンを合成する。ヘモグロビンが増加すると血中の酸素を多く運搬できるようになるが、酸素は免疫細胞や繊維芽細胞の働きを活発にするため、創傷治癒がさらに促進される。

本発明の創傷治癒促進組成物における他の実施形態として、さらにオリゴ糖や食物繊維といった、いわゆるプレバイオティクスを含んでいてもよい。プレバイオティクスは、単独で投与しても腸内環境を改善する効果を有する。しかし、本発明の創傷治癒促進組成物に含まれる細菌と一緒に投与することにより、細菌の栄養源となりその増殖を助長する。また、細菌がプレバイオティクスを発酵することにより、乳酸や酢酸といった短鎖脂肪酸が産生される。短鎖脂肪酸は大腸上皮細胞から吸収され、上皮細胞の増殖や粘液の分泌、水やミネラルの吸収に寄与する。これにより、腸内環境がさらに改善され、結果として創傷治癒がさらに促進される。さらに、プレバイオティクスは、腸内に既に存在するビフィズス菌の増殖をも助けるため、ヘモグロビンの合成も促進される。プレバイオティクスとしては、短鎖脂肪酸の産生量の観点から水溶性食物繊維が好ましく、グアーガム分解物が特に好ましい。

本発明の創傷治癒促進組成物は、経腸投与もしくは経口投与によって投与されることが好ましい。本発明の創傷治癒促進組成物は公知の方法によって製剤化することができ、剤形としては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、散剤、坐剤などが挙げられる。投与量および投与回数は、投与方法、治療期間、年齢、性別、体重等により適宜設定することができる。本発明の創傷治癒促進組成物の投与時期は、創傷が形成された後、もしくは、創傷が形成される前に予防的に投与することができる。

以下、本発明の創傷治癒促進組成物を実施例に基づいて具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

［実施例１］創傷治癒促進組成物
創傷治癒促進組成物として、エンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株を１×１０^７個／１ｇ、クロストリジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株を１×１０^７個／１ｇ、バチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株を１×１０^８個／１ｇを含む生菌剤を用いた。なお、当該生菌剤は東亜薬品工業株式会社のビオスリーＨ、もしくはビオスリーＨｉ錠として入手可能である。

［実施例２］プレバイオティクスと創傷治癒促進組成物の混和物
創傷治癒促進組成物としては、実施例１と同様の生菌剤を用いた。さらに、プレバイオティクスとして、グアーガム分解物（ＰＨＧＧ）を用い、前記生菌剤と混和した。

［投与対象］
投与対象として、５週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（日本チャールズ・リバー（株））を用いた。ラットは事前に１週間の馴化飼育を行い、馴化飼育中の飼料（固形飼料ＭＦ、オリエンタル酵母工業（株））および水は自由摂取とした。室温２２±２℃、相対湿度５５±５％、照明時間１２時間という環境下の飼育室で個別飼育した。

［群分け］
ラットを、体重差が生じないように２群に分けた。このうち、一方は生菌剤を投与する「投与群」とし、もう一方は生菌剤を投与しない「対照群」とした。なお、以下の記載においては、実施例１の生菌剤を投与する群を「投与群１」、実施例２の生菌剤・ＰＨＧＧ混和物を投与する群を「投与群２」と呼ぶ。また、便宜上、「投与群１」と比較する対照群を「対照群１」、「投与群２」と比較する対照群を「対照群２」と呼ぶ。また、単に「投与群」、「対照群」と記載する場合は、投与群（対照群）１および２の両方を指す。

［投与方法］
投与群、対照群ともに、食物繊維を含まない経腸栄養剤（エンシュアＨ、アボットジャパン（株））４５ｍｌ（摂取カロリー７０ｋｃａｌに相当）を毎日投与した。経腸栄養剤は小動物用給水器（ウォーターボトルフラット７０、（株）マルカン）を使用して投与した。水は給水器から自由摂取させた。投与群１には、１日当たり生菌剤０．１ｇを蒸留水１ｍｌに混和したものを投与した。また、投与群２には、１日当たり生菌剤０．１ｇとＰＨＧＧ０．７ｇを蒸留水２ｍｌに混和したものを投与した。投与は、経口ゾンデ（ＫＮ−３４９Ｂ、（株）夏目製作所）を用い、１日２回（投与間隔８時間）に分けて麻酔下で強制経口投与した。

［創傷モデルの作製］
投与群１においては生菌剤の投与を始めて７日目に、投与群２においては生菌剤・ＰＨＧＧ混合物の投与を始めてから１４日目に、創傷モデルを作製した。創傷作製前日、ラット背部において、皮膚の状態が観察できるよう電気バリカン（ＤＣ−６、清水電気工業（株））で剃毛した後、除毛剤（エピラット、クラシエ（株））を用いて除毛した。投与群、対照群ともに、麻酔下で直径８ｍｍの生検トレパン（ＢＩＯＰＳＹＰＵＮＣＨ、カイインダストリーズ（株））を用いて背部に皮筋層を含む皮下全層欠損創傷を左右対称に２箇所作製した。対照群１、対照群２についても、投与群１もしくは投与群２と同日に創傷モデルを作製した。

［創面の処置］
創作製後、１日１回以下の処置を行った。創面に、創傷被覆材（ハイドロサイトＡＤジェントル、スミス＆ネフュー（株））を貼付後、自己剥離防止のために粘着包帯（キノプレス、日東メディカル（株））を体幹に１周巻いて固定した。

［評価］
上記方法による投与群および対照群について、以下の項目を評価した。

＜創面積比＞（全ての投与群および対照群）
創作製日を０日目とし、１日１回創面積を測定した。０日目の創面積に対する創面積比を下記の式により求めた。
創面積比（％）＝［（測定日の創面積）／（創作製日の創面積）］×１００

＜上皮化率＞（投与群２および対照群２）
全体の創傷数に対する、上皮化した創傷数の比率（％）を算出した。

＜糞便検査＞（投与群２および対照群２）
創作製前に、各群３匹のラットについて、糞便中の腸内細菌叢のＴ−ＲＦＬＰフローラ解析および短鎖脂肪酸分析を行った。

＜腸管組織の顕微鏡観察＞（投与群２および対照群２）
小腸、大腸の腸管組織を摘出し光学顕微鏡により観察した。摘出した組織は１０％中性緩衝ホルマリン液（和光純薬工業（株））で固定し、エタノール（６０〜１００％）にて脱水、キシレンにて置換した後パラフィンに包理した。パラフィンブロックよりミクロトームを用いて３μｍの薄切片を作製後、ヘマトリキシン・エオジン（ＨＥ）染色を施した。染色した組織について光学顕微鏡を用いて観察した。

［結果］
上記評価項目の結果を図１〜４に示す。

図１には、創面積比の推移を示す。図１（ａ）には実施例１における結果を示し、図１（ｂ）には実施例２における結果を示す。投与群１および投与群２の両方において、創作製後１日目より対照群１または対照群２よりも創面積比は小さい状態で推移した。

図２には、上皮化率の推移を示す。投与群２は６日目に上皮化が始まり７日目に８７．５％上皮化したが、対照群２は６日目には未だ上皮化せず、７日目の上皮化率は５０％にとどまった。すなわち、投与群２の方が早期に上皮化する割合が高いことが分かった。

図３には、糞便検査の結果を示す。図３（ａ）には糞便中の腸内細菌叢の割合を、図３（ｂ）には糞便中に存在する短鎖脂肪酸の割合を示す。図３（ａ）について、Bifidobacteriumは対照群２では３．１±１．５％に対し投与群２では１１．２±２．９％、Lactobacillales目は対照群２では２２．８±２．７％に対し投与群２では２４．１±４．６％、Bacteroidesは対照群２では１５．６±３．２％に対し投与群２では３０．６±８．７％、Clostridium subcluster XIVaは対照群２では１１．１±２．１％に対し投与群２では１３．３±３．４％であり、腸内環境の改善に効果をもたらすと言われている細菌の増殖が認められた。また、これらの細菌の増殖に伴い、その他の細菌は対照群２では３８．２±０．８％、投与群２では１４．７±６．０％と、投与群２の方が少なかった。特に、投与群２のBifidobacterium（ビフィズス菌）は、対照群２と比較して有意に高い値となった（ｐ＜０．０５）。
図３（ｂ）について、酢酸は対照群２では０．５６±０．０８ｍｇ／ｇに対し投与群２では１．３７±０.１５ｍｇ／ｇ、乳酸は対照群２では０．０８±０．０６ｍｇ／ｇに対し投与群２では０．５１±０．１ｍｇ／ｇ、酪酸は、対照群２では０．１２±０．０２ｍｇ／ｇに対し投与群２では０．１３±０．０１ｍｇ／ｇであり、すべての項目で投与群２の方が多かった。また、総短鎖脂肪酸量としても、対照群２では０．９３±０．２２ｍｇ／ｇに対し投与群２では２．２９±０．５５ｍｇ／ｇと、投与群２の方が多いことが分かった。

図４は、腸管組織における組織学的所見を示す。図４（ａ）は小腸粘膜、図４（ｂ）は大腸粘膜の様子を示す。小腸の組織学的所見では、対照群２の粘膜は投与群に比べ小腸絨毛の高さが低く、萎縮していた。大腸の組織では、対照群２において粘膜層が投与群２と比較し全体的に高さが低く萎縮していた。また、対照群２の筋層も投与群と比較し萎縮している所見が確認された。すなわち、投与群２の方が対照群２よりも腸内環境が優れているといえる。

以上の結果より、腸内環境を改善することが創傷治癒の促進に繋がることが示唆され、腸内環境改善に効果を有する組成物が創傷治癒促進組成物としても有用であると考えられる。

［参考試験例］プレバイオティクスの創傷治癒促進効果
プレバイオティクスのみを投与した場合の創傷治癒促進効果について検討した。プレバイオティクスには、実施例２と同じＰＨＧＧを使用した。投与方法において、ＰＨＧＧ０．５ｇを蒸留水１ｍｌに混和したものを投与した以外は、上記と同様の方法でラットに投与した。ＰＨＧＧを投与した群（投与群３）とＰＨＧＧを投与しなかった群（対照群１）について、上記と同様の方法によって創面積比を算出した。

図５に、参考試験例における創面積比の推移を示す。創作製後１日目より、対照群１よりも投与群３の方が創面積比は小さく推移し、投与群３の方が創傷治癒が早期に進行することが分かった。

Claims (12)

1. 乳酸菌と、酪酸菌と、糖化菌とを含むことを特徴とする創傷治癒促進組成物。
2. 前記乳酸菌がエンテロコッカス属であることを特徴とする、請求項１記載の創傷治癒促進組成物。
3. 前記エンテロコッカス属がエンテロコッカス・フェカリスであることを特徴とする、請求項２記載の創傷治癒促進組成物。
4. 前記エンテロコッカス・フェカリスがエンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株であることを特徴とする、請求項３記載の創傷治癒促進組成物。
5. 前記酪酸菌がクロストリウジウム・バチリカムであることを特徴とする、請求項１〜４の何れか一項に記載の創傷治癒促進組成物。
6. 前記クロストリウジウム・バチリカムがクロストリウジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株であることを特徴とする、請求項５記載の創傷治癒促進組成物。
7. 前記糖化菌がバチルス・メセンテリカスであることを特徴とする、請求項１〜６の何れか一項に記載の創傷治癒促進組成物。
8. 前記バチルス・メセンテリカスが、バチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株であることを特徴とする、請求項７記載の創傷治癒促進組成物。
9. 前記乳酸菌がエンテロコッカス・フェカリス Ｔ−１１０株であり、前記酪酸菌がクロストリウジウム・バチリカム ＴＯ−Ａ株であり、前記糖化菌がバチルス・メセンテリカス ＴＯ−Ａ株であることを特徴とする、請求項１記載の創傷治癒促進組成物。
10. さらに食物繊維を含むことを特徴とする、請求項１〜９の何れか一項に記載の創傷治癒促進組成物。
11. 前記食物繊維が水溶性食物繊維であることを特徴とする、請求項１０記載の創傷治癒促進組成物。
12. 経腸投与もしくは経口投与によって投与されるものであることを特徴とする、請求項１〜１１の何れか一項に記載の創傷治癒促進組成物。