JP2016537416A - 脳マラリアを治療するためのアンギオポエチンに基づいた介入 - Google Patents

Abstract

本発明は、脳マラリアを治療する、予防する、またはその重症度減少させるための方法を提供する。本発明の方法は、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１などの修飾アンギオポエチン分子を含む治療上有効な量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。

Description

本発明は、脳マラリアの治療または予防を、それを必要とする対象において行うためのアンギオポエチン分子またはその変異体の使用に関する。

脳マラリアは、地球規模の病的状態及び死亡の主要な原因であり、典型的には血液脳関門統合性の喪失及び神経障害によって特徴づけられ、それに続いて、治療にもかかわらず１５〜３０％の場合で死亡を伴う。ヒトにおける脳マラリアは、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）によって引き起こされる。脳マラリアの典型的な症候は、発熱、頭痛及び筋肉痛とそれに続く眠気、錯乱、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、昏睡、ならびに死を含む。治療選択肢は、現在キニーネまたはアルテミシニン誘導体に限られており、それは寄生虫血症を抑制するが、死亡率を減少させるには有効でない。したがって、脳マラリアを予防する、または治療する、有害な副作用を伴わない有効な治療的及び予防的アプローチに対する満たされていない需要が当該技術において存在する。

本発明の一つの態様によれば、方法が、対象における脳マラリア（たとえば、実験的な脳マラリア、熱帯熱マラリア、その他を含む）の少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、予防する、または改善するために提供される。本発明のこの態様に従った方法は、アンギオポエチンもしくは修飾アンギオポエチンタンパク質またはこれらの断片を含む治療上有効な量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。

ある特定の実施形態において、少なくとも１つの症候、兆候または合併症は、発熱、頭痛及び筋肉痛とそれに続く眠気、錯乱、血管漏出、血液脳関門統合性の喪失、内皮マーカーの血中濃度上昇、脳における寄生された赤血球の隔離、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、脾腫、反射及び自己防衛の喪失、衛生関連行動の欠如、急性肺傷害、痙攣、昏睡、ならびに死からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、内皮マーカーは、アンギオポエチン−１（Ａｎｇ１）、アンギオポエチン−２（Ａｎｇ２）、アンギオポエチン受容体Ｔｉｅ２、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、ＩＰ−１０、Ｅセレクチン及び血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）からなる群より選択される。

もう一つの本発明の態様によれば、方法が、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）感染後の対象の生存を改善する、または増加させるために提供される。方法は、アンギオポエチンもしくは修飾アンギオポエチンタンパク質またはこれらの断片を含む治療上有効な量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。関連した態様において、本発明は、血管漏出を予防する、または血液脳関門統合性を保護するための方法を提供し、方法は、治療上有効な量の修飾アンギオポエチンタンパク質またはその断片を含む医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。

もう一つの態様において、本発明は、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種に感染した対象における重篤な脳マラリアを予防するための方法を提供し、方法は、０．１％を超える寄生虫血症をもつ対象を選択すること、及び治療上有効な量の修飾アンギオポエチンタンパク質またはその断片を含む医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。

ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンの投与を、それを必要とする対象に行うことは、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、反射及び自己防衛の喪失、記憶障害及び情動障害を含む長期神経認知傷害及び機能障害、衛生関連行動の欠如、痙攣及び引き付けまたは発作からなる群より選択される神経障害の少なくとも１つの兆候を予防する。

ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、第２の治療薬または療法と組み合わせて投与される。ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、たとえば、アルテスナートなどの第２の治療薬と一緒に補助療法として投与される。

本発明の方法の状況において使用され得る例示的なアンギオポエチン分子は、たとえばアンギオポエチン−１、組換えアンギオポエチン（たとえば、アデノウイルスベクターで発現されるアンギオポエチン−１）及び修飾アンギオポエチン（たとえば、アンギオポエチンまたはその断片を含む融合タンパク質）を含む。ある特定の実施形態では、修飾アンギオポエチンは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ断片に融合され、及び次いで四量体にされたアンギオポエチンのフィブリノーゲン様ドメインからなる融合タンパク質である（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ ２００３， Ｎａｔ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． １０： ３８−４４）。ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、Ｃ−末端にてＦｃ断片のＮ−末端に融合されたアンギオポエチンの第１のフィブリノーゲン様ドメイン、及びＣ−末端にてアンギオポエチンの第２のフィブリノーゲン様ドメインのＮ−末端に融合されたＦｃ断片を含む融合タンパク質を含む。

本発明の方法の状況において使用され得る、そのようなタイプの修飾アンギオポエチンの１つは、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１（配列番号２）である。

ある特定の実施形態において、本発明は、ヒトを含む対象における脳マラリアを治療する、または抑制する、または予防するための医薬の製造における本発明のアンギオポエチンもしくは修飾アンギオポエチンタンパク質またはこれらの断片の使用を提供する。

もう一つの態様において、本発明は、対象における脳マラリア（たとえば、実験的な脳マラリア、熱帯熱マラリア、その他を含む）の少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、予防する、または改善するための方法を含む。本発明のこの態様に従った方法は、抗Ｔｉｅ２抗体またはその抗原結合断片を含む治療上有効な量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。ある特定の実施形態において、抗Ｔｉｅ２抗体は、活性化またはアゴニスト抗体である。

本発明のその他の実施形態は、次の詳細な説明を考察することにより明らかになるだろう。

齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）に感染したＣ５７Ｂｌ／６（実験的な脳マラリア感受性、ＥＣＭ−Ｓ）及びＢＡＬＢ／ｃ（実験的な脳マラリア耐性；ＥＣＭ−Ｒ）マウスの生存曲線を示す。 ＰｂＡに感染したＥＣＭ−Ｓ及びＥＣＭ−Ｒマウスにおける急速マウス昏睡及び行動スコア（ＲＭＣＢＳ）における倍数変化パーセントを示す。 ＰｂＡに感染したＥＣＭ−Ｒ及びＥＣＭ−Ｓマウスの脳から抽出されたエバンスブルー色素の比較レベルを示す。 ＰｂＡに感染したＥＣＭ−Ｓ及びＥＣＭ−Ｒマウスにおける寄生虫血症パーセントを示す。 ＰｂＡ感染の過程にわたるＡｎｇ−１血清レベルを示す。^***ｐ＜０．０００１（時間）、^*ｐ＜０．０５（株）及び^**ｐ＜０．００１（示した比較についてのボンフェローニ事後試験を伴う二元配置ＡＮＯＶＡ）。 図６（ａ）は、ＲＭＣＢＳ（％）及び血清Ａｎｇ−１レベル（ｎｇ／ｍｌ）＊ナイーブと比較したｐ＜０．０５、一元配置ＡＮＯＶＡである。図６（ｂ）は、血清Ａｎｇ１レベル（ｎｇ／ｍｌ）と死までの時間（時間）との間の線形回帰分析（スピアマン相関、ｒ値、ｐ＜０．０００１）を示す散布図を描写する。 ＰｂＡ感染後のＥＣＭ−Ｒ及びＥＣＭ−ＳマウスにおけるＡｎｇ２タンパク質の相対レベルを示す。 ＰｂＡに感染後６日目のＥＣＭ−Ｒ及びＥＣＭ−ＳマウスにおけるｖＷＦタンパク質レベルを示す。 ＰｂＡ感染後ＥＣＭ−Ｒ及びＥＣＭ−ＳマウスにおけるＴｉｅ２ ｍＲＮＡの相対レベルを示す。 ＰｂＡに感染し、抗Ａｎｇ２抗体（ｍＡｂ『Ｂ』）、アイソタイプ対照（ｍＡｂ『Ａ』）または生理食塩水で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスの生存曲線を示す。 ＰｂＡに感染し、及び抗Ａｎｇ２抗体（ｍＡｂ『Ｂ』）、アイソタイプ対照（ｍＡｂ『Ａ』）または生理食塩水で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＲＭＣＢＳの倍数変化パーセントを示す。 抗Ａｎｇ２抗体（ｍＡｂ『Ｂ』）、アイソタイプ対照（ｍＡｂ『Ａ』）または生理食塩水で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＰｂＡ感染後７日目の寄生虫血症パーセントを示す。 ナイーブＣ５７Ｂｌ／６マウス（斜線のバー）またはＰｂＡに感染し、抗Ａｎｇ２抗体（ｍＡｂ『Ｂ』）（灰色のバー）またはアイソタイプ対照（ｍＡｂ『Ａ』）（黒色のバー）で処置したマウスにおける（ａ）ｖＷＦ及び（ｂ）Ｅセレクチン、ＩＣＡＭ及びＶＣＡＭの血漿タンパク質レベルを示す。 ＰｂＡに感染し、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１、Ｆｃ対照、抗Ａｎｇ２抗体、二重抗−Ａｎｇ１／Ａｎｇ２抗体（「比較対照」）または生理食塩水で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスの生存曲線を示す。 ＰｂＡに感染し、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１、Ｆｃ対照、抗Ａｎｇ２抗体、二重抗−Ａｎｇ１／Ａｎｇ２抗体（「比較対照」）または生理食塩水で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける寄生虫血症パーセントを示す。 図１６（ａ）は、ＰｂＡに感染し、Ｆｃ対照（Ａ）、抗Ａｎｇ２抗体（Ｂ）、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１（Ｃ）または抗Ａｎｇ１／Ａｎｇ２比較対照抗体（Ｄ）で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスの脳から抽出されたエバンスブルー色素のレベルを示す。図１６（ｂ）は、ＰｂＡに感染し、Ｆｃ対照（Ａ）、抗Ａｎｇ２抗体（Ｂ）、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１（Ｃ）または抗Ａｎｇ１／Ａｎｇ２「比較対照」抗体（Ｄ）で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける寄生虫血症パーセントを示す。 図１７（ａ）は、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはアイソタイプ対照で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＰｂＡ感染後６日目のＲＭＣＢＳにおける変化パーセントを示す。図１７（ｂ）は、ＰｂＡに感染し、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはアイソタイプ対照で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＲＭＣＢＳにおける７日間にわたる変化パーセントを示す。 図１８（ａ）は、ＰｂＡに感染し、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはアイソタイプ対照で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける寄生虫血症パーセントを示す。図１８（ｂ）は、ＰｂＡに感染し、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはアイソタイプ対照で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスの重量倍数変化パーセントを示す。 ナイーブＣ５７Ｂｌ／６マウス、及びＰｂＡに感染し、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはＦｃ対照で処置したマウスのサイトカインＴＮＦα及びＩＦＮγ（ａ）、ｖＷＦ（ｂ）、Ｅセレクチン、ｓＩＣＡＭ、ならびにＶＣＡＭ−１（ｃ）の血漿タンパク質レベルを示す。 ＰｂＡに感染し、アルテスナート＋ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１、アルテスナート＋生理食塩水または生理食塩水で処理したＣ５７Ｂｌ／６マウスの生存曲線を示す。 図２１（ａ）は、ＰｂＡに感染し、及びアルテスナート＋ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはアルテスナート＋生理食塩水で処置したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける寄生虫血症パーセントを示す。図２１（ｂ）は、ＰｂＡに感染し、アルテスナート＋ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１またはアルテスナート＋生理食塩水で処理したＣ５７Ｂｌ／６マウスの重量倍数変化パーセントを示す。

詳細な説明
本発明が記載される前に、本発明は、記載される特定の方法及び実験条件に限定されないことが理解されるべきである。それは、このような方法及び条件は変化し得るからである。また、本明細書において使用される用語は特定の実施形態のみを記載するためのものであり、本発明の範囲は添付の請求の範囲によってのみ限定されるので、限定することを意図しないことが理解されるべきである。

別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に使用される「約」という用語は、特定の列挙された数値に関して使用される場合、値が１％以下で列挙された値から変化し得ることを意味する。たとえば、本明細書に使用される、表現「約１００」は、９９及び１０１並びに間の全ての値を含む（たとえば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、等）。

本明細書において記載したものに類似または均等の任意の方法及び材料が、本発明の実施において使用することができるが、好ましい方法及び材料をここで記載する。本明細書において言及される全ての刊行物は、それらの全体を記載するように参照により本明細書に援用される。

脳マラリアを治療する、予防する、または改善するための方法
脳マラリア病原性は、内皮活性化及び血液脳関門統合性の喪失と関連する。アンギオポエチン−Ｔｉｅ２シグナリング経路は、内皮機能の重要な制御因子である。血管形成バランス、特にＡｎｇ１と比較して特に増加したアンギオポエチン−２（Ａｎｇ２）における変化は、脳マラリアにおける不良臨床予後と関連づけられている（Ｙｅｏ ｅｔ ａｌ，
２００８ ＰＮＡＳ； Ｌｏｖｅｇｒｏｖｅ ｅｔ ａｌ ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２００９； Ｅｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２０１１； Ｃｏｎｒｏｙ ｅｔ ａｌ ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２０１１）。しかし、Ａｎｇ−Ｔｉｅ２経路が脳マラリア病原性に原因として関わるかどうかは、不明である。本発明者らは、アンギオポエチンの調節異常が脳マラリア病原性に寄与し、及びしたがって、Ｔｉｅ２活性化を維持する介入が内皮安定度を促進し、血液脳関門への有害作用を防ぎ、及びプラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）感染に続く予後を改善し得ると仮定した。したがって、修飾アンギオポエチンが、感染した対象に投与されるときに、血液脳関門統合性を保護し、及び神経障害及び死を予防することが本明細書において示される。本明細書において他の所に開示するように、本発明者らは、疾患重症度及び死亡と関連するアンギオポエチンにおける変化を研究し、及びＡｎｇ／Ｔｉｅ２軸の調節異常が疾患重症度及び死亡と関連することを示すために、周知の齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）で誘導された実験的な脳マラリア（ＥＣＭ）のマウスモデルを使用した。本明細書において示すように、Ａｎｇ１は、脳マラリアのマウスモデルにおける罹患率及び死亡率と逆に相関する。本明細書において示した研究に基づくと、Ａｎｇ１が致死マラリア曝露に応答して血液脳関門統合性を維持するのに必要であり、従来の治療（たとえば、アルテスナート）単独によって達成されるよりも生存を改善することができることが確立される。さらに、修飾アンギオポエチンの投与は、寄生虫隔離及び脳マラリア病原性に関係するプロ−接着分子のダウンレギュレーションを介して、血液脳関門統合性を増強して、静止内皮の維持を促進した。

したがって、本発明は、対象における脳マラリア（たとえば、実験的な脳マラリア、熱帯熱マラリア、その他を含む）の少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、予防する、または改善するための方法を含む。本発明のこの態様に従った方法は、修飾アンギオポエチンタンパク質またはその断片を含む治療上有効な量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。

本明細書に使用される「脳マラリア」（ＣＭ）は、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種によって引き起こされ、及び血液脳関門統合性の喪失及び神経障害によって特徴づけられる感染性疾患を意味する。ＣＭの症候は、発熱、頭痛及び筋肉痛とそれに続く眠気、錯乱、血管漏出、血液脳関門統合性の喪失、内皮マーカーの血中濃度上昇、脳における寄生された赤血球の隔離、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、脾腫、反射及び自己防衛の喪失、衛生関連行動の欠如、急性肺傷害、痙攣、引き付け、昏睡、ならびに死を含むが、限定されない。ＣＭの臨床病理は、脳細静脈及び毛細血管における感染した赤血球の隔離、続く内皮活性化によって特徴づけられる。「脳マラリア」という用語は、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）によってヒトに引き起こされる重篤な脳マラリア及び齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡによってマウスに引き起こされる実験的な脳マラリア（ＥＣＭ）を含むが、限定されない。

本明細書に使用される「治療」、「治療する」または同様の用語は、対象における脳マラリアの症候または合併症を緩和し、一時的または永続的のいずれかに症候または合併症の原因を排除する、または症候または合併症の出現を予防する、または遅らせることを意味する。本発明の文脈において、「治療」、「治療する」または同様の用語は、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種に感染した対象における死亡率を減少させる、または低下させることを指す。また、当該用語は、脳マラリアに罹患する対象における血液脳関門統合性の喪失及び神経障害を予防することを指す。ある特定の実施形態において、本方法は、発熱、頭痛及び筋肉痛とそれに続く眠気、錯乱、血管漏出、血液脳関門統合性の喪失、内皮マーカーの血中濃度上昇、脳における寄生された赤血球の隔離、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、脾腫、反射及び自己防衛の喪失、衛生関連行動の欠如、急性肺傷害、痙攣、引き付け、昏睡、ならびに死を含むが、限定されない脳マラリアの少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、または改善するのに有用である。

「治療上有効な量」という表現は、それが投与される所望の効果を生み出す量を意味する。正確な量は、治療の目的に依存し、及び公知の技術を使用して当業者によって確認可能だろう（たとえば、Ｌｌｏｙｄ （１９９９） Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。

本明細書に使用される「対象」という用語は、脳マラリアの１つまたは複数の症候、兆候または合併症を示し、及び／または脳マラリア（ＣＭ）と診断された、及び／または脳マラリアの改善、予防及び／または治療の必要のある動物、好ましくは哺乳動物をいう。また、「それを必要とする対象」という用語は、たとえば治療の前に、脳マラリアの１つまたは複数の症候または兆候、たとえば発熱頭痛及び筋肉痛とそれに続く眠気、錯乱、血管漏出、血液脳関門統合性の喪失、内皮マーカーの血中濃度上昇、脳における寄生された赤血球の隔離、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、脾腫、反射及び自己防衛の喪失、衛生関連行動の欠如、急性肺傷害、痙攣、引き付け、昏睡、ならびに死などを示す（または示した）対象を含み得る。

本発明の文脈において、「それを必要とする対象」は、集団のサブセットを含み得る、それは内皮マーカーのレベル上昇を示し得る。このような対象集団は、たとえばＡｎｇ１、Ａｎｇ２、Ｔｉｅ２、ｖＷＦ、ＩＣＡＭ−１、Ｅセレクチン及びＶＣＡＭ−１などの内皮マーカーのレベル上昇を示し得る。

本発明の方法は、高齢者を含む成人における脳マラリアを治療するのに使用されてもよい。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、５０歳を超える、５５歳を超える、６０歳を超える、６５歳を超えるまたは７０歳を超える成人を治療するのに使用される。

いくつかの実施形態において、本明細書における方法は、３歳以下である子供における脳マラリアを治療するのに使用されてもよい。たとえば、本方法は、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月未満または１２ヵ月未満である乳児を治療するのに使用されてもよい。他の実施形態において、本発明の方法は、３歳を超える、４歳、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳を超える、または１５歳を超える子供を治療するのに使用されてもよい。

また、本発明は、脳マラリアをもつ対象における生存を増加させるための方法を含む。本発明のこの態様に従った方法は、修飾アンギオポエチンを含む１つまたは複数の用量の医薬組成物を対象に投与して、対象における生存を増加させることを含む。

また、本発明は、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種に感染した対象における重篤な脳マラリアを予防する方法を含み、方法は、それを必要とする対象に修飾アンギオポエチンを含む治療上有効な量の医薬組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、外因性タンパク質として投与される。

本明細書に使用される「予防する」という用語は、疾患の発症を予防することをいう。また、本明細書に使用される当該用語は、血管漏出を予防すること、血液脳関門統合性及び病原体の感染による発作及びまひなどの神経症候の発症を保護すること含む。いくつかの実施形態において、当該用語は、脳マラリア（実験的な脳マラリアを含む）の重要な病理学的特徴である内皮機能不全を予防することをいう。

本発明は、それを必要とする対象に修飾アンギオポエチンを含む治療上有効な量の医薬組成物を投与することを含む脳マラリアの重症度を治療する、予防する、または減少させるための方法を含む方法を含み、医薬組成物は、たとえば特定の治療投与計画の一部として複数の用量で対象に投与される。たとえば、治療投与計画は、約１日に１回、２日毎に１回、３日毎に１回、４日毎に１回、５日毎に１回、６日毎に１回、一週間に１回、二週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回の頻度で、またはより少ない頻度で対象に複数の用量の医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、治療投与計画は、約１日に１回、１日に約２回、１日に約３回または１日に４回を超える頻度で対象に複数の用量の医薬組成物を投与することを含む。

ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、それを必要とする対象に皮下に、静脈内に、頭蓋内に、脳室内に投与される、またはアデノウイルスベクターにおいて全身的に送達される。

本発明の方法は、ある特定の実施形態に従って、第２の治療薬と組み合わせて修飾アンギオポエチンを含む治療上有効な量の医薬組成物を対象に投与することを含む。第２の治療薬は、アルテミシニン、キニーネまたはそれらの変異体もしくは誘導体（たとえば、アルテスナート）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［たとえば、アフリベルセプトなどの「ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ」またはＵＳ７，０８７，４１１に記載のその他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質もしくは抗ＶＥＧＦ抗体またはこれらの抗原結合断片（たとえば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）］、活性化抗Ｔｉｅ２抗体、Ａｎｇ２アンタゴニスト、抗ヒスタミン剤及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）からなる群より選択される薬剤であり得る。本明細書に使用される「と組み合わせて」という表現は、修飾アンギオポエチンを含む医薬組成物が、第２の治療薬の投与と同時に、それの直前または直後に対象に投与されることを意味する。ある特定の実施形態において、第２の治療薬は、修飾アンギオポエチンとの共製剤として投与される。

また、本発明は、対象における脳マラリアの少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、予防する、または改善するために方法を含み、方法は、抗Ｔｉｅ２抗体またはその抗原結合性断片を含む治療上有効な量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。ある特定の実施形態において、抗Ｔｉｅ２抗体は、活性化またはアゴニスト抗体であり、たとえば、抗体はＴｉｅ２への結合の際にＴｉｅ２の活性を増加させる、またはさもなければＴｉｅ２シグナリングを刺激する。ある特定の実施形態において、抗Ｔｉｅ２抗体は、ＵＳ２０１３０２０９４９２に記載の抗体である。抗Ｔｉｅ２抗体は、対象の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの投薬量で皮下に、静脈内に、または頭蓋内に投与されてもよい。ある特定の実施形態において、活性化抗Ｔｉｅ２抗体は、第２の活性化抗Ｔｉｅ２抗体と組み合わせてそれを必要とする対象に投与される。

もう一つの態様において、本発明は、対象におけるＡｎｇ−Ｔｉｅ２経路の機能不全と関連する疾患または障害の少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、予防する、または改善するための方法を含む。方法は、それを必要とする対象に修飾アンギオポエチンタンパク質またはその断片を含む治療上有効な量の医薬組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、アンギオポエチンまたはその変異体は、脳マラリア、敗血症、炭疽病、デング熱、出血熱（ウイルス出血熱、たとえば、ラッサ熱、黄熱病及びエボラ熱を含む）、毒素ショック症候群、ＨＵＳ、出血性ショック（外傷、たとえば、ＩＥＤ（簡易爆発物）による大量失血のためのモデル）、虚血再灌流、溶血性尿毒症症候群、心筋梗塞及び脳卒中を含む疾患または障害の少なくとも１つの症候または兆候を治療する、予防する、または改善するのに使用されてもよい。

修飾アンギオポエチン
本発明の方法は、アンギオポエチンまたはその変異体を含む治療組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。本明細書に使用される「アンギオポエチン」は、アンギオポエチン−１（Ａｎｇ１）またはアンギオポエチン−２（Ａｎｇ２）を含む。

修飾アンギオポエチンのカテゴリーの非限定的な例は、組換えアンギオポエチン（たとえば、アデノウイルスベクターにおいて発現したアンギオポエチン；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ ２０００， Ｎａｔ． Ｍｅｄ．）、アンギオポエチンの突然変異体及びキメラ形態並びにＴｉｅ１及び／またはＴｉｅ２受容体を特異的に結合するアンギオポエチンまたはその断片を含む融合タンパク質を含む。

本発明のある特定の例示的実施形態に従って、修飾アンギオポエチンは、多量体化ドメインに融合したアンギオポエチン分子の１つまたは複数のドメインを含む融合タンパク質である。一般論として、本発明の多量体化ドメイン（群）は、アンギオポエチン分子（たとえば、フィブリノーゲン様ドメイン）の種々の成分を互いに接続するように機能する。本明細書に使用される「多量体化ドメイン」は、同じまたは類似の構造または構成の第２の高分子と（共有結合または非共有結合で）結合する能力を有する任意の高分子である。たとえば、多量体化ドメインは、免疫グロブリンＣ_H３ドメインを含むポリペプチドでもよい。多量体化ドメインの非限定的な例は、免疫グロブリンのＦｃ部分、たとえばアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４並びにそれぞれのアイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメインである。ある特定の実施形態において、多量体化ドメインは、Ｆｃ断片または少なくとも１つのシステイン残基を含む１〜約２００アミノ酸の長さのアミノ酸配列である。その他の実施形態において、多量体化ドメインは、システイン残基または短いシステイン含有ペプチドである。その他の多量体化ドメインは、ロイシンジッパー、ヘリックス−ループモチーフまたはコイルドコイルモチーフを含む、またはそれらからなるペプチドまたはポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．７，００８，７８１に記載されたとおりの、アミノ酸配列のいずれかを含む免疫グロブリンのＦｃ断片に融合したアンギオポエチン−１分子の１つまたは複数のフィブリノーゲン様ドメインを含む融合タンパク質である。ある特定の例示的実施形態において、本発明の方法の文脈において使用され得る融合タンパク質は、Ｃ−末端にてＩｇＧ Ｆｃ断片のＮ−末端に融合したアンギオポエチンの第１のフィブリノーゲン様ドメイン、及びアンギオポエチンの第２のフィブリノーゲン様ドメインのＮ−末端に融合したＦｃ断片のＣ−末端を含むタンパク質であって（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ２００３）、アンギオポエチンは、Ａｎｇ１またはＡｎｇ２でもよい。ある特定の例示的実施形態では、本発明の方法は、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１として参照され、及び当該技術分野において公知の修飾アンギオポエチンの使用を含む。ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、Ｆｃ断片の分子内会合を介して結合する２つのＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１を含む二量体である（また、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ２００３に開示されたようにＢｏｗＡｎｇ１として参照される）。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。

本発明の方法の文脈において使用され得るその他の修飾アンギオポエチンは、ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．６２６５５６４、６４４１１３７及び６８２５００８に記載されたような、修飾アンギオポエチン分子のいずれかを含む。

ある特定の実施形態において、アンギオポエチンまたはその変異体は、敗血症、デング熱、出血熱（ウイルス出血熱、たとえば、ラッサ熱、黄熱病及びエボラ熱を含む）、毒素ショック症候群、ＨＵＳ、出血性ショック（外傷、たとえば、ＩＥＤ（簡易爆発物）による大量失血のためのモデル）、虚血再灌流、溶血性尿毒症症候群、心筋梗塞及び脳卒中を含む疾患または障害の少なくとも１つの症候または兆候を治療する、予防する、または改善するのに使用されてもよい。

医薬組成物
本発明は、対象に修飾アンギオポエチンを投与することを含む方法を含む方法を含み、修飾アンギオポエチンは、医薬組成物内に含まれる。本発明の医薬組成物は、適切な移動、送達、耐性及び同様のものを提供する適切な担体、賦形剤及びその他の薬剤とともに製剤化されてもよい。多数の適切な製剤が、全ての薬学的化学者に公知の処方集に見いだされることができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ。これらの製剤は、たとえば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ろう、油、脂質、脂質を含む小胞（陽イオンまたは陰イオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル及びカルボワックスを含む半固体混合物を含む。また、Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ． “Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ” ＰＤＡ （１９９８） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１を参照されたい。

種々の送達系が公知であり、及び本発明の医薬組成物を投与するのに使用され得、たとえば、リポソームにおけるカプセル化、微小粒子、マイクロカプセル、突然変異体ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（たとえば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， １９８７， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２： ４４２９−４４３２を参照されたい）である。投与の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内の、皮下、鼻腔内、硬膜外及び経口経路を含むが、限定されない。組成物は、たとえば注入またはボーラス注入によって、上皮性または粘膜内膜（たとえば、口腔粘膜、直腸及び腸管粘膜、その他）を介する吸収によって、任意の都合の良い経路によって投与されてもよく、及びその他の生物活性薬と共に投与されてもよい。

本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器で皮下または静脈内に送達されることができる。加えて、皮下送達に関して、ペン送達装置が、容易に本発明の医薬組成物を送達するのに用途を見出す。このようなペン送達装置は、再使用可能または使い捨て可能である。再使用可能なペン送達装置は、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを一般に利用する。一旦カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、及びカートリッジが空となると、空のカートリッジは、容易に捨てられ、及び医薬組成物を含む新たなカートリッジと取り換えられることができる。次いで、ペン送達装置は、再利用されることができる。使い捨てペン送達装置においては、交換可能カートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達装置は、装置内の貯蔵所に保持される医薬組成物で予備充填される。一旦貯蔵所の医薬組成物が空にされると、全ての装置は捨てられる。

ある特定の状況において、医薬組成物は、徐放系で送達することができる。一つの実施形態において、ポンプが使用されてもよい。もう一つの実施形態において、重合体材料を使用されることができる。Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ （ｅｄｓ．）， １９７４， ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらにもう一つの実施形態において、徐放系は、組成物の標的の付近に置くことができ、したがって、全身用量のほんの一部のみを必要とする（たとえば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， １９８４， ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， ｓｕｐｒａ， ｖｏｌ． ２， ｐｐ． １１５−１３８を参照されたい）。他の徐放系が、Ｌａｎｇｅｒ， １９９０， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３による総説において考察されている。

注射可能な調合剤は、静脈内、皮下、皮内及び筋肉内の注射、点滴、その他のための剤形を含んでいてもよい。これらの注射可能な調合剤は、公知の方法によって調製され得る。たとえば、注射可能な調合剤は、たとえば従来の注射のために使用される無菌水性溶媒または油性溶媒に上記の抗体またはその塩を溶解する、懸濁する、または乳化することによって調製されてもよい。使用してもよい、注射のための水性溶媒として、たとえば、生理的食塩水、グルコース及び他の補助薬剤などを含む等張液があり、それは、アルコール（たとえば、エタノール）、多価アルコール（たとえば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤［たとえば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用されてもよい。油性溶媒として、たとえば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、それは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール、その他などの可溶化剤と組み合わせて使用されてもよい。したがって、調製された注射が適切なアンプルに好ましくは満たされる。

好都合には、上記の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適する単位用量の剤形に調整される。単位用量のこのような剤形は、たとえば錠剤、丸薬、カプセル、注射（アンプル）、坐薬などを含む。

用量
本発明の方法に従って対象に投与される修飾アンギオポエチン（たとえば、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１）の量は、一般に治療上有効な量である。本明細書に使用される「治療上有効な量」という表現は、（ａ）重篤な脳マラリアの症候、兆候または合併症の重症度または期間の減少、（ｂ）増加した生存、（ｃ）血液脳関門統合性の保護、及び（ｄ）対象における神経障害の予防のうちの１つまたは複数を生じる修飾アンギオポエチンの量を意味する。

修飾アンギオポエチンの場合において、治療上有効な量は、約０．０５ｍｇ〜約６００ｍｇ、たとえば、約０．０５ ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇまたは約６００ｍｇの修飾アンギオポエチンであり得る。

個々の用量内に含まれる修飾アンギオポエチンの量は、対象の体重のキログラムあたりのタンパク質のミリグラムとして表され得る（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）。たとえば、修飾アンギオポエチンは、約０．０００１〜約１００ｍｇ／患者の体重ｋｇの用量で対象に投与されてもよい。ある特定の実施形態において、修飾アンギオポエチンは、約５〜２５ｍｇ／対象の体重ｋｇの用量でそれを必要とする対象に投与される。

以下の例は、本発明の方法及び組成物を作製し、及び使用する方法の完全な開示及び記載を当業者に提供するように提示され、及び本発明者らが彼らの発明と考えるものの範囲を限定することは意図されない。使用される数値（たとえば、量、温度、その他）に関して精度を保証するための努力はなされたが、いくらかの実験誤差及び偏差は、考慮されるべきである。別途示されない限り、部分は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、及び圧力は大気圧、またはその近くである。

実施例１：マウスの齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（Ｐｂａ）誘導の実験的な脳マラリア（ＥＣＭ）における内皮調節因子における変化
この実施例において、マウスモデルにおける、齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）で誘導された実験的な脳マラリアの内皮制御因子の変化について研究した。このモデルは、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスが、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）に感染したヒトにおける脳マラリアの症候及び疾患発症に匹敵する神経性症候をもつ重篤な、最終的に致命的な疾患を作り出すマウス寄生虫齧歯類マラリア原虫（Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡに感受性があるという観察に基づく。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスとは対照的に、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、感染し、及び類似の、または時にはより高いレベルの寄生虫濃度を達成するが、脳症を発症しないという点においてＰｂＡに耐性がある。この研究は、Ａｎｇ／Ｔｉｅ２軸の調節異常が疾患重症度及び死亡と関連したことを示した。さらに、Ａｎｇ１は、脳マラリアのマウスモデルにおける罹患率及び死亡率と逆に相関した。

材料及び方法
ＰｂＡにより誘導されたＥＣＭモデル：感染
凍結保存齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ；ＭＲ４、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）をナイーブＣ５７Ｂｌ／６マウスを介して継代した。実験のために、感染を、ドナー継代マウスから得た新たに単離された寄生された赤血球（ＰＥ）１×１０⁶個の腹腔内（ｉｐ）注射によって、Ｃ５７Ｂｌ／６及びＢＡＬＢ／ｃマウスに開始した。寄生虫血症を少なくとも１５００個の赤血球を計数することによって、修飾ギムザ染色法（Ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｈｅｍａ３ Ｓｔａｉｎ Ｓｅｔ，Ｓｉｇｍａ，Ｏａｋｖｉｌｌｅ， ＯＮ）で染色された薄層血液塗抹標本によってモニターした。感染したマウスを生存、神経障害、血管漏出、寄生虫負荷ならびに血管形成因子及び内皮活性化のマーカーのレベルについてモニターした。

生存及び健康状態の評価
マウスの感染後生存を比較のためにログランク検定を使用してカプラン・マイヤー曲線としてプロットした。ＥＣＭ関連神経障害（損なわれた協調及び運動行為）の定量的評価をＣａｒｒｏｌｌ ＲＷ， ｅｔ ａｌ． ２０１０ ｉｎ ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５： ｅ１３１２４によって以前に記載されたように、１０パラメーターの急速マウス昏睡及び行動スコア（ＲＭＣＢＳ）を使用して毎日行った。ＥＣＭの徴候は、損なわれたバランス／協調、運動障害（運動失調、片まひ／対まひ）、反射及び自己防衛の喪失、衛生関連行動（身繕い）の欠如及び／または引き付けを含む。それぞれのパラメーターについて、スコアを最も低い機能を示す０及び最も高い２のスコアで、０〜２を割り当てた。それぞれのマウスに対する総スコアを総可能スコアの割合（％）として算出し、及び提供した。３５％以下のスコアをもつマウスを、重篤なＥＣＭを有するとみなした。

エバンスブルー透過性アッセイ
脳における血管透過性をエバンスブルー（ＥＢ）色素を使用して評価した。マウスにＥＣＭの臨床徴候が観察されたときに、０．１ｍＬの１％エバンスブルー色素溶液（フィルタ滅菌されたＰＢＳ中のエバンスブルー粉末；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、尾静脈を経て静脈内に注射した。マウスを１時間後にイソフルラン（９９．９％吸入麻酔薬）で安楽死させ、５０ｍＬのＰＢＳ（１×）で潅流した。脳を無菌的に解剖し、重さを量り、撮影し、及び１ｍＬ Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミドに４８時間室温に置いて組織からの色素を抽出した。吸光度を６２０ｎｍで測定した。濃度をＥＢ色素の標準曲線を使用して算出し、及び脳組織のグラムあたりのｎｇ色素として表した。

内皮活性化のサイトカインマーカーの検出
末梢全血をヘパリン化されたチューブ（Ｓｔａｒｓｔｅｄｔ）に、０日目（ｄ ０、ＰｂＡ感染より前）及び感染後６日目に伏在静脈穿刺によって収集した。血漿を１５分間１０００×ｇで遠心分離によって全血試料から単離した。血漿試料を分注し、分析まで−８０℃で貯蔵した。可溶性形態におけるマウス細胞間接着分子−１（ｓＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４）、Ｅ−セレクチン（ｓＥ− Ｓｅｌ／ＣＤ６２Ｅ）及び血管細胞接着分子−１（ｓＶＣＡＭ−１／ＣＤ１０６）のレベルを製造業者プロトコルに従って、市販のマウスＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＵＳＡ）を使用して血漿において決定した。フォン・ヴィレブランド因子抗原（ｖＷＦ：Ａｇ）のレベルを以下の通りにＥＬＩＳＡによって血清において測定した。９６ウェルＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ）を０．０１Ｍ ＰＢＳ中のポリクローナル抗体抗ヒトｖＷＦ（１：６００， Ｄａｋｏ， Ｇｌｏｓｔｒｕｐ， Ｄｅｎｍａｒｋ）で４℃にて一晩被覆した。マウス血清を１％ ＢＳＡ−ＰＢＳ中のプレートにまき、結合したｖＷＦ：Ａｇを西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ポリクローナル抗体抗ヒトｖＷＦ（１：８０００， Ｄａｋｏ）で検出した。プレートを３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質溶液で発色させ、比色反応をＨ₂ＳＯ₄で止めた後吸光度を４５０ｎｍで読み込んだ。ｖＷＦ：Ａｇ濃度をそれぞれのプレート上に含む新鮮凍結血漿（１：５００， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ， Ｓｔａｍｆｏｒｄ， ＣＴ）から公知の濃度のヒトｖＷＦで作り出される標準曲線から補間した。ＩＦＮ−ガンマ及びＴＮＦ−アルファを製造業者のプロトコルに従って、市販のマウスＥＬＩＳＡキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して血漿において決定した。

統計分析
統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン４．００（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）を使用して行った。マウスの感染後生存をカプラン・マイヤー曲線としてプロットし、及びログランク検定を使用して評価した。生存試験を特に明記しない限り三連で、プールされたデータにおいて行った。シャピロ・ウィルク検定を、正規分布データを決定するのに使用し、及び群間の比較をＤｕｎｎの事後検定が後に続く非母数のマンホイットニー検定またはクラスカル・ウォリス検定を使用して評価した。二元配置ＡＮＯＶＡを複数時点にわたって群間を比較するのに使用した。血漿生物マーカー試験については、Ｄｕｎｎの多重比較を伴うフリードマン試験を異なる時点（たとえば、入院及び回復期）にて患者から収集される試料間のレベルを比較するのに使用した。全てのデータを特に明記しない限り、中央値及びＩＱＲ（ノンパラメトリック）として提示する。正規分布データを平均及びＳＥＭとして提示する。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとみなした。複数の実験からのデータを、比較のためにそれぞれの実験の、感染したが未処置の群の幾何平均に正規化した。

結果
図１に示すように、耐性ＢＡＬＢ／ｃマウス（また、「ＥＣＭ−Ｒ」として参照する）は、感受性Ｃ５７Ｂｌ／６マウス（また、「ＥＣＭ−Ｓ」として参照する）と比較して、ＰｂＡに感染後有意に延長された生存（ｐ＝０．０００７、ログランク検定）を示した。耐性ＢＡＬＢ／ｃマウスは、感染後７日間１００％の生存を示し、生存が１０日目まで、及び１４日目まで（マウスが犠牲にされたとき）１０％を超えるまで低下した。対照的に、感受性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスは、６日目という速い時点で約５０％のみの生存を示し、感染後８日目までで０％を示した。

ＥＣＭ−Ｓマウスは、神経障害の非存在を示した耐性ＥＣＭ−Ｒマウスと比較して、６日目付近で３５％未満のスコアによって証明されるように神経障害を示した（図２）。エバンスブルー（ＥＢ）溢出を血管透過性及び血液脳関門機能不全を評価するのに使用した。循環させている色素を除去するための潅流後、ＰｂＡ感染したＥＣＭ−Ｓマウスの脳実質における溢血したＥＢレベルは、同等の寄生虫負荷をもつＥＣＭ−Ｒマウスにおけるレベルより２倍高く［平均（標準偏差）ＥＢ色素／ｇ組織：ＥＣＭ−Ｒマウスについて１０．７（７．９）対ＥＣＭ−Ｓマウスについて２２．９（７．２）； ｐ＝０．００５］、増加した血管漏出及び血液脳関門統合性の喪失と一致した（図３）。これは、感受性マウスと比較して、耐性マウスにおけるより大きな寄生虫負荷によって証明されたように、観察された寄生虫血症に依存しない（図４）。

ＥＣＭ−Ｒマウスは、ＰｂＡ感染時の血管形成因子Ａｎｇ１、Ａｎｇ２及びｖＷＦのレベルにおいてＥＣＭ−Ｓマウスと異なった。感染の間の経時的評価では、Ａｎｇ１レベルが時間とともに減少することを示した（ｐ＜０．０００１、二元配置ＡＮＯＶＡ；図５）。感染後のＡｎｇ１減退の動態は、ＥＣＭ−Ｒ対ＥＣＭ−Ｓマウスにおいて有意に異なった（ｐ＝０．０２、二元配置ＡＮＯＶＡ）。疾患の急性相の間、ＥＣＭ−Ｒマウスは、ＥＣＭ−Ｓマウスと比較して有意により高いＡｎｇ１レベルを維持した（ｐ＜０．００１）。両方の株について、循環Ａｎｇ１の喪失は、ＲＭＣＢＳにおける有意な減退によって決定した神経障害の発症及びＥＣＭと関連していた。Ａｎｇ１血清レベル（ｎｇ／ｍｌ）は、ＲＭＣＢＳ（％）スコア（ｐ＜０．０５；図６ａ）及び死亡時間（時間）（ｐ＜０．０００１；図６ｂ）と有意に相関した。全体として、感染後６日目に評価したときに、最低のレベルの循環Ａｎｇ１をもつマウスは、致命的な予後へ進む可能性が有意に高く、Ａｎｇ１が生存の重要な決定因子であり得るという仮説を支持した。

ＥＣＭ−Ｒマウスは、有意により低いＡｎｇ２及びｖＷＦレベルを示した（図７〜９）。

実施例２：Ａｎｇ２を遮断することは、実験的なＣＭの発症に対して改良された保護を与えない
この実施例では、マウスモデルにおけるＰｂＡ誘導されたＥＣＭにおけるＡｎｇ２遮断の効果を評価した。２０匹のＣ５７Ｂｌ／６マウスを０日目のドナー継代マウスから得た新たに単離された寄生された赤血球（ＰＥ）１×１０⁶個の腹腔内注射によって齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）によって感染させた。感染したマウスをＵＳ Ｐａｔｅｎｔ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＵＳ２０１１００２７２８６に記載されているように、皮下注射を経て感染後−１、１、４及び７日目に１５ｍｇ／ｋｇの抗Ａｎｇ２抗体（Ｈ１Ｈ６８５）で処置した。マウスを実施例１に詳細に記載したように、生存、神経障害、寄生虫負荷及び血漿タンパク質レベルについてモニターした。

図１０は、ＰｂＡに感染し、及び抗Ａｎｇ２抗体（図１０において「ｍＡｂ「Ｂ」として参照される）またはアイソタイプ対照（ｍＡｂ「Ａ」）または生理食塩水で処置したマウスの生存をプロットするカプラン・マイヤー曲線を示す。抗Ａｎｇ２抗体でＡｎｇ２を遮断することは、アイソタイプ対照と比較して、感染したマウスの増加した生存を導かなかった。また、抗Ａｎｇ２抗体での処置は、抗Ａｎｇ２抗体、アイソタイプ対照または生理食塩水で処置された感染したマウス間に寄生虫負荷における有意な相違がなかったが（図１２）、感染したマウスにおける神経障害を防がなかった（図１１）。ｖＷＦ、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ及びＥセレクチンの血漿タンパク質レベルは、抗Ａｎｇ２抗体またはアイソタイプ対照で処理されるマウスにおいて有意に異ならなかった（図１３）。

実施例３：Ａｎｇ１の治療的投与は、ＰｂＡに感染したマウスの生存を有意に向上させる
この実施例では、マウスモデルにおけるＰｂＡ誘導されたＥＣＭへのＡｎｇ１投与の効果を試験した。８０匹のＣ５７Ｂｌ／６マウスを０日目のドナー継代マウスから得た新たに単離された寄生された赤血球（ＰＥ）１×１０⁶個の腹腔内注射を経て、齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）によって感染させた。感染したマウスを４群に分け、及び感染後４日目及び６日目に皮下注射を経て１５ｍｇ／ｋｇの抗Ａｎｇ２抗体（実施例２を参照されたい）、Ａｎｇ１／Ａｎｇ２もしくはアイソタイプ対照のいずれかで、または２５ｍｇ／ｋｇのＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１（配列番号２）で処置した。「比較対照」二重Ａｎｇ１／Ａｎｇ２遮断抗体は、ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．７２０５２７５ （Ａｍｇｅｎ）に記載されたように、ペプチボディ２×Ｃｏｎ４Ｃ（ＡＭＧ３８６）であった。マウスを実施例１に詳細に記載したように、生存、神経障害、寄生虫負荷及び血漿タンパク質レベルについてモニターした。

図１４に示すように、ＰｂＡに感染したマウスへのＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の治療的投与は、アイソタイプ対照、抗Ａｎｇ２抗体または二重遮断抗体で処置されたマウスと比較して、生存を有意に向上させた（ｐ＜０．０５、ログランク検定）。ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１で処置されたマウスは、全ての処理全体の寄生虫血症パーセントが類似したが、感染後８日目まで０％の生存を示したその他の３つの処置で処置されたマウスと比較して感染後少なくとも１５日目まで３５％を超える生存を示した（図１５）。また、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１での処置は、エバンスブルー色素取り込みで示されるように、血液脳関門統合性を保護した（図１６）。ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１で処置したマウスは、寄生虫血症パーセントが類似だったにもかかわらず（図１６ｂ）、有意に低い量の色素取り込みを示し（図１６ａのパネルＣ）、無傷の血液脳関門及び減少した血管透過性の維持と一致した（ｐ＜０．０５、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ）。これは、外因性Ａｎｇ１が致死マラリア曝露後に血液脳関門統合性を維持するのに十分であることを確認した。

また、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の治療的投与は、ＥＣＭ関連罹患率及び神経障害を防ぎ（図１７）、末梢の寄生虫血症への変化に依存しなかった（図１８）。感染後６日目まで、対照マウスの大多数は、ＥＣＭに進行したが、疾患進行は、処置されたマウスにおいて緩和された。感染したＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１処置マウスは、対照で処置されたマウスと類似の体重減少を示した。

ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１で血管保護が炎症性サイトカインにおける減少に続発性に生じたかどうか、または保護が全身炎症性応答にさらされて血管安定度の直接増強のためだったかどうかを決定するために、処置及び未処置のＰｂＡ感染したマウスからの血漿試料を重要な炎症誘発性サイトカインについて分析した。ＰｂＡ感染したマウスは、処置にもかかわらず感染後６日目にＴＮＦ及びＩＦＮγにおける有意な増大を示した（ベースラインと比較してＴＮＦにおける３倍の増大及びＩＦＮγにおける６０倍の増大、両方についてｐ＜０．０１、一元配置ＡＮＯＶＡ）。ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１での処置は、ＴＮＦまたはＩＦＮγのレベルに影響を及ぼさず、対照及び処置したマウス両方は、感染に応答して類似のアップレギュレーションを示した（図１９ａ）。

寄生された赤血球での炎症誘発性サイトカイン刺激及び／または直接的内皮相互作用が、寄生虫細胞接着を媒介する内皮細胞受容体のアップレギュレーションを含む、ＣＭに関係する多数の病理学的イベントに寄与し得る。ＩＣＡＭ−１及び／または血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）などの細胞接着分子（ＣＡＭ）のダウンレギュレーションを経た宿主受容体に対する寄生虫隔離の撹乱は、微小血管閉塞及び内皮機能不全を少なくし得る。したがって、内皮活性化及びプロ−接着性血管表現型の兆候とみなされるＣＡＭＳの可溶性形態の循環レベルの減少に対するＡｎｇ１処置の効果を調査した。感染後６日目に収集された血漿試料の解析では、ベースラインと比較して、ＰｂＡ感染でｓＩＣＡＭ−１の循環レベルにおいて４倍の増大を示した（ｐ＜０．００１、多重比較のためのボンフェローニ検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡ；図１９ｃ）。これらのレベルは、ＰｂＡ感染した対照と比較してＡｎｇ１処置で有意に減少させられた（ｐ＜０．０５；図１９ｃ）。同様に、ｓＶＣＡＭ−１レベルは、ＰｂＡに感染後６日目に有意に増加し（５倍の増大、ｐ＜０．００１；図１９ｃ）、Ａｎｇ１処置は、ＰｂＡ感染した対照と比較してｓＶＣＡＭ−１の循環レベルを有意に減少させた（ｐ＜０．０５、図１９ｃ）。これらのデータは、部分的に、接着分子のダウンレギュレーションを経た抗接着性血管表現型の保存を介して、Ａｎｇ−１−Ｔｉｅ−２相互作用が全身炎症性応答にさらされて血管静止を維持するのを助けることを示す。

この研究は、Ａｎｇ１（ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１）の治療的投与が血液脳関門統合性及び生存を改善したが、Ａｎｇ２の阻害では改善しなかったことを示した。それは、脳マラリアのための補助療法としてＡｎｇ２の阻害でなく、プロ−Ａｎｇ１の研究を支持した。さらに、Ａｎｇ１に基づいた治療が、感染に対する強い全身炎症誘発性応答にもかかわらず、効果的であり、及び血液脳関門統合性を保存したことは、興味深い。データは、抗炎症ストラテジーが血管統合性を保存し、及び全身炎症と関連する致命的な感染症における予後を改善するのに必要とされない可能性があることを示唆する。

１つの追実験において、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の保護効果を遮断する際のＴｉｅ２の関与を研究するために、感染した感受性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに抗Ｔｉｅ２抗体と組み合わせて投与されるだろう（ＵＳ２０１３０２０９４９２に記載されたように）。抗Ｔｉｅ２抗体は、活性化（またはアゴニスト）抗体であってもよく、たとえば、それは、アンギオポエチンの結合を増加させ、及び／またはＴｉｅ２の活性を増加させる。抗Ｔｉｅ２抗体と組み合わせて投与されたＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１単独と比較して、感染したマウスのより低い生存を導くだろうことが予想される。

もう一つの追実験において、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、ＰｂＡに感染した耐性ＢＡＬＢ／ｃマウスを処置して、生存、血液脳関門統合性、神経障害及び血漿タンパク質マーカーへの効果を研究するのに使用されるであろう。ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の投与が、改善された血液脳関門統合性の保護及び感染したＢＡＬＢ／ｃマウスの生存を導くだろうことが予想される。

３つ目の実験において、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、耐性マウスがＥＣＭに感受性にされるかどうか研究するために、感染した耐性ＢＡＬＢ／ｃマウスに抗Ｔｉｅ２抗体と組み合わせて投与されるであろう。抗Ｔｉｅ２抗体と組み合わせて投与されたＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１単独と比較して、感染したＢＡＬＢ／ｃマウスのより低い生存を導くだろうことが予想される。

実施例４：アルテスナートと組み合わせた補助療法としてのＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の治療的投与
この実施例では、マウスモデルにおいてＰｂＡ誘導されたＥＣＭに対するアルテスナートと組み合わせたＡｎｇ−Ｆ１−Ｆｃ−Ｆ１の投与の効果を試験した。２０匹のＣ５７Ｂｌ／６マウスを０日目にドナー継代マウスから得た新たに単離された寄生された赤血球（ＰＥ）１×１０⁶個の腹腔内注射を経て、齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）によって感染させた。感染したマウスを感染後４日目及び６日目に１５ｍｇ／ｋｇのＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１（配列番号２）で、及び皮下注射を経て感染後５日目に１０ｍｇ／ｋｇのアルテスナートで処置した。マウスを実施例１に詳細に記載したように、生存、神経障害、寄生虫負荷及び血漿タンパク質レベルについてモニターした。

補助的ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１処置は、アルテスナート単独と比較して、感染したマウスの生存を有意に向上させた（図２０）。アルテスナートと組み合わせてＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１で処置された感染したマウスは、感染後少なくとも１５日目まで１００％の生存を示した。対照的に、アルテスナート単独で処理された感染したマウスは、感染後８日目までに６０％未満の生存を示した。プレＥＣＭレベルまで有意に減少した寄生虫負荷にもかかわらず（すなわち、２％未満の寄生虫血症）、アルテスナート処理マウスの４１．７％は、ＥＣＭで死亡した。この効果は、寄生虫血症パーセントに依存しなかった（図２１）。

追実験において、アルテスナートと組み合わせた補助的ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の効果が、感染したマウスにおける神経障害について試験されるであろう。アルテスナートと組み合わせたＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１の投与が、アルテスナート単独と比較して、感染したマウスにおける神経障害を予防するだろうことが予想される。

もう一つの追実験において、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、感染したマウスの生存を研究するために抗Ａｎｇ２抗体と組み合わせて投与されるであろう（実施例２に記載したように）。抗Ａｎｇ２抗体と組み合わせて投与されたＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１が、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１単独と比較して、感染したマウスの改良された生存を導くであろうことが予想される。

実施例５：マラリア関連急性肺傷害からの保護
この実施例において、感染したマウスにおける肺における血管透過性及びマラリア関連急性肺傷害に対するＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１投与の効果が試験される。２０匹のＣ５７Ｂｌ／６マウスを０日目にドナー継代マウスから得た新たに単離された寄生された赤血球（ＰＥ）１×１０⁶個の腹腔内注射を経て、齧歯類マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｂｅｒｇｈｅｉ）ＡＮＫＡ（ＰｂＡ）に感染させる。感染したマウスを、下注射を経て感染後４及び６日目に１５ｍｇ／ｋｇのＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１（配列番号２）で処置する。マウスを生存及びエバンスブルー染色によって肺における血管透過性についてモニターする。

ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１で処理されたマウスは、エバンスブルー色素取り込みの非存在を示し、血管透過性の非存在及び肺における及びマラリア関連急性肺傷害からの保護を示すであろうことが予想される。

本発明は、本明細書において記載した具体的実施形態に範囲が限定されるものではない。実際は、本明細書において記載したものに加えて本発明の種々の改変が、前の記載及び添付の図から当業者にとって明らかになるだろう。このような改変は、添付の請求の範囲内に入ることが意図される。

Claims (30)

1. 脳マラリアの少なくとも１つの症候、兆候または合併症を治療する、予防する、または改善する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の修飾アンギオポエチンタンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
2. 少なくとも１つの症候、兆候または合併症は、発熱、頭痛及び筋肉痛とそれに続く眠気、錯乱、血管漏出、血液脳関門統合性の喪失、内皮マーカーの血中濃度上昇、脳における寄生された赤血球の隔離、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、脾腫、反射及び自己防衛の喪失、衛生関連行動の欠如、急性肺傷害、痙攣、引き付け、昏睡、ならびに死からなる群より選択される、請求項１の前記方法。
3. 前記内皮マーカーは、Ａｎｇ１、Ａｎｇ２、Ｔｉｅ２、ｖＷＦ、ＩＣＡＭ−１、Ｅセレクチン及びＶＣＡＭ−１からなる群より選択される、請求項２の前記方法。
4. 前記修飾アンギオポエチンは、５〜５０ｍｇ／前記対象の体重ｋｇの投薬量で投与される、請求項１〜３のいずれか１項の前記方法。
5. 前記修飾アンギオポエチンは、１５ｍｇ／前記対象の体重ｋｇの投薬量で投与される、請求項４の前記方法。
6. 前記修飾アンギオポエチンは、皮下に投与される、請求項１〜５のいずれか１項の前記方法。
7. 前記修飾アンギオポエチンは、第２の治療薬と組み合わせて投与される、請求項１〜６のいずれか１項の前記方法。
8. 前記第２の治療薬は、アルテミシニン、キニーネ及びそれらの変異体または誘導体からなる群より選択される、請求項７の前記方法。
9. 前記第２の治療薬は、アルテスナートである、請求項８の方法。
10. プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種に感染した対象における重篤な脳マラリアを予防する方法であって、前記方法は、（ａ）０．１％を超える寄生虫血症をもつ対象を選択すること、及び（ｂ）それを必要とする前記対象に治療上有効な量の修飾アンギオポエチンタンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
11. 前記修飾アンギオポエチンの投与は、神経障害及び血管漏出からなる群より選択される少なくとも１つの兆候を予防する、請求項１０の前記方法。
12. 神経障害の少なくとも１つの兆候は、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、反射及び自己防衛の喪失、長期神経認知傷害及び機能障害、記憶障害、情動障害、衛生関連行動の欠如、痙攣及び引き付けからなる群より選択される、請求項１１の前記方法。
13. 前記修飾アンギオポエチンの投与は、血液脳関門統合性の喪失を予防する、請求項１０〜１２のいずれか１項の前記方法。
14. 血管漏出を予防する、または血液脳関門統合性を保護する方法であって、前記方法は、それを必要とする対象に治療上有効な量の修飾アンギオポエチンタンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
15. 前記対象は、重篤な脳マラリア、実験的な脳マラリア、敗血症、デング熱、出血熱、毒素ショック症候群、出血性ショック、溶血性尿毒症症候群、心筋梗塞及び脳卒中からなる群より選択される疾患または障害に罹患している、請求項１４の前記方法。
16. 重篤な脳マラリア、実験的な脳マラリア、敗血症、デング熱、出血熱、毒素ショック症候群、出血性ショック、溶血性尿毒症症候群、心筋梗塞及び脳卒中からなる群より選択される疾患または障害に罹患している対象の生存を増加させる方法であって、前記方法は、それを必要とする前記対象に治療上有効な量の修飾アンギオポエチンタンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
17. 前記対象は、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種に感染している、請求項１４〜１６のいずれか１項の前記方法。
18. 前記修飾アンギオポエチンの投与は、前記対象における前記血液関門統合性の保護をもたらす、請求項１７の前記方法。
19. 前記修飾アンギオポエチンの投与は、前記対象における神経障害の少なくとも１つの兆候を予防することをもたらす、請求項１７の前記方法。
20. 前記神経障害の少なくとも１つの兆候は、損なわれたバランスまたは協調、運動障害、反射及び自己防衛の喪失、長期神経認知傷害及び機能障害、記憶障害、情動障害、衛生関連行動の欠如、痙攣及び引き付けからなる群より選択される、請求項１９の前記方法。
21. 前記修飾アンギオポエチンは、１５ｍｇ／前記対象の体重ｋｇの用量で投与される、請求項１０〜２０のいずれか１項の前記方法。
22. 前記修飾アンギオポエチンは、皮下に投与される、請求項１０〜２１のいずれか１項の前記方法。
23. 前記修飾アンギオポエチンは、第２の治療薬と組み合わせて投与される、請求項１０〜２２のいずれか１項の前記方法。
24. 前記第２の治療薬は、アルテスナートである、請求項２３の前記方法。
25. 前記修飾アンギオポエチンは、多量体化ドメインに融合したアンギオポエチン−１またはその断片を含む融合タンパク質を含む、請求項１〜２４のいずれか１項の前記方法。
26. 前記多量体化ドメインは、免疫グロブリンＦｃ断片である、請求項２５の前記方法。
27. 前記融合タンパク質は、Ｆｃ断片に融合したアンギオポエチン−１の少なくとも１つのフィブリノーゲン様ドメインを含む、請求項２６の前記方法。
28. 前記融合タンパク質は、Ｃ−末端にてＦｃ断片のＮ−末端に融合したアンギオポエチン−１の第１のフィブリノーゲン様ドメイン、及びＣ−末端にてアンギオポエチン−１の第２のフィブリノーゲン様ドメインのＮ−末端に融合した前記Ｆｃ断片を含む、請求項２７の前記方法。
29. 前記修飾アンギオポエチン−１は、ＡｎｇＦ１−Ｆｃ−Ｆ１である、請求項１〜２８のいずれか１項の前記方法。
30. 前記修飾アンギオポエチン−１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２９のいずれか１項の前記方法。