JP2016534752A - 酸化ストレス、およびdnaに対する損傷によって引き起こされる疾患を処置するための、gse24.2に由来するペプチド - Google Patents
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Abstract
Description
GSE24.2に由来するペプチドは、酸化ストレスおよび/またはDNAに対する損傷によって引き起こされるか、および/または当該酸化ストレスおよび/または損傷に関連している疾患および/または症状(例えば、炎症または細胞の老化)を処置するための、生物工学分野および薬学分野における用途を有する。
GSE24.2は、テロメラーゼ複合体の一部であるタンパク質ジスケリンに対応しているペプチドである。GSE24.2は、病理的な状態および生理学的な状態においてテロメラーゼを再活性化可能であり;テロメラーゼ異常をともなっている疾患において、GSE24.2活性は、患者由来の細胞の生存度を向上させる。
(発明の簡単な説明)
本発明は、フリーラジカルの生成および/または細胞内DNAの構造に対する損傷を低減させるか、または減少させる化合物を提供し、この化合物は、ジスケリンのペプチドGSE24.2のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の断片に基づいており、当該断片は、正常細胞の酸化還元バランスに戻すことおよび/または細胞DNAに対する損傷を校正可能である。したがって、本発明は、細胞内の酸化ストレスおよび/またはDNAの構造に対する損傷の増大をともなう疾患(例えば、動脈硬化、パーキンソン病、筋痛性脳症、アルツハイマー病、血管拡張性運動失調症、先天性異常角化および老化)の処置のための新たな治療手段を提供するという課題に対処する。
本発明の基礎は、本発明者らが、ヒトの種々の疾患に存在しているか、または作用因子(例えば、放射線または遺伝毒性物質)に対する曝露から生じる、フリーラジカルのレベルおよびDNAに対する損傷を低減させるための、GSEに24.2由来するペプチドの能力を調べていることにある。したがって、GSEに24.2由来する本発明のペプチドおよびGSE24.2自体は、DNAに対する損傷の蓄積もしくはフリーラジカルの増加を原因とするか、またはDNAに対する損傷の蓄積もしくはフリーラジカルの増加をともなう、これらのすべて疾患(例えば、促進老化の疾患(例えば、ウェルナー症候群、ハッチンソン−ギルフォード症候群);認識機構およびプロセッシング機構における変異によって引き起こされるDNAに対する損傷がある疾患(例えば、血管拡張性運動失調症、色素性乾皮症、ロトムンド−トムソン症候群、ナイミーヘン染色体不安定症候群);神経変性疾患(例えば、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病など);筋肉退化をともなう疾患(例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー);心血管疾患または肺疾患(例えば、肺線維症、動脈硬化);それらの病態に主要な炎症性の成分をともなっている疾患(例えば、リウマチ様関節炎))に適用され得る。また、これらのペプチドの用途は、組織工学および細胞培養に関する用途、ならびに他の生物工学的な用途を包含している。また、これらのペプチドは、化粧品産業(例えば、皮膚における老化によって引き起こされる損傷の処置など)における用途を有し得る。
(図1)AT細胞におけるDNAに対する損傷の決定:AT3784 AT細胞を、GSE24.2を発現するレンチウイルスベクター、またはGFPの空ベクターによって感染させ、処理後の24時間に固定し、リン酸化ヒストンH2AX(Ser139)に対する抗体とハイブリダイズさせた。対照C−1787細胞を、陰性対照として用いた。次に、それらを、フルオレセイン標識した抗体とハイブリダイズさせ、核の位置を示すためにDAPIを用いて染色した。凝集体(foci)は、細胞種ごとに200細胞において、リン酸化ヒストンH2AXに対する染色によって評価し、その結果を、凝集体を示さない細胞、5〜20の凝集体の細胞、および20を超える凝集体の細胞に分類した。
対照の細胞株について得られた(NIHイメージプログラムを用いて)、リン酸化タンパク質および上記非リン酸化タンパク質の間における相対値を1とみなし、他は、それを基準にされている。
実施例1.血管拡張性運動失調症の患者の細胞内のDNAに対する損傷を戻すGSE24.2の能力。
AT719細胞に、GSE24.2、pを発現するレンチウイルスベクターCMV−GFP−GSE24.2、またはGFPのみを発現する空ベクター(GFP)を感染させ、感染から3週間後に、タンパク質抽出物を、両方の細胞系統から取得した。正常なリンパ芽球細胞系統AT736は、陰性対照として用いた。上記抽出物をポリアクリルアミドゲル上に溶解し、タンパク質をニトロセルロースフィルターへとトランスファーし、続いて、抗体とハイブリダイゼーションさせた。リン酸化p38タンパク質を検出する抗体を使用し、その後、ローディング対照として、非リン酸化p38タンパク質に対する抗体で、再度ハイブリダイゼーションした。両方のハイブリダイゼーションにおいて取得したシグナルは、NIH−イメージプログラムを用いて定量化し、対照細胞系統として取得された、リン酸化タンパク質と非リン酸化タンパク質との間の相対値を、1とみなした。図4は、当該値は、GFPウイルスを感染させたAT719細胞の場合において増加したが、GSE24.2ウイルスを感染させた際には、対照細胞と同様のレベルにまで著しく低下した、ことを示している。これらのデータは、ATMの活性化の破綻および関連した酸化ストレスの結果の1つとしてのp38の活性化が、GSE24.2の発現後に戻ったことを示している。
Claims (17)
- ポリペプチドであって、
上記ポリペプチドは、フリーラジカルの生成および/または細胞内DNAの構造に対する損傷を低減可能な配列番号2を有している、ペプチドGSE24.2(配列番号1)の配列の断片を含んでおり、
上記ポリペプチドがペプチドGSE24.2(配列番号1)または配列番号4を有しているその断片からなる場合を除くことを特徴とする、ポリペプチド。 - 配列番号2、配列番号3、配列番号5および配列番号6からなる群のうち少なくとも1つから選択されるペプチドGSE24.2の断片を少なくとも含んでいることを特徴とする、請求項1に記載のポリペプチド。
- 上記断片のアミノ酸配列のカルボキシル末端またはアミノ末端の少なくとも一方に結合されている少なくとも1つの核局在化配列を、上記断片に加えて含んでいることを特徴とする、請求項1または2に記載のポリペプチド。
- 上記核局在化配列が、上記断片の上記カルボキシル末端に対して結合されていることを特徴とする、請求項3に記載のポリペプチド。
- 上記核局在化配列が、KRKR配列および/またはKKEKKKSK配列であることを特徴とする、請求項3または4に記載のポリペプチド。
- 配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13および配列番号14からなる群から選択される1つの配列からなることを特徴とする、請求項3〜5のいずれか1項に記載のポリペプチド。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載のポリペプチドをコードしていることを特徴とする、ポリヌクレオチド。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド配列を含んでいることを特徴とする、発現ベクター。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載のポリペプチド、および/または請求項7に記載のポリヌクレオチド、および/または請求項8に記載の発現ベクターを少なくとも含んでいることを特徴とする、薬学的組成物。
- 薬学的に許容可能な補助剤および/またはビヒクルのうち少なくとも1つをさらに含んでいることを特徴とする、請求項9に記載の薬学的組成物。
- フリーラジカルの生成および/または細胞内DNAの構造に対する損傷を低減可能な配列番号2を有している、ペプチドGSE24.2(配列番号1)の配列の断片を含んでいるポリペプチドの、酸化ストレスおよび/または細胞内DNAに対する損傷の増大によって引き起こされる疾患および/または障害の処置および/または予防のための薬学的組成物または薬剤の調製のための、使用。
- 上記ポリペプチドが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13および配列番号14からなる群の少なくとも1つから選択されることを特徴とする、請求項11に記載の使用。
- 酸化ストレスおよび/または細胞内DNAに対する損傷の増大によって引き起こされる疾患および/または障害の処置および/または予防のための薬学的組成物または薬剤の調製に用いられる、請求項7に記載のポリヌクレオチドの、使用。
- 酸化ストレスおよび/または細胞内DNAに対する損傷の増大によって引き起こされる疾患および/または障害の処置および/または予防のための薬学的組成物または薬剤の調製に用いられる、請求項8に記載の発現ベクターの、使用。
- 上記疾患または障害が、先天性異角化症、神経変性疾患、猫鳴き症候群、血管拡張性運動失調症、ナイミーヘン染色体不安定症、ブルーム症候群、ウェルナー症候群、ファンコニー貧血、潰瘍性大腸炎、血管老化、動脈硬化、好ましくはアテローム性動脈硬化、がん、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、早老症、光過敏症、突然変異または外因性作用物質によって引き起こされる遺伝的不安定性、ハッチンソン−ギルフォード症候群、色素性乾皮症、ロトムンド−トムソン症候群、肺線維症、リウマチ様関節炎、および慢性炎症をともっている疾患からなる群から選択されることを特徴とする、請求項11〜14のいずれか1項に記載の使用。
- 上記神経変性疾患が、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、小脳性運動失調症および骨髄変性からなる群から選択されることを特徴とする、請求項15に記載の使用。
- フリーラジカルの生成および/または細胞内DNAの構造に対する損傷を低減可能な配列番号2を有している、ペプチドGSE24.2(配列番号1)の配列の断片を含んでいるポリペプチド、または当該ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドもしくはベクターの、組織工学および細胞培養における細胞の生存度を向上させるための、使用。
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