JP2016534084A - 癌を治療するための方法及び組成物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、癌の治療に関する方法及び組成物を提供している。該組成物は、多形性膠芽腫及び肺癌を含む癌の治療に有用である。【選択図】図１

Description

［関連出願の参照］
本出願は、米国仮出願第６１／８９５，３０８号（題名「癌を治療するための方法及び組成物」、２０１３年１０月２４日出願）の利益を主張するものである。その内容は本明細書に参考として組み込まれる。
［連邦政府資金による研究開発の記載］
本発明は、アメリカ国立衛生研究所により認定されたＮＩＨグラント／コントラクト番号第Ｒ０１ＣＡ１３８２１２号、第Ｒ０１ＣＡ１３３６６２号、及び第ＲＣ４ＣＡ１５６５０９号に基づき、米国政府の支援を受けてなされたものである。米国政府は本発明に特定の権利を有する。
本発明は、癌の治療に関する方法及び組成物を提供している。該組成物は、多形性膠芽腫及び肺癌を含む癌の治療に有用である。
米国の中央脳腫瘍レジストリ（ＣＢＴＲＵＳ）には、５０州全てにおける原発性悪性脳腫瘍死亡者の総計が挙げられており、２０１２年のコロンビア特別区においては、１３７００名に上ると推測される。膠芽腫（ＧＢＭ）は、最も一般的な悪性脳腫瘍であり、外科的切除、術後放射線療法、及びテモゾロマイドによる化学療法で構成される標準的な三併用治療を行った場合でも、ヒトの平均生存期間は、僅か１４．６カ月である。これら腫瘍の本質的な浸潤性、並びに放射線及び化学療法に対する内因的な耐性に起因して、この療法は殆ど効果がない。最適治療を行った場合でも、平均生存期間は１５カ月未満であり、再発せずに２年間生存している患者は、僅か１０％である。患者の生存率及び生活の質を改善するために、膠芽腫及び他の癌に対して、新規治療標的が必要なことは明らかである。
さらに、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）は、小児、青年、及び若年成人の骨と軟組織に起こる高悪性度腫瘍である。これらの患者は化学療法に反応するが、転移性ＥＳＦＴになった患者の７５％〜８０％は、高投与量の化学療法を行っても、５年以内に死亡する（Ｇｒｉｅｒ，Ｈ．Ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８，６９４−７０１（２００３））。ＥＳＦＴは、よく特徴付けられた染色体転座を有する。この染色体転座は、２２番染色体に存在するユーイング肉腫遺伝子（ＥＷＳ）を、ｅｔｓファミリー遺伝子、多くの場合は１１番染色体に存在するＦＬＩ１（ｆｒｉｅｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ １）遺伝子に結合させ、種々の融合タンパク質の発現につながるｔ（１１:２２）転座である（Ａｙｋｕｔ Ｕｒｅｎ，Ｊｅｆｆｒｅｙ Ａ Ｔｏｒｅｓｔｓｋｙ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ＥＷＳ−ＦＬＩ１：ｔｈｅ ｐｅｒｆｅｃｔ ｔａｒｇｅｔ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ，Ｆｕｔｕｒｅ Ｏｎｃｏｌ．１（４），５２１−５２８（２００５））。
インビトロ及びインビボ研究では、腫瘍性タンパク質であるＥＷＳ−ＦＬＩ１の除去は、ＥＳＴＦ細胞株増殖の減少及び腫瘍容積の減少をもたらすことが証明された。ＥＷＳ−ＦＬＩ１は酵素活性を欠くが、ＲＨＡヘリカーゼＡ（ＲＨＡ）は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１で調節された腫瘍形成を促進するので、この２つのタンパク質の間のタンパク質間相互作用が、腫瘍増殖の維持に必要である（Ｈｙａｒｉｙｅ Ｎ Ｅｒｋｉｚａｎ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦｌＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ＲＨＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５（７）７５０−７５６（２００９））。重要なタンパク質相互作用を破壊するパラダイムは、類似の転座を有する肉腫、及びＭＬＬ転座を有する白血病を含む疾患の治療に有用性があり得る（Ｈｅｌｍａｎ ＬＪ，Ｍｅｌｔｚｅｒ Ｐ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓａｒｃｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００３；３（９）：６８５−９４）、及びＰｕｉ ＣＨ，Ｒｅｌｌｉｎｇ ＭＶ，Ｄｏｗｎｉｎｇ ＪＲ．Ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００４；３５０（１５）：１５３５−４８）。また、変性タンパク質は、それらの固有の生化学的性質に基づいて、優れた治療標的であり得る（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ＬｅＧａｌｌ Ｔ，Ｏｌｄｆｉｅｌｄ ＣＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ ｖｉａ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００６；２４（１０）：４３５−４２）。
Ｇｒｉｅｒ，Ｈ．Ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８，６９４−７０１（２００３） Ａｙｋｕｔ Ｕｒｅｎ，Ｊｅｆｆｒｅｙ Ａ Ｔｏｒｅｓｔｓｋｙ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ＥＷＳ−ＦＬＩ１：ｔｈｅ ｐｅｒｆｅｃｔ ｔａｒｇｅｔ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ，Ｆｕｔｕｒｅ Ｏｎｃｏｌ．１（４），５２１−５２８（２００５） Ｈｙａｒｉｙｅ Ｎ Ｅｒｋｉｚａｎ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦｌＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ＲＨＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５（７）７５０−７５６（２００９） Ｈｅｌｍａｎ ＬＪ，Ｍｅｌｔｚｅｒ Ｐ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓａｒｃｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００３；３（９）：６８５−９４ Ｐｕｉ ＣＨ，Ｒｅｌｌｉｎｇ ＭＶ，Ｄｏｗｎｉｎｇ ＪＲ．Ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００４；３５０（１５）：１５３５−４８ Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ＬｅＧａｌｌ Ｔ，Ｏｌｄｆｉｅｌｄ ＣＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ ｖｉａ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００６；２４（１０）：４３５−４２
ＥＷＳ−ＦＬＩ１に向けられる、アンチセンス及びｓｉＲＮＡを用いたインビトロ及び異種移植の研究が長年に渡って行われてきたが、送達及び安定性が不充分であり、これまでヒトの治療として実用的なものはない。したがって、ＥＳＦＴのような疾患を治療するために、治療法の改善が必要とされる。
一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）第１の実施態様は、
式（Ｉ）：
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
からなる群より選ばれ、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１４、Ｒ１７、及びＲ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
ｎは、０〜４の整数であり、
ｐは、１又は３であり、
破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩
を提供する。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
からなる群より選ばれる。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−ＳＣＨ３である。
第１の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）第２の実施態様は、
式（Ｉ）の化合物を、それを必要とする対象に有効量投与することを含む、癌の治療方法
を提供する。
第２の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、対象は哺乳動物である。
第２の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、対象はヒトである。
第２の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、癌は、肺腺癌及び多形性膠芽腫からなる群より選ばれる。
第２の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、癌は、ＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ，ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座を有する。
第２の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、化合物を非経口投与する。
一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）第３の実施態様は、
式（Ｉ）：
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
からなる群より選ばれ、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
Ｒ１７及びＲ１８は、独立してＨ又はＦであり、
ｎは、０〜４の整数であり、
ｐは、１又は３であり、
破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、腫瘍細胞に有効量接触させることを含む、腫瘍細胞を殺傷する、又は腫瘍細胞の増殖を阻害する方法
を提供する。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
からなる群より選ばれる。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−ＳＣＨ３である。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、細胞は、哺乳動物のものである。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、細胞は、ヒトのものである。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、細胞は、肺腺癌及び多形性膠芽腫からなる群より選ばれるものである。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、細胞は、ＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座を有する。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、細胞はインビボのものである。
第３の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、細胞はエクスビボのものである。
一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）第４の実施態様は、
式（Ｉ）：
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
からなる群より選ばれ、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
Ｒ１７及びＲ１８は、独立してＨ又はＦであり、
ｎは、０〜４の整数であり、
ｐは、１又は３であり、
破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩
を提供する。
第４の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
からなる群より選ばれる。
第４の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる。
第４の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である。
第４の実施態様において、一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）１つの実施形態では、Ｒ３は、−ＳＣＨ３である。
一般的に適用し得る（すなわち、ここで定義される実施態様又は実施形態のいずれかと、独立して組み合わせが可能な）第５の実施態様は、
式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物
を提供する。
第１〜第５実施態様における実施形態の特徴のいずれかは、ここで定義される全ての実施態様及び実施形態に適応し得る。第１〜第５実施態様における実施形態の特徴のいずれかは、ここで定義される他の実施形態と、多少なりとも、部分的に又は全体的に独立して組み合わせが可能である。例えば、１つ、２つ、又は３つ以上の実施形態が、全体的に又は部分的に組み合わされてもよい。第１〜第５実施態様における実施形態の特徴のいずれかは、他の実施形態又は実施態様に付加されてもよい。方法の実施態様又は実施形態のいずれかは、他の実施態様又は実施形態の化合物を用いることによって実施され得る。そして、化合物の実施態様又は実施形態のいずれかは、他の実施態様又は実施形態の方法において用いられるもので構成され得る。
図１は、ＮＳＣ６３５４３７の構造、及び特定の類似物のためのジェネリック構造を示す図である。 図２は、ＹＫ−４−２７９の効力を高めるための方法例を示す図である。 図３Ａは、種々の濃度のＹＫ−４−２７９及びＰＴ−１−３３によるＴＣ７１及びＴＣ３２細胞増殖阻害を示すグラフである。 図３Ｂは、種々の濃度のＹＫ−４−２７９、ＰＴ−１−３３、及びＰＴ−１−５５によるＴＣ７１細胞増殖阻害を示すグラフである。 図３Ｃは、種々の濃度のＹＫ−４−２７９及びＰＴ−１−１２３によるＴＣ７１細胞増殖阻害を示すグラフである。 図４は、ＹＫ−４−２７９で処置され、かつＲＨＡ、ＥＷＳ−ＦＬＩ１、又は総タンパク質で共沈されるＴＣ３２細胞からのタンパク質溶解物の免疫ブロット顕微鏡写真である。 図５Ａは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図５Ｂは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図５Ｃは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図５Ｄは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図５Ｅは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図５Ｆは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図５Ｇは、種々の候補薬剤によるＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイにおける相対光学密度のグラフである。 図６Ａは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤による相対ルシフェラーゼ活性の一般的な傾向を示すグラフである。 図６Ｂは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤による相対ルシフェラーゼ活性の一般的な傾向を示すグラフである。 図７Ａは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｂは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｃは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｄは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｅは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｆは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｇは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｈは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図７Ｉは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＮＲＯＢ1プロモーターへの結合の阻害を測定するルシフェラーゼアッセイにおいて種々の濃度の候補薬剤によるルシフェラーゼ活性を示す。 図８は、「ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｏｍｉｃｓ」ウェブサイトのインターフェイスを示す。 図９は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００装置で測定した定常状態の動態で、ＹＫ−４−２７９の、１１．７μＭのＫＤでのＥＲＧへの結合及び１７．９μＭのＫＤでのＥＴＶ１への結合を示す。 図１０は、ＹＫ−４−２７９感度と相関するＦＬＩ１を過剰発現させるＧＢＭ細胞株を示す。上部パネルは、抗ＦＬＩ１でプローブされた免疫ブロットで、ユーイング肉腫ＴＣ３２が陽性対照として含まれている。ＦＬＩ１の期待値は５０ｋＤａで、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の期待値は６８ｋＤａである。下部パネルは、ＩＣ５０とデンシトメトリー（濃度測定）とのグラフである。 図１１は、正常脳と比較したＦＬＩ１のＧＥＭＭ過剰発現を示す。ＲＮＡは、対照マウスの正常組織及び遺伝子組み換えマウスの腫瘍組織から抽出した。正常化に次ぐハイブリッド形成により、ＦＬＩ１プローブは、正常脳組織では上昇しなかったが、腫瘍では著しく上昇した。 図１２は、ＦＬＩ１のＧＢＭ発現を示す。ヒト膠芽細胞腫におけるＦＬＩ１に対する免疫染色は、血管内皮細胞及び炎症細胞と同様に、腫瘍細胞の多くで陽核染色を示す（対物４０倍）。 図１３Ａは、（Ｓ）−ＹＫ−４−２７９又はラセミ体での３日間の処置による、著しい腫瘍の軽減を示す。ＥＳ異種移植マウスを、４００ｍｇ／ｋｇの化合物又は所定対照物で処置した。既知の腫瘍（３００ｍｍ３）で開始し、腹腔内化合物で３日間マウスに処置を施した。計６回の投与を行った。 図１３Ｂは、（Ｓ）−ＹＫ−４−２７９又はラセミ体での３日間の処置による、著しい腫瘍の軽減を示す。同様の実験により、Ｈ及びＥは腫瘍を染色した。 図１４は、ＺＥＢ１及びＺＥＢ２の発現を誘発するＥＲＧを示す。ＺＥＢ１及びＺＥＢ２は、肺癌の転移及び薬剤耐性を齎すＥＭＴを活性化させる。 図１５は、ＥＲＧタンパク質に直接作用するＹＫ−４−２７９を示す。精製組み替えＥＲＧをＢｉａｃｏｒｅ ＣＭ５マイクロチップ上に固定し、８種の異なる濃度（０．１〜５０μＭ）のＹＫ−４−２７９への直接結合を、ＳＰＲにより確認した。定常状態のＫＤをＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアにて算出した。 図１６Ａは、ＹＫ−４−２７９によるＥＲＧの転写活性の阻害を示す。Ｃｏｓ−７細胞のルシフェラーゼアッセイにより、ＥＲＧとＩｄ−２レポータールシフェラーゼ構成とを共トランスフェクトした。ＹＫ−４−２７９処置により、ＥＲＧレベル（＊：ｐ＜０．００１）への影響なしで、Ｉｄ−２プロモーター活性が低減された。 図１６Ｂは、ＹＫ−４−２７９によるＥＲＧの転写活性の阻害を示す。ＶＣａＰ細胞はｓｉＥＲＧ又はＹＫ−４−２７９で４８時間処置され、ＥＲＧ標的ｍＲＮＡ及びタンパクレベルが決定された。ＹＫ−４−２７９処置により、ＰＬＡＵ ｍＲＮＡ、ＡＤＡＭ１９ ｍＲＮＡ、及びＰＬＡＴ ｍＲＮＡの発現が低減された。ＰＬＡＵレベルも低減された。 図１７は、ＮＳＣＬＣ細胞株によるＥＲＧタンパク質の発現を示す。ＮＳＣＬＣ細胞株からの総タンパク溶解物は、ＰＡＧＥによって分割された。ヒトＥＲＧタンパク質の発現は、ａｎｔｉ−ＥＲＧ抗体を用いたウェスタンブロット法によって確認された（上部パネル）。分子量マーカーは、左部に付与されている。等タンパク負荷は、同じ薄膜をａｎｔｉ−β−アクチン（ａｎｔｉ−ｂｅｔａ−ａｃｔｉｎ）抗体でストリッピング及び再ブロットすることにより確認された（下部パネル）。 図１８Ａは、ＥＭＴマーカーを誘発するＥＲＧ発現を示す。Ｈ３５８ ＮＳＣＬＣ細胞を、ヒトＥＲＧタンパク質をコードするｃＤＮＡでトランスフェクトした。増加したＥＲＧ発現をウェスタンブロット法によって検出した。 図１８Ｂは、ＥＭＴマーカーを誘発するＥＲＧ発現を示す。即時ＰＣＲ解析により、ＥＲＧ発現細胞においてＺＥＢ１及びＦＯＸＣ２の発現がより高いことが明らかになった。データは、まず１８Ｓ ＲＮＡについて正規化され、その後、空ベクタートランスフェクト細胞に対する誘導倍率（ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）として表される。 図１９は、ＮＳＣＬＣにおいてＥＭＴを阻害するＹＫ−４−２７９を示す。Ａ５４９細胞は、ＴＧＦ−β発現を増加させるとともに、高レベルのＺＥＢ１及びＦＯＸＣ２を発現させ、ＹＫ−４−２７９によるＥＲＧ阻害レベルを低減させた。データは、まず１８Ｓ ＲＮＡについて正規化され、各群に対する対照に分割することによって発現倍率（ｆｏｌｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）が算出された。
以下の記述及び実施例では、開示された発明のいくつかの例示的な実施形態を詳しく説明する。当業者は、本発明の範囲に含まれる本発明の多数の変形及び変更が存在すると理解されるべきである。したがって、特定の例示的な実施形態の説明は、本発明の範囲を限定するものではない。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１結合について、表面プラズモン共鳴を用いて３０００小分子のＮＣＩ／ＤＴＰライブラリをスクリーニングした。化合物ＮＳＣ６３５４３７は、さらなる最適化及びさらなる研究に適した候補として選ばれた（図１）。設計された類似物の第１シリーズにおいて、ＹＫ−４−２７９は最も活性が強かった（図２）。ＹＫ−４−２７９は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１及びＥＳＦＴ細胞を機能的に阻害し、カスパーゼ−３活性を増加させることが示されている（Ｈｙａｒｉｙｅ Ｎ Ｅｒｋｉｚａｎ ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦｌＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎ ｗｉｔｈ ＲＨＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １５（７） ７５０−７５６ （２００９））。本願は、改良された化合物、及びその化合物を用いて肺腺癌、多形性膠芽腫、並びにＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座を有する癌などの疾患を治療する方法に関する。
本明細書で提供される方法及び組成物と共に有用な他の方法及び組成物は、国際公開ＷＯ２００８／０８３３２６号公報、米国公開２０１０／０１６７９９４号公報、米国仮出願第６１／６２３３４９号明細書、及び国際公開ＷＯ２０１３／１５５３４１号公報に開示されており、これらの全開示内容は、参照して明確に本明細書に組み込まれる。
＜定義＞
本明細書において、例えば、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒａ、Ｒｂなどの（これらに限定されない）任意の「Ｒ」基は、指定される原子に結合できる置換基を表す。Ｒ基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。２つの「Ｒ」基が「一緒になっている」と記載される場合、Ｒ基とそれらが結合する原子とにより、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は複素環を形成できる。例えば、ＮＲ１ａＲ１ｂ基におけるＲ１ａ及びＲ１ｂは、「一緒になっている」と示される場合、Ｒ１ａとＲ１ｂとは互いに共有結合して下記のような環：
を形成することを意味するが、これに限定されるものではない。
「任意に置換される」と記載される基は、置換されていなくてもよく、１つ以上の指定される置換基で置換されていてもよい。同様に、「非置換又は置換」と記載される基が置換される場合、置換基は、１つ以上の指定される置換基から選ばれてもよい。指定される置換基がない場合、「任意に置換される」又は「置換される」と示される基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、ヘテロアラルキル、（ヘテロアリシクリル）アルキル、ヒドロキシ、保護ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロゲン、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、保護Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、シリル、スルフェニル、スルフィニル、スルホニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンスルホンアミド、アミノ、一置換アミノ及び二置換アミノ基、並びにそれらの保護誘導体から、それぞれ独立して選ばれる１つ以上の基で置換されてもよいことを意味する。
本明細書において、「Ｃａ〜Ｃｂ」における「ａ」及び「ｂ」は、アルキル、アルケニル若しくはアルキニル基における炭素原子数、又はシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール若しくはヘテロアリシクリル基の環における炭素原子数を表す整数である。すなわち、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル環、シクロアルケニル環、シクロアルキニル環、アリール環、ヘテロアリール環、又はヘテロアリシクリル環は、包括的に、「ａ」〜「ｂ」個の炭素原子を含んでもよい。したがって、例えば、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基は、１個〜４個の炭素原子を有するすべてのアルキル基、すなわち、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−、及び（ＣＨ３）３Ｃ−を指す。アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロアリシクリル基に関して、「ａ」及び「ｂ」が指定されていない場合、これらの定義に記載された最も広い範囲であると考えられる。
本明細書において、「アルキル」は、完全に飽和した（二重結合又は三重結合を有しない）炭化水素基を含む直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素鎖を指す。アルキル基は、１個〜２０個の炭素原子（本定義は数値範囲が指定されていない用語「アルキル」の存在も包含するが、本明細書で示される場合、「１〜２０」などの数値範囲は、その指定された範囲における各整数を指す。例えば、「１個〜２０個の炭素原子」は、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などの、２０個以下の炭素原子からなり得るアルキル基を意味する）を有してもよい。アルキル基は、１個〜１０個の炭素原子を有する中間サイズのアルキルであってもよい。アルキル基は、１個〜６個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。化合物のアルキル基は、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」又は類似の名称として示されてもよい。例として、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、アルキル鎖において１個〜４個の炭素原子があることを示す。すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔ−ブチルから選ばれる。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換又は非置換であってもよい。
本明細書において、「アルケニル」は、直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素鎖に１つ以上の二重結合を含むアルキル基を指す。アルケニル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「アルキニル」は、直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素鎖に１つ以上の三重結合を含むアルキル基を指す。アルキニル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「シクロアルキル」は、完全に飽和した（二重結合又は三重結合を有しない）単環式又は多環式炭化水素環系を指す。２つ以上の環から構成される場合、それらの環は、縮合環の形で互いに結合されてもよい。シクロアルキル基は、環に３個〜１０個の原子、又は３個〜８個の原子を含んでもよい。シクロアルキル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。典型的なシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが含まれるが、これらに限定されない。
複数の二重結合が存在する場合、それらの二重結合はすべての環にわたって完全に非局在化したπ電子系を形成することはない（そうでなければ、その基は本明細書で定義される「アリール」になる）が、本明細書において、「シクロアルケニル」は、少なくとも１つの環に１つ以上の二重結合を含む単環式又は多環式炭化水素環系を指す。２つ以上の環から構成される場合、それらの環は、縮合環の形で互いに結合されてもよい。シクロアルケニル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「シクロアルキニル」は、少なくとも１つの環に１つ以上の三重結合を含む単環式又は多環式炭化水素環系を指す。複数の三重結合が存在する場合、それらの三重結合はすべての環にわたって完全に非局在化したπ電子系を形成することはない。２つ以上の環から構成される場合、それらの環は、縮合環の形で互いに結合されてもよい。シクロアルキニル基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「アリール」は、すべての環にわたって完全に非局在化したπ電子系を有する炭素環式（すべて炭素）の単環式又は多環式芳香環系（２つの炭素環が化学結合を共有する縮合環系を含む）を指す。アリール基の炭素原子数は変更可能である。例えば、アリール基は、Ｃ６〜Ｃ１４アリール基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、又はＣ６アリール基であってもよい。アリール基の例としては、ベンゼン、ナフタレン、及びアズレンが含まれるが、これらに限定されない。アリール基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「ヘテロアリール」は、１つ以上のヘテロ原子、すなわち、炭素以外の元素を含む単環式又は多環式芳香環系（完全に非局在化したπ電子系を有する環系）を指す。そのヘテロ原子としては、窒素、酸素、及び硫黄が含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリール環の原子数は変更可能である。例えば、ヘテロアリール基は、環に４個〜１４個の原子、環に５個〜１０個の原子、又は環に５個〜６個の原子を含んでもよい。さらに、用語「ヘテロアリール」は縮合環系を含み、その縮合環系において、２つの環、例えば少なくとも１つのアリール環及び少なくとも１つのヘテロアリール環、又は少なくとも２つのヘテロアリール環は、少なくとも１つの化学結合を共有する。ヘテロアリール環の例としては、フラン、フラザン、チオフェン、ベンゾチオフェン、フタラジン、ピロール、オキサゾール、ベンゾオキサゾール、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，４−オキサジアゾール、チアゾール、１，２，３−チアジアゾール、１，２，４−チアジアゾール、ベンゾチアゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、インドール、インダゾール、ピラゾール、ベンゾピラゾール、イソオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、イソチアゾール、トリアゾール、ベンゾトリアゾール、チアジアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、プリン、プテリジン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、及びトリアジンが含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「ヘテロシクリル」又は「ヘテロアリシクリル」は、炭素原子と１個〜５個のヘテロ原子とにより構成される、三員、四員、五員、六員、七員、八員、九員、十員、十八員までの単環式、二環式、及び三環式の環系を指す。複素環は、このように位置している１つ以上の不飽和結合を任意に含んでもよいが、完全に非局在化したπ電子系がすべての環にわたって発生することはない。ヘテロ原子は、酸素、硫黄、及び窒素を含む、炭素以外の元素であるが、これらに限定されるものではない。複素環は、ラクタム、ラクトン、環状イミド、環状チオイミド、及び環状カルバマートなどのオキソ系及びチオ系を含むように定義されるために、１つ以上のカルボニル又はチオカルボニル官能基をさらに含んでもよい。２つ以上の環から構成される場合、それらの環は、縮合環の形で互いに結合されてもよい。また、ヘテロ脂環式環における任意の窒素は、四級化されてもよい。ヘテロシクリル又はヘテロ脂環式基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。このような「ヘテロシクリル」又は「ヘテロアリシクリル」基の例としては、１，３−ジオキシン、１，３−ジオキサン、１，４−ジオキサン、１，２−ジオキソラン、１，３−ジオキソラン、１，４−ジオキソラン、１，３−オキサチアン、１，４−オキサチイン、１，３−オキサチオラン、１，３−ジチオール、１，３−ジチオラン、１，４−オキサチアン、テトラヒドロ−１，４−チアジン、２Ｈ−１，２−オキサジン、マレイミド、スクシンイミド、バルビツール酸、チオバルビツール酸、ジオキソピペラジン、ヒダントイン、ジヒドロウラシル、トリオキサン、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、オキサゾリジノン、チアゾリン、チアゾリジン、モルホリン、オキシラン、ピペリジン−Ｎ−オキシド、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、ピロリドン、ピロリジオン、４−ピペリドン、ピラゾリン、ピラゾリジン、２−オキソピロリジン、テトラヒドロピラン、４Ｈ−ピラン、テトラヒドロチオピラン、チアモルホリン、チアモルホリンスルホキシド、チアモルホリンスルホン、及びそれらのベンゾ縮合類似物（例えば、ベンズイミダゾリジノン、テトラヒドロキノリン、３，４−メチレンジオキシフェニル）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書において、「アラルキル」及び「アリール（アルキル）」は、低級アルキレン基を介して置換基として接続されるアリール基を指す。アラルキルの低級アルキレン及びアリール基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。例としては、ベンジル、２−フェニルアルキル、３−フェニルアルキル、及びナフチルアルキルが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書において、「ヘテロアラルキル」及び「ヘテロアリール（アルキル）」は、低級アルキレン基を介して置換基として接続されるヘテロアリール基を指す。ヘテロアラルキルの低級アルキレン及びヘテロアリール基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。例としては、２−チエニルアルキル、３−チエニルアルキル、フリルアルキル、チエニルアルキル、ピロリルアルキル、ピリジルアルキル、イソオキサゾリルアルキル、及びイミダゾリルアルキル、並びにそれらのベンゾ縮合類似物が含まれるが、これらに限定されない。
「（ヘテロアリシクリル）アルキル」及び「（ヘテロシクリル）アルキル」は、低級アルキレン基を介して置換基として接続される複素環式又はヘテロ脂環式基を指す。（ヘテロアリシクリル）アルキルの低級アルキレン及びヘテロシクリルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。例としては、（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチル、（ピペリジン−４−イル）エチル、（ピペリジン−４−イル）プロピル、（テトラヒドロ−２Ｈ−チオピラン−４−イル）メチル、及び（１，３−チアジナン−４−イル）メチルが含まれるが、これらに限定されない。
「低級アルキレン基」は、直鎖状の−ＣＨ２−連結基であり、その末端炭素原子に介して分子断片を接続するように結合を形成する。例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、及びブチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）が含まれるが、これらに限定されない。低級アルキレン基は、低級アルキレン基における１つ以上の水素を、下記の用語「置換」の定義で記載される置換基に換えることによって、置換されてもよい。
本明細書において、「アルコキシ」は、式−ＯＲを指し、ここで、Ｒは、上記のように定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、又はシクロアルキニルである。アルコキシの例は、限定されないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、１−メチルエトキシ（イソプロポキシ）、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、及びｔｅｒｔ−ブトキシである。アルコキシは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「アシル」は、カルボニル基を介して置換基として接続される水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はアリールを指す。例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリルが含まれる。アシルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「ヒドロキシアルキル」は、１つ以上の水素原子がヒドロキシ基によって置換されるアルキル基を指す。ヒドロキシアルキル基の例としては、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、及び２，２−ジヒドロキシエチルが含まれるが、これらに限定されない。ヒドロキシアルキルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「ハロアルキル」は、１つ以上の水素原子がハロゲンによって置換されるアルキル基（例えば、モノハロアルキル、ジハロアルキル、及びトリハロアルキル）を指す。このような基としては、クロロメチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、及び１−クロロ−２−フルオロメチル、２−フルオロイソブチルが含まれるが、これらに限定されない。ハロアルキルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「ハロアルコキシ」は、１つ以上の水素原子がハロゲンによって置換されるアルコキシ基（例えば、モノハロアルコキシ、ジハロアルコキシ、及びトリハロアルコキシ）を指す。このような基としては、クロロメトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、１−クロロ−２−フルオロメトキシ、及び２−フルオロイソブトキシが含まれるが、これらに限定されない。ハロアルコキシは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書において、「アリールオキシ」及び「アリールチオ」は、ＲＯ−及びＲＳ−を指し、ここで、Ｒは、例えばフェニルなどのアリールであるが、これに限定されるものではない。アリールオキシ及びアリールチオは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「スルフェニル」又は「チオ」基は、「−ＳＲ」基を指し、ここで、Ｒは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。スルフェニルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。用語「スルフェニル」又は「チオ」は、−ＳＨ基（以下、「チオール」基とも呼ばれる）、及び−ＳＲＡ基（以下、ＲＡが水素ではない場合、「チオエーテル」とも呼ばれる）を含むが、これらに限定されない。
「スルフィニル」基は、「−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ」基を指し、ここで、Ｒは「スルフェニル」に関して定義されるＲと同じであってもよい。スルフィニルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「スルホニル」基は、「ＳＯ２Ｒ」基を指し、ここで、Ｒは「スルフェニル」に関して定義されるＲと同じであってもよい。スルホニルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｏ−カルボキシ」基は、「ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ−」基を指し、ここで、本明細書で定義されるように、Ｒは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｏ−カルボキシは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
用語「エステル」及び「Ｃ−カルボキシ」は、「−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ」基を指し、ここで、Ｒは「Ｏ−カルボキシ」に関して定義されるＲと同じであってもよい。エステル及びＣ−カルボキシは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「チオカルボニル」基は、「−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ」基を指し、ここで、Ｒは「Ｏ−カルボキシ」に関して定義されるＲと同じであってもよい。チオカルボニルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「トリハロメタンスルホニル」基は、「Ｘ３ＣＳＯ２−」基を指し、ここで、Ｘはハロゲンである。
「トリハロメタンスルホンアミド」基は、「Ｘ３ＣＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＡ）−」基を指し、ここで、Ｘはハロゲンであり、ＲＡは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルである。
本明細書において、用語「アミノ」は、−Ｎ（Ｒ）２基を指し、ここで、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルからなる群より独立して選ばれる。アミノは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。用語「アミノ」は、−ＮＨ２基（「アンモニウム」基とも呼ばれる）、−ＮＨＲ基（Ｒが水素ではない場合、「第２級アミン」とも呼ばれる）、又は−ＮＲ２基（Ｒが水素ではない場合、「第３級アミン」とも呼ばれる）を含むが、これらに限定されない。
本明細書において、用語「ヒドロキシ」は−ＯＨ基を指す。
「シアノ」基は「−ＣＮ」基を指す。
本明細書において、用語「アジド」は、−Ｎ３基を指す。
「イソシアナト」基は、「−ＮＣＯ」基を指す。
「チオシアナト」基は、「−ＣＮＳ」基を指す。
「イソチオシアナト」基は、「−ＮＣＳ」基を指す。
「メルカプト」基は、「−ＳＨ」基を指す。
「カルボニル」基は、Ｃ＝Ｏ基を指す。
「Ｓ−スルホンアミド」基は、「−ＳＯ２Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここで、ＲＡ及びＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｓ−スルホンアミドは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｎ−スルホンアミド」基は、「ＲＳＯ２Ｎ（ＲＡ）−」基を指し、ここで、Ｒ及びＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｎ−スルホンアミドは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｏ−カルバミル」基は、「−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここで、ＲＡ及びＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｏ−カルバミルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｎ−カルバミル」基は、「ＲＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ）−」基を指し、ここで、Ｒ及びＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｎ−カルバミルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｏ−チオカルバミル」基は、「−ＯＣ（＝Ｓ）−Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここで、ＲＡ及びＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｏ−チオカルバミルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｎ−チオカルバミル」基は、「ＲＯＣ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＡ）−」基を指し、ここで、Ｒ及びＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｎ−チオカルバミルは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｃ−アミド」基は、「−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ここで、ＲＡ及びＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｃ−アミドは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
「Ｎ−アミド」基は、「ＲＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ）−」基を指し、ここで、Ｒ及びＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、又は（ヘテロアリシクリル）アルキルであってもよい。Ｎ−アミドは、置換されていてもよく、非置換であってもよい。
本明細書で使用される用語「ハロゲン原子」又は「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素などの元素の周期表の第７族における任意の放射性安定した原子を意味する。
置換基の数が特定されない場合（例えば、ハロアルキル）、１つ以上の置換基が存在してもよい。例えば、「ハロアルキル」は、１つ以上の同一又は異なるハロゲンを含んでもよい。別の例として、「Ｃ１〜Ｃ３アルコキシフェニル」は、１つ以上の同一又は異なる、１個、２個、又は３個の炭素原子を有するアルコキシ基を含んでもよい。
本明細書において、任意の保護基、アミノ酸、及び他の化合物の略称は、特に指定されない限り、それらの慣例、広く認められている略称、又はＩＵＰＡＣ・ＩＵＢ合同委員会生化学命名法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１：９４２−９４４（１９７２）を参照）と一致している。
本明細書に記載の化合物は、同位体で標識され得ると理解される。重水素などの同位体による置換によって、より高い代謝安定性に起因する特定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の増加、又は必要投与量の減少などの利点が得られる。化合物構造に示されるような各化学元素は、上記元素の任意の同位体を含んでもよい。例えば、化合物構造において水素原子は、その化合物に存在することが明示されるか、又は理解される。水素原子が存在し得る化合物の任意の位置において、水素原子は、水素−１（軽水素）及び水素−２（重水素）を含む（これらに限定されない）任意の水素同位体であってもよい。したがって、本明細書における化合物は、特段の定めがない限り、すべての潜在的な同位体形態を包含する。
本明細書に記載の方法及び組み合わせは、結晶形（元素組成が同じである化合物の異なる結晶充填配置を含む多形としても知られる）、非晶相、塩、溶媒和物、及び水和物を含むと理解される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態で存在する。他の実施形態において、本明細書に記載の化合物は、非溶媒和形態で存在する。溶媒和物は、化学量論又は非化学量論量の溶媒を含み、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒による結晶化プロセルにおいて形成され得る。溶媒が水である場合には、水和物を形成し、溶媒がアルコールである場合には、アルコラートを形成する。また、本明細書で提供される化合物は、溶媒和形態だけでなく、非溶媒和形態でも存在する。一般的に、本明細書で提供される化合物及び方法の目的に対して、溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であると考えられる。
数値範囲を提供する場合、上限及び下限、並びにその範囲における上限と下限との間の各介在値は、実施形態の範囲内に含まれると理解される。
＜特定の合成法＞
いくつかの実施形態において、適切なアセトフェノン（４．０当量）及び触媒量のジエチルアミン（１０滴）を、４，７−ジクロロイサチン（１．０当量）のメタノール（５ｍＬ）溶液に加えた。出発物質（４，７−ジクロロイサチン）が完全に消失するまで、混合液を室温で攪拌した。得られた溶液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーに付してヘキサン／酢酸エチルで溶出し、定量的収率で純粋生成物を得た。ヘキサン／酢酸エチルで再結晶することにより、さらなる精製を行った。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、１Ｈ（４００ＭＨｚ）ＮＭＲスペクトルを記録した。化学シフト（δ）は、内部標準テトラメチルシランから低磁場側にｐｐｍで表し、結合定数（Ｊ値）は、ヘルツ（Ｈｚ）で表した。元素分析は、Ａｔｌａｎｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｌａｂで行った。
本明細書で提供される特定の化合物は、下記の合成スキームに従って調製できる。
これらのスキームにおいて、ケトン（４．０当量）及び触媒量のジエチルアミン（１０滴）を、置換イサチン（１．０当量）のメタノール（５ｍＬ）溶液に加えた。出発物質（置換イサチン）が完全に消失するまで、混合液を室温で攪拌した。得られた溶液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーに付してヘキサン／酢酸エチルで溶出し、定量的収率で純粋生成物を得た。ヘキサン／酢酸エチルで再結晶することにより、さらなる精製を行った。
２つの環系を連結する基における炭素−炭素二重結合に組み込まれる阻害剤は、当技術分野において既知の合成技術を使用して化合物を還元することにより、対応する飽和阻害剤から調製できる。
＜特定の化合物＞
本明細書で提供される特定の化合物は、一般式（Ｉ）：
［式中、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
からなる群より選ばれ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１４、Ｒ１７、及びＲ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、ｎは、０〜４の整数であり、ｐは、１又は３であり、破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
からなる群より選ばれる。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、−ＳＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である。
置換基の存在により、小分子阻害剤は、薬学的に許容される塩の形であってもよい。本明細書において、「薬学的に許容される塩」は、広義の用語であり、当業者にとって通常かつ慣用的な意味である（特別な意味又はカスタマイズされた意味に限定されるべきではない）。また、薬学的に許容される非毒性の酸又は塩基で調製される塩を指すが、これに限定されない。適切な薬学的に許容される塩としては、アルミニウム、亜鉛の塩、リチウム、ナトリウム、及びカリウムの塩などのアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウムの塩などのアルカリ土類金属塩が例示される金属塩と、リシン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、プロカイン、並びに遊離酸及び遊離塩基の三塩などが例示される有機塩と、硫酸塩、塩酸塩、及び臭化水素酸塩などが例示される無機塩と、例えばＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘのような当業者に周知の情報源に記載され、現在広範な医薬用途に用いられる他の塩と、が含まれる。本明細書において検討される治療薬の塩を製造するために、所望の活性を実質上阻害しない限り、任意の適切な成分を選ぶことができる。
好ましい実施形態に係る化合物は、異性体、ラセミ体、光学異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、及びシス／トランス配座異性体を含んでもよい。これらの異性体は全て、これらの混合物を含み、混合物も好ましい実施形態の範囲内に含まれる。上述のように、好ましい実施形態に係る化合物は、不斉中心を有してもよい。例えば、これらの化合物は、不斉炭素原子を有する場合、エナンチオマー又はジアステレオ異性体、及び例えばラセミ体などのこれらの混合物の形で存在してもよい。不斉炭素原子は、（Ｒ）配置、（Ｓ）配置、又は（Ｒ,Ｓ）配置、好ましくは（Ｒ）配置又は（Ｓ）配置で存在してもよく、これらの混合物として存在してもよい。異性体混合物は、必要に応じて、純粋な異性体を得るための従来の方法により単離されてもよい。
化合物は非晶形であってもよく、結晶形であってもよい。好ましい実施形態に係る化合物の結晶形は、好ましい実施形態に含まれる多形であってもよい。さらに、好ましい実施形態に係るいくつかの化合物は、水又は他の有機溶媒とともに溶媒和物を形成してもよい。このような溶媒和物は、同様に、好ましい実施形態の範囲内に含まれる。
＜特定の医薬組成物＞
一般的には、好ましい実施形態に係る阻害剤を静脈内又は皮下の単位剤形で投与することが好ましいが、他の投与経路も考えられる。考えられる投与経路としては、経口、非経口、静脈内、及び皮下が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態に係る阻害剤は、例えば経口投与などのための液体製剤に製剤化することができる。適切な剤形は、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などを含む。経口投与のための特に好ましい単位剤形は、錠剤及びカプセル剤を含む。単位剤形は、１日１回投与するように構成されることが特に好ましいが、特定の実施形態において、１日２回又はそれ以上の回数で投与するように構成されることが望ましい場合もある。
好ましい実施形態に係る医薬組成物は、受容者の血液又は他の体液と等張であることが好ましい。組成物の等張性は、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、又は他の無機若しくは有機溶質によって得られる。塩化ナトリウムは特に好ましい。例えば、酢酸及びその塩、クエン酸及びその塩、ホウ酸及びその塩、並びにリン酸及びその塩などの緩衝剤を使用することができる。非経口用賦形剤は、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、又は不揮発性油を含む。静脈内用賦形剤は、流体及び栄養補充液、電解質補充液（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）などを含む。
医薬組成物の粘度は、薬学的に許容される増粘剤を使用して、選択されたレベルに維持することができる。メチルセルロースは、簡単に入手可能かつ経済的に利用可能で、使いやすいので、好ましい。他の適切な増粘剤としては、例えば、キサンタンゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが含まれる。増粘剤の好ましい濃度は、選択された増粘剤によって決まる。選択された粘度が得られる量を使用することが好ましい。粘性組成物は、通常、このような増粘剤を添加することによって溶液で調製される。
薬学的に許容される保存剤は、医薬組成物の貯蔵寿命を増加させるために使用することができる。例えば、パラベン、チメロサール、クロロブタノール、又は塩化ベンザルコニウムを含む種々の保存剤が使用できるが、ベンジルアルコールは、適切であり得る。保存剤の適切な濃度は、選択された保存剤によってより多くの量又はより少ない量が望ましいが、典型的に、組成物の総重量に基づいて約０．０２％〜約２％である。前述のような還元剤は、製剤の良好な貯蔵寿命を維持するために有利に使用することができる。
好ましい実施形態に係る阻害剤は、適切な担体、希釈剤、又は滅菌水、生理食塩水、グルコースなどの賦形剤と混合されてもよく、所望の投与経路及び製剤に応じて、湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化又は増粘剤、保存剤、香味剤、着色剤などの補助物質を含んでもよい。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｕｎｅ １，２００３）、及び「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．；１８ｔｈ ａｎｄ １９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎｓ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９８５，ａｎｄ Ｊｕｎｅ １９９０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）を参照する。このような製剤としては、錯化剤、金属イオン、ポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル、デキストランなどの高分子化合物、リポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層若しくは多層ベシクル、赤血球ゴースト、又はスフェロプラストを含んでもよい。リポソーム製剤に適した脂質としては、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などが含まれるが、これらに限定されない。そのような追加成分の存在は、物理的状態、溶解度、安定性、インビボ放出速度、及びインビボクリアランス速度に影響を与えることができるので、例えば、担体の特性が選択された投与経路に合わせるように、意図された用途に応じて選択される。
経口投与の場合、医薬組成物は、錠剤、水性又は油性懸濁液、分散性粉末又は顆粒剤、エマルジョン、硬カプセル剤若しくは軟カプセル剤、シロップ剤、又はエリキシル剤として提供することができる。経口用組成物は、医薬組成物を製造するための当技術分野で既知の任意の方法に応じて調製することができ、甘味料、香味剤、着色剤、及び保存剤のうちの１つ以上の添加剤を含んでもよい。水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤と混合される活性成分を含んでもよい。
経口使用のための製剤は、活性成分が炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、又はカオリンなどの不活性固体希釈剤と混合される硬ゼラチンカプセル剤として提供されてもよく、軟ゼラチンカプセル剤として提供されてもよい。軟カプセル剤において、阻害剤は、水、又はピーナッツ油、オリーブ油、脂肪油、流動パラフィン、若しくは液体ポリエチレングリコールなどの油媒体のような適切な液体に溶解又は懸濁することができる。経口投与用の安定剤及びミクロスフェアを使用することができる。カプセル剤は、ゼラチンからなるプッシュフィットカプセル剤と、ゼラチン及びグリセロール又はソルビトールなどの可塑剤からなる軟密閉カプセル剤とを含んでもよい。プッシュフィットカプセル剤は、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどのバインダー、及び／又は、タルク若しくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、並びに任意に選択した安定剤と混合される活性成分を含んでもよい。
錠剤は、素錠であってもよく、又は、崩壊及び消化管での吸収を遅らせることによって、長期間にわたって持続作用を提供するように、既知の方法でコーティングされてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリンなどの時間遅延材料を使用することができる。錠剤型などの固形で投与する場合、固形は典型的に、約０．００１重量％以上、約５０重量％以下の活性成分を含み、好ましくは、約０．００５重量％、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％、０．１重量％、０．２重量％、０．３重量％、０．４重量％、０．５重量％、０．６重量％、０．７重量％、０．８重量％、０．９重量％、又は１重量％から、約２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、又は４５重量％までの活性成分を含む。
錠剤は、不活性物質を含む非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合される活性成分を含んでもよい。例えば、錠剤は、任意に１つ以上の追加成分とともに、圧縮又は成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、粉末又は顆粒などの自由流動形態の活性成分をバインダー、潤滑剤、不活性希釈剤、界面活性剤、又は分散剤と任意に混合して、適当な機械で圧縮することによって製造することができる。湿製錠剤は、不活性液体希釈剤に濡れた粉状阻害剤と混合して、適切な機械で成形することによって製造することができる。
好ましくは、各錠剤又はカプセル剤は、約１ｍｇ以上、約１０００ｍｇ以下の好ましい実施形態に係る阻害剤を含み、より好ましくは、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、又は１００ｍｇから、約１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、又は９００ｍgまでの好ましい実施形態に係る阻害剤を含む。最も好ましくは、錠剤又はカプセル剤は、分割投与量を可能にするための用量範囲で提供される。患者に適している投与量及び１日当たりの投与回数は、このように便利に選択することができる。特定の実施形態において、２つ以上の治療薬を併用して単一の錠剤又は他の剤形で投与する（例えば、併用療法において）ことが好ましいが、他の実施形態において、別個の剤形で治療薬を提供することが好ましい。
適切な不活性物質は、炭水化物、マンニトール、ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、修飾デキストラン、デンプンなどの希釈剤、又は、三リン酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、及び塩化ナトリウムなどの無機塩類を含む。製剤には崩壊剤又は造粒剤を含んでもよく、崩壊剤又は造粒剤としては、例えば、コーンスターチなどのデンプン、アルギン酸、デンプングリコール酸ナトリウム、アンバーライト、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラミロペクチン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸カルボキシメチルセルロース、天然スポンジ及びベントナイト、不溶性陽イオン交換樹脂、寒天、カラヤゴム若しくはトラガカントゴムなどの粉末ゴム、又はアルギン酸若しくはその塩などが含まれる。
硬い錠剤を形成するために、バインダーを使用することができる。バインダーとしては、アカシア、トラガカント、デンプン及びゼラチン、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの天然物由来の材料が含まれる。
錠剤製剤には、例えば、ステアリン酸又はそのマグネシウム若しくはカルシウム塩、ポリテトラフルオロエチレン、流動パラフィン、植物油及びワックス、ラウリル硫酸ナトリウムス、ラウリル硫酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、デンプン、タルク、焼成シリカ、シリコアルミネート水和物などの潤滑剤を含むことができる。
界面活性剤を使用することができ、界面活性剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、及びジオクチルスルホン酸ナトリウムなどの陰イオン界面活性剤、塩化ベンザルコニウム若しくは塩化ベンゼトニウムなどの陽イオン界面活性剤、又は、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート、蔗糖脂肪酸エステル、メチルセルロース、若しくはカルボキシメチルセルロースなどの非イオン界面活性剤が含まれる。
拡散又は浸出機構のいずれかにより放出を可能にする不活性マトリックスにアミホスチン又はその類似物が組み込まれる放出制御製剤を使用することができる。徐々に変性するマトリックスは、製剤に組み込むことができる。他の送達システムとしては、徐放、遅延放出、又は持続放出送達システムが含まれ得る。
コーティングを使用することができ、コーティングとしては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシ−エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、ナトリウムカルボキシ−メチルセルロース、プロビドン、及びポリエチレングリコールなどの非腸溶性材料、又は、フタル酸エステルなどの腸溶性材料が含まれる。染料又は色素は、識別のため、又は阻害剤の用量の異なる組み合わせを特徴づけるために添加することができる。
液体形態で経口投与する場合、水、石油などの液体担体、ピーナッツ油、鉱油、大豆油、若しくはゴマ油などの動物性又は植物性油脂又は合成油は、活性成分に添加することができる。また、生理食塩水溶液、デキストロース、若しくは他の糖溶液、又はエチレングリコール、プロピレングリコール、若しくはポリエチレングリコールなどのグリコールは、適切な液体担体である。医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、オリーブ油若しくはラッカセイ油などの植物油、流動パラフィンなどの鉱油、又はそれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤としては、アカシアゴム及びトラガカントゴムなどの天然ゴムと、大豆レシチンなどの天然リン脂質と、モノオレイン酸ソルビタンなどの、脂肪酸及び無水ヘキシトールに由来するエステル又は部分エステルと、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどの、それらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物とが含まれる。エマルジョンは、甘味剤及び香味剤を含んでもよい。
また、肺送達を利用することができる。化合物は、吸入の間に肺に送達され、肺上皮層を透過して血流に達する。治療薬の肺送達のために設計された種々の機械装置を使用することができ、その機械装置としては、当業者によく知られているネブライザー、定量吸入器、及び粉末吸入器が含まれるが、これらに限定されない。これらの装置は、化合物の投薬に適している製剤を使用する。典型的に、各製剤は、使用する装置の種類によって特定され、治療に有効である希釈剤、補助剤、及び／又は担体に加え、適切な噴射剤材料を使用することができる。
化合物及び／又は他の任意の活性成分は有利に、０．１μｍ以上、１０μｍ以下、より好ましくは約０．２μｍ、０．３μｍ、０．４μｍ、０．５μｍ、０．６μｍ、０．７μｍ、０．８μｍ、又は０．９μｍから、約１．０μｍ、１．５μｍ、２．０μｍ、２．５μｍ、３．０μｍ、３．５μｍ、４．０μｍ、４．５μｍ、５．０μｍ、５．５μｍ、６．０μｍ、６．５μｍ、７．０μｍ、７．５μｍ、８．０μｍ、８．５μｍ、９．０μｍ、又は９．５μｍまでの平均粒径を有する微粒子の形態で、肺送達のために調製される。阻害剤の肺送達のための薬学的に許容される担体としては、トレハロース、マンニトール、キシリトール、スクロース、ラクトース、及びソルビトールなどの炭水化物が含まれる。製剤に使用する他の成分は、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、及びＤＯＰＣを含んでもよい。天然又は合成の界面活性剤を使用することができ、その界面活性剤としては、ポリエチレングリコール、及びシクロデキストランなどのデキストランが含まれる。胆汁酸塩及び他の関連するエンハンサー、並びにセルロース及びセルロース誘導体、及びアミノ酸を使用することができる。リポソーム、マイクロカプセル、ミクロスフェア、包接錯体、及び他の種類の担体を使用することもできる。
ジェット式又は超音波式のいずれかのネブライザーによる使用に適している医薬製剤は、典型的に、水に溶解又は懸濁される阻害剤を、約０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、約１００ｍｇ／ｍＬ以下の阻害剤の溶液における濃度で、好ましくは約０．１ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、又は１０ｍｇ／ｍＬから、約１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、又は９０ｍｇ／ｍＬまでの阻害剤の溶液における濃度で含む。また、製剤は、緩衝液及び単糖を含んでもよい（例えば、タンパク質安定化及び浸透圧の調節のために）。ネブライザー製剤には、エアロゾルを形成する際に溶液の噴霧化による阻害剤の表面誘起凝集を減少又は防止するために、界面活性剤を含んでもよい。
定量吸入装置とともに使用するための製剤は、一般的に、界面活性剤の助けを借りて噴射剤に懸濁される活性成分を含有する微粉を含む。噴射剤は、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、及び炭化水素などの従来の噴射剤を含んでもよい。好ましい噴射剤としては、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、及びそれらの組み合わせが含まれる。適切な界面活性剤としては、ソルビタントリオレート、大豆レシチン、及びオレイン酸が含まれる。
粉末吸入装置から投薬するための製剤は、典型的に、阻害剤を含有するとともにラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース、又はキシリトールなどの充填剤を任意に含有する乾燥微粉を、装置からの粉末の分散を促進する量で、典型的に製剤の約１重量％以上、約９９重量％以下、好ましくは製剤の約５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、又は５０重量％から、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、又は９０重量％までの量で含む。
好ましい実施形態に係る化合物は、静脈内、非経口、又は他の注射経路により投与される場合、発熱物質を含まない、非経口的に許容される水溶液又は油性懸濁液の形態であることが好ましい。懸濁液は、当技術分野でよく知られている方法に従って、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて調製することができる。適切なｐＨ、等張性、安定性などを有し、許容できる水溶液の調製は、当業者によく知られている範囲内にある。好適な注射用医薬組成物は、１，３−ブタンジオール、水、等張塩化ナトリウム溶液、リンゲル溶液、デキストロース溶液、デキストロース及び塩化ナトリウム溶液、乳酸リンゲル溶液などの等張賦形剤、又は当技術分野でよく知られている他の賦形剤を含むことが好ましい。さらに、滅菌不揮発性油は、従来の溶媒又は懸濁媒体として使用することができる。この目的のために、合成のモノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無菌性不揮発性油は、使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、同様に、注射用製剤の調製に使用することができる。医薬組成物は、安定剤、保存剤、緩衝液、抗酸化剤、又は当業者によく知られている他の添加剤を含んでもよい。
注射持続時間は、種々の要因に応じて調整することができ、数秒以内の間に投与される単回注射と、０．５時間、０．１時間、０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、又は２４時間以上までの持続静脈内投与とを含んでもよい。
好ましい実施形態に係る化合物は、医薬組成物によく見られる従来の補助成分を、それらの技術分野で慣用の方法、及び慣用のレベルでさらに使用することができる。したがって、例えば、組成物は、併用療法のために添加される相溶性のある薬学的活性物質（例えば、補助的抗菌剤、止痒剤、収斂剤、局所麻酔剤、抗炎症剤、還元剤、化学療法剤など）を含んでもよく、また、好ましい実施形態に係る種々の剤形を物理的に調製するのに有用である特定の材料、例えば賦形剤、染料、増粘剤、安定剤、保存剤又は抗酸化剤などを含んでもよい。好ましい実施形態に係る化合物と併用可能である抗癌剤は、ビンブラスチン及びビンクリスチンなどのビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシンなどのアントラサイクリン、ビスアントレン及びミトキサントロンなどのアントラセン、エトポシド及びテニポシドなどのエピポドフィロトキシン、及び他のアクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ミトラマイシン、メトトレキサート、ドセタキセル、エトポシド（ＶＰ−１６）、パクリタキセル、ドセタキセル、及びアドリアマイシンなどの抗癌剤、並びに免疫抑制剤（例えば、シクロスポリンＡ、タクロリムス）を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される化合物、組成物、及び方法は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、オーロラキナーゼ阻害剤、脱メチル化剤（例えば、５−ＡＺＡシチジン）、ナチュラルキラー細胞による免疫療法、ＩＧＦ−ＩＲ抗体、ユーイング抗原抗体、免疫抑制薬、及びヒドロキシウレアと併用されてもよい。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例としては、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、ベリノスタット、モセチノスタット（ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）、ギビノスタット（ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、及びトリコスタチンＡが含まれる。オーロラキナーゼ阻害剤の例としては、ＺＭ４４７４３９、ヘスペラジン（ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ）、及びＶＸ−６８０が含まれる。脱メチル化剤の例としては、５−アザシチジン、５−アザデオキシシチジン、及びプロカインが含まれる。免疫抑制薬の例としては、６−メルカプトプリン、及びアザチオプリンが含まれる。
＜特定のキット＞
好ましい実施形態に係る化合物は、キットの形で、医師又は他の医療専門家による投与に提供され得る。キットは、適切な医薬組成物における化合物の収納容器、及び対象に医薬組成物を投与するための使用説明を収容するパッケージである。また、キットは、例えば、本明細書に記載される肉腫の治療に現在使用される化学療法薬などの１つ以上の付加的治療薬を任意に含んでもよい。例えば、１つ以上の付加的化学療法薬と併用する好ましい実施形態に係る化合物が含まれる１つ以上の組成物を含有するキットを提供することができ、又は好ましい実施形態に係る阻害剤が含まれる医薬組成物と付加的治療薬とを分けるキットを提供することができる。キットは、順次又は連続投与のために、個別投与量の好ましい実施形態に係る化合物を含んでもよい。キットは、１つ以上の診断ツール及び使用説明を任意に含んでもよい。キットは、例えば注射器などの適切な送達デバイスを、阻害剤及び他の任意の治療薬を投与するための使用説明とともに含んでもよい。キットは、それに含まれる一部又は全ての治療薬の保管、再構成（必要な場合）、及び投与のための使用説明を任意に含んでもよい。キットは、対象に与えられる投与回数に対応する複数の容器を含んでもよい。
＜特定の治療法＞
本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）を治療する方法に関する。ＥＳＦＴは、特有の融合タンパク質であるＥＷＳ−ＦＬＩ１を含む。ＥＳＦＴは、３歳〜４０歳の間の患者に影響を与え、ほとんどの場合１０代の患者に発生する。ＥＳＦＴが由来する発生学的細胞型は不明であるにもかかわらず、腫瘍は骨に近接して成長する場合が多いが、軟組織塊として発生する可能性もある。転位性ＥＳＦＴを呈する患者の７５％〜８０％は、高用量の化学療法にもかかわらず、５年以内に死亡することになる一方、局所腫瘍を呈する患者の４０％以上は、再発性疾患を発症することになるとともに、これらの患者の大部分は、ＥＳＦＴで死亡することになる（Ｇｒｉｅｒ ＨＥ，Ｋｒａｉｌｏ ＭＤ，Ｔａｒｂｅｌｌ ＮＪ，ｅｔ ａｌ．Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ ａｎｄ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｔｏ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｂｏｎｅ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００３；３４８（８）：６９４−７０１）。これらの患者の生存率は、用量強化化学治療（ｄｏｓｅ−ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）後でも、過去２０年間に改善していない。生存率を改善し治療関連死亡率を減少させるために、好ましい実施形態で提供されるような、ＥＳＦＴ患者を治療するための新規標的戦略を使用することができる。
ＥＳＦＴは、９５％の腫瘍において、２２番染色体に存在するＥＷＳ遺伝子（ユーイング肉腫）の中央エクソンとｅｔｓファミリー遺伝子の中央エクソンとの間、すなわち、１１番染色体に存在するＦＬＩ１（フレンド白血病統合体）との間 ｔ（１１;２２）又は２１番染色体に存在するＥＲＧとの間 ｔ（２１;２２）、で発生する転座によって特徴付けられる。ＥＷＳ−ＦＬＩ１融合転写物は、２つのプライマリドメインを有する５５ｋＤａタンパク質（約６８ｋＤの電気泳動移動度）をコードする。ＦＬＩ１ドメインは、高度に保存されたｅｔｓＤＮＡ結合ドメインを含有する。一方、ＥＷＳドメインは、強力な転写活性化因子である（Ｍａｙ ＷＡ，Ｌｅｓｓｎｉｃｋ ＳＬ，Ｂｒａｕｎ ＢＳ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ＥＷＳ／ＦＬＩ−１ ｆｕｓｉｏｎ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｍｏｒｅ ｐｏｔｅｎｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｎｄ ｉｓ ａ ｍｏｒｅ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｅｎｅ ｔｈａｎ ＦＬＩ−１．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９３；１３（１２）：７３９３−８）。得られたＥＷＳ−ＦＬＩ１融合タンパク質は、異常な転写因子として作用する。マウス線維芽細胞のＥＷＳ−ＦＬＩ１形質転換は、ＥＷＳ及びＦＬＩ１双方の機能ドメインが無傷であることを必要とする（Ｍａｙ ＷＡ，Ｇｉｓｈｉｚｋｙ ＭＬ，Ｌｅｓｓｎｉｃｋ ＳＬ，ｅｔ ａｌ．Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ １１；２２ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｔｈｅ ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ＦＬＩ１ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １９９３；９０（１２）：５７５２−６）。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、腫瘍細胞のみで発現され、ＥＳＦＴ細胞株の増殖を維持するために必要とされる点において、優れた治療標的である。アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｙ，Ｎｅｃｋｅｒｓ Ｌ，Ｂｈａｔ ＮＫ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＥＷＳ−ＦＬＩ−１ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ １９９７；３１（１−２）：９−１６；Ｔａｎａｋａ Ｋ，Ｉｗａｋｕｍａ Ｔ，Ｈａｒｉｍａｙａ Ｋ，Ｓａｔｏ Ｈ，Ｉｗａｍｏｔｏ Ｙ．ＥＷＳ−Ｆｌｉ１ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９９７；９９（２）：２３９−４７）、又は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（Ｏｕｃｈｉｄａ Ｍ，Ｏｈｎｏ Ｔ，Ｆｕｊｉｍｕｒａ Ｙ，Ｒａｏ ＶＮ，Ｒｅｄｄｙ ＥＳ．Ｌｏｓｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ｔｏ ＥＷＳ−ｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９５；１１（６）：１０４９−５４；Ｍａｋｓｉｍｅｎｋｏ Ａ，Ｍａｌｖｙ Ｃ，Ｌａｍｂｅｒｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ａ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｒｅ ｍａｄｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｂｙ ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２００３；２０（１０）：１５６５−７；Ｋｏｖａｒ Ｈ，Ａｒｙｅｅ ＤＮ，Ｊｕｇ Ｇ，ｅｔ ａｌ．ＥＷＳ／ＦＬＩ−１ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｄｕｃｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １９９６；７（４）：４２９−３７）の使用によってＥＷＳ−ＦＬＩ１の発現量が減少し、ヌードマウスにおいてＥＳＦＴ細胞株の増殖減少及び腫瘍の退縮が誘発される。ナノテクノロジーの最近の進歩により、ｓｉＲＮＡの送達及び制御放出は改善されたが、ヒトにおいて、アンチセンスＯＤＮ又はｓｉＲＮＡでＥＷＳ−ＦＬＩ１を減少させることは、現在の技術では不可能である（Ｍａｋｓｉｍｅｎｋｏ Ａ，Ｍａｌｖｙ Ｃ，Ｌａｍｂｅｒｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ａ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｒｅ ｍａｄｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｂｙ ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２００３；２０（１０）：１５６５−７；Ｌａｍｂｅｒｔ Ｇ，Ｂｅｒｔｒａｎｄ ＪＲ，Ｆａｔｔａｌ Ｅ，ｅｔ ａｌ．ＥＷＳ ｆｌｉ−１ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ−ｒｅｌａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２０００；２７９（２）：４０１−６）。ＥＷＳ−ＦＬＩ１標的の興味深いアプローチの１つでは、Ａｒａ−Ｃによる現在の臨床試験につながる、ＥＷＳ−ＦＬＩ１を減少させるｓｉＲＮＡと小分子ライブラリとの間の比較発現が利用されていた（Ｓｔｅｇｍａｉｅｒ Ｋ，Ｗｏｎｇ ＪＳ，Ｒｏｓｓ ＫＮ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ ａｓ ａｎ ＥＷＳ／ＦＬＩ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ｉｎ Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ．ＰＬｏＳ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００７；４（４）：ｅ１２２）。Ａｒａ−Ｃの同定方法では、ドキソルビシン及びピューロマイシンがＥＷＳ−ＦＬＩ１レベルを減少させることも示された。ドキソルビシンは、現在ＥＳＦＴ患者の標準的治療として使用されているが、生存率が許容範囲にあるとは言えなかった（Ｇｒｉｅｒ ＨＥ，Ｋｒａｉｌｏ ＭＤ，Ｔａｒｂｅｌｌ ＮＪ，ｅｔ ａｌ．Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ ａｎｄ ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ｔｏ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｂｏｎｅ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００３；３４８（８）：６９４−７０１）。ＥＳＦＴ患者におけるＡｒａ−Ｃの使用は、現在、第二相試験で評価されている。これは必要な臨床突破口を示すと期待されている一方、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の小分子標的の重要性を確実に示している。好ましい実施形態は、重要なタンパク質パートナーからＥＷＳ−ＦＬＩ１を破壊する小分子タンパク質間相互作用阻害剤（ＳＭＰＰＩＩ）を提供することによって、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の腫瘍特異性及びより正確な標的を達成する。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１融合タンパク質機能は、転座しないＥＷＳ又はＦＬＩ１と異なるという結論を下すのに充分な証拠がある（Ｍａｙ ＷＡ，Ｇｉｓｈｉｚｋｙ ＭＬ，Ｌｅｓｓｎｉｃｋ ＳＬ，ｅｔ ａｌ．Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ １１；２２ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｔｈｅ ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ＦＬＩ１ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １９９３；９０（１２）：５７５２−６）。ＥＷＳ−ＦＬＩ１発現細胞株の遺伝子発現プロフィール（Ｂｒａｕｎ ＢＳ，Ｆｒｉｅｄｅｎ Ｒ，Ｌｅｓｓｎｉｃｋ ＳＬ，Ｍａｙ ＷＡ，Ｄｅｎｎｙ ＣＴ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ＥＷＳ／ＦＬＩ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｙ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９５；１５（８）：４６２３−３０）又はＥＳＦＴ患者から得る腫瘍細胞における変化は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１発現欠損腫瘍と比べて、ＥＷＳ−ＦＬＩ１が転写調節に関与する可能性を示している（Ｋｈａｎ Ｊ，Ｗｅｉ ＪＳ，Ｒｉｎｇｎｅｒ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒｓ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ａｎｄ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｎｅｕｒａｌ ｎｅｔｗｏｒｋｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ ２００１；７（６）：６７３−９；Ｂａｅｒ Ｃ，Ｎｅｅｓ Ｍ，Ｂｒｅｉｔ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００４；１１０（５）：６８７−９４）。ＥＷＳ−ＦＬＩ１調節遺伝子発現のメカニズムの明確なイメージがすでに出現する一方、この活性は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１と、ＲＮＡ合成及びスプライシングの調節因子との間の直接的又は二次的相互作用の結果である可能性が高い（Ｕｒｅｎ Ａ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ．Ｅｗｉｎｇ’ｓ Ｓａｒｃｏｍａ Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１：ｔｈｅ Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｔａｒｇｅｔ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔ．Ｆｕｔｕｒｅ Ｏｎｃ ２００５；１（４）：５２１−８）。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、腫瘍細胞のみで発現するので、重要な治療標的であるが、その腫瘍特異性がん遺伝子を標的とする能力は、これまでは充分に発揮されていない。小分子の開発に向けた課題の１つは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１が、標的治療に重要であると考えられる任意の既知の酵素ドメインを欠いていることである。さらに、ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、構造情報に基づく医薬品設計に利用できる強固な構造が見られないことを示す変性タンパク質である（Ｕｒｅｎ Ａ，Ｔｃｈｅｒｋａｓｓｋａｙａ Ｏ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００４；４３（４２）：１３５７９−８９）。実際には、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の変性特質は、その転写調節にとって重要である（Ｎｇ ＫＰ，Ｐｏｔｉｋｙａｎ Ｇ，Ｓａｖｅｎｅ ＲＯ，Ｄｅｎｎｙ ＣＴ，Ｕｖｅｒｓｋｙ ＶＮ，Ｌｅｅ ＫＡ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｒｏｍａｔｉｃ ｓｉｄｅ ｃｈａｉｎｓ ｗｉｔｈｉｎ ａ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＥＷＳ ｆａｍｉｌｙ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００７；１０４（２）：４７９−８４）。変性タンパク質は、特に、それらの生化学的変性特性のため、小分子タンパク質間相互作用阻害剤のより魅力的な標的と考えられる（Ｃｈｅｎｇ Ｙ，ＬｅＧａｌｌ Ｔ，Ｏｌｄｆｉｅｌｄ ＣＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｓｉｇｎ ｖｉａ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００６；２４（１０）：４３５−４２）。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、インビトロ及びインビボでＲＮＡヘリカーゼＡを結合する。ＥＷＳ−ＦＬＩ１のタンパク質間相互作用は、その発癌性に寄与する可能性があると考えられるので、新規タンパク質は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１と直接に相互作用し、かつＥＷＳ−ＦＬＩ１を機能的に調節すると考えられる。転写活性のある組み換えＥＷＳ−ＦＬＩ１（Ｕｒｅｎ Ａ，Ｔｃｈｅｒｋａｓｓｋａｙａ Ｏ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００４；４３（４２）：１３５７９−８９）は、市販のペプチドファージディスプレイライブラリをスクリーニングするための標的として使用している。ＥＷＳ−ＦＬＩ１と特異的に結合している２８個の新規ペプチドは、ファージシークエンシングから同定される。これらのペプチドと相同のヒトタンパク質を検索するための国立生物工学情報センターのデータベースは、ヒトＲＮＡヘリカーゼＡのａａ８２３−８３２と相同のペプチドを同定した（ＲＨＡ、遺伝子バンク登録番号Ａ４７３６３）（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｅｒｋｉｚａｎ Ｖ，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；６６（１１）：５５７４−８１）。
タンパク質の高度に保存されたＤＥＸＤ／ＨボックスヘリカーゼファミリーのメンバーであるＲＨＡは、ヒトトランスクリプトームの不可欠な多機能メンバーである（Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｇｒｏｓｓｅ Ｆ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ ＩＩ（ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ）ｉｎ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ａｃｔａ Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｓｉｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）２００４；３６（３）：１７７−８３；ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ ＰＨ，Ｄｅｌａｇｏｕｔｔｅ Ｅ．Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｅｌｉｃａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ“ｃｏｕｐｌｉｎｇ”ｗｉｔｈｉｎ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｃｈｉｎｅｓ．Ｃｅｌｌ ２００１；１０４（２）：１７７−９０）。これらのタンパク質は、古細菌、真正細菌、下等及び高等真核生物、並びに多数のウイルスから、フラビウイルスファミリーのプラス鎖ＲＮＡウイルスを含む種々の生物の多様な機能に関わる。ＲＨＡは、ＮＦ−κＢの転写コアクチベーターであり、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）（Ｎａｋａｊｉｍａ Ｔ，Ｕｃｈｉｄａ Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＦ，ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｍｅｄｉａｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＢＰ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＩ．Ｃｅｌｌ １９９７；９０（６）：１１０７−１２）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（Ｎａｋａｊｉｍａ Ｔ，Ｕｃｈｉｄａ Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＦ，ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｍｅｄｉａｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＢＰ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＩ．Ｃｅｌｌ １９９７；９０（６）：１１０７−１２）、乳癌腫瘍抑制因子ＢＲＣＡ１（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＦ，Ｓｃｈｌｅｇｅｌ ＢＰ，Ｎａｋａｊｉｍａ Ｔ，Ｗｏｌｐｉｎ ＥＳ，Ｐａｒｖｉｎ ＪＤ．ＢＲＣＡ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＩ ｈｏｌｏｅｎｚｙｍｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｖｉａ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １９９８；１９（３）：２５４−６）、及びごく最近のＥＷＳ−ＦＬＩ１（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｅｒｋｉｚａｎ Ｖ，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；６６（１１）：５５７４−８１）と、複合体を形成することが示される。ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、特有で、かつ他の任意のＲＨＡ結合パートナーの結合部位としては知られていないＲＨＡの領域に結合する（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｅｒｋｉｚａｎ Ｖ，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；６６（１１）：５５７４−８１）。ＲＨＡの不活性化変異はコロニー形成を防止する一方、ＲＨＡ発現はＥＷＳ−ＦＬＩ１媒介足場非依存性のコロニー形成を促進した（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｅｒｋｉｚａｎ Ｖ，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；６６（１１）：５５７４−８１）。この構造的及び機能的相互作用は、好ましい実施形態に係る治療薬の基礎である。
転写が腫瘍形成に重要であるにもかかわらず、このプロセスにおけるヘリカーゼの役割は充分に研究されていない。ＲＨＡは、多様な機能を持つヒトトランスクリプトームの不可欠なメンバーである（Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｇｒｏｓｓｅ Ｆ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ ＩＩ（ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ）ｉｎ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ａｃｔａ Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｓｉｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）２００４；３６（３）：１７７−８３；ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ ＰＨ，Ｄｅｌａｇｏｕｔｔｅ Ｅ．Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｅｌｉｃａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ“ｃｏｕｐｌｉｎｇ”ｗｉｔｈｉｎ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｃｈｉｎｅｓ．Ｃｅｌｌ ２００１；１０４（２）：１７７−９０）。発明者らの最近発表されたデータにより、ＲＨＡは多機能のＥＷＳ−ＦＬＩ１腫瘍性タンパク質と相互作用することが示されている（Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｅｒｋｉｚａｎ Ｖ，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；６６（１１）：５５７４−８１）。この相互作用は、転写開始及び転写後双方のＲＮＡ修飾においてＥＷＳ−ＦＬＩ１が機能する能力を有すると認められる主要因である。また、ＲＮＡヘリカーゼは、スプライシング因子Ｕ１Ｃ（Ｃｈｅｎ ＪＹ，Ｓｔａｎｄｓ Ｌ，Ｓｔａｌｅｙ ＪＰ，Ｊａｃｋｕｐｓ ＲＲ，Ｊｒ．，Ｌａｔｕｓ ＬＪ，Ｃｈａｎｇ ＴＨ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｕ１−Ｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｒ Ｕ１ ｓｍａｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ＲＮＡ ｃａｎ ｅｌｉｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｒｐ２８ｐ，ａｎ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ＤＥＡＤ ｂｏｘ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ２００１；７（１）：２２７−３２；Ｋｎｏｏｐ ＬＬ，Ｂａｋｅｒ ＳＪ．Ｔｈｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ Ｕ１Ｃ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ＥＷＳ／ＦＬＩ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０００；２７５（３２）：２４８６５−７１）、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）（Ｎａｋａｊｉｍａ Ｔ，Ｕｃｈｉｄａ Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＦ，ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｍｅｄｉａｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＢＰ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＩ．Ｃｅｌｌ １９９７；９０（６）：１１０７−１２）、及びＲＮＡポリメラーゼＩＩ（Ｎａｋａｊｉｍａ Ｔ，Ｕｃｈｉｄａ Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＦ，ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｍｅｄｉａｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＢＰ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＩＩ．Ｃｅｌｌ １９９７；９０（６）：１１０７−１２）を含む、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の結合パートナーとして同定された同じ因子の一部に結合して、ブリッジの役割を果たすことが知られている。ＲＨＡは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１及びＲＮＡ Ｐｏｌ ＩＩと同様の機能を果たすことができ、キープロセシングタンパク質の補充において役割を果たす。また、ＲＨＡは、その機能がエネルギーソースとしてＲＨＡのＡＴＰアーゼ活性に依存している大きな転写複合体の一部として、ＥＷＳ−ＦＬＩ１を維持することによって、ＥＳＦＴ腫瘍形成に寄与する可能性がある。最後に、ＲＨＡなどのヘリカーゼは、ｍＲＮＡ種を安定化させることができる（Ｉｏｓｔ Ｉ，Ｄｒｅｙｆｕｓ Ｍ．ｍＲＮＡｓ ｃａｎ ｂｅ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｂｙ ＤＥＡＤ−ｂｏｘ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ １９９４；３７２（６５０２）：１９３−６）。ＲＨＡによるＥＷＳ−ＦＬＩ１転写ｍＲＮＡの安定化及び代謝は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の発癌性を増大させるかもしれない。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１がＥＳＦＴ細胞に非常に特異的である一方、ＥＷＳ及びＲＨＡは、遍在的に発現される。ＥＷＳ−ＦＬＩ１は腫瘍のみで発現されるとともに、ＲＨＡとの相互作用点が特有であるので、ＥＷＳ−ＦＬＩ１とＲＨＡとの間の領域は、特異性のある分子治療薬の標的とされる。治療薬、すなわち、小分子タンパク質間相互作用阻害剤は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１機能を阻害するように本明細書中で提供される。
ＥＳＦＴを含むほとんどの転座融合タンパク質肉腫は、予後不良の前兆となる。特有で重要な融合タンパク質ＥＷＳ−ＦＬＩ１につながる染色体転座ｔ（１１；２２）は、完全な癌標的である。他の多くの肉腫は、同様の転座変異体を共有する（Ｈｅｌｍａｎ ＬＪ，Ｍｅｌｔｚｅｒ Ｐ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｓａｒｃｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００３；３（９）：６８５−９４の表２）。
ＥＷＳ−ＦＬＩ１転座は、膵臓の充実性偽乳頭腫瘍（ｓｏｌｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙｎｅｏｐｌａｓｍｓ）で報告されている（Ｍａｉｔｒａ Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔ（１１；２２）（ｑ２４；ｑ１２）ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ＥＷＳ−ＦＬＩ−１ ｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｉｎ ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｎｃｒｅａｓ．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｄｅｖ Ｐａｔｈｏｌ ２０００；３：６０３−６０５）が、全ての充実性偽乳頭腫瘍におけるＥＷＳ−ＦＬＩ１の役割は、まだ解明されていない（Ｋａｔｈａｒｉｎａ Ｔｉｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｎｃｒｅａｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＦＬＩ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｗｉｔｈ ＥＷＳ／ＦＬＩ−１ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）。
ＥＷＳ又はＦＬＩ１のホモログ（相同物）は、広範囲の肉腫及び白血病で発生する転座のパートナーである。ＥＷＳ又はそのホモログであるＴＬＳ若しくはＦＵＳは、明細胞肉腫、粘液性脂肪肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、軟骨肉腫、及び急性骨髄性白血病の染色体転座に関与する。ＦＬＩ１は、遺伝子のｅｔｓファミリーに属する。ＦＬＩ１のホモログであるＥＲＧは、約１０％のユーイング肉腫及び２０％の急性骨髄性白血病で転座する。これによって、ＥＷＳ−ＦＬＩ１は、多数の患者に影響する疾患群（転座パートナーによって関連付けられる）に影響を与える可能性のあるモデルシステムとして役立つことが示唆されている。（Ｕｒｅｎ Ａ．，Ｔｃｈｅｒｋａｓｓｋａｙａ Ｏ．ａｎｄ Ｔｏｒｅｔｓｋｙ Ｊ．Ａ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３（４２）１３５７９−８９（２００４））。
また、ＥＲＧは、ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合が疾患進行のリスクを定義できる特異的な分子サブタイプを示唆する前立腺がんにおいても、転座することがある（Ｆ．Ｄｅｍｉｃｈｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ ｇｅｎｅ ｆｕｓｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅｔｈａｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ａ ｗａｔｃｈｆｕｌ ｗａｉｔｉｎｇ ｃｏｈｏｒｔ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００７）２６，４５９６−４５９９）。ＥＷＳ又はＦＬＩ１ファミリーメンバーの転座が認められる他の疾患は、ｅｔｓファミリーメンバーであるＥＴＶ６がＮＴＲＫ３と並置される先天性線維肉腫及び細胞中胚葉性腎腫を含む。他の転座遺伝子融合は、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質の発現につながる慢性骨髄性白血病と、１８番染色体由来のＳＹＴ遺伝子がＸ染色体由来のＳＳＸ１又はＳＳＸ２と並置される滑膜肉腫とを含む（Ａｙｋｕｔ Ｕｒｅｎ ａｎｄ Ｊｅｆｆｒｅｙ Ａ．Ｔｏｒｅｔｓｋｙ，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｕｎｉｑｕｅ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｅｄｉａｔｒ １７：１４−１９（２００５））。
したがって、好ましい実施形態に係る治療薬は、他の多くの腫瘍に適用する可能性がある。さらに広く見れば、最も困難な白血病のいくつかは、混合系統白血病遺伝子（ＭＬＬ，１１ｑ２３）に関与する転座発生融合タンパク質を有し、発明者らの仕事は、非常に治療抵抗性のある癌グループのためのパラダイムとして役立つ（Ｐｕｉ ＣＨ，Ｃｈｅｓｓｅｌｌｓ ＪＭ，Ｃａｍｉｔｔａ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｗｉｔｈ １１ｑ２３ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２００３；１７（４）：７００−６．）。そのため、本発明の実施形態は、転座が発生した癌を含む。転座融合遺伝子は、表１に示される。
＜特定の適応症＞
本明細書で提供される特定の化合物、組成物及び方法は、転座遺伝子融合、ユーイング肉腫、明細胞肉腫、粘液性脂肪肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、粘液性軟骨肉腫、急性骨髄性白血病、先天性線維肉腫、前立腺がん、乳がん、及び膵臓がんを含む、腫瘍などの多数の疾患を治療するために使用できる。いくつかの実施形態では、癌は、肺腺癌又は多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、癌は、ＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座を有している。
完成した実験及び結果を含む以下の実施例は、説明のみを目的として提供されるものであり、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。化学構造は不完全な原子価（ｕｎｆｉｌｌｅｄ ｖａｌｅｎｃｙ）を有する原子を表現する場合、１つ以上の水素原子によってその原子価を満たすと理解される。
（実施例１：４，７−ジクロロイサチン類似物の合成）
触媒量のジエチルアミンの存在下で、適切なアセトフェノンと４，７−ジクロロイサチンとを縮合させ、定量的収率で所望の化合物を調製した。
実施例化合物：Ｒ１＝４’−ＣＮ（ＰＴ−１−１１）、２’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−１２）、３’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−１８）、２’，４’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−１９）、２’，３’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−２０）、３’，４’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−２１）、３’，５’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−２２）、２’，３’，４’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−２３）、３’，４’，５’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−１３）、４’−ＯＣ２Ｈ５（ＰＴ−１−１４）、４’−ＣＦ３（ＰＴ−１−１５）、４’−ＯＣＦ３（ＰＴ−１−１６）、４’−Ｎ（ＣＨ３）２（ＰＴ−１−１７）、４’−ＯＰｈ（ＰＴ−１−６０）、４’−ＳＣＨ３（ＰＴ−１−６７）、及び４’−Ｃ（ＣＨ３）２（ＰＴ−１−６７）。
（実施例２：脱水４，７−ジクロロイサチン類似物の合成）
４，７−ジクロロイサチンの９６％Ｈ２ＳＯ４溶液を室温で攪拌し、還元類似物を得た。
実施例化合物：Ｒ２＝４’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−３３）、２’，４’−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−３９）、２’，３’，４’,−ＯＣＨ３（ＰＴ−１−４１）、４’−ＯＣ２Ｈ５（ＰＴ−１−４３）、及び４’−Ｎ（ＣＨ３）２（ＰＴ−１−３８）。
（実施例３：還元４，７−ジクロロイサチン類似物の合成）
（実施例４：還元４，７−ジクロロイサチンピリジン誘導体の合成）
（実施例５：特定の化合物の生物活性）
本明細書に記載の方法と同様の方法によって、表２に示す化合物を調製した。特定の化合物の構造、並びにＰＡＮＣ１（ヒト膵臓癌）細胞、ＴＣ３２（ヒトＥＳＦＴ細胞株）細胞及びＴＣ７１（ヒトＥＳＦＴ細胞株）細胞におけるＩＣ５０活性を表２にまとめる。
（実施例６：置換類似物によるＥＷＳ−ＦＬＩ１細胞の増殖阻害）
ＥＳＦＴ細胞の増殖阻害を確認することによって、ＹＫ−４−２７９類似物のＥＳＦＴ細胞に対する効果を試験した。リード化合物のＩＣ５０は、単分子層で増殖する細胞に対して、９００ｎＭであった。種々の濃度の特定の化合物で、ＥＳＦＴ細胞の増殖阻害を測定した。種々の濃度のＹＫ−４−２７９及びＰＴ−１−３３で、ＴＣ７１及びＴＣ３２細胞の増殖阻害を測定した（図３Ａ）。種々の濃度のＹＫ−４−２７９、ＰＴ−１−３３、及びＰＴ−１−５５で、ＴＣ７１細胞の増殖阻害を測定した（図３Ｂ）。種々の濃度のＹＫ−４−２７９及びＰＴ−１−１２３で、ＴＣ７１細胞の増殖阻害を測定した（図３Ｃ）。いくつかの類似物は、ＹＫ−４−２７９と同様の活性を有する。脱水類似物及びアルコール類似物は、ＥＳＦＴ細胞（図３Ａ）に対して同様の活性を示した。ケトンの修飾は、化合物の活性を改善しなかった（図３Ｂ及び図３Ｃ）。
（実施例７：ＥＷＳ−ＦＬＩ１細胞のアポトーシス）
ＹＫ−４−２７９で処理され、ＲＨＡ、ＥＷＳ−ＦＬＩ１又は総タンパクと共沈殿したＴＣ３２細胞からのタンパク質溶解物により、免疫ブロットを行った（図４）。ＹＫ−４−２７９は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１又はＲＨＡのレベルに直接影響を与えないが、それらの相互作用を分断した。ＲＨＡとＥＷＳ−ＦＬＩ１との相互作用の分断により、ユーイングファミリーの肉腫腫瘍に対する潜在的な治療薬として小分子クラスの開発手段が示された。ＹＫ−４−２７９がタンパク質間相互作用を分断する一方、ＰＴ−１−１７は、ＴＣ７１細胞においてより強い効力を呈する。ＹＫ−４−２７９の脱水類似物は、化合物の効力を著しく増加させなかった。
（実施例８：ＥＷＳ−ＦＬＩ１／ＲＨＡ結合の分断）
ＥＬＩＳＡアッセイで、ＥＷＳ−ＦＬＩ１とヒスチジンで標識されたＲＨＡタンパク質であるＨｉｓタグＲＨＡ（６４７−１０７５）との間の結合を分断する候補小分子の活性をスクリーニングした。つまり、ＥＷＳ−ＦＬＩ１によりコーティングしたプレートにおいて候補薬剤をＲＨＡとともに培養した。プレートを洗浄した後、一次抗ＲＨＡ抗体及び二次シグナル抗体を用いて、プレートとの結合を維持しているＲＨＡの量を測定した。
９６ウェルプレートのウェルを、１００μｌ／ウェルの２０ｎＭ ＥＷＳ−ＦＬＩ１タンパク質溶液（１Ｍ イミダゾール、２０ｍＭ トリス、５００ｍＭ ＮａＣｌ）とともに４℃で一晩培養した。プレートをＰＢＳで洗浄した後、１５０μｌ／ウェルの４％ ＢＳＡにより、室温で少なくとも２時間ブロックし、その後、ＥＬＩＳＡ洗浄液（ＰＢＳ＋０．１％ Ｔ２０、２００μｌ／ウェル）で再度洗浄した。プレートを、１００μｌ／ウェルの候補薬剤とともに、ＰＢＳ（1０μＭ又は最終５０μＭ）又はＤＭＳＯ対照において、室温で１時間培養した。プレートを１００μｌ／ウェルの２０ｎＭ Ｈｉｓ−ＲＨＡタンパク質溶液（０．５Ｍ イミダゾール、１２５ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ トリス）とともに、4℃で一晩培養した後、ＥＬＩＳＡ洗浄液（ＰＢＳ＋０．１％ Ｔ２０、２００μｌ／ウェル）で洗浄した。プレートを、１００μｌ／ウェルの一次抗ＲＨＡ抗体（１:１０００ ｇｏａｔ Ａｎｔｉ−ＤＨＸ９／ＥＢ０９２９７、エベレスト）とともに、室温で１時間培養した後、ＥＬＩＳＡ洗浄液（ＰＢＳ＋０．１％ Ｔ２０、２００μｌ／ウェル）で洗浄することによって、プレートに結合したＲＨＡを検出した。プレートを、１００μl／ウェルの二次抗ヤギ抗体（１:５００ ｄｏｎｋｅｙ ａｎｔｉ−ｇｏａｔ ＩｇＧ−ＨＲＰ:ｓｃ−２０２０）とともに、室温で１時間培養した後、ＥＬＩＳＡ洗浄液（ＰＢＳ＋０．１％ Ｔ２０、２００μｌ／ウェル）で洗浄することによって、一次抗体を検出した。４５０ｎｍにおけるプレートリーダーにより、西洋ワサビペルオキシダーゼアッセイキットを用いて、各ウェル（Ｂｉｏ―Ｒａｄ−ＴＭＢペルオキシダーゼＥＩＡ基質キット♯１７２−１０６６）における二次抗ヤギ抗体の量を測定した。低い量のＨＲＰを示す相対的に低い光学密度は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１−ＲＨＡ結合に対する阻害活性が増加した候補薬剤を意味する。その結果を、図５Ａ〜５Ｇにまとめた。図５Ａは、候補分子ＹＫ−４−２７５、ＹＫ−４−２８５、ＰＴ−１−１２、ＰＴ−１−１８、ＰＴ−１−１９、ＰＴ−１−２０、ＰＴ−１−２１、ＰＴ−１−２２、ＰＴ−１−２３、ＰＴ−１−１７５の結果をまとめる。図５Ｂは、候補分子ＰＴ−２−８４、ＰＴ−２−５９、ＰＴ−１−１７、ＰＴ−２−７１、ＰＴ−２−８９、ＰＴ−１−１２３、ＰＴ−１−１５、ＰＴ−１−６０、ＰＴ−１−６７、ＰＴ−１−６９の結果をまとめる。図５Ｃは、候補分子ＹＫ−４−２８５、ＹＫ−４−２８６、ＰＴ−１−３３、ＰＴ−１−３８、ＰＴ−１−２７１、ＰＴ−１−５２、ＰＴ−１−５６、ＰＴ−１−６４、ＰＴ−２−９４、ＰＴ−１−２６７の結果をまとめる。図５Ｄは、候補分子ＹＫ−４−２８２、ＹＫ−４−２８７、ＹＫ−４−２８０、ＹＫ−４−２８９、ＹＫ−４−２８８、ＹＫ−４−２７８、ＹＫ−４−２７６、ＹＫ−４−２８３、ＹＫ−４−２７７、ＹＫ−４−２８１の結果をまとめる。図５Ｅは、候補分子ＰＴ−１−５４、ＹＫ−４−２７９、ＹＫ−４−２７９（Ｒ）、ＰＴ―１−５５、ＰＴ−２−７５、ＰＴ−２−３９、ＰＴ−２−７９、ＰＴ−１−１６、ＰＴ−１−１３、ＰＴ−２−６４の結果をまとめる。図５Ｆは、候補分子ＹＫ−４−２８４、ＰＴ−１−１４、ＰＴ−１−３９、ＰＴ−１−４１、ＰＴ−１−４３、ＰＴ−１−５３、ＰＴ−２−５６、ＰＴ−２−５２、ＰＴ−１−６１、ＰＴ−１−１８３の結果をまとめる。図５Ｇは、候補分子ＰＴ−１−２７５、ＰＴ−２−６９、ＰＴ−２−９９、ＹＫ−４−２８８、ＰＴ−１−１９、ＰＴ−１−２０、ＰＴ−１−６９、ＰＴ−２−８９、ＰＴ−１−１７、ＰＴ−２−９４の結果をまとめる。
（実施例９：ＥＷＳ−ＦＬＩ１転写因子活性の妨害）
ＮＲＯＢ１プロモーターに結合するＥＷＳ−ＦＬＩ１がルシフェラーゼ発現を増加させるルシフェラーゼアッセイを用いて、ＥＷＳ−ＦＬＩ１転写因子活性を妨害する候補小分子の活性をスクリーニングした。つまり、ルシフェラーゼ発現を駆動するＮＲＯＢ１プロモーターと、ＥＷＳ−ＦＬＩ１発現ベクターとを含むベクターにより細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を種々の濃度の候補薬剤によって処理し、ルシフェラーゼ発現の相対レベルの変化を測定した。ＣＯＳ７細胞を９６ウェルプレートに播種し、ｐｃｉＮＥＯ／ＥＦベクター及びｐＧＬ３−ＮＲＯＢ１によってトランスフェクトした。対照群は、各ベクターによるトランスフェクションのみを含んだ。トランスフェクトされた細胞を種々の濃度の候補薬剤によって処理し、処理された細胞のルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼ活性の低下は、ルシフェラーゼの転写を促進し、転写因子として機能するＥＷＳ−ＦＬＩ１の阻害活性を有する候補薬剤を示す。図６Ａ及び図６Ｂは、種々の濃度の候補薬剤による相対ルシフェラーゼ活性の一般的な傾向を示す。図７Ａ〜図７Ｉは、種々の濃度の候補薬剤による阻害活性を示す。
（実施例１０：多形性膠芽腫の治療）
多形性膠芽腫（ＧＢＭ）は、分子隔離へ導くその遺伝的特徴の視点から、古典的な、前神経系の、神経系の、及び間葉性の分類がある、非常に注釈が多い腫瘍である（Ｐｕｒｏｗ ＢＷ，Ｓｃｈｉｆｆ Ｄ． Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｇｅｎｅｔｉｃｓ：ｉｎ ｒａｐｉｄ ｆｌｕｘ．Ｄｉｓｃｏｖ Ｍｅｄ．２０１０ Ｆｅｂ；９（４５）：１２５−３１．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２０１９３６３８．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３３６５５７４）。ＧＢＭを分類する遺伝的特徴の変化には、シグナル伝達経路の構成的活性化、腫瘍抑制因子の損失、代謝伝達経路における突然変異、異常ＤＮＡ修復、及び有糸分裂規制の損失が含まれる（Ｓｕｚｕｋｉ Ｅ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｓ，Ｓａｔｏ Ｓ，Ｇｉｌｋｅｓｏｎ Ｇ，Ｗａｔｓｏｎ ＤＫ，Ｚｈａｎｇ ＸＫ．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｆｌｉ−１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｏｎｏｃｙｔｅ，ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｎｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１３ Ｊｕｌ；１３９（３）：３１８−２７．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３３２０７３７．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３７０１１７８；Ｃｈｏｗ ＬＭ，Ｅｎｄｅｒｓｂｙ Ｒ，Ｚｈｕ Ｘ，Ｒａｎｋｉｎ Ｓ，Ｑｕ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ａｎｄ ａｍｏｎｇ Ｐｔｅｎ，ｐ５３，ａｎｄ Ｒｂ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｂｒａｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｍａｒ ８；１９（３）：３０５−１６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１３９７８５５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０６０６６４；Ｓｏｌｏｍｏｎ ＤＡ，Ｋｉｍ Ｔ，Ｄｉａｚ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ ＬＡ，Ｆａｉｒ Ｊ，Ｅｌｋａｈｌｏｕｎ ＡＧ，Ｈａｒｒｉｓ ＢＴ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＡＧ２ ｃａｕｓｅｓ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１ Ａｕｇ １９；３３３（６０４５）：１０３９−４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１８５２５０５．Ｅｐｕｂ ２０１１／０８／２０．ｅｎｇ）。これらの分類内であっても、ＧＢＭは、重要な腫瘍内異質性を伴う腫瘍として認識されている（Ｇａｒｒａｗａｙ ＬＡ，Ｌａｎｄｅｒ ＥＳ．Ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｏｍｅ．Ｃｅｌｌ．２０１３ Ｍａｒ ２８；１５３（１）：１７−３７．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３５４０６８８；Ｎａｂｉｌｓｉ ＮＨ，Ｄｅｌｅｙｒｏｌｌｅ ＬＰ，Ｄａｒｓｔ ＲＰ，Ｒｉｖａ Ａ，Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ＢＡ，Ｋｌａｄｄｅ ＭＰ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｓｉｎｇｌｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．２０１３ Ｏｃｔ ８．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２４１０５７７０）。遺伝的特徴における並外れた可変性にもかかわらず、転写制御因子はほとんど注目されてきていない。ＧＢＭにおいて転写因子がほとんど充分には研究されなかった理由の１つは、効果的な小分子阻害剤が存在しないことであると考えられる。この例外はｐ５３であり、ｐ５３の野生型機能は、小分子タンパク質相互作用阻害剤Ｎｕｔｌｉｎ−３で維持され得る（Ｖａｓｓｉｌｅｖ ＬＴ．ｐ５３ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００５ Ｊｕｌ １４；４８（１４）：４４９１−９．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１５９９９９８６）。
遺伝的多様性にもかかわらず、ＧＢＭについての標的及び非標的療法を評価する多くの臨床試験が完成している。これらの試験全て（放射線療法及び分子的に誘導された外科的切除を含む全て）をもってしても、効果的で長期間に渡るＧＢＭについての療法は、大多数の患者にとっては進展していない（Ｙｉｎ ＡＡ，Ｃｈｅｎｇ ＪＸ，Ｚｈａｎｇ Ｘ，Ｌｉｕ ＢＬ．Ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ：Ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｔｒｉａｌｓ． Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｌ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１３ Ｓｅｐ；８７（３）：２６５−８２．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３４５３１９１）。最も近年のＶＥＧＦＲ小分子阻害剤とテモゾロマイドとの第３相試験もまた、テモゾロマイドと放射線療法との標準的な治療を超える改善効果を示さなかった（Ｂａｔｃｈｅｌｏｒ ＴＴ，Ｍｕｌｈｏｌｌａｎｄ Ｐ，Ｎｅｙｎｓ Ｂ，Ｎａｂｏｒｓ ＬＢ，Ｃａｍｐｏｎｅ Ｍ，Ｗｉｃｋ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｔｒｉａｌ Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ Ａｓ Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ ｉｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ，Ｖｅｒｓｕｓ Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ Ａｌｏｎｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１３ Ｓｅｐ １０；３１（２６）：３２１２−８．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３９４０２１６）。いくつかのＧＢＭについての療法に対して重要な挑戦が行われ、これにより、血液脳関門（ＢＢＢ）が克服されている。このことは、多くの潜在的な標的療法に影響を及ぼしてきている（Ｊｕｒａｔｌｉ ＴＡ，Ｓｃｈａｃｋｅｒｔ Ｇ，Ｋｒｅｘ Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｇｌｉｏｍａｓ−ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１３ Ｓｅｐ；１３９（３）：３４１−５８．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３６９４７６４）。
ＧＢＭの生態の理解及び新規療法の発展のためにマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を使用することにより、ジアシルグリセロールキナーゼアルファが潜在的な標的となるかもしれないという新規発見が導かれ、これらの阻害剤について小分子最適化が目下進行中である（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ ＣＬ，Ｆｌｏｙｄ ＤＨ，Ｘｉａｏ Ａ，Ｍｕｌｌｉｎｓ ＧＲ，Ｋｅｆａｓ ＢＡ，Ｘｉｎ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ｋｉｎａｓｅ ａｌｐｈａ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｎｏｄｅ ａｎｄ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３ Ｊｕｌ；３（７）：７８２−９７．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３５５８９５４．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３７１０５３１）。さらに、ｍｉＲＮＡは、ＧＢＭ腫瘍形成にとって転写制御のネットワークが明らかに重要であることを示唆する生物情報モデル創造するために使用されてきている（Ｓｕｎ Ｊ，Ｇｏｎｇ Ｘ，Ｐｕｒｏｗ Ｂ，Ｚｈａｏ Ｚ．Ｕｎｃｏｖｅｒｉｎｇ ＭｉｃｒｏＲＮＡ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｎｅｔｗｏｒｋｓ ｉｎ Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ．ＰＬｏＳ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１２；８（７）：ｅ１００２４８８．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２２８２９７５３．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３４００５８３）。
推定新規ＧＢＭ標的であるフレンド白血病統合体−１（ＦＬＩ１）
転写因子は、酵素活性を有しないため「新薬の開発にはつながらない」と考えられてきたが、多くの癌において局所性推進発癌遺伝子である。今まで、ＧＢＭについてのＴＣＧＡデータベースがあるにもかかわらず、臨界転写結節の療法的な標的指向性は生じていない。ｅｔｓファミリー転写因子ＦＬＩ１は、ＴＣＧＡデータベースへの検索要求に基づいてＧＢＭ中に発現される（図８）。初期のＥＴＳ−１研究では、ＥＴＳ−１発現と、ヒト星細胞腫における悪性潜在とが関連付けられていた（Ｋｉｔａｎｇｅ Ｇ，Ｋｉｓｈｉｋａｗａ Ｍ，Ｎａｋａｙａｍａ Ｔ，Ｎａｉｔｏ Ｓ，Ｉｓｅｋｉ Ｍ，Ｓｈｉｂａｔａ Ｓ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｔｓ−１ ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ ｔｕｍｏｒｓ．Ｍｏｄ Ｐａｔｈｏｌ．１９９９ Ｊｕｎ；１２（６）：６１８−２６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１０３９２６３９）。さらに、上記研究では、ＥＴＳ−１は星細胞腫における血管形成を推進するかもしれないことが示されていた（Ｖａｌｔｅｒ ＭＭ， Ｈｕｇｅｌ Ａ，Ｈｕａｎｇ ＨＪ，Ｃａｖｅｎｅｅ ＷＫ，Ｗｉｅｓｔｌｅｒ ＯＤ，Ｐｉｅｔｓｃｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｔｓ−１ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｍｓ−ｌｉｋｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ−１（Ｆｌｔ−１）／ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｎｅｏａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９９ Ｎｏｖ １；５９（２１）：５６０８−１４．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１０５５４０４２）。多くの研究により、ＧＢＭ転写及び全生態におけるｅｔｓファミリーＥＬＫメンバーについての重要な役割が示唆されている（Ｄａｙ ＢＷ，Ｓｔｒｉｎｇｅｒ ＢＷ，Ｓｐａｎｅｖｅｌｌｏ ＭＤ，Ｃｈａｒｍｓａｚ Ｓ，Ｊａｍｉｅｓｏｎ ＰＲ，Ｅｎｓｂｅｙ ＫＳ，ｅｔ ａｌ．ＥＬＫ４ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｃｌ−１．Ｎｅｕｒｏ Ｏｎｃｏｌ．２０１１ Ｎｏｖ；１３（１１）：１２０２−１２．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１８４６６８０．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３１９９１５１；Ｓｈｕｋｌａ ＡＡ，Ｊａｉｎ Ｍ，Ｃｈａｕｈａｎ ＳＳ．Ｅｔｓ−１／Ｅｌｋ−１ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ−ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＩＩ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｆｅｂｓ Ｊ．２０１０ Ａｐｒ；２７７（８）：１８６１−７５．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２０２３６３１８；Ｕｈｔ ＲＭ，Ａｍｏｓ Ｓ，Ｍａｒｔｉｎ ＰＭ，Ｒｉｇｇａｎ ＡＥ，Ｈｕｓｓａｉｎｉ ＩＭ．Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ−ｅｔａ ｉｓｏｆｏｒｍ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ＥＲＫ／Ｅｌｋ−１ ｐａｔｈｗａｙ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００７ Ｍａｙ ３；２６（２０）：２８８５−９３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１７１４６４４５）。ある免疫組織化学研究では、ＧＢＭにおけるＦＬＩ１発現は認められなかったが、この研究には、これらの陰性結果に影響を与えていたかもしれない抗体選択及び抗原回復における重要な課題がある（Ｍｈａｗｅｃｈ−Ｆａｕｃｅｇｌｉａ Ｐ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ ＦＲ，Ｂｓｈａｒａ Ｗ，Ｏｄｕｎｓｉ Ｋ，Ｔｅｒｒａｃｃｉａｎｏ Ｌ，Ｓａｕｔｅｒ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｆｒｉｅｎｄ ｌｅｕｋａｅｍｉａ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ａｎｄ ｂｅｎｉｇｎ ｔｕｍｏｕｒｓ：ａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｕｍｏｕｒ ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．２００７ Ｊｕｎ；６０（６）：６９４−７００．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１６９１７０００．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：１９５５０５）。
「ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｏｍｉｃｓ」ウェブサイトのインターフェイスを用い、癌に関与したｅｔｓファミリーメンバーのサブセットを評価した。これらの変化には、増幅（赤色で塗り潰した棒）、突然変異（小さな緑色の四角）、及びｍＲＮＡ上昇制御（赤色で囲んだ棒）が含まれている（図８参照）。
ＧＢＭ中のＦＬＩ１標的指向性は、ＭＤＭ２の転写活性化に基づいてさらに支持されている（Ｔｒｕｏｎｇ ＡＨ，Ｃｅｒｖｉ Ｄ，Ｌｅｅ Ｊ，Ｂｅｎ−Ｄａｖｉｄ Ｙ．Ｄｉｒｅｃｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ ｂｙ Ｆｌｉ−１．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００５ Ｆｅｂ ３；２４（６）：９６２−９．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１５５９２５０２）。この場合、高いＭＤＭ２は、主要となる腫瘍抑制タンパク質の損失につながるｐ５３の分解を誘発する。注目すべきは、７つのＧＢＭ細胞株の中で、高いＦＬＩ１と高いＭＤＭ２との緩い相関関係があることである（表３及び図１０）。タンパク質が相同的組み換えによって除去されるとき、多発性免疫不全によって示されているように、造血発生においてＦＬＩ１は明らかに重要なタンパク質である（Ｓｕｚｕｋｉ Ｅ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｓ，Ｓａｔｏ Ｓ，Ｇｉｌｋｅｓｏｎ Ｇ，Ｗａｔｓｏｎ ＤＫ，Ｚｈａｎｇ ＸＫ．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｆｌｉ−１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｏｎｏｃｙｔｅ，ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｎｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１３ Ｊｕｌ；１３９（３）：３１８−２７．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２３３２０７３７．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３７０１１７８；Ｋｒｕｓｅ ＥＡ，Ｌｏｕｇｈｒａｎ ＳＪ，Ｂａｌｄｗｉｎ ＴＭ，Ｊｏｓｅｆｓｓｏｎ ＥＣ，Ｅｌｌｉｓ Ｓ，Ｗａｔｓｏｎ ＤＫ，ｅｔ ａｌ．Ｄｕａｌ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ＥＴＳ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ Ｆｌｉ−１ ａｎｄ Ｅｒｇ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ ｌｉｎｅａｇｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ． ２００９ Ａｕｇ １８；１０６（３３）：１３８１４−９．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１９６６６４９２．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：２７２８９７７；Ｌｉｕ Ｆ，Ｗａｌｍｓｌｅｙ Ｍ，Ｒｏｄａｗａｙ Ａ，Ｐａｔｉｅｎｔ Ｒ．Ｆｌｉ１ ａｃｔｓ ａｔ ｔｈｅ ｔｏｐ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｎｅｔｗｏｒｋ ｄｒｉｖｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ．２００８ Ａｕｇ ２６；１８（１６）：１２３４−４０．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１８７１８７６２）。ＦＬＩ１は胚発生から決定的である一方、その発現は免疫細胞及び内皮の分画に限られるため、成熟組織においては決定的ではなさそうである（Ｗａｔｓｏｎ ＤＫ，Ｓｍｙｔｈ ＦＥ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＭ，Ｃｈｅｎｇ ＪＱ，Ｔｅｓｔａ ＪＲ，Ｐａｐａｓ ＴＳ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＥＲＧＢ／Ｆｌｉ−１ ｇｅｎｅ：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＥＴＳ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．１９９２ Ｏｃｔ；３（１０）：７０５−１３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１４４５８００；Ｔｒｕｏｎｇ ＡＨ，Ｂｅｎ−Ｄａｖｉｄ Ｙ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｆｌｉ−１ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０００ Ｄｅｃ １８；１９（５５）：６４８２−９．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１１１７５３６４；Ｐｒａｓａｄ ＤＤ，Ｒａｏ ＶＮ，Ｒｅｄｄｙ ＥＳ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｆｌｉ−１ ｇｅｎｅ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９２；５２（２０）：５８３３−７）。さらに、ＦＬＩ１を標的とするアプローチは、その発現を除去することよりも、ＹＫ−４−２７９でタンパク質相互作用からそれを妨害することである。
ＹＫ−４−２７９によるｅｔｓファミリーメンバーＥＲＧ、ＥＴＶ１及びＥＷＳ−ＦＬＩ１の機能の阻害
小児／若年成人の癌であるユーイング肉腫において、ＥＷＳ転写活性化ドメインは、新規融合タンパク質であるＥＷＳ−ＦＬＩ１を導くｅｔｓファミリーメンバーに融合される。小分子ＹＫ−４−２７９が特定され、これは、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＲＨＡへの結合を妨害することが確認された。ＲＨＡは、ユーイング肉腫細胞株パネルにおける細胞アポトーシスを誘発するものである（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００９ Ｊｕｌ；１５（７）：７５０−６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１９５８４８６６．ｅｎｇ）。また、同投与量にて、腫瘍を含有する非ＥＷＳ−ＦＬＩ１の増殖には影響を及ぼさず、ユーイング肉腫異種移植モデルにおける腫瘍増殖の削減が実証された。特異性の重要な証拠として、ＹＫ−４−２７９の（Ｓ）光学異性体のみが、ＲＨＡへの結合、転写活性化、及び選択的スプライシングを含むＥＷＳ−ＦＬＩ１の機能活性を阻害することができる（Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｓｅｌｖａｎａｔｈａｎ ＳＰ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｓｎｙｄｅｒ ＴＭ，Ｈｏｎｇ ＰＳ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｏｆ ＹＫ−４−２７９ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｉｎ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ＥＷＳ−ＦＬＩ１．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１２ Ｆｅｂ；３（２）：１７２−８２．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２２３８３４０２．Ｅｐｕｂ ２０１２／０３／０３．ｅｎｇ）。進行性前立腺癌は、染色体転座又は遺伝子増幅によって、ＥＲＧ、ＥＴＶ１、又はＥＴＶ４を過剰発現させる。ＥＲＧ、ＥＴＶ１、又はＥＴＶ４活性は、浸潤及び転移の増加に直接的に関与してきている。これら３つは全て、ＦＬＩ１への重要な相同関係を共有しているｅｔｓファミリータンパク質であり、ドメインに結合している本質的に同一のＤＮＡを有する。ＥＲＧ又はＥＴＶ１により齎される前立腺細胞は、ＹＫ−４−２７９で処置されたとき、浸潤が非常に減少した（Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１１；６（４）：ｅ１９３４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１５５９４０５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０８４８２６．Ｅｐｕｂ ２０１１／０５／１２．ｅｎｇ）。ｅｔｓ転写因子の相関関係に基づくこの交配腫瘍活性（ｃｒｏｓｓ−ｔｕｍｏｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ）により、１つのｅｔｓ転写因子により齎される一部分であるかもしれない付加的な腫瘍の詳査が導かれた。
ｅｔｓファミリーメンバーＦＬＩ１は、したがって、新規分子標的であるかもしれず、ＹＫ−４−２７９は、ＧＢＭにおいて潜在的な標的治療である。ＧＢＭの同所異種移植及び遺伝子組み換えマウスモデルは、ヒト臨床試験への昇格のための論拠をサポートする原理証明研究に有益である。ＦＬＩ１は、ＧＢＭに対する新規生体標的であるかもしれず、また、ＹＫ−４−２７９は、将来的な治療として有用であるかもしれない。
ＧＢＭは、解析に利用し得る多重データセットを伴う、癌ゲノムアトラス（Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ））の標的腫瘍タイプの１つである。高い同種タンパク質と同様に、ＦＬＩ１の変化が検索されており、ＧＢＭ標本の２３％が、ＦＬＩ１が新規標的であることを裏付けする変化を有していることが分かった（図８）。
ＦＬＩ１、ＥＲＧ、及びＥＴＶ１の間の密接した相同関係を考慮して、ＹＫ−４−２７９のＥＲＧ及びＥＴＶ１への結合が評価された（Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１１；６（４）：ｅ１９３４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１５５９４０５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０８４８２６．Ｅｐｕｂ ２０１１／０５／１２．ｅｎｇ）。ＥＷＳ−ＦＬＩ１に対するＹＫ−４−２７９の親和性（ＫＤ）は、９．５μＭと測定された（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００９ Ｊｕｌ；１５（７）：７５０−６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１９５８４８６６．Ｅｎｇ；Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｓｅｌｖａｎａｔｈ）。表面プラズモン共鳴を用いた、組み換えＥＲＧ及びＥＴＶ１に結合するＹＫ−４−２７９の定常状態の動態によれば、結合親和性（ＫＤ）は、非特異性タンパク質ＢＳＡに対しては１２２．４μＭといった弱いものである一方で、ＥＲＧに対しては１１．７μＭであり、ＥＴＶ１に対しては１７．４μＭであった。図９には、ＹＫ−４−２７９が、ＥＲＧ及びＥＴＶ１に、各々１１．７μＭ及び１７．９μＭのＫＤで結合していることが示されている。定常状態の動態は、前述のとおり、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００装置で測定し（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００９ Ｊｕｌ；１５（７）：７５０−６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１９５８４８６６．Ｅｎｇ；Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｓｅｌｖａｎａｔｈ）、ＳＰＲセンサーグラムは示していない。
ＸＸ細胞株の解析を含むＧＢＭの大解読プロジェクトが完成している（Ｓｏｌｏｍｏｎ ＤＡ，Ｋｉｍ Ｔ，Ｄｉａｚ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ ＬＡ，Ｆａｉｒ Ｊ，Ｅｌｋａｈｌｏｕｎ ＡＧ，Ｈａｒｒｉｓ ＢＴ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＡＧ２ ｃａｕｓｅｓ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１ Ａｕｇ １９；３３３（６０４５）：１０３９−４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１８５２５０５．Ｅｐｕｂ ２０１１／０８／２０．ｅｎｇ）。ＧＢＭで発生する遺伝的異常のスペクトルによって７つの細胞株が選択された。表３に、ＧＢＭ細胞株の異質性を示す。ＧＢＭ細胞株パネルは、疾患の異質性の表れである。符号（＋）は、野生型又は突然変異型にリストされたタンパク質の発現を示す。符号（−）は、免疫ブロットにおける発現がないことを示す。これらの細胞株は、阻害剤ＹＫ−４−２７９に対する感度と同様に、ＦＬＩ１の発現を評価するために用いられた（図３）。
７つのＧＢＭ細胞株のうち６つ（８５％）が、免疫ブロットによりＦＬＩ１発現を実証した（図１０の上部パネル）。これらの細胞株各々の増殖は、ＹＫ−４−２７９によって、ＩＣ５０が０．５〜９．９μＭの範囲で減少し、ＦＬＩ１のレベルとＹＫ−４−２７９に対する感度との間で逆の相関関係が観察された（ｒ２＝０．８、図１０）。
ＧＢＭ標的としてのＦＬＩ１の潜在を評価するために、２つの遺伝子組み換えモデルを解析した（Ｃｈｏｗ ＬＭ，Ｅｎｄｅｒｓｂｙ Ｒ，Ｚｈｕ Ｘ，Ｒａｎｋｉｎ Ｓ，Ｑｕ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ａｎｄ ａｍｏｎｇ Ｐｔｅｎ，ｐ５３，ａｎｄ Ｒｂ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｂｒａｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｍａｒ ８；１９（３）：３０５−１６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１３９７８５５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０６０６６４）。正常脳幹、脳幹星状細胞、及び皮質星状細胞を含む２つのＦＬＩ１プローブセットについて、非常に低い発現が観察された（図１１）。しかしながら、２２中２０の二重欠損腫瘍（ＰＴＥＮ／ｐ５３）及び１４中１３の三重欠損腫瘍（ＰＴＥＮ／ｐ５３／Ｒｂ）は、２つのプローブセット解析に基づくＦＬＩ１の重要な発現を示した（図１１）。
ヒトＧＢＭにおけるＦＬＩ１発現レベルを決定するために、ＧＢＭパネルをＦＬＩ１抗体で染色した。このパネルは、無作為に選択されたグレード４の腫瘍６つからなる。６つ中４つ（６６％）が、抗体が最適化され、交差反応しているタンパク質及び非特異性シグナルが除去された後に、ＦＬＩ１に対して納得のいくＩＨＣ（免疫組織化学）染色を示した（図１２）。内部陽性標準（内皮細胞）は陽性ではないので、４つの付加的な腫瘍は評価不可であると考えた。
ＧＢＭに対する新規標的療法を得る重要な挑戦の１つは、血液脳関門（ＢＢＢ）を克服することである。ＹＫ−４−２７９の薬物動態評価の一部として、７５ｍｇ／ｋｇのラセミ体ＹＫ−４−２７９を静脈内投与（ＩＶ）した１２匹のマウスにおいて、組織レベルを測定し、これらをプラズマで比較した。脳組織におけるＹＫ−４−２７９レベルは、ユーイング肉腫前脛骨異種移植腫瘍の７４％であり、ＦＬＩ１を阻害するのに適度であった。さらに、化合物の静脈内投与（ＩＶ）によってラット薬物動態を行った場合、ラットは、急激な注入の後に、緩やかな点滴では起こらなかった眠気に襲われた。このことは、ＢＢＢを越えて中枢神経系に入る可能性があることを裏付けている。
ここで得られたデータにより、ＦＬＩ１がＧＢＭに対する推定標的であると認められる。ＴＣＧＡデータ、細胞株パネル、ＧＥＭＭモデル、及びヒト腫瘍からのＩＨＣパネルの組み合わせにより、ＦＬＩ１のさらなる検証が裏付けられる。
ＧＢＭにおける新規標的としてのＦＬＩ１の検証
ＧＢＭ細胞増殖に必要か否か評価することにより、推定標的としてのＦＬＩ１を検証する。グリア幹細胞においてＦＬＩ１は陽性癌遺伝子か否かを確認する。標的ＦＬＩ１の治療指数に対応させるために、ＦＬＩ１の重要性について、ＧＢＭ細胞は、正常ヒト星状膠細胞及びグリア幹細胞と比較される。正常脳細胞との比較は、ＦＬＩ１を好適な治療指数でもって検証標的であると確立させるのに有用である。
生存、増殖、及び浸潤のためにＦＬＩ１発現を必要とするＧＢＭ細胞株の識別
ＦＬＩ１の３’ＵＴＲを標的とするＥＧＦＰでタグ付けされたｓｈＲＮＡベクターを用いて、生存、増殖、及び浸潤のためにＦＬＩ１発現を必要とするＧＢＭ細胞株が識別される。ｓｈＲＮＡを、レンチウィルス系を用いて細胞内に感染させた。これにより、遺伝子型異質性の大半に及ぶ７つのＧＢＭ細胞株におけるＦＬＩ１の相対的な重要性を評価する（表３）。ｓｈＲＮＡによってＦＬＩ１が減少した後、単層増殖、浸潤、足場非依存性増殖、及び腫瘍形成アッセイにおけるスクランブルｓｈＲＮＡ対照とＦＬＩ１減少との間の変化を測定する。前述の報告のとおり、細胞培養実験が行われている（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００９ Ｊｕｌ；１５（７）：７５０−６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１９５８４８６６．Ｅｎｇ；Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１１；６（４）：ｅ１９３４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１５５９４０５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０８４８２６．Ｅｐｕｂ ２０１１／０５／１２．ｅｎｇ）。浸潤アッセイは、悪性腫瘍細胞によって内皮細胞の浸潤を即時に観測及び定量する電気インピーダンス基礎方法により、腫瘍細胞及びこれらの臍帯内皮細胞への浸潤を用いて行われる。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ装置（Ｒｏｃｈｅ製造）を用いる。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ装置では、電気インピーダンスの変化を、付着する細胞として、そしてこの付着を妨害する腫瘍細胞として測定する（Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１１；６（４）：ｅ１９３４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１５５９４０５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０８４８２６．Ｅｐｕｂ ２０１１／０５／１２．Ｅｎｇ；Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｕｒｅｎ Ａ．Ａ ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｉｍｐｅｄａｎｃｅ ｂａｓｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ｂｙ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ：ＪｏＶＥ．２０１１（５０）．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１４９０５８１．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３１６９２８３）。７つの細胞株全てにおいて、異種移植実験には、ＦＬＩ１を減少させた多クローン性ｓｈＲＮＡを用いる。ｓｈＲＮＡ ＦＬＩ１及びスクランブル細胞株は各々、５匹の無胸腺マウスに定位的に投与される（Ｆｉａｎｄａｎｃａによる補佐）。（７細胞株、細胞株につき５匹の動物、＋／−ＦＬＩ１＝７０匹）。増殖を、７〜１０日の間隔で、共有リソースのＧＵ Ａｎｉｍａｌ ＩｍａｇｉｎｇにおけるＭＲＩによって観測する。腫瘍増殖動態の計測は、記載のとおり、Ｂｒｕｋｅｒ Ｐａｒａｖｉｓｉｏｎ ５．０ソフトウェア又はＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ）を用いて、興味度解析の領域で行う（Ｔｒｕｏｎｇ ＡＨ，Ｃｅｒｖｉ Ｄ，Ｌｅｅ Ｊ，Ｂｅｎ−Ｄａｖｉｄ Ｙ．Ｄｉｒｅｃｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＭ２ ｂｙ Ｆｌｉ−１．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００５ Ｆｅｂ ３；２４（６）：９６２−９．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１５５９２５０２；Ｐｉｍａｎｄａ ＪＥ，Ｃｈａｎ ＷＹ，Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ ＩＪ，Ｂｏｗｅｎ Ｍ，Ｇｒｅｅｎ ＡＲ，Ｇｏｔｔｇｅｎｓ Ｂ．Ｅｎｄｏｇｌｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ Ｆｌｉ−１，Ｅｒｇ，ａｎｄ Ｅｌｆ−１ ａｃｔｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｎｄ ａ−８−ｋｂ ｅｎｈａｎｃｅｒ．Ｂｌｏｏｄ．２００６ Ｊｕｎ １５；１０７（１２）：４７３７−４５．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１６４８４５８７）。腫瘍の増殖統計により、進行及び処置の時間依存性プロファイルが得られる。
完全長ＦＬＩ１ ｃＤＮＡでの正常ヒト星状膠細胞のトランスフェクション
星状膠細胞へのＦＬＩ１の形質転換効果を確認するために、レンチウィルス系を用いて、正常ヒト星状膠細胞を完全長ＦＬＩ１ ｃＤＮＡでトランスフェクトさせ、軟寒天中で、インビボ同所注入アッセイでの形質転換を評価する。対照（空ベクター）及びＦＬＩ１トランスフェクト多クローン細胞を、足場非依存性増殖アッセイのための軟寒天中に載置する（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔ Ｍｅｄ． ２００９ Ｊｕｌ；１５（７）：７５０−６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１９５８４８６６．ｅｎｇ）。上述のとおり、異種移植研究が行われる（２細胞株 ＋／−ＦＬＩ１、細胞株につき５匹の動物＝２０匹の動物）。上述のとおり、１０日ごとに動物をＭＲＩで撮像し、腫瘍増殖を評価する。
ＦＬＩ１が外因的に発現するとき、グリア幹細胞は、ＦＬＩ１の先天性発現及び腫瘍形成作用の双方について評価される。公知の（Ｌｅｌｉｅｖｒｅ Ｅ，Ｌｉｏｎｎｅｔｏｎ Ｆ，Ｍａｔｔｏｔ Ｖ，Ｓｐｒｕｙｔ Ｎ，Ｓｏｎｃｉｎ Ｆ．Ｅｔｓ−１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｆｌｉ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＴＳ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｌｉ−１ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００２ Ｊｕｌ １２；２７７（２８）：２５１４３−５１．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１１９９１９５１）、及び新規細胞株を用いる。足場非依存性増殖及び浸潤アッセイの評価を、対照及びＦＬＩ１発現の双方について行う。さらに、対照及びＦＬＩ１発現の双方でトランスフェクトされたこれらの細胞株を、異種移植実験で用いる（評価の前の免疫ブロットにより常に判明する）。これらの細胞全てを、本来の神経素質を維持するための血清よりもむしろ、外因性増殖因子で、最少増殖培地において注意深く増殖させる（Ｒｏｓｓｉ Ｓ，Ｏｒｖｉｅｔｏ Ｅ，Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏ Ａ，Ｌａｕｒｉｎｏ Ｌ，Ｎｉｎｆｏ Ｖ，Ｄｅｉ Ｔｏｓ ＡＰ．Ｕｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＦＬＩ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒｏｕｎｄ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｎｅｏｐｌａｓｍ ｕｓｉｎｇ ａ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｍｏｄ Ｐａｔｈｏｌ． ２００４ Ｍａｙ；１７（５）：５４７−５２．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：１５００１９９３）。（３細胞株 ＋／−ＦＬＩ１、細胞株につき５匹の動物＝１５匹の動物）。
ＹＫ−４−２７９毒性とＦＬＩ１レベルとの間の相関関係を測定する。ＹＫ−４−２７９は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１のＦＬＩ１成分を標的とする（Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｓｅｌｖａｎａｔｈａｎ ＳＰ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｓｎｙｄｅｒ ＴＭ，Ｈｏｎｇ ＰＳ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｏｆ ＹＫ−４−２７９ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｉｎ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ＥＷＳ−ＦＬＩ１．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１２ Ｆｅｂ；３（２）：１７２−８２．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２２３８３４０２．Ｅｐｕｂ ２０１２／０３／０３．Ｅｎｇ；Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１１；６（４）：ｅ１９３４３．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１５５９４０５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０８４８２６．Ｅｐｕｂ ２０１１／０５／１２．ｅｎｇ）。細胞株パネルでのＦＬＩ１阻害剤ＹＫ−４−２７９の効果、及び阻害とＦＬＩ１発現との相関関係の評価の後、これらの結果をｓｈＲＮＡデータと比較する。ＦＬＩ１発現との相関関係を伴う７つのＧＢＭ細胞株についての予備データがある。これは、図９を作成するために用いられる技法により、さらなる細胞株へと拡張される。非腫瘍性グリア細胞株がこれらの比較に含まれる。
ＦＬＩ１発現が他の既知のＧＢＭ遺伝子型及び表現型と相関関係を有するか否かを確認する。我々の細胞株データでの相関関係と同様に、ＴＣＧＡからのオンライン情報ツールシリーズを用いる。解析には、ＦＬＩ１ ｃＤＮＡ又はタンパク質発現が含まれ、ＦＬＩ１が、ＰＴＥＮ損失、ｐ１６、ｐ５３突然変異、ＩＤＨ１点突然変異、又はＥＧＦＲ突然変異といった他の既知のＧＢＭ遺伝子事象との相関関係を有するか否かが、解析によって評価される。これは、診断時及び評価された遺伝子マーカーパネルへのＦＬＩ１の含有時に切除された患者の腫瘍が含まれるように拡張される。
ＹＫ−４−２７９を治療剤として評価するための、ＧＢＭの動物モデルの利用
ＹＫ−４−２７９が、ＧＢＭについて、増殖の緩和又は軽減の誘発に有効か否かを実証するために、ＹＫ−４−２７９を、実証されているＧＢＭとともにマウスに投与する。これにより、ＧＢＭの異種移植モデル及び遺伝子組み換えモデルの双方が評価される。
１匹ではなくマウス群において一度に、ＭＲＩによって頭蓋内病巣を評価する方法を実証する。ＭＲＩによってＧＢＭ腫瘍の高詳細グラフィック及び代謝スペクトルが得られる一方、マウスをスクリーニングする時間により、膨大な研究のためのその用途は制限される。２つのＧＢＭ細胞株は、キセノーゲン頭蓋内イメージング（Ｘｅｎｏｇｅｎ ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ ｉｍａｇｉｎｇ）のために用いられる７つの細胞株のＧＢＭ同所スクリーニングから選択され、作成される。これら２つのＧＢＭ細胞株は、上述のごときＦＬＩ１に対する要求及び増殖動態に基づいて選択される。これら２つのＧＢＭ細胞株は、安定してルシフェラーゼでトランスフェクトされ、動物群を、キセノーゲンシステム（Ｘｅｎｏｇｅｎ ｓｙｓｔｅｍ）を用いてスクリーニング／観察することができる。さらなる詳細な研究及び定量比較のために、選択された動物はＭＲＩを用いて評価される。細胞株は、インビトロでスクリーニングされ、続いて同所異種移植パイロット研究に供される（２細胞株×５動物＝１０動物）。キセノーゲンイメージング（Ｘｅｎｏｇｅｎ ｉｍａｇｉｎｇ）の前に、ルシフェラーゼ基質を動物の腹腔内に注入する。
動物を、症候性腫瘍注入後７日間処置することにより、異種移植ＧＢＭ腫瘍へのＹＫ−４−２７９を評価する。初期の腫瘍を、キセノーゲンシステムにて、ＭＲＩと相関しているサイズで、及び動物の５ｍｍ３病変時に開始した処置でスクリーニングする。ＹＫ−４−２７９は血液脳関門を通過する。ユーイング肉腫腫瘍の軽減を導く投与量に類似したＢＩＤ注入量のＹＫ−４−２７９で、動物を処置する（図１３）。この研究により、脳腫瘍の容量、動物の症候、及び全生存期間が査定されるであろう。剖検で、腫瘍及び正常隣接脳は、ＧＢＭマーカー、アポトーシス、及びＦＬＩ１調節標的遺伝子について免疫組織化学によって評価されるであろう。図１３は、（Ｓ）−ＹＫ−４−２７９又はラセミ体での３日間の処置による、著しい腫瘍の軽減を示す。図１３Ａ：ＥＳ異種移植マウスを、４００ｍｇ／ｋｇの化合物又は所定対照物で処置した。既知の腫瘍（３００ｍｍ３）で開始し、腹腔内化合物で３日間マウスに処置を施した。計６回の投与を行った。図１３Ｂ：同様の実験により、Ｈ（ヘマトキシリン）及びＥ（エオジン）は腫瘍を染色した。
ＧＢＭでの被検動物の大部分において、症候及び比較的大きな腫瘍が存在しているので、より大きな症候性腫瘍に対してＹＫ−４−２７９が処置される。これにより、ＭＲＩを用いて、腫瘍が定着して症候の最初の表示があった後に動物を処置することにより、既知のＧＢＭ ２０ｍｍ３へのＹＫ−４−２７９が評価される。このときの腫瘍は、キセノーゲンシステムで検出可能である。動物は、処置中、キセノーゲン評価を１週間に２回受ける。この研究により、腫瘍の容量、動物の症候、及び全生存期間が比較される。剖検で、腫瘍及び正常隣接脳は、ＧＢＭマーカー、アポトーシス、及びＦＬＩ１調節標的遺伝子について免疫組織化学によって評価される。
ＧＢＭのＧＥＭＭモデルが用いられる。動物を、公知のとおりに繁殖させる（Ｃｈｏｗ ＬＭ，Ｅｎｄｅｒｓｂｙ Ｒ，Ｚｈｕ Ｘ，Ｒａｎｋｉｎ Ｓ，Ｑｕ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ａｎｄ ａｍｏｎｇ Ｐｔｅｎ，ｐ５３，ａｎｄ Ｒｂ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｂｒａｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｍａｒ ８；１９（３）：３０５−１６．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：２１３９７８５５．Ｐｕｂｍｅｄ Ｃｅｎｔｒａｌ ＰＭＣＩＤ：３０６０６６４）。生後約９０日で、動物は、ＧＢＭの発症を探索するために、１０〜１４日ごとにＭＲＩ評価を受ける。実験例１では、動物は、９０日で開始して、ＹＫ−４−２７９で処置されるか又は対照である（対照及び処置で１０動物ずつ＝２０動物）。実験例２では、動物は、症候、又はいずれかの次元における２ｍｍよりも大きいＭＲＩ測定腫瘍の発症のときに処置される（対照及び処置で１０動物ずつ＝２０動物）。処置に次いで、動物は上述のとおりに評価される。ＹＫ−４−２７９は、腹腔内投与される。
データの供給により、ＦＬＩ１及びＧＢＭを運ぶ役割の潜在的な他のｅｔｓファミリーメンバーのさらなる探査がサポートされる。
選択された癌に関連する参考技術には、以下のものが含まれる。
ＣＢＴＲＵＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ：Ｐｒｉｍａｒｙ Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ Ｔｕｍｏｒｓ Ｄｉａｇｎｏｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｉｎ ２００４−２００８（Ｍａｒｃｈ ２３，２０１２ Ｒｅｖｉｓｉｏｎ）．Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｒａｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１２；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｔｒｕｓ．ｏｒｇ．Ａｖａｉｌａｂｌｅ ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｔｒｕｓ．ｏｒｇ
（実施例１１：肺癌治療のためのＹＫ−４−２７９の使用）
上皮間葉転換（ＥＭＴ）は、癌の病因の鍵となる構成である。ＥＭＴは、細胞形態と転移及び薬剤耐性表現型を齎す阻害との重要な変化を誘発する。さらに、ＥＭＴが癌幹細胞の生成に関与することを示唆する証拠がある。肺癌は、主に、治療が困難な進行ステージで診断されることが典型的であるので、癌に関連した死亡率の先導となっている。癌の分子遺伝的特徴に対する我々の理解の進歩により、腫瘍形成に必要とされる独自の分子が定義されてきた。これにより、特定の癌の治療に有用な標的治療の開発が導かれてきた。これら分子標的の例には、細胞表面増殖因子レセプター及び細胞内タンパク質チロシンキナーゼが含まれる。残念ながら、このような治療によっても、肺癌患者についての全生存期間又は生活の質は著しく改善されてはいない。
本明細書に記載の近年の発見により、転写因子のｅｔｓファミリーメンバーである、Ｅ−２６形質転換配列（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（ＥＴＳ）関連遺伝子ＥＲＧの生成物が、ＥＭＴにおいて重要な役割を担う、という仮説が導かれてきている。さらに、それは、亜鉛フィンガーＥ−ｂｏｘ結合ホメオボックス１及び２遺伝子（ＺＥＢ１、ＺＥＢ２）の発現の直接的な上方調節によって、ＥＭＴ及び上皮細胞の悪性進行を誘発する。ＺＥＢ１は、肺癌細胞中のＥＭＴに結び付くとともに、ＥＭＴを置き換えるだけでなく、インビトロ及びインビボにて腫瘍増殖を阻害するｓｉＲＮＡを用いて、その発現を阻害する。肺癌細胞が高レベルのＥＲＧを発現するので、ＥＲＧは、ＺＥＢによってＥＭＴを誘発するかもしれない。ＥＲＧが、ＺＥＢ１／２によって齎される肺癌細胞のＥＭＴに関与するか否かを確定する実験が行われる。ＹＫ−４−２７９の新しい処方が行われ、肺癌治療について評価される。
転写因子としてのＥＲＧは、発癌にとって重要な多くの遺伝子の発現を調節する。初期の観測で、ＥＲＧの発癌性には、上皮間葉転換（ＥＭＴ）を誘発する能力が含まれることが示唆された。異なる実験系において、ＥＲＧは、癌細胞においてＥＭＴの正調節因子である亜鉛フィンガーＥ−ｂｏｘ結合ホメオボックス１及び２遺伝子（ＺＥＢ１、ＺＥＢ２）の発現を誘発することが示されてきている。ＥＭＴは、ＮＳＣＬＣにおける転移及び薬剤耐性を齎すので、ＥＭＴを導く分子経路の阻害が重要な臨床的実用性を有するかもしれない。
肺癌細胞においてＥＭＴを媒介しているＥＲＧの役割が確定される。ＥＲＧ発現の変化に応じたＥＭＴ及びＮＳＣＬＣ細胞株の薬剤耐性表現型が確定される。ＥＲＧが、他の上皮腫瘍における場合のようにＥＭＴを誘発するか否かが確定される。さらに、ＮＳＣＬＣ中のＥＭＴを媒介したＥＲＧが、ＺＥＢ１／２遺伝子によるものか否かが確定される。これらの実験には、ＥＲＧの阻害及びＲＮＡｉ技術によるＮＳＣＬＣ細胞におけるＺＥＢ発現が含まれる。ＥＭＴ表現型は、定着ＥＭＴマーカーについての即時ＰＣＲ解析及びウェスタンブロット法によって評価される。
非経口で投与可能なＹＫ−４−２７９の処方が得られ、肺癌細胞の増殖及び有害な特性に対するＹＫ−４−２７９の効果が評価される。添加剤の一例は、β−ヒドロキシプロピルシクロデキストリン（β−ＨＰＣＤ）である。ＮＳＣＬＣ細胞はＹＫ−４−２７９で処置され、これらの反応を、複数のインビトロ及びインビボモデルにおいて測定した。免疫無防備状態のマウスにおける細胞生存能力、走化性、内皮細胞浸潤、及び異種移植増殖を観測する。ＹＫ−４−２７９とＮＳＣＬＣについて最も常識的な化学療法剤との間の潜在的な相乗効果が確定される。ＥＭＴによって媒介される、ＮＳＣＬＣ細胞の薬剤耐性及び高転移能といった特性は、ＮＳＣＬＣ患者の予後不良に大きく寄与している。
ＥＭＴによって媒介される、ＮＳＣＬＣ細胞の薬剤耐性及び高転移能といった特性は、ＮＳＣＬＣ患者の予後不良に大きく寄与している。肺癌においてＥＭＴ表現型を置き換える特定のタンパク質は、小分子を用いて標的とされる。図１４は、ＺＥＢ１及びＺＥＢ２の発現を誘発するＥＲＧを示す。ＺＥＢ１及びＺＥＢ２は、肺癌の転移及び薬剤耐性を齎すＥＭＴを活性化させる。
薬剤を癌細胞の増殖に必要とされる特定分子の標的とすることは、分子及び細胞生物学における近年の進展にもかかわらず、困難な挑戦のままである。癌細胞の無秩序な再生を推進するタンパク質が知られてはいるが、効果的な治療の標的として役立つものはほんの僅かである。慢性骨髄性白血病の治療に用いられるメシル酸イマチニブという小分子と、胸部癌の治療に用いられるモノクローナル抗体（トラスツズマブ）とによってその活性が阻害される細胞内タンパク質チロシンキナーゼが例示され、細胞表面増殖因子レセプターへの標的とされる。このような、制限されてはいるが、重要かつ非常に心強い成功により、医薬工業による継続的及び着実な調査が促されている。これらタンパク質の生化学は充分に研究されているので、酵素の活性又はレセプターの活性化を阻害することは、癌に加えて多くの疾患に対する薬剤開発の揺るぎのない最終目的である。これに対して、タンパク質同士の結合に関与する生化学は遥かに複雑であり、その研究は不充分である。
ＥＲＧは、核に局在し、酵素活性を欠いているので、標的治療の設計のさらなる挑戦に供される。ＹＫ−４−２７９は、ＥＲＧの転写活性を阻害する小分子であり、ＮＳＣＬＣにおいて自身の規則性について詳査されている。ＥＭＴに必要とされるＥＲＧと結合し、ＥＲＧ機能を妨げることによって、ＹＫ−４−２７９であるか否かが確認され（図１４）、ＮＳＣＬＣの処置に使用され得る。
ＥＲＧは発癌性タンパク質である。Ｅ−２６形質転換配列（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（ＥＴＳ）関連遺伝子ＥＲＧは、多くの組織における内皮恒常性、分化、及び血管形成に不可欠な、転写因子のｅｔｓファミリーメンバーをコードする（Ｌｉｕ Ｆ，Ｐａｔｉｅｎｔ Ｒ．Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ＥＴＳ ｆａｍｉｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｈｅｍａｎｇｉｏｂｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００８；１０３：１１４７−５４；Ｓａｓｈｉｄａ Ｇ，Ｂａｚｚｏｌｉ Ｅ，Ｍｅｎｅｎｄｅｚ Ｓ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｎｉｍｅｒ ＳＤ．Ｔｈｅ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＥＴＳ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ＭＥＦ ａｎｄ ＥＲＧ．Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ．２０１０；９：３４５７−９）。証拠により、ＥＲＧによって調節される特定の遺伝子の活性が血管形成に必要とされることが示唆されている。例えば、それ自身の発現のためにＥＲＧを必要とするＶＥ−カドヘリンは、血管形成において、内皮接合安定性及び内皮生存率の双方の重要工程のために不可欠である（Ｙｕａｎ Ｌ，Ｓａｃｈａｒｉｄｏｕ Ａ，Ｓｔｒａｔｍａｎ ＡＮ，Ｌｅ Ｂｒａｓ Ａ，Ｚｗｉｅｒｓ ＰＪ，Ｓｐｏｋｅｓ Ｋ，ｅｔ ａｌ．ＲｈｏＪ ｉｓ ａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ Ｒｈｏ ＧＴＰａｓｅ ｔｈａｔ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＥＲＧ．Ｂｌｏｏｄ．２０１１；１１８：１１４５−５３）。発癌において、ＥＴＳ転写因子は、細胞外マトリクスの分解を含む転移、並びに細胞−細胞間接合及び細胞−マトリクス間接合の形成に必要とされる工程に加わっている多くの遺伝子の調節に関与している（Ｌｅｌｉｅｖｒｅ Ｅ，Ｌｉｏｎｎｅｔｏｎ Ｆ，Ｓｏｎｃｉｎ Ｆ，Ｖａｎｄｅｎｂｕｎｄｅｒ Ｂ．Ｔｈｅ Ｅｔｓ ｆａｍｉｌｙ ｃｏｎｔａｉｎｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ａｎｄ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ．２００１；３３：３９１−４０７）。特定の例には、血管内皮増殖因子、エンドグリン、マトリクスメタロプロテイナーゼ、コラゲナーゼ１、及びヘムオキシゲナーゼ１のためのレセプターが含まれる。ＥＲＧは、造血性及び上皮細胞癌において過剰発現し、ヒト前立腺癌において強力な発癌遺伝子として動作する（Ｃｈｅｎ Ｙ，Ｃｈｉ Ｐ，Ｒｏｃｋｏｗｉｔｚ Ｓ，Ｉａｑｕｉｎｔａ ＰＪ，Ｓｈａｍｕ Ｔ，Ｓｈｕｋｌａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．ＥＴＳ ｆａｃｔｏｒｓ ｒｅｐｒｏｇｒａｍ ｔｈｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｉｓｔｒｏｍｅ ａｎｄ ｐｒｉｍｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＰＴＥＮ ｌｏｓｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１３；Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｕｒｅｎ Ａ．Ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ＥＴＳ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｓ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｔｏｏｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１３；５：２５４−６８；Ｔｕｒｎｅｒ ＤＰ，Ｗａｔｓｏｎ ＤＫ．ＥＴＳ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ：ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｅｘｐｅｒｔ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．２００８；８：３３−４２）。
ＥＲＧ及びＥＭＴは、ＮＳＣＬＣにおいて不充分な臨床転帰を表す。肺癌におけるＥＲＧの役割へと我々の興味を導く注目すべき発見には、正常組織と比較した肺腫瘍サンプル１００％中の、ＮＳＣＬＣにおける比較的高レベルのＥＲＧ発現の検出及び選択的スプライス型ＥＲＧの存在が含まれる（Ｘｉ Ｌ，Ｆｅｂｅｒ Ａ，Ｇｕｐｔａ Ｖ，Ｗｕ Ｍ，Ｂｅｒｇｅｍａｎｎ ＡＤ，Ｌａｎｄｒｅｎｅａｕ ＲＪ，ｅｔ ａｌ．Ｗｈｏｌｅ ｇｅｎｏｍｅ ｅｘｏｎ ａｒｒａｙｓ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ ｓｐｌｉｃｅｄ，ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００８；３６：６５３５−４７）。マイクロアレイによるｍＲＮＡ発現の解析：ＥＲＧ ｍＲＮＡ発現ランキングは、上位８％内であり（Ｒａｍａｓｗａｍｙ Ｓ，Ｒｏｓｓ ＫＮ，Ｌａｎｄｅｒ ＥＳ，Ｇｏｌｕｂ ＴＲ．Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２００３；３３：４９−５４）、ＮＳＣＬＣ組織サンプルでは上位１１％内である（Ｄｉｎｇ Ｌ，Ｇｅｔｚ Ｇ，Ｗｈｅｅｌｅｒ ＤＡ，Ｍａｒｄｉｓ ＥＲ，ＭｃＬｅｌｌａｎ ＭＤ，Ｃｉｂｕｌｓｋｉｓ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｓｏｍａｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｆｆｅｃｔ ｋｅｙ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５５：１０６９−７５）。ＥＲＧ標的遺伝子はＥＭＴ表現型に関与しているので、ＥＲＧ媒介ＥＭＴは、ＮＳＣＬＣの悪性表現型に寄与するかもしれないことが仮定される。
細胞がその上皮特徴を損失し、間葉表現型を獲得するとき、ＥＭＴはまず、初期の胚発生において描写された（Ｓａｔｏ Ｍ，Ｓｈａｍｅｓ ＤＳ，Ｈａｓｅｇａｗａ Ｙ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｔｏ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｒｅｓｐｉｒｏｌｏｇｙ．２０１２；１７：１０４８−５９）。ＥＭＴが進展するにつれて、細胞は、より運動性で侵略的な表現型を獲得する。したがって、ＥＭＴは、発癌において重要な成分として浮上した。薬剤耐性及び抗アポトーシス表現型と同様に、ＥＭＴと、ＮＳＣＬＣ局所的侵略、血管形成、遠隔転移との間の関連が、インビボ及びインビトロで実施した多くの研究によって実証されてきている（表４）。例えば、ＥＭＴに関与する分子の発現は、転移の増大及び患者の全生存期間の短縮を含むＮＳＣＬＣの臨床病理的な特徴と相関している（Ｄａｕｐｈｉｎ Ｍ，Ｂａｒｂｅ Ｃ，Ｌｅｍａｉｒｅ Ｓ，Ｎａｗｒｏｃｋｉ−Ｒａｂｙ Ｂ，Ｌａｇｏｎｏｔｔｅ Ｅ，Ｄｅｌｅｐｉｎｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｉｎ ｎｏｎ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．２０１３；８１：１１７−２２）。さらに、発癌におけるＥＭＴの重要な役割は、幹細胞の細胞表現型特徴によって示される（Ｍａｎｉ ＳＡ，Ｇｕｏ Ｗ，Ｌｉａｏ ＭＪ，Ｅａｔｏｎ ＥＮ，Ａｙｙａｎａｎ Ａ，Ｚｈｏｕ ＡＹ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｇｅｎｅｒａｔｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ．２００８；１３３：７０４−１５）。纏めると、これらの研究により、肺癌の進行において発生するＥＭＴの阻害は非常に正当であることが提示されている。表４に、ＮＳＣＬＣにおける臨床的な特徴と相関するＥＭＴに関与する分子を掲載する。
ＥＲＧ標的遺伝子ＺＥＢ１は、ＥＭＴを媒介する。ＥＭＴは、多重シグナル経路に関与する複合細胞レスポンスである。亜鉛フィンガーＥ−ｂｏｘ結合ホメオボックス（ＺＥＢ）タンパク質は、ＥＭＴの鍵となる調節遺伝子である（Ｔａｋｅｙａｍａ Ｙ，Ｓａｔｏ Ｍ，Ｈｏｒｉｏ Ｍ，Ｈａｓｅ Ｔ，Ｙｏｓｈｉｄａ Ｋ，Ｙｏｋｏｙａｍａ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ ＺＥＢ１，ａ ｍａｓｔｅｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｔｏ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ｇｅｎｅ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ａｎｃｈｏｒａｇｅ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ ｌｅｔｔｅｒｓ．２０１０；２９６：２１６−２４）。特に、ＺＥＢ１は、ＥＭＴに関与するタンパク質をコードする遺伝子の発現を調節することによって、肺癌のＥＭＴ関連発癌性表現型において重要な役割を担う。例えば、肺癌細胞株におけるｓｉＲＮＡによるＺＥＢ１発現の阻害は、インビトロ及びインビボにおける、ドセタキセルに対する感度の増大及び肺癌細胞の増殖の減少といった、ＥＭＴの克服という結果を齎す（Ｒｅｎ Ｊ，Ｃｈｅｎ Ｙ，Ｓｏｎｇ Ｈ，Ｃｈｅｎ Ｌ，Ｗａｎｇ Ｒ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＺＥＢ１ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ＥＭＴ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２０１３；１１４：１３９５−４０３）。最も重要なのは、ＥＲＧは、ＺＥＢ中枢によって前立腺癌細胞中のＥＭＴを媒介することである（Ｌｅｓｈｅｍ Ｏ，Ｍａｄａｒ Ｓ，Ｋｏｇａｎ−Ｓａｋｉｎ Ｉ，Ｋａｍｅｒ Ｉ，Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ Ｉ，Ｂｒｏｓｈ Ｒ，ｅｔ ａｌ．ＴＭＰＲＳＳ２／ＥＲＧ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＺＥＢ１／ＺＥＢ２ ａｘｉｓ ｉｎ ａ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１１；６：ｅ２１６５０）。さらに、ｍｉＲ−３０は、ＥＲＧ発現を直接標的とすることによって、前立腺癌細胞中のＥＭＴを抑制する（Ｋａｏ ＣＪ，Ｍａｒｔｉｎｉｅｚ Ａ，Ｓｈｉ ＸＢ，Ｙａｎｇ Ｊ，Ｅｖａｎｓ ＣＰ，Ｄｏｂｉ Ａ，ｅｔ ａｌ．ｍｉＲ−３０ ａｓ ａ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｏｎｎｅｃｔｓ ＥＧＦ／Ｓｒｃ ｓｉｇｎａｌ ｔｏ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＭＴ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０１３）。これら及び他の研究により、肺癌中のＥＭＴを克服するためにＺＥＢ１及びＺＥＢ２を標的とする試みは成功であると結論付けられるのは妥当であることが示されている。ＲＮＡｉ技術は、臨床適用に充分なほどは発展していないので、肺癌においてＺＥＢ１発現を阻害する別のメカニズムを特定する必要があるであろう。ＥＲＧ結合部位は、ＺＥＢ１及びＺＥＢ２プロモーター領域に存在することが知られている（Ｌｅｓｈｅｍ Ｏ，Ｍａｄａｒ Ｓ，Ｋｏｇａｎ−Ｓａｋｉｎ Ｉ，Ｋａｍｅｒ Ｉ，Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ Ｉ，Ｂｒｏｓｈ Ｒ，ｅｔ ａｌ．ＴＭＰＲＳＳ２／ＥＲＧ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＺＥＢ１／ＺＥＢ２ ａｘｉｓ ｉｎ ａ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１１；６：ｅ２１６５０）。２００９年に、我々は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１の阻害剤として、ユーイング肉腫における腫瘍特異性の再配列遺伝子によってコードされた融合タンパク質である、ＹＫ−４−２７９を発見した（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００９；１５：７５０−６）。より最近では、２つのＥＴＳメンバー、ＦＬＩ１及びＥＲＧ、の間での相同関係に基づき、ＹＫ−４−２７９は、ＥＲＧに直接結合し、その転写活性を阻害していることが分かった（Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１１；６：ｅ１９３４３）。肺癌細胞中のＥＲＧ機能の阻害は、ＺＥＢタンパク質によって媒介されるＥＭＴを克服し、転移増殖の阻害及び化学療法薬剤に対する感度の増大を導くかもしれない。
ＥＲＧへのＹＫ−４−２７９の結合
ＹＫ−４−２７９は、ＥＷＳ−ＦＬＩ１に直接結合し、ユーイング肉腫細胞の増殖を阻害する小分子である（Ｅｒｋｉｚａｎ ＨＶ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｍｅｒｃｈａｎｔ Ｍ，Ｓｃｈｌｏｔｔｍａｎｎ Ｓ，Ｂａｒｂｅｒ−Ｒｏｔｅｎｂｅｒｇ ＪＳ，Ｙｕａｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＷＳ−ＦＬＩ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００９；１５：７５０−６）。ＥＷＳ−ＦＬＩ１は染色体転座の生成物である。ＦＬＩ１は、保存されたＤＮＡ結合ドメインを有するｅｔｓファミリー転写因子である。他のｅｔｓファミリーメンバー、ＥＲＧ、でのＦＬＩ１の配置調整で、アミノ酸配列は著しい類似性を示す（同一性６３．５％、相同性８０．２％）。市販の組み換えＥＲＧタンパク質（Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）が得られており、これについて、レポーター部分なしで即時に分子間相互作用を検出するＢｉａｃｏｒｅ Ｔ−１００上で、ＹＫ−４−２７９への直接結合親和性が測定された（図１５）。組み換えタンパク質をＢｉａｃｏｒｅマイクロチップ上で固定し、濃度を変化させたＹＫ−４−２７９の存在下で結合を測定した。１１．７μＭの定常状態のＫＤでＥＲＧに結合するＹＫ−４−２７９が検出された。図１５は、ＥＲＧタンパク質に直接作用するＹＫ−４−２７９を示す。精製組み替えＥＲＧをＢｉａｃｏｒｅ ＣＭ５マイクロチップ上に固定し、８種の異なる濃度（０．１〜５０μＭ）のＹＫ−４−２７９への直接結合を、ＳＰＲにより確認した。定常状態のＫＤをＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアにて算出した。
ＹＫ−４−２７９は、ＥＲＧの転写活性を阻害する。ＥＴＳタンパク質は、標的遺伝子の発現を制御する。この標的遺伝子は、その多くが発癌性増殖の一因となる多様な生化学的プロセスに関与しているタンパク質をコードする（Ｈｏｌｌｅｎｈｏｒｓｔ ＰＣ，ＭｃＩｎｔｏｓｈ ＬＰ，Ｇｒａｖｅｓ ＢＪ．Ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ＥＴＳ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ．Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２０１１；８０：４３７−７１）。ＥＲＧの転写活性に対するＹＫ−４−２７９の効果を、プロモーターレポーターアッセイ及び内在性遺伝子発現プロファイリングを利用して試験した。ＹＫ−４−２７９は、ＣＯＳ７細胞中のルシフェラーゼ発現を制御するＥＴＳ標的遺伝子プロモーター（ＩＤ２）のＥＲＧ活性化を阻害した（図１６Ａ）。ＶＣａＰ前立腺癌細胞は、ＴＭＰＲＳＳ２／ＥＲＧ融合遺伝子を保有し、ここで、ＥＲＧは、ＰＬＡＵ、ＡＤＡＭ１９、及びＰＬＡＴといった特定の内在性標的遺伝子の発現を誘発する。即時（ＲＴ）−ＰＣＲ解析により、ＹＫ−４−２７９は、ＥＲＧ発現のものではなく、これら内在性標的遺伝子の発現を著しく阻害することが明らかになった（図１６Ｂ）。これらの発見は、ＥＲＧ及びＰＬＡＵについてタンパク質レベルにまで拡大された。ＹＫ−４−２７９による阻害は、細胞がＥＲＧ ｓｉＲＮＡで処置されたときに観察されるものに相当した（図１６Ｂ）（Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＥＭ，Ｋｏｎｇ Ｙ，Ｂｒｏｗｎ ＭＬ，Ｔｏｒｅｔｓｋｙ ＪＡ，Ｕｒｅｎ Ａ．ＹＫ−４−２７９ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＥＲＧ ａｎｄ ＥＴＶ１ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１１；６：ｅ１９３４３）。上皮細胞はＦＬＩ１を発現しないので、ＴＫ−４−２７９の効果は、ＥＲＧ阻害による可能性が最も高い。このことにより、ＹＫ−４−２７９は、単に転写及び置き換えの一般的な阻害剤ではなく（ＥＲＧ ｍＲＮＡ及びタンパク質レベルは変化しなかった）、ｅｔｓファミリータンパク質の転写活性を特異的に阻害する、というさらなる証拠が得られる。
ＮＳＣＬＣ細胞株で発現され、ＥＭＴマーカーを誘発するＥＲＧ
ヒト腫瘍サンプルで観察されるものと類似して著しいＥＲＧ発現が存在することを確認するために、５つのＮＳＣＬＣ細胞株について実験した。Ａ５４９、Ｈ１９４４、Ｈ３５８、Ｈ１３９５、及びＨ５９６細胞溶解物についてウェスタンブロット解析を行った（図１７）。５つのうち４つの細胞株が、高レベルのＥＲＧタンパク質を発現した。ＥＲＧをほとんど発現しなかったＨ３５８細胞株は、我々の研究において、陰性対照として使用されるであろう。
他の腫瘍型における初期の研究では、ＥＲＧはＥＭＴを誘発するかもしれないことが示唆された。ＮＳＣＬＣ細胞において同じ効果があるか否かを試験するために、相対的に非常に低レベルの内在性ＥＲＧタンパク質を有するＥＲＧ発現ベクターが、Ｈ３５８細胞へトランスフェクトされた（図１８Ａ）。Ｈ３５８細胞が高レベルのＥＲＧタンパク質を発現したとき、２つのＥＭＴマーカー（ＺＥＢ１及びＦｏｘｃ２）の発現の著しい増加が観察された（図１８Ｂ）。これは、ＥＲＧはＮＳＣＬＣ細胞中のＥＭＴの誘発が可能であることを示唆している。
図１８Ａ及び１８Ｂは、ＥＭＴマーカーを誘発するＥＲＧ発現を示す。Ｈ３５８ ＮＳＣＬＣ細胞を、ヒトＥＲＧタンパク質をコードするｃＤＮＡでトランスフェクトした。増加したＥＲＧ発現をウェスタンブロット法によって検出した（図１８Ａ）。即時ＰＣＲ解析により、ＥＲＧ発現細胞においてＺＥＢ１及びＦＯＸＣ２の発現がより高いことが明らかになった（図１８Ｂ）。データは、まず１８Ｓ ＲＮＡについて正規化され、その後、空ベクタートランスフェクト細胞に対する誘導倍率として表された。
ＹＫ−４−２７９によるＥＭＴマーカー依存性ＥＲＧの発現の阻害
Ａ５４９細胞は、相対的に高レベルのＥＲＧタンパク質を発現する（図１７）。これらの細胞におけるＥＭＴマーカー遺伝子発現を、即時定量ＰＣＲ解析によって評価した。Ａ５４９細胞のＴＧＦ−β（既知のＥＭＴ誘導物質）処置により、ＺＥＢ１及びＦＯＸＣ２発現が増大する結果となった。トランスフェクトされていないＡ５４９細胞がＥＲＧ阻害剤ＹＫ−４−２７９で処置されたとき、ＺＥＢ及びＦＯＸＣ２双方の発現が阻害されるという、完全に反対の結果が観察された。
本明細書の予備データにより、ＹＫ−４−２７９は、ＥＲＧタンパク質に直接結合し、転写因子としてのその機能を阻害することが確認されている。さらに、ＥＲＧは、ＮＳＣＬＣ細胞中のＥＭＴマーカーを誘発することができ、これは、ＹＫ−４−２７９によって克服され得ることが実証された。
このセクションにおいて要約された実験により、ＥＲＧが、（ＥＭＴ）を誘発することによるＮＳＣＬＣの発病の一因となり、肺癌治療のための標的としての機能を果たすという仮定が試験されている。ＥＲＧはＹＫ−４−２７９によってうまく阻害されるかもしれないことが、新規治療のアプローチとして立証されている。
肺癌細胞中のＥＭＴ媒介におけるＥＲＧの役割
肺癌細胞株上のＥＲＧ発現のレベルを調節する効果、特にＥＭＴについて、評価する。非小細胞肺癌由来のＨ３５８細胞株は、相対的に低レベルの内在性ＥＲＧタンパク質を発現する（図１７）。これらの細胞においてＥＲＧレベルを上昇させるために、ＥＲＧ発現ベクターが導かれる。他の肺癌細胞株（Ａ５４９、Ｈ１９４４、Ｈ１３９５、及びＨ５９６）は非常に高レベルの内在性ＥＲＧを発現する。これらの細胞におけるその発現レベルを低減させるために、ＥＲＧへの標的とされるＲＮＡ干渉技術（ｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ）が用いられる。各々の場合、ｍＲＮＡの発現レベル及びＥＭＴに対する特異性マーカーとしての機能を果たすそれらの同種タンパク質（Ｅ−カドヘリン、ビメンチン、スネイル（Ｓｎａｉｌ）、スラッグ（Ｓｌｕｇ）、及びＺＥＢ１）を確認することによって、ＥＭＴへの効果が評価される。ＥＲＧを過剰発現するＨ３５８細胞において上昇したＥＭＴ発現プロファイル、又はＲＮＡ干渉によってＥＲＧ発現が阻害されている細胞（Ａ５４９、Ｈ１９４４、Ｈ１３９５、及びＨ５９６）において減少したＥＭＴ発現プロファイルが観察され、これらの研究は、ＺＥＢ１及びＺＥＢ２ ｓｉＲＮＡの効果を確定することによって拡張される。ＺＥＢ１及びＺＥＢ２発現が阻害されるときにＥＭＴに対するＥＲＧの効果が軽減されるのであれば、ＥＲＧが、ＺＥＢ１及びＺＥＢ２を介してＥＭＴ機能を媒介するという仮説が立証される。
５つのＮＳＣＬＣ細胞株上で、一般的な化学療法薬剤（シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、エトポシド、及びビンブラスチン）についてのＩＣ５０値が確定される。電気インピーダンス及びＷＳＴアッセイによって、細胞生存率が確定される。一度基準ＩＣ５０値が成立すると、ＥＲＧ発現の変化を伴う実験が繰り返される。ＥＲＧ発現は、Ａ５４９、Ｈ１９４４、Ｈ１３９５、及びＨ５９６細胞において、ｓｈＲＮＡで阻害される。安定したｓｈＲＮＡ発現及び減少したＥＲＧタンパク質発現が達成され得ないならば、ＥＲＧを標的とするｓｉＲＮＡの一時的なトランスフェクションでもってこれらの実験は行われる。ＮＳＣＬＣ細胞株においてＥＲＧ発現を減少させることにより、細胞がこれらの化学療法薬剤に対してさらに敏感になるようにＩＣ５０カーブが大きく左にシフトすることが期待される。これらの実験を補足して、哺乳動物発現ベクターからの高レベルのＥＲＧタンパク質を発現する、安定したＨ３５８細胞株が立証される。この細胞株において、細胞が化学療法に対してさらに耐性を得るようにＩＣ５０カーブが大きく右にシフトすることが分かる。
非経口で投与し得るＹＫ−４−２７９の新しい処方が得られ、肺癌細胞の分芽増殖及び悪性特性に対するＹＫ−４−２７９の効果が確定している。
主な添加剤はβ−ヒドロキシプロピルシクロデキストリン（β−ＨＰＣＤ）であり、β−ＨＰＣＤは、臨床的に実用可能な賦形剤である。上位７つの処方について、ＨＰβＣＤに対する動態を比較する。０、５、１０、１５、３０、６０、１２０、１８０、２４０、及び４８０分でのタイムポイントに続いて、ＣＤ−１は腹腔内投与（ＩＰ）される。２４時間ポイントではまた、遅延クリアランスをチェックする。０、５、１０、１５、３０、６０、１２０、１８０、及び２４０でのタイムポイントに続いて静脈内投与（ＩＶ）されたＣＤ−１マウスシリーズを、吸収レベルの測定に用いる。プラズマを解析し、薬物動態パラメータを算出する。これらの研究の終点は、吸収と半減期との比較により、ＨＰβＣＤに対して優れた製剤があるか否かを確定することである。ある処方が、ＩＰ吸収を達成することができ、３μＭよりも高いプラズマレベルを２４時間持続させることができるのであれば、これは著しい改善であると考えられる。このことにより、連続的な点滴治療と比較して、毎日の投与が評価される。連続したＩＶよりも毎日の投与を採用した方が、将来的な動物及び臨床研究に好適である。
細胞をＹＫ−４−２７９で処置することによって、ＥＲＧ機能は阻害される。前述のとおり、ＹＫ−４−２７９処置により、ＥＲＧ（ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ）の不足と同じＥＭＴマーカー発現プロファイル結果が得られることが、ＥＭＴマーカーの変化によって確認され、認定される。以下の実験の終点は、ＥＭＴが変化したときに機能転帰に対する効果を評価することである。このような目的で、悪性形質（細胞運動性、走化性、内皮細胞単層の浸潤、プラスチック上での増殖、軟寒天での増殖、及びキセノグラフトとしてのインビボ増殖）の代替マーカーが評価される。並行した実験において、細胞は、ＹＫ−４−２７９、並びに、ＮＳＣＬＣに対する濃度を変化させた種々の化学治療薬剤（シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、エトポシド、及びビンブラスチン）で処置される。ＹＫ−４−２７９にこれらの薬剤を組み合わせることにより、相乗的な阻害効果が観察される。ＥＲＧ発現を阻害すると、ＺＥＢ１／２を介してＥＭＴが軽減するという仮説を裏付けるために、ＺＥＢ１／２の強制的な過剰発現により、細胞表現型に対するＹＫ−４−２７９の効果が覆されるか否かを確定する。
ＮＳＣＬＣ細胞運動性及び浸潤に対するＹＫ−４−２７９の効果を試験する。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ装置を用い、ＹＫ−４−２７９がＮＳＣＬＣ細胞浸潤を阻害する能力を試験する。この新しい手法により、古典的なボイデンチャンバーフォーマット（Ｂｏｙｄｅｎ ｃｈａｍｂｅｒ ｆｏｒｍａｔ）において、多孔質膜（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ ｓｉｍ−プレート）の真下の表面上の金電極層で、細胞運動性の即時測定を行うことができる。細胞は、膜を介して、上部チャンバーから下部チャンバーの走化性因子へと向かって移動するとき、膜の下面上の電気インピーダンスを増大させ、これは即時に記録される。同じ機器はまた、内皮単層を介した浸潤の測定に用いられる（Ｒａｈｉｍ Ｓ，Ｕｒｅｎ Ａ．Ａ ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｉｍｐｅｄａｎｃｅ ｂａｓｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ｂｙ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ：ＪｏＶＥ．２０１１）。この実験フォーマットにおいて、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、表面に金電極を有する通常の細胞培養プレート（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ Ｅ−プレート）上で培養される。内皮細胞が安定した単層を形成した時点で、ＮＳＣＬＣ細胞を最上面に加える。癌細胞は、内皮細胞間の締まった接続を破壊し、内皮単層を介して浸透するので、電気インピーダンスを変化させる。これらの実験により、ＹＫ−４−２７９が、ＮＳＣＬＣ細胞の運動性、走化性、及び浸潤表現型を変化させるか否かが評価される。
ＹＫ−４−２７９及び化学療法薬剤（シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、エトポシド、及びビンブラスチン）を滴定することによって、細胞培養における相乗効果の研究を行う。細胞死を終点とし、何らかの潜在的相乗効果を、組み合わせ指数（ＣＩ）アイソボログラム等式法（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ（ＣＩ）ｉｓｏｂｏｌｏｇｒａｍ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）にて算出する（Ｃｈｏｕ ＴＣ．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ ｄｒｕｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ．２００６；５８：６２１−８１）。
３つの異なるヒトＮＳＣＬＣキセノグラフト（２つは高ＥＲＧ発現で、１つは低ＥＲＧ発現）の増殖に対するＥＲＧ阻害の効果を試験する。マトリゲル中で調製された細胞懸濁液を、４〜６週齢オスＳＣＩＤマウスに皮下移植する。服用割合を調整し、２つの動物グループ（１０動物／キセノグラフト株）には、各キセノグラフト株についての処方研究に基づいて、阻害剤ＹＫ−４−２７９及びプラシーボのみのキャリアーが投与される。腫瘍が２００ｍｍ３のサイズに到達したら、薬剤処置を開始する。腫瘍増殖及び体重を週に２回測定する。全ての実験グループは、総腫瘍容積における３５％差を検出するために、ｐ＜０．０５で８３％のパワーを有する。動物は、８週で、又は支障を来す状態になる（原発性腫瘍が２０００ｍｍ３に到達する、原発性腫瘍が潰傷となる、又はマウスが痛み及び苦痛を示す）ならばそれよりも早くに、回収する。腫瘍組織の半分は、免疫組織化学解析のためにパラフィンに埋め込まれ、残りの半分は、分子解析のために急速冷凍される。ＮＳＣＬＣキセノグラフト中のＥＲＧ活性の防御により、原発性腫瘍サイズが低減すると仮定される。
本開示は、図面及び前述の記載で詳しく例証及び説明されるが、このような例証及び説明は、実例又は例示にすぎず、限定的に解釈されるべきではない。本開示は、開示された実施形態に限定されるものではない。特許請求された開示を実施する際に、開示された実施形態の変形は、図面、本開示、及び添付された特許請求の範囲への研究から、当業者によって理解及び達成され得る。
本明細書で引用した全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。参考として組み込まれる刊行物および特許又は特許出願は、本明細書に含まれる開示と矛盾する場合、本明細書は任意のこのような矛盾する素材に優先することを意図している。
別段の定めがない限り、すべての用語（技術用語及び科学用語を含む）は、当業者に通常かつ慣用の意味を与えるものであり、本明細書で明白に定義しない限り、特別な又はカスタマイズされた意味に限定されるものではない。本開示の特定の特徴又は様態を説明する場合に特定の専門用語の使用は、専門用語が関連する本開示の特徴又は様態の任意の特定の特性を含むように制限されるために、本明細書中でその専門用語が再定義される意味に解釈されるべきではないことを注意すべきである。本願に使用される用語及び表現、並びにそれらの変形は、特に添付の特許請求の範囲において、特に明記しない限り、制限に対立する開放式として解釈されるべきである。前述の実施例に示すように、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は「含むが、これらに限らない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ,ｗｉｔｈｏｕｔ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）」、「含むが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」などの意味に解釈されるべきである。本明細書で使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又は「特徴づけられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義で、包含的又は開放式であり、追加、記載されていない要素又は方法ステップを除外しない。用語「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、「少なくとも有する」と解釈されるべきである。用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」は、「含むが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｅｓ ｂｕｔ ｉｓ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」と解釈されるべきである。用語「（実施）例（ｅｘａｍｐｌｅ）」は、討論されるアイテムの典型的な事例を提供するために使用され、それらの完全又は限定的なリストではない。「既知の（ｋｎｏｗｎ）」、「慣用の（ｎｏｒｍａｌ）」、「標準の（ｓｔａｎｄａｒｄ）」などの形容詞、及び類似した意味の用語は、所定の期間に記載されるアイテム、又は所定の時点で利用可能なアイテムに限定されるものとして解釈されるべきではないが、その代わりに、現在又は将来の任意の時点で入手可能又は知られる、既知、慣用又は標準の技術を包含すると解釈されるべきである。「好ましい（ｐｒｅｆｅｒａｂｌｙ）」、「好ましい（ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ）」、「所望（ｄｅｓｉｒｅｄ）」、又は「所望（ｄｅｓｉｒａｂｌｅ）」などの用語、及び類似した意味の言葉の使用は、特定の特徴が本発明の構造や機能に対して重大、本質的、又は重要であることを意味すると理解すべきではないが、その代わりに、単に、本発明の特定の実施形態に利用可能又は利用できない代替的又は追加の特徴を強調することを意図している。同様に、接続詞「及び（ａｎｄ）」に関連しているアイテムグループは、それらのアイテムの一つ一つがグルーピングに存在する必要があると理解されるべきではないが、別段の記載がない限り、むしろ、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」として理解されるべきである。同様に、接続詞「又は（ｏｒ）」に関連しているアイテムグループは、それらのグループの間で相互排他性を必要とすることが理解されるべきではないが、別段の記載がない限り、むしろ、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」と理解されるべきである。
数値範囲を提供する場合、上限及び下限、並びにその範囲における上限と下限との間の各介在値は、実施形態の範囲内に包含されると理解されるべきである。
本明細書で実質的に任意の複数形及び／又は単数形の用語の使用に関して、当業者は、複数形から単数形への変換、及び／又は、単数形から複数形への変換を文脈及び／又は適用に合わせるように行うことができる。種々の単数形/複数形の置き換えは、明確にするために、本明細書に明示的に説明されてもよい。不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は複数を除外しない。単一の処理装置又は他のユニットは、特許請求の範囲に記載されるいくつかのアイテムの機能を満たすことができる。特定の手段が互に異なる従属請求項に記載されるという単なる事実は、これらの手段の組み合わせを有利に使用できないことを示すものではない。特許請求の範囲における任意の引用符号は、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
導入される請求項の記載における特定の数字が意図される場合に、そのような意図が請求項に明確に記載される一方、そのような記載が存在しない場合に、そのような意図は存在しないことは、当業者にとって理解されるであろう。例えば、理解の助けとして、以下に添付される特許請求の範囲は、請求項の記載を導入する導入句「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」及び「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」の使用を含むことができる。しかしながら、このような語句の使用は、同一の請求項が導入句「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」又は「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」、及び「ａ」又は「ａｎ」などの不定冠詞（例えば、「ａ」及び／又は「ａｎ」は、一般的に、「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」又は「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」を意味すると解釈されるべきである）を含む場合であっても、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による請求項の記載の導入が、そのような導入された請求項の記載を含む任意の特定の請求項を、このような記載の１つのみを含む実施形態に限定すると解釈されるべきではない。請求項の記載を導入するために使用される定冠詞の使用についても同じである。さらに、導入された請求項の記載における特定の数字を明示的に記載する場合であっても、そのような記載が典型的に少なくとも記載の数を意味するように解釈されるべきであることは、当業者にとって理解されるであろう（例えば、他の修飾のない「２つの記載」という最低限の記載は、典型的に、少なくとも２つの記載、又は２つ以上の記載を意味する）。さらに、「Ａ、Ｂ、及びＣなどの少なくとも１つ」に類似している慣例を使用するこれらの例において、一般的に、このような構成は、その慣例について当業者が理解する意味で意図されている（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つを有するシステム」は、単独のＡ、単独のＢ、単独のＣ、ＡとＢを一緒に、ＡとＣを一緒に、ＢとＣを一緒に、及び／又は、ＡとＢとＣとを一緒になどを有するシステムを含むが、これらに限定されない。）。「Ａ、Ｂ、及びＣなどの少なくとも１つ」に類似している慣例を使用するこれらの例において、一般的に、このような構成は、その慣例について当業者が理解する意味で意図されている（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つを有するシステム」は、単独のＡ、単独のＢ、単独のＣ、ＡとＢを一緒に、ＡとＣを一緒に、ＢとＣを一緒に、及び／又は、ＡとＢとＣとを一緒になどを有するシステムを含むが、これらに限定されない。）。２つ以上の選択可能な用語が存在する実質的に任意の離接語及び／又は語句は、明細書、特許請求の範囲、又は図面にあるなしを問わず、その選択可能な用語の１つ、いずれか一方、又は両方ともを含む可能性を意図すると理解されるべきであることは当業者にとってさらに理解されるであろう。例えば、語句「Ａ又はＢ」は、「Ａ」又は「Ｂ」又は「Ａ及びＢ」の可能性を含むと理解されるであろう。
明細書中で使用される成分、反応条件などの数量を表すすべての数字は、すべての例において用語「約（ａｂｏｕｔ）」により修飾されるものとして理解されるべきである。それで、反対に示されない限り、本明細書で説明される数値パラメータは、得ようとする所望の特性に応じて変更できる近似値である。本出願の優先権を主張する任意の出願における任意の特許請求の範囲に対しては、少なくとも均等論が適用されるが、これに限定されず、各数値パラメータは、有効数字及び通常の丸めアプローチの数字に照らして解釈されるべきである。
さらに、前述において、明瞭さ及び理解のために例示及び実施例を手段として多少詳しく述べられるが、特定の変更及び修飾が実施できることは、当業者にとって明らかである。したがって、説明及び実施例は、本発明の範囲を本明細書に記載される特定の実施形態及び実施例に限定するものとして解釈されるべきではないが、むしろ、本発明の真の範囲及び趣旨に伴うすべての修飾及び代替物を包含する。

Claims (46)

  1. 式（Ｉ）：
    ［式中、
    Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
    からなる群より選ばれ、
    Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１４、Ｒ１７、及びＲ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
    Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
    Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
    各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
    ｎは、０〜４の整数であり、
    ｐは、１又は３であり、
    破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に有効量投与すること
    からなる、癌の治療方法。
  2. 前記式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
  4. 前記Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
    からなる群より選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  6. 前記Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記Ｒ３は、−ＳＣＨ３である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記式（Ｉ）の化合物は、式：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
  9. 前記対象は、哺乳動物である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 前記対象は、ヒトである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 前記癌は、肺腺癌及び多形性膠芽腫からなる群より選ばれる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記癌は、ＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座からなる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記化合物を非経口投与する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
  14. 式（Ｉ）：
    ［式中、
    Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
    からなる群より選ばれ、
    Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１４、Ｒ１７、及びＲ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
    Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
    Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
    各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
    ｎは、０〜４の整数であり、
    ｐは、１又は３であり、
    破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、腫瘍細胞に有効量接触させること
    からなる、前記腫瘍細胞を殺傷する、又は前記腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
  15. 前記式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１４に記載の方法。
  17. 前記Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
    からなる群より選ばれる、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
  20. 前記Ｒ３は、−ＳＣＨ３である、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記式（Ｉ）の化合物は、式：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１４に記載の方法。
  22. 前記細胞は、哺乳動物のものである、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記細胞は、ヒトのものである、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記細胞は、肺腺癌及び多形性膠芽腫からなる群より選ばれるものである、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記細胞は、ＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ，ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座からなるものである、請求項１４〜２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記細胞は、インビボのものである、請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記細胞は、エクスビボのものである、請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の方法。
  28. 式（Ｉ）：
    ［式中、
    Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
    からなる群より選ばれ、
    Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１４、Ｒ１７、及びＲ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
    Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
    Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
    各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
    ｎは、０〜４の整数であり、
    ｐは、１又は３であり、
    破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
  29. 前記Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
    からなる群より選ばれる、請求項２８に記載の化合物。
  30. 前記Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる、請求項２８に記載の化合物。
  31. 前記Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項２８に記載の化合物。
  32. 前記Ｒ３は、−ＳＣＨ３である、請求項２８に記載の化合物。
  33. 請求項２８〜３２のいずれか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される添加剤からなる、医薬組成物。
  34. 癌を治療するための化合物の使用であり、
    前記化合物は、式（Ｉ）：
    ［式中、
    Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、１つのアミノ酸、互いに結合している２つのアミノ酸、互いに結合している３つのアミノ酸、
    からなる群より選ばれ、
    Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１４、Ｒ１７、及びＲ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群よりそれぞれ独立して選ばれ、
    Ｒ６は、Ｃ１−６ジアルキルアミンであり、
    Ｒ７は、水素及びＣ１−６アルキルからなる群より選ばれ、
    Ｒ８及びＲ１５は、それぞれ独立してＣ１−６アルキルであり、
    各Ｒ１６は、独立して水素、−ＯＨ、又はＣ１−６アルコキシであり、
    ｎは、０〜４の整数であり、
    ｐは、１又は３であり、
    破線は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、及びＲ１４の少なくとも１つが−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５からなる群より選ばれるという条件で、シス及びトランスからなる群より選ばれる配置を有する任意の二重結合を表す］の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、化合物の使用。
  35. 前記式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項３４に記載の使用。
  36. 前記式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉｂ）：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項３４に記載の使用。
  37. 前記Ｒ１は、Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）Ｃ（ＣＨ３）２、
    からなる群より選ばれる、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の使用。
  38. 前記Ｒ３は、−ＮＨ（Ｒ１５）、−Ｎ（Ｒ１５）２、及び−ＳＲ１５から選ばれる、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の使用。
  39. 前記Ｒ３は、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の使用。
  40. 前記Ｒ３は、−ＳＣＨ３である、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の使用。
  41. 前記式（Ｉ）の化合物は、式：
    の構造であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項３４に記載の使用。
  42. 前記対象は、哺乳動物である、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の使用。
  43. 前記対象は、ヒトである、請求項３４〜４２のいずれか１項に記載の使用。
  44. 前記癌は、肺腺癌及び多形性膠芽腫からなる群より選ばれる、請求項３４〜４３のいずれか１項に記載の使用。
  45. 前記癌は、ＦＬＩ１、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＲＧ，ＥＴＳ１、及びＥＴＳ２からなる群より選ばれるＥＴＳ遺伝子を含む転座からなる、請求項３４〜４４のいずれか１項に記載の使用。
  46. 前記化合物が非経口投与される、請求項３４〜４５のいずれか１項に記載の使用。
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