JP2016530216A5 - - Google Patents
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Claims (57)
- 単離された抗体を標識又は誘導体化試薬にコンジュゲートする方法であって、グリシン以外の、α位又はβ位にアミン置換基を有するモノカルボン酸バッファー化合物を含む緩衝系中で、前記抗体を、活性化標識若しくは活性化誘導体化試薬と接触させるか、又は前記抗体を、抗体コンジュゲーション試薬が存在する状態で前記標識若しくは誘導体化試薬と接触させる工程を含むことを特徴とする方法。
- 前記抗体コンジュゲーション試薬又は活性化標識が、カルボジイミド、N−ヒドロキシスクシンイミドエステル、マレイミド、イソチオシアネート又はチオール化試薬を含む請求項1に記載の方法。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、1つ以上の非アミン置換基を更に含むか、又は更なる置換基を含まない、及び/又は、
前記モノカルボン酸のアミン置換基が、第二級若しくは第三級アミン、又は第四級アンモニウムである請求項1から2のいずれかに記載の方法。 - 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、ベタインである請求項3に記載の方法。
- 前記ベタインが、N,N,N−トリメチルグリシンである請求項4に記載の方法。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、第一級アミノ酸である請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- 前記第一級アミノ酸が、アラニン、β−アラニン又は2−アミノ酪酸である請求項6に記載の方法。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、プロリン、トリシン、N−メチルグリシン、N,N−ジメチルグリシン又は2−ピコリン酸である請求項7に記載の方法。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物のカルボキシル基が、1〜4の範囲のpKa、又は1.5〜3.5の範囲のpKaを有する、及び/又は、
前記モノカルボン酸バッファー化合物のアミンが、8を超えるpKa、又は9を超えるpKaを有する請求項1から8のいずれかに記載の方法。 - 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、200mM未満の濃度、又は100mM未満の濃度、又は50mM未満の濃度で存在する請求項1から9のいずれかに記載の方法。
- 前記緩衝系が、5.5を超えるpKaを有する中和バッファー化合物を更に含む請求項1から10のいずれかに記載の方法。
- 前記中和バッファー化合物が、モルホリノ、ピペラジン又はN−シクロヘキシル化合物を含む請求項11に記載の方法。
- 前記中和バッファー化合物が、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、(4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸)(HEPES)、3−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]プロパンスルホン酸(EPPS又はHEPPS)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(4−ブタンスルホン酸)(HEPBS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−シクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、4−(シクロヘキシルアミノ)−1−ブタンスルホン酸(CABS)又は3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシル−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)である請求項12に記載の方法。
- 前記緩衝系が、6〜8の範囲のpKaを有するキャッチバッファー化合物を更に含み、前記中和バッファー化合物が、8を超えるpKa、又は8〜11の範囲のpKaを有する請求項11から13のいずれかに記載の方法。
- 前記キャッチバッファーが、MOPS又はHEPESである、及び/又は、
前記キャッチバッファー化合物の濃度が、前記中和バッファー化合物の濃度未満である請求項14に記載の方法。 - 前記標識が、酵素、蛍光性タンパク質、有機色素、着色粒子、ビオチン、ストレプトアビジン又はポリマーを含む請求項1から15のいずれかに記載の方法。
- 5〜9の範囲のpHで実施される請求項1から16のいずれかに記載の方法。
- 固相から抗体を溶出するための、バッファーの使用であって、前記バッファーが、グリシン以外の、α位又はβ位にアミン置換基を有するモノカルボン酸バッファー化合物を含むことを特徴とする使用。
- 前記固相が、カラム内に配置されている、及び/又は、
前記固相が、前記抗体のためのアフィニティーマトリックスを含む請求項18に記載の使用。 - 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、1つ以上の非アミン置換基を更に含むか、又は更なる置換基を含まない、及び/又は、
前記モノカルボン酸のアミン置換基が、第二級若しくは第三級アミン、又は第四級アンモニウムである請求項18から19のいずれかに記載の使用。 - 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、ベタインである請求項20に記載の使用。
- 前記ベタインが、N,N,N−トリメチルグリシンである請求項21に記載の使用。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、第一級アミノ酸である請求項18から20のいずれかに記載の使用。
- 前記第一級アミノ酸が、アラニン、β−アラニン又は2−アミノ酪酸である請求項23に記載の使用。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、プロリン、トリシン、N−メチルグリシン、N,N−ジメチルグリシン又は2−ピコリン酸である請求項20に記載の使用。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物のカルボキシル基が、1〜4の範囲のpKa、又は1.5〜3.5の範囲のpKaを有する、及び/又は、
前記モノカルボン酸バッファー化合物のアミンが、8を超えるpKa、又は9を超えるpKaを有する請求項20から25のいずれかに記載の使用。 - 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、200mM未満の濃度、又は100mM未満の濃度、又は50mM未満の濃度で存在する請求項20から26のいずれかに記載の使用。
- 前記バッファーのpHが、1.8〜4.8の範囲にある請求項20から27のいずれかに記載の使用。
- 前記抗体を、前記標識、誘導体化試薬、活性化標識又は活性化誘導体化試薬と接触させる工程の前に、前記抗体が、請求項18から28のいずれかに記載の固相から前記抗体を溶出する工程によって単離され、前記緩衝系が、前記抗体を溶出する前記工程で使用された前記バッファーを含む請求項1から17のいずれかに記載の方法。
- 抗体を結合するための固相アフィニティーマトリックスと、前記抗体が前記アフィニティーマトリックスに結合した場合に前記抗体を溶出するためのバッファーとを含む抗体単離キットであって、前記バッファーが、グリシン以外の、α位又はβ位にアミン置換基を有するモノカルボン酸バッファー化合物を含むことを特徴とする抗体単離キット。
- 前記バッファーが請求項20から28のいずれかに記載されている通りである、及び/又は、
前記抗体単離キットが、5.5を超えるpKaを有する中和バッファーを更に含む請求項30に記載の抗体単離キット。 - 5.5を超えるpKaを有する中和バッファーを含み、
前記中和バッファーが、モルホリノ、ピペラジン又はN−シクロヘキシル化合物を含む請求項31に記載の抗体単離キット。 - 前記中和バッファーが、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、(4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸)(HEPES)、3−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]プロパンスルホン酸(EPPS又はHEPPS)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(4−ブタンスルホン酸)(HEPBS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−シクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、4−(シクロヘキシルアミノ)−1−ブタンスルホン酸(CABS)又は3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシル−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)を含む請求項32に記載の抗体単離キット。
- 6〜8の範囲のpKaを有するキャッチバッファーを更に含み、前記中和バッファーが8を超えるpKa、又は8〜11の範囲のpKaを有する請求項31から33のいずれかに記載の抗体単離キット。
- 前記キャッチバッファーが、MOPS又はHEPESである請求項34に記載の抗体単離キット。
- 前記キャッチバッファーの濃度が、前記中和バッファーの濃度未満である請求項34から35のいずれかに記載の抗体単離キット。
- 前記キャッチバッファーのpHが、6〜8の範囲にある、及び/又は、
前記中和バッファーのpHが、6を超える、又は8を超える、又は8.5〜11の範囲にある、又は9〜9.5の範囲にある請求項34から36のいずれかに記載の抗体単離キット。 - 緩衝系中に単離された抗体を含む、コンジュゲーション反応に使用するための抗体組成物であって、前記緩衝系が、グリシン以外の、α位又はβ位にアミン置換基を有するモノカルボン酸バッファー化合物を含むことを特徴とする抗体組成物。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、1つ以上の非アミン置換基を更に含むか、又は更なる置換基を含まない、及び/又は、
前記モノカルボン酸のアミン置換基が、第二級若しくは第三級アミン、又は第四級アンモニウムである請求項38に記載の抗体組成物。 - 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、ベタインである請求項39に記載の抗体組成物。
- 前記ベタインが、N,N,N−トリメチルグリシンである請求項40に記載の抗体組成物。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、第一級アミノ酸である請求項38から39のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記第一級アミノ酸が、アラニン、β−アラニン又は2−アミノ酪酸である請求項42に記載の抗体組成物。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、プロリン、トリシン、N−メチルグリシン、N,N−ジメチルグリシン又は2−ピコリン酸である請求項39に記載の抗体組成物。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物のカルボキシル基が、1〜4の範囲のpKa、又は1.5〜3.5の範囲のpKaを有する請求項38から44のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物のアミンが、8を超えるpKa、又は9を超えるpKaを有する請求項38から45のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記モノカルボン酸バッファー化合物が、200mM未満の濃度、又は100mM未満の濃度、又は50mM未満の濃度で存在する請求項38から46のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記緩衝系が、5.5を超えるpKaを有する中和バッファー化合物を更に含む請求項38から47のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記中和バッファー化合物が、モルホリノ、ピペラジン又はN−シクロヘキシル化合物を含む請求項48に記載の抗体組成物。
- 前記中和バッファー化合物が、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、(4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸)(HEPES)、3−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]プロパンスルホン酸(EPPS又はHEPPS)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸)(PIPES)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(4−ブタンスルホン酸)(HEPBS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−シクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、4−(シクロヘキシルアミノ)−1−ブタンスルホン酸(CABS)又は3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシル−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)である請求項49に記載の抗体組成物。
- 前記緩衝系が、6〜8の範囲のpKaを有するキャッチバッファー化合物を更に含み、前記中和バッファー化合物が、8を超えるpKa、又は8〜11の範囲のpKaを有する請求項48から50のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記キャッチバッファーが、MOPS又はHEPESである請求項51に記載の抗体組成物。
- 前記キャッチバッファー化合物の濃度が、前記中和バッファー化合物の濃度未満である請求項51から52のいずれかに記載の抗体組成物。
- 5〜9の範囲のpHを有する請求項38から53のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記単離された抗体が、標識にコンジュゲートされている請求項38から54のいずれかに記載の抗体組成物。
- 前記標識が、酵素、蛍光性タンパク質、有機色素、着色粒子、ビオチン、ストレプトアビジン又はポリマーを含む請求項55に記載の抗体組成物。
- 抗体又は抗体コンジュゲートのための保存媒体としての請求項48から51のいずれかに記載の緩衝系の使用。
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