JP2016529236A - Ｆｔｙ７２０のアザサイクリック拘束アナログ - Google Patents

Abstract

ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログから構成される低分子が提供される。例えば、白血病のような疾患および他の疾患の処置に関する製剤および医薬がまた、提供される。薬学的に有効な塩としてもしくは純粋な形態のいずれかで存在する１種またはそれより多くの低分子化合物の治療上有効な量を含む治療剤もまた、提供される（経口投与、静脈内投与、もしくは筋肉内投与のための製剤が挙げられるが、これらに限定されない）。

Description

連邦政府の出資する研究または開発に関する記述
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって与えられた助成金番号Ｔ３２ＣＡ００９０５４、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｆｅｎｓｅによって与えられた助成金番号Ｗ８１ＸＷＨ−１１−１−０５３５、およびＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって与えられた助成金番号Ｒ０１ ＧＭ０８９９１９の下で政府の支援と共になされた。政府は、本発明においてある特定の権利を有する。
（発明の分野）

本発明は、一般に、ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログ、これらアナログから形成される医薬、およびこのような治療剤を使用する障害の処置のための方法に関する。

（背景）
スフィンゴシン−１ホスフェートレセプター（Ｓ１Ｐ）は、多くの細胞タイプの表面に見出される。Ｓ１Ｐレセプターは、スフィンゴシン−１ホスフェートの結合によって活性化される。Ｓ１Ｐレセプターには５つのタイプがあり、これらのうちの各々は、別個のシグナル伝達経路の引き金となる。Ｓ１Ｐレセプターに結合するＳ１Ｐは、種々の細胞機能を活性化し得、上記機能としては、細胞増殖および分化、細胞生存、細胞侵襲、リンパ球トラフィッキング、ならびに細胞遊走が挙げられる。

ＦＴＹ７２０は、Ｓ１Ｐレセプターに拮抗することによって機能する免疫抑制性プロドラッグである。その活性なリン酸化状態では、ＦＴＹ７２０は、上記５種のＳ１Ｐレセプターのうちの４種に結合する。Ｓ１Ｐ１に結合するＦＴＹ７２０は、レセプター活性化およびその後の二次リンパ器官におけるリンパ球捕捉のダウンレギュレーションを引き起こす。現在では、ＦＴＹ７２０は、再発緩解型多発性硬化症（ＭＳ）を処置するために販売されている。以前の刊行物は、Ｓ１Ｐレセプターに選択的に結合するにあたって使用するためのＦＴＹ７２０アナログの広いクラスを記載している。

（発明の要旨）
多くの実施形態において、本発明は、ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログの性質である低分子、これら低分子から形成される医薬に関し、このような治療剤を使用する障害の処置のための方法が開示される。

いくつかの実施形態において、本発明の局面は、以下の分子式：

を有する化合物に関し、ここで：
Ｒ_１は、アルキル鎖、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、ＣＨＯＨ−アルキル、ＣＨＯＨ−アルキン、および（ＣＨ_２）_ｎＯＭｅから選択される任意選択の官能基であり；
Ｒ_２は、脂肪族鎖（Ｃ_６−Ｃ_１０）であり；
Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アジド（Ｎ_３）、エーテル、ＮＯ_２、もしくはシアニド（ＣＮ）を含む、モノ−、ジ−、トリ−もしくはクアッド−芳香族置換基であり；
Ｒ_４は、Ｒ_１と共に任意選択のアルコール（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
Ｌは、Ｏ−ＣＨ_２であり；
Ｍｅは、アルキル、アルケンもしくはアルキンであり；
ｎは、１〜３から独立して選択される整数であり；そして
ここでフェニルは、上記Ｒ_２もしくはＲ_３の炭素鎖に沿って移動し得る。

いくつかのこのような実施形態において、上記化合物は、ＰＰ２Ａ活性を刺激する。

他のこのような実施形態において、上記化合物の立体化学は、２位でＳかつ４位でＲ、２位でＲかつ４位でＳ、２位でＲかつ４位でＲおよび２位でＳかつ４位でＳからなる群より選択される。

なお他のこのような実施形態において、ピロリジンに結合される官能基は、シスの相対的配向にある。

なお他のこのような実施形態において、ピロリジンに結合される官能基は、トランスの相対的配向にある。

さらになお他のこのような実施形態において、Ｒ_１は、１〜６個の炭素を有するアルキル鎖である。

さらになお他のこのような実施形態において、上記化合物は、塩の形態にある。いくつかのこのような実施形態において、上記塩は、薬学的に受容可能な塩である。

さらになお他のこのような実施形態において、上記化合物は、リン酸化される。いくつかのこのような実施形態において、上記化合物は、任意のヒドロキシメチル基においてリン酸化される。

さらになお他のこのような実施形態において、上記化合物は、ＦＴＹ７２０と比較した場合、Ｓ１Ｐレセプターへの結合に対して低下した活性を示す。いくつかのこのような実施形態において、上記化合物は、ＦＴＹ７２０と比較した場合、Ｓ１Ｐ１レセプターおよびＳ１Ｐ３レセプターへの結合に対して低下した活性を示す。いくつかの実施形態において、上記化合物は、細胞栄養素輸送をダウンレギュレートすることにおいて活性を有する。

さらになお他のこのような実施形態において、Ｒ_２は、Ｃ_８Ｈ_１７であり、Ｒ_１は、ＣＨ_２ＯＨである。

さらになお他の実施形態において、Ｒ_１は、ホスフェートもしくはホスホネート（例えば、（ＣＨ_２）_ｎＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、ＣＨ＝ＣＨＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、（ＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、ならびに（ＣＨ_２）_ｎＯＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル）である。

他の実施形態において、本発明の局面は、１種またはそれより多くのアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物の治療上有効な量を含む薬学的製剤を含む、障害の処置のための医薬に関する。

いくつかのこのような実施形態において、上記医薬は、がん、白血病、糖尿病および肥満症からなる群より選択される障害の処置に指向される。

他のこのような実施形態において、上記医薬は、経口投与、非経口投与および経皮投与からなる群より選択される投与形態のために製剤化される。

さらに他のこのような実施形態において、上記化合物は、ＰＰ２Ａ活性を刺激する。

なお他のこのような実施形態において、上記化合物は、ＦＴＹ７２０と比較した場合に、Ｓ１Ｐレセプターへの結合に対して低下した活性を示す。

さらになお他のこのような実施形態において、上記化合物は、ＦＴＹ７２０と比較した場合に、Ｓ１Ｐ１レセプターおよびＳ１Ｐ３レセプターへの結合に対して低下した活性を示す。

さらに他の実施形態において、本発明の局面は、患者において疾患を処置するための方法に関し、上記方法は、
少なくとも一部は細胞栄養素ダウンレギュレーションによる処置に感受性のある障害を有する患者を診断する工程；および
細胞栄養素輸送をダウンレギュレートすることにおいて有効な１種またはそれより多くのアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物の治療的量を投与する工程、
を包含する。

説明および特許請求の範囲は、以下の図面およびデータグラフを参照することでより完全に理解されるが、この図面およびデータグラフは、本発明の例示的実施形態として呈示され、本発明の範囲の完全な記載として解釈されるべきではない。

図１は、ＦＴＹ７２０の分子構造を提供する。

図２ａ〜２ｄは、本発明の実施形態に従う治療用低分子アナログの分子構造を提供する。 図２ｂは、本発明の実施形態に従う治療用低分子アナログの分子構造を提供する。

図３ａは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｂは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｃは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｄは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｅは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｆは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｇは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｈは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｉは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｊは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｋは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。 図３ｌは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの生成のための反応経路を提供する。

図４ａは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの分子構造を提供する。

図４ｂは、本発明に従う治療用低分子アナログの実施形態が白血病細胞を死滅させる能力に対する、ヒドロキシメチルと比較したエーテルの立体化学的影響の研究をまとめるデータプロットを提供する。

図５ａは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの分子構造を提供する。

図５ｂは、本発明に従う治療用低分子アナログの実施形態の抗がん活性に対する、ピロリジン環配向の効果の研究をまとめるデータプロットを提供する。

図６ａは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの分子構造を提供する。

図６ｂは、本発明に従う化合物５の治療用低分子アナログの実施形態の効力に対する、ヒドロキシメチル基上のリン酸化部位の喪失の影響の研究をまとめるデータプロットを提供する。図６ｃは、本発明に従う化合物６の治療用低分子アナログの実施形態の効力に対する、ヒドロキシメチル基上のリン酸化部位の喪失の影響の研究をまとめるデータプロットを提供する。

図７ａは、本発明の種々の実施形態に従う治療用低分子アナログの分子構造を提供する。

図７ｂは、本発明に従う治療用低分子アナログの実施形態の抗がん活性の効力に対する、脂肪族鎖の長さの影響の研究をまとめるデータプロットを提供する。

図８は、本発明に従う治療用低分子アナログの実施形態がＳｕｐ−Ｂ１５白血病細胞において栄養素輸送体喪失の引き金となる能力の研究をまとめるデータプロットを提供する。

図９ａおよび９ｂは、本発明に従う化合物６およびそのホスフェートの分子構造を提供する。

図１０ａは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｂは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｃは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｄは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｅは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｆは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｇは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｈｉｊは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｋは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｌは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｍは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｎは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。 図１０ｏは、本発明に従う例示的な治療用低分子アナログの効力および活性に対する研究の結果を提供するデータプロットを提供する。

（詳細な説明）
ここで図面およびデータみると、細胞栄養素輸送体のダウンレギュレーションの引き金となることを含む種々の治療機構から障害（がんを含む）を処置し得る低分子、これら低分子から形成される医薬、およびこのような治療剤を使用する障害の処置のための方法が開示される。いくつかの実施形態において、上記低分子は、ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログである。上記低分子のさらなる実施形態は、ｏ−ベンジルピロリジンである。実施形態は、純粋化合物形態もしくは薬学的に有効な塩の形態で存在し得る。いくつかの実施形態は、ＰＰ２Ａ活性を刺激することによって細胞栄養素輸送を阻害する。他の実施形態において、製剤および医薬が提供され、疾患の処置に指向される。いくつかのこのような実施形態において、これら製剤および医薬は、がん（例えば、白血病）および潜在的に他の疾患を標的とする。治療の実施形態は、薬学的に有効な塩としてもしくは純粋形態のいずれかで存在する、１種またはそれより多くの低分子化合物の治療上有効な用量を含む。実施形態は、種々の製剤を可能にし、これらには、経口投与、静脈内投与、もしくは筋肉内投与のための製剤が挙げられるが、これらに限定されない。他のさらなる実施形態は、上記低分子の治療的な量を使用する障害のための処置レジメンを提供する。いくつかの処置実施形態において、上記低分子、送達系および投与レジメンは、がん（例えば、白血病）および潜在的に他の疾患（栄養素輸送のダウンレギュレーションが治療的に有効である疾患を含む）の処置に指向される。
定義

この説明の目的で、別段記載されなければ、以下の定義が使用される。

「スフィンゴシン−１ホスフェート（Ｓ１Ｐ）」は、多様な刺激に応じて細胞中で形成され、細胞シグナル伝達において重要な役割を果たす。

「Ｓ１Ｐレセプター」は、Ｓ１Ｐ、ＦＴＹ７２０、およびＦＴＹ７２０もしくはＳ１Ｐの任意のアナログが挙げられるが、これらに限定されない分子を結合する任意のレセプターである。レセプターのこのクラスは、公知のＧタンパク質共役型のＳ１Ｐレセプターのうちのいずれかを含む。

「栄養素輸送」とは、代謝関連の化合物（アミノ酸、グルコース、および鉄が挙げられるが、これらに限定されない）の運び入れおよび運び出しを調節する細胞の能力を指す。

「ＰＰ２Ａ」は、シグナル伝達経路を不活性化するにあたってある役割を果たし、Ｂｃｌ−２ファミリーメンバー（Ｂｃｌ−２およびＢａｄを含む）の作用に拮抗し、多くの他の細胞プロセスを調節するにあたってある役割を果たすセリン／スレオニンホスファターゼである。

図１に模式的に示される「ＦＴＹ７２０」（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン １，３−ジオールヒドロクロリド）は、疎水性脂肪族鎖を有する芳香族部分の上にアミノジオール官能性を有する合成免疫調節剤である。これは、再発緩解型多発性硬化症の処置のために商品名Ｇｉｌｅｎｙａ（登録商標）の下で現在販売されている。

「選択的」とは、特定のレセプター部位に対して指向される化合物リガンドを指す。その結合部位において、上記化合物は、標的分子を作動もしくは拮抗するように作用し得る。これは、特定の標的タンパク質の活性を調節するシグナル伝達経路における工程に影響を及ぼすことによって、直接的にもしくは間接的に行われ得る。

用語「ホスフェート前駆体」および「ホスフェート前駆体アナログ」とは、インビボで直接リン酸化され得る本発明の化合物における置換基部分を指す。

「ホスフェート誘導体」とは、ホスフェートもしくはホスフェートエステル基を含む本発明の化合物における置換基部分を指す。

「プロドラッグ」とは、リン酸化後にのみインビボで生物学的に活性になる化合物を指す。
（技術用語）

「アシル」とは、−Ｒ−Ｃ＝Ｏ基を意味する。

「アシルホスフェート」とは、ホスフェートに結合されたアシル基、ＲＣＯ_２ＰＯ_３ ^２−を意味する。

「アルコール」とは、飽和アルカン様化合物に結合した−ＯＨ基を有する化合物（ＲＯＨ）を意味する。

「アルキル」とは、１個の水素原子がアルカンから除去される場合に残る部分構造を指す。

「アルカン」とは、単結合のみを含む、炭素および水素の化合物を意味する。

「アルケン」とは、炭素−炭素二重結合を含む炭化水素（Ｒ_２Ｃ＝ＣＲ_２）を指す。

「アルキン」とは、炭素−炭素三重結合を含む炭化水素構造を指す。

「アルコキシ」とは、酸素原子に結合したアルキル基を特徴とする分子構造の部分を指す。

「アリール」とは、芳香族環に由来する任意の官能基もしくは置換基を指す。

「アミン」分子とは、窒素原子に結合した１またはそれより多くの有機置換基を含む化合物（ＲＮＨ_２、Ｒ_２ＮＨ、もしくはＲ_３Ｎ）である。

「アミノ酸」とは、カルボキシル基に隣接する炭素原子上にアミノ基を有する二官能性化合物、ＲＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯ_２Ｈを指す。

「アジド」とは、Ｎ_３を指す。

「シアニド」とは、ＣＮを指す。

「エステル」とは、−ＣＯ_２Ｒ官能基を含む化合物である。

「エーテル」とは、同じ酸素原子に結合した２つの有機置換基を有する化合物、すなわち、Ｒ−Ｏ−Ｒ’を指す。

「ハロゲン」もしくは「ハロ」とは、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、もしくはヨード（Ｉ）を意味する。

「炭化水素」とは、完全に炭素（Ｃ）および水素（Ｈ）の元素からなる有機化合物を意味する。

「ホスフェート」、「ホスホネート」、もしくは「ＰＯ」とは、リン（Ｐ）および酸素（Ｏ）の元素を含む化合物を意味する。

上記の分子式中および至る所にある「Ｒ」とは、任意の適切な有機分子を示すことが意味される。
（導入）

ＦＴＹ７２０は、周知の免疫抑制剤であり、集中的な研究の主題であった。免疫抑制剤として使用される場合、ＦＴＹ７２０は、プロドラッグである。インビボでのリン酸化は、プロ−Ｓ−ホスフェートエステル異性体を特異的にもたらす。リン酸化されたとき、ＦＴＹ７２０は、Ｓ１Ｐレセプターに結合する機能的アンタゴニストとして作用し、二次リンパ組織へのリンパ球遊走を刺激して、循環しているリンパ球を隔離させる。言い換えると、ＦＴＹ７２０は、循環から免疫細胞を連れ出すことによって、免疫系を抑制する。

近年、科学者は、ＦＴＹ７２０を抗がん剤として使用することを提唱し始めた。示唆されたアプローチとしては、以下が挙げられる：（１）特定のＳ１Ｐレセプターに対して選択的活性を有するＦＴＹ７２０を設計すること；および（２）ＦＴＹ７２０を使用して、ＰＰ２Ａ活性化を促進し、腫瘍形成性Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質のダウンレギュレーションをもたらすこと（例えば、Ｃｏｆｆｉｎ， Ａ． ｅｔ ａｌ． ＷＯ ２００８／０９７８１９；およびＢｙｒｄ， Ｊ．Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ＵＳ ２０１３／０１２３３６６を参照のこと（これらの開示は、本明細書に参考として援用される））。例えば、ある者は、Ｓ１Ｐレセプターの特定の部分セットに対して指向されるＦＴＹ７２０アナログを作ることは、ＦＴＹ７２０の高用量と関連する厳しい副作用を緩和し得ると考えている（例えば、上記で引用したＷＯ ２００８／０９７８１９を参照のこと）。特に、リン酸化の立体化学を研究しようとする試みにおいて、極性サブユニットに主に焦点を当てるＦＴＹ７２０の多くの合成アナログが生成されており、その得られたホスフェートエステルの生物学的活性が報告された。これら研究は、Ｓ１Ｐレセプターでの活性に最適である付加物を見出すことに特に焦点を当てた（例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓ， Ｊ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ２００５， １５， ３５６８−３５７２； Ｈａｎｅｓｓｉａｎ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ２００７， １７， ４９１−４９４； Ｄａｖｉｓ， Ｍ． Ｄ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２００５， ２８０， ９８３３−９８４１； Ｚｈｕ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２００７， ５０， ６４２８−６４３５； Ｆｏｒｒｅｓｔ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ． ２００４， ３０９， ７５８−７６８．； Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ， Ｗ． Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ． Ｓｉｇｎａｌ． ２０１０， ２２， １５４３−１５５３； Ｌｉｍ， Ｋ． Ｇ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ． ２０１１， ２３， １５９０−１５９５； Ｓｕｎ， Ｃ． ＆ Ｂｉｔｔｍａｎ， Ｒ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ２００６， ７１， ２２００−２２０２；およびＫｉｕｃｈｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０００， ４３， ２９４６−２９６１を参照のこと（これらの各々の開示は、本明細書に参考として援用される））。

対照的に、他の者は、ＦＴＹ７２０自体（いかなる具体的なアナログでもなく）が、Ｓ１Ｐレセプターに対するその分子の本来の活性にも拘わらず、ＰＰ２Ａ（セリン／スレオニンホスファターゼ）の活性を刺激することによって白血病を処置するために使用され得ると考えた（例えば、上記で引用したＵＳ ２０１３／０１２３３６６を参照のこと）。ＰＰ２Ａおよび他のホスファターゼは、シグナル伝達経路を不活性化し、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質に拮抗するにあたって、重要な役割を果たす（例えば、Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， １１３（２）： ４２２−８ （２００９）を参照のこと（その開示は、本明細書に参考として援用される））。制御不能な細胞増殖がある多くのがんにおいて、ホスファターゼ活性は低減され、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質は、抗アポトーシス効果を有する（例えば、Ｒｅｅｄ， Ｊ．Ｃ．， Ｂｌｏｏｄ １１１（７）： ３３２２−３０を参照のこと（その開示は、本明細書に参考として援用される））。よって、理論上は、ＦＴＹ７２０を投与して、ＰＰ２ＡホスファターゼをアップレギュレートしかつＢｃｌ−２をダウンレギュレートすることによって、腫瘍形成性の細胞増殖を緩和すると研究者は提唱している（上記で引用したＵＳ ２０１３／０１２３３６６を参照のこと）。ＰＰ２Ａのアップレギュレーションは、この処置ストラテジーの根底にある原則的な機構であるが、Ｓ１Ｐレセプターの活性化は、ＦＴＹ７２０のいかなる使用にも本来内在している（例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ， Ｖ．， Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２００９， １５８， １１７３−１１８２；およびＴｉｇｙｉ， Ｇ． ｅｔ ａｌ．， ＦＡＳＥＢ Ｊ．， Ａｐｒｉｌ ２４， ２０１０， Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １ｂ／１００を参照のこと（これらの開示は、本明細書に参考として援用される））。従って、研究者はＦＴＹ７２０分子の種々のバリエーションを使用するものの、Ｓ１Ｐレセプターの活性化は、両方の提唱される抗がん処置に本来内在している。

不運なことに、抗がん処置に必要とされるＦＴＹ７２０の必要量を投与することは、顕著な欠点を有する。ＭＳを処置するために使用される用量では、ＦＴＹ７２０は十分に寛容されることを示したが、有効かつ選択的な抗がん処置に必要とされるＦＴＹ７２０の高い用量は、Ｓ１Ｐ１およびＳ１Ｐ３の活性化に二次的な徐脈（潜在的に致死的であるので、用量を制限する毒性である）を引き起こすことが示された（例えば、Ｌｅｅ， Ｔ． Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００５， １１， ８４５８−８４６６； Ａｚｕｍａ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００２， ６２， １４１０−１４１９； Ｃｈｕａ， Ｃ． Ｗ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ２００５， １１７， １０３９−１０４８； Ａｚｕｍａ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｕｒｏｌ． ２００３， １６９， ２３７２−２３７７； Ｎｅｖｉａｎｉ， Ｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ２００７， １１７， ２４０８−２４２１．Ｓａｎｎａ， Ｍ． Ｇ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２００４， ２７９， １３８３９−１３８４８；およびＫｏｙｒａｋｈ， Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ２００５， ５， ５２９−５３６を参照のこと（これらの開示は、本明細書に参考として援用される））。よって、抗がん治療剤としての使用の可能性があるにも拘わらず、現在公知のＦＴＹ７２０関連化合物は、Ｓ１Ｐレセプター結合に起因して用量が制限され、このことは、それらが抗がんで使用することを維持できなくしている。

ＦＴＹ７２０の関連する抗がん活性は、そのＳ１Ｐレセプター活性から切り離せるということがここで発見された。実際に、抗がん処置に必要なＦＴＹ７２０の高用量が、Ｓ１Ｐレセプター効果から生じだけではなく、少なくとも部分的に、栄養素輸送の阻害からも生じることをここで提唱する。よって、以前の研究とは明確に対照的に、ＦＴＹ７２０のＳ１Ｐレセプターに関連する用量を制限する毒性を示さない、ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログに基づく安全かつ有効な抗がん剤が呈示される。むしろ、提唱されるアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ実施形態、治療剤および処置は、少なくとも部分的には栄養素輸送をブロックし、それによって病的な細胞を飢餓状態にし、そして死滅させることによって、がんおよび他の障害を処置する。さらに、これら化合物は、ＰＰ２Ａ活性をアップレギュレートする能力を有し、これはさらなる抗腫瘍形成性効果および抗増殖効果を有する。要するに、本明細書で記載されるＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログは、当該分野のものの者によってとられるアプローチに本質的に内在し、抗がん剤としてのＦＴＹ７２０の使用を有効に維持できないものにする致死的効果なしに、がんと闘うためにいくつかの機構を使用する。よって、ＦＴＹ７２０の低分子アザサイクリック拘束アナログの実施形態、このような低分子に基づく治療剤、ならびにがんおよび他の障害を処置することにおいて使用するためのこのような治療剤を組み込む処置レジメンが以下で呈示される。
（本発明の分子）

本発明の実施形態に従う化合物は、Ｏ−ベンジルピロリジンに基づく。ＦＴＹ７２０の化学構造は、図１に図示される。本発明の実施形態に従う化合物は、図２に図示され、以下に示される。実施形態は、図２ａに図示されるとおりの分子、図２ｂに図示されるとおりのこのような分子のホスフェート、図２ｃに図示されるとおりのこのような分子のホスホネート、もしくはその薬学的に受容可能な塩を含み、ここで：

Ｒ_１は、アルキル鎖、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、ＣＨＯＨ−アルキル、ＣＨＯＨ−アルキン、（ＣＨ_２）_ｎＯＭｅ、（ＣＨ_２）_ｎＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、ＣＨ＝ＣＨＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、（ＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、ならびに（ＣＨ_２）_ｎＯＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステルから選択される任意選択の官能基であり；
Ｒ_２は、脂肪族鎖（Ｃ_６−Ｃ_１０）であり；
Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アジド（Ｎ_３）、エーテル、ＮＯ_２、もしくはシアニド（ＣＮ）を含む、モノ−、ジ−、トリ−もしくはクアッド−芳香族置換基であり；
Ｒ_４は、Ｒ_１と共に任意選択のアルコール（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
Ｌは、Ｏ−ＣＨ_２であり；
Ｍｅは、アルキル、アルケンもしくはアルキンであり；
ｎは、１、２、もしくは３から独立して選択される整数であり；そして
ここで上記フェニルは、Ｒ_２もしくはＲ_３の炭素鎖に沿って移動され得る。

さらなる実施形態において、上記Ｏ−ベンジル基は３位もしくは４位へと移動され得、ここで、Ｏ−ベンジル基によって占有されない位置は、いまＨ（すなわち、ＣＨ_２）であり、これは図２ｄに示され、以下で再現されるとおりである。

さらなる実施形態において、アルキル、ＣＨ_２ＯＨ、もしくは（ＣＨ_２）_ｎＯＨ基は、５位に付加され得る。

さらに他の実施形態において、上記Ｒ_２およびＲ_３置換基は、それらの位置に関して上記フェニル環の周りで異なる組み合わせを有し得る。

さらに他の実施形態において、上記Ｒ_１は、１〜６個の炭素を有するアルキルであり得る。

本発明の化合物が、立体異性体（ホスフェート、ホスホネート、エナンチオマー、ジアステレオマー、シス、トランス、ｓｙｎ、ａｎｔｉ、溶媒和物（水和物を含む）、互変異性体、およびこれらの混合物を含む）として存在し得、本発明の化合物において企図されることは、理解される（例えば、図２ｂ〜２ｃ、図４ａ、図５ａ、図６ａおよび図７ａを参照のこと）。

上記化合物がホスフェートもしくはホスホネートである多くの実施形態において、Ｒ_１は、例えば、（ＣＨ_２）_ｎＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、ＣＨ＝ＣＨＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、（ＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステル、ならびに（ＣＨ_２）_ｎＯＰＯ（ＯＨ）_２およびそのエステルであり得る。

特許請求される発明はまた、薬学的に受容可能な塩に包含され得る／薬学的に受容可能な塩に関し得る。「薬学的に受容可能な塩」は、望ましくない毒物学的効果なしに上記化合物の望ましい生物学的活性を保持する。塩は、適切な酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など；酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、安息香酸、パモ酸、アルギン酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などが挙げられるが、これらに限定されない）との塩であり得る。また、組み込まれるカチオンとしては、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、リチウム、亜鉛、銅、バリウム、ビスマス、カルシウムなど；または有機カチオン（例えば、テトラアルキルアンモニウムおよびトリアルキルアンモニウムカチオン）が挙げられ得る。酸性塩とカチオン塩との組み合わせもまた有用である。他の酸および／もしくはカチオンの塩（例えば、トリフルオロ酢酸、クロロ酢酸、およびトリクロロ酢酸との塩）が含まれる。

他のアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログならびに本発明の実施に適した改変アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログは、当業者に明らかであり、たとえ上記に示される化合物に構造的に同一でないとしても、毒性のＳ１Ｐレセプター活性を誘発することなく、栄養素輸送の阻害もしくはダウンレギュレーションおよび／またはＰＰ２Ａ活性のアップレギュレーションを含むいくつかの機構を使用し得る任意のＯ−ベンジルピロリジン化合物を含む。
（製剤）

実施形態において、上記低分子アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログは、例えば、栄養素輸送の阻害に、もしくはＰＰ２Ａ活性化に感受性のあるがんのような障害の処置のための治療用医薬へと製剤化される。このような実施形態において、上記治療剤の投与様式としては、経口、経皮、経粘膜（例えば、舌下、鼻、膣もしくは直腸）、または非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、ボーラスもしくは連続注入）が挙げられるが、これらに限定されない。必要とされる薬物の実際の量は、罹患した個体の大きさ、年齢および疾患の重症度のような要因に依存する。必要とされる薬物の実際の量は、ＦＴＹ７２０の種々のアザサイクリック拘束アナログの有効阻害濃度範囲にも依存する。異なるアナログは、以下の図５〜７においてより詳細に示されかつ記載されるように、異なる有効阻害濃度範囲を有する。

治療剤の実施形態は、このような処置に感受性のある疾患もしくは病的状態（例えば、白血病のようながん）の症状を低減、改善もしくは除去するために有効な用量でおよび期間にわたって投与され得る。使用のための他の適応症としては、２型糖尿病および肥満症が挙げられ得る。例えば、栄養素取り込みの調節が示される実施形態において、上記ＦＴＹ７２０低分子化合物の種々の実施形態を使用することは、カロリーの取り込みを制限および／もしくは寿命を延ばすために使用され得る。投与レジメンは、上記化合物の治療応答もしくは予防応答を改善する目的で調節され得る。例えば、いくつかの分割用量が毎日、望ましい治療結果を達成するために、上記化合物の１用量、もしくは周期的投与が投与され得る。単一のアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物が投与されてもよいし、同様に種々のアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物の組み合わせが投与されてもよい。

これら化合物の溶解度を改善する薬剤を添加することもまた、可能である。例えば、特許請求される化合物は、選択される投与経路に従って、１種またはそれより多くのアジュバントおよび／もしくは薬学的に受容可能なキャリアとともに製剤化され得る。経口適用に関しては、ゼラチン、矯味矯臭剤、もしくは被覆材料が添加され得る。一般に、溶液もしくはエマルジョンに関しては、キャリアとしては、生理食塩水および緩衝化媒体を含め、水性もしくはアルコール性／水性の溶液、エマルジョンもしくは懸濁物が挙げられ得る。非経口ビヒクルには、とりわけ、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムが含まれ得る。さらに、静脈内ビヒクルには、流体および栄養素補充物、電解質補充物などが含まれ得る。

保存剤および他の添加剤（抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、および不活性ガスのような）もまた、存在し得る（一般には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｍａｃｋ， （１９８０）を参照のこと（その開示は、本明細書に参考として援用される））。
（例示的実施形態）

生物学的データは、疾患（がん、肥満症、糖尿病）を処置するための種々の実施形態において前述のＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログの使用を裏付ける。上記では、低分子化合物、医薬を組み込む実施形態、および処置レジメンの一部として記載される。以前の研究は、ＦＴＹ７２０の可撓性のアミノジオール部分に対する化学改変がＳ１Ｐレセプターへの選択的結合に影響を及ぼすことを立証した（Ｃｌｅｍｅｎｓ， Ｊ． Ｊ． ｅｔ ａｌ．，（上記で引用））。本開示に従うＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログの実施形態は、少なくとも部分的に、Ｓ１Ｐレセプターへの結合に対して低下した活性とともに飢餓状態によって細胞を死滅させ、それによって徐脈のような致死的副作用を回避することに留意されたい。よって、種々の疾患を処置するためのこれら化合物を使用する実施形態は、以前のアプローチと関連した落とし穴を回避する。考察されるように、データは、本開示に従う低分子アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログの実施形態が既存のＦＴＹ７２０関連分子および関連する処置法より優れているという提唱を裏付ける。

アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子の実施形態の予測される治療効力は、Ｓｕｐ−Ｂ１５白血病細胞を使用した予備研究におけるその実証された生物学的活性から生じる。以下で考察されるように、軽微な化学的および構造的改変（立体化学、Ｏ−ベンジル鎖の位置、リン酸化部位の喪失、および脂肪族鎖の長さに対する変化が挙げられる）は、ＦＴＹ７２０低分子アナログ活性に対して僅かな影響を有するが、全てのアナログは、ＦＴＹ７２０対照を超える治療利点をなお示す。
（材料および方法）

合成：実施形態として、適切に置換された２−および４−ヒドロキシ Ｄ−もしくはＬ−プロリンから出発して、ピロリジンのエナンチオマーとして純粋であり立体化学的に多様なＯ−置換されたベンジルエーテルが挙げられる。上記アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物のいくつかの列挙される実施形態は、類似の反応から発生する。化合物５、６、７、８、１３、１４、および１５に関しては、全合成反応を行う代わりに、分子前駆体を購入し得る。前述の前駆体は、全て公知の化合物であり、スペクトルデータは、提唱される構造と一致し、文献中のものと合っていた。化合物５および６は、（２Ｒ，４Ｓ）−１−Ｂｏｃ−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）−４−ヒドロキシピロリジン（図３ｂの６ｄ）（対して、化合物５に関しては、（２Ｓ，４Ｒ））の異なる立体異性体から始める。残りの工程は、最終工程を除けばルーチンであり、この最終工程は、化合物１４および１５の前駆体を生成するので、化合物６に関して２工程に分けられる（図３ａおよび３ｂを参照のこと）。

化合物５（図３ａに図示されるとおり）に関しては、化合物５の合成は、６工程のプロセスである。しかし、化合物５ｂ、５ｃ、および５ｄは、上述の前駆体と一致して全て公知の化合物である。よって、関連する合成反応は、化合物５ｅで始まる。化合物５ｅ（（２Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（（４−ブロモベンジル）オキシ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）−ヒドロキシピロリジン）を合成するために、化合物５ｄ（４９５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、アルゴンでパージし、ＮａＨ（鉱油中６０％、１８０ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）の前に０℃へと冷却する。上記混合物を、４−ブロモベンジルブロミドを添加する前に３０分間撹拌する。その後、上記反応を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させて、濾過する。減圧下で溶媒を除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。このことから、化合物５ｅ、すなわち（２Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（（４−ブロモベンジル）オキシ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）−４−ヒドロキシピロリジンが得られる（図３ａ）。

次に、２工程の反応において、１−オクチン（４４μＬ、０．３ｍｍｏｌ）およびカテコールボラン（ＴＨＦ中１．０Ｍ、０．３ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液を、７０℃で２時間、アルゴン雰囲気下で還流した。上記反応混合物を室温へと冷却した。ＤＭＥ（２ｍＬ）中の５ｅ（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液を、上記反応混合物に添加し、続いて、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（６．９ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ_３の１Ｎ水溶液（２ｍＬ）を添加した。上記反応混合物を、一晩激しく撹拌しながら還流する。次いで、上記混合物を室温へと冷却し、ブライン溶液を添加する。上記混合物をＥｔ_２Ｏで３回抽出する。その合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過した。減圧下で上記溶媒を除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製して、無色油状物（３６ｍｇ、３４％）を得る。次いで、この油状物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％）を添加する。フラスコから空気をポンプで抜き、Ｈ_２で置き換える。ＴＬＣによって完了が示されれば、上記反応を停止させ、上記混合物を、綿およびセライトを詰めたピペットを通して濾過する。減圧下で上記溶媒を除去して、水素化生成物である化合物５ｆ（２９ｍｇ、８３％）を無色油状物として得る。最後に、化合物５を化合物５ｆから合成するために、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、９５μＬ、０．０９５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（１．３ｍＬ）中の化合物５ｆ（２９ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。次いで、上記反応系を室温で３時間撹拌する。ＴＬＣ上で出発物質がもはや認められなくなったときに、上記反応混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液でクエンチし、ＣＨ_２Ｃｌ_２で３回抽出する。次いで、その有機層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過する。減圧下で上記溶媒を除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、６：４）によって精製して、アルコール（２０ｍｇ、８８％）を無色油状物として得る。次に、上記アルコールを、ジオキサン（１．２ｍＬ）中の４．０Ｍ ＨＣｌ溶液の中に溶解し、上記混合物を室温で一晩撹拌する。化合物５に関連する実施形態において、その粗製混合物のＭＳおよびＴＬＣ分析は、望ましい化合物のみを示す。上記溶媒をエバポレートし、その残渣を純粋なジオキサン中に溶解し、上記溶媒を再びエバポレートする。上記手順を、その溶液のｐＨが７になるまで反復する。その残渣を氷冷Ｅｔ_２Ｏで洗浄し、これを廃棄したところ、化合物５（１８ｍｇ、１００％）を白色固体として得た。

化合物６（図３ｂに図示されるとおり）に関しては、合成反応は、化合物６の反応を追跡する。化合物５についてのように、前駆体は、化合物６ｃ、６ｃ、および６ｄのために入手可能である。化合物６ｅ（（２Ｒ，４Ｓ）−１−Ｂｏｃ−４−（（４−ブロモベンジル）オキシ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）−４−ヒドロキシピロリジン）を合成するために、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ． （Ｚｈａｎｇ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ２００９， ５０， １１７３−１１７６（その開示は、本明細書に参考として援用される）によって詳述される手順に倣う。次に、２工程反応において、１−オクチン（３．１ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）およびカテコールボラン（ＴＨＦ中１．０Ｍ、２１．０ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、７０℃で２時間、アルゴン雰囲気下で還流する。上記反応混合物を室温へと冷却する。ＤＭＥ（８０．０ｍＬ）中の６ｅ（３．５ｇ、７．０ｍｍｏｌ）の溶液を、上記反応混合物に添加し、続いて、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２４３．０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、およびＮａＨＣＯ_３の１Ｎ水溶液（６０ｍＬ）を添加する。上記反応混合物を、一晩激しく撹拌しながら還流する。上記混合物を室温へと冷却し、ブライン溶液を添加した。上記混合物をＥｔ_２Ｏで３回抽出する。その合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過した。減圧下で上記溶媒を除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、１２：１〜９：１）によって精製して、僅かに黄色の油状物を得る。次いで、この油状物をＥｔＯＡｃ（１４０ｍＬ）の中に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％、７４５．０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコから空気をポンプで抜き、Ｈ_２で置き換える。ＴＬＣによって完了が示されれば、上記反応を停止させ、上記反応混合物を、綿およびセライトを通して濾過する。減圧下で上記溶媒を除去して、水素化生成物６ｆ（３．２５ｇ、２工程で８７％）を僅かに黄色の油状物として得る。次に、ＴＢＳを化合物６ｆから除去するために、これをＴＢＡＦおよびＴＨＦと反応させ、６ｇを得、僅かに黄色の油状物として得る。最後に、化合物６ｇ（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（６０．０ｍＬ、２４０ｍｍｏｌ）中の４．０Ｍ ＨＣｌ溶液の中に溶解し、上記混合物を室温で一晩撹拌する。ＭＳおよびＴＬＣ分析は、所望の化合物のみを示す。上記溶媒をエバポレートし、その残渣を純粋なジオキサンの中に溶解させる。上記溶媒を再びエバポレートした。上記手順を、上記溶液のｐＨが７になるまで反復する。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：９〜１：４）によって精製して、化合物６（７５９ｍｇ、９０％）を白色固体として得る。

化合物１４および１５に関しては、化合物６ｇ（（２Ｒ，４Ｓ）−１−Ｂｏｃ−４−（（４−オクテニルベンジル）オキシ）プロリノール）を前駆体として使用した。

図３ｃで図示されるように、化合物１４の合成は、３工程を要する。第１に、化合物６ｇ（１００ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（０．８ｍＬ）の中に溶解し、Ｅｔ_３Ｎ（６６μＬ、０．４７６ｍｍｏｌ）を添加する。次いで、上記溶液を０℃へと冷却し、その後、ＭｓＣｌ（２８μＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）を添加し、上記溶液を一晩静置する。上記反応混合物を水の中へと注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出する。その合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、３：１）によって濾過して、化合物１４ａ（１１２ｍｇ、９５％）を僅かに黄色の油状物として得る。第２に、化合物１４ｂを合成するために、ＬｉＢＨＥｔ_３（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、０．６４４ｍＬ、０．６４４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（０．１６ｍＬ）中の化合物１４ａ（８０ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）の氷冷溶液にゆっくりと添加する。上記溶液を室温へと加温する。２時間撹拌した後には、ＴＬＣ上には出発物質はもはや認められないはずである。次いで、上記反応を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃへと注ぐ。その水相およびＥｔＯＡｃ相を分離し、上記水相をＥｔＯＡｃで抽出した。その合わせた有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、１６：１）によって精製して、化合物１４ｂ（６０ｍｇ、９２％）を僅かに黄色の油状物として得る。第３に、および最後に、化合物１４の合成を完了するために、化合物１４ｂ（２８ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（１．７３ｍＬ、６．９ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌの中に溶解し、一晩撹拌する。上記粗製混合物のＴＬＣ分析は、望ましい化合物のみを示すはずである。上記溶媒をエバポレートし、その残渣を純粋なジオキサンの中に溶解し、再びエバポレートする。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：１０）によって精製して、１４ｂ（２０．１ｍｇ、８５％）を白色固体として得る。

化合物１５を、化合物６ｇが化学前駆体である、１つの２工程反応で合成する。化合物１５（（２Ｒ，４Ｓ）-２-（メトキシメチル）-４−（（４-オクチルベンジル）オキシ）−ピロリジン塩酸塩）を合成するために、化合物６ｇ（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１ｍＬ）の中に溶解し、アルゴンでパージし、０℃へと冷却し、その後、ＮａＨ（鉱油中６０％、９．６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加する。この反応混合物に、ＭｅＩ（１５μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加し、上記反応系を室温へと加温し、一晩静置する。その後、上記反応をＮＨ_４Ｃｌの飽和溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、その２つの相を分離する。その水相をＥｔＯＡｃで２回抽出し、その合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過する。次いで、減圧下で上記溶媒を除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製して、そのメチル化アルコール（３６ｍｇ、６９％）を無色油状物として得る。次いで、上記メチル化アルコール（３５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）をジオキサン（２．４ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌの中に溶解し、一晩撹拌する。上記粗製混合物のＴＬＣ分析は、望ましい化合物のみを示す。上記溶媒をエバポレートし、その残渣を純粋なジオキサンの中に溶解し、上記溶媒を再びエバポレートした。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：９）によって精製して、１５（２６ｍｇ、８８％）を僅かに黄色の固体として得た。

図３ｄで図示されるように、化合物７の合成は、いくつかの工程を要し、そのうちの多くは、公知の分子前駆体を使用することによって削除され得る。特に、合成は、化合物７ｂもしくは化合物７ｃを前駆体として使用して起こり得る。両方とも公知の化合物であり、スペクトルデータは、その提唱される構造と一致し、文献中で報告されたものと合っている（Ｗａｔａｎａｂｅ， Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ． ２０１１， ４８， １１３２−１１３９を参照のこと（その開示は、本明細書で参考として援用される）。化合物７ｃから出発して、化合物７ｄを無色油状物として得る。次に、化合物７ｅを２工程（図３ｄ中に列挙）で化合物７ｄから得る。最後に、化合物７を、黄色固体／油状物として化合物７ｅから得た。

図３ｅで図示されるように、化合物８を、化合物５および化合物７を合成するための手順に従って合成し得る。化合物８ｂおよび化合物８ｃは、公知の化合物である。特別なデータは、その提唱される構造と一致し、文献中で報告されたものと合っていた（Ｗａｔａｎａｂｅ， Ｊ． Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ． ２０１１， ４８， １１３２‐１１３９を参照のこと（その開示は、本明細書で参考として援用される））。化合物８ｄを、無色油状物として８ｃから得た。化合物８ｅを、無色油状物として８ｄから得た。化合物８は塩であり、８ｅから２工程で黄色油状物として得られる。

化合物９〜１２（２，３−置換されたピロリジンアナログ）の合成は、以下で考察される。化合物１０、化合物１１、および化合物１２は、化合物９（（２Ｒ，３Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−３−（（４−オクチルベンジル）オキシ）−ピロリジン塩酸塩）から誘導される。

図３ｆで図示されるように、化合物９の合成は、いくつかの中間反応を要する。化合物９の前駆体（化合物９ｄを含む）は、Ｅｖａｎｏ ｅｔ ａｌによって記載される手順に従って生成される（Ｔｏｕｍｉ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． ２００７， ４６， ５７２−５７５を参照のこと（その開示は、本明細書に参考として援用される））。化合物９ｅを、僅かに黄色の油状物として化合物９ｄから得る。次に、化合物９ｆを、僅かに黄色の油状物として化合物９ｅから得た。化合物９を、黄色固体として化合物９ｆから得る。

図３ｇで図示されるように、化合物１０を合成するために、そのプロセスは、異なる立体化学的配座の前駆体を用いるが、化合物９におけるプロセスとほぼ同じである。

図３ｈで図示されるように、化合物１１の合成は、いくつかの工程のプロセスである。それは、上記で考察されるＥｖａｎｏ ｅｔ ａｌ．のプロセスによって生成されるとおりの化合物９ｄに係る。図３ｈで図示されるように、１１ａを合成するために、ＮａＨＣＯ_３（１３４ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を、化合物９ｄ（７０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１．０ｍＬ）に室温で添加し、続いて、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（１３４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加する。得られた混合物を、ＴＬＣによって出発物質がもはや認められなくなるまで、１．５時間撹拌する。次いで、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３の飽和溶液を上記混合物に添加し、その有機層を分離し、その水層をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出する。その合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、１２：１〜８：１）によって精製して、化合物１１ａ（６４ｍｇ、９２％）を僅かに黄色の油状物として得る。次に、化合物１１を、Ｌ−ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ（ＴＨＦ中１Ｍ、０．２７ｍＬ、０．２７ｍｍｏｌ）を、化合物１１ａ（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．８ｍＬ）溶液に７８℃で添加することによって合成する。得られた溶液を１時間にわたってこの温度で撹拌すると、出発物質はＴＬＣによってもはや認められなくなった。次いで、ＮＨ_４Ｃｌの飽和溶液を上記溶液に添加し、その有機層を分離し、その水層をＥｔＯＡｃで抽出する。その合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、５：１）によって精製して、化合物１１ｂ（４５ｍｇ、７５％）を無色油状物として得る。化合物１１ｃを無色油状物として化合物１１ｂから得た。化合物１１ｄを僅かに黄色の油状物として２工程で１１ｃから得た。化合物１１を黄色固体として化合物１１ｄから得た。

図３ｉで図示されるように、化合物１２の合成は、化合物１１に関するものとほぼ同じである。唯一の差異は、そのプロセスが最初に化合物１０ｄを９ｄの代わりに使用することである。化合物１０ｄは、化合物９ｄの立体異性体である。

図３ｊで図示されるように、化合物１３の合成は、多工程プロセスである。化合物１３に関して、いくつかの前駆体が使用され得る。公知の前駆体としては、化合物１３ｂ〜ｆが挙げられる。これらに関して、化合物およびスペクトルデータは、提唱される構造と一致し、文献中に報告されたものに合っている（Ｇａｕｃｈｏｔ， Ｖ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ２０１２， ７７， ４９１７‐４９２３； Ｗａｔｔｓ， Ｊ．ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ． Ｓｙｎｔｈ． Ｃａｔａｌ． ２０１２， ３５４， １０３５‐１０４２； Ｒｏｓｅｎ， Ｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９８８， ３１， １５９８‐１６１１； Ｍｉｔｓｕｍｏｒｉ， Ｓ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ２００６， １２８， １０４０‐１０４１を参照のこと（これらの開示は、本明細書で参考として援用される））。化合物１３ｆから出発して、化合物１３ｇを無色油状物として得る。次に、化合物１３ｈを無色油状物として２工程で１３ｇから得る。最後に、化合物１３を、化合物１３ｈ（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をジオキサン（６ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌの中に溶解し、一晩撹拌することによって合成する。上記粗製混合物のＴＬＣ分析は、望ましい化合物のみを示すはずである。上記溶媒をエバポレートし、その残渣を純粋なジオキサンの中で溶解し、上記溶媒を再びエバポレートする。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＨ：ＤＣＭ、１：９）によって精製して、化合物１３（６２ｍｇ、７３％）を僅かに黄色の固体として得た。

化合物１６および１７は、ともに３−置換されたピロリジンエーテルであり、類似の反応シーケンスを使用して合成される。化合物１７の合成は、化合物１６に由来する前駆体を要する。

図３ｋで認められるように、化合物１６の合成は、４反応のプロセスである。第１に、化合物１６ｂを、無色油状物（１．３ｇ、１００％）として（Ｒ）‐３‐ピロリジノール（５３９ｍｇ、６．１９ｍｍｏｌ）から得た。スペクトルデータは、提唱される構造と一致し、文献中で報告されたものに合っていた（Ｋｕｃｚｎｉｅｒｚ， Ｒ． ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９８， ４１， ４９８３−４９９４を参照のこと）。化合物１６ｃを無色油状物として化合物１６ｂから得た。化合物１６ｅを無色油状物として２工程で化合物１６ｃから得た。最後に、化合物１６を黄色油状物として化合物１６ｅから得た。

図３ｌは、化合物１７の合成が化合物１６ｂを前駆体として使用し、全体的に、その合成プロセスは、化合物１６のものに類似であることを示す。第１に、化合物１７ａを、化合物１６ｂ（４００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８ｍＬ）の中で溶解することによって合成する。ＰＰｈ_３（１．１８ｇ、４．４９ｍｍｏｌ）および４‐ニトロ安息香酸（７５０ｍｇ、４．４９ｍｍｏｌ）を逐次的に添加する。上記溶液を０℃へと冷却し、その後、ＤＩＡＤ（０．８８ｍＬ、４．４９ｍｍｏｌ）を添加する。上記反応系を室温で一晩撹拌する。ＴＬＣは、出発物質がもはやないことを示すはずである。上記反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ_３の飽和溶液で洗浄する。その有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、エバポレートする。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、２：８）によって精製して、そのエステルを僅かに黄色の油状物として得る。次いで、上記エステルをＭｅＯＨ（３．５ｍＬ）の中に溶解し、２Ｍ ＮａＯＨ（１．２ｍＬ）を添加する。上記反応混合物を室温で１時間撹拌する。ＴＬＣによって示されるように完了した後、上記反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、その有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：１）によって精製して、化合物１７ａ（１１３ｍｇ、２工程で４７％）を無色油状物として得る。スペクトルデータは、提唱される構造と一致し、文献中で報告されるものに合っている（Ｋｉｍ， Ｙ． Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ２０００， １０， ２４１７‐２４２０を参照のこと（その開示は、本明細書に参考として援用される））。

白血病細胞アッセイ：ＢＣＲ−ＡＢＬ陽性ヒト急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞株Ｓｕｐ−Ｂ１５を使用した細胞生存性アッセイで認められる場合の細胞を死滅させる能力に対する化学変化の影響を、記載する。上記Ｓｕｐ−Ｂ１５細胞株を使用するアッセイを設計して、ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束低分子アナログが白血病細胞を死滅させる効力を決定した。アナログを、上述の合成法を使用して生成した。Ｓｕｐ−Ｂ１５細胞を、１０％ウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標））、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ^ＴＭ）、５５μＭ β‐メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標））、２ｍＭ Ｌ‐グルタミン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（登録商標））、および抗生物質を補充したＲＰＭＩ １６４０（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（登録商標））中で、２〜３００万個／ｍＬで維持した。ＢＶ１７３、Ｎａｌｍ−６、およびＢｌｉｎ−１を、同じ培地中で、１〜２００万個／ｍＬで維持し、ＣＣＲＦ‐ＣＥＭを５００，０００／ｍＬ未満で維持した。ＢＭｐ１９０細胞を、ＢＣＲ‐Ａｂｌのｐ１９０アイソフォームおよびヒトＣＤ４をＩＲＥＳから発現するｐＭＩＣ‐ｐ１９０でマウス骨髄細胞を形質導入することによって作りだした；これら細胞を、１〜２００万個／ｍＬで、上記のとおり補充したＲＰＭＩ中で維持した。

フローサイトメトリー：呈示される生物学的活性の大部分は、フローサイトメトリーデータを通じて示される。フローサイトメトリーデータは、培養物中のどの程度多くの細胞がＦＴＹ７２０およびアナログによって死滅させられたか、および細胞表面レセプター発現のレベルを示す。ここで、ＩＣ_５０フローサイトメトリーアッセイを使用した。それらにおいて、生存性を、生細胞色素排除［ヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ）もしくはＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ（ｄｉａｍｉｎｄｉｎｏ）−２−フェニルインドール）］によって７２時間で決定した。ＦＴＹ７２０およびＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログへの曝露後の栄養素レセプター発現を測定するために、表面４Ｆ２ｈｃ発現を、薬物処置の３時間後に、１５０，０００個の細胞をフィコエリトリン結合体化マウス抗ヒトＣＤ９８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（登録商標））で染色することによって測定した。分析を生細胞に限定した。

開示されるデータセットの全てのサンプルを、ＢＤ ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーターで分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ（登録商標））で分析した。ＩＣ_５０を計算し、統計的検定をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）を使用して行った。

実施例１：立体化学
第１の実施形態において、細胞培養アッセイを行って、実施形態に従う種々の低分子ジアステレオマーの殺傷能力を示した。特に、化合物５〜８（図４ａに示される）は、一連のジアステレオマーシリーズのメンバーを提供し、上記アッセイは、ヒドロキシメチル基に対するエーテル付加物の三次元配向が、化合物ががん細胞を死滅させる能力に影響を及ぼすことを示す。実際に、図４ｂで図示されるように、上記化合物の立体化学のわずかなバリエーションすら、上記低分子アナログの有効性に影響を及ぼし得る。特に、ある種の化合物は、他より大きな殺傷能力を有する。例えば、化合物８は、化合物６より活性において１／８の減少を有し、そのエナンチオマー（化合物５）より２倍の弱い。実際に、化合物６は、化合物５、化合物７、および化合物８より遙かに大きな活性を示した。このことは、立体化学が低分子活性を改善するにあたって有る役割を果たし得ることを示す。活性におけるこの潜在的に有用な変動性にも拘わらず、上記低分子アナログ実施形態の立体化学が変化しても、上記低分子アナログがＦＴＹ７２０より有効でなくなるということではないことに注意すべきである。特に、上記アザサイクリック拘束アナログの全てが、白血病細胞を死滅させるにあたって、ＦＴＹ７２０対照とほぼ同じ程度有効である。さらに、これら化合物は、上記低分子がＳ１Ｐ１レセプターもＳ１Ｐ３レセプターも活性化させず、それによって、ＦＴＹ７２０および以前に報告されたアナログと関連するＳ１Ｐレセプター関連の用量を制限する毒性を回避するというさらなる利益を付与する（以下の図１０ａおよび図１０ｂに関してより詳細に記載されるとおりである）。要するに、立体化学は、アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログのある種の実施形態の抗白血病活性を実質的に増大させ得るか、または白血病細胞を死滅させる能力に対して上記アナログを害さない取るに足らない役割を果たし得るかのいずれかである。よって、上記アナログ実施形態の立体化学を改変することは、アザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログの効力に影響を及ぼす可能性を有するが、いくつかの実施形態、および特にＳｕｐＢ１５細胞に関しては、従来の化合物と比較しても抗がん効力を低下させない。
実施例２：Ｏ−ベンジル鎖の位置

第２の例示的分析において、上記低分子アナログの活性に関してＯ−ベンジル鎖の位置を試験した。まとめると、この位置は、細胞を死滅させるための実施形態の能力に実質的に影響を及ぼすことを示さない。上記で考察される技術を使用して、研究者は、ジアステレオマーの２−ヒドロキシメチルピロリジン ４−アリールエーテル（図５ａ）を合成した。これら実施形態を、Ｔｏｕｍｉ， ｅｔ ａｌ． （Ｔｏｕｍｉ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． ２００７， ４６， ５７２−５７５（その開示は、本明細書で参考として援用される）によって開示される前駆体を使用して合成した。化合物１０〜１２を得るための手順は、化合物９についてのものと一致する。

これらアナログの合成およびそれらをＳｕｐ−Ｂ１５アッセイへ組み込んだ後に、上記Ｏ−ベンジル鎖の位置（３位 対 ４位）が、効力を完全に害さないことが示される（図４ｂおよび５ｂを比較する）。さらに、両方のデータプロットは、３位にＯ−ベンジルを有する分子がＦＴＹ７２０を超える治療上の利点を呈示することを示す。これらアナログはＦＴＹ７２０対照に類似のがん細胞殺傷能力を有するが、ＦＴＹ７２０のＳ１Ｐレセプター関連の用量を制限する毒性の引き金とはならないので、それらは、ＦＴＹ７２０対照分子より治療上有利である。これの増大した効力とともに動物においてＳ１Ｐ１／３活性化を回避する能力は、この化合物の実施形態が見込みのある治療剤であることを示す（図１０ａおよび１０ｂに関する以下の考察もまた参照のこと）。

さらに、上記化合物のある種の立体化学的配座は、特有の治療上の利益を有する。図４ｂおよび図５ｂで示されるように、化合物６は、この研究で使用される特定の白血病細胞株（Ｓｕｐ−Ｂ１５）において、そのジアステレオマーのコンジナー（ｃｏｇｅｎｅｒ）およびＦＴＹ７２０と比較して、増強した抗がん活性を付与する点で特有である。このことは、Ｓ１Ｐ１／３を活性化しないという治療上の利益に加えて、ＦＴＹ７２０のアザサイクリック拘束アナログの実施形態は、ＦＴＹ７２０と同等かそれより優れたがん細胞殺傷活性を有することを示す。特に、データプロットで示されるように、上記実施形態の全ては、より可撓性の親ＦＴＹ７２０に類似の有効性で細胞死の引き金となる（図４ｂおよび図５ｂにおいて、ＦＴＹ７２０は化合物１としてプロットされている）。
実施例３：リン酸化

第３の例示的試験において、上記分子上のリン酸化部位の喪失は、ＦＴＹ７２０もしくはそのアザサイクリック拘束アナログががん細胞を死滅させる能力にとって重要でないことが示される。Ｓ１Ｐ１レセプターシグナル伝達に干渉する能力は、低ナノモル用量でのその免疫抑制活性にとって重大であるものの、ＦＴＹ７２０によるＳ１Ｐ１およびＳ１Ｐ３の活性化は、それががん治療において使用されることを妨げる。上記拘束アナログはまた、細胞中でリン酸化を受ける可能性があるので、ヒドロキシメチル基が改変もしくは完全に除去された一連の化合物を研究した。例えば、化合物１３および化合物１４において、５および６それぞれに存在するヒドロキシメチル基を、メチル基で置換した（図６ａ）。この潜在的リン酸化部位の喪失は、５と比較して１３の有効性に検出可能な効果を有さなかったが、６と比較して、１４の活性を低下させた（図６ｂおよび図６ｃ）。同様に、化合物１５のように、上記ヒドロキシル基をＯ−メチルエーテルとして保護すると、６と比較して有効性が低下した。ヒドロキシメチル基を５から除去して、ピロリジン１６を得ると、細胞生存性アッセイにおける活性に対してわずかな効果を有するに過ぎない。しかし、エナンチオマーのピロリジンアナログ１７は、６と比較して活性において１／６の低下を示した。化合物１３〜１７は、リン酸化され得ないが、白血病細胞を死滅させる能力を保持しているので、その結果は、ＦＴＹ７２０ががん細胞を死滅させる能力にリン酸化を必要としないモデルと一致する。

まとめると、化合物５上の潜在的なリン酸化部位の除去は、そのがん細胞殺傷効力に対して影響を有さない。化合物６に関しては、リン酸化の除去は、化合物５よりも効力に対してより大きな効果を有する（図６ｃと図５ｂおよび６ｂとを比較のこと）。この研究は、リン酸化が、ＦＴＹ７２０の効力と比較した場合に、いくつかの実施形態において、がん細胞を死滅させる化合物の能力に関連性があり得ることを示す。
実施例４：脂肪族鎖の特徴

第４の例示的研究において、フェニル上の脂肪族鎖の性質および長さの、活性に対する効果を試験した。図７ａおよび図７ｂで示されるように、上記脂肪族鎖の性質および長さは、アナログの実施形態の活性にとって重要である。特に、図７ｂで示されるように、より短い鎖を有する、およびより長い鎖を有する、または単純なヘプチル鎖を有する化合物５のアナログは、ＭＯＭエーテルのように、それほど活性ではない。このことは、上記アナログの実施形態において、上記脂肪族鎖の特許請求された長さを、６〜１０個の間の炭素に制限することの重要性を示す。
実施例５：栄養素輸送体発現の効果

第５の例示的研究において、がん細胞における栄養素輸送体の喪失の引き金となることにおけるアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ実施形態の効力を、試験した。図８で示されるように、本明細書で記載される低分子アナログは、１０μＭで使用される場合、立体化学配座にもリン酸化にも関係なく、がん細胞における栄養素輸送体の喪失を引き起こす。さらに、上記化合物は、立証されている免疫抑制剤ＦＴＹ７２０と少なくとも同程度有効であることが示されている。これは、ＦＴＹ７２０の記載されるアザサイクリック拘束アナログが、がん細胞における栄養素輸送を阻害するように設計された治療剤として有効であると同時に、Ｓ１Ｐレセプター結合を回避し、従って、Ｓ１Ｐ活性分子（例えば、ＦＴＹ７２０およびその従来のアナログ）で見出される副作用の引き金となることなく、治療上有効な医薬を提供し得る化合物のファミリーを提供することを示す。
実施例６：細胞生存性アッセイ

化合物６の効力が、そのジアステレオアイソマー５、７および８と比較して増大したことが認められたので、同様に、この差次的活性が他のがん細胞株においても認められるか否かを決定する必要があった。細胞生存性アッセイを使用して、さらなるＢＣＲ−ＡＢＬ陽性ＡＬＬ細胞株であるＢＶ１７３において、上記拘束アナログおよびＦＴＹ７２０の活性を比較した。以下の表１で示されるように、この細胞株において、化合物６は、再度、その立体異性体５、７および８より活性が高かった。興味深いことに、化合物６はまた、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質ｐ１９０の導入によって形質転換されたマウス骨髄において、化合物５より１０倍活性が高かった。Ｎａｌｍ−６、Ｂｌｉｎ−１、およびＣＣＲＦ−ＣＥＭはまた、ＡＬＬ細胞株であるが、腫瘍形成性ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質を発現しない。これら３種のヒト白血病細胞株において、６は、上記シリーズ中の他の化合物と比較して、増大した有効性をもはや示さなかった。前立腺がん細胞株ＰＣ３およびＤＵ１４５に対する化合物６およびそのジアステレオアイソマーであるコンジナーの効果もまた、決定した。化合物５および化合物６は、同様の程度まで細胞死を誘発し、上記拘束アナログの有効性は、ＦＴＹ７２０と比較して僅かに低下していた。

これら知見から、６の、そのジアステレオアイソマーより増強した有効性が、血液学と関連する特性であるが前立腺がんでは関連せず、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質の発現に関連し得ると結論づけることは可能である。ＢＣＲ−ＡＢＬ依存性シグナル伝達は、慢性骨髄性白血病およびＡＬＬの部分セットの生存および増殖を駆動する。従って、ＢＣＲ−ＡＢＬ陽性白血病に対して活性を有するアナログ化合物の実施形態は、特定の臨床上の有用性を有し得る。
実施例７： 化合物６の特徴

その有望な活性に基づいて、化合物６およびその関連ホスフェートの試験に着手した（この化合物およびそのホスフェートの分子式は、図９ａおよび図９ｂで示される）。その結果のまとめを、多くの相関したデータグラフ（図１０ａ〜１０ｏ）とともに以下に提供する（図１０ａ〜１０ｏでは、化合物６は、番号「１７７」で標識されており、そのホスフェートは、番号「１０６２」で標識され、そのエナンチオマーは「３９」と標識されていることに留意されたい）。

以前に考察されるように、ＦＴＹ７２０自体は、がん患者では使用できない。なぜならＳｐｈＫによるＦＴＹ７２０のリン酸化がＦＴＹ７２０−Ｐを作りだし、これは、Ｓ１Ｐレセプターに作用して、徐脈および免疫抑制を引き起こす（主な使用に関するオンターゲット効果）からである。図１０ａで示されるように、遠隔測定法を使用して、マウス心拍数を、抗がん用量のＦＴＹ７２０を投与した後２４時間測定した。心拍数の劇的な低下が認められる。さらに、図１０ｂで示されるように、ＦＴＹ７２０はまた、投与の１２時間後に、循環しているリンパ球の数を測定した場合、リンパ球隔離を引き起こす。しかし、本発明の実施形態に従う化合物６は、免疫抑制も引き起こさず（図１０ｂ）、同じ用量で心拍数も低下させない（化合物６およびそのホスフェートの１０ｍｇ／ｋｇの単一用量および３０ｍｇ／ｋｇでの複数用量の両方を、この研究で投与し、類似の結果であったことに留意されたい）。

化合物６は、白血病細胞株で非常によく機能したので、ＳｕｐＢ１５モデルにおけるインビボでその有効性の試験に着手した。化合物６の１０ｍｇ／ｋｇでの処置（ｉ．ｐ．）の２１日後に、骨髄における白血病負荷量の劇的な減少が、図１０ｃで示されるように認められた。化合物６を３０ｍｇ／ｋｇ ＳＩＤで経口投与した場合に、同様の結果を認めた。

化合物６と、ＦＴＹ７２０もしくは化合物６のエナンチオマーとの間の別の差異は、化合物６が、他の細胞タイプと比較して、ＢＣＲ−Ａｂｌ＋白血病に対して特異的かつ非常に高い活性を有することである。この傾向は、化合物６（１７７とも呼ぶ）およびそのエナンチオマー化合物５（３９とも呼ぶ）のＩＣ５０の比を計算することによって、図１０ｄで示される。上記薬物が同様に有効であれば、ほぼ１の比が予測され、化合物６がより良好に機能する（より低いＩＣ５０を有する）場合、ＳｕｐＢ１５の場合のように１より高い比が予測される。グラフで示されるように、２種のＰｈ＋ ＡＬＬ株において、およびＢＣＲ−ＡＢＬ ｐ１９０融合物を形質導入したＢＭにおいて、化合物６がそのエナンチオマーより良好に機能した（１より高い比）一方で、３種のＰｈ− ＡＬＬ株は全て、１に近い比を有することが見出された。次に、非感受性株（ＣＣＲＦ）に、ｐ１９０を形質導入したところ、化合物６に感受性になることが見出された。最後に、Ｐｈ＋ ＡＬＬの１次患者サンプルが１より高い比を有することが認められる。このデータは、化合物６の機能の獲得におけるＡｂｌもしくは下流の標的の役割を裏付ける。特に、Ａｂｌキナーゼを欠いているかもしくは核に転移できないＡｂｌの形態のみを発現する細胞は、化合物６による処置に耐性である。このことは、Ａｂｌの核機能が、化合物６のエナンチオマーと比較して化合物６の増大した有効性において役割を果たし得ること、およびＢＣＲ−Ａｂｌ発現が、化合物６のエナンチオマーを超えて、化合物６に対する増強した感度を与えるために十分であることを示唆する。

この研究から導かれ得る別の結論は、化合物６が、アポトーシス促進性タンパク質ＢａｘおよびＢａｋを欠いている細胞において、そのエナンチオマーを超えて増強した活性を保持することである。このことは、化合物６のエナンチオマーと比較して化合物６の増強した活性が、これらタンパク質の活性化に関わらないことを示唆する。化合物６およびそのエナンチオマーは、上記レセプターを発現するＣＨＯ細胞に添加された場合、スフィンゴシン−１−ホスフェートレセプターを活性化しない。純粋なホスフェートがこれらＣＨＯ細胞に添加される場合、複数のＳ１Ｐレセプターは、上記ホスフェートが１〜１０μＭで存在するときに活性化される。Ｓ１Ｐレセプターの活性化にエナンチオマー選択性は存在しない。

図１０ｅ〜１０ｇにおいて、ＢＣＲ−Ａｂｌ＋ ＳｕｐＢ１５白血病細胞株に対する化合物６の効力を研究した。以下でより詳細に記載されるように、チロシンキナーゼインヒビターであるダサチニブ（標準治療）および化合物６の効果は、相加的である。図１０ｅで示されるように、致死的ではない濃度（１μＭ＝０．５×ＩＣ５０）の化合物６を、最大活性用量のダサチニブ（２００ｎＭ；１００ｎＭおよび２００ｎＭのダサチニブが同じように死滅させ、１００ｎＭのダサチニブが１時間でＡｂｌシグナル伝達を止めるという事実に基づく）と合わせる場合、化合物６は、細胞死を増強する。そのＩＣ５０（２μＭ）において、化合物６は、それだけで効率的に殺傷し、殺傷は、ダサチニブの存在下で増強される。図１０ｆは、図１０ｄ上で７２時間の時点からのデータの棒グラフを提供する。１μＭの化合物６（＝０．５×ＩＣ５０）は死滅させない一方で、２μＭ（１×ＩＣ５０）は、７２時間で細胞生存性を有意に減少させる。最大有効用量のダサチニブ（２００ｎＭ）と合わせる場合、１μＭの化合物６は、細胞死を増大させる。ダサチニブを２μＭまで加えると、化合物６は、化合物６単独によって引き起こされるものを超えて、細胞死を増大させる。

最後に、図１０ｇでは、患者由来のＢＣＲ−Ａｂｌ＋急性リンパ芽球性白血病細胞を用いて行った研究の用量応答曲線が提供される。生存性を、９６時間でフローサイトメトリー（生細胞染色排除）によって測定した。化合物６は、ＦＴＹ７２０およびそのエナンチオマーである化合物３９より強力である。結論として、ダサチニブ（ＢＣＲ−Ａｂｌ陽性白血病の成功裡の、しかし疾患は治癒しない治療剤）が、本発明の実施形態に従って、化合物６との組み合わせにおいてより良好に機能する。さらに、化合物６は、化合物６およびダサチニブ両方の薬物が、それらの最大活性用量で使用される場合に、ダサチニブより良好に死滅させる。

次いで、化合物６の活性におけるリン酸化の重要性を試験した。この研究において、化合物６に対してそのエナンチオマーと比較して、白血病細胞と同じ差次的な感度を示すＭＥＦノックアウト系統を使用した（図１０ｈ）。図１０ｉで示されるように、この差異は、ＳｐｈＫ１ヌルＭＥＦにおいて維持される。しかし、化合物６は、ＳｐｈＫ２ヌルＭＥＦの機能的活性の獲得をもはや示さない（図１０ｊ）。このことは、化合物６がＳｐｈＫ２の基質であり、そのリン酸化がその機能にとって重要であり、その抗がん活性に寄与することを示唆する。さらに、図１０ｋで示されるように、化合物６およびそのエナンチオマー（図１０ｋでは３９と標識する）の両方が、細胞ではスフィンゴシンキナーゼ２によってリン酸化されるものの、化合物６のリン酸化は、より効率的である。次いで、化合物６のホスフェートおよびリン酸化可能でないアナログを試験した。図１０ｌで示されるように、両方が白血病細胞を死滅させるが、リン酸化可能でないアナログ（１７７−非リン酸化と標識する）は、化合物６より有効ではない。このことは、上記リン酸化された形態およびリン酸化されていない形態の両方が、抗がん効果に寄与することを示唆する。

次いで、動物に投与した場合に、化合物６に何が起こるかを調べる研究を行った。マウスを、１０ｍｇ／ｋｇ用量の化合物６（ｉ．ｐ．）で処置し、次いで、上記マウスを種々の時点で屠殺し、次いで、血漿、骨髄および脾臓組織を取り出して、曲線を作った。図１０ｍで示されるように、血漿中ではリン酸化形態が優勢である（血漿中でのリン酸化された化合物６：リン酸化されていない化合物６の比率は、＞１０：１である）が、化合物６およびそのリン酸化形態は、骨髄（これは、白血病モデルにおいて疾患が形成される場所である）中ではおよそ等モル量で存在し、ＳｕｐＢ１５のＩＣ５０を上回って存在するようである。実際に、脾臓および骨髄中のリン酸化された化合物６：リン酸化されていない化合物６の比は、ｉ．ｐ．投与後には１：１に近い。総タンパク質に対する正規化は、化合物６が、血中で存在するより高いレベルまで組織中で蓄積することを示唆する。

図１０ｎおよび図１０ｏは、ＢＣＲ−Ａｂｌ＋ ＳＦＯ２細胞の処置の有効性の研究からのデータ結果（１０ｎ）を、化学療法に抵抗性の後期白血病であるＢＣＲ−Ａｂｌ−ＬＡＸ７Ｒ細胞においても同様に（１０ｏ）提供する。図１０ｎで示されるように、ＭＥＫ１インヒビターであるトラメチニブの細胞増殖抑制性濃度と化合物６の細胞増殖抑制性濃度とを合わせると、照射した間質細胞層を死滅させることなく、患者由来の白血病細胞を死滅させる。いくつかのＢＣＲ−Ａｂｌ陰性患者白血病サンプル（図１０ｏ）は、この薬物組み合わせに感受性であるが、それらは、単一の薬剤としての化合物６には感受性ではない。図１０ｏで示されるＢＣＲ−Ａｂｌ陰性白血病の結果に類似して、トラメチニブおよび化合物６の組み合わせは、単一薬剤としての化合物６もしくはトラメチニブで処置した場合には死滅しないヒト結腸がん細胞を死滅させ得る。これら研究は、上昇したＥＲＫ活性が、化合物６への抵抗性を付与し、ＭＥＫ、および従ってＥＲＫの阻害、トラメチニブでのシグナル伝達が、ＢＣＲ−Ａｂｌ陽性がん細胞およびＢＣＲ−Ａｂｌ陰性がん細胞を化合物６に対して感作することを示唆する。
（まとめ）

ＦＴＹ７２０は、スフィンゴシン−１−ホスフェートレセプターに対するその効果に起因して免疫抑制剤として機能する。免疫抑制のために必要とされるものを十分に上回る用量では、ＦＴＹ７２０は、抗新生物作用をも有する。ＦＴＹ７２０の抗がん活性が、部分的に、その栄養素輸送体ダウンレギュレーションを誘発する能力に依存することがここで決定された。栄養素輸送体喪失の引き金となるが、ＦＴＹ７２０のＳ１Ｐレセプター関連の用量を制限する毒性を欠いている化合物の実施形態は、有効かつ選択的抗腫瘍薬剤として使用され得ることが示される。特に、一連のエナンチオマーとして純粋で、立体化学的に多様な、ピロリジンのＯ−置換されたベンジルエーテルが生成され、ヒト白血病細胞を死滅させる能力を有することが示された。そのヒドロキシメチルの立体化学は、上記化合物活性を調製する有効な手段であることが見出された。さらに、この基のリン酸化は、抗白血病活性に必要とされないことが示された。

（均等論）
上記の説明は、多くの本発明の具体的実施形態を含む一方で、これらは、本発明の範囲に対する限定としてではなく、むしろその一実施形態の例として解釈されるべきである。よって、本発明の範囲は、例示される実施形態によってではなく、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物によって決定されるべきである。

Claims (31)

1. 

   を含む化合物であって、ここで：
   Ｒ_１は、アルキル鎖、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、ＣＨＯＨ−アルキル、ＣＨＯＨ−アルキン、および（ＣＨ_２）_ｎＯＭｅから選択される任意選択の官能基であり；
   Ｒ_２は、脂肪族鎖（Ｃ_６−Ｃ_１０）であり；
   Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アジド（Ｎ_３）、エーテル、ＮＯ_２、もしくはシアニド（ＣＮ）を含む、モノ−、ジ−、トリ−もしくはクアッド−芳香族置換基であり；
   Ｒ_４は、Ｒ_１共に任意選択のアルコール（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
   Ｌは、Ｏ−ＣＨ_２であり；
   Ｍｅは、アルキル、アルケンもしくはアルキンであり；
   ｎは、１、２、もしくは３の群から独立して選択される整数であり；そして
   ここでフェニルは該Ｒ_２もしくはＲ_３炭素鎖に沿って移動し得る、
   化合物。
2. ベンジル基が、３位でピロリジン環に結合されている、請求項１に記載の化合物。
3. 前記化合物が、細胞栄養素輸送のダウンレギュレートおよびＰＰ２Ａ活性の刺激から選択される活性化法を有する、請求項１に記載の化合物。
4. 前記化合物の立体化学が、２位でＳかつ４位でＲ、２位でＲかつ４位でＳ、２位でＲとかつ４位でＲ、および２位でＳかつ４位でＳからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
5. ピロリジン基に結合される官能基が、シスもしくはトランスいずれかの相対的配向のうちの一方にある、請求項１に記載の化合物。
6. 前記化合物が、薬学的に受容可能な塩の形態にある、請求項１に記載の化合物。
7. 前記化合物が、リン酸化されている、請求項１に記載の化合物。
8. 前記化合物が、ＦＴＹ７２０と比較した場合、Ｓ１ＰレセプターおよびＳ１Ｐ３レセプターいずれかのうちの少なくとも一方への結合に対して低下した活性を示す、請求項１に記載の化合物。
9. Ｒ_２はＣ_８Ｈ_１７であり、Ｒ_１はＣＨ_２ＯＨである、請求項１に記載の化合物。
10. 障害の処置のための医薬であって、該医薬は、
    

    

    を含む１種またはそれより多くのアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物の治療上有効な量を含む薬学的製剤を含み、ここで：
    Ｒ_１は、アルキル鎖、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、ＣＨＯＨ−アルキル、ＣＨＯＨ−アルキン、および（ＣＨ_２）_ｎＯＭｅから選択される任意選択の官能基であり；
    Ｒ_２は、脂肪族鎖（Ｃ_６−Ｃ_１０）であり；
    Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アジド（Ｎ_３）、エーテル、ＮＯ_２、もしくはシアニド（ＣＮ）を含む、モノ−、ジ−、トリ−もしくはクアッド−芳香族置換基であり；
    Ｒ_４は、Ｒ_１と共に任意選択のアルコール（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
    Ｌは、Ｏ−ＣＨ_２であり；
    Ｍｅは、アルキル、アルケンもしくはアルキンであり；
    ｎは、１、２、もしくは３の群から独立して選択される整数であり；そして
    ここでフェニルは、該Ｒ_２もしくはＲ_３炭素鎖に沿って移動し得る、医薬。
11. 前記ベンジル基が、３位でピロリジン環に結合されている、請求項１０に記載の医薬。
12. 前記化合物の立体化学が、２位でＳかつ４位でＲ、２位でＲかつ４位でＳ、２位でＲかつ４位でＲ、および２位でＳかつ４位でＳからなる群より選択される、請求項１０に記載の医薬。
13. ピロリジン基に結合される官能基が、シスもしくはトランスいずれかの相対的配向のうちの一方にある、請求項１０に記載の医薬。
14. 前記化合物が、薬学的に受容可能な塩の形態にある、請求項１０に記載の医薬。
15. 前記化合物が、リン酸化されている、請求項１０に記載の医薬。
16. Ｒ_２はＣ_８Ｈ_１７であり、Ｒ_１はＣＨ_２ＯＨである、請求項１０に記載の医薬。
17. 前記医薬が、がん、白血病、糖尿病および肥満症からなる群より選択される障害の処置に指向される、請求項１０に記載の医薬。
18. 前記医薬が、経口投与、非経口投与および経皮投与からなる群より選択される投与形態のために製剤化されている、請求項１０に記載の医薬。
19. 前記化合物が、細胞栄養素輸送のダウンレギュレーションおよびＰＰ２Ａ活性の刺激から選択される活性化の様式を有する、請求項１０に記載の医薬。
20. 前記化合物が、ＦＴＹ７２０と比較した場合に、Ｓ１ＰレセプターおよびＳ１Ｐ３レセプターのうちの少なくとも一方への結合に対して低下した活性を示す、請求項１０に記載の医薬。
21. 患者において疾患を処置するための方法であって、該方法は、
    少なくとも一部は細胞栄養素ダウンレギュレーションによる処置に感受性のある障害を有する患者を診断する工程；および
    細胞栄養素輸送を少なくともダウンレギュレートすることにおいて有効な１種またはそれより多くのアザサイクリック拘束ＦＴＹ７２０アナログ低分子化合物の治療的量を投与する工程を含み、ここで該低分子化合物は、
    

    

    を含み、ここで：
    Ｒ_１は、アルキル鎖、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、ＣＨＯＨ−アルキル、ＣＨＯＨ−アルキン、および（ＣＨ_２）_ｎＯＭｅから選択される任意選択の官能基であり；
    Ｒ_２は、脂肪族鎖（Ｃ_６−Ｃ_１０）であり；
    Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アジド（Ｎ_３）、エーテル、ＮＯ_２、もしくはシアニド（ＣＮ）を含む、モノ−、ジ−、トリ−もしくはクアッド−芳香族置換基であり；
    Ｒ_４は、Ｒ_１と共に任意選択のアルコール（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
    Ｌは、Ｏ−ＣＨ_２であり；
    Ｍｅは、アルキル、アルケンもしくはアルキンであり；
    ｎは、１、２、もしくは３の群から独立して選択される整数であり；そして
    ここでフェニルは、Ｒ_２もしくはＲ_３炭素鎖に沿って移動し得る、方法。
22. ベンジル基が、３位でピロリジン環に結合されている、請求項２１に記載の方法。
23. 前記化合物の立体化学が、２位でＳかつ４位でＲ、２位でＲかつ４位でＳ、２位でＲかつ４位でＲおよび２位でＳかつ４位でＳからなる群より選択される、請求項２１に記載の方法。
24. ピロリジン基に結合される官能基が、シスもしくはトランスいずれかの相対的配向のうちの一方にある、請求項２１に記載の方法。
25. 前記化合物が、薬学的に受容可能な塩の形態にある、請求項２１に記載の方法。
26. 前記化合物が、リン酸化されている、請求項２１に記載の方法。
27. Ｒ_２はＣ_８Ｈ_１７であり、Ｒ_１はＣＨ_２ＯＨである、請求項２１に記載の方法。
28. 前記方法が、がん、白血病、糖尿病および肥満症からなる群より選択される障害の処置に指向される、請求項２１に記載の方法。
29. 前記投与する工程が、経口投与、非経口投与および経皮投与からなる群より選択される投与形態にある、請求項２１に記載の方法。
30. 前記化合物が、ＰＰ２Ａ活性を刺激する、請求項２１に記載の方法。
31. 前記化合物が、ＦＴＹ７２０と比較した場合に、Ｓ１ＰレセプターおよびＳ１Ｐ３レセプターのうちの少なくとも一方への結合に対して低下した活性を示す、請求項２１に記載の方法。

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