JP2016526564A - ストレプトコッカス ニューモニエ１型に対する合成ワクチン - Google Patents

ストレプトコッカス ニューモニエ１型に対する合成ワクチン Download PDF

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Abstract

本発明は、ストレプトコッカス ニューモニエ１型の莢膜ポリサッカライドに含まれるサッカライド構造の全合成に関し、全合成によって得られる前記サッカライド構造を含む複合糖質に関し、および、細菌の莢膜ポリサッカライドにおいて前記サッカライド構造を含む細菌、より特別にはストレプトコッカス ニューモニエと関連する疾患に対する免疫における当該複合糖質および当該複合糖質の医薬組成物の使用に関する。

Description

発明の詳細な説明
［発明の分野］
本発明は、ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｐｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１型の莢膜ポリサッカライドに含まれるサッカライド構造の全合成に関し、全合成によって得られる前記サッカライド構造を含む複合糖質に関し、および、細菌と関連する疾患に対する、特に、ストレプトコッカス ニューモニエと関連する疾患に対する免疫付与における当該複合糖質および当該複合糖質の医薬組成物の使用に関する。
［発明の背景］
グラム陽性被包性細菌ストレプトコッカス ニューモニエは、世界中で疾病および死亡の主な要因になる。それらは、上気道にコロニーをつくり、髄膜炎、菌血症、および菌血症性肺炎のような侵襲性肺炎球菌疾患、および急性中耳炎および肺炎を含む非侵襲性肺炎球菌疾患の原因となる。これらの疾患は、若い子供、高齢者、および全ての年齢の免疫障害をもつ人によく見られる。発展途上国において、ストレプトコッカス ニューモニエ関連疾患は、推定１２０万人の若い子供達の死亡原因になる。
構造的に、３つの区別された層：細胞膜、細胞壁、および莢膜を細菌表面で見ることができる。細胞壁は、細胞壁ポリサッカライド（Ｃ−ポリサッカライド）および莢膜ポリサッカライド（ＣＰＳ）を固定するペプチドグリカン骨格からなる。Ｃ−ポリサッカライドは、全ての肺炎球菌血清型に共通の構造であり、一方ＣＰＳは、９０個の公知の血清型のそれぞれに特異的であり、主な毒性因子になる。
９０個の血清型から、世界中で発見される最も共通の一般的な血清型を、図１に示す。この分布は、地理学および年齢差に基づいても変化する。したがって、最も一般的で普及しているストレプトコッカス ニューモニエ血清型の莢膜ポリサッカライド由来の免疫原性担体およびサッカライド構造を含む複合糖質を含むワクチンは、グラム陽性細菌のクラスによって引き起こされる高い割合の疾患に対して免疫を提供するだろう。
種々の多価肺炎球菌ワクチンが現在まで製造された。市販の２３−多価肺炎球菌ポリサッカライドワクチン（ＰＰＶ）は、２３血清型の精製された莢膜ポリサッカライド（ＣＰＳ）抗原を含む。しかしながら、このワクチンは、乳児および幼児の場合では効果的ではない。現在市販される肺炎球菌共役ワクチン（ＰＣＶ）、ＰＣＶ−７（プレベナーＴＭ）は、ジフテリアＣＲＭ９１７に、個々に共役される血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆの莢膜抗原であるサッカライドを含み、乳児に効果的である。
現在市販されているワクチンは、北アメリカおよびヨーロッパにおいて特定の年齢の個人に効果的である。これらのワクチンの製造過程は、複雑であり結果として高価になる。したがって、ワクチンは、ほとんどの発展途上国には手が届かない。本発明の目的は、発展途上世界の一般的な血清型の多くを含む手ごろな価格の合成サッカライドワクチンを提供することである。
ストレプトコッカス ニューモニエ１型（ＳＰ１）は、最も一般的なＳ．ニューモニエ血清型の一つである。ストレプトコッカス ニューモニエ１型莢膜ポリサッカライドは、繰り返しユニットとして：［→３］−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→］を有する線状ポリマーである。
ストレプトコッカス ニューモニエ１型莢膜ポリサッカライドの［→３］−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→］トリサッカライドの繰り返しユニットに由来する合成サッカライド構造は、すでに報告された。しかしながら、Ｂｕｎｄｌｅ（Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１０，１６，３４７６）によって開発された方法は、α−メトキシサッカライドを提供し、免疫原性担体への共役には適切ではない。
本発明の目的は、リンカーを有する機能化されたサッカライド構造にアクセスするための改良された合成経路を提供することであり、前記サッカイライド構造は、ストレプトコッカス ニューモニエ１型莢膜ポリサッカライドの［→３］−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→］トリサッカライドの繰り返しユニットに由来する。前記サッカライド構造は、リンカーと共に機能化されているので、免疫原性担体に共役されるのに適しているという利点を有する。したがって、本発明の目的は、細菌の莢膜ポリサッカライドにおいて次の構造：α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ、α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ、α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ、α−Ｄ−ＧａｌＡｐ、α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ、α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ、α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ、α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐの一つを含む細菌と関連する疾患に対する免疫付与のために、前記複合糖質を含む複合糖質、および医薬組成物を提供することである。一般式（Ｉ）のサッカライド、および／または一般式（ＩＩ）の中間体、および／または本発明に係る複合糖質を含む医薬組成物は、細菌と関連する疾患、特にストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｐｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）と関連する疾患に対する免疫において使用するためであり、前記疾患は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症並びに慢性気管支炎、副鼻腔炎、関節炎および結膜炎の急性憎悪を含む。
本発明の目的は、独立請求項の教示によって解決される。本発明のさらに有利な特徴、態様および詳細は、本出願における独立請求項、明細書、図面および実施例から明らかである。
［発明の説明］
［定義］
本願で使用される用語「リンカー」は、免疫原性担体、または固体支持体と、サッカライドの還元末端モノサッカライドとを、任意選択的に少なくとも一つの内部連結分子に結合することによって、連結することが可能な分子断片を含む。したがって、リンカー自体の機能、または内部連結分子と共にリンカーの機能は、還元末端モノサッカライドと、免疫原性担体または固体支持体との間の特別な距離を定め、保ち、および／または架橋することである。より明確に、リンカーの一方の末端は、還元末端モノサッカライドのアノマー中心で環外酸素原子に連結され、他方の末端は、免疫原性担体または固体支持体と、内部連結分子と共にまたは直接、硫黄原子を介して連結される。
本願で使用される用語「内部連結分子」は、官能基Ｘおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、官能基Ｘは、リンカーＡにおける末端チオール基と反応することが可能であり、官能基Ｙは、免疫原性担体に、または固体支持体に結合することが可能である。図２は、市販の内部連結分子の例を表示するが、その内部連結分子に限定されず、内部連結分子を本願に表示される実施例に本発明にしたがって使用することができる
本願で使用される用語「アジュバント」は、免疫学的アジュバント、すなわち、ワクチンに抗原的に関連しているのではなく、与えられた抗原に対してワクチンに含まれる免疫応答を高めることによって、前記ワクチンの効果を改善する、または増強させる、ワクチン組成物に使用される物質に関する。当業者にとって、古典的に認識されるアジュバントの例は、次を含む。
無機物含有組成物−カルシウム塩およびアルミニウム塩（またはそれらの混合物）を含む組成物を含む。カルシウム塩は、リン酸カルシウムを含む。アルミニウム塩は、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩等、任意の適切な形（例えば、ゲル、結晶性、非晶質など）をとる塩と共に含む。これらの塩への吸着が好ましい。無機物含有組成物は、金属塩の粒子としても調製されてもよい。水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムのような公知のアジュバントを使用してもよい。本発明は、アジュバントとして一般的に使用される「水酸化物」、または「リン酸塩」のいずれかのアジュバントを使用されることができる。「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的にアルミニウムオキシ水酸化物塩であり、通常少なくとも部分的に結晶である。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的にリン酸水酸化アルミニウムであり、少量の硫酸塩（すなわち、リン酸水酸化硫酸アルミニウム）もよく含む。それらは沈殿によって得られてもよく、沈殿中の反応条件および濃度は、塩におけるヒドロキシルのリン酸への置換の度合いに影響を与える。水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムの混合物を、本発明に係る製剤化において使用することができる。
−サポニン、サポニンは、多種多様な植物種の樹皮、葉、茎、根及び花でも発見されるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種の群である。クイライア サポナリア モリナ（Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の木の樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。サポニンを、スミラックス オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、ジプソフィラ パニキュラータ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライズベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））およびサポナリア オフィシアナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ）（ソープルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から商業的にも得ることができる。サポニンアジュバント製剤は、ＱＳ２１のような精製製剤および、例えばＩＳＣＯＭのような脂質製剤を含む。サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製されている。これらの技術を使用する特定の精製画分が同定されており、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む。サポニン製剤は、コレステロールのようなステロールも含んでもよい。サポニンとコレステロールとの組合せを、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる特有の粒子を形成するために使用できる。ＩＳＣＯＭは、例えばホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質を一般的に含む。任意の公知のサポニンをＩＳＣＯＭにおいて使用できる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１つ以上を含む。
−生分解性及び非毒性である材料から形成される微粒子（すなわち、直径１００ｎｍ〜１５０ｐｍ、より好ましくは直径２００ｎｍ〜３０ｐｍ、または直径５００ｎｍ〜１０ｐｍ）。当該非毒性および生体分解性材料は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンを含むが、それらに限定されない。
−ＣＤ１ｄリガンド、例えばα−グリコシルセラミド、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００［（２ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール）、ＣＲＯＮＹ−１０１、３’’−スルホ−ガラクトシルセラミドなど。
−免疫刺激性オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧモチーフ含有オリゴヌクレオチド（グアノシン残基に結合されるリン酸結合によって連結される非メチル化シトシン残基を含有するジヌクレオチド配列）、またはＣｐＩモチーフ含有オリゴヌクレオチド（イノシンに連結されるシトシンを含むジヌクレオチド）、または二本鎖ＲＮＡ、またはパリンドローム配列を含むオリゴヌクレオチド、またはポリ（ｄＧ）配列を含むオリゴヌクレオチドなど。免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾のようなヌクレオチド修飾／アナログを含むことができ、二本鎖または（ＲＮＡを除いて）一本鎖であることができる。
−リン酸含有非環式骨格に結合される脂質を含有する化合物、例えばＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４など
−オイルエマルジョン（例えば、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバント）
理論的に、免疫学的事象のカスケードにおいて特定の状況を支持する、または増幅することができ、最終的により顕著な免疫学的応答につながる、各分子または物質をアジュバントとして定義することができる。
原理上は、ワクチン製剤においてアジュバントを使用して、
−ワクチンにとって適切な、または所望の免疫応答に向ける、および最適化することができる、
−ワクチンの粘膜投与、すなわち、口腔、または胃内、または肺上皮、および関連したリンパ系組織とワクチンとの接触の結果として起こる投与、を可能にすることができる、
−細胞媒介免疫応答を促進することができる、
−高純度抗原または組換え型抗原のような弱くなった免疫原の免疫原性を高めることができる、
−防御免疫を提供するための必要とされる免疫付与の頻度または抗原量を減少させることができる、および
−新生児、老人、免疫力がないワクチン接種者のような、減少した、または弱くなった免疫応答を有する個人においてワクチンの効果を改善することができる。
アジュバントの作用機構についてはほとんど知られていないけれども、アジュバントは、次のメカニズムの一つによって免疫応答を増加させることが現在信じられている。
−抗原の生物学的または免疫学的半減期を増加させる、
−抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）への抗原輸送、並びに抗原処理および抗原提示を、ＡＰＣによって、例えば、ＡＰＣによって抗原−アジュバント複合体の接種後、抗原がエンドソーム膜を超えて細胞質ゾルに入ることを可能にすることによって、を改善する、
−ストレス細胞または損傷細胞から危険誘導シグナルを模倣し、危険誘導シグナルは免疫応答を開始するのに役立つ、
−免疫調節サイトカインの産生を誘導する、
−免疫システムの特定の一部分に対する免疫応答を付勢する、および
−抗原チャレンジの急速分散を阻止する。
サッカライドは、ＴＩ−２（Ｔ細胞非依存性−２）抗原、および低い免疫原性として当業者に公知である。したがって、サッカライドに基づくワクチンを生成するために、前記サッカライドは、免疫原性担体に共役され複合糖質を提供し、サッカイライドと比較して増加した免疫原性を示す。これに関連して、用語「免疫原性担体」は、構造として定義され、複合糖質を形成するためにサッカライドに共役され、サッカライド自体と比較して増加した免疫を示す。したがって、サッカライドの免疫原性担体への共役は、前記免疫原生担体に対する免疫応答を誘導することなく、前記サッカライドに対する免疫応答を刺激する効果を有する。
本願で使用される用語「Ｏ−グリコシド結合」は、糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３のアノマー炭素（すなわち、炭素Ｃ−１）を糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ２または−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に酸素原子を介して連結する共有結合に関する。糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３のアノマー炭素が、−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結される場合、酸素原子は、断片−Ｏ−Ａ−ＳＨの末端酸素原子である。糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３のアノマー炭素が、他の糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３に連結される場合、酸素原子は、糖断片Ｓ１における３位の酸素原子、または糖断片Ｓ２における３位における酸素原子、または糖断片Ｓ３の４位における酸素原子である。言い換えると、本発明に係るサッカライドは、−Ｏ−Ｏ−結合、または糖断片のアノマー炭素またはＣ−１炭素を介して、互いに連結される、または結合される糖断片を含まない。
したがって、本発明は下記一般式（Ｉ）のサッカライド、およびこれらのサッカイライドの薬学的に許容できる塩に関し：
式中、Ａはリンカーであり；
Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して、次の糖断片の一つを表し：
ここで、前記糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、前記一般式（Ｉ）において多くて１回存在し、糖断片Ｓ１は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ３に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ３は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ２に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ２は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ１に同時に連結されることができず、ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで前記整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である。
各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、前記一般式（Ｉ）において多くて１回存在するとは、Ｍ、Ｎ、およびＰのそれぞれは、Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３の一つを表さなければならず、糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３のどれもが２度選択させることはできないことを意味する。したがって、ＭがＳ１である場合、ＮはＳ２およびＳ３からのみ選択されることができるがＳ１を表すことはできず、ＭがＳ１であり、ＮがＳ２である場合、ＰはＳ３だけであることができる。
用語「同時に連結されることができず」は、直接的な連結に関する。「直接的な連結」は、例えば、糖断片Ｓ１は断片−Ｏ−Ａ−ＳＨに直接的に連結される場合、糖断片Ｓ１は、当該アノマー炭素原子を介して断片−Ｏ−Ａ−ＳＨに連結され、他の糖断片（例えばＳ３等）を介して断片−Ｏ−Ａ−ＳＨに間接的に連結されないことを意味する。各糖断片Ｓ１またはＳ２またはＳ３は、点線によって示される２つの位置を介して連結されることができる。１つの位置は、アノマー炭素Ｃ−１であり、断片−Ｏ−Ａ−ＳＨの酸素に、または他の糖断片の点線を有する酸素原子に連結されることができる。各糖断片Ｓ１、またはＳ２またはＳ３の点線を有する酸素は、断片−Ｏ−Ａ−ＳＨに連結されることはできず、水素原子に（末端糖断片の場合）、または他の糖断片のアノマー炭素Ｃ−１に連結されるだけである。しかしながら、糖断片および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片を共に連結する場合、本願で開示された例外を考慮しなければならない。
したがって、本発明の範囲の下では、下記一般式（Ｉａ）のサッカライド、
式中、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ２＝１およびｎ１＝ｎ３＝０；
および、下記一般式（Ｉｂ）のサッカライド
式中、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ３＝１およびｎ１＝ｎ２＝０；
および、一般式（Ｉｃ）のサッカライド
式中、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ３＝１およびｎ１＝ｎ２＝０、
並びに、これらのサッカライドの薬学的に許容できる塩になる。
言い換えると、本発明は、下記一般式（Ｉ）のサッカライドおよびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩に関し、
式中、Ａはリンカーであり；
ＰはＳ１を表し、ＮはＳ３を表し、ＭはＳ２を表し；
または、
ＰはＳ３を表し、ＮはＳ２を表し、ＭはＳ１を表し；
または、
ＰはＳ２を表し、ＮはＳ１を表し、ＭはＳ３を表し；
および、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、または、ｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、または、ｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、または、ｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、または、ｎ２＝１およびｎ１＝ｎ３＝０、または、ｎ３＝１およびｎ１＝ｎ２＝０であり、
式中、Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、次に定義される糖断片であり、
および、糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結される。
好ましくは、ｎ１、ｎ２、およびｎ３の多くても一つは、０またはｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１であり、さらにより好ましくはｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１である。さらに、糖Ｓ１を含む一般式（Ｉ）のサッカライドが好ましい。したがって、一般式（Ｉ）は次の糖：Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、および好ましくはＨ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、およびＨ−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、を表すと好ましい。
特に好ましい一般式（Ｉ）のサッカライドは、
であり、
Ａはリンカーとして定義され、断片−Ｏ−Ａ−ＳＨの一部分である。したがって、リンカーＡは、酸素原子およびＳＨ基に結合され、一方、酸素原子およびＳＨ基は、リンカーＡの異なる炭素原子に結合される。リンカーの少なくとも２つの炭素原子は、酸素原子およびＳＨ基の間に−Ｏ−Ｃ−Ｃ−ＳＨのようにある。
リンカーＡは、２〜２０個の炭素原子（任意の側鎖の炭素原子を含む）、より好ましくは２〜１８個、より好ましくは２〜１６個、より好ましくは２〜１４個、より好ましくは２〜１２個、さらにより好ましくは２〜１０個の炭素原子を含む。
酸素（すなわち、−Ｏ−Ａ−ＳＨの酸素）およびＳＨ基の間の最も短い原子鎖は、好ましくは、２〜１４個の原子、より好ましくは２〜１２個の原子、より好ましくは２〜１０個の原子、より好ましくは２〜８個の原子からなる。最も短い鎖（最も短い鎖は、酸素およびＳＨ基の間の最も短い可能な連結である）は、２〜５個の原子からなり、原子は好ましくは炭素原子である。最も短い鎖が４〜８個の原子からなる場合、鎖は、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含んでもよい。最も短い鎖が９〜１４個の原子からなる場合、鎖は、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１、２、３、４、５、または６個のヘテロ原子を含んでもよい。最も短い鎖が０、１、または２個の硫黄原子、および／または０、１、２個の窒素原子、および／または０、１、２、または３個の酸素原子を含むと好ましい。４個より多い酸素原子が存在する場合、好ましくは他のヘテロ原子は存在しない。
リンカーＡ、または最も短い鎖は、完全に、または部分的にフッ素化されていても好ましい。リンカーＡは、４員環、もしくは５員環、もしくは６員環の飽和炭素環、または６員環の部分的に不飽和（芳香族ではない）の炭素環、または４員環、もしくは５員環、もしくは６員環の飽和の酸素ヘテロ環、または４員環、もしくは５員環、もしくは６員環の飽和の窒素ヘテロ環を含んでもよい。
リンカーＡは、アミド（−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−）残基および／またはウレア（−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−）残基も含んでもよく、好ましくは一つのアミドまたはウレア残基のみ含んでもよい。リンカーは置換基も含んでもよく、好ましくは、Ｒ１のような１つの置換基、またはＲ１およびＲ２のような２つの置換基も含んでもよく、置換基は本願で定義される通りの意味を有し、好ましくは、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２Ｈ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨＡｃ、−ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ（Ｃ２Ｈ５）、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、および−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３から選択される。
リンカーがフッ素化されている場合、２個を超える置換基がＦであると好ましい。
酸素ヘテロ環が存在する場合、酸素ヘテロ環の各炭素原子は、ヒドロキシ基（−ＯＨ）によって置換されてもよい。したがって、５員環の酸素ヘテロ環は、１個または２個のヒドロキシ基を含んでもよく、６員環の酸素ヘテロ環は、１個または２個、または好ましくは３個のヒドロキシ基を含んでもよい。
リンカーＡは、−Ａａ−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、または−Ａａ−Ａｂ−Ａｄ−として定義され、好ましくは１個、２個、３個または４個の次の断片、より好ましくは１個、２個、３個の次の断片を含み、
−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−、−（ＣＨ２）Ｏ３−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ｓ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ｏ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）Ｏ１−ＮＨ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）Ｏ１−ＮＡｃ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−Ｃ２Ｈ４−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−、−（ＣＨ２）ｑ１−、−（ＣＲ１６Ｒ１７）ｑ１−、−（ＣＨ２）ｑ１−ＮＨＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｑ１−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、
ここで、上述の残基の二つのヘテロ原子は、基−Ｓ−が基−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−に連結されないように、共に連結されず；
ｐ２、Ｏ２、Ｏ３は、互いに独立して、
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される整数であり、
ｐ１、ｑ１、Ｏ１、Ｏ４は、互いに独立して、
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される整数であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１６、およびＲ１７は、互いに独立して、
−Ｈ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２Ｈ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＡｃ、−ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ（Ｃ２Ｈ５）、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、および−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３を表す。
本発明に係るリンカーＡは、
−Ａａ−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、または−Ａａ−Ａｂ−Ａｄ−、または−Ａａ−Ａｄ−、または−Ａａ−を表し、
ここで、
Ａａは、−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ３、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ３−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ３−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−Ｓ−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−Ｏ−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−ＮＨ−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｓ−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｓ−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ３−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｏ−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｏ−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ３−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−ＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−ＮＨ−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ３−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ３−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４−、
を表し、
Ａｂは、−（ＣＨ２）ｐ１−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−Ｓ−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ２−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−Ｏ−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ２−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−ＮＨ−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ３−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ２−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ３−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ２−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ３−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ１５−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｐ１−（ＣＲ９Ｒ１０）ｐ２−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｐ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１８）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１８）−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１９）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−Ｃ２Ｈ４−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−、
を表す。
Ａｃは、−（ＣＨ２）ｑ１−、−（ＣＲ１６Ｒ１７）ｑ１−、−（ＣＨ２）ｑ１−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｑ１−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−
を表す。
Ａｄは、−（ＣＨ２）ｍ１−、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｍ１−、−ＣＨ２−Ｓ−Ｃ（ＣＨ２）ｍ１、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（ＣＨ２）ｍ１−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｍ１−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｍ２−、−（ＣＨ２）ｍ１−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｍ２−、 −（ＣＲ１３Ｒ１４）ｍ２−（ＣＨ２）ｍ１−、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｍ１−（ＣＨ２）ｍ２−、−（ＣＨ２）ｍ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｍ１−、
を表す。
Ｒ１〜Ｒ１４、Ｒ１６およびＲ１７は、互いに独立して、−Ｈ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣ３Ｈ７、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−シクロ−Ｃ７Ｈ１３、−シクロ−Ｃ８Ｈ１５、−ＣＨ２−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−Ｃ（シクロ−Ｃ６Ｈ１１）３、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ５Ｈ１１、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ６Ｈ１３、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ７Ｈ１５、−Ｃ８Ｈ１７、−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ３、−Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２Ｈ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ１５、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ２２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ２３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ２４、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ２５、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＲ１５Ｒ２２、−ＮＨＲ１５、−ＮＨＲ２２、−ＮＨＲ２３、−ＮＨＲ２４、−ＮＨＲ２５、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２４、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２５、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１５、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２２、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２４、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２５、を表す。
Ｒ１５、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、およびＲ２５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ５Ｈ１１、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ６Ｈ１３、−Ｃ３Ｈ６−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（ＣＨ３）３、を表し、
Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、およびＲ２１は、互いに独立して、−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＣＨ２−ＳＣＨ３、−ＣＨ２−ＳｅＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−ＯＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−ＳＣＨ３、−Ｃ２Ｈ４−ＳｅＣＨ３、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＯＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−Ｐｈ、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）（Ｃ２Ｈ５）、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＨ２−ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ３、を表し、
ｐ２、ｐ３、Ｏ２、Ｏ３は、互いに独立して、
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される整数であり、
ｐ１、ｑ１、Ｏ１、Ｏ４、ｍ１、ｍ２は、互いに独立して、
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される整数である。
好ましくは、リンカーＡは残基−Ａａ−を表す。
−Ａａ−は、好ましくは、直鎖の炭素鎖であり、または
から選択される飽和炭素環である。
更に好ましくは、リンカーＡは、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｄ−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｄ−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、（ＣＲ１Ｒ２）０１−Ａｂ−Ａｄまたは−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｄ−を表し、ここで、Ａｂ、Ａｃ、およびＡｄは、本願に定義される通りの意味を有し、Ｒ１およびＲ２は、本願に定義される通りの意味を有し、好ましくは互いに独立して、−Ｈ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２Ｈ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＡｃ、−ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ（Ｃ２Ｈ５）、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、および−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３を表す。
Ａｂは、一般的に、特に上記の一般式−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｄ−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｄ−を表し、好ましくは次の残基：−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ１５、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ１８）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−Ｃ２Ｈ４−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｐ１−の一つを表し、ここで、置換基Ｒ１５、およびＲ１８は、本願に定義される通りの意味を有し、好ましくは、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−Ｃ３Ｈ７である。
Ａｃは、一般的に、特に上記の一般式−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、および−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−を表し、好ましくは、次の残基：−（ＣＨ２）ｑ１、
の一つを表す。
Ａｄは、一般的に、特に上記の一般式−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｄ−、−（ＣＨ２）Ｏ１−Ａｄ−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｂ−Ａｄ−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ａｄ−を表し、好ましくは次の残基：
の一つを表す。
リンカー単独の、または相互接続分子と共にリンカーの機能は、免疫原性担体、または固体支持体にサッカライドの還元末端を共有的に結合することである。本発明に係る相互接続分子は、官能基Ｚおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、官能基Ｘは、リンカーＡにおける末端チオール基と反応することが可能であり、官能基Ｙは、免疫原性担体に、または固体支持体に結合することが可能である。したがって、本発明は、式（Ｉ）のサッカライドに関し、ここで、リンカー自体、または相互接続分子共にリンカーは、モノサッカライドの還元末端と免疫原性担体または固体支持体との間の空間的な距離を設立する、保つ、および／または架橋することが可能である。
本発明に係る好ましい実施形態において、リンカー−Ａ−は、−Ａａ−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−を表す。好ましくは、断片−Ａａ−Ａｂ−Ａｃ−Ａｄ−は次の断片から選択される：
他の好ましい実施形態は、一般式（Ｉ）のサッカライドに関し、式中、リンカーＡは、−Ａａ−Ａｂ−Ａｄ−を表す。好ましくは、断片−Ａａ−Ａｂ−Ａｄ−は次の断片
から選択される。
好ましくは、リンカーＡは、−Ａａ−Ａｄ−を表し、より好ましくは、断片−Ａａ−Ａｄ−は次の断片
から選択される。
好ましくは、リンカーＡは、−Ａａ−を表し、ここで−Ａａ−は、
、−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ３−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−（ＣＲ５Ｒ６）Ｏ３−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ３−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ１−、−（ＣＨ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−Ｓ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−Ｏ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＨ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−ＮＨ−（ＣＨ２）Ｏ４−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｓ−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｏ−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−ＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４、または−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４、
から選択される。
好ましい実施形態において、置換基Ｒ１〜Ｒ１４、Ｒ１６およびＲ１７は、
−Ｈ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＲ１５Ｒ２２、−ＮＨＲ１５、−ＮＨＲ２２、−ＮＨＲ２３、−ＮＨＲ２４、−ＮＨＲ２５、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２４、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２５、から選択される。
リンカーとしてさらにより好ましくは、−Ａ−は、−Ａａ−を表す。好ましくは、断片−Ａａ−は、次の意味：−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−、−（ＣＨ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−（ＣＨ２）Ｏ３、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ２−（ＣＲ１Ｒ２）−（ＣＨ２）Ｏ１−、−（ＣＨ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−Ｓ−（ＣＨ２）Ｏ４、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｓ−（ＣＨ２）Ｏ４、−（ＣＨ２）Ｏ１−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ２−Ｏ−（ＣＨ２）Ｏ４、−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｏ−（ＣＨ２）Ｏ４、または−（ＣＲ１Ｒ２）Ｏ１−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲ３Ｒ４）Ｏ４、
を有し、
式中、
Ｏ１およびＯ４は、１、２、３、４、５、６、から選択される整数であり、
Ｏ２およびＯ３は、０、１、２、３、４、５、６、から選択される整数であり、
置換基Ｒ１〜Ｒ６は、
−Ｈ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＣＨ２−ＯＣＨ３、−ＳＣＨ３、−ＳＣ２Ｈ５、−ＮＨＲ１５、−ＮＨＲ２２、−ＮＨＲ２３、−ＮＨＲ２４、−ＮＨＲ２５、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１５、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２４、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２５、から選択される。
本発明に係るリンカーＡは、文献に記載される手順にしたがって、当業者によって簡単に利用されることができる。
さらに、本発明は式（Ｉ）の合成のサッカライドに関し、ここで、リンカーは、一般式（Ｉ）におけるサッカライドの還元末端モノサッカライドを、チオール基を介して免疫原性担体と、または固体支持体と、任意に少なくとも一つの更なる相互接続分子に結合することにより、連結することが可能な分子断片である。より明確に、リンカーの一つの末端は、還元末端モノサッカライドのアノマー中心で、環外の酸素原子に連結され、他の末端は、相互接続分子と硫黄原子を介して連結される、または硫黄原子を介して免疫原性担体もしくは固体支持体と直接連結される。
本発明の化合物は、塩基および／または酸置換基を有し、有機もしくは無機酸、または有機もしくは無機塩基を用いて塩を形成してもよい。当該酸付加塩形成のための適切な酸の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンフルスルホン酸、キナ酸、マンデル酸、Ｏ−メチルマンデル酸、水素−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−Ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、（Ｏ、ｍ、ｐ）−トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、および当業者に公知の他の無機酸、またはカルボン酸である。塩は、従来の方法で塩を生成するために、十分な量の所望の酸と遊離塩基形を接触させることによって調製される。
適切な無機塩、または有機塩の例は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギニン等である。塩は、当技術分野で公知の方法を用いて従来の方法で、例えば、一般式（Ｉ）の化合物を有する溶液を、上述の群から選択される酸の溶液と処理することによって、調製されてもよい。
さらに、本発明の化合物は、塩基性基および酸性基を同時に有することも可能である。さらに、これらの塩基性基および酸性基は、互いに近接して存在するようにしてあって、酸性基から塩基性基へ分子内プロトン移動を可能にするということも起こってもよい。したがって、本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、両性イオンであってもよく、少なくとも例えば、一つの−Ｏ−および一つの−ＮＨ３＋基を有する。
したがって、本発明は、下記一般式（Ｉ）のサッカライドおよびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩に関し、
式中、Ａはリンカーであり；
Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して、次の糖断片の一つを表し：
ここで、各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、前記一般式（Ｉ）において多くて１回存在し、糖断片Ｓ１が存在する場合、当該アノマー炭素は、−Ｏ−Ａ−ＳＨにのみ、または糖断片Ｓ３の４位で酸素原子にのみ連結されることができ、糖断片Ｓ２が存在する場合、当該アノマー炭素は、−Ｏ−Ａ−ＳＨにのみ、または糖断片Ｓ１の３位で酸素原子にのみ連結され、糖断片Ｓ３が存在する場合、当該アノマー炭素は、−Ｏ−Ａ−ＳＨにのみ、または糖断片Ｓ２の３位で酸素原子にのみ連結されることができ、
ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である。
一般式（Ｉ）のサッカライドのために本願に開示される通り、同じ連結は、中間体として本願で名付けられている一般式（ＩＩ）のジスルフィド（すなわち、二量体サッカライド）にも適用する。
したがって、本発明の範囲の下で含まれるのは、一般式：Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨのトリサッカライド、一般式：Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨのジサッカライド、および一般式：Ｈ−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−ＳＨ、Ｈ−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−ＳＨのモノサッカライドであり、式中、Ａはリンカーとして定義される。
本出願における好ましい実施形態は、下記一般式（Ｉ）のサッカライド、およびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩に関し
式中、Ａは上記に定義されるリンカーであり、
ＰはＳ１を表し、
ＮはＳ３を表し、
ＭはＳ２を表し、
糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、糖断片Ｓ２は、糖断片Ｓ１に連結されることはできず、および、
ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である。
言い換えると、本発明の好ましいサッカライドは、下記一般式（Ｉ）のサッカライドであり、
式中、Ａは上記に定義されるリンカーであり、
ＰはＳ１を表し、
ＮはＳ３を表し、
ＭはＳ２を表し、
糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、および
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ１＝０およびｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝０およびｎ３＝１である。
本発明のさらに他の好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）に係る化合物は、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）−（１→３）−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）
２−メルカプトエタニル Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）−（１→３）−Ｏ−（２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）−（１→３）−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）−（１→３）−Ｏ−（２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシド）、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）−（１→３）−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート）−（１→３）−Ｏ−（２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシド）、
２−メルカプトエタニル Ｏ−（２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシド）、
を含む、からなる群から選択される。
［化学合成］
本発明の他の態様は、下記一般式（Ｉ）のサッカライドの合成に関して、
式中、Ａはリンカーであり；
Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して、次の糖断片の一つを表し：
ここで、糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、一般式（Ｉ）において多くて１回存在し、糖断片Ｓ１は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ３に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ３は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ２に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ２は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ１に同時に連結されることができず、ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１であり、
次のステップ：
Ａ１）下記一般式である化合物４を得るために、
式中、Ｐ１〜Ｐ４は上述のように定義され、
式
である化合物２を、
式
である化合物３と反応させること、
ここで、化合物２の式中、Ｐ１〜Ｐ３は保護基を表し、
化合物３の式中、Ｐ４は保護基を表し、
および、
一般式
であるモノサッカライドジスルフィド５を提供するために、化合物４における保護基Ｐ１〜Ｐ４の除去を行うこと、
ここで、モノサッカライドジスルフィド５の式中、Ａは上述のように定義され、モノサッカライドジスルフィド５は、一般式
であるモノサッカライド６を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
ここで、モノサッカライド６の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式
である化合物７を提供するために化合物４において選択的脱保護を行うこと、
化合物７の式中、Ｐ５は保護基であり、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、およびＡは、上述のように定義され、
または
Ａ２）一般式
である化合物９を提供するために、
ここで、化合物９の式中、Ｐ６、Ｐ７、およびＡは上述のように定義され、
一般式
である化合物８を、
化合物３と反応させること、
ここで、化合物８の式中、Ｐ６およびＰ７は保護基を表し、
および、
一般式
であるモノサッカライドジスルフィド１０を提供するために、化合物９においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ４、Ｐ６、およびＰ７の除去を行うこと、
ここで、モノサッカライドジスルフィド１０の式中、Ａは上述のように定義され、モノサッカライドジスルフィド１０は、一般式
であるモノサッカライド１１を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
ここで、モノサッカライド１１の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式：
である化合物１２を提供するために化合物９において選択的脱保護を行うこと、
ここで、化合物１２の式中、Ｐ４、Ｐ７、およびＡは、上述のように定義され、
または、
Ａ３）一般式
である化合物１４を提供するために、
ここで、化合物１４の式中、Ｐ４、Ｐ８〜Ｐ１１は上述のように定義され、
一般式
である化合物１３を、化合物３と反応させること、
ここで、化合物１３の式中、Ｐ８〜Ｐ１１は保護基を表す：
および、
一般式：
である化合物１５を提供するために、化合物１４の選択的脱保護を行うこと、
ここで、化合物１５の式中、Ｐ４、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１１およびＡは上述のように定義され、
および、
Ｂ１）一般式：
である化合物１６を提供するために、化合物７を、化合物１３と反応させること、
ここで、化合物１６の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８〜Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され；
および、
一般式：
であるジサッカライドジスルフィド１７を提供するために、化合物１６における保護基Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８〜Ｐ１１の除去を行うこと、
ここで、ジサッカライドジスルフィド１７の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド１７は、一般式：
であるジサッカライド１８を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
ここで、ジサッカライド１８の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式：
である化合物１９を提供するために化合物１６における保護基Ｐ１０の選択的除去を行うこと、
ここで、化合物１９の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１１およびＡは、上述のように定義される。
または、
Ｂ２）一般式：
である化合物２０を提供するために、化合物１５を、化合物８と反応させること、
化合物２０の式中、Ｐ４、Ｐ６〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
および、
一般式
であるジサッカライドジスルフィド２１を提供するために、化合物２０においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ４、Ｐ６〜Ｐ９、Ｐ１１の除去を行うこと、
ジサッカライドジスルフィド２１の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド２１は、一般式
であるジサッカライド２２を提供するために還元剤を用いて処理され、
ジサッカライド２２の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式
である化合物２３を提供するために化合物２０における保護基Ｐ６の選択的除去を行うこと、
化合物２３の式中、Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１およびＡは、上述のように定義され；
または、
Ｂ３）一般式：
である化合物２４を提供するために、化合物１２を、化合物２と反応させること、
化合物２４の式中、Ｐ１〜Ｐ４、Ｐ７、およびＡは上述のように定義され、
および、
一般式：
であるジサッカライドジスルフィド２５を提供するために、化合物２４においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１〜Ｐ４、およびＰ７の除去を行うこと、
ジサッカライドジスルフィド２５の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド２５は、一般式：
であるジサッカライド２６を提供するために還元剤を用いてさらに処理され、
ジサッカライド２６の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式：
である化合物２７を提供するために化合物２４における選択的脱保護を行うこと、
化合物２７の式中、Ｐ１２は保護基であり、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ７およびＡは、上述のように定義される。
および、
Ｃ１）一般式：
である化合物２８を提供するために、化合物１９を、化合物８と反応させること、
化合物２８の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
および、
次の化学式：
である化合物２９を得るために、化合物２８の式中、保護基Ｐ６は、保護基Ｐ１３と置換され、
化合物２９の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、Ｐ１３、およびＡは上述のように定義され；
および、
アジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、Ｐ１３の切断による化合物２９におけるトリサッカライドジスルフィド３０への変換、化合物３０は、一般式：
であり、
化合物３０の式中、Ａは上述のように定義され；
および、
還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３０のトリサッカライド３１への変換、化合物３１は一般式：
であり、化合物３１の式中、Ａは上述のように定義される。
または、
Ｃ２）一般式：
である化合物３２を提供するために、化合物２３を、化合物２と反応させること、
化合物３２の式中、Ｐ１〜Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
および、
アジド基のアセトアミド基への変換および保護基Ｐ１〜Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１の切断による化合物３２のトリサッカライドジスルフィド３３への変換、ここで化合物３３は、一般式：
であり、
化合物３３の式中、Ａは上述のように定義され；
および、
還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３３のトリサッカライド３４への変換、ここで、化合物３４は一般式：
であり、化合物３４の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
Ｃ３）一般式：
である化合物３５を提供するために、化合物２７を、化合物１３と反応させること、
化合物３５の式中、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
および、
アジド基のアセトアミド基への変換および保護基Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ１１の切断による化合物３５のトリサッカライドジスルフィド３６への変換、ここで化合物３６は、一般式：
であり、
化合物３６の式中、Ａは上述のように定義され；
および、
還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３６のトリサッカライド３７への変換、ここで、化合物３７は一般式：
であり、化合物３７の式中、Ａは上述のように定義される。
本願で使用される用語「保護基」は、有機合成において一般的に使用される基に関し、好ましくは、アミン、ヒドロキシル基、チオール、イミン、カルボニル、カルボキシル、または他の一般的な官能基のために使用され、特に好ましくは、アミン、ヒドロキシル基、チオール、およびカルボキシルのために使用される。
より明確に、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ８〜Ｐ１０、Ｐ１２、およびＰ１３は、好ましくは、ヒドロキシル基のための適切な保護基であり、より好ましくは、適切な一連の脱保護反応によって、次々に続いて除去されることが可能な、ヒドロキシル基のための種々の適切な保護基である。したがって、ヒドロキシル基のための保護基、すなわち、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ８〜Ｐ１０、Ｐ１２、およびＰ１３は、アセチル、ベンジル、イソプロピリデン、ベンジリデン、ベンゾイル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メトキシベンジリデン、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ブロモベンジル、ｐ−ブロモベンジレデン（ｂｒｏｍｏｂｅｎｚｙｌｅｄｅｎｅ）、ｐ−ニトロフェニル、アリル、アセチル、イソプロピル、ｐ−ブロモベンジル ジメトキシトリチル、トリチル、２−ナフチルメチル、ピバロイル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリエチルシリル、トリメチルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシメチル、メチルオキシメチル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシメチル、メトキシエチルオキシメチル、レブリノイル、からなる、または含む群から選択されてもよい。
より明確に、本発明の好ましい実施形態において、保護基Ｐ１、Ｐ５、Ｐ８、Ｐ９、およびＰ１２はベンジルであり、Ｐ２はベンジリデンであり、Ｐ６はレブリノイルであり、Ｐ１０は、９−フルオレニルメトキシカルボニルであり、Ｐ１３はベンジルオキシメチルである。
アミンは一般的にカルバメートとして保護される。したがって、保護基Ｐ７は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、からなる、または含む群から選択されてもよい。本発明の好ましい実施形態において、Ｐ７はベンジルオキシカルボニルである。
カルボン酸は一般的にエステルとして保護される。したがって、保護基Ｐ３およびＰ１１は、メチル、エチル、アリル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、からなる、または含む群から選択されてもよい。本発明の好ましい実施形態において、保護基Ｐ３およびＰ１１は、メチルである。
ヒドロキシル基のための保護基は、チオールのための保護基と同様に機能してもよい。したがって、チオール基のための好ましい保護基は、ベンジル、ベンゾイル、４−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル、アリル、アセチル、メチルスルホニルエトキシカルボニル、レブリニル、ジメトキシトリチル、２−ナフチルメチル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチルである。特に、本発明の好ましい実施形態において、保護基Ｐ４はベンジル基である。
一般式（Ｉ）のサッカライドの合成において採用される保護基は、永久的保護基および一次的保護基に区別されることができる。永久的保護基は、全合成中に適しており、合成の後期で効率的に除去されることができる保護基である。当該永久的保護基は、限定されないが、ベンジル、ベンジリデン、ベンゾエート、アセテート、アルキルエステルを含む。一次的保護基は、モノサッカライドまたは他の保護基を含む種々の置換基の後続の導入のために、遊離のヒドロキシル基へと合成の種々のレベルで選択的に除去されることができる一般的にオルソゴナル保護基である。保護基の巧妙な選択は、担体抗原または固体支持体への後続の結合のためにチオール基を有して機能化される一般式（Ｉ）のサッカライドのライブラリーに対して適切なアクセスを許す。
本発明の好ましい実施形態は、下記一般式（Ｉ）のサッカライドの合成に関し
式中、Ａは上記に定義されるリンカーであり、
ＰはＳ１を表し、
ＮはＳ３を表し、
ＭはＳ２を表し、
糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、糖断片Ｓ２は、糖断片Ｓ１に連結されることはできず、および、
ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１であり、
次のステップ：
Ａ１）下記一般式である化合物４を得るために、
式中、Ｐ１〜Ｐ４およびＡは上述のように定義され、
式：
である化合物２を、
式
である化合物３と反応させること、
ここで、化合物２の式中、Ｐ１〜Ｐ３は保護基を表し、
化合物３の式中、Ｐ４は保護基を表し、
および、
一般式：
であるモノサッカライドジスルフィド５を提供するために、化合物４における保護基Ｐ１〜Ｐ４の除去を行うこと、
モノサッカライドジスルフィド５の式中、Ａは上述のように定義され、ここで、モノサッカライドジスルフィド５は、一般式：
であるモノサッカライド６を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
ここで、モノサッカライド６の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式
である化合物７を提供するために化合物４において選択的脱保護を行うこと、
化合物７の式中、Ｐ５は保護基であり、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、およびＡは、上述のように定義され、
または
Ａ２）一般式
である化合物９を提供するために、
化合物９の式中、Ｐ６、Ｐ７、およびＡは上述のように定義され、
一般式
である化合物８を、
化合物３と反応させること、
ここで、化合物８の式中、Ｐ６およびＰ７は保護基を表し、
および、
一般式：
であるモノサッカライドジスルフィド１０を提供するために、化合物９においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ４、Ｐ６、およびＰ７の除去を行うこと、
モノサッカライドジスルフィド１０の式中、Ａは上述のように定義され、ここでモノサッカライドジスルフィド１０は、一般式：
であるモノサッカライド１１を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
モノサッカライド１１の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
Ａ３）一般式
である化合物１４を提供するために、
ここで、化合物１４の式中、Ｐ４、Ｐ８〜Ｐ１１は上述のように定義され、
一般式
である化合物１３を、化合物３と反応させること、
ここで、化合物１３の式中、Ｐ８〜Ｐ１１は保護基を表し、
および、
一般式：
である化合物１５を提供するために、化合物１４の選択的脱保護を行うこと、
化合物１５の式中、Ｐ４、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１１およびＡは上述のように定義され、
および、
Ｂ１）一般式：
である化合物１６を提供するために、化合物７を、化合物１３と反応させること、
化合物１６の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８〜Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され；
および、
一般式：
であるジサッカライドジスルフィド１７を提供するために、化合物１６における保護基Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８〜Ｐ１１の除去を行うこと、
ジサッカライドジスルフィド１７の式中、Ａは上述のように定義され、ここで、ジサッカライドジスルフィド１７は、一般式：
であるジサッカライド１８を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
ジサッカライド１８の式中、Ａは上述のように定義され；
または、
一般式：
である化合物１９を提供するために化合物１６における保護基Ｐ１０の選択的除去を行うこと、
化合物１９の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１１およびＡは、上述のように定義される。
または、
Ｂ２）一般式：
である化合物２０を提供するために、化合物１５を、化合物８と反応させること、
化合物２０の式中、Ｐ４、Ｐ６〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
および、
一般式：
であるジサッカライドジスルフィド２１を提供するために、化合物２０においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ４、Ｐ６〜Ｐ９、Ｐ１１の除去を行うこと、
ジサッカライドジスルフィド２１の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド２１は、一般式：
であるジサッカライド２２を提供するために還元剤を用いて処理され、
ジサッカライド２２の式中、Ａは上述のように定義され；
Ｃ１）一般式：
である化合物２８を提供するために、化合物１９を、化合物８と反応させること、
化合物２８の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
および、
次の化学式：
である化合物２９を得るために、化合物２８の式中、保護基Ｐ６は、保護基Ｐ１３と置換され、
化合物２９の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、Ｐ１３、およびＡは上述のように定義され；
および、
アジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、Ｐ１３の切断による化合物２９のトリサッカライドジスルフィド３０への変換、ここで、化合物３０は、一般式：
であり、
化合物３０の式中、Ａは上述のように定義され；
および、
還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３０のトリサッカライド３１への変換、ここで、化合物３１は一般式：
であり、化合物３１の式中、Ａは上述のように定義される。
サッカライドジスルフィド３６、３３、３０、２５、２１、１７、１０、および５のサッカライド３７、３４、３１、２６、２２、１８、１１、および６それぞれへの変換は、還元剤の存在下で行われる。当業者に公知の還元剤は、メルカプトエタノール、ジトリオテオリトール（ｄｉｔｒｉｏｔｈｅｒｉｔｏｌ）、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、マグネシウム／メタノール、ナトリウム／アンモニア、続いて塩化アンモニウム／塩酸を含むが、それらに限定されない。好ましくは、サッカイライドジスルフィドの対応するサッカライドへの変換は、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを用いて行われる。
化合物２と化合物３、化合物２と化合物１２、化合物５＊と化合物１１＊、化合物１９＊と化合物２１＊、化合物２と化合物２３との間の反応は、非極性溶媒および極性非プロトン性溶媒の混合物中に、（ジメチルチオ）メチルスルホニルトリフルオロメタンスルホネート（ＤＭＴＳＴ）および２，４，６−トリ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（ＴＴＢＰｙ）の存在下で行われる。さらに、３Åモレキュラーシーブ、４Åモレキュラーシーブ、３Å酸で洗浄したモレキュラーシーブのような活性化されたモレキュラーシーブを使用することができる。反応温度は、−２０℃〜室温であり、好ましくは、温度は−１０℃〜室温であり、より好ましくは、温度は−５℃〜室温であり、最も好ましくは、温度は０℃〜室温である。好ましい極性非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、およびジオキサンである。好ましい非極性溶媒は、トルエン、クロロホルムおよび塩化メチレンのようなハロゲン化溶媒である。非極性および極性非プロトン溶媒の好ましい混合物は、塩化メチレン／テトラヒドロフラン、塩化メチレン／ジエチルエーテル、トルエン／ジエチルエーテル、トルエン／テトラヒドロフランである。
化合物１３と化合物７、化合物８と化合物３、化合物１２＊と化合物９＊、化合物１３＊と化合物２＊、化合物１３＊と化合物２＊、化合物２＊と化合物２１＊、化合物２＊と化合物１１＊、化合物１９と化合物８、化合物２７と化合物１３、並びに、化合物８と化合物１５との間の反応は、非極性溶媒中、または非極性溶媒および極性プロトン性溶媒の混合物中、シリルトリフレートの存在下で行われる。シリルトリフレートの例は、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルトリフルオロメタンスルホネート、トリイソプロピルトリフルオロメタンスルホネートを含むが、それらに限定されない。適切な非極性溶媒は、トルエン、クロロホルム、および塩化メチレンである。好ましい極性非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、およびジオキサンである。反応温度は、−２０℃〜＋２０℃であり、好ましくは、温度は−１０℃〜＋１０℃であり、より好ましくは、温度は−５℃〜＋５℃であり、最も好ましくは、温度は約０℃である。好ましくは、３Åモレキュラーシーブ、４Åモレキュラーシーブ、または３Å酸で洗浄したモレキュラーシーブのような活性化されたモレキュラーシーブを使用することができる。
好ましくは、化合物２９を得るために、化合物２８における保護基Ｐ６の保護基Ｐ１３との置換は、２つのステップ：溶媒中でまたは溶媒の混合物中で、ヒドラジンまたはヒドラジニウム塩と化合物２８との反応を含む第１のステップ、第１のステップ後に得られた生成物を非極性溶媒中でＢｎＯＣＨ２ＳＣｙ、ＤＭＴＳＴ、およびＴＴＢＰｙと処理することによる第２のステップ、で行われる。最初のステップでは、酢酸ヒドラジニウム、またはプロピオン酸ヒドラジニウムなどのような弱酸のヒドラジニウム塩が好ましい。この反応に適切な溶媒は、塩化メチレンのような非極性溶媒、ピリジンおよび酢酸のような極性溶媒、並びにそれらの混合物である。第２のステップは、上述のように活性化したモレキュラーシーブの存在下で、好ましくは−１０℃〜２０℃の温度で、最も好ましくは、０℃〜１０℃で、行われる。適切な非極性溶媒は上述の通りである。保護基Ｐ６の保護基Ｐ１３との置換は、永久的保護基の切断中の副反応を避けるために必須であることが見出された。
化合物４から５への、１６から１７への、１３＊から２７＊への、および２０＊から２２＊への変換は、保護基の切断、より明確には永久的保護基の切断を必要とする。前記保護基の切断は、第１に、極性非プロトン性溶媒および極性プロトン性溶媒の混合物中で塩基を用いて処理することにより塩基に不安定な保護基の切断；第２に、極性プロトン性溶媒および極性非プロトン性溶媒の混合物中でナトリウムおよびアンモニアに曝すことにより水素化に敏感な保護基の切断を含む。第１のステップのための適切な非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、およびＮ，Ｎ−ジメチルスルホキシドを含み、例えば水、およびメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、またはｔｅｒｔ−ブタノールを含むアルコールのような適切なプロトン性溶媒と混合される。
保護基の塩基性切断は、好ましく室温で行われ、０℃〜室温の間を含む。第１ノステップを行うために適切な塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、および水酸化カリウムを含む。水素化に敏感な保護基の切断は、極性プロトン性溶媒および極性非プロトン性溶媒の混合物中で、−７８℃〜室温の間を含む温度で、ナトリウムおよびアンモニアに曝すことにより行われる。
任意選択的に、リチウムを、水素化に敏感な保護基の切断中にナトリウムと同等のものとして使用することができる。
永久的保護基の上述の切断より前に、化合物９から１０への、２０から２１への、２４から２５への、２９から３０への、３２から３３への、３６から３７への、および１６＊から１８＊への変換は、アジド基のアセトアミド基への変換を含み、好ましくは、チオ酢酸およびピリジンの存在下で行われる。代替方法は、二つのステップ：最初にアジド基の化学選択的還元、続いてアセチル化でアジド基のアセトアミド基への変換を行うことである。化学選択的還元を、アンモニア、酢酸アンモニア、トリフェニルホスフィン、またはピリジンの存在下においてＰｄ／Ｃでの水素化を用いて行うことができる。アセチル化を、塩基の存在下で塩化アセチルまたは無水酢酸を用いて達成することができる。
サッカライド１、５、６、１０、１１、１７、１８、２１、２２、２５、２６、３０、３１、３３、３４、３６、３７、２７＊、２６＊、２４＊、２２＊および１８＊は、塩基および／または酸置換基を有し、それらは有機もしくは無機酸、または有機もしくは無機塩基を用いて塩を形成してもよい。当該酸付加塩形成のための適切な酸の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンフルスルホン酸、キナ酸、マンデル酸、Ｏ−メチルマンデル酸、水素−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−Ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、（Ｏ、ｍ、ｐ）−トルイル酸、ナフチルアミンスルホン酸、および当業者に公知の他の無機酸、またはカルボン酸である。塩は、従来の方法で塩を生成するために、十分な量の所望の酸と遊離塩基形を接触させることによって調製される。
遊離塩基形は、希釈された水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、アンモニアおよび重炭酸ナトリウムのような適切な希釈された塩基溶液と共に塩を処理することによって再生されてもよい。遊離塩基形は、それらの対応する塩形とは、極性溶媒における溶解性のような特定の物理的特性で多少異なるが、塩は、本発明の目的のために、それらの対応する遊離塩基形に、その他の点では同じである
適切な無機塩、または有機塩の例は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギニン等である。塩は、当技術分野で公知の方法を用いて従来の方法で、例えば、一般式（Ｉ）の化合物を有する溶液を、上述の群から選択される酸の溶液と処理することによって、調製されてもよい。
さらに、本発明の化合物は、塩基性基および酸性基を同時に有することも可能である。さらに、これらの塩基性基および酸性基は、互いに近接して存在するようであり、酸性基から塩基性基へ分子内プロトン移動を可能にするということも起こってもよい。したがって、本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、両性イオンであってもよく、少なくとも例えば、一つの−Ｏ−および一つの−ＮＨ３＋基を有する。
本発明は、水和物を含む当量の溶媒和物、および可変量の水を含む化合物を当該範囲内に含み、凍結乾燥のような過程によって生成されてもよい。
したがって、一般式（Ｉ）のサッカライドの合成は、ステップＤ：
Ｄ）一般式（Ｉ）の化合物の塩を調製すること、または一般式（Ｉ）の化合物の、もしくは一般式（Ｉ）の化合物の塩の凍結乾燥体を調製すること、
をさらに含んでもよい。
他の好ましい実施形態において、一般式（ＩＩ）の中間体の合成は、ステップＤ：
Ｄ）一般式（ＩＩ）の化合物の塩を調製すること、または一般式（ＩＩ）の化合物の凍結乾燥体、もしくは一般式（ＩＩ）の化合物の塩の凍結乾燥体を調製すること、
をさらに含んでもよい。
好ましい実施形態において、下記一般式（Ｉ）のサッカライドの合成、
式中、Ａは上記に定義されるリンカーであり、
ＰはＳ１を表し、
ＮはＳ３を表し、
ＭはＳ２を表し、
糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、糖断片Ｓ２は、糖断片Ｓ１に連結されることはできず、および、
ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１であり、
および、
ステップＤ）
Ｄ）一般式（Ｉ）の化合物の塩を調製すること、または一般式（Ｉ）の化合物の凍結乾燥体、もしくは一般式（Ｉ）の化合物の塩の凍結乾燥体を調製すること、
をさらに含んでもよい。
［中間体］
本発明の他の態様は、下記一般式（ＩＩ）の中間体、およびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩に関し、
式中、Ａはリンカーであり、
Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して、次の断片の一つを表し：
ここで、糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、断片Ｈ−（Ｐ）ｎ３−（Ｎ）ｎ２−（Ｍ）ｎ１−Ｏ−Ａ−Ｓにおいて多くて１回存在し、糖断片Ｓ１は、−Ｏ−Ａ−Ｓおよび糖断片Ｓ３に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ３は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ２に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ２は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ１に同時に連結されることができず、並びに、
ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である。
したがって、本発明の範囲下では、次の一般式（ＩＩａ）の中間体、およびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩になり、
式中、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ２＝１およびｎ１＝ｎ３＝０；
および、下記一般式（ＩＩｂ）の中間体
式中、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ３＝１およびｎ１＝ｎ２＝０；
および、下記一般式（ＩＩｃ）の中間体
式中、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ３＝１およびｎ１＝ｎ２＝０；
言い換えると、本発明は、下記一般式（ＩＩ）の中間体およびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩に関し、
式中、Ａはリンカーであり、
ＰはＳ１を表し、ＮはＳ３を表し、ＭはＳ２を表し、
または、
ＰはＳ３を表し、ＮはＳ２を表し、ＭはＳ１を表し、
または、
ＰはＳ２を表し、ＮはＳ１を表し、ＭはＳ３を表し、および
ここで、
ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、またはｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、またはｎ２＝ｎ３＝１およびｎ１＝０、またはｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、またはｎ２＝１およびｎ１＝ｎ３＝０、またはｎ３＝１およびｎ１＝ｎ２＝０；
ここで、
および、糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−Ｓ−断片に連結される。
好ましくは、一般式（ＩＩ）の中間体であり
式中、Ａは上記のように定義されるリンカーであり；
ＰはＳ１を表し、
ＮはＳ３を表し、
ＭはＳ２を表し、
糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−Ｓ−断片に連結され、断片Ｓ２は、糖断片Ｓ１に連結されることはできず、および
ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である。
より好ましいのは、一般式（ＩＩ）の中間体であり、
式中、Ａは上記のように定義されるリンカーであり；
ＰはＳ１を表し、
ＮはＳ３を表し、
ＭはＳ２を表し、
糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−Ｓ−断片に連結され、
式中、ｎ１＝ｎ２＝ｎ３＝１、または、ｎ１＝ｎ２＝１およびｎ３＝０、または、ｎ１＝１およびｎ２＝ｎ３＝０、または、ｎ１＝０およびｎ２＝ｎ３＝１、または、ｎ１＝ｎ２＝０、ｎ３＝１。
さらにより好ましいのは中間体：
Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ２）−（Ｓ３）−（Ｓ１）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ３）−（Ｓ１）−（Ｓ２）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ１）−（Ｓ２）−（Ｓ３）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ３）−（Ｓ１）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ２）−（Ｓ３）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ１）−（Ｓ２）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ１）−Ｈ、および
Ｈ−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ３）−Ｈ、である。特に好ましくは、
Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−（Ｓ２）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ２）−（Ｓ３）−（Ｓ１）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ３）−（Ｓ１）−（Ｓ２）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ３）−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ１）−（Ｓ２）−（Ｓ３）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ１）−（Ｓ３）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ３）−（Ｓ１）−Ｈ、
Ｈ−（Ｓ２）−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ１）−（Ｓ２）−Ｈ、および、Ｈ−（Ｓ１）−Ｏ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｏ−（Ｓ１）−Ｈ、
のような、糖断片Ｓ１を含む一般式（ＩＩ）の中間体である。
［複合糖質］
本発明の他の態様は、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）および（Ｉｃ）のサッカライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質に関する。前記複合糖質は、細菌と関連する疾患に対する免疫付与のためのワクチンとして効果的であることを証明された。したがって、免疫原性担体に共有結合的に結合された一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）および（Ｉｃ）のサッカライドを含む複合糖質は、人および／または動物宿主の防御免疫応答を上昇させるのに有用であるので、細菌と関連する疾患の予防および／または治療に有用である。
サッカライドは、一般的にＴＩ−２（Ｔ細胞非依存性−２）抗原および低い免疫原性として当業者に知られている。ＴＩ−２抗原は、抗原であり、表面に曝された免疫グロブリン受容体のクロスリンクを介して成熟Ｂ細胞によってのみ認識される。Ｔ細胞ヘルプなしでは、免疫記憶は発生せず、ＩｇＭから他のＩｇＧサブクラスへのアイソタイプ変換も、Ｂ細胞親和性成熟も起こらない。さらに、サッカライドは、人の糖脂質および糖蛋白質の構造的相同性により、人において低い免疫原であると知られている。それらの低い免疫原性特性により、サッカライドは、強力なワクチンの産生に必須である特徴の、Ｂ細胞による抗体産生ならびに記憶細胞の形成の両方を産生する能力が低い。
したがって、強力なサッカライドに基づくワクチンを産生するために、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、および（Ｉｃ）は、免疫原性担体に共役され、複合糖質を提供し、複合糖質はサッカイライドと比較して増加した免疫原性を示す。
これに関連して、用語「免疫原性担体」は、構造として定義され、複合糖質を形成するためにサッカライドに共役され、サッカライド自体と比較して増加した免疫を表す。したがって、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、および（Ｉｃ）のサッカライドの免疫原性担体への共役は、前記免疫原生担体に対する免疫応答を誘導することなく、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、および（Ｉｃ）のサッカライドに対する免疫応答を刺激する効果を有する。
好ましい免疫学的担体は、免疫調節特性を有する担体タンパク質、またはスフィンゴ糖脂質であり、当業者にとって、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイド、変異ジフテリアトキソイド、修飾ジフテリアトキソイド、変異および修飾ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、修飾破傷風トキソイド、変異破傷風トキソイド、外膜タンパク質（ＯＭＰ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）、またはコレラ毒素（ＣＴ）を含む、または、からなる群から選択されるタンパク質である。本願で使用される用語「トキソイド」は、細菌毒素（一般に、外毒素）に関し、細菌毒素の毒性は化学的（ホルマリン）または熱的処理のどちらかによって、不活性化または抑制されており、一方他の特性、典型的な免疫原性は維持される。本願で使用される変異トキソイドは、組換え型細菌毒素であり、野生型アミノ酸配列を修正することによって、低い毒性に、または非毒性にさへなるように修正されている。当該変異は、一つ以上のアミノ酸の置換であり得る。当該変異トキソイドは、修正トキソイドを提供するために、内部連結分子の官能基Ｙと反応することができる官能性を該表面に提示する。前記官能性は、当業者に知られており、還元剤の存在下で活性化されたエステル、イソシアネート基、またはアルデヒドと反応することができるリジン残基の第一級アミノ官能性、カルボジイミドによって活性化されることができる、グルタミン酸残基またはアスパラギン酸残基のカルボキシレート官能性、またはシステイン残基のチオール官能性を含むがこれに限定されない。活性化されたエステルは、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ＳＩＡＢ）、スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、２−ピリジルジチオール−テトラオキサテトラデカン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＰＥＧ−４−ＳＰＤＰ）を含む（図２参照）。担体タンパク質におけるシステイン残基は、担体タンパク質の表面に内部連結分子の官能基Ｘを有する修飾担体タンパク質を提供するために、適切な内部連結分子とさらに反応させることができる対応するジヒドロアラニンに変換されることができる。この場合において、内部連結分子における官能基Ｙはチオール基でもよく、基Ｘはアルケンでもよい。当該内部連結分子はアリルメルカプタンを含む。当該内部連結分子との反応後、担体タンパク質は、内部連結分子のビニル基Ｘを示す修飾担体タンパク質に変換され、それは、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）および（Ｉｃ）のサッカイライドと反応させるのに適している。
一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）および（Ｉｃ）のサッカライド、好ましくはサッカライド３７、３４、３１、２６、２２、１８、１１、および６は、官能性リジン残基の第１級アミンの官能性として示す非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に共役されると特に好ましい。
野生型ジフテリア毒素のようにＣＲＭ１９７は、グリシンがグルタミン酸に置換された単一のアミノ酸置換を有するジスルフィド架橋によって連結される２つのサブユニットからなる５３５アミノ酸（５８ｋＤ）の一本鎖ポリペプチドである。ＣＲＭ１９７は、プレブナー（Ｐｒｅｖｎａｒ）のような疾患のための認可された多くの共役ワクチンで担体タンパク質として利用される。
したがって、本発明の好ましい実施形態において、担体タンパク質は、それらの表面に、内部連結分子の前記官能基Ｘを有する修飾担体タンパク質を提供するために、当該表面にリジン残基の第１級アミノ官能性を示し、内部連結分子の官能基Ｙと反応させることができ、修飾担体タンパク質は、一般式（Ｉ）の化合物のリンカーにおける末端チオール基と反応することができる。内部連結分子の上記官能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、２−ピリジルジチオール、チオール、およびビニルを含む、または、からなる群から選択される（図３参照）。
好ましくは、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカライドは、非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に共役され、マレイミドによって修飾される。さらに他の好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカライドは、非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に共役され、ビニルによって修飾される。最も好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカライドは、非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に共役され、α−ブロモアセトアミドによって修飾される。
他の実施形態において、上記免疫原性担体は、好ましくは、免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質であり、より好ましくは、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールである。本願で使用される用語「免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質」は、標的抗原への免疫システム応答を刺激することができるが、上記に定義されるように、スフィンゴ糖脂質自体で免疫を与えない、適切なスフィンゴ糖脂質に関する。
本願で使用されるスフィンゴ糖脂質は、スフィンゴ脂質にα−連結される糖質部分を含む化合物である。好ましくは、糖質部分はヘキソピラノースであり、最も好ましくは、α−Ｄ−ガラクトピラノースである。当業者にとって、スフィンゴ脂質は、脂肪酸にアミド結合を介して連結されるＣ１８アミノアルコールを含む脂質のクラスである。Ｃ１８アミノアルコールは、好ましくは、ヒドロキシル基を有するモノ−、ジ−、またはポリ置換されている。特に好ましくは、Ｃ１８アミノアルコールは、フィトスフィンゴシンである。脂肪酸は、１６〜２８個の範囲の、より好ましくは１８〜２６個の範囲の炭素数の飽和アルキル鎖を有する好ましくは、モノカルボン酸である。免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質は、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールを含むが、これに限定されず、ナチュラルキラー（ＮＫ）活性、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞によるサイトカイン産生を刺激することができ、インビボにおいて強力な抗腫瘍活性を示す（Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５、５６９０）。
免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質と一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカイライドとの共役体は、熱的安定であるという利点を有する。共役に安定であるために、免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質において官能性を導入する。前記官能性は、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカイライドの複合糖質を提供するために、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカイライドのリンカーの末端チオール基と直接反応しやすい、または免疫調節特性を有する修飾スフィンゴ糖脂質を提供するために、内部連結分子の官能基Ｙと、直接反応しやすい。
好ましくは、前記官能性は、免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質の糖部分のＣ６位に導入される。したがって、免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質は、一般式（Ｉ）のサッカライドの複合糖質を、または内部連結分子の官能基Ｘを提示する免疫調節特性を有する修飾スフィンゴ糖脂質を直接的に提供するために、官能基で官能化され、チオール基、活性化されたエステル、イソシアネート基、アルデヒド、ビニル、アミノ基、およびアジド基と反応しやすい。
好ましくは、免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質の糖質部分のＣ６位に導入される官能基は、アミン、チオール、アルコール、カルボン酸、ビニル、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、２−ピリジルジチオールを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、または、含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）群から選択される。
内部連結分子の前記官能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、２−ピリジルジチオール、チオールおよびビニルを含む、または、からなる群から選択される。
本願で使用される通り、用語「内部連結分子」は官能基Ｘおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、官能基Ｘは、リンカーＡにおける末端チオール基と反応することが可能であり、官能基Ｙは、免疫原性担体に、または固体支持体に結合することが可能である。
一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカイライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質は、動物における免疫応答を引き起こすのに適切であるので、細菌と関連する疾患に対する免疫におけるワクチンとして有用であり、細菌の莢膜ポリサッカライドにおいて、次から選択されるサッカライド構造を含む：
α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
好ましくは、莢膜ポリサッカライドにおいて上記のサッカライド構造の一つを含む細菌は、ストレプトコッカス ニューモニエ１型である。
好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、または（Ｉｃ）のサッカイライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質は、細菌と関連する疾患に対する免疫のためのワクチンとして有用であり、前記疾患は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症並びに慢性気管支炎、副鼻腔炎、関節炎および結膜炎の急性憎悪を含む。
本発明の一つの態様は、医薬組成物、特に、任意の一般式（Ｉ）のサッカライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質、および／または一般式（Ｉ）の一つのサッカライド、および／または一般式（ＩＩＩ）の中間体の少なくとも一つを、薬学的に許容できる抗凍結剤、リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、賦形剤および／または希釈剤の少なくとも一つと共に含むワクチンに関する。
前記ワクチンは、懸濁液の形態で調製されてもよく、または凍結乾燥されてもよい。懸濁液の形態は凍結して保存されてもよい。凍結乾燥形態では、一つ以上の安定剤を加えると好ましい。任意に、一つ以上のアジュバントを同様に加えてもよい。任意の慣習の安定剤およびアジュバントは、本発明に係るワクチンに含まれてもよい。
本願で使用される用語「アジュバント」は、免疫学的アジュバント、すなわち、ワクチンに抗原的に関連しているのではなく、与えられた抗原に対してワクチンに含まれる免疫応答を高めることによって、前記ワクチンの効果を修正する、または増強させる、ワクチン組成物に使用される物質に関する。当業者にとって、古典的に認識される免疫学的アジュバントの例は、制限されないが、オイルエマルジョン（例えば、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバント）、サポニン、アルミニウム塩またはカルシウム塩（例えば、ミョウバンなど）、非イオン性ブロックポリマー界面活性剤、および他多数、を含む。
ワクチン接種を、任意の年齢で行うことができる。ワクチンを、皮下に、スプレー、注射、経口、眼内、気管内、または、経鼻によって投与してもよい。
本発明の他の態様は、少なくとも一つの薬学的に許容できる担体、アジュバント、溶媒および／または希釈剤と共に、活性成分としてワクチンを含む医薬製剤および医薬組成物に関する。
さらに好ましくは、医薬組成物は、凍結乾燥体または液体緩衝液の形態で製剤化される。
ワクチンを、当該薬学的に活性な塩の形態で、任意に実質上は非毒性の薬学的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント、希釈剤を用いて投与することもできる。本発明のワクチンは、従来の固体もしくは液体担体、または希釈剤、および従来の薬学的に作られるアジュバントを用いて公知の方法で適切な用量レベルで調製される。好ましい調製物および製剤は、投与可能な形態であり、経口適用に適切である。これらの投与可能形態は、例えば、ピル、錠剤、フィルム錠剤、被覆錠剤、カプセル、粉末および沈殿物を含む。経口投与可能な形態以外も可能である。本発明のワクチンを、吸入、注射（静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下内）を含む任意の適切な手段によって；上皮または皮膚粘膜ライニング（口腔粘膜、直腸および膣上皮ライニング、鼻咽頭粘膜、腸粘膜）を介して吸収によって；経口的に、直腸に、経皮的に、局所的に、皮内に（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌｌｙ）、胃内に、皮内に（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅＯｕｓｌｙ）、膣内に、血管内に、鼻腔内に、口腔内に、経皮的に、舌下的に、または医薬分野内の任意の他の手段によって投与され得るがこれに制限されない。
活性成分として、一般式（Ｉ）のサッカライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質、またはその薬学的に許容できる塩を含む本発明のワクチンを、意図された投与形態、すなわち経口錠剤、カプセル（固体充填、半固体充填、または液体充填のいずれか）、構成のための粉末、経口ゲル、エリキシル、粉末顆粒、シロップ、懸濁液などについて適切に選択された適切な担体材料と混合して、従来の薬務と一致して典型的に投与するだろう。例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与のために、活性成分を、ラクトース、デンプン、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、タルク、マンニトール、エチルアルコール（液体形態）などのような、任意の経口非毒性の薬学的に許容可できる不活性担体と組み合わせてもよい。さらに、望まれる場合または必要とされる場合、適切な結合剤、潤滑剤、ｚ、および着色剤を、混合物中に含んでもよい。
適切な結合剤は、デンプン、ゼラチン、天然糖、コーン甘味料、アカシアのような天然および合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチル−セルロース、ポリエチレングルコールおよびワックスを含む。潤滑剤のうち、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどは、これらの投与形態で使用のために述べられ得る。崩壊剤は、デンプン、メチルセルロース、グアーゴムなどを含む。甘味料および着香料および保存料を、適切な場合に含んでもよい。上記の用語のいくつか、すなわち、崩壊剤、希釈剤、潤滑剤などは、下記により詳細に論じられる。
さらに、本発明のワクチンは、、治療効果を最適化するために任意の一つ以上の構成成分、または活性成分の速度制御された放出を提供するために持続放出形態で製剤化されてもよい。持続放出のための適切な投与形態は、変動する崩壊速度の層、または活性成分をしみ込ませた制御された放出ポリマーマトリックスを含み、および当該しみ込ませた、またはカプセル化されたポーラスポリマーマトリックスを含む錠剤形態、またはカプセルで形成された層状の錠剤を含む。
液体形態調製物は、溶液、懸濁液、およびエマルジョンを含む。例として、水、または非経口注射液のための水−ポリエチレングリコール溶液、または経口溶液のための甘味料および乳白剤の付加、懸濁液、およびエマルジョンを言及されてもよい。液体形態調製物は、鼻腔内投与のための溶液も含んでもよい。
吸入のために適切なエアロゾル調製物は、溶液および粉末形態のための固体を含んでもよく、それらは、例えば、窒素などの不活性ガスのような薬学的に許容できる担体と組み合わせてもよい。
坐薬を調製するために、ココアバターのように脂肪酸グリセリドのような低融点ワックスが最初に溶解され、活性成分は、撹拌または同様の混合によって、その中で均一に分散される。溶解された均一な混合物を、その後、便利な大きさの型に注ぎ、冷却させて、それによって凝固させる。
固体形態製剤も含まれ、使用するすぐ前に、経口または非経口投与のいずれかのために、液体形態調製物に変換されることを意図される。当該液体形態は、溶液、懸濁液、およびエマルジョンを含む。
本発明のワクチンは、経皮的に輸送可能であってもよい。経皮組成物は、クリーム、ローション、エアロゾル、および／またはエマルジョンの形態をとってもよく、この目的のために従来の技術であるように、マトリックス型またはリザボア型の経皮パッチに含まれることができる。
用語カプセルは、活性成分を含む組成物を保持し、または含むための、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、または変性ゼラチンまたは変性デンプンから作られる特別な容器またはエンクロージャに関する。殻の固いカプセルは、典型的に、比較的高いゲル強度の骨および豚皮ゼラチンの混合物から作られる。カプセル自体は、少量の染色料、オペーク剤、可塑剤、および保存剤を含んでもよい。
錠剤は、適切な希釈剤と共に、活性成分を含む圧縮された、または型で作られた固体投与形態を意味する。錠剤を、当業者によく知られている湿式造粒によって、乾式造粒によって、または圧縮によって得られる混合物または顆粒の圧縮によって調製することができる。
経口ゲルは、親水性の反固体マトリックスに分散された、または可溶化された活性成分に関する。
構成のための粉末は、水またはジュース中に懸濁されることができる有効成分および適切な希釈剤を含む粉末混合物に関する。
適切な希釈剤は、組成物または投与形態の大部分を通常占める物質である。適切な希釈剤は、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトールのような糖、小麦、コーンライス、およびポテト由来のデンプン、並びに微結晶性セルロースのようなセルロースを含む。組成における希釈剤の量は、全組成物の約５〜約９５重量％、好ましくは約２５〜約７５重量％、より好ましくは約３０〜約６０重量％、最も好ましくは約４０〜５０重量％の範囲であることができる。
用語崩壊剤は、組成物を粉々にする（崩壊する）、および薬剤を放出することを助けるために組成物に添加される材料に関する。適切な崩壊剤は、デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウムのような「冷水可溶化」修飾デンプン、ローカストビーン、カラヤ、グアー、トラガカント、およびアガーのような天然および合成ガム、メチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウムのようなクロスリンクされた微結晶性セルロース、アルギン酸およびアルギン酸ナトリウムのようなアルギネート、ベントナイトのようなクレイ、並びに発泡性の混合物を含む。組成物における崩壊剤の量は、組成物の約１〜約４０重量％、好ましくは組成物の２〜約３０重量％、より好ましくは組成物の約３〜２０重量％、最も好ましくは約５〜約１０重量％の範囲であることができる。
結合剤は、粉を共に結合し、または「接着し」、顆粒を形成することによってそれらを凝集させ、製剤において「接着剤」として働く物質と特徴づける。結合剤は、希釈剤または充填剤において、すでに得られる凝集強度を増大する。適切な結合剤は、スクロースのような糖、小麦、コーンライス、およびポテト由来のデンプン；アカシア、ゼラチン、およびトラガカントのような天然ガム；アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、およびアルギン酸アンモニウムカルシウムのような海藻の誘導体；メチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースナトリウム、およびヒドロキシプロピル−メチルセルロースのようなセルロース材料、ポリビニルピロリドン；ケイ酸アルミニウムマグネシウムのような無機物を含む。組成物における結合剤の量は、組成物の約１〜３０重量％、好ましくは組成物の約２〜約２０重量％、より好ましくは組成物の約３〜約１０重量％、さらにより好ましくは約３〜約６重量％の範囲であることができる。
潤滑剤は、圧縮された後、錠剤、顆粒などが、摩擦または摩耗を減少させることによって型（ｍｏｌｄ）、または鋳型（ｄｉｅ）から放出できるように投与形態に加えられる物質に関する。適切な潤滑剤は、ステアリン酸マグネシム、ステアリン酸カルシウム、またはステアリン酸カリウムのようなステアリン酸金属塩；ステアリン酸、高融点ワックス、および塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、およびＤ，Ｌ−ロイシンのような水溶性潤滑剤を含む。潤滑剤は、顆粒表面に、および顆粒と錠剤圧縮部分との間に存在しなければならないので、圧縮前に最後の最後のステップで通常加えられる。組成物における潤滑剤の量は、組成物の約０．０５〜約１５重量％、好ましくは組成物の０．２〜約５重量％、より好ましくは約０．３〜約３重量％、最も好ましくは組成物の約０．３〜約１．５重量％の範囲であることができる。
流動促進剤は、固化を防ぎ、顆粒の流動特性を改善する材料であるので、流動は滑らかおよび均一になる。適切な流動促進剤は、二酸化ケイ素およびタルクを含む。組成物における流動促進剤の量は、組成物の約０．０１〜１０重量％、好ましくは全組成物の０．１〜約７重量％、より好ましくは約０．２〜５重量％、最も好ましくは約０．５〜約２重量％の範囲であることができる。
着色剤は、組成物または投与形態に着色を与える賦形剤である。当該賦形剤は、食品等級染色剤、およびクレイまたは酸化アルミニウムのような適切な吸着剤に吸着される食品等級染色剤を含むことができる。着色剤の量は、組成物の約０．０１〜１０重量％、好ましくは約０．０５〜６重量％、より好ましくは組成物の約０．１〜約４重量％、最も好ましくは約０．１〜約１重量％に変わることができる。
本発明における製剤およびワクチンの投与のための技術は、「レミントンの薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」マック出版社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＣＯ．）、ペンシルベニア州、イーストン、で明らかにされてもよい。少なくとも一つの本発明の複合糖質および／または複合糖質の薬学的に許容できる塩を含む適切なワクチン組成物は、適切な液体医薬担体中の、または錠剤、ピル、フィルム錠剤、被覆錠剤、ドラジェ、カプセル、粉末、および沈殿物、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、エマルジョンなどのような任意の他の製剤中の、一般式（Ｉ）の任意のサッカライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる一つの複合糖質の溶液であってもよい。
一般式（Ｉ）の任意のサッカライドを、免疫原性担体と反応させることによって得られる一つの複合糖質の治療有効投与量は、疾患に対して少なくとも部分的な免疫化が結果として起こる化合物の量に関する。当該化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養物、または実験動物において標準的な薬学的な、薬理学的な、および毒物学的な手順によって決定されることができる。毒性および治療有効性の用量比は、治療指数になる。投与される化合物の実際量は、治療される患者、患者の体重、苦痛の重症度、投与方法、および処方医師の判断に依存するだろう。
本発明の他の好ましい実施形態は、一般式（Ｉ）の任意のサッカライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質、および／または一般式（Ｉ）のサッカライド、および／または一般式（ＩＩ）の中間体を、少なくとも一つの薬学的に許容できる抗凍結剤、リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物に関する。前記医薬組成物は、ストレプトコッカス ニューモニエ細菌と関連する疾患に対する免疫化に有用である。
本願で言及されるストレプトコッカス ニューモニエ細菌は、次の血清型、ストレプトコッカス ニューモニエ１型、ストレプトコッカス ニューモニエ４型、ストレプトコッカス ニューモニエ９Ｖ型、ストレプトコッカス ニューモニエ２型、ストレプトコッカス ニューモニエ１９Ｆ型、ストレプトコッカス ニューモニエ３型、ストレプトコッカス ニューモニエ１９Ａ型、ストレプトコッカス ニューモニエ１２Ｆ型、ストレプトコッカス ニューモニエ３１型、ストレプトコッカス ニューモニエ７Ｆ型、ストレプトコッカス ニューモニエ５型、ストレプトコッカス ニューモニエ１４型、ストレプトコッカス ニューモニエ６Ａ型、ストレプトコッカス ニューモニエ６Ｂ型、ストレプトコッカス ニューモニエ１８Ｃ型、およびストレプトコッカス ニューモニエ２３Ｆ型を含む。
本発明の好ましい実施形態は、ストレプトコッカス ニューモニエ１型と関連する疾患に対する免疫化に使用するために、一般式（Ｉ）の任意のサッカライドを免疫原性担体と反応させることによって得られる複合糖質、および／または一般式（Ｉ）のサッカライド、および／または一般式（ＩＩ）の中間体を、少なくとも一つの薬学的に許容できる抗凍結剤、リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、賦形剤および／または希釈剤と共に含む医薬組成物、特にワクチンに関する。
［→３］−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→］に由来するサッカライドは、適切なリンカーと共に機能化されて、免疫原性担体へサッカライドを共役させ、本願で定義されるような複合糖質を提供する。前記複合糖質は、細菌と関連する疾患に対する、特にストレプトコッカス ニューモニエ、特にストレプトコッカス ニューモニエ１型と関連する疾患に対する、免疫化のためのワクチンとして有効であることを証明した。前記疾患は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症並びに慢性気管支炎、副鼻腔炎、関節炎および結膜炎の急性憎悪を含む。
本発明のさらに他の態様は、
α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
から選択されるサッカライド構造を莢膜ポリサッカライドに含む細菌によって引き起こされる疾患の診断のための免疫学的アッセイにおけるマーカーとして使用するための、一般式（Ｉ）のサッカライド、および／または一般式（ＩＩ）の中間体に関する。
当該アッセイは、本発明のサッカイライドを含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）細菌によって引き起こされる疾患の診断に有用である、例えば、マイクロアレイおよびＥＬＩＳＡを含み、前記疾患は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症並びに慢性気管支炎、副鼻腔炎、関節炎および結膜炎の急性憎悪を含む。
本発明のサッカライドは、本発明のサッカイライドを含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）細菌によって引き起こされる疾患の診断に有用なアッセイを提供するための固体担体に容易に共役されることができる。前記固体担体は、官能性を固体担体表面に提示し、修飾固体担体を提供するために内部連結分子の官能基Ｙと反応しやすく、内部連結分子の官能基Ｘを該表面に提示し、一般式（Ｉ）のサッカライドのチオール基と反応することができる。前記固体担体は、マイクロアレイスライドを含むが、制限されない。マイクロアレイスライドは、マイクロアレイスライドの表面に官能性を提示し、修飾マイクロアレイスライドを提供するために内部連結分子の官能基Ｙと反応しやすく、内部連結分子の官能基Ｘを該表面に提示する。好ましくは、マイクロアレイスライドは、マイクロアレイスライド表面にアミノ基を提示する。マイクロアレイスライド表面にアミノ基を提示するマイクロアレイスライドは、アミン被覆されたＧＡＰＳＩＩスライド（コーニング）、またはコードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ） ＮＨＳスライドを含むがこれに限定されず、それらスライド上のアミノ官能性は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）とのインキュベーションによって導入された。
一般式（Ｉ）のサッカライドを用いて被覆されるマイクロアレイスライドは、一般式（Ｉ）のサッカライドを前記修飾マイクロアレイスライドに共役させることによって合成され、天然のストレプトコッカス ニューモニエ１型ポリサッカライドの存在下、または非存在下で、ウサギ抗−ストレプトコッカス ニューモニエ１型血清ヒト肺炎球菌血清００７ｓｐとインキュベートされた。結合実験は、ウサギ抗−ストレプトコッカス ニューモニエ１型血清およびヒト肺炎球菌血清００７ｓｐの両方は、α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐおよびα−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐサッカライド構造に結合されることを示す（図４〜８参照）。さらに、結合は、天然のストレプトコッカス ニューモニエ１型ポリサッカライドを用いて阻害されることが可能であり、本発明に係るサッカライドは、免疫応答によって認識されるエピトープを共有することを示す（図５および図６参照）。
図１は、ストレプトコッカス ニューモニエ血清型の全体分布を示す。 図２は、本発明に係る市販の内部連結分子の例を提供する。 図３は、本発明に係る内部連結分子の官能基Ｘの例を提供する。 図４は、マイクロアレイスライドにおける一般式（Ｉ）のサッカライドのプリントパターンを示す。 図５は、ヒト肺炎球菌血清００７ｓｐ（ニューモバックスワクチンを用いて免疫付与された２８７人のプール血清）における一般式（Ｉ）のサッカライドへの結合を示し、天然のストレプトコッカス ニューモニエ１型ポリサッカライドの存在下、および非存在下で、修飾コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）ＮＨＳスライド上で被覆される。 図６は、ウサギ抗−ストレプトコッカス ニューモニエ１型血清における一般式（Ｉ）のサッカライドへの結合を示し、天然のストレプトコッカス ニューモニエ１型ポリサッカライドの存在下、および非存在下で、修飾されたアミン被覆ＧＡＰＳＩＩスライド上で被覆される。 図７は、ウサギ抗−ストレプトコッカス ニューモニエ１型血清における一般式（Ｉ）のサッカライドへの結合を示し、修飾されたアミン被覆ＧＡＰＳＩＩスライド（コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上で被覆される。 図８は、ウサギ抗−ストレプトコッカス ニューモニエ１型血清における一般式（Ｉ）のサッカライドへの結合を示し、修飾されたコードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）ＮＨＳスライド上に被覆される。
次の実施例は、本発明における好ましい実施形態を示すために含まれる。実施例に開示される技術は、当業者によって認識されるべきであり、続いて、本発明の実施においてよく機能するために発明者によって開示される技術を示すのであって、当該実施のための好ましい様式を構成することを考慮されるべきである。しかしながら、当業者は、本発明の開示を考慮して、いくつかの変化が特定の実施形態において作られることができることを認識するべきであり、それは開示され、本発明の精神および範囲から逸脱することなく同様または類似の結果を常に得る。
本発明の種々の態様のさらなる修正および代替的な実施形態は、本願の記述を考慮して当業者に明らかであるだろう。したがって、本願の記述は、例として解釈されるべきであり、本発明を実行する一般的な方法を当業者に教示する目的のためである。本願で示される、および記述される本発明の形態は、実施形態の例として受け入れられるべきであることは理解されるべきである。要素および材料は、本願で例示される、および記述されるものに置換されてもよく、部分および工程は、反転されてもよく、本発明の特定の特徴は、独立して利用されてもよく、全て、当業者には、本発明における本願に記述の利点を有することは明らかであるだろう。変化が、次のクレームに記述されるように本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本願に記述される要素で作られてもよい。
［実施例］
［化学合成］
化学合成に一般的な情報
市販の試薬を、注記がある場合を除いて更なる精製なしで使用した。溶媒を、通常の方法で使用するより前に乾燥させ再蒸留した。全ての反応を、他に注記されていなければ、不活性雰囲気下、オーブンで乾燥させたガラス製品で行った。分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、シリカゲルが０．２５ｍｍの厚さでプレコートされたキーゼルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）６０Ｆ２５４ガラスプレートで行った。ＴＬＣを、ハネシアン溶液（含水硫酸中に硫酸セリウムおよびモリブデン酸アンモニウム）、または硫酸−エタノール溶液を用いて染色することによりＵＶライトを用いて可視化した。カラムクロマトグラフィーを、フルカ キーゼルゲル６０（２３０〜４００メッシュ）で行った。旋光度を、シュミット ウント ハエンシュ（Ｓｃｈｍｉｄｔ ＆ Ｈａｅｎｓｈ） ＵｎｉＰＯｌ Ｌ１０００ポラリメーターを用いてｇ／１００ｍＬで表される濃度（ｃ）で測定した。１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、バリアン（Ｖａｒｉａｎ）４００−ＭＲ、またはバリアン（Ｖａｒｉａｎ）６００スペクトロメーターを用いて、内部標準物質としてＭｅ４Ｓｉを用いて測定した。ＮＭＲ化学シフト（δ）をｐｐｍで記録し、カップリング定数（Ｊ）をＨｚで報告した。高解像度マススペクトル（ＨＲＭＳ）を、アギレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）６２１０ ＥＳＩ−ＴＯＦマススペクトロメーターを用いて、ベルリン自由大学、マススペクトロメトリーコア施設で記録した。
実施例１：４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−レブリノイル−４，６−ジデオキシ−Ｄ−ガラクタール（１＊）：
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）中に４−Ｏ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−ヒドロキシ−４，６−ジデオキシ−Ｄ−ガラクタール（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１０，１２，１６２４）（１．６４ｇ、６．２１ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、０℃でピリジン（０．５０１ｍｌ、６．２１ｍｍｏｌ）、レブリン酸（０．９６ｍｌ、９．３１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１５２ｇ、１．２４２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１．２０５ｍｌ、６．８３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温まで温め、その室温で撹拌した。３時間後、０．５当量のレブリン酸および０．５当量のＥＤＣを加えて反応を開始し完結させる。５時間後、混合物を、１００ｍｌＤＣＭを用いて希釈し、水（５０ｍｌ）、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５０ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）、およびブライン（５０ｍｌ）を用いて洗浄した。有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１）によって精製し、エステル１＊（２．０７ｇ、５．７３ｍｍｏｌ、９２％）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１９Ｈ２３ＮＯ６ （Ｍ＋Ｎａ＋） 計算値３８４．１４２３ 実測値 ３８４．１４１５ ｍ／ｚ。
実施例２：ジブチル［２−アジド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−レブリノイル−２，４，６−トリデオキシ−Ｄ−ガラクトピラノシル]ホスフェート（２＊）：
乾燥ＭｅＣＮ（４４ｍｌ）中にガラクタール１＊（３．１７ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、−２５℃で硝酸セリウムアンモニウム（１４．４２ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．８６ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応を−２５℃〜−２０℃の間で激しく撹拌した。混合物を、冷Ｅｔ２Ｏ（５０ｍｌ）を用いて希釈した。有機相を、冷水（３×３０ｍｌ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣を、シリカゲルのプラグ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／Ｅｔ３Ｎ １：１：０．０１）に通してろ過し、わずかに黄色のオイルとして４：１ガラクト／タロ混合物で粗硝酸グリコシル（２．０１ｇ）を得た。
粗硝酸グリコシル（２．０１ｇ）を、乾燥ＤＭＦ（２８ｍｌ）中にリン酸セシウムジブチル（２．２１ｇ、６．４５ｍｍｏｌ）を有する溶液に室温で加えた。混合物を４．５時間、その温度で撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で希釈し、水（１００ｍｌ）に注いだ。有機相を水（５×５０ｍｌ）で洗浄し、合わせた水性画分をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン４５：５５〜５０：５０）によって精製し、リン酸グリコシル２＊（１．８４ｇ、３．００ｍｍｏｌ、３７％、１：１０ α／β）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２７Ｈ４１Ｎ４Ｏ１０Ｐ （Ｍ＋Ｎａ＋） 計算値６３５．２４５８ 実測値 ６３５．２４２２ ｍ／ｚ。
実施例３：エチル２−Ｏ−ベンジル−３，４−イソプロピリデン−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３＊）：
ＤＭＦ（１５０ｍｌ）およびＴＨＦ（７５ｍｌ）中にエチル６−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−３，４−イソプロピリデン−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＢｉＯＯｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，９，１３９５）（４５．７ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、０℃で、少しずつ水素化ナトリウム（６０％、７．２４ｇ、１８１ｍｍｏｌ）を加え、その後ベンジルブロミド（１７．２ｍｌ、１４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１時間撹拌し、ゆっくり室温まで温め、１６時間その温度で撹拌した。反応を、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍｌ）を用いて０℃でクエンチし、水（２００ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を用いて希釈し、１５分間０℃で撹拌した。分離後、有機相を、水（５×１００ｍｌ）を用いて洗浄し、合わせた水性画分を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）を用いて再抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮し、黄色オイルとして粗ベンジルエーテル（６１ｇ）を得た。
ＴＨＦ（３７０ｍｌ）中に粗ベンジルエーテル（６１ｇ）を有する撹拌溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中に１Ｍ、１６６ｍｌ、１６６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を室温まで温め、１時間撹拌した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を用いて希釈した。分離後、水相を、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０：１〜１：３〜１：１）によって精製し、アルコール３＊を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ２６Ｏ５Ｓ（Ｍ＋Ｎａ＋） 計算値３７７．１３９８ 実測値 ３７７．１４１６ ｍ／ｚ。
実施例４：メチル（エチル２−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）ウロネート（４＊）
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）およびＨ２Ｏ（２５ｍｌ）中にアルコール４＊（６．０ｇ、１６．９３ｍｍｏｌ）を有する激しく撹拌した溶液に、０℃で、ＴＥＭＰＯ（０．５３ｇ、３．３９ｍｍｏｌ）、およびＢＡＩＢ（１０．９ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温まで温め、１時間その温度で撹拌した。反応を、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１０ｍｌ）を用いてクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）を用いて希釈した。分離後、有機相を、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（４×２０ｍｌ）を用いて洗浄した。水相を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮し、黄色オイルとして粗の酸（７．９２ｇ）を得た。
ＭｅＯＨ（３００ｍｌ）中に塩化アセチル（６．０４ｍｌ、８５ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、ＭｅＯＨ（４０ｍｌ）中に粗の酸（７．９２ｇ）を有する溶液を０℃で滴下した。混合物を室温まで温め、その温度で２時間撹拌し、０℃まで冷却した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍｌ）用いてクエンチし、固体ＮａＨＣＯ３を用いてｐＨ７に中和した。揮発性物質を蒸発させ、混合物をＥｔＯＡｃ（７０ｍｌ）を用いて希釈した。分離後、水相を、ＥｔＯＡｃ（５×５０ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機画分を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン２：３〜１：１、その後１：０）を行い粗生成物を与え、粗生成物をメタノール中、２０℃で結晶化させ（５ｍｌ／ｇ粗生成物）、ジオール４＊（３．４７ｇ、１０．１３ｍｍｏｌ、６０％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ２２Ｏ６Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値３６５．１０３４ 実測値 ３６５．１０５８ ｍ／ｚ。
実施例５：メチル（エチル２−Ｏ−ベンジル−３，４−Ｏ−エンド−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）ウロネート（５＊）、およびメチル（エチル２−Ｏ−ベンジル−３，４−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）ウロネート（６＊）
乾燥アセトニトリル（２９ｍｌ）中にジオール４＊（２．９９ｇ、８．７３ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（６．５７ｍｌ、４３．６ｍｍｏｌ）、およびＤＬ−カンファースルホン酸（０．５１ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で５時間撹拌し、反応をトリエチルアミン（０．３５ｍｌ）の添加によってクエンチした。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を与え、残渣をシリカゲルのショートプラグに通してろ過し（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ８：１（２％Ｅｔ３Ｎ）〜１：１（２％Ｅｔ３Ｎ）、ベンジリデンアセタール５＊（エンド）および６＊（エキソ）（３．４６ｇ、８．０３ｍｍｏｌ、９２％）の１：１の混合物を得た。異性体を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンからエキソ異性体６＊の選択的結晶化、および母液のクロマトグラフ分離（バイオタージ（Ｂｉｏｔａｇｅ）、ヘキサン１０％〜４０％中ＥｔＯＡｃ＋０．５％Ｅｔ３Ｎの均一なグラジエント）によって分離した。５＊の分析データ、透明なオイル、ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２６Ｏ６Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値４５３．１３４８ 実測値 ４５３．１３５２ ｍ／ｚ。６＊の分析データ、白色固体、ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２６Ｏ６Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値４５３．１３４８ 実測値 ４５３．１３３８ ｍ／ｚ。
実施例６：メチル（エチル２，３−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート（７＊）
ＴＨＦ（９．４ｍｌ）中にアセタール６＊（１６２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２９６ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を有する溶液に、室温で、塩化水素（Ｅｔ２Ｏ中に１Ｍ）をガスの発生が終わるまで加えた。１０分後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２９６ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を加え、続いてＨＣｌを加えた。反応物を室温で撹拌し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）を用いて希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍｌ）を用いてクエンチした。分離後、有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍｌ）を用いて洗浄し、水層を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）を用いて再抽出した。有機抽出物をためて、ＭｇＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１）によって精製し、アルコール７＊（６７．５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ、４２％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２８Ｏ５Ｓ（Ｍ＋Ｎａ＋） 計算値４５５．１５０４ 実測値 ４５５．１５１１ ｍ／ｚ。
実施例７：メチル（エチル２，３−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−フルオレニルメトキシカルボニル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート（８＊）
ピリジン（１．２ｍｌ）中にアルコール７＊（１６０ｍｇ、０．３７０ｍｍｏｌ）を有する溶液に、０℃でＦｍｏｃＣｌ（３８３ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温まで温め、３時間撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を用いて希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（２×３０ｍｌ）、および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍｌ）を用いて洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：２）によって精製し、カルボネート８＊（２１７ｍｇ、０．３３１ｍｍｏｌ、９０％）を白色泡として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３８Ｈ３８Ｏ８Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値６７７．２１８５ 実測値 ６７７．２１６７ ｍ／ｚ。
実施例８：ジブチル［メチル（２，３−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−フルオレニルメトキシカルボニル−α／β−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート］ホスフェート（９＊）
チオグリコシド８＊（２００ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（２×３０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で１時間保ち、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）に溶解した。活性化されたモレキュラーシーブ（３Å−ＡＷ）を加え、溶液を１５分間、室温で撹拌した。溶液をその後０℃まで冷却し、リン酸ジブチル（１２８ｍｇ、０．６１１ｍｍｏｌ）を用いて処理し１５分間撹拌した。混合物を、その後ＮＩＳ（８９ｍｇ、０．３９７ｍｍｏｌ）を用いて処理し、室温まで温め、その温度で３時間撹拌した。反応物を、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）を用いて希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液の１：１（ｖ／ｖ）混合物（２０ｍｌ）を用いてクエンチした。水相を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１〜２：１）によって精製し、リン酸グリコシル９＊（２１８ｍｇ、０．２７２ｍｍｏｌ、８９％、１０：１α／β）を透明オイルとして得た。９＊αの分析データ：ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ４４Ｈ５１Ｏ１２Ｐ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値８２５．３０１５ 実測値 ８２５．３０２０ ｍ／ｚ、９＊βの分析データ：ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ４４Ｈ５１Ｏ１２Ｐ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値８２５．３０１５ 実測値 ８２５．２９７０ ｍ／ｚ
実施例９：メチル（２−Ｏ−ベンジル−３，４−Ｏ−エンド−ベンジリデン−α／β−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（１０＊）、
チオグリコシド５＊（１０２ｍｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）、２−（ベンジルチオ）エタノール１１＊（６０ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）、およびＴＴＢＰｙ（１１７ｍｇ、０．４７４ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で３０分間保った。混合物を、ＴＨＦ（４．８ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（３Å）で、３０分間、室温で撹拌した。溶液を０℃まで冷却し、ＤＭＴＳＴ（０．２ｍｌ乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中、９２ｍｇ、０．３５５ｍｍｏｌ）を用いて処理した。反応物を、室温まで温め、その温度で２時間撹拌した。反応を、１：１（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ混合物（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／Ｅｔ３Ｎ ０：１：０．０１〜３０：７０：０．０１〜４５：５５：０．０１）によって精製し、チオエーテル１０＊α（５９ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ、４６％）を透明オイルとして、対応するβ−異性体１０＊β（３５ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、２７％）と共に得た。１０＊αの分析データ：ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３０Ｈ３２Ｏ７Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値５５９．１７６６ 実測値 ５５９．１７３１ｍ／ｚ。
実施例１０：メチル（２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド）ウロネート−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（１２＊）
乾燥ＴＨＦ（５．３ｍｌ）中にアセタール１０＊（１００．０ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、最初にトリメチルアミンボラン複合体（５７．４ｍｇ、０．７４５ｍｍｏｌ）を、その後、塩化アルミニウム（１４９ｍｇ、１．１１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を４．５時間撹拌した。反応を、水（１０ｍｌ）および１Ｍ 塩酸（５ｍｌ）の添加によってクエンチした。混合物を、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン２：５〜１：１）によって精製し、アルコール１２＊（７０．０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、７０％）を透明オイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３０Ｈ３４Ｏ７Ｓ（Ｍ＋Ｎａ＋） 計算値５６１．１９２３ 実測値 ５６１．１８７９ ｍ／ｚ。
実施例１１：メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−メチル（２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（２−（ベンジルチオ）エタノール（１３＊）：
アルコール１２＊（９０ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）、およびグリコシルホスフェート９＊（２０８ｍｇ、０．２５９ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で１時間保った。混合物を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３．３ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（３Å−ＡＷ）で、３０分間、室温で撹拌した。溶液を０℃まで冷却し、ＴＢＳＯＴｆ（０．２ｍｌ乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１３３ｍｍｏｌ）を用いて滴下で処理した。溶液を、室温まで温め、２０時間撹拌した。反応物を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）を用いて希釈し、１：１（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ピリジン混合物（０．２ｍｌ）を用いてクエンチした。溶液を、セライトに通してろ過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルのショートプラグ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）に通してろ過し、透明のオイルとして中間体ジサッカライド混合物（１５０ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ、８０％、３：１ α／β）を得た。
ＣＨ２Ｃｌ２（２．６ｍｌ）中に炭酸塩混合物（１５０ｍｇ）を有する撹拌溶液に、室温でトリエチルアミン（１．１ｍｌ、７．９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を３時間その温度で撹拌し、トルエン（２×１０ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：６〜２：３〜１：１）によって精製し、アルコール１３＊（６２ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ、５１％）を対応するβ−アノマー（２０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１７％）と共に得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ５１Ｈ５６Ｏ１３Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値９３１．３３３９ 実測値９３１．３３４０ｍ／ｚ。
実施例１２：２−アジド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−レブリノイル−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−メチル（２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（１４＊）：
アルコール１３＊（６５ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）、およびグリコシルホスフェート２＊（６１ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で３０分保った。混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（２．１ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（４Å−ＡＷ）で、１時間、室温で撹拌した。溶液をその後０℃まで冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．２ｍｌ乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中、１７μｌ、０．０９３ｍｍｏｌ）を用いて処理した。混合物を３時間０℃で撹拌させ、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）は、アクセプターの完全な消費を示した。反応を、１：１（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＮＥｔ３混合物（０．５ｍｌ）を用いてクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）を用いて希釈しセライトに通してろ過した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：２〜１：１）によって精製し、トリサッカライド１４＊（６９ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、８５％）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７０Ｈ７８Ｎ４Ｏ１９Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値１３３３．４８７９ 実測値１３３３．４９１１ｍ／ｚ。
実施例１３：２−アジド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−メチル（２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−（２−（ベンジルチオ）エタノール（１５＊）：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．０ｍｌ）中に、レブリノイルエステル１４＊（３０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、室温で、最初にピリジン（５６μｌ、０．６９２ｍｍｏｌ）および酢酸（３７μｌ、０．６４６ｍｍｏｌ）の混合物を加え、その後、ヒドラジン一水和物（２μｌ、０．０４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌させ、ＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）を用いて希釈し、アセトン（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし、水（１５ｍｌ）に注いだ。水相を、ＥｔＯＡｃ（４×１０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ０：１〜１：２〜２：３）によって精製し、アルコール１５＊（２８ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、１００％）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ６５Ｈ７２Ｎ４Ｏ１７Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値１２３５．４５１１ 実測値１２３５．４５３９ｍ／ｚ。
実施例１４：２−アジド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−ベンジルオキシメチル−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−メチル（２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（１６＊）：
アルコール１５＊（８．６ｍｇ、７．１μｍｍｏｌ）、ベンジルオキシメチルチオシクロヘキサン（７９ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ）、およびＴＴＢＰｙ（１０５ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で３０分間保った。混合物を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（０．４ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（３Å）で、３０分間、室温で撹拌した。混合物を０℃まで冷却し、ＤＭＴＳＴ（０．１ｍｌ乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中、７．１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を４５分間にわたって滴下で加え、一方、反応温度は１０℃より下に保った。反応物を更に４５分間撹拌し、１：１（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ混合物の添加によってクエンチし濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１０〜１：２）によって精製し、アセタール１６＊（６．０ｍｇ、４．５μｍｏｌ、６４％）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７３Ｈ８０Ｎ４Ｏ１８Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値１３５５．５０８６ 実測値１３５５．５０７１ｍ／ｚ。
実施例１５：２−アセトアミド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−ベンジルオキシメチル−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−メチル（２，４−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（１７＊）：
乾燥ピリジン（０．３５ｍｌ）中にアジド１６＊（１４．０ｍｇ、１０．５μｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、０℃でチオ酢酸（０．３５ｍｌ）を加えた。混合物を室温に温め、その温度で２４時間撹拌した。溶液を、トルエン（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１０〜アセトン／ヘキサン １：７〜１：５〜１：３）によって精製し、アセトアミド１７＊（９．４ｍｇ、７．０μｍｏｌ、６６％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ７５Ｈ８４Ｎ２Ｏ１９Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値１３７１．５２８１ 実測値１３７１．５３１４ｍ／ｚ。
実施例１６：２，２’−ジチオビス［２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート−（１→１）−エタノール］（１８＊）：
ＴＨＦ（４．０ｍｌ）およびＭｅＯＨ（０．８ｍｌ）中に、ジエステル１７＊を有する撹拌溶液に、０℃で、水中にＮａＯＨの１Ｍ溶液（１．５ｍｌ）を加えた。反応物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。反応物を、ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）を用いて希釈し、０．５ＭのＮａＨＳＯ４水溶液を用いてｐＨ４に酸性化した。分離後、水性画分を、ＥｔＯＡｃ（８×１０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、白色固体として中間体二塩基酸を得た。
液体アンモニア（５ｍｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（１５ｍｌ）中に粗二塩基酸を有する溶液を−７８℃で加えた。混合物を、ｔＢＵＯＨ（０．５ｍｌ）を用いて処理し、新たにカットされたナトリウムのかたまり（４５ｍｇ）を、深い青色が持続されるまで加えた。反応物を、−７８℃で４５分間撹拌し、固体の酢酸アンモニウム（２００ｍｇ）を添加することによってクエンチした。溶液をアルゴン気流の下で、室温に温め、ＭｅＯＨ（２×１０ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣を１６時間空気下に放置し、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、１：１ ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ水溶液）によって精製し、繰り返して凍結乾燥し、ジスルフィド１８＊を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）Ｃ４４Ｈ７０Ｎ４Ｏ３２Ｓ２（Ｍ−Ｈ＋） 計算値１２２９．３３３０ 実測値１２２９．３３４２ｍ／ｚ。
実施例１７：メチル（エチル２，３−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリノイル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート（１９＊）：
ＣＨ２Ｃｌ２（１．９ｍＬ）中にアルコール７＊（９４ｍｇ、０．２１７ｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、室温でレブリン酸（３８６ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（６７３ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．２６ｍＬ、３．２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をその温度で３５時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて希釈し、セライトに通してろ過した。混合物を濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１〜３ｍＬ）の最少容量で溶解し、脱脂綿に通してろ過した。同じ手順を３回繰り返した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／トルエン １：１）によって精製し、エステル１９＊（９１ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ、７９％）を淡黄色のオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２８Ｈ３４Ｏ８Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値５５３．１８７２ 実測値５５３．１８７２ｍ／ｚ。
実施例１８：メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド）ウロネート−（１→１）−６−（ベンジルチオ）ヘキサノール（２０＊）：
チオグリコシド１９＊（８７ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）、６−（ベンジルチオ）ヘキサノール２１＊（８５ｍｇ、０．３７９ｍｍｏｌ）、およびＴＴＢＰｙ（９７ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で３０分間保った。混合物を、Ｅｔ２Ｏ（２．５ｍｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（０．８３ｍｌ）の溶液に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（３Å）を加え、３０分間、室温で撹拌した。溶液を０℃に冷却し、ＤＭＴＳＴ（６３．５ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）を用いて処理した。反応物を、室温まで温め、８時間その温度で撹拌した。反応を、１：１（ｖ／ｖ）のＭｅＯＨおよびトリエチルアミン（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン ０：０：１〜１：２：１）によってろ過し、分離できないα／β混合物として対応するグリコシド（６０ｍｇ）を得た。
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２．２ｍｌ）中にグリコシド混合物を有する撹拌溶液に、室温で最初にピリジン（１９５μｌ、２．４１１ｍｍｏｌ）および酢酸（１３７μｌ、２．３９３ｍｍｏｌ）の混合物、その後、ヒドラジン水和物（５．９μｌ、０．１２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間その温度で撹拌し、ＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）を用いて希釈し、アセトン（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし、水（１５ｍｌ）に注いだ。水相を、ＥｔＯＡｃ（４×１０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：２）によって精製し、アルコール２０＊（２９ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、２ステップで３０％）を透明オイルとして、対応するβ−異性体（２２ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、２２％）と共に得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３４Ｈ４２Ｏ７Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値６１７．２５４４ 実測値６１７．２５４２ｍ／ｚ。
実施例１９：６，６’−ジチオビス［α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート−（１→１）−１−ヘキサノール］（２２＊）：
ＴＨＦ（１．０ｍｌ）およびＭｅＯＨ（０．５ｍｌ）中に、エステル２０＊（１０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、０℃で、ＮａＯＨの１Ｍ水溶液（０．８ｍｌ）を加えた。反応物を室温に温め、１６時間撹拌した。反応を、ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）、および水（５ｍｌ）を用いて希釈し、０．５ＭのＮａＨＳＯ４水溶液を用いてｐＨ４に酸性化した。分離後、水性画分を、ＥｔＯＡｃ（８×５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、白色固体として中間体酸を得た。
液体アンモニア（８ｍｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（２ｍｌ）中に粗二塩基酸を有する溶液を−７８℃で加えた。混合物を、ｔＢＵＯＨ（０．４ｍｌ）を用いて処理し、新たにカットされたナトリウムのかたまり（４５ｍｇ）を、深い青色が持続されるまで加えた。反応物を、−７８℃で４５分間撹拌し、固体の酢酸アンモニウム（１００ｍｇ）の添加によってクエンチした。溶液をアルゴン気流の下で、室温に温め、ＭｅＯＨ（２×１０ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣を１６時間空気下に放置し、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、９：１ ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ水溶液）によって精製し、繰り返して凍結乾燥し、ジスルフィド２２＊（３．１ｍｇ、５．１μｍｏｌ、２ステップで６０％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）Ｃ２４Ｈ４２Ｏ１４Ｓ２（Ｍ−Ｈ＋） 計算値６１７．１９３８ 実測値６１７．１９５４ｍ／ｚ。
実施例２０：２−アセトアミド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−レブリノイル−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−６−（ベンジルチオ）ヘキサノール（２３＊）：
６−（ベンジルチオ）ヘキサノール２１＊（２９ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ）、およびリン酸グリコシル２＊（７０ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で３０分間保った。混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（１．８ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（４Å−ＡＷ）を加え、１時間、室温で撹拌した。溶液をその後０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．２ｍｌの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中に、３１μｌ、０．１７１ｍｍｏｌを用いて処理した。混合物を、３時間その温度で撹拌し、反応を、１：１（ｖ／ｖ）のＭｅＯＨおよびトリエチルアミン（０．５ｍｌ）を用いてクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）を用いて希釈し、セライトに通してろ過した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３〜３：２）によってろ過し、分離できないα／β混合物として対応するグリコシド（５７ｍｇ）を得た。
乾燥ピリジン（０．９ｍｌ）中にグリコシド混合物を有する撹拌溶液に、０℃でチオ酢酸（０．９ｍｌ）を加えた。混合物を、室温に温め、２４時間その温度で撹拌した。溶液を、トルエン（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：２〜２：１〜６：１）によって精製し、アセトアミド２３＊（２２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、２ステップで２９％）を白色固体として、対応するβ−異性体（２１．６ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、２９％）と共に得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３４Ｈ４６Ｎ２Ｏ８Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値６６５．２８７２ 実測値６６５．２８６５ｍ／ｚ。
実施例２１：６，６’−ジチオビス［２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−１−ヘキサノール］（２４＊）：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．０ｍｌ）中にエステル２３＊（１０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、室温で最初にピリジン（３８μｌ、０．４６７ｍｍｏｌ）と酢酸（２４．９μｌ、０．４３６ｍｍｏｌ）との混合物を加え、その後ヒドラジン水和物（１．０μｌ、０．０２０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、２時間その温度で撹拌し、アセトン（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＬＨ−２０、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ２：１）によって精製し、対応するアルコールを透明なオイルとして得た。
液体アンモニア（５ｍｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（１．２ｍｌ）中に中間体アルコールを有する溶液を−７８℃で加えた。混合物を、ｔＢＵＯＨ（０．５ｍｌ）を用いて処理し、新たにカットされたナトリウムのかたまり（８０ｍｇ）を、深い青色が持続されるまで加えた。反応物を、−７８℃で４５分間撹拌し、固体の酢酸アンモニウム（１００ｍｇ）に添加することによってクエンチした。溶液をアルゴン気流の下で、室温に温め、ＭｅＯＨ（２×１０ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣を１６時間空気下に放置し、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、９：１ ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ水溶液）によって精製し、繰り返して凍結乾燥し、ジスルフィド２４＊（１．７ｍｇ、２．７μｍｏｌ、２ステップで３３％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２８Ｈ５４Ｎ４Ｏ８Ｓ２（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値６６１．３２８１ 実測値６６１．３３０６ｍ／ｚ。
実施例２２：２−アセトアミド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−３−Ｏ−レブリノイル−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（２５＊）：
２−（ベンジルチオ）エタノール１１＊（７１ｍｇ、０．４２１ｍｍｏｌ）、およびリン酸グリコシル２＊（１７１ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で３０分間保った。混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（１．８ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（４Å−ＡＷ）を加え、１時間、室温で撹拌した。溶液を−４０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（０．２ｍｌの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中に、５６μｌ、０．３０９ｍｍｏｌ）を用いて処理した。混合物を、０℃にゆっくり温め（２時間）、１：１（ｖ／ｖ）のＭｅＯＨとトリエチルアミンとの混合物（０．５ｍｌ）を用いてクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）を用いて希釈し、セライトに通してろ過し濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：３〜１：１）によって精製し、対応するβ−グリコシド（２２ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ、１４％）と共に、対応するα−グリコシド（５５ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、３４％）を得た。
乾燥ピリジン（０．４ｍｌ）中に中間体α−グリコシド（４０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、０℃でチオ酢酸（０．４ｍｌ）を加えた。混合物を、室温に温め、２４時間その温度で撹拌した。溶液を、トルエン（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：３〜アセトン／ヘキサン１：２〜２：３）によって精製し、アセトアミド２５＊（３１ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、７６％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３０Ｈ３８Ｎ２Ｏ８Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値６０９．２２４６ 実測値６０９．２２５６ｍ／ｚ。
実施例２３：６，６’−ジチオビス［２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−１−エタノール］（２６＊）：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３．０ｍｌ）中にエステル２５＊（２０．７ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、室温で最初にピリジン（８６μｌ、１．０５８ｍｍｏｌ）と酢酸（５７μｌ、０．９８８ｍｍｏｌ）との混合物を加え、その後ヒドラジン水和物（３．４μｌ、０．０７１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、５時間その温度で撹拌し、ＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）を用いて希釈し、アセトン（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし、水（１０ｍｌ）に注いだ。水相を、ＥｔＯＡｃ（４×５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（アセトン／ヘキサン １：１）によって精製し、中間体アルコール（１７．５ｍｇ）を白色固体として得た。
液体アンモニア（６ｍｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（１．５ｍｌ）中に中間体アルコールを有する溶液を−７８℃で加えた。混合物を、ｔＢＵＯＨ（０．５ｍｌ）を用いて処理し、新たにカットされたナトリウムのかたまり（４５ｍｇ）を、深い青色が持続されるまで加えた。反応物を、−７８℃で４５分間撹拌し、固体の酢酸アンモニウム（１００ｍｇ）の添加によってクエンチした。溶液をアルゴン気流の下で、室温に温め、ＭｅＯＨ（２×１０ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣を１６時間空気下に放置し、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、１：１０ ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ水溶液）によって精製し、繰り返して凍結乾燥し、ジアセテート塩としてジスルフィド２６＊（７．９１ｍｇ、１２．３μｍｏｌ、２ステップで７０％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ３８Ｎ４Ｏ８Ｓ２（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値５４９．２０２９ 実測値５４９．２０８６ｍ／ｚ。
実施例２４：２，２’−ジチオビス［α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート−（１→１）−１−エタノール］（２７＊）：
ＴＨＦ（０．６ｍｌ）、およびＭｅＯＨ（０．３ｍｌ）の溶液中にエステル１３＊（８．６ｍｇ、９．５μｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、０℃で、水中にＮａＯＨが１Ｍとなる溶液（０．５ｍｌ）を加えた。反応物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）および水（５ｍｌ）を用いて希釈し、０．５Ｍ ＮａＨＳＯ４水溶液を用いてｐＨ４に酸性化した。分離後、水性画分を、ＥｔＯＡｃ（８×５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、白色固体として中間体二塩基酸を得た。
液体アンモニア（６ｍｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（１．５ｍｌ）中に粗二塩基酸を有する溶液を−７８℃で加えた。混合物を、ｔＢＵＯＨ（０．４ｍｌ）を用いて処理し、新たにカットされたナトリウムのかたまり（７５ｍｇ）を、深い青色が持続されるまで加えた。反応物を、−７８℃で４５分間撹拌し、固体の酢酸アンモニウム（１００ｍｇ）の添加によってクエンチした。溶液をアルゴン気流の下で、室温に温め、ＭｅＯＨ（２×１０ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣を１６時間空気下に放置し、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、１：９ ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ水溶液）によって精製し、繰り返して凍結乾燥し、ジスルフィド２７＊（２．５ｍｇ、２．９μｍｏｌ、２ステップで６１％）を白色固体として得た。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）Ｃ２８Ｈ４２Ｏ２６Ｓ２（Ｍ−Ｈ）＋ 計算値９０１．０９６６ 実測値９０１．０９８１ｍ／ｚ。
実施例２５：複合糖質の合成 一般式（Ｉ）のサッカライドのＣＲＭ１９７への共役：
０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ＮａＰｉ） ｐＨ７．４（１ｍｌ）中にＣＲＭ１９７を有する撹拌溶液に、室温で、ＤＭＦ（２０μｌ）中にスクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）（２６４μｇ、８６３ｎｍｏｌ）を有する溶液を加えた。混合物を、その温度で１時間撹拌し、膜ろ過（アミコンウルトラ（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ）遠心分離（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）膜、１０ｋＤａ カットオフ）を用いて濃縮した。タンパク質溶液を０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４を用いて希釈し、再び濃縮した。この工程を３回繰り返し、溶液を、０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４を用いて１ｍｌに希釈した。１２０μｌの０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４中に一般式（ＩＩ）の中間体（６９０ｍｍｏｌ）を有する溶液を、室温で、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）（６９０ｍｍｏｌ）と共に処理し、アルゴン雰囲気下その温度で１時間放置し、ブロモアセトアミド修飾ＣＲＭ１９７を有する溶液に、室温で、加えた。混合物を室温で２時間、その後４℃で１６時間放置し、膜ろ過を用いて精製した（上記参照）。その後、０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４（１ｍｌ）中に精製された複合糖質を有する溶液を、１００μｌの水中にＬ−システイン（４１７μｇ、３．４５μｍｏｌ）を有する溶液と室温で処理した。混合物をその温度で２時間放置し、膜ろ過によって精製した。一般式（Ｉ）のサッカライドの複合糖質への取り込みを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および直角光散乱検出器（ＳＥＣ−ＲＡＬＳ）を有するサイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。
実施例２６：複合糖質の合成 一般式（Ｉ）のサッカライドの免疫調節特性を有するスフィンゴ糖脂質への共役の流れ
環状のテフロンＡＦ２４００チューブ（５６６μｌ）を装着している光化学的フローリアクターを用いることによって（Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１３，１９，３０９０）、水（３００μｌ）中に一般式（Ｉ）のサッカライド（１．５当量）を有する溶液を、水（３００μｌ）およびＡｃＯＨ中にペンテニル修飾された（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオール（１当量）を有する溶液と反応させる（８μｌ；滞留時間：１０分、流速：シリンジごとに２８．３μＬ／ｍｉｎ−１）。リアクターアウトプットは凍結乾燥され、粗物質を、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、水中に５％ＥｔＯＨ、１０ｍｍ×１５０ｍｍ）を用いて精製し、修飾された（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールに共有結合した一般式（Ｉ）のサッカライドの複合糖質を、白色固体として得た。
実施例２７：複合糖質の合成 ２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールのＢＳＡへの共役
０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ＮａＰｉ）ｐＨ７．４（１ｍＬ）中にＢＳＡ（０．５ｍｇ、７．６ｎｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、ＤＭＦ（２０μｌ）中にＮ−スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）（８９μｇ、２９０ｎｍｏｌ）を有する溶液を室温で加えた。混合物を、室温で１時間撹拌し、膜ろ過（アミコン（Ａｍｉｃｏｎ） ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）遠心式（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）膜、１０ｋＤａ カットオフ）を用いて濃縮した。タンパク質溶液を０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４を用いて希釈し、再び濃縮した。この工程を３回繰り返し、溶液を、水を用いて０．５ｍＬに希釈した。２０μＬを分析のために取り、タンパク質溶液を、膜ろ過を用いて０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４に再バッファー化した。１２０μｌの０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４中に、ジスルフィド１８＊（モノマーに対してそれぞれ１４０μｇ、２２８ｎｍｏｌ）を有する溶液を、室温で、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）（２５０ｍｍｏｌ）と共に処理し、アルゴン雰囲気下その温度で１時間放置し、活性化されたタンパク質を有する溶液に、室温で、加えた。混合物を４℃で１６時間放置し、膜ろ過を用いて精製した（上記参照）。水を用いて洗浄し、０．５ｍＬに希釈後、分析サンプル（２０μＬ）を取り、溶液を再バッファー化した。０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４（０．５ｍｌ）中に精製された複合糖質を有する溶液を、１００μｌの水中にＬ−システイン（４１７μｇ、３．４５μｍｏｌ）を有する溶液と室温で処理した。混合物をその温度で２時間放置し、膜ろ過によって精製した。２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールの複合糖質への取り込みを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（ポジティブモード）によって評価した。
測定された分子量：
ＢＳＡ：６６３４１ｍ／ｚ
ＢＳＡ−ＳＢＡＰ共役体：６８３１６ｍ／ｚ（約１０個のＳＢＡＰ基の取り込み）
ＢＳＡ−ＳＢＡＰ複合糖質：６９１０ｍ／ｚ（約１．３分子の２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールの取り込み）
Ｌ−システインを用いてクエンチ後のＢＳＡ−ＳＢＡＰ複合糖質：７２０７４ｍ／ｚ（約２４．５個のＬ−システイン分子の取り込み）
実施例２８：複合糖質の合成 ２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールのＢＳＡへの共役
０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ＮａＰｉ）ｐＨ７．４（１ｍＬ）中にＢＳＡ（０．５ｍｇ、７．６ｎｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、ＤＭＦ（２０μｌ）中にＮ−スクシンイミジル−３−マレイミドプロピオネート（１０１μｇ、３８０ｎｍｏｌ）を有する溶液を室温で加えた。混合物を、室温で１時間撹拌し、膜ろ過（アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）０．５ｍＬウルトラ（Ｕｌｔｒａ）遠心式（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）膜、１０ｋＤａ カットオフ）を用いて濃縮した。タンパク質溶液を０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４を用いて希釈し、再び濃縮した。この工程を３回繰り返し、溶液を、水を用いて０．５ｍＬに希釈した。２０μＬを分析のために取り、タンパク質溶液を、膜ろ過を用いて０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４に再バッファー化した。１２０μｌの０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４中に、ジスルフィド１８＊（モノマーに対してそれぞれ１４０μｇ、２２８ｎｍｏｌ）を有する溶液を、室温で、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）（２５０ｍｍｏｌ）と共に処理し、アルゴン雰囲気下その温度で１時間放置し、活性化されたタンパク質を有する溶液に、室温で、加えられた。混合物を４℃で１６時間放置し、膜ろ過を用いて精製した（上記参照）。水を用いて洗浄し、０．５ｍＬに希釈後、分析サンプル（２０μＬ）を取り、溶液を再バッファー化した。０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４（０．５ｍｌ）中に精製された複合糖質を有する溶液を、１００μｌの水中にＬ−システイン（４１７μｇ、３．４５μｍｏｌ）を有する溶液と室温で処理した。混合物をその温度で２時間放置し、膜ろ過によって精製した。グリカンの複合糖質への取り込みを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（ポジティブモード）によって評価した。
測定された分子量：
ＢＳＡ：６６３４１ｍ／ｚ
ＢＳＡ−マレイミド共役：６９２５４ｍ／ｚ（約１９個のマレイミド基の取り込み）
ＢＳＡ−マレイミド複合糖質：７１３４０ｍ／ｚ（約３．４分子の２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールの取り込み）
Ｌ−システインを用いてクエンチ後のＢＳＡ−マレイミド複合糖質：７２１０６ｍ／ｚ（約６．３個のＬ−システイン分子の取り込み）
実施例２９：固体担体への共役 ＧＡＰＳＩＩスライドを用いたマイクロアレイ合成
マレイミド−機能化マイクロアレイを、ジイソプロピルエチルアミン（２．５％ｖ／ｖ）と共に、乾燥ＤＭＦ中に６−マレイミドヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２ｍＭ）を有する溶液中にアミン被覆されたスライド（ＧＡＰＳＩＩスライド、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ））を２４時間、室温で浸すことによって生成した。スライドを、水を用いて３回洗浄、エタノールを用いて３回洗浄し、乾燥まで遠心分離し、スポットがつくまでアルゴン下で保存した。希釈された一般式（Ｉ）のサッカライドを、スポットにつき０．４ｎＬで、自動圧電配列ロボット（サイエニオン社（Ｓｃｉｅｎｉｏｎ）、ベルリン、ドイツ）によって修飾マイクロアレイスライドに印刷した。固定化反応の完結のために、印刷されたスライドを、加湿チャンバーに保存した。
マイクロアレイスライドを、水を用いて３回洗浄した。未反応のマレイミドを、スライドをＰＢＳ中にβ−メルカプトエタノール（０．１％、ｖ／ｖ）を有する溶液に、１時間室温で浸すことによってクエンチした。スライドを、水を用いて、およびエタノールを用いて３回洗浄し、乾燥まで遠心分離し、ＰＢＳ中にＢＳＡ（１％、ｗ／ｖ）を有する溶液で、１時間室温でブロックした。ブロックされたスライドを洗浄し（２×ＰＢＳ、３×水）、遠心分離し、血清希釈液と共にインキュベートした。
実施例３０：固体担体への共役 コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）ＮＨＳスライドを用いてのマイクロアレイの合成
コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）ＮＨＳスライドを２４時間（ＰＢＳ中に１％ｗ／ｖ）インキュベートした。スライドをブロッキングバッファー（５０ｍＭ ＮａＰｉ中に１００ｍＭエタノールアミン ｐＨ＞９）中で、３０分間室温でインキュベートし、水およびエタノールを用いてそれぞれ３回洗浄し、乾燥した。スライドは、その後、マレイミド機能化および印刷を受けた（実施例２９参照）。
実施例３１：実施例２９および実施例３０に記述される手順に従って合成されたマイクロアレイを用いた結合実験
結合実験を、蛍光標識された抗ウサギ、または抗ヒト二次抗体を用いて、天然のＳＰ１ポリサッカライドの存在下、または非存在下で示される希釈液において、ウサギ抗−ＳＰ１型血清、またはヒト肺炎球菌標準血清００７ｓｐ（ニューモバックスワクチンを用いて免疫付与された２８７人のプール血清）のいずれかを用いて被覆されたマイクロアレイスライドをインキュベートすることによって行った。
実施例３２：リンカーＡの、および内部連結分子の免疫原性の評価
本発明に係る複合糖質１、すなわち
Ｈ−（Ｐ）ｎ３−（Ｎ）ｎ２−（Ｍ）ｎ３−Ｏ−Ａ−Ｓ−残りの内部連結分子１−免疫原性担体１
のように内部連結分子１を介して免疫原性担体１に連結されるリンカーＡを示す一般式（Ｉ）のサッカライドを含む複合糖質、
を調製するのに使用されるリンカーＡの、および内部連結分子の免疫原性をチェックするために、
下記の３つの複合糖質を合成する必要がある：
複合糖質２：
Ｈ−（Ｐ）ｎ３−（Ｎ）ｎ２−（Ｍ）ｎ３−Ｏ−Ａ−Ｓ−残りの内部連結分子２−免疫原性担体２；
複合糖質３
ガラクトース−Ｏ−Ａ−Ｓ−残りの内部連結分子１−免疫原性担体２；
複合糖質４
ガラクトース−Ｏ−Ａ−Ｓ−残りの内部連結分子２−免疫原性担体２；
免疫原性担体２は、免疫付与において使用される免疫原性担体１に無関係でなければいけない。例えば、ＣＲＭ１９７を、複合糖質１を調製するために使用する場合、ＢＳＡを免疫原性担体２として使用することができる。
ガラクトースは、本発明に係るサッカライド、すなわちＨ−（Ｐ）ｎ３−（Ｎ）ｎ２−（Ｍ）ｎ３−ＯＨに無関係であるように、複合糖質３を調製するのに選択された。
複合糖質２の調製のために使用される内部連結分子２は、内部連結分子１に無関係でなければいけない。例えば、スルホ−ＧＭＢＳを、内部連結分子１として使用した場合、無関係な内部連結分子２はスルホＳＩＡＢになるだろう。
免疫原性担体２、内部連結分子２、および無関係なサッカライドの選択は、複合糖質の合成の分野の当業者にとって明らかである。
ＥＬＩＳＡプロトコル
９６ウェルプレートを、ＰＢＳ中に各複合糖質（５０μｇ／ｍｌ）を有する溶液の５０μｌを用いて１時間３７℃で被覆した。プレートを１００μｌの洗浄バッファー（ＰＢＳ＋０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０）を用いて一度洗浄し、２００μｌのブロッキング溶液（ＰＢＳ中に１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ）を用いてブロックした。プレートを、洗浄バッファーを用いて３回洗浄し、その後ブロッキング溶液中で抗血清希釈液と共に１６時間４℃でインキュベートした。プレートを３回洗浄し、ブロッキング溶液で希釈された適切な二次抗体（例えば、ヤギ抗−マウスＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＨＲＰ）、アブカム（ａｂｃａｍ）ａｂ６７８９）の溶液５０μｌと共に１時間３７℃でインキュベートした。プレートを、洗浄バッファーを用いて３回洗浄し、製造業者の取扱説明書にしたがってＥＬＩＳＡ基質（例えば、ピアース（Ｐｉｅｒｃｅ）製ＡＢＴＳ、Ｎｏ．３７６１５など）と共にインキュベートした。
適用された複合糖質間の光学密度の比較は、抗リンカー、抗内部連結分子、および抗サッカライドとの間で免疫応答の定量比較を与えるだろう。
実施例３３：２−アジド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−６−（ベンジルチオ）エタノール（２８＊）：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．０ｍｌ）中に中間体レブ（Ｌｅｖ）エステル２５＊（１７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、室温で最初にピリジン（７２μｌ、０．８９４ｍｍｏｌ）および酢酸（４８μｌ、０．８３４ｍｍｏｌ）の混合物を加え、その後ヒドラジン水和物（３μｌ、０．０６２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、５時間その温度で撹拌し、ＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）を用いて希釈し、アセトン（０．１ｍｌ）を用いてクエンチし、水（１０ｍＬ）に注いだ。水相を、ＣＨ２Ｃｌ２（４×５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機層画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：１）によって精製し、アルコール２８＊（１３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、９２％）を透明なオイルとして得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２８Ｎ４Ｏ５Ｓ２（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値４９５．１６７８ 実測値４９５．１６７９ｍ／ｚ。
実施例３４：メチル（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−２−アジド−４−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−２−（ベンジルチオ）エタノール（２９＊）
アルコール２８＊（１３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、ＴＴＢＰｙ（４５、０．１３８ｍｍｏｌ）、およびチオグリコシド１９＊（３７ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３×１０ｍｌ）と共に共蒸発させ、高真空下で１時間保った。混合物を、乾燥ＴＨＦ（１．５ｍｌ）に溶解し、活性化されたモレキュラーシーブ（３Å）で、３０分間、室温で撹拌した。溶液を０℃に冷却し、ＤＭＴＳＴ（０．２ｍＬＤＣＭ中、１７ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を滴下して処理した。混合物を室温に温め、２時間後、ＤＣＭ中にさらなるＤＭＴＳＴを有する溶液（２当量）を用いて処理した。反応を１６時間撹拌し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）の１：１（ｖ／ｖ）混合物を用いてクエンチした。混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）を用いて抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：２）によって精製し、中間体ジサッカライドを透明なオイルとして得た。
乾燥ピリジン（０．２ｍｌ）中に中間体ジサッカライドを有する撹拌溶液に、０℃でチオ酢酸（０．２ｍｌ）を加えた。混合物を室温に温め、その温度で２４時間撹拌した。溶液を、トルエン（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：３〜アセトン／ヘキサン １：２）によって精製し、中間体アセトアミドを白色泡として得た。
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（０．６ｍＬ）およびＭｅＯＨ（６０μＬ）中に中間体アセトアミドを有する撹拌溶液に、室温で最初にピリジン（１２μｌ、０．１６ｍｍｏｌ）および酢酸（８μｌ、０．１５ｍｍｏｌ）の混合物を加え、その後ヒドラジン水和物（１μｌ、０．０２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、３時間その温度で撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）を用いて希釈し、アセトン（０．１ｍＬ）を用いてクエンチし、水（５ｍＬ）に注いだ。水相を、ＣＨ２Ｃｌ２（４×５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機層画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（アセトン／ヘキサン ０：１〜１：１）によって精製し、アセトアミド２９＊（２．７ｍｇ、３．１４μｍｏｌ、回収された２８＊に基づいて３ステップで２１％）を白色泡として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ４６Ｈ５４Ｎ２Ｏ１２Ｓ（Ｍ＋Ｎａ）＋ 計算値８８１．３２９５ 実測値８８１．３２８６ｍ／ｚ。
実施例３５：２，２’−ジチオビス［α−Ｄ−ガラクトピラノシルウロネート−（１→３）−２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−１−エタノール］（３０＊）
ＴＨＦ（１ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．２５ｍＬ）中にエステル２９＊（２．７ｍｇ、３．１４μｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、１ＭのＮａＯＨ水溶液（０．４ｍＬ）を０℃で加えた。反応物をゆっくり室温に温め、１６時間撹拌した。反応物を、ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）および水（５ｍｌ）を用いて希釈し、０．５ＭのＮａＨＳＯ４水溶液を用いてｐＨ４に酸性化した。分離後、水性画分を、ＥｔＯＡｃ（８×５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、白色固体として中間体二塩基酸を得た。
液体アンモニア（１０ｍｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（１．５ｍｌ）中に粗二塩基酸を有する溶液を−７８℃で加えた。混合物を、ｔＢＵＯＨ（０．４ｍｌ）を用いて処理し、新たにカットされたナトリウムのかたまり（８０ｍｇ）を、深い青色が持続されるまで加えた。反応物を、−７８℃で４５分間撹拌し、固体の酢酸アンモニウム（１００ｍｇ）を添加することによってクエンチした。溶液をアルゴン気流の下で、室温に温め、ＭｅＯＨ（２×１０ｍｌ）および水（２×５ｍｌ）を用いて共蒸発させた。残渣を１６時間空気下に放置し、サイズ排除クロマトグラフィー（セファデックスＧ−２５、１：３ ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ水溶液）によって精製し、繰り返して凍結乾燥し、ジスルフィド３０＊（１．１５ｍｇ、２．６１μｍｏｌ、２ステップで８３％）を白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．１６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４４−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．３４−４．２０（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．０４（ｍ，１Ｈ），４．００−３．７８（ｍ，５Ｈ），３．０６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ Ｃ３２Ｈ５４Ｎ４Ｏ２０Ｓ２（Ｍ＋２Ｈ）２＋ 計算値４４０．４ 実測値４４０．２ｍ／ｚ。
実施例３６：本発明に係る一般式３の化合物にアクセルするための一般的手順
実施例３６．１
１２ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中にイソシアネートＡ１２（２．７０ｍｍｏｌ）を有する溶液に、アミン（１．０５当量、２．８３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１２時間大気温度で撹拌し、その後真空内で濃縮した。粗物質を、Ｅｔ２Ｏ中で溶解し、続いてヘキサンを添加した。その後、ウレアを沈殿しろ過し、生成物を得た。
無水ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中にｐ−メトキシベンジルエーテル保護されたウレア化合物（０．４ｍｍｏｌ）、および１，３，５−トリメトキシベンゼン（０．２ｍｍｏｌ）の混合物を有する溶液を、無水ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中にヘキサフルオロアンチモン酸銀（２０μｍｏｌ、５ｍｏｌ％）を有する溶液にカニューレを介して加えた。反応混合物を完了するまで加熱還流し、溶出剤としてジクロロメタンを用いてセライトの小さいパッドに通してろ過した。溶媒を真空内で除去し、粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製しＡ１０を得た。
実施例３６．２
ここで、Ｒ３はＭｅを表し、Ｒ４はＯＨを表す。
ｉ−ＰｒＯＨ（１００ｍＬ）中にアルデヒドＡ１７（１．０ｍｍｏｌ）およびケトンＡ１６（１．０ｍｍｏｌ）の混合物を有する溶液に、プロピオン酸（０．１ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）およびピロリジン（０．１ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を４５℃で１〜２５時間撹拌した。ＮａＨＣＯ３を加え、混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（３５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた抽出物を、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、中間体の不飽和ケトンＡ１５を得た。
ＴＨＦ中に中間体の不飽和ケトンＡ１５（０．０５ｍｍｏｌ）を有するＡ９．５×１０−３Ｍ溶液、および最近報告されたストライカー（Ｓｔｒｙｋｅｒ’ｓ）試薬（０．０２５ｍｍｏｌ）を、共に混合して均一溶液を形成し、その溶液を室温で２時間撹拌した。反応を、飽和ＮＨ４Ｃｌを用いてクエンチした。混合物を１時間撹拌した。反応混合物をろ過し、残渣を、酢酸エチルを用いて洗浄した。有機相を分離し、水相を、酢酸エチルを用いて抽出した。合わせた有機相を、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ケトンＡ１４を得た。
ニートなトリス−ノニルオキシメチルチタニウム（１０．１ｍｍｏｌ）を二口丸底フラスコ内に置き、Ａｒ雰囲気にさらした。ＴＨＦ中にケトンＡ１４（４．６５ｍｍｏｌ）を有する溶液を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。オレイン酸（１７．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１１０℃に加熱した。生成物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、中間体の第３級アルコールを得た。
ジクロロメタン（５ｍＬ）中にＰＭＢエーテル（０．１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＰＯＣｌ３（０．５ｍｍｏｌ）を加えて室温で撹拌した。反応の完結後、反応を氷水でクエンチし、有機層を分離し、水層を、ジクロロメタン（２×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって精製し、アルコールＡ１３を得た。
実施例３６．３
オーブン乾燥させた２５０ｍＬ丸底フラスコに、乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中に、１，３−プロパンジチオール（２０ｍｍｏｌ、１．１当量）、およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（０．４０ｍｍｏｌ、２．２ｍｏｌ％）を有する溶液を装填した。混合物を室温で撹拌し、水素化ナトリウム（鉱油中に６０％懸濁液、２０ｍｍｏｌ、１．１当量）を一部分ずつ加えた。結果として生じる混合物を３０分間撹拌し、その後、臭化ベンジル（１８ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を室温で１時間撹拌し、その後、フリットファンネル（ｆｒｉｔ ｆｕｎｎｅｌ）でろ過し、真空下で濃縮した。結果として生じる粗オイルを、真空下で蒸留し、無色オイルＡ２０として表題の化合物を得た。
無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中にＡ１９（０．１１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、チオールＡ２０（０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１８時間撹拌し、その後、真空内で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、Ａ１８を提供した。
一般式Ａ２０の種々のジチオール誘導体は市販されている。
実施例３６．４
新たにカットされたナトリウム金属（４．６７ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（１０ｍＬ）に溶解し、ベンジルメルカプタン（６．２３ｍｍｏｌ）を加えた。イソプロパノール（５ｍＬ）中に４−（ブロモメチル）シクロペント−１−エン（１．５５ｍｍｏｌ）を有する溶液を加え、その溶液を４日間加熱還流した。溶液を冷却して室温にし、水（５０ｍＬ）を用いて希釈し、ジエチルエーテル（３×５０ｍ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を、０．１Ｍの水酸化カリウム水溶液（２×５０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、粗Ａ２５を得た。酢酸エチル／ヘキサンを用いて溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより表題の化合物Ａ２５を得た。
磁気の撹拌バー、セプタム注入口、オイルバブラー、及び還流凝縮装置を備えている乾燥５０ｍＬフラスコを、窒素を用いてフラッシュした。フラスコに、アルケンＡ２５（５．５ｍｍｏｌ）および乾燥ＴＨＦ（２．５ｍＬ）を加え、その後９−ＢＢＮ（ＴＨＦ中に０．５Ｍ水溶液、５．５ｍｍｏｌ）を有する溶液を０℃で加えた。混合物をゆっくり室温に温め、その後４〜６時間撹拌し、Ｂ−アルキル−９−ＢＢＮ Ａ２４の溶液を得た。
Ａ２４の上記ボラン溶液に、ＤＭＦ−ＴＨＦ（２５ｍＬ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（０．１５ｍｍｏｌ）、ハロアルケン（５ｍｍｏｌ）、および粉末化Ｋ３ＰＯ４（６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を８時間５０℃で撹拌し、その後水に注いだ。生成物を、ベンゼンを用いて抽出し、水を用いて４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。酢酸エチル／ヘキサンを用いて溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより表題の化合物Ａ２２を得た。
実施例３６．５
乾燥メタノール中に１．１当量のアルデヒドＡ３０を有する溶液に、乾燥メタノール中に１．３当量のアミンＡ２８を０℃アルゴン雰囲気下で滴下した。混合物を、さらに１０分間室温で撹拌し、続いて、乾燥メタノール中に１．０当量の酸Ａ２７を有する溶液、および１．１当量のイソシアニドＡ２９の連続的な付加を行った。反応混合物を室温で２４〜４８時間撹拌した。結果として生じる溶液を、ジクロロメタンを用いて希釈し、１Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて、続いて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、およびブラインによって洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）によって精製した。
実施例３６．６
Ａ３３の合成：
エチルアルコール（８０ｍＬ）および水（２７ｍＬ）中にアジドＡ３５（０．０３ｍｏｌ）および塩化アンモニウム（０．０７ｍｏｌ）を有する溶液に、亜鉛粉末（０．０４ｍｏｌ）を加え、混合物を、室温で、または還流で激しく撹拌した。反応が終わった後、酢酸エチル（２００ｍＬ）およびアンモニア水（１０ｍＬ）を加えた。混合物をろ過し、ろ液を、ブラインを用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。
Ａ３１の合成
酸Ａ３２（１ｍｍｏｌ）およびアミンＡ３３（１ｍｍｏｌ）を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩（１ｍｍｏｌ）と３．５ｍＬのメタノール中、３時間、室温でカップリングさせた。混合物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、水（１０ｍＬ）、１ＭのＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）、および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、中間体アルコールを与えた。
ＴＨＦ（２ｍＬ）中にＮａＨ（０．８３ｍｍｏｌ）を有する懸濁液を０℃に冷却し、その後、懸濁液に、ＴＨＦ（４ｍＬ）中に中間体アルコール（０．１７ｍｍｏｌ）を有する溶液をゆっくり加えた。混合物を２時間還流し、その後、冷却して室温にした。混合物に、ＴＨＦ（２ｍＬ）中にＡ３４（０．１１ｍｍｏｌ）を有する溶液を、その温度で滴下した。反応混合物を、１２時間還流し、その後冷却して室温にした。ロータリーエバポレーターによって溶媒の除去後、残渣をＣＨＣｌ３に溶解し、ろ過した。ろ液をロータリーエバポレーターによって蒸発させた後、クロマトグラフィーを行った。
ジクロロエタン（５ｍＬ）中にＰＭＢエーテル（０．１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＰＯＣｌ３（０．５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で撹拌した。反応の完結後、反応を冷水でクエンチし、有機層を分離し、水層を、ジクロロメタン（２×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって精製し、対応するアルコールＡ３１を得た。
実施例３６．７
試験管にエポキシドＡ４２（５ｍｍｏｌ）および水（２ｍＬ）を導入した。アミンＡ４１（６ｍｍｏｌ）を一度に加えて、試験管を０℃に保持し、２４時間激しい撹拌下室温に温めた。水（２ｍｌ）を加えて、含水混合物を、１０ｍｌの酢酸エチルを用いて抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去し、中間体β−アミノアルコールを得た。ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中の粗アミン、および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１ｍＬ）を、ＣｂｚＣｌ（６ｍｍｏｌ）を用いて室温で処理し、５時間その温度で撹拌した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）を用いて抽出し、有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、アルコールＡ４０を得た。
実施例３６．８
ブロミドＡ４７（８．２６ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中でチオールＡ４８と反応させ、ＮａＯＭｅを用いてｐＨ９に調節した。混合物を室温で１６時間撹拌し、減圧下で濃縮し、中間体ＰＭＢエーテルを得た。
ジクロロエタン（５ｍＬ）中にＰＭＢエーテル（０．１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＰＯＣｌ３（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。反応の完結後、反応を冷水でクエンチし、有機層を分離し、水層を、ジクロロエタン（２×５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン溶液を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって精製し、対応するアルコールＡ４６を得た。
実施例３６．９
酸Ａ５１（１ｍｍｏｌ）およびアミンＡ５０（１ｍｍｏｌ）を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩（１ｍｍｏｌ）と３．５ｍＬのメタノール中、３時間、室温でカップリングさせた。混合物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、水（１０ｍＬ）、１ＭのＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）、および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、アルコールＡ４９を得た。
実施例３６．１０
ピリジン（６０ｍＬ）中にＡ５３（８０ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＭｓＣｌ（８０ｍｍｏｌ）を効果的な撹拌で、３０分間２０℃で少量ずつ加えた。３０分間撹拌した後、反応混合物を２０時間室温で維持し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）を用いて希釈し、水性洗浄物が酸性になるまで２Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて洗浄した。Ｈ２Ｏ層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、中間体メシレートを得た。
ナトリウムベンジルスルフィド（４．１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中に中間体メシレート（２．７ｍｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、室温で少量ずつ加えた。３時間後、混合物を、トルエン（１００ｍＬ）を用いて希釈し、水（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空内で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、チオエーテルＡ５２を得た。
実施例３６．１１
ピリジン（６ｍＬ）中にジオールＡ５５（８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＴｓＣｌ（８ｍｍｏｌ）を効果的な撹拌をしながら、３０分間２０℃で少量ずつ加えた。３０分間撹拌した後、反応混合物を２０時間室温で維持し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）を用いて希釈し、水性洗浄物が酸性になるまで２Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて洗浄した。Ｈ２Ｏ層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、中間体トシレートを得た。
５ｍＬの乾燥ＨＭＰＡ中に中間体トシレート（０．６７ｍｍｏｌ）を有する溶液を、Ｎ２下、氷浴で冷却した。この混合物を、２０ｍＬの乾燥ＨＭＰＡ中にＮａＳＢｎ（１０ｍｍｏｌ）を有する冷たい溶液（乾燥エーテル中で４００ｍｇのナトリウムおよび過剰のＢｎＳＨから調製され、エーテルは続いて除去され、ＨＭＰＡと置き換えられる）に加えた。添加後、溶液を冷凍庫（−１５℃）で１４時間保存した。それを１００ｍＬの水を用いて処理し、エーテルを用いて３回抽出した。エーテル抽出物を、水を用いて４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒をその後、真空下で除去し、残渣（１４０ｍｇ）をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い、チオエーテルＡ５４を得た。
実施例３６．１２
新たに蒸留されたＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に、Ｎ２下でＥｔ２Ｚｎ（ヘキサン中に１．０Ｍ）（２０．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を氷浴で冷却し、その後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中にトリフルオロ酢酸（２０．０ｍｍｏｌ）を有する溶液を、シリンジを介して反応混合物に滴下した。２０分間撹拌して、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中にＣＨ２Ｉ２（２０．０ｍｍｏｌ）を有する溶液を加えた。さらなる２０分の撹拌後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中にジオールＡ５８（１０．０ｍｍｏｌ）を有する溶液を加え、氷浴を除去した。さらなる３０分の撹拌後、反応混合物を、０．１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）（代替方法として、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、またはＥｔ３Ｎ、続いて飽和ＮａＨＣＯ３水溶液）、およびヘキサン（２５ｍＬ）を用いてクエンチし、層を分離した。水層を、ヘキサンを用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、およびブラインを用いて洗浄し、その後、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／エーテル＝５０／１）によって精製し、ジオールＡ５７を得た。
ピリジン（６ｍＬ）中にジオールＡ５７（８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＴｓＣｌ（８ｍｍｏｌ）を効果的な撹拌をしながら、３０分間２０℃で少量ずつ加えた。３０分間撹拌した後、反応混合物を２０時間室温で維持し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）を用いて希釈し、水性洗浄物が酸性になるまで２Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて洗浄した。Ｈ２Ｏ層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、中間体トシレートを得た。
５ｍＬの乾燥ＨＭＰＡ中に中間体トシレート（０．６７ｍｍｏｌ）を有する溶液を、Ｎ２下、氷浴で冷却した。この混合物を、２０ｍＬの乾燥ＨＭＰＡ中にＮａＳＢｎ（１０ｍｍｏｌ）を有する冷たい溶液（乾燥エーテル中で４００ｍｇのナトリウムおよび過剰のＢｎＳＨから調製され、エーテルは続いて除去され、ＨＭＰＡと置き換えられる）に加えた。添加後、溶液を冷凍庫（−１５℃）で１４時間保存した。それを１００ｍＬの水を用いて処理し、エーテルを用いて３回抽出した。エーテル抽出物を、水を用いて４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒をその後、真空下で除去し、残渣（１４０ｍｇ）をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い、チオエーテルＡ５６を得た。
実施例３６．１３
ＣＨ２Ｃｌ２（１２０ｍＬ）中、ジオールＡ６１（１６．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２４．１ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．１６ｍｍｏｌ）を有する溶液に、ＴＢＤＭＳＣｌ（１９．３ｍｍｏｌ）を０℃で１時間にわたって５回で加えた。結果として生じる不均一な反応混合物を、室温に徐々に温めた。混合物を、水およびＣＨ２Ｃｌ２を用いて希釈する前に１２時間撹拌した。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液、水、およびブラインを用いて連続して洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空内で濃縮した。淡黄色オイルを、真空クロマトグラフィーによって精製し、中間体シリルエーテルを得た。
封管内で、ｉＰｒＯＨ（１ｍＬ）中に中間体シリルエーテル（１．０ｍｍｏｌ）および触媒（活性炭上のＲｈまたはＲｕ、Ｎ．Ｅ ケムキャット（Ｃｈｅｍｃａｔ）；基質の１０ｗｔ％）の混合物を有する溶液を、６０℃、５気圧、Ｈ２下で撹拌した。室温に冷却後、反応混合物を、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を用いて希釈し、触媒を、膜フィルター（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、マイレクス（Ｍｉｌｌｅｘ）−ＬＨ、０．４５ｍｍ）に通してろ過によって除去した。ろ液を真空内で濃縮し、対応するデカリンを得た。
ピリジン（６ｍＬ）中に中間体デカリンアルコール（８ｍｍｏｌ）を有する溶液にＴｓＣｌ（８ｍｍｏｌ）を効果的な撹拌をしながら、３０分間２０℃で少量ずつ加えた。３０分間撹拌した後、反応混合物を２０時間室温で維持し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）を用いて希釈し、水性洗浄物が酸性になるまで２Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて洗浄した。Ｈ２Ｏ層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、トシレートＡ６０を得た。
５ｍＬの乾燥ＨＭＰＡ中にトシレートＡ６０（０．６７ｍｍｏｌ）を有する溶液を、Ｎ２下、氷浴で冷却した。この混合物を、２０ｍＬの乾燥ＨＭＰＡ中にＮａＳＢｎ（１０ｍｍｏｌ）を有する冷たい溶液（乾燥エーテル中で４００ｍｇのナトリウムおよび過剰のＢｎＳＨから調製され、エーテルは続いて除去され、ＨＭＰＡと置き換えられる）に加えた。添加後、溶液を冷凍庫（−１５℃）で１４時間保存した。それを１００ｍＬの水を用いて処理し、エーテルを用いて３回抽出した。エーテル抽出物を、水を用いて４回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒をその後、真空下で除去し、残渣（１４０ｍｇ）をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い、中間体シリルエーテルを得た。
中間体シリルエーテル（０．２３５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）中に室温で溶解し、続いて、７０％ＨＦ−ピリジン（０．２ｍＬ）を添加した。２日間撹拌後、反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いて慎重にクエンチし、結果として生じる溶液を、ＥｔＯＡｃを用いて希釈した。有機層を、ブラインを用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、真空内で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、アルコールＡ５９を得た。
実施例３６．１４
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中にスクアリン酸エチルエステルＡ６７（０．５ｍｍｏｌ）、Ａ６８（１００ｍｇ、０．５８８ｍｍｏｌ）、およびＥｔ３Ｎ（１５滴）を有する溶液を、室温で一晩撹拌した。その後、溶液を減圧下で濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中に、結果として生じる粗残渣、Ａ６６（１．１ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１５滴）を有する溶液を、室温で一晩撹拌した。その後、溶液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーによって精製した。ＰＭＢエーテル（０．４４ｍｍｏｌ）を、アセトン（４．５ｍｌ）および水（０．５ｍｌ）中に溶解した。ＣＡＮ（０．８４５ｍｍｏｌ）を固体として加え、続いて、アセトン（０．９ｍｌ）および水（０．１ｍｌ）中にＣＡＮ（０．８４５ｍｍｏｌ）を有する溶液の滴下を７０分にわたって行った。さらに１５分後、反応物を炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、クロロホルムを用いて抽出した。生成物をクロマトグラフィーで精製し、６５を得た。
実施例３６．１５
トリエチルアミン（０．３５９ｍＬ）を、ＴＨＦ（７．５０ｍＬ）中に市販のＳ−ベンジル−（Ｒ）−システイノール（２．５６ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。１０分撹拌後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（２．５６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を、２時間室温で撹拌した。その後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、水を用いて洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発させ、無色オイルとしてＡ６９を得た。
実施例３７：本発明に係るサッカライドのさらなる例：
実施例３８：複合糖質の合成 ２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールのＣＲＭ１９７への共役
０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ＮａＰｉ）ｐＨ７．４（１．３３ｍＬ）中にＣＲＭ１９７（２ｍｇ、３４．５ｎｍｏｌ）を有する撹拌溶液に、ＤＭＦ（４０μｌ）中にＮ−スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）（１．０５ｍｇ、３．４μｍｏｌ）を有する溶液を室温で加えた。混合物を、室温で１時間撹拌し、膜ろ過（アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）４ｍＬウルトラ（Ｕｌｔｒａ）遠心式（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）膜、１０ｋＤａ カットオフ）を用いて濃縮した。タンパク質溶液を、滅菌水を用いて４ｍＬに希釈し、再び濃縮した。この工程を３回繰り返し、溶液を、滅菌水を用いて０．５ｍＬに希釈した。２０μＬを分析のために取り、タンパク質溶液を、膜ろ過を用いて０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ８．０（０．５ｍＬ）に再バッファー化した。０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ８．０（０．２ｍＬ）中に、ジスルフィド１８＊（モノマーに対してそれぞれ１．４４ｍｇ、２．３３μｍｏｌ）を有する溶液を、室温で、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ、ｐＨ７．４で１００ｍＭ保存溶液から２５μＬ）と共に処理し、アルゴン雰囲気下その温度で１時間放置し、活性化されたタンパク質を有する溶液に、加えられた。混合物を室温で１６時間撹拌し、膜ろ過を用い滅菌水で洗浄した（上記参照）。分析サンプルを取り、溶液を０．１Ｍ ＮａＰｉ ｐＨ７．４（０．５ｍｌ）に再バッファー化した。その後、複合糖質を、１００μｌの滅菌水中にＬ−システイン（０．６２５ｍｇ、５．１μｍｏｌ）を有する溶液と室温で処理した。混合物をその温度で２時間放置し、膜ろ過によって精製した。グリカンの複合糖質への取り込みを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（ポジティブモード）によって評価した。
測定された分子量：
ＣＲＭ１９７：５８１００ｍ／ｚ
ＣＲＭ１９７−ＳＢＡＰ共役体：６１７００ｍ／ｚ（約１９ＳＢＡＰ基の取り込み）
ＣＲＭ１９７−ＳＢＡＰ複合糖質：６６０００ｍ／ｚ（約５．９分子の２−アセトアミド−４−アミノ−２，４，６−トリデオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→３）−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）ウロネート−（１→１）−２−（チオ）エタノールの取り込み）
実施例３９：免疫付与実験
マウス（６〜８週歳の雌ＮＭＲＩマウス、チャールスリバー（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ））を、アルム（Ａｌｕｍ）（アルヒドロゲル（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）、ブレンタグ（Ｂｒｅｎｎｔａｇ）を用いる、または用いないで製剤化された実施例３８において合成されたＣＲＭ１９７−ＳＢＡＰ−複合糖質（４μｇ合成グリカンに対応する）を用いて、１００μＬの全用量で、０日、１４日、および２８日に皮下に免疫付与された。対照群は、アルム（Ａｌｕｍ）のみまたはＰＢＳで同様に処理されたマウスを含んだ。血液を０日、１４日、２８日、および３５日に採取し、免疫応答をグリカンマイクロアレイおよびＥＬＩＳＡによって評価した。
天然のＳｐ１ポリサッカライドに対する免疫応答は、アルム（Ａｌｕｍ）でアジュバント化された複合糖質を用いて免疫付与された一連のマウスに見出され、０日と比べて３５日では、それぞれ５００および２５００のエンドポイント力価を有する。

Claims (15)

  1. 一般式（Ｉ）：
    式中、Ａはリンカーであり；
    Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して、次の糖断片の一つを表し：
    ここで、前記糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して、互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、各Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、前記一般式（Ｉ）において多くて１回存在し、糖断片Ｓ１は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ３に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ３は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ２に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ２は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ１に同時に連結されることができず、並びに、
    ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで前記整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である、
    一般式（Ｉ）のサッカライド、およびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩。
  2. 前記一般式（Ｉ）のサッカライドの合成であって、
    式中、Ａはリンカーであり；
    Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して、次の糖断片の一つを表し：
    ここで、前記糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−ＳＨ断片に連結され、各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、前記一般式（Ｉ）において多くて１回存在し、糖断片Ｓ１は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ３に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ３は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ２に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ２は、−Ｏ−Ａ−ＳＨおよび糖断片Ｓ１に同時に連結されることができず、並びに、
    ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで前記整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１であり、
    並びに次のステップ：
    Ａ１）一般式
    である化合物４を得るために、
    ここで化合物４の式中、Ｐ１〜Ｐ４は上述のように定義され、
    式
    である化合物２を、
    式
    である化合物３と反応させること、
    ここで、化合物２の式中、Ｐ１〜Ｐ３は保護基を表し、
    化合物３の式中、Ｐ４は保護基を表し、
    および、
    一般式
    であるモノサッカライドジスルフィド５を提供するために、化合物４における保護基Ｐ１〜Ｐ４の除去を行うこと、
    ここで、モノサッカライドジスルフィド５の式中、Ａは上述のように定義され、モノサッカライドジスルフィド５は、一般式
    であるモノサッカライド６を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
    ここで、モノサッカライド６の式中、Ａは上述のように定義され；
    または、
    一般式
    である化合物７を提供するために化合物４において選択的脱保護を行うこと、
    化合物７の式中、Ｐ５は保護基であり、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、およびＡは、上述のように定義され、
    または
    Ａ２）一般式
    である化合物９を提供するために、
    ここで、式中、Ｐ６、Ｐ７、およびＡは上述のように定義され、
    一般式
    である化合物８を、
    化合物３と反応させること、
    ここで、化合物８の式中、Ｐ６およびＰ７は保護基を表し、
    および、
    一般式
    であるモノサッカライドジスルフィド１０を提供するために、化合物９においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ４、Ｐ６、およびＰ７の除去を行うこと、
    ここで、モノサッカライドジスルフィド１０の式中、Ａは上述のように定義され、モノサッカライドジスルフィド１０は、一般式
    であるモノサッカライド１１を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
    ここで、モノサッカライド１１の式中、Ａは上述のように定義され；
    または、
    一般式
    である化合物１２を提供するために化合物９において選択的脱保護を行うこと、
    化合物１２の式中、Ｐ４、Ｐ７、およびＡは、上述のように定義され、
    または
    Ａ３）一般式
    である化合物１４を提供するために、
    ここで、化合物１４の式中、Ｐ４、Ｐ８〜Ｐ１１は上述のように定義され、
    一般式
    である化合物１３を、化合物３と反応させること、
    ここで、化合物１３の式中、Ｐ８〜Ｐ１１は保護基を表し、
    および、
    一般式
    である化合物１５を提供するために、化合物１４の選択的脱保護を行うこと、
    ここで、化合物１５の式中、Ｐ４、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１１およびＡは上述のように定義され、
    および、
    Ｂ１）一般式
    である化合物１６を提供するために、化合物７を、化合物１３と反応させること、
    ここで、化合物１６の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８〜Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され；
    および、
    一般式
    であるジサッカライドジスルフィド１７を提供するために、化合物１６における保護基Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８〜Ｐ１１の除去を行うこと、
    ここで、ジサッカライドジスルフィド１７の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド１７は、一般式
    であるジサッカライド１８を提供するために還元剤を用いて更に処理され、
    ここで、ジサッカライド１８の式中、Ａは上述のように定義され；
    または、
    一般式
    である化合物１９を提供するために化合物１６における保護基Ｐ１０の選択的除去を行うこと、
    ここで、化合物１９の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０およびＡは、上述のように定義され、
    または、
    Ｂ２）一般式
    である化合物２０を提供するために、化合物１５を、化合物８と反応させること、
    ここで、化合物２０の式中、Ｐ４、Ｐ６〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
    および、
    一般式
    であるジサッカライドジスルフィド２１を提供するために、化合物２０においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ４、Ｐ６〜Ｐ９、Ｐ１１の除去を行うこと、
    ここで、ジサッカライドジスルフィド２１の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド２１は、一般式
    であるジサッカライド２２を提供するために還元剤を用いて処理され、
    ここで、ジサッカライド２２の式中、Ａは上述のように定義され；
    または、
    一般式
    である化合物２３を提供するために化合物２０における保護基Ｐ６の選択的除去を行うこと、
    ここで、化合物２３の式中、Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１およびＡは、上述のように定義され；
    または、
    Ｂ３）一般式
    である化合物２４を提供するために、化合物１２を、化合物２と反応させること、
    ここで、化合物２４の式中、Ｐ１〜Ｐ４、Ｐ７、およびＡは上述のように定義され、
    および、
    一般式
    であるジサッカライドジスルフィド２５を提供するために、化合物２４においてアジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１〜Ｐ４、およびＰ７の除去を行うこと、
    ここで、ジサッカライドジスルフィド２５の式中、Ａは上述のように定義され、ジサッカライドジスルフィド２５は、一般式：
    であるジサッカライド２６を提供するために還元剤を用いてさらに処理され、
    ここで、ジサッカライド２６の式中、Ａは上述のように定義され；
    または、
    一般式：
    である化合物２７を提供するために化合物２４における選択的脱保護を行うこと、
    ここで、化合物２７の式中、Ｐ１２は保護基であり、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ７およびＡは、上述のように定義され、
    および、
    Ｃ１）一般式：
    である化合物２８を提供するために、化合物１９を、化合物８と反応させること、
    ここで、化合物２８の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
    および、
    ここで、次の化学式
    である化合物２９を得るために、化合物２８の式中、保護基Ｐ６は、保護基Ｐ１３と置換され、
    ここで、化合物２９の式中、Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、Ｐ１３、およびＡは上述のように定義され；
    および、
    アジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１、Ｐ３〜Ｐ５、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、Ｐ１３の切断による化合物２９におけるトリサッカライドジスルフィド３０への変換、ここで化合物３０は、一般式：
    であり、
    化合物３０の式中、Ａは上述のように定義され；
    および、
    還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３０のトリサッカライド３１への変換、ここで、化合物３１は一般式：
    であり、化合物３１の式中、Ａは上述のように定義され、
    または、
    Ｃ２）一般式：
    である化合物３２を提供するために、化合物２３を、化合物２と反応させること、
    ここで、化合物３２の式中、Ｐ１〜Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
    および、
    アジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１〜Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ９、Ｐ１１の切断による化合物３２におけるトリサッカライドジスルフィド３３への変換、ここで化合物３３は、一般式：
    であり、
    化合物３３の式中、Ａは上述のように定義され；
    および、
    還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３３のトリサッカライド３４への変換、ここで、化合物３４は一般式：
    であり、化合物３４の式中、Ａは上述のように定義され；
    または、
    Ｃ３）一般式：
    である化合物３５を提供するために、化合物２７を、化合物１３と反応させること、
    ここで、化合物３５の式中、Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ１１、およびＡは上述のように定義され、
    および、
    アジド基のアセトアミド基への変換、および保護基Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ７〜Ｐ１１の切断による化合物３５におけるトリサッカライドジスルフィド３６への変換、ここで化合物３６は、一般式：
    であり、
    化合物３６の式中、Ａは上述のように定義され；
    および、
    還元剤を用いて処理することによるトリサッカライドジスルフィド３６のトリサッカライド３７への変換、ここで、化合物３７は一般式：
    であり、化合物３７の式中、Ａは上述のように定義される、合成。
  3. 請求項２に記載の合成であって、ステップＤ：
    Ｄ）一般式（Ｉ）の化合物の塩を調製すること、または一般式（Ｉ）の化合物の、もしくは一般式（Ｉ）の化合物の塩の凍結乾燥体を調製すること、
    をさらに含む、合成。
  4. 請求項２に記載の合成であって、化合物２および化合物３、化合物２および化合物１２、並びに化合物２および化合物２３との前記反応は、非極性溶媒、および極性非プロトン性溶媒の混合物中にＤＭＴＳＴおよびＴＴＢＰｙが存在する溶液で行われる、合成。
  5. 請求項２に記載の合成であって、化合物２９を得るために、化合物２８における保護基Ｐ６の保護基Ｐ１３との置換は、二つのステップで行われ、第１に、溶媒中で、または溶媒の混合物中で化合物２８をヒドラジン、またはヒドラジニウム塩と反応させることを含み、第２に、第１のステップ後に得られた生成物を、非極性溶媒中でＢｎＯＣＨ２ＳＣｙ、ＤＭＴＳＴ、およびＴＴＢＰｙと処理することである、合成。
  6. 請求項２に記載の合成であって、前記保護基の切断は、第１に、極性非プロトン性溶媒および極性プロトン性溶媒の混合物中で塩基を用いて処理することにより塩基に不安定な保護基の切断；第２に、極性プロトン性溶媒および極性非プロトン性溶媒の混合物中でナトリウムおよびアンモニアに曝すことにより水素化に敏感な保護基の切断を含む、合成。
  7. 一般式（ＩＩ）：
    式中、Ａはリンカーであり；
    Ｍ、Ｎ、およびＰは、互いに独立して次の断片を表し：
    ここで、前記糖断片Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、Ｏ−グリコシド結合を介して互いに連結され、および−Ｏ−Ａ−Ｓ断片に連結され、各糖断片Ｓ１、Ｓ２、およびＳ３は、前記断片Ｈ−（Ｐ）ｎ３−（Ｎ）ｎ２−（Ｍ）ｎ１−Ｏ−Ａ−Ｓにおいて多くて１回存在し、糖断片Ｓ１は、−Ｏ−Ａ−Ｓおよび糖断片Ｓ３に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ３は、−Ｏ−Ａ−Ｓおよび糖断片Ｓ２に同時に連結されることができず、糖断片Ｓ２は、−Ｏ−Ａ−Ｓおよび糖断片Ｓ１に同時に連結されることができず、並びに、
    ｎ１、ｎ２、およびｎ３は、０および１から選択される整数であり、ここで前記整数ｎ１、ｎ２、およびｎ３の少なくとも一つは、１である、
    一般式（ＩＩ）である中間体、およびこれらのサッカライドの薬学的に許容できる塩。
  8. 請求項１に記載の一般式（Ｉ）のサッカライドを免疫原性担体と反応させることにより得られる複合糖質。
  9. 細菌と関連する疾患に対する免疫付与においてワクチンとしての使用のための請求項８に記載の複合糖質であって、
    α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    から選択されるサッカライド構造を細菌の莢膜ポリサッカライドにおいて含む、複合糖質。
  10. 前記細菌は、ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｃｏｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１型である、請求項９に記載の複合糖質。
  11. 細菌と関連する前記疾患は、肺炎、髄膜炎、中耳炎、菌血症、並びに、慢性気管支炎、副鼻腔炎、関節炎および結膜炎の急激な悪化を含む、請求項９に記載の複合糖質。
  12. 少なくとも一つの薬学的に許容できる抗凍結剤、リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、賦形剤および／または希釈剤と共に、請求項８に記載の複合糖質、および／または請求項１に記載のサッカライド、および／または請求項７に記載の中間体を含む医薬組成物。
  13. ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細菌と関連する疾患に対する免疫において使用するための請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 請求項１３に記載の医薬組成物であって、
    前記ストレプトコッカス ニューモニエ細菌は、ストレプトコッカス ニューモニエ１型、ストレプトコッカス ニューモニエ４型、ストレプトコッカス ニューモニエ９Ｖ型、ストレプトコッカス ニューモニエ２型、ストレプトコッカス ニューモニエ１９Ｆ型、ストレプトコッカス ニューモニエ３型、ストレプトコッカス ニューモニエ１９Ａ型、ストレプトコッカス ニューモニエ１２Ｆ型、ストレプトコッカス ニューモニエ３１型、ストレプトコッカス ニューモニエ７Ｆ型、ストレプトコッカス ニューモニエ５型、ストレプトコッカス ニューモニエ１４型、ストレプトコッカス ニューモニエ６Ａ型、ストレプトコッカス ニューモニエ６Ｂ型、ストレプトコッカス ニューモニエ１８Ｃ型、およびストレプトコッカス ニューモニエ２３Ｆ型を含む、または、からなる群から選択される、医薬組成物。
  15. α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ
    α−Ｄ−ＧａｌＡｐ−（１→３）−α−２，４，６−トリデオキシ−４−アミノ−Ｄ−ＧａｌＮＡｃ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｐ
    から選択されるサッカライド構造を細菌の莢膜ポリサッカライドにおいて含む細菌によって引き起こされる疾患の診断のための免疫学的アッセイにおけるマーカーとして使用するための、請求項１に記載のサッカライド、および／または請求項７に記載の中間体。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017537941A (ja) * 2014-12-12 2017-12-21 マックス プランク ゲゼルシャフト ツゥアー フェデルゥン デル ヴィッセンシャフテン エー フォー ストレプトコッカス ニューモニアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４に対するワクチン

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11160855B2 (en) * 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
ES2738604T3 (es) * 2016-04-14 2020-01-24 Max Planck Gesellschaft Preparación mejorada de vacunas contra streptoccocus pneumoniae tipo 3
CN110914892A (zh) 2017-07-17 2020-03-24 3M创新有限公司 弯曲限制膜
US20220054632A1 (en) 2018-12-12 2022-02-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified carrier proteins for o-linked glycosylation

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005093422A2 (en) * 2004-03-22 2005-10-06 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Carbohydrate-encapsulated quantum dots for biological imaging
WO2011133227A2 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 Ancora Pharmaceuticals Inc. Synthetic oligosaccharides for staphyloccocus vaccine

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5153312A (en) * 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
ATE534402T1 (de) * 2000-06-29 2011-12-15 Smithkline Beecham Biolog Multivalente impfstoffzusammensetzung
CA2606890C (en) * 2005-05-06 2014-02-04 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Immunogens for meningitidis-a vaccines
WO2011137181A1 (en) 2010-04-27 2011-11-03 Ancora Pharmaceuticals Inc. Synthetic oligosaccharides for moraxella vaccine

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005093422A2 (en) * 2004-03-22 2005-10-06 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Carbohydrate-encapsulated quantum dots for biological imaging
WO2011133227A2 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 Ancora Pharmaceuticals Inc. Synthetic oligosaccharides for staphyloccocus vaccine

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALPHERT E CHRISTINA; LEENDERT J VAN DEN BOS; HERMAN S OVERKLEEFT: "GALACTURONIC ACID LACTONES IN THE SYNTHESIS OF ALL TRISACCHARIDE REPEATING UNITS OF THE ZWITTERIONIC", THE JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY, [ONLINE], vol. VOL:76, NR:6,, JPN5016007831, 18 March 2011 (2011-03-18), pages PAGE(S):1692 - 1706 *
TETRAHEDRON, vol. Vol.66, JPN6018011140, 2010, pages 7510 - 7519 *
XIANGYANG WU; LINA CUI; TOMASZ LIPINSKI: "SYNTHESIS OF MONOMERIC AND DIMERIC REPEATING UNITS OF THE ZWITTERIONIC TYPE 1 CAPSULAR POLYSACCHARID", CHEMISTRY - A EUROPEAN JOURNAL, [ONLINE], vol. VOL:16, NR:11,, JPN5016007830, 15 March 2010 (2010-03-15), pages PAGE(S):3476 - 3488 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017537941A (ja) * 2014-12-12 2017-12-21 マックス プランク ゲゼルシャフト ツゥアー フェデルゥン デル ヴィッセンシャフテン エー フォー ストレプトコッカス ニューモニアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４に対するワクチン

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