JP2016518861A - 生物学的試料用のケース及びケース保持器、ならびに対応する使用方法 - Google Patents
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Abstract
複数の生物学的試料を処理するためのシステムは、支持部及び温度制御器を収容する。支持部は、内部室及び内部室内に位置する基板を含むケースを保持するように構成され、基板は、1つ以上の生物学的試料を包含する複数の隔離された反応部位を包含する。温度制御器は、1つ以上の生物学的試料に対するアッセイまたは反応中に、支持部、ケース、または1つ以上の生物学的試料のうちの少なくとも1つの温度を維持または制御するように構成される。支持部はまた、アッセイまたは反応中に、基板の表面のうちの少なくとも1つを水平面に対して正の角度で維持するように構成される。【選択図】図31
Description
発明の背景
本発明は、概して、1つ以上の生物学的試料を観察、試験、及び/または分析するためのシステム、装置、及び方法に関し、より具体的には、生物学的試料のアレイを観察、試験、及び/または分析するためのシステム、装置、及び方法に関する。
本発明は、概して、1つ以上の生物学的試料を観察、試験、及び/または分析するためのシステム、装置、及び方法に関し、より具体的には、生物学的試料のアレイを観察、試験、及び/または分析するためのシステム、装置、及び方法に関する。
背景技術
生物学的及び生化学的反応のためのシステムは、リアルタイムで、及び実行後または終点分析中に、そのような反応を監視、測定、及び/または分析するために使用されている。そのようなシステムは、進行を監視し、定量的データを提供するために、配列決定、遺伝子型決定、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、及び他の生化学的反応において一般に使用される光学読み取り機を含み得る。例えば、光学励起ビームは、ハイブリダイゼーションプローブまたは分子ビーコンを照射して、標的遺伝子または他のヌクレオチド配列の量を示す蛍光信号を提供するために、リアルタイムPCR(qPCR)反応において使用され得る。更に、終点光学読み取り機は、デジタルPCR(dPCR)分析などのために、反応が完了した後にデータを提供するために使用され得る。1つのテストまたは実験につきより多くの数の反応を提供する需要の高まりは、これまでよりも多い数の反応を同時に行うことのできる機器をもたらしている。
生物学的及び生化学的反応のためのシステムは、リアルタイムで、及び実行後または終点分析中に、そのような反応を監視、測定、及び/または分析するために使用されている。そのようなシステムは、進行を監視し、定量的データを提供するために、配列決定、遺伝子型決定、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、及び他の生化学的反応において一般に使用される光学読み取り機を含み得る。例えば、光学励起ビームは、ハイブリダイゼーションプローブまたは分子ビーコンを照射して、標的遺伝子または他のヌクレオチド配列の量を示す蛍光信号を提供するために、リアルタイムPCR(qPCR)反応において使用され得る。更に、終点光学読み取り機は、デジタルPCR(dPCR)分析などのために、反応が完了した後にデータを提供するために使用され得る。1つのテストまたは実験につきより多くの数の反応を提供する需要の高まりは、これまでよりも多い数の反応を同時に行うことのできる機器をもたらしている。
1つの試験または実験における試料部位の数の増加は、これまでよりも小さい試料体積を提供するマイクロタイタープレート及び他の試料形式につながっている。更に、デジタルPCR(dPCR)などの技術は、多数の試験試料の全てまたは大部分に0または1つの標的ヌクレオチド配列を含有するより小さい試料体積に対する需要を高めている。高密度の試料形式において信頼できるデータを提供するシステム及び試料形式の必要性が存在する。
本発明の実施形態は、添付の図面と併せて閲読されるとき、以下の詳細な記載からより良く理解され得る。そのような実施形態は、図示的な目的のみであり、本発明の新規の明白ではない態様を描写する。図面は、以下の図を含む。
本発明の実施形態は、概して、多数の小さな試料または溶液の生物学的反応を監視及び測定するための装置、機器、システム、及び方法を対象とする。実施形態は、アレル特異的PCR、不斉PCR、連結媒介PCR、多重PCR、ネステッドPCR、リアルタイムPCR(qPCR)、ゲノムウォーキング、架橋PCR、デジタルPCR(dPCR)などを含み得るが、これらに限定されないポリメラーゼ連鎖反応(PCR)プロセスまたはプロトコルの使用を含む。
本発明の実施形態に従う装置、機器、システム、及び方法は、多数の試料または溶液が処理されるあらゆるPCRプロセスまたはプロトコルに適用可能である一方で、本発明の実施形態は特にdPCRにとってより好適である。dPCRにおいて、比較的少ない数の標的ポリヌクレオチドまたはヌクレオチド配列を含有する溶液は、多数の非常に小さな試験試料または体積に細分割され、これらの試料または体積のうちの大部分は、標的ヌクレオチド配列の1つの分子を含有するか、またはいずれの標的ヌクレオチド配列も含有しないようになる。試料がPCRプロトコル、手順、または実験において後続して熱サイクルされるとき、標的ヌクレオチド配列を含有する試料は大いに増幅され、正の検出信号を生成する一方で、標的ヌクレオチド配列を含有しない試料は増幅されず、検出信号または所定の閾値未満の信号を生成しない。ポアソン統計を使用して、原溶液中の標的ヌクレオチド配列の数は、正の検出信号を生成する試料の数に相関付けられ得る。いくつかの実施形態において、qPCR及びdPCRプロセスまたはプロトコルの両方は、同一の装置、機器、システム、及び方法を使用して行われる。
様々な実施形態において、本明細書に記載される装置、機器、システム、及び方法は、対象の生物学的構成要素を包含する試料または溶液中に包含される、対象の生物学的構成要素の1つ以上の型を検出するために使用され得る。これらの対象の生物学的構成要素は、DNA配列(無細胞DNAを含む)、RNA配列、遺伝子、オリゴヌクレオチド、分子、タンパク質、生物マーカー、細胞(例えば、循環性腫瘍細胞)、または任意の他の好適な標的生体分子を含むが、これらに限定されない任意の好適な生物学的標的であり得る。様々な実施形態において、そのような生物学的構成要素は、胎児診断、多重dPCR、ウイルス検出及び定量化基準、遺伝子型決定、配列決定確認、突然変異検出、遺伝子組み換え体の検出、希アレル検出、及びコピー数変動などの用途における様々なPCR方法及びシステムと併せて使用され得る。
本発明の実施形態に従うと、生物学的標的を包含する試料または溶液は、小さな試料体積または反応体積中に含まれ得る。本明細書に開示される本発明の実施形態のための試料または溶液は、一般的に、基板材料内に位置する貫通孔内に包含されるものとして説明されるが、基板内に形成されるウェルまたは湾入部内に位置する反応体積、表面基板上に分布する溶液の点、あるいはミクロ流体システムの試験部位または体積中、もしくは小さなビーズまたは球内に位置する試料または溶液などの、他の型の反応室または形式を含む、他の形態の試料または反応部位が使用されてもよい。
本発明の実施形態に従うdPCRプロトコル、手順、プロセス、または実験を行うために、初期試料または溶液は、それぞれが簡素で対費用効果の高い方法で、数ナノリットル、約1ナノリットル、または1ナノリットル未満(例えば、数十または数百ピコリットル、あるいはそれ未満)の体積を有する、数万、数十万、または百万の反応部位または領域にさえ分割され得る。標的ヌクレオチド配列の数は非常に少なくあり得るため、そのような場合において、初期溶液の内容全体が説明され、処理される試料体積または室のうちの1つの中に含有されることもまた重要であり得る。例えば、いくつかの標的ヌクレオチドのみが初期溶液中に存在する場合、これらの標的ヌクレオチドのうちの多くまたは全ては、反応部位または領域のうちの1つの中への装填に成功していない小さな残留流体体積中に潜在的に含有され得る。したがって、初期溶液の効率的な移動は、希アレルまたは標的ヌクレオチドの計数における計算違いの可能性、あるいは、より悪くは、これらの標的が指定された反応部位または領域のうちの1つの中に分布されたために、希アレルまたは標的ヌクレオチドを全く失ってしまう可能性を低減するのに役立つ。したがって、本発明の実施形態は、全て、または本質的に全ての試料または溶液が、所定の反応部位のうちの1つの中に包含されることにつながる方法で、初期試料溶液を、多数の反応部位または領域、あるいは貫通孔内に効率的に分布及び装填するために使用され得る。
図1を参照すると、生物学的分析のためのシステム100は、試料保持器、基板、または複数の生物学的試料を保持するように構成されるプレート102を備える。特定の実施形態において、システム100は、試料保持器102を保定する、位置付ける、または支持するためのキャリア、支持部、または支持枠104と、試料保持器102を受け入れるための土台またはマウント103と、生物学的試料の1つ以上の生物学的プロセスを監視及び/または測定するための光学システム106と、生物学的試料及び/または試料保持器102の熱環境を維持及び/またはサイクルするための熱制御器108と、生物学的試料及び/または試料保持器102の周囲または内部の環境の制御のために試料保持器の上に配置される加熱蓋109と、生物学的試料内で発生する1つ以上の生物学的プロセスを制御、監視、及び/または測定するための関連する電子メモリ及びアルゴリズムを有する1つ以上の電子プロセッサ110と、のうちのいずれかまたは全てを更に備え得る。様々な実施形態において、システム100は、キャリア104、土台103、光学システム106、熱制御器108、加熱蓋109、及び/または1つ以上の電子プロセッサ110のうちのいくつかまたは全ての組み合わせを含む機器を備える。
特定の実施形態において、システム100及び試料保持器102は、複数の生物学的試料に対してリアルタイムPCRプロセスを実行するために好適である。他の実施形態において、システム100及び試料保持器102は、配列決定または遺伝子型決定測定などの、他の生物学的または生化学的プロセスを実行するために好適である。図示される実施形態において、光学システム106は、試料保持器102及び関連する生物学的試料を照射するための励起システム112、ならびに、例えば、生物学的試料内に存在し、励起ビームに応答する1つ以上の蛍光色素またはプローブ分子によって生成される蛍光信号などによる、生物学的試料からの発光を受け入れるための発光光学システム114を備える。励起光学システム112は、励起源118、レンズ120、122、124、及びビームスプリッタ128を備える。励起光学システム112はまた、生物学的試料によって受け入れられる光の波長範囲を限定するための1つ以上の光学フィルタ130を備え得る。発光光学システム114は、光学感知器132、レンズ124、134、及びビームスプリッタ128を備える。発光光学システム114はまた、光学感知器132によって受け入れられる光の波長範囲を限定するための1つ以上の光学フィルタ138を備え得る。更に、光学システム106は、例えば、生物学的試料の処理中の望まれない熱または光学効果を低減または排除するために、システム100の部分を隔離するように構成される1つ以上の窓140を備え得る。
特定の実施形態において、試料保持器102は、例えば、生物学的試料の蒸発を低減または防止するために密封され得る、収納部、筐体、またはケース150内に配置される。特定の実施形態において、1つ以上の試料保持器102または試料ケース150は、システム100内の試料保持器102を整列化及び/または運搬するように構成されるキャリア104によって保定、位置付け、及び/または支持される。
図2を参照すると、試料保持器102は、1つまたは両方の表面上に配置される、対向する表面及び複数の反応領域、ウェル、またはバイアル154を備える基板を含み得る。図2に図示される実施形態において、反応領域154は、試料保持器102の対向する表面間に配置される複数の貫通孔を備える。特定の実施形態において、貫通孔154は、二次元のアレイに沿って互いから均等に離間配置される。あるいは、貫通孔154は、例えば、試料の異なる群の貫通孔内への装填を促進するために、複数のサブアレイ158内に群化され得る。例えば、図2に示される図示される実施形態において、試料保持器102は、各サブアレイが8×8の個々の貫通孔154を含み、試料保持器102上に合計3072の貫通孔154を含む、4×12のサブアレイを備える。貫通孔154は、図2の拡大図に図示されるように、生物学的試料及び/または参照色素を包含する液体が、表面張力または毛管力によって貫通孔154内に保持されるように寸法取りされ得る。この効果は、貫通孔154の壁を親水性コーティングでコーティングすることによって増強され得る。特定の実施形態において、試料保持器102の外部表面は、様々な貫通孔154内に位置する試料間の相互汚染または混合を低減または排除するように構成される、疎水性材料またはコーティングを含む。生物学的試料を支持するための貫通孔配置の様々な態様及び利点は、米国特許第USPN6,306,578号、米国特許第USPN6,893,877号、米国特許第USPN7,682,565号において更に開示され、これらの特許のそれぞれの全内容の全体が、本明細書に完全に説明されるかのように、全ての目的のためにこれにより参照によって組み込まれる。
特定の実施形態において、試料保持器102などの試料保持器の初期試料または溶液は、それぞれが、例えば、数ナノリットル、約1ナノリットル、または1ナノリットル未満(例えば、数十または数百ピコリットル、あるいはそれ未満)の体積を有する、100分の1、1000分の1、1万分の1、10万分の1、あるいは100万分の1の反応部位または領域にさえ分割され得る。
図2に示される図示される実施形態において、試料保持器102は矩形を有するが、試料保持器102は方形または円形などの他の形を有し得る。特定の実施形態において、試料保持器102は、方形、かつ15ミリメートル×15ミリメートルの全体寸法を有する。そのような実施形態において、試料保持器102は、13ミリメートル×13ミリメートルの寸法を有する有効区域、領域、または帯域を有し得る。本明細書で使用される場合、用語「有効区域」、「有効領域」、または「有効帯域」は、反応領域、貫通孔、または溶液体積がその上に包含される、または分布する、試料保持器102などの試料保持器の表面区域、表面領域、または表面帯域を意味する。特定の実施形態において、試料保持器102の有効区域は、14ミリメートル×14ミリメートル以上、例えば、15ミリメートル×15ミリメートルの基板寸法に増大され得る。
図示される図2の実施形態において、貫通孔154は、320マイクロメートルの特性直径、及び隣接する貫通孔間に500マイクロメートルのピッチを有し得る。他の実施形態において、貫通孔154は、75マイクロメートルの特性直径を有し、隣接する貫通孔間に125マイクロメートルのピッチを有する。更に他の実施形態において、貫通孔154は、75マイクロメートル以下の特性直径、例えば、60マイクロメートル以下または50マイクロメートル以下の特性直径を有する。他の実施形態において、貫通孔154は、20マイクロメートル以下、10マイクロメートル以下、または1マイクロメートル以下の特性直径を有する。貫通孔間のピッチは、125マイクロメートル以下、例えば、100マイクロメートル以下、30マイクロメートル以下、または10マイクロメートル以下であり得る。
特定の実施形態において、試料保持器102は、試料保持器102の対向する表面間に、300マイクロメートルである、または約300マイクロメートルである厚さを有する基板を備え、各貫通孔154は、約1ナノリットル、33ナノリットル、または1.3ナノリットル〜33ナノリットルの間の体積を有し得る。あるいは、各貫通孔154の体積は、例えば、貫通孔154の直径及び/または試料保持器102基板の厚さを減少させることによって、1ナノリットル以下であり得る。例えば、各貫通孔154は、1ナノリットル以下、100ピコリットル以下、30ピコリットル以下、または10ピコリットル以下の体積を有し得る。他の実施形態において、各貫通孔154のうちのいくつかまたは全ての体積は、1ナノリットル〜20ナノリットルの範囲内にある。特定の実施形態において、試料保持器102は、同時係属中の米国特許出願番号第61/612,087号、PCT出願番号第PCT/US2013/032002号、米国仮出願番号第61/723,759号、またはPCT出願番号第PCT/US2013/032002号に記載される基板に類似するまたは等しい基板を備え、これらの出願のうちのそれぞれは、その全体が本明細書に参照によって組み込まれる。例えば、貫通孔154は、六角形を有し得る、または六角形パターンに配置される。更に、貫通孔154のアレイは、米国仮出願番号第61/723,759号またはPCT出願番号第PCT/US2013/032002号において説明されるように、孔パターンにおいて脱落を有するように配置され得る。
特定の実施形態において、貫通孔154の密度は、1平方ミリメートル当たり少なくとも100の貫通孔である。より高い密度もまた期待される。例えば、貫通孔154の密度は、1平方ミリメートル当たり150以上の貫通孔、1平方ミリメートル当たり200以上の貫通孔、1平方ミリメートル当たり500以上の貫通孔、1平方ミリメートル当たり1,000以上の貫通孔、または1平方ミリメートル当たり10,000以上の貫通孔であり得る。
有利なことに、有効区域を有する全ての貫通孔154は、光学システムによって同時に撮像及び分析され得る。特定の実施形態において、有効区域は12,000を超える貫通孔154を含む。他の実施形態において、有効区域は、少なくとも20,000、少なくとも30,000、少なくとも100,000、少なくとも1,000,000の貫通孔、または少なくとも10,000,000の貫通孔を備える。
特定の実施形態において、貫通孔154は、第1の特性直径、厚さ、または体積を特徴とする第1の複数の貫通孔、及び第1の特性直径、厚さ、または体積とは異なる第2の特性直径、厚さ、または体積を特徴とする第2の複数の貫通孔を備える。貫通孔サイズまたは寸法におけるそのような変動は、例えば、異なる濃度を有し得る2つ以上の異なるヌクレオチド配列を同時に分析するために使用され得る。更に、またはあるいは、単一の基板102上の貫通孔154のサイズにおける変動は、プロセスまたは実験の動的範囲を増大させるために使用され得る。例えば、試料保持器102は貫通孔154の2つ以上のサブアレイを含み得、各群は、他の群または残りの群(複数可)の貫通孔154の直径または厚さとは異なる直径または厚さを特徴とする。各群は、標的ポリヌクレオチドの計数の異なる動的範囲を提供するようなサイズに作製され得る。サブアレイは、基板102の異なる部分上に位置し得る、または2つ以上のサブアレイが、試料保持器102の全有効区域の上に、または試料保持器102の有効区域の共通部分上に延在するように散在し得る。
特定の実施形態において、貫通孔154のうちの少なくともいくつかは、それらの壁の全てまたは一部分にわたって漸減または面取りされる。面取り及び/または漸減された貫通孔の使用は、溶液部位間または試験試料間の最小空間の光学的制限を超過せずに、隣接する貫通孔154間の平均距離または合計区域を低減することが発見されている。これは、装填プロセス中に基板102の表面上に取り残される液体溶液の量の低減につながる。したがって、光学システムのための隣接する溶液部位間または試験試料間により大きい効果的な空間を依然維持しながら、より高い装填効率が得られ得る。
図2に示される図示される実施形態において、試料保持器102はまた、そこから個々の保持器102に対する情報が引き出され得る、または確認され得る、英数字160、バーコード162、または他の記号的表示を備え得る。そのような情報は、貫通孔154のうちのいくつかまたは全てとともに包含される試薬、及び/または試料保持器102を使用するときに従うプロトコルを含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、発光光学システム114は、光学感知器132が文字160及び/またはバーコード162を読み取るために使用され得るように構成される。更に、発光光学システム114は、単一枠内に、貫通孔154、及び英数字160またはバーコード162のうちのいずれかまたは両方を含む試料保持器102の部分を含む画像を提供するように構成され得る。いくつかの実施形態において、発光光学システム114は、単一枠内に、各試料保持器102の貫通孔154、及び英数字160またはバーコード162のうちのいずれかまたは両方を含む2つ以上の試料保持器102同一の試料保持器102の部分を含む画像を提供するように構成される。
図3を参照すると、特定の実施形態において、ケース150は、生物学的試料を外部環境から少なくとも部分的に隔離または分離するように、上部表面168を有する土台164、及び土台164の上部表面168を密封可能に係合して、試料プレート102を収容するための収納部を形成するカバー170を備える。ケース150はまた、任意で土台164とカバー170との間に位置するガスケットまたは密封部171を備え得る。図4〜8を更に参照すると、土台164は、図5に図示されるように、試料プレート102を完全に空洞176内部に、かつ完全に上部表面168及びカバー170の下に含むために十分な深度を有する空洞、室、内部室、または収納部176をカバー170とともに形成する、底部表面172及び側壁174を備える。土台164は、カバー170が土台164に取り付けられた後に流体を空洞176内に注入するための、1つ以上の充填口178を更に備え得る。底部表面172は、完全にまたは概して平坦な表面を含む。あるいは、底部表面172は1つ以上の湾入部180を含み得る。例えば、図5に図示される実施形態において、湾入部180は、充填口178の近位に位置し、ピペットまたは類似する装置を使用して空洞176に液体が充填されるにつれて、流体が進入し、空気が退出することを可能にする拡大した作業体積を提供するように構成される。
特定の実施形態において、有利に密封するが、より親水性である生物学的試料と混合しない、性質上疎水性である密封流体または液体が、密封されたケース150に充填口178を通して注入される。ケース150内へのそのような密封流体または液体の使用は、貫通孔154内の生物学的試料を更に密封し、高温(例えば、90〜100℃の上温度)での熱サイクル中の生物学的試料の蒸発を低減するために使用され得る。好適な密封流体は、3M Companyによって商業的に販売されるFluorinert(商標)、例えば、ペルフルオロヘキサン(C6F14)を含むが、これに限定されない。
土台164はまた、底部表面172の上及び/またはそれと一体化して位置する、複数の突起、タブ、杭部位、または支持パッド182を備え得る。支持パッド182は、試料保持器102に係合及び固定するように構成され得る。あるいは、支持パッド182のうちのいくつかは、例えば、試料保持器102の歪みまたは屈曲を低減または防止するために、試料保持器102をその長さに沿って単純に接触または支持するように構成され得る。支持パッド182は、試料保持器102の底部表面と土台164の底部表面172との間の所定の空間を維持するように更に構成され得る。支持パッド182の数は、支持パッド182のうちのいくつかまたは全てによって係合されるときの、試料保持器102の所定の平坦さを維持するように選択される。特定の実施形態において、支持パッド182のうちのいくつかは、残りの支持パッド182がプレート102の底部面に沿ってのみ試料プレート102に接触するように構成されながら、試料プレート102を側方方向(例えば、底部表面172に平行な平面に沿って)に係合する。他の実施形態において、試料プレート102は、支持パッド182の材料のうちのいくつかを側方方向に置換するための支持パッド182のうちの少なくともいくつかによって、用具または固定具の使用を通して係合される。他の実施形態において、プレート102と支持パッド182のうちの少なくともいくつかの間の係合は、試料プレート102と支持パッド182との間に配置される接着材、エポキシ、または溶接材料の使用によって提供される。
特定の実施形態において、複数の支持パッド182に加えて、またはそれの代わりに、土台164は、試料保持器102の周辺部分を受け入れるように構成される1つ以上の横棒を備え得る。例えば、横棒の対は、反対側の側壁174に沿って配置され得る。横棒は、各側壁174の全長に沿って配置され得る。あるいは、横棒は、各側壁174の一部分のみに沿って配置され得る。更に、1つ以上の支持パッド182は、反対側の側壁174に沿って、及び/または土台164の他の壁174に沿って含まれ得る。
土台164は、比較的高い熱伝導率及び/または高い熱拡散率を有する材料、例えば、少なくとも50〜200W・m−1・K−1の熱伝導率、及び/または少なくとも約8×10−5m2・s−1の熱拡散率を有する材料から作製され得る。好適な材料は、アルミニウム、銅、銀、または金などの金属材料、あるいは黒鉛などの半金属を含むが、これらに限定されない。そのような金属の使用は、均一な温度(低熱不均一性またはTNU)、または土台164の所定の温度プロファイル底部表面172の提供を援助し、今度はそれが試料保持器102にわたって均一な、または所定の温度プロファイルを提供する。
特定の実施形態において、試料保持器102にわたる低TNUまたは所定の温度プロファイルの提供は、試料保持器102の全範囲にわたる、底部表面172と試料保持器102との間の接触を同時に防止しながら、試料保持器102の底部表面を土台164の底部表面172の近くに位置付けることによって更に増強される。これらの条件を満たすために、特定の実施形態において、試料保持器102は、土台164の底部表面172から300マイクロメートル未満の名目距離を配置される。他の実施形態において、名目距離は、250マイクロメートル未満、200マイクロメートル未満、または100マイクロメートル未満である。
ケースまたはパッド材料の熱伝導率が、生物学的試験試料の貫通孔154からの蒸発を低減するために使用される空洞176内の密封流体の熱伝導率よりもずっと高いとき、支持パッド182と試料保持器102との間の接触は、保持器上に熱点を生成し得る。例えば、上記に引用するFluorinert(商標)FC−70材料は、共通の金属についての200W・m−1・K−1を超える熱伝導率と比較される、0.07W・m−1・K−1の熱伝導率を有する。特定の実施形態において、熱点の問題は、支持パッド182が試料保持器102と低い全接触区域を有するように構成することによって解決される。
低い全接触区域は、少ない数の支持パッドを提供することによって、及び個々のパッドが試料保持器102と低い接触区域を有するように構成することによって達成され得る。支持パッド182の数の下限は、少ない量の試料保持器102の屈曲または内陥を維持するための設計制約によって影響される。図示される実施形態において、例えば、図6及び7に見られるように、支持パッド182のうちの少なくともいくつかは、支持パッド182が側壁174の近くで比較的広く、支持パッド182の先端に向かって幅が漸減するように、側方方向に漸減される。この様式において、支持パッド182の硬性が維持されながら、試料保持器102との接触区域は低レベルの熱点への熱移動を提供する、低レベルで維持される。
特定の実施形態において、試料保持器102は、例えば、試料装填中及び顧客またはエンドユーザによるシステム100内での使用中の、人の試料保持器102との接触を低減または排除するために、顧客への発送前に土台164に固定されるか、または取り付けられる。そのような実施形態において、用具または特殊化された固定具は、少量のパッド材料が側方(例えば、底部表面172に平行な平面に沿って)に置換されるように利用され得、側方に置換された材料は、試料保持器102を固定、保持、または係止するのに十分な量であるが、試料保持器102の屈曲または歪みを排除するのに十分に小さい。あるいは、側方に置換された材料の量は、試料保持器102を固定、保持、または係止し、かつ所定のレベル以下で試料保持器102を屈曲または歪ませるのに十分な量である。
特定の実施形態において、土台164の外部表面は、システム100内のケース150、試料保持器102、及び/または貫通孔154を登録及び整列化するための複数の登録機能184を含む。例えば、2つの登録機能184aは、ケース150を試料保持器102の長い縁のうちの1つに対して垂直な軸に沿って整列化または登録するために使用される一方で、登録機能184bは、ケース150を試料保持器102の長い縁のうちの1つに対して平行な軸に沿って整列化または登録するために使用される。
図9〜11を参照すると、カバー170は、外部表面188、及び土台164の上部表面168と相互作用する周縁部192を含む内部表面190を含む。カバー170の少なくとも一部分は、貫通孔154及びその中に包含される生物学的試料または参照試料への光学アクセスを提供するために、材料中に透明または比較的透明なを含む。カバー170は、生体適合性材料、またはカバー170が貫通孔154内に包含される生物学的試料から隔離される場合、別の材料から作製され得る。カバー170のための好適な材料は、ガラス、アクリル、スチレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、及びポリプロプレンを含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、材料は、シクロオレフィンポリマー(COP)を含む。特定の実施形態において、カバー170は、貫通孔154に、またはそこから向けられる光を調節するように構成されるレンズレットアレイまたは回折光学的要素(図示せず)を含み得る。カバー170は、それに取り付けられる密封部171で製作され得る。あるいは、密封部171は、カバー170から分離して顧客またはユーザに提供され、その後土台164による使用及び適用前に互いに取り付けられる。密封部171は、土台164及び/またはカバー170への接着のために少なくとも1つの表面上に接着性材料を含み得る。密封部170は、接着性材料上に配置され、使用前に除去される、除去可能な非粘着層194を任意で含み得る。
試料保持器102の反応領域154内に包含される試料は、様々な方法、アッセイ、またはプロトコルに従って処理され得る。特定の実施形態において、試料保持器102の反応領域154は、PCRアッセイまたはプロトコル中に熱サイクルされる。熱サイクルは、qPCR、dPCR、あるいは他の終点PCRアッセイまたはプロトコルを提供するために、機器100の熱制御器108及び/または光学システム106を使用して提供され得る。更に、またはあるいは、熱サイクルは、外部の熱サイクラーを使用して提供され、後続して光学システム106などの光学読み取り機を使用して検視または分析される。試料保持器102の反応領域154内に包含される試料の熱サイクル中、ケース150の空洞176内に包含される密封流体中でガス抜けが発生し得る。そのような場合、例えば、摂氏60℃〜摂氏95℃または摂氏100℃の温度範囲を超える熱サイクル中に密封流体の温度が増大するために、ガス抜けは、気泡の形成につながり得る。特定の実施形態において、内部表面190は、試料保持器102の空洞176内に包含される密封流体中のそのような気泡の形成を制御または管理する、表面プロファイル、形状、または輪郭200を含む。そのようなプロファイルは、気泡が浮力のために液体培地の上部に向かって位置または移動する自然の傾向を有利に利用する。
特定の実施形態において、輪郭200及び内部表面190は、中央帯域210、周辺帯域212、側帯域214、第1の末端帯域220、及び第2の末端帯域222を含む。各帯域は、更に部分化され得る。例えば、図11に示す図示される実施形態において、第1の末端帯域220は、第1の区域230、第2の区域232、及び第3の区域234を含む。帯域210、212、214、220、222、及び区域230、232、234の形状及び位置を説明するにあたって、内部表面190上の位置が外部表面188の位置よりも正である座標系が採用される。
ケース150及び試料保持器102の他の構成要素とともに組み立てられるとき、中央帯域210は、光学監視または検査が望ましい、あるいは必要とされる、複数の貫通孔154、及び試料保持器102の任意の他の特徴の光学検査にとって好ましく好適であり、その上に好ましく位置する。例えば、中央帯域210はまた、英数字160及び/またはバーコード162が光学検査のために利用可能であるように、英数字160及び/またはバーコード162上に延在する。中央帯域210内の外部及び内部表面188、190は、光学的に平坦または互いに平行であり得る。あるいは、中央帯域210内の表面188、190は、例えば、表面間の複数の反射(この反射は光学感知器132によって受信されるデータ信号の画像品質を低減し得る)を低減または排除するために、光学的に平坦であり、かつ互いに対して小さなオフセット角度を有し得る。表面間のオフセット角度は、0.1度以上、かつシステム100の撮像規格に応じて0.5度、1度、2度、または5度以下であり得る。いくつかの実施形態において、表面188、190のいずれかまたは両方は、試料保持器102の上部表面に対してオフセット角度、例えば、0.1度以上、かつシステム100の撮像規格に応じて0.5度、1度、2度、または5度以下のオフセット角度を有し得る。
図11に図示される実施形態において、トラフ250は、外部表面188に対する垂直線に沿った正の方向(z軸)が外部表面188から内部表面190までの方向である、図9及び11B〜11Dに示す座標系の中央帯域210の完全に下にある底部表面を有する。したがって、外部表面188が内部表面190の上の状態でケース150がシステム100内に設置されるとき、空洞内のあらゆる気泡は、中央帯域210の区域内よりもむしろトラフ250内に位置する傾向にある。特定の実施形態において、下から検視される(例えば、図11Aにおける視点から見られる)とき、トラフ250は、中央帯域210を囲むか、または収納するが、他の構成が可能である。
特定の実施形態において、中央帯域210のうちの少なくとも一部分は最小値、座標、または深度240に配置され、トラフ250のうちの少なくとも一部分は最大値、座標、または深度242に配置される。図示される実施形態において、帯域212、214、222は、チャネル、カネル、またはトラフ250を形成する。トラフ250は、トラフ全体に沿って一定の深度を有し得る。あるいは、例えば、図11に示すように、トラフ250は深度の異なる底部表面プロファイルを有し得る。例えば、帯域220の区域230及び234は最小深度240に等しい深度を有する一方で、トラフ250の残りの帯域及び区域は最小深度よりも小さい深度を有する。そのような実施形態において、空洞176内のいかなるガスまたは気泡も、内部表面190の他の帯域よりもむしろ区域230、224内に位置する傾向にある。図11Aに見られるように、例えば、第1の末端帯域220に、それがその後内部表面190の望まれない部分内に溢流し得る、ガスまたは気泡が充填されるのを防止するために、空洞176を充填する密封流体内の気泡またはガスの回収のための、拡大した区域を更に提供するために、末端帯域220はまた、トラフ250の他の部分よりも一般的に広くあり得る。更に、第1の末端帯域220の拡大は、期待される体積の気泡または捕捉されたガスを回収するために十分に大きい体積をもまた提供しながら、ケース150の比較的小さな全体のサイズを維持するように有利に構成され得る。ケース150のサイズを比較的小さく保つことを援助するために、中央帯域210は、試料保持器102の全幅上に延在しない、英数字160への良質の光学アクセスを提供する、タブ付けされた部分252を含む。したがって、第1の末端帯域220の区域230、234は、トラフ250の他の部分と比較して拡大した幅または体積を有する一方で、区域232はより小さく、トラフ250の他の部分の幅に等しいか、またはほぼ等しくあり得る。
特定の実施形態において、第1の末端帯域220は、その全長上に一定の深度または実質的に一定の深度を有し得る。あるいは、図11A及び11Bに示す図示される実施形態におけるように、第1の末端帯域220の区域230、234は、区域232によって分離され得、区域232は、区域230、234のいずれかよりも小さい深度を有する。区域230、234は同一の深度を有し得るか、または区域230、234のうちの一方は他方よりも小さい深度を有し得るが、そのような実施形態において、区域232は区域230、234の深度よりも小さい深度を有する。区域232の深度は、一定または可変であり得る。例えば、区域232は、区域230、234のうちの1つに向かって傾斜する、または図11Bに図示するように、区域230、234の両方に向かって傾斜するプロファイルを有し得る。第2の末端帯域222は、一定深度を有し得るか、または側帯域214のうちの1つに向かって変化または傾斜する深度を有し得る。あるいは、第2の末端帯域は、図11Dに図示するように、側帯域234の両方に向かって傾斜するプロファイルを有し得る。側帯域214の両方は、互いに比較して同一または異なる深度プロファイルを有し得る。図示される実施形態において、側帯域214の両方の深度は、第1の末端帯域220の最大深度より小さい。各側帯域214のうちの全てまたは一部分は、それによって形成されるチャネルに沿って変化または傾斜する深度を有し得る。例えば、1つまたは両方の側帯域は、第2の末端帯域222での、またはその近くでの最小深度値から傾斜し得、それは第1の末端帯域220での、またはその近くでの最大深度まで増大する。
いくつかの状況下で、ケース150の空洞176内に包含される密封流体中の気泡の形成は、ケース150の底部表面172に沿って位置する1つ以上の核形成部位で熱サイクル中、例えば、PCR、qPCR、またはdPCR手順、アッセイ、またはプロトコル中に発生し得る。例えば、熱サイクル中、システム100は、熱制御器とケース150との間の熱を、ケース150の底部表面172を通して移動するように構成され得る。そのような状況下で、熱サイクル中に表面の温度が増大するにつれて、気泡は核形成部位からサイズにおいて成長し得る。気泡は、それが試料保持器102の底部表面に接触して、反応領域または貫通孔154のうちの1つ以上の底部に対する圧力を生成する程度にまで成長し得る。反応領域または貫通孔154の底部に対する圧力は、反応領域または貫通孔154内に包含される試料流体のうちのいくらかまたは全てを、加圧された反応領域または貫通孔の上部から押し出すのに十分であり得ることが発見されている。加圧された貫通孔から押し出された試料流体が、試料保持器102の上部表面を超えて1つ以上の隣接する反応領域または貫通孔154に移動または「架橋」し得ることが更に発見されている。試料流体のこの移動は、隣接する反応領域または貫通孔154内の試料流体の汚染につながり得る。この問題の発見は、この試料流体汚染の源を軽減または排除するための、様々な構造及び方法の実装につながっている。本明細書で使用される場合、用語「架橋」は、試料保持器の1つの反応領域、ウェル、または貫通孔から試料保持器の別の反応領域、ウェル、または貫通孔へと液体試料を移動することを意味する。
特定の実施形態において、ケース150の底部表面172は、隣接する反応領域154間の試料流体の移動を低減または排除するために、例えば、ケース150の底部表面172に沿った気泡の生成または発生を排除または低減することによって、研磨、コーティング、及び/または他の方法で処理され得る。いくつかの実施形態において、底部表面172のそのような処理は、所定の値未満の表面粗度を提供する。表面粗度を所定の値未満に維持することによって、底部表面172に沿った核形成部位の発生は、低減または排除され得、したがって底部表面172に沿った気泡の発生を低減または排除する、及び/または反応領域または貫通孔154の接触または加圧を防止する程度に、そのような気泡のサイズを低減する。他の実施形態において、ケース150の底部表面172と試料保持器102の底部表面との間の空間は、底部表面172に沿って形成される気泡のサイズを低減する、及び/または反応領域または通孔154の接触または加圧を防止または低減するように選択され得る。
特定の実施形態において、試料保持器102、底部表面172、及び/またはケース150の水平面からの角度は、反応領域または貫通孔154間の試料溶液の移動を防止または低減するように選択され得ることが発見されている。本明細書で使用される場合、用語「水平な」は、地球の水平線に対して平行であることを意味する。そのような実施形態において、ケース150の空洞176内に包含される密封流体中の気泡の浮力は、底部表面172に沿って、またはその近くに位置する気泡を初期位置または核形成部位から移動させた。この移動は、1つ以上の気泡をケース150または空洞176のうちの1つの末端に向かって、及び/または反応領域または貫通孔154のうちのいずれの下にもないその領域内に移動させ得る。したがって、流体中での気泡浮力の使用は、反応領域または貫通孔154間の試料溶液の移動または架橋を低減または排除する予想外の結果を生成し、今度はそれが反応領域または貫通孔154間の相互汚染試料溶液を低減または排除する。図12及び13を参照すると、特定の実施形態において、ケース150は、プラグ302、及びプラグ302に脱離可能に連係または結合されるプラグドライバ304を備えるプラグ組立体300を含む。プラグドライバ304は、ケース150の充填口178を密封または塞栓するための手段として、駆動力またはトルクをプラグ302に適用するために使用される。より小型のユニットを提供する手段として、特定の実施形態において、充填口178内への挿入後にプラグドライバ304をプラグ302から分離することが望ましい。駆動力またはトルクの適用を促進するために、プラグドライバ304は、例えば、駆動力またはトルクの直接手での適用を可能にするための、こぶのある近位末端306を含み得る。更に、またはあるいは、プラグドライバ304の近位末端は、用具または固定具が所望の駆動力またはトルクを提供するために適用されることを可能にする構成を含み得る。
図12Cに図示するように、プラグドライバ304は、エポキシ308を使用してプラグ302に連係されるか、または取り付けられる。あるいは、プラグドライバ304のプラグ302への連係または取り付けは、膠または他の型の接着剤、はんだ結合、溶接結合などを使用して提供され得る。プラグ302は、第1のパターン322を有する近位末端312を含む一方で、プラグドライバ304は、第2のパターンまたは形態324を有する遠位末端314を含む。第1及び第2のパターン322、324は、パターンが結合されることを可能にする方法、ケース150の充填口178を塞栓または密封するために、プラグ302を駆動するために力またはトルクがプラグドライバ304に適用されることを可能にする方法で互いを補完する。図示される実施形態において、第1のパターン322はPhillips頭部ねじの形態を有する一方で、第2のパターン324は、Phillips頭部ねじドライバの先端部分の形態を有する。あるいは、第1のパターン322は、Phillips頭部ねじドライバの先端部分の形態を有し得る一方で、第2のパターン324は、Phillips頭部ねじの形態を有し得る。スロット、ソケット、六角ソケット、一方向ねじ頭部、スパナ頭部、Troxなどを含むが、これらに限定されない他の型の標準ボルトまたはねじ頭部パターンが、代替的に使用され得る。あるいは、パターン322、324は、カスタムパターン及びその補完物であり得る。
特定の実施形態において、プラグドライバ304とプラグ302との間の結合は、ケース150の充填口178を塞栓または密封するために十分である駆動力またはトルクが、プラグドライバ304に適用され得るように十分に強力である。一般的に、プラグドライバ304とプラグ302との間の結合は、駆動力またはトルクが、結合及び/またはパターン322、324を破壊または破損しないように十分に強力である。これらの特性に加えて、プラグドライバ304とプラグ302との間の結合は、駆動力またはトルクを使用して充填口178に生成される密封を妨害または破損しない様式で、プラグドライバ304とプラグ302との間の結合を破壊、分離、または脱連係する、分離または破壊力またはトルクが適用され得るように、十分弱い。特定の実施形態において、分離力またはトルクは、駆動力またはトルクよりもわずかにだけ大きい。例えば、分離力またはトルクは、駆動力またはトルクの120%以下、駆動力またはトルクの150%以下、駆動力またはトルクの200%以下、あるいは駆動力またはトルクの400%以下であり得る。特定の実施形態において、分離力またはトルクは、駆動力またはトルクとは異なる種類のもの、または異なる方向である。例えば、図示される実施形態において、プラグ302は、駆動トルクを使用して、プラグ302及びプラグドライバ304の両方を通過する伸長する軸の周りに充填口178内にねじ付けされるねじ状遠位末端を含む。プラグ302が充填口178内に固定されると、分離トルクが異なる軸、例えば、伸長する軸に対して垂直な軸の周りに適用され得る。あるいは、または更に、伸長する軸に対して垂直な側方力が、プラグドライバ304に分離力として適用され得る。
図14〜15を参照すると、キャリア104は、複数の試料保持器102、例えば、図15に示す試料保持器102を支持または保持するように構成され得る。キャリア104は、4つの別個の試料保持器102のうちのそれぞれを収容するように構成される近位または上部側400と、熱制御器108と相互作用または係合するように、及び/または係合熱制御器108によって各試料保持器102と相互作用または係合するように構成される遠位または底部側402と、を含む。システム100は、各ケース内の同一のキャリアを使用して、1つ、2つ、3つ、または4つの試料保持器を収容するように構成され得る。例えば、システム100は、キャリア104上またはその中にいくつの試料保持器102が存在するかを感知し、その後生物学的試料を処理するための試験プロトコル、光学システム構成または性能、画像処理アルゴリズム、データ表示アルゴリズム、及び/または他の機械的、電気的、熱的、または光学的要素あるいはシステム100のサブシステムに対して適切な調整を行うように構成される1つ以上の感知器を備え得る。
特定の実施形態において、システム100は、4つ超または4つ未満の試料保持器102を保持するように構成される1つ以上のキャリアを備える。他の実施形態において、システム100は、他の型の試料保持器を保持するように構成される1つ以上の更なるキャリアを備える。例えば、システム100は、48、96、及び/または384の個々の試料を保持するための形式を収容するように構成される更なる試料保持器を備え得る。そのような実施形態において、異なるキャリアが各試料保持器形式のために提供され得、各キャリアは、キャリア104の部分と同一またはほぼ同一の第1の部分(例えば、底部側)を含むが、各キャリアはまた、異なる型の試料保持器のうちのそれぞれを収容するための異なる構築を有する第2の部分(例えば、上部側)を含む。
図16を参照すると、特定の実施形態において、方法500は、試料保持器102を提供することを含む要素505を含む。方法500はまた、試料保持器102を土台164内に位置付けること、定置すること、または装填することを含む要素510を含む。方法500は、1つ以上の生物学的試料を、貫通孔154のうちの少なくともいくつかの中に装填することを含む要素515を更に含む。方法500は、カバー170を土台164上または全体上に取り付けることによって、試料保持器102を空洞176内に収納することを含む要素520を更に含む。方法500はまた、充填口178によって、空洞176に流体を充填することを含む要素252を含む。方法500は、第1の力またはトルクを適用することによって、プラグ組立体300を充填口178に取り付けることを含む要素530を更に含む。方法500は、プラグ組立体300を破砕、分割、または破壊するために第2の力またはトルクを適用し、その後プラグドライバ304を組立体300から除去することを含む要素535を更に含む。方法500はまた、土台164、試料保持器102、及びカバー170を含むケース150を、機器100内に装填することを含む要素540を含む。方法500はまた、貫通孔154のうちの1つ以上の中での生物学的反応を誘導及び監視するように機器を操作することを含む要素545を含む。
方法500の要素510に関して、試料保持器102は、試料保持器102の底部表面172が土台164の底部表面172に対して、平行または実質的に平行であるように支持パッド182上に位置し得る。支持パッド182のうちの少なくともいくつかは、上部表面を有し、側壁174のうちの1つに取り付けられる、及び/またはそれと一体となる近位部分、ならびに近位部分の上部表面よりも底部表面172の近くに配置される、上部表面を有するステップを形成する遠位部分を含む。例えば、試料保持器102と支持パッド182との間の物理的接触の量を低減するために、遠位部分の幅は近位部分の幅未満であり得る。そのような支持パッド上で、試料保持器102は、支持パッド182の遠位ステップ部分上に存在し、近位パッド部分の側壁に接触し得るか、またはそれと近位パッド部分との間に間隙を有するかのいずれかである。後者の場合、近位パッド部分の材料のうちのいくつかを側方置換して、近位パッド部分と試料保持器102との間に保持力を提供するために、用具が使用され得る。更に、またはあるいは、試料保持器102は、例えば、試料保持器102の前面及び後面(すなわち、貫通孔154がその中に位置付けられる面)の屈曲または膨化を低減または防止するのを助けるために、試料保持器102の底部側のみに接触するように構成される支持パッド182上に定置され得る。特定の実施形態において、試料保持器102を土台164に固定するために、いくつかまたは全ての支持パッド182上に接着剤が使用され得る。更に他の実施形態において、例えば、支持パッド182のうちの少なくともいくつかの付近での試料保持器102に対する下方力で、試料保持器102を土台164に固定するために、試料保持器102の上面に対する下方力が使用される。例えば、方法500の要素520で取り付けられるとき、下方力は、カバー170によって試料保持器102の周辺部分に適用され得る。下方力は、試料保持器102に直接、あるいは試料保持器102の上部に位置する、例えば、試料保持器102の周辺部分上に位置する中間間座、密封部、またはガスケットを通して適用され得る。いくつかの実施形態において、試料保持器102の土台164上または内部への位置付け前に、試料は貫通孔154のうちの少なくともいくつかの中に装填される。
方法500の要素515に関して、生物学的試料は、1つ以上の従来のピペットを使用して、貫通孔154のうちの1つ以上の中に装填され得る。あるいは、例えば、貫通孔154のうちの1つ以上が同時に装填されることを可能にする、複数のピペット先端部を備える装填器などのカスタム装填器が使用され得る。特定の実施形態において、装填器は、参照によって本明細書に完全に説明されるかのように、その全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願番号第13/170,563号に開示される装填器を備え得る。生物学的試料は、1つ以上のヌクレオチド配列、アミノ酸配列、あるいはオリゴヌクレオチド、遺伝子、DNA配列、RNA配列、ポリペプチド、タンパク質、酵素などを含むが、これらに限定されない他の生物学的巨大分子を含み得る。更に、生物学的試料は、プライマー、ハイブリダイゼーションプローブ、レポータープローブ、クエンチャー分子、分子ビーコン、蛍光色素、化学的緩衝剤、酵素、洗浄剤などを含むが、これらに限定されない生物学的反応を制御または監視するための他の分子を含み得る。更に、またはあるいは、生物学的試料は、1つ以上のゲノム、細胞、細胞核などを含み得る。
方法500の要素520に関して、カバー170は、土台164の周辺領域の周囲に、例えば、土台164の上部表面168に沿って、土台164に取り付けられる。カバー170を土台164に直接取り付けるために、接着剤が使用され得る。あるいは、接着剤がガスケット171の上部及び底部表面と、及び/または土台164及び/またはカバー170上の接合表面の部分とに適用されている、カバー170を取り付けるために、ガスケット171が使用され得る。接着剤は、カバー170の付属品の直前にユーザによって適用され得るか、またはカバー170、土台164、及び/またはガスケット171の製作中に適用され得る。特定の実施形態において、カバー170の付属品の前に除去される接着剤層の上部に、除去可能な非粘着層、例えば、図3、9、及び10に示す密封部171上の除去可能な非粘着層194が適用される。
方法500の要素525、530、及び535に関して、ピペット、針、または類似する充填装置が充填口178内に挿入され得る。充填装置の先端は、例えば、液体が湾入部180から内に進入し、空気が充填装置の先端の後方の挿入口178を通して退出し得るように、土台164の底部表面172内の湾入部180の付近内に挿入される。あるいは、ケース150の空洞176内の空気が、充填口178とは異なる位置または追加の位置から退出することを可能にするために、土台164またはカバー170内に分離ベント口が提供され得る。そのような実施形態において、充填装置は、挿入口178で密封を形成するように構成され得る。空洞176に密封流体または液体が充填またはほぼ充填されると、充填装置は充填口178から除去されるか、または抜き取られ得、その後充填された空洞176を外部環境から隔離するために、及び/または空気が空洞176に進入すること、あるいは液体が空洞176から退出することを防止または妨害するために、充填口178及び/またはあらゆる既存のベント口は、塞栓または密封され得る。充填口は、本明細書に上述するように、プラグ組立体300を使用して密封され得る。あるいは、当該技術分野において既知である任意の型のプラグまたは密封部が使用され得る。特定の実施形態において、充填口178は、充填中に充填装置が挿入され、充填装置の抜き取り時に密封部が口178を充填する自動的に閉鎖されることを可能にする弁を含む。更に、任意の分離ベント口が組み込まれる場合、これらもまた、充填後に閉鎖された空洞176を維持するために、逆止弁などの弁を有し得る。いくつかの実施形態において、充填口178は、充填装置(例えば、注射器針)によって穿刺され、充填装置の除去時に密封を保ち得る自己回復ダイヤフラムを含む。
方法500の要素540及び545に関して、機器100は、試料保持器102及びその生物学的試料を包含するケース150を受け入れるように構成される。特定の実施形態において、1つ以上のケース150はキャリア104上またはその中に装填され、その後キャリア104は、1つ以上のケース150とともに機器100によって受け入れられる。その後、機器100を使用して、貫通孔154内に包含される生物学的試料に対する1つ以上の生物学的プロセスまたは実験が実行される。機器100は、試料保持器102の貫通孔154内に包含される試料のうちの1つ以上に対する、qPCR、dPCR、終点PCR、配列決定、遺伝子型決定、または他のそのような手順を行うように構成され得る。特定の実施形態において、1つ以上の試料保持器102及び/またはケース150は、機器100または関連する光学システム106によって同時に処理され得る。本明細書において上記に説明するように、1つ以上のケース150は、キャリア104に装填されるか、または取り付けられ得、その後機器100によって受け入れられる。更に、機器100は、48の試料ウェル、96の試料ウェル、及び384の試料ウェルを包含するマイクロタイタープレートを含むが、これらに限定されない他の型の試料形式を受け入れるようにもまた構成され得る。
図17〜21を参照すると、特定の実施形態において、収納部、筐体、またはケース600は、土台602、及び土台602を密封可能に係合するように構成されるカバーまたは蓋604を備える。土台602及びカバー604は、ともに結合されて、試料保持器、基板、平面部材、またはプレート610を受け入れる、または含み得る空洞または室608を形成し得る。試料保持器610は、土台602の一部分であり得るか、あるいは土台602とは別個である、及び/または異なり、土台602によって装填または保持されるように構成され得る。ケース600は、例えば、空洞608及び試料保持器610を外部環境から密封または隔離するために、土台602とカバー604との間に配置される接着剤、密封部、またはガスケット612を更に含む。
特定の実施形態において、試料保持器610は、土台602に取り付けられるか、またはそれと結合される。試料保持器610は、製造業者による土台602の製作または組み立て中に取り付けられるか、または結合され得る。他の実施形態において、試料保持器610は、例えば、試料保持器610に生物学的物質を包含する試料または溶液が装填された後に、ユーザによって土台602に取り付けられるか、または結合される。あるいは、試料保持器610は、生物学的物質を包含する試料または溶液の装填の前に、土台に取り付けられる。これらの実施形態のうちのいずれかにおいて、試料保持器610は、試料保持器610及び/または土台602を受け入れるように構成される装填機構またはシステムを使用して、試料保持器610内に導入され得る。例えば、試料保持器610に1つ以上の生物学的試料を装填するために、米国特許出願番号第61/612,008号または同第61/723,658号などに開示される装填機構が使用され得る。
図17及び20を参照すると、土台602は、試料保持器610を土台602及び空洞608内に保持する、及び/または位置付けるように構成される複数の突起、タブ、杭部位、及び/または支持パッド620(例えば、図示される実施形態におけるタブ620a及び620b)を含み得る。タブ620は、タブ182に関して上記に説明される機能のうちの1つ以上を有して構成され得る。例えば、1つ以上のタブ182は、タブからの材料が試料保持器610を土台602内で堅固に保持するために変形または移動するように杭で固定され得る。更に、またはあるいは、試料保持器610は、接着剤、エポキシ、または膠を使用して1つ以上のタブ182に膠付けされ得る。特定の実施形態において、膠付けは、タブ620によって生成される圧着または保持力の使用によって誘導され得る、そのような保持器材料に対する可能性のある亀裂または破損を回避するために、ガラスまたはシリコンの試料保持器610と併せて使用される。
図20〜22を参照すると、土台602は、各組のタブが他の組とは異なる幾何学を有する、2組のタブ602a及び602bを含み得る。図示される実施形態において、試料保持器610の面がタブ620aの上部に静止または存在するときに、試料保持器610の縁のうちのいくつかまたは全てが、タブ620bによって係合または保持されることを提供するのに十分な量だけ、タブ620bは、タブ620aより長い。タブ620aの高さは、試料保持器610を、土台602の内部底部面622より上の所定の高さで保持または維持するように選択され得る。更に、タブ620aの高さ及び試料プレート210の厚さは、試料保持器610を、カバー604の上内部面より下の所定の距離で保持または維持するように選択され得る。試料保持器610と土台602との間、及び試料保持器610とカバー604との間にそのように生成される間隙は、試料保持器610、及び/またはその中に保持される溶液または試料の所定の熱隔離及び/または均一性を提供するように選択され得る。
タブ620aのうちのそれぞれは、試料保持器610の縁のうちのいくつかまたは全ての中心に、またはその近くに位置し得る。タブ620bのうちのそれぞれは、試料保持器610の角のうちのいくつかまたは全てに、またはその近くに位置し得る。あるいは、2つ以上のタブ620aは、例えば、試料保持器610の追加の支持、試料保持器610にわたる低減した熱非均一性、及び/または試料保持器610の低減した変形を提供するために、試料保持器610の1つ以上の縁に沿って位置し得る。
図示される実施形態において、タブ620aの形状は、試料保持器610とタブ620aとの間に比較的小さな接触区域を維持し、したがって試料保持器610と土台602との間の熱移動を低減しながら、一滴の膠または接着剤を背側に定置するために十分な区域を可能にするように構成される。更に、タブ620aの形状は、タブ620aによって接触される試料保持器610上の有効区域の量を低減するように構成され得、これはさもなくば、試料を保持するために使用され得る、試料保持器610上の反応部位または領域の数を否定的に低減し得る。
接着剤または膠は、タブ620aまたはタブ620bのうちのいくつかまたは全て、あるいはタブ620a及びタブ620bのうちのいくつかまたは全ての組み合わせに適用され得る。更に、またはあるいは、タブ620bのうちの1つ以上は、試料保持器610の1つ以上の縁に保持力を適用するために、圧着、変形、屈曲、または移動され得る。
図17及び20を参照すると、土台602は、例えば、空洞608を密封するように構成されるガスケットまたは接着剤の形態で、密封部612を受け入れるように構成され得る。特定の実施形態において、密封部612は、空洞608の流体密着密封(例えば、空気密着密封または液体密着密封)を提供する。例えば、密封部612は、空洞608内部のFluorinertなどの液体が、使用中(例えば、PCR実験またはプロセス中の試料保持器610内の試料の熱サイクル中)に漏出しないように、流体密着密封を提供するように構成され得る。図示される実施形態において、土台602は、密封部612を受け入れるように構成される面624を含む。図22に示すように、面624は、密封部612を含むように構成される挿入溝またはチャネル624aを含み得る。
図17〜19を参照すると、カバー604は、土台602の面624に係合または相互作用するように構成される内部面(図中では不可視)を含む。土台602とカバー604との間に密封部を提供することを援助するために、ケース600は、固定機構625を更に含む。図示される実施形態において、ラッチまたは固定機構625は、カバー604上に配置される複数の固定具またはクリップ626、及びクリップ626を受け入れて、接合部間に密封部を生成するように構成される複数の対応する湾入または溝628を含む。複数のクリップ626及び湾入628は、土台602及びカバー604の2つ以上の縁に沿って配置され得る。図示される実施形態において、複数のクリップ626及び湾入628は、土台602及びカバー604の全ての4つの縁に沿って配置され得る。特定の実施形態において、カバー604は1つ以上のクリップ626を含み、土台602はもう1つの対応する湾入628を含む。特定の実施形態において、試料保持器610内に包含される試料を周囲環境から隔離して、例えば、PCRまたは類似する増幅プロセスによって生成される、高コピーDNA増幅産物の周辺研究室環境への放出を低減または排除し、したがって汚染物質に対する環境の暴露を低減または最小化するように、固定機構625は、カバー604の土台602に対する持続または安定した接続を提供するように構成される。
図19を再度参照すると、カバー604は、周辺部分630、中央部分632、及び周辺部分630の縁の周りに配置される複数のクリップ626を含む。カバー604は、英数字、バーコード、QRコード(登録商標)(高速応答コード)、あるいは他の型のマークまたは印を含む別個のラベルを受け入れるように構成されるラベル区域634を更に含む。あるいは、ラベル区域634は、英数字、バーコード、QRコード(登録商標)、あるいは他の型のマークまたは印を直接受け入れるように構成される。更に、またはあるいは、ラベル区域634は、RFIDタグ、ホログラフィックタグ、回折格子、または表面、体積、またはタグの上またはその中に情報を記録するための他の手段を含む。ラベル区域634内に含まれる情報は、ケース600(例えば、機器互換性、幾何的サイズまたは構成、材料特質など)、試料保持器610(例えば、反応領域サイズ、密度、幾何的構成、材料特質など)、試料保持器610内に包含される試料及び/または試薬などに関する情報を含み得るが、これらに限定されない。
中央部分632は、試料保持器610への光学アクセスを提供するために、清澄または透明であり得る。中央部分632の内部面及び外部面は、試料保持器610の、及び/またはその中に包含される試料の低収差画像を提供するために、光学品質仕上げ(平坦さ及び表面粗度)であり得る。周辺部分630はまた、透明または半透明であり得るが、周辺部分630の内部表面及び/または外部表面の光学品質は、中央部分632の光学品質より低くあり得る。透明なものの代わりに、周辺部分630は、その区域のうちのすべてまたは一部分にわたって艶消し、半透明、または不透明である材料または表面を含み得る。
特定の実施形態において、中央部分632は、周辺部分630とは異なる材料から任意に作製され得る、別個の窓または部分を含む。そのような実施形態において、周辺部分は、窓632を受け入れるように構成される接合開口部で構成される。周辺部分は、1つ以上の縁の周りに配置され、窓632を受け入れるためのインレーを提供するように構成される、棚またはステップを含み得る。膠、接着剤、及び/または密封材は、例えば、空洞608及び試料保持器610を外部環境から密封または隔離するために、窓632とカバー604の周辺部分630との間の接合表面に適用され得る。
他の実施形態において、中央部分632及び周辺部分630は単位構築を有し得るか、及び/または単一材料を含み得る。そのような実施形態において、中央部分632は、周辺部分630とは異なる様式または方法で、成型、機械処理、研磨、または他の方法で処理され得る。例えば、周辺部分及び中央部分630、632は共通の様式から鋳造され得、カバー604の周辺部分630に対応する鋳型表面は、鋳型領域においてよりも、カバー604の中央部分632に対応する鋳型領域において異なる肌理、構造、または粗度領域を有する。あるいは、部分630、632は、成型後に、共通の表面構造を有し得るが、後続して機械処理または処理(例えば、研磨または化学的に処理)されて、中央部分632と周辺部分630との間に異なる表面特質を提供する。例えば、中央部分632は、成型及び/または機械処理後に研磨されて、比較的低い光学収差を有する光学品質の窓を提供し得る一方で、周辺部分630は一切処理されない。他の実施形態において、周辺部分630はまた、成型及び/または機械処理後に研磨されるが、中央部分632より低い品質または粗い表面につながる方法において研磨される。あるいは、周辺部分630は、成型及び/または機械処理後に処理されて、中央部分632とは異なる特質を提供するために使用され得る、半透明、不透明、または粗化された表面を提供する。例えば、周辺部分630は、光を散乱させるように、及び/または接着剤、密封部、またはガスケット612と接触したときに、より良く接着または密封する表面を提供するように、粗化され得る。他の実施形態において、周辺部分630は、例えば、周辺部分630のうちの1つ以上の表面をコーティングまたは彩色することによって、あるいは周辺部分630のうちの全てまたは一部にわたる交差重合などの化学反応を誘導することによって、不透明であるように、及び/または他の好ましい特質を提供するように処理される。
特定の実施形態において、試料保持器610は、試料保持器102に類似または相当する、複数の貫通孔を備えるプレートを備える。試料保持器610は、試料保持器610の対向する表面間に、300マイクロメートルである、約300マイクロメートルである厚さを有する基板を備え得、各貫通孔は、約1ナノリットル、33ナノリットル、または1.3ナノリットル〜33ナノリットルの間の体積を有し得る。あるいは、各貫通孔の体積は、例えば、貫通孔の直径及び/または試料保持器610基板の厚さを減少させることによって、1ナノリットル以下であり得る。例えば、各貫通孔は、1ナノリットル以下、100ピコリットル以下、30ピコリットル以下、または10ピコリットル以下の体積を有し得る。他の実施形態において、各貫通孔のうちのいくつかまたは全ての体積は、1ナノリットル〜20ナノリットルの範囲内にある。特定の実施形態において、試料保持器610は、同時係属中の米国特許出願番号第61/612,087号、PCT出願番号第PCT/US2013/032002号、または米国仮出願番号第61/774,499号に記載される基板に類似するまたは等しい基板を備え、これらの出願のうちの全ては、その全体が本明細書に参照によって組み込まれる。例えば、貫通孔154は、六角形を有し得る、または六角形パターンに配置される。試料保持器610には、土台602への取り付け前に、生物学的試料を含む試料流体が充填または装填され得る。あるいは、試料保持器610には、試料保持器610が土台602に既に取り付けられた、及び/またはそれと一体化した状態で、生物学的試料を含む試料流体が充填または装填され得る。そのような実施形態において、米国特許出願番号第61/612,008号または同第61/723,658号に開示される装填器に類似または相当する装填器が使用され得、これらの出願のうちの両方は、その全体が本明細書に参照によって組み込まれる。
カバー604の土台602への取り付け前に、空洞608は、Fluorinert(商標)などの流体または他の好適な液体で、充填または部分的に充填され得る。カバー604の内部表面(図中では不可視)は、使用中に空洞608内に包含される液体によって形成される、気泡の分布の取り扱いまたは管理にとって好適な表面構造を含み得る。例えば、カバー604の内部表面は、図11A〜11Dへの参照で上記に説明される、カバー170の表面構造に類似または相当する表面構造を含み得る。
図20を再度参照すると、図示される実施形態における試料保持器610は方形、かつ15ミリメートル×15ミリメートルの全体寸法を有する。試料保持器610はまた、13ミリメートル×13ミリメートルの寸法を有する有効区域、領域、または帯域611を含み得る。本明細書で使用される場合、用語「有効区域」、「有効領域」、または「有効帯域」は、反応領域または溶液体積(例えば、反応領域154など)がその上に包含される、または分布する、試料保持器610の表面区域、表面領域、または表面帯域を意味する。特定の実施形態において、有効区域611は、有効区域611に包含される反応領域の合計数を増大させるために、14ミリメートル×14ミリメートル以上に増大され得る。試料保持器610は、例えば、矩形、三角形、円形、またはいくつかの他の幾何学的形状などの、他の形状または寸法を有し得る。試料保持器610及び有効区域611の全体の寸法は、所与のシステム、アッセイ、または実験のための特定の設計パラメータに応じて、図20内の図示される実施形態の寸法よりも小さいか、またはそれよりも大きくあり得る。
有効区域611は、複数の反応領域、ウェル、バイアル、または貫通孔(図示せず、例えば、反応領域154など)を備え得る。反応領域は、75マイクロメートルの特性直径を有し、隣接する反応領域間に125マイクロメートルのピッチで、有効区域611上に分布され得る。他の実施形態において、反応領域は、75マイクロメートル以下の特性直径、例えば、60マイクロメートル以下または50マイクロメートル以下の特性直径を有する。他の実施形態において、反応領域は、20マイクロメートル以下、10マイクロメートル以下、1マイクロメートル以下、または610ナノメートル以下の特性直径を有する。反応領域間のピッチは、125マイクロメートル未満、例えば、610マイクロメートル以下、30マイクロメートル以下、10マイクロメートル以下、または1マイクロメートル以下であり得る。
特定の実施形態において、各反応領域が約1.3ナノリットルの体積を有するように、試料保持器610は、対向する上部表面と底部表面との間に、300マイクロメートルに等しい、または約300マイクロメートルである厚さを有する。あるいは、各反応領域の体積は、例えば、反応領域の直径及び/または試料保持器610の厚さを減少させることによって、1.3ナノリットル未満であり得る。例えば、各反応領域は、1ナノリットル以下、610ピコリットル以下、30ピコリットル以下、または10ピコリットル以下の体積を有し得る。他の実施形態において、反応領域のうちのいくつかまたは全ての体積は、1ナノリットル〜20ナノリットルの範囲内にある。
特定の実施形態において、有効区域611上の反応領域の密度は、1平方ミリメートル当たり少なくとも610の反応領域である。より高い密度もまた期待される。例えば、有効区域611上の反応領域の密度は、1平方ミリメートル当たり150以上の反応領域、1平方ミリメートル当たり200以上の反応領域、1平方ミリメートル当たり500以上の反応領域、1平方ミリメートル当たり1,000以上の反応領域、1平方ミリメートル当たり10,000以上の反応領域、または1平方ミリメートル当たり1,000,000以上の反応領域であり得る。有利なことに、有効区域611内の全ての反応領域は、光学システムによって同時に撮像及び分析され得る。特定の実施形態において、光学システムによって撮像及び分析される効区域611は、少なくとも12,000の反応領域を備える。他の実施形態において、光学システムによって撮像及び分析される有効区域611は、少なくとも15,000、少なくとも20,000、少なくとも30,000、少なくとも610,000、少なくとも1,000,000の反応領域、または少なくとも10,000,000の反応領域を備える。
適切な場合、ケース600及びその関連する要素は、ケース150との関連で説明される機能、実施形態、寸法、及び/または作用を組み込み得、逆もまた真である。例えば、ケース600及び/または試料保持器610は、上記にケース150及び試料保持器102との関連で説明されるように、熱サイクル中に生成される気泡の量または効果を低減または排除するように構成され得る。
図23〜25を参照すると、特定の実施形態において、収納部、筐体、またはケース700は、土台702、及び土台702を密封可能に係合するように構成されるカバーまたは蓋704を備える。土台702及びカバー704は、ともに結合されて、試料保持器、基板、平面部材、またはプレート710を受け入れる、または含み得る空洞または室708を形成し得る。試料保持器710は、土台702の一部分であり得るか、あるいは土台702とは別個である、及び/または異なり、土台702によって装填または保持されるように構成され得る。ケース700は、例えば、空洞708及び試料保持器710を外部環境から密封または隔離するために、土台702とカバー704との間に配置される接着剤、密封部、またはガスケット712を更に含む。
試料保持器710は、上記に試料保持器610との関連で説明されるように、構築され、搭載され、土台702に取り付けられるか、または結合され得る。特定の実施形態において、試料保持器710は、複数の貫通孔を備え、上記に説明される試料保持器102、610の1つ以上の機能または実施形態を含むプレートを備える。試料保持器710には、土台702への取り付け前に、生物学的試料を含む試料流体が充填または装填され得る。あるいは、試料保持器710には、試料保持器710が土台702に既に取り付けられた、及び/またはそれと一体化した状態で、生物学的試料を含む試料流体が充填または装填され得る。そのような実施形態において、米国特許出願番号第61/612,008号または同第61/723,758号に開示される装填器に類似または相当する装填器が使用され得、これらの出願のうちの両方は、その全体が本明細書に参照によって組み込まれる。
図26及び27を参照すると、土台702は、試料保持器710を土台702及び空洞708内に保持する、及び/または位置付けるように構成される複数の突起、タブ、杭部位、及び/または支持パッド720を含み得る。タブ720は、タブ620として、またはそれに類似するように構成され得る。土台702は、例えば、空洞708を密封するように構成されるガスケットまたは接着剤の形態で、密封部712を受け入れるように構成され得る。密封712は、カバー704を土台702に結合、密封、及び/または固定するように構成される1つ以上の接着性材料を含み得る。特定の実施形態において、1つ以上の接着性材料は、試料保持器710内に包含される試料を周囲環境から隔離して、例えば、PCRまたは類似する増幅プロセスによって生成される、高コピーDNA増幅産物の周辺研究室環境への放出を低減または排除し、したがって汚染物質に対する環境の暴露を低減または最小化するように、固定機構725は、カバー704の土台602に対する持続または安定した接続を提供するように構成される。
特定の実施形態において、密封部712は、空洞708の流体密着密封(例えば、空気密着密封または液体密着密封)を提供する。例えば、密封部712は、空洞708内部の液体(例えば、Fluorinert(商標)など)が、使用中(例えば、PCR実験またはアッセイ中の試料保持器710内の試料の熱サイクル中)に漏出しないように、流体密着密封を提供するように構成され得る。図示される実施形態において、土台702は、密封部712を受け入れるように構成される表面または面724を含む。図26に示すように、表面724は平坦であり得る。あるいは、表面724は、例えば、土台602について図22に示す溝624aに示されるような、密封部712を含むように構成される挿入溝またはチャネルを含み得る。
図23及び24を参照すると、カバー704は、周辺部分730、中央部分732、及び英数字、バーコード、QRコード(登録商標)(高速応答コード)、あるいは他の型のマークまたは印を含むラベルを分離するように構成されるラベル区域734を備える。部分730、732、及びラベル734は、カバー604との関連で上記に説明される部分630、632、及びラベル634との関連で上記に説明される、様々な態様及び実施形態を含み得る。図28〜29を更に参照すると、カバー704はまた、内部表面または面742及び外部表面または面743を備える。内部表面742は、土台702及び/または密封部712の表面724に係合またはそれと相互作用するように構成され得る。内部表面742は、土台または底区域744、及び土台区域744からオフセットされ、カバー704が土台702に取り付けられるときに試料保持器710の近くに位置する突出または投射部分748を備え得る。突出部分748と試料保持器710との間の間隙は、試料保持器710上の対流電流を低減する、及び/または試料保持器710上の熱非均一性を低減するように選択され得る。外部表面743は、平坦または名目的に平坦であり得る台地または参照区域743aを含む。外部表面743はまた、カバー704が土台702に取り付けられるときに試料保持器710上に位置する中央区域743bを含み得る。参照区域743aに対して、中央区域743bは、内部表面742に向けて湾入またはオフセットされ得る。あるいは、区域743a及び743bは、例えば、より大きな硬性を提供するために、近接表面及び/または平坦表面を形成し得る。
内部表面742の土台区域744、及び/または外部表面743の参照区域743aは、カバー704の土台702への取り付けの後に形成される空洞708内に液体を導入するように構成される充填口740を含み得る。導入される流体は、例えば、PCRアッセイまたは実験における熱サイクル中に、試料保持器710からの試料の蒸発を低減または防止するように構成される液体で、空洞708を完全に充填または部分的に充填し得る。充填口740は、空洞708の充填中に形成される空気またはガスの気泡が、例えば、浮力効果のために、突出部分748から離れて土台区域744に向かって移動し、充填口740から出る傾向があるように構成され得る。空洞708内への流体の追加後、充填口740は、例えば、プラグを使用して密封され得る。特定の実施形態において、プラグは、例えば、紫外線照射を使用して、適用後に硬化され得るエポキシまたは他の好適な材料を備える。したがって、ケース700が水平に配向され、それが実験またはアッセイ中に有するのと同一の配向でありながら、充填口740は、カバー704上に有利に位置して、空洞708内に捕捉されたガスまたは捕捉の浄化を促進し得る。
適切な場合、ケース700及びその関連する要素は、ケース150及び/またはケース600との関連で説明される機能、実施形態、寸法、及び/または作用を組み込み得、逆もまた真である。例えば、ケース700及び/または試料保持器710は、上記にケース150及び試料保持器102との関連で説明されるように、熱サイクル中に生成される気泡の量または効果を低減または排除するように構成され得る。
図30を参照すると、ケース600、700は、米国特許出願番号第61/659,029号またはPCT出願番号第PCT/US2013/031890号に開示されるシステムに相当または類似するシステム800と併せて使用され得、これらの出願のうちのそれぞれは、その全体が本明細書に参照によって組み込まれる。システム800は、光源810を備え得る光学システムまたは読み取り機801と、試料保持器102、610、または710を有するケース150、600、または700と、撮像レンズ812と、感知器814と、光を光源810から試料保持器102、610、または710上へと向けるための、及び試料保持器102、610、または710内に包含された試料によって発光された光を感知器814に向けるための光学と、を含み得る。システム800はまた、熱制御器802と、システム801及び/または熱制御器802を操作するための1つ以上のプロセッサ803と、を含み得る。
特定の実施形態において、システム800は熱制御器802を含まないか、あるいは熱制御器802は光学システム801と同一の筐体または機器内に包含されない別個の機器またはシステムを備えない。例えば、光学システム801は、ケース150、600、または700、及び/またはPCR熱サイクラーなどの別個の熱制御器内で熱サイクルされた試料保持器102、610、または710を受け入れるように構成され得る。光学システム801は、終点PCRまたはdPCR実験またはアッセイを実行するために後続して使用され得る。特定の実施形態において、別個の熱制御システムは、例えば、ケース150、600、または700などの形態の、複数のチップまたはプレートを処理するように構成される。そのような実施形態において、光学システム801は、複数のケース150、600、または700のうちの1つ以上を受け入れて、dPCR実験またはアッセイを実行するように構成され得る。1つ以上のプロセッサ803は、試料保持器102、610、または710からのデータに基づくdPCR分析を実行するために使用され得る。
図31及び32を参照すると、本発明の実施形態に従う、複数の生物学的試料を処理するためのシステム900の要素のうちの少なくともいくつかを示す。システム900は、オフセット部材902及び筐体904を備える。筐体904は、本明細書に開示されるこれらの要素の実施形態のうちの、いずれかに従うケースを保持するための支持部を含み得る。特定の実施形態において、オフセット部材902は、使用中、筐体904に係合して、1つ以上の生物学的試料のアッセイまたは反応中に、本発明の一実施形態に従う支持部、ケース、または基板のうちの少なくとも1つを正の角度で維持する。他の実施形態において、オフセット部材902は、筐体904内に位置し、使用中、本発明の一実施形態に従う支持部、ケース、または基板に係合して、アッセイまたは反応中に少なくとも1つの表面を正の角度で維持する。
ケース700及び試料保持器710に類似する様々な試験ケース及び試料保持器を構築して、熱サイクル中の気泡の形成による、熱サイクル中の相互汚染の問題を研究した。試験試料保持器は、六角形の断面を有する約20,000の貫通孔をそれぞれ備え、各貫通孔が約60マイクロメートルの主要直径を有した。各試験試料保持器の貫通孔を、72マイクロメートルの隣接する貫通孔間の最小距離で、六角形パターンに配置した。各試験試料保持器を、試験ケースの内側底部と試験試料保持器の底部との間の距離が約300マイクロメートルであるように、試験ケース内に装填した。試験試料保持器の貫通孔に試験溶液を充填し、試験ケースの土台にカバーを取り付けることによって試験ケース内部に収納した。その後、各試験ケース内の空洞にFluorinertを充填し、密封した。
摂氏60℃〜摂氏95℃の間のサイクル温度範囲の熱サイクラー内で、様々な試験ケースを処理した。熱サイクル中、試験ケースを水平面に対して異なる角度に傾けた。その後、試料保持器を相互汚染の量について評価した。以下の結果が得られた。
上記は、本発明を実行することが企図される最良の様式、及びそれが属するいかなる当業者も本発明を作製し使用することができるような、完全、明白、簡潔、かつ正確な用語で、それを作製し使用する様式及びプロセスの説明を提示する。しかしながら、本発明は、完全に相当する、上記に説明されるものからの、修正及び代替の構築が可能である。結果として、本発明を開示される特定の実施形態に限定することは意図されない。それどころか、意図は、本発明の主題を特に指摘し、明瞭に主張する以下の特許請求の範囲によって一般的に表現されるような、本発明の精神及び範囲内に生じる修正及び代替の構築を網羅することである。
本文書に記載される様々な実施形態に関する方法のための例示的なシステムは、米国出願及びPCT出願の以下のリストに記載されるシステムを含む。
2012年3月16日に出願された米国仮出願番号第61/612,087号である、Life Technologies整理番号LT00655PRO、
2012年11月7日に出願された米国仮出願番号第61/723,759号である、Life Technologies整理番号LT00655PRO2、
2012年3月16日に出願された米国仮出願番号第61/612,005号である、Life Technologies整理番号LT00656PRO、
2012年3月16日に出願された米国仮出願番号第61/612,008号である、Life Technologies整理番号LT00657PRO、
2012年11月7日に出願された米国仮出願番号第61/723,658号である、Life Technologies整理番号LT00657PRO2、
2012年11月7日に出願された米国仮出願番号第61/723,738号である、Life Technologies整理番号LT00668PRO、
2012年6月13日に出願された米国仮出願番号第61/659,029号である、Life Technologies整理番号LT00699PRO、
2012年11月7日に出願された米国仮出願番号第61/723,710号である、Life Technologies整理番号LT00749PRO、
2013年3月7日に出願された米国仮出願番号第61/774,499号である、Life Technologies整理番号LT00749PRO2、
2012年11月7日に出願された米国意匠出願番号第29/436,636号である、Life Technologies整理番号LT00746DES、
2013年3月15日に出願されたPCT出願番号第PCT/US2013/032002号である、Life Technologies整理番号LT00655PCT、
2013年3月15日に出願されたPCT出願番号第PCT/US2013/032420号である、Life Technologies整理番号LT00656PCT、
2013年3月15日に出願されたPCT出願番号第PCT/US2013/032107号である、Life Technologies整理番号LT00657PCT、
2013年3月15日に出願されたPCT出願番号第PCT/US2013/032242号である、Life Technologies整理番号LT00668PCT、及び
2013年3月15日に出願されたPCT出願番号第PCT/US2013/031890号である、Life Technologies整理番号LT00699PCT。
これらの出願のうちの全てはまた、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
Claims (26)
- 複数の生物学的試料を処理するためのシステムであって、
土台と、
前記土台の少なくとも一部分上に配置されるカバーであって、前記土台及び前記カバーがともに内部室を形成する、カバーと、
前記内部室内に位置する基板であって、前記基板が第1の表面、前記第1の表面の反対側の対向する第2の表面、及び前記表面間に配置される複数の貫通孔を備え、前記複数の貫通孔が、1つ以上の生物学的試料を包含する、基板と、
前記内部室内に配置され、前記基板の前記表面を被覆する密封流体と、
を備える、ケースを保持するように構成される支持部と、
前記1つ以上の生物学的試料に対するアッセイまたは反応中に、前記支持部、前記ケース、前記土台、前記基板、前記カバー、前記密封流体、または前記1つ以上の生物学的試料のうちの少なくとも1つの温度を維持または制御するように構成される温度制御器と、を備え、
前記支持部が、前記アッセイまたは反応中に、前記基板の表面のうちの少なくとも1つを水平面に対して正の角度で維持するように構成される、前記システム。 - 前記角度が、ポリメラーゼ連鎖反応中に、前記複数の貫通孔のうちの任意の隣接する貫通孔の対の間の試料溶液の移動を防止するのに十分な量である、請求項1に記載の前記ケース。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも5度である、請求項1または2に記載の前記ケース。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも10度である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記温度制御器が、前記1つ以上の生物学的試料に対してポリメラーゼ連鎖反応を実行するように構成される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記アッセイまたは反応中に、前記少なくとも1つの表面を前記正の角度で維持するように構成されるオフセット部材を更に備える、請求項1〜5のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記支持部を収容する筐体を更に備え、前記オフセット部材が、前記アッセイまたは反応中に、前記基板の前記少なくとも1つの表面を前記正の角度で維持するために、使用中に前記筐体に係合する、請求項6に記載の前記ケース。
- 前記支持部及びオフセット部材を収容する筐体を更に備え、前記オフセット部材が、前記筐体の内側に配置され、前記アッセイまたは反応中に前記少なくとも1つの表面を前記正の角度で維持するために、使用中に前記支持部に係合する、請求項6に記載の前記ケース。
- 複数の生物学的試料を処理する方法であって、
土台と、
前記土台の少なくとも一部分上に配置されるカバーであって、前記土台及び前記カバーがともに内部室を形成する、カバーと、
前記内部室内に位置する基板であって、前記基板が第1の表面、前記第1の表面の反対側の対向する第2の表面、及び前記表面間に配置される複数の貫通孔を備え、前記複数の貫通孔が、1つ以上の生物学的試料を包含する、基板と、
前記内部室内に配置され、前記基板の前記表面を被覆する密封流体と、
を備えるケースを提供することと、
前記土台を温度制御器と熱接触して定置することと、
前記支持部、前記ケース、前記土台、前記基板、前記カバー、前記密封流体、または前記1つ以上の生物学的試料のうちの少なくとも1つの温度を維持または制御しながら、前記1つ以上の生物学的試料に対してアッセイまたは反応を実行することと、
前記アッセイまたは反応を実行しながら、前記基板の表面を水平面に対して正の角度で維持することと、を含む、前記方法。 - 前記角度が、ポリメラーゼ連鎖反応中に、前記複数の貫通孔のうちの任意の隣接する貫通孔の対の間の試料溶液の移動を防止するのに十分な量である、請求項9に記載の前記方法。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも5度である、請求項9に記載の前記方法。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも10度である、請求項9に記載の前記方法。
- 複数の生物学的試料を処理するためのシステムであって、
内部室と、
前記内部室内に位置する基板であって、1つ以上の生物学的試料を包含する複数の隔離された反応部位を包含する、基板と、
を備えるケースを保持するように構成される支持部と、
前記1つ以上の生物学的試料に対するアッセイまたは反応中に、前記支持部、前記ケース、または前記1つ以上の生物学的試料のうちの少なくとも1つの温度を維持または制御するように構成される温度制御器と、を備え、
前記支持部が、前記アッセイまたは反応中に、前記基板の表面のうちの少なくとも1つを水平面に対して正の角度で維持するように構成される、前記システム。 - 前記角度が、ポリメラーゼ連鎖反応中に、前記複数の貫通孔のうちの任意の隣接する貫通孔の対の間の試料溶液の移動を防止するのに十分な量である、請求項13に記載の前記ケース。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも5度である、請求項13または14のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも10度である、請求項13〜15のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記温度制御器が、前記1つ以上の生物学的試料に対してポリメラーゼ連鎖反応を実行するように構成される、請求項13〜16のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記アッセイまたは反応中に、前記少なくとも1つの表面を前記正の角度で維持するように構成されるオフセット部材を更に備える、請求項13〜17のいずれか一項に記載の前記ケース。
- 前記支持部を収容する筐体を更に備え、前記オフセット部材が、前記アッセイまたは反応中に前記基板の前記少なくとも1つの表面を前記正の角度で維持するために、使用中に前記筐体に係合する、請求項18に記載の前記ケース。
- 前記支持部及びオフセット部材を収容する筐体を更に備え、前記オフセット部材が、前記筐体の内側に配置され、前記アッセイまたは反応中に前記少なくとも1つの表面を前記正の角度で維持するために、使用中に前記支持部に係合する、請求項18に記載の前記ケース。
- 複数の生物学的試料を処理する方法であって、
内部室と、
前記内部室内に位置する基板であって、1つ以上の生物学的試料を包含する複数の隔離された反応部位を包含する、基板と、
を備えるケースを提供することと、
前記土台を温度制御器と熱接触して定置することと、
前記支持部、前記ケース、または前記1つ以上の生物学的試料のうちの少なくとも1つの温度を維持または制御しながら、前記1つ以上の生物学的試料に対してアッセイまたは反応を実行することと、
前記アッセイまたは反応を実行しながら、前記基板の表面を水平面に対して正の角度で維持することと、を含む、前記方法。 - 前記角度が、ポリメラーゼ連鎖反応中に、前記複数の貫通孔の任意の対の隣接する貫通孔間の試料溶液の移動を防止するのに十分な量である、請求項21に記載の前記方法。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも5度である、請求項21に記載の前記方法。
- 前記角度が、前記水平面に対して少なくとも10度である、請求項21に記載の前記方法。
- 前記システムが前記ケースを含む、請求項1に記載の前記システム。
- 前記システムが前記ケースを含む、請求項13に記載の前記システム。
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