JP2016516669A - 転写因子atf5の阻害により腫瘍細胞を阻害するための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は2013年2月22日に出願された米国仮特許出願第61/768,390号明細書の利益を主張するものであり、この米国仮出願は、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
本発明は、国立衛生研究所(National Institute of Health)からの助成金第RCA126924A号の下で、政府の支援によりなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
毎年、約100万人が癌と診断されており、あらゆる年齢の何百万もの米国人が現在、何らかの形の癌に罹患しながら生活している。一生の間に、米国人男性の2人に1人、また米国人女性の3人に1人が何らかの形の癌と診断される。毎年癌と診断される100万の米国人のうち、17,000人は脳腫瘍と診断される。脳腫瘍は正常組織に浸潤し、それを破壊して、感覚運動および認知機能の損傷、頭蓋内圧亢進、脳水腫、ならびに脳組織、脳神経、および大脳脈管の圧迫などの影響をもたらす。傾眠、嗜眠、鈍重、人格変化、異常行動、および心的能力の障害が、悪性脳腫瘍を有する患者の25%における初期症状である。脳腫瘍の治療は多くの場合多様的であり、腫瘍の病態および部位に依存する。悪性神経膠腫の場合、化学療法、放射線療法、および外科手術を含む集学的治療が、腫瘍容積の縮小を目的として用いられる。しかしながら、このようなアプローチにもかかわらず、これらの腫瘍に罹患した患者の予後は注意深く見守られる。化学療法、放射線療法、および外科手術の後の生存期間の中央値は、わずか約1年であり、2年間生存率はこれらの患者の25%のみである。
ある実施形態では、本発明は、腫瘍を治療および/もしくは予防し、並びに/または新生細胞のアポトーシスを促進するための方法であって、ATF5の機能および/または活性を阻害することができる細胞透過性ドミナントネガティブATF5(「CP−d/n−ATF5」)と新生細胞を接触させることを含む方法に関する。
または
から選択される配列を含む。ある実施形態では、CP−d/n−ATF5は、下記の群
から選択される配列を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーであり、かつこの配列は、細胞透過性配列に(インフレームで)作動可能に連結される。ある実施形態では、細胞透過性ドミナントネガティブATF5は、下記の群
から選択される配列を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーであり、かつこの配列は、細胞透過性配列に作動可能に並列される。
(ここで、下線付きの残基(MG〜HM)は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基(RQ〜KK)はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基(DY〜DK)はFLAGタグであり、フォント修飾のない残基(MA〜PD)はスペーサーアミノ酸であり、太字でイタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);
(ここで、下線付きの残基(MG〜LE)は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基(YG〜RR)はTAT配列であり、イタリック体の残基(YP〜YA)はHAタグであり、フォント修飾のない残基(MA〜PD)はスペーサーアミノ酸であり、太字でイタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);
(ここで、下線付きの残基(MG〜HM)は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基(RQ〜KK)はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);および
(ここで、太字の残基(RQ〜KK)はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである)
から選択される配列を含む。ある実施形態では、細胞透過性ドミナントネガティブATF5は化学合成される。
4.1 ATF5およびd/n−ATF5組成物
ATF5は、種々の腫瘍タイプにより広範に発現されている。具体的には、ATF5は、高度に増殖性の神経性腫瘍、例えば神経膠芽腫で発現されるだけでなく、必ずしも以下に限定されるものではないが、乳房、卵巣、子宮内膜、胃、結腸、肝臓、膵臓、腎臓、膀胱、前立腺、精巣、皮膚、食道、舌、口、耳下腺、喉頭、咽頭、リンパ節、肺、血液癌、末梢神経系、および脳の腫瘍を含む、複数の異常増殖でも発現される。
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGG AAGCGCGCAACCGCGAACTGAAAGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、
を含む。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGAAAGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGCGCGCGAAAACGAAGAACTGCTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGAAAGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAACAGCGCGCGGA AGAACTGGCGCGCGAAAACGAAGAACTGCTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGAAAGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAACAGCGCGCGGAAGAACTGGCGCG CGAAAACGAAGAACTGCTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGAAAGAACGCGCGGAAAGCGTGTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、ATF5ロイシンジッパー配列LEGECQGLEARNRELKERAESVを含むd/n−ATF5は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23または24個の追加のC末端ATF5ロイシンジッパー残基をさらに含む。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、前述のペプチド配列の1つからなる。
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGG CCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGCGCGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAAAAAGAAGCG GAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGCGCGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGCGCGCGAAAACGAAGAAC TGCTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGCGCGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAACAGCGCGCGGAAGAACTGGCGCGCGAAAACGAA GAACTGCTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGCGCGAACGCGCGGAAAGCTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、下記の配列
を含み、ここで、下線付きの配列はドミナントネガティブ配列であり、配列の残りの部分はATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、d/n−ATF5は、配列CTGGAACAGCGCGCGGAAGAACTGGCGCGCGAAAACGAAGA ACTGCTGGAAAAAGAAGCGGAAGAACTGGAACAGGAAAACGCGGAACTGGAAGGCGAATGCCAGGGCCTGGAAGCGCGCAACCGCGAACTGCGCGAACGCGCGGAAAGCGTGTAAを含む核酸によりコードされる。ある実施形態では、ATF5ロイシンジッパー配列LEGECQGLEARNRELRERAESVを含むd/n−ATF5は、配列EREIQYVKDLLIEVYKARSQRTRSのうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23または24個の追加のC末端ATF5ロイシンジッパー残基をさらに含む。ある実施形態では、d/n−ATF5ペプチドは、前述のペプチド配列の1つからなる。
であり、ここで、下線付きの残基は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基はFLAGタグであり、フォント修飾のない残基はスペーサーアミノ酸であり、太字でイタリック体の残基はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、CP−d/n−ATF5は、配列ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGCGTCAAATTAAAATTTGGTTTCAAAATCGTCGTATGAAATGGAAAAAAGACTACAAGGACGATGATGACAAAATGGCATCTATGACTGGAGGACAACAAATGGGAAGAGACCCAGACCTCGAACAAAGAGCAGAAGAACTAGCAAGAGAAAACGAAGAACTACTAGAAAAAGAAGCAGAAGAACTAGAACAAGAAAATGCAGAGCTAGAGGGCGAGTGCCAAGGGCTAGAGGCGCGGAATCGGGAGCTGAGGGAGAGGGCAGAGTCAGTGTAGを含む核酸によりコードされる。
であり、ここで、下線付きの残基は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基はTAT配列であり、イタリック体の残基はHAタグであり、フォント修飾のない残基はスペーサーアミノ酸であり、太字でイタリック体の残基はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである。ある実施形態では、CP−d/n−ATF5は、配列ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGCTCGAGTACGGCCGCAAGAAACGCCGCCAGCGCCGCCGCTATCCATATGACGTCCCAGACTATGCTATGGCATCTATGACTGGAGGACAACAAATGGGAAGAGACCCAGACCTCGAACAAAGAGCAGAAGAACTAGCAAGAGAAAACGAAGAACTACTAGAAAAAGAAGCAGAAGAACTAGAACAAGAAAATGCAGAGCTAGAGGGCGAGTGCCAAGGGCTAGAGGCGCGGAATCGGGAGCTGAGGGAGAGGGCAGAGTCAGTGTAGを含む核酸によりコードされる。
(ここで、下線付きの残基(MG〜HM)は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基(RQ〜KK)はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基(DY〜DK)はFLAGタグであり、フォント修飾のない残基(MA〜PD)はスペーサーアミノ酸であり、太字でイタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);
(ここで、下線付きの残基(MG〜LE)は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基(YG〜RR)はTAT配列であり、イタリック体の残基(YP〜YA)はHAタグであり、フォント修飾のない残基(MA〜PD)はスペーサーアミノ酸であり、太字でイタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);
(ここで、下線付きの残基(MG〜HM)は6XHisタグリーダー配列であり、太字の残基(RQ〜KK)はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);および
(ここで、太字の残基(RQ〜KK)はペネトラチン配列であり、イタリック体の残基(LE〜AE)はd/n配列であり、かつ太字で下線付きの残基(LE〜SV)はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである)
から選択される配列を含む。ある実施形態では、細胞透過性ドミナントネガティブATF5は化学合成される。
本明細書に記載する方法に従うと、細胞のATF5の機能または活性を無効、破壊、または不活性化することによって、細胞においてATF5を阻害することができる。例えば、細胞のATF5の機能または活性は、細胞の天然ATF5の機能または活性を阻害することができるドミナントネガティブATF5分子を与えることにより阻害することができる。ある実施形態では、d/n−ATF5はCP−d/n−ATF5である。
経口投与のために、CP−d/n−ATF5は、カプセル剤、錠剤、粉剤、顆粒剤として、または懸濁剤として製剤化することができる。CP−d/n−ATF5製剤は、ラクトース、マンニトール、コーンスターチ、またはジャガイモデンプンなどの従来の添加剤を含むことができる。CP−d/n−ATF5製剤にはまた、結晶セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、コーンスターチ、またはゼラチンなどの結合剤を添加することができる。加えて、CP−d/n−ATF5製剤に、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤を添加することができる。CP−d/n−ATF5製剤にはまた、無水リン酸水素カルシウムまたはデンプングリコール酸ナトリウムを添加することができる。最終的に、CP−d/n−ATF5製剤に、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど滑沢剤を添加することができる。
5.1 CP−d/n−ATF5の実施例
5.1.1 材料および方法
d/n ATF−5の短縮。pQC eGFP−d/n−ATF5プラスミド(Angelastroら、J Neurosci 2003;23(11):4590〜600を参照のこと)を鋳型として用い、上流プライマー5’−TCC GCG GCC GCA CCG GTC GCC−3’および下流プライマー5’−CTC GAG GAT ATC TCA GTT ATC TAC ACT GAC TCT GCC CTC TCC CTC AG−3’を用いるPCRは、3’プラスミドから75塩基対を短縮した。電気泳動的に精製したeGFP−d/n ATF5−tr(tr=短縮)cDNAを、pGEM−T Easy Cloningベクター(Promega)に連結し、DH5α細胞に形質転換し、LB寒天−アンピシリンプレート上に播種して青白選択をした。選択したコロニーを、LB+アンピシリン中で一晩増幅した。培養物から単離したプラスミド(mini−prep、Invitrogen)を、AgeIおよびEcoRVで消化した後、アガロースゲル電気泳動を行ってd/n−ATF5−trの挿入を確認し、挿入断片をDNAシークエンシングに供して確認した。Agel/EcoRVで消化したeGFP−d/n−ATF5−tr cDNAを、AgeI/EcoRV消化の精製pQCXIX(Clontech)発現ベクターに連結した。この連結混合物を用いてDH5α細菌を形質転換し、その産物を、細菌培養物のミニプレップのAgeI/EcoRV消化およびゲル電気泳動、ならびに未切断プラスミドのDNAシークエンシングにより確認した。pQC−eGFP−d/n−ATF5−trプラスミドは、Maxiprep(Invitrogen)で増殖させた。
細胞透過性形態のd/n−ATF5の作製。
全身に送達できる可能性のある改変された細胞透過性形態のd/n−ATF5を、本明細書に概説するように調製した。これには、迅速な生体内分布、低下した免疫応答、血液脳関門の通過、細胞への侵入、および広範に分散した腫瘍に到達する能力という潜在的な利点がある。最初のd/n−ATF5は、DNA結合ドメインに置き換わる、7番目の残基ごとのロイシン反復を含む両親媒性α−ヘリックス配列を有する野性型ロイシンジッパードメインを含む、N−末端短縮形態のATF5である[Angelastroら、J Neurosci 2003;23(11):4590〜600]。得られたタンパク質は、増強されたロイシンジッパー領域を介してATF5およびその結合相手と相互作用することができるが、DNAとは相互作用できず、その結果、ATF作用の有効なd/nサプレッサーとして作用する[Angelastroら、J Neurosci 2003;23(11):4590〜600;Vinsonら、Genes Dev 1993;7(6):1047〜58]。N末端ドメインが欠失すると、分解に対してd/n−ATF5が実質的に安定化する[Leeら、Developmental Neurobiology 2012;72(6):789〜804;Uekusaら、Biochem Biophys Res Commun 2009;380(3):673〜8]。送達可能形態のd/n−ATF5を設計するために、C末端の2つのバリン/バリン7アミノ酸反復を含む、タンパク質の最後の25アミノ酸を最初に短縮した。この欠失コンストラクトをC6神経膠芽腫細胞にトランスフェクトすると、アポトーシスの促進において、完全長d/n−ATF5と同等の有効性が示された(図1)。
動物実験を実施する前に、Pen−d/n−ATF5−RPが、培養において神経膠芽腫細胞に侵入し、死滅させる能力について確認した。ラットC6およびヒトU87神経膠芽腫細胞の血清含有培養物に加えると、Pen−対照−RPとPen−d/n−ATF5−RPは両方とも、2〜4時間以内に細胞中に容易に検出可能になり、少なくとも24時間検出可能のままであった(図3A、B)。共焦点顕微鏡検査から、ペプチドが細胞質および核の両方のコンパートメントに存在することが明らかになった(図3A)。
原発性脳腫瘍に到達し治療するPen−d/n−ATF5−RPの能力を試験するために、成体マウス脳へのPDGF−B−HA/shRNA−p53レトロウイルスの定位固定注射により神経膠腫を発生させるモデルを用いた。腫瘍は、内因性の分裂前駆細胞におそらく由来したものであり、ステージII〜IVの範囲にある浸潤性ヒト神経膠腫に極めて類似している。腫瘍は、早くも注射後52日目にMRIにより検出可能であり(以下を参照のこと)、HAタグの存在によって、また高細胞充実性、高色素性核、および上昇したKi67染色によって組織学的に同定可能であった。
表1続き−肝臓腎臓機能パネル
本明細書に提示した所見から、Pen−d/n−ATF5−RPは、培養GBM細胞に侵入し、アポトーシス活性を促進すること、ならびに動物に全身投与すると、血液脳関門を横断し、脳そして腫瘍細胞に侵入し、正常組織に外見上障害を与えることなく、大量の腫瘍細胞死および長期の腫瘍退縮/根絶を引き起こすことが示される。
5.2.1 TAT−d/n−ATF5は、培養メラノーマMEL501細胞のアポトーシス死を促進する
TAT連結ドミナントネガティブATF5ペプチドを、図13に表示する濃度(μM単位)でMEL501メラノーマ細胞の培地に加えた。4日後、細胞をHoescht色素で染色すると、細胞はアポトーシス核に比例して染色された。図10に示すように、TAT−d/n/ATF5は用量依存的にアポトーシスを促進した。
TAT連結ドミナントネガティブATF5ペプチドを、図14に表示する濃度(μM単位)で1日17時間、U373神経膠芽腫細胞の培地に加え、次いで、細胞を回収して、ウエスタン免疫ブロッティングにより、内因性ATF5レベルを分析した。TAT−d/n−ATF5が内因性ATF5の発現を大幅に低下させることに注目されたい。腫瘍細胞が生存のために内因性ATF5を必要とすることが以前の試験で示されているので、理論に拘束されるものではないが、細胞透過性TAT−ZIPペプチドの殺作用の機序は、内因性ATF5タンパク質の減少を原因とするものである可能性がある。TAT−ZIPペプチドが存在する場合、内因性ATF5上のスメアにも注目されたい。これは、TAT−ZIPが、内因性ATF5のユビキチン化およびプロテアソーム分解を引き起こすことによって内因性ATF5を減少させることを示唆する。
TAT−d/n−ATF5(TAT−ZIP)ペプチドは、種々の腫瘍細胞株において、細胞死促進遺伝子DDIT3(CHOP)の発現を誘導する。図15に表示する時間および用量(μM単位)でTAT−d/n−ATF5により細胞を処理し、次いで、細胞を回収して、CHOPおよび他の非応答性タンパク質の発現についてウエスタン免疫ブロッティングにより分析した。すべての場合におけるCHOPの上昇に注目されたい。CHOPは細胞死を誘導することができるので、これらのデータから、CHOPタンパク質の誘導が、TAT−d/n−ATF5が腫瘍細胞を死滅させる1つの機序である可能性が示される。
siRNAによるCHOPタンパク質のサイレンシング(図16の上部ウエスタン免疫ブロット)により、TAT−d/n−ATF5ペプチドを原因とする死からU87細胞が部分的に保護される。CHOP発現をサイレンシングさせるsiCHOP(図16の上部ウエスタン免疫ブロット)または対照siRNAで細胞を処置した。次いで、それらの細胞をTAT−d/n−ATF5に2日間曝露し、アポトーシス核を有する細胞の割合を評価した。これらのデータから、TAT−d/n−ATF5が腫瘍細胞を死滅させる機序の一部が、その後の死を媒介するCHOPの発現増大によることが示される。
TAT−d/n−ATF5はBCL2細胞生存タンパク質を下方制御する。図17に概略を示すように、培養U87ヒト神経膠芽腫細胞を表示濃度(μM単位)のTATZIP(TAT−d/n−ATF5ペプチド)で30時間処理した。次いで、細胞を回収して、ウエスタン免疫ブロッティングにより細胞生存タンパク質BCL2の発現を評価した。これらの所見から、細胞死促進CHOPの上昇に加えて、TAT−d/n−ATF5は、BCL2細胞生存タンパク質のレベルを低下させることによって腫瘍細胞を死滅させる可能性が示される。
TAT−d/n−ATF5はテモゾロミド(TMZ)と相乗的に作用して、培養U87神経膠芽腫細胞を死滅させる。図18に概略を示すように、致死量以下のTAT−d/n−ATF5(TZIP 1μM)およびTMZ(50μM)を個々にまたは併用して細胞に加え1日間培養し、次いで、アポトーシス核を有する細胞の割合を評価した。TMZは現在、ヒトGBMに対する第一選択治療である。このデータから、TAT−d/n−ATF5がTMZの存在下で機能するだけでなく、この2つの薬物が相乗的に作用してGBM細胞を死滅させることも明らかになる。これにより、TMZを服用している患者にTAT−d/n−ATF5を投与できることが示唆される。
図19に概略を示すように、3〜5日間の組換えTAT−d/n−ATF5(3μM)処置により、MTAアッセイを用いて検出されるように、2種のヒトGMB細胞株および1種のマウスGMB細胞株の生存率が低下する。
図20に概略を示すように、合成PEN−d/n−ATF5は、培養U87ヒト神経膠芽腫細胞の生存率を低下させる。MTAアッセイを用いて検出する場合、表示濃度(μM)で5日間の処置。
図21に概略を示すように、組換えTAT−d/n−ATF5は、アネキシンV/PI染色およびフローサイトメトリーにより示されるように、培養U87ヒト神経膠芽腫細胞の死を促進する。生細胞の割合は、下方左四分区間で示される(対照88%対処理58%)。瀕死細胞の割合は、下方右四分区間および上方右四分区間である(対照9%対処理36%)。
図22に概略を示すように、合成PEN−d/n−ATF5は、培養物中でスフェアとして増殖する初代GS9−6ヒト神経膠芽腫幹細胞のアポトーシス死を促進する。データは6日間処理の反映である。アネキシンV/PI染色およびフローサイトメトリーにより測定したデータ。
図23に概略を示すように、組換えPEN−d/n−ATF5は、培養物中でスフェアとして増殖する初代GS9−6ヒト神経膠芽腫幹細胞のアポトーシス死を促進する。5日間処理。アネキシンV/PI染色およびフローサイトメトリーにより測定したデータ。
Claims (8)
- 腫瘍を治療および/もしくは予防し、並びに/または新生細胞のアポトーシスを促進するための方法であって、ATF5の機能および/または活性を阻害することができる細胞透過性ドミナントネガティブATF5と前記新生細胞を接触させることを含む方法。
- 前記新生細胞が、乳房、卵巣、子宮内膜、胃、結腸、肝臓、膵臓、腎臓、膀胱、前立腺、精巣、皮膚、食道、舌、口、耳下腺、喉頭、咽頭、リンパ節、肺、末梢神経系、および脳からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 新生物脳細胞が、神経膠芽腫、星状細胞腫、神経膠腫、髄芽腫 中皮腫、および神経芽細胞腫からなる群から選択され、かつ前記新生物脳細胞が原発性または再発性の脳腫瘍に関連している、請求項2に記載の方法。
- 前記細胞透過性ドミナントネガティブATF5が、経口的、非経口的、および/または経皮的に投与される、請求項1に記載の方法。
- 細胞透過性ドミナントネガティブATF5を含む組成物であって、前記細胞透過性ドミナントネガティブATF5が、LEQENAELEGECQGLEARNRELKERAES、LEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRE LKERAES、LARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELKERAES、LEQRAEE LARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELKERAES、LEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELKERAESVからなる群から選択される配列からなり、前記「LEQENAE」、「LEKEAEELEQENAE」、「LARENEELLEKEAEELEQENAE」、「LEQRAEE LARENEELLEKEAEELEQENAE」、「LEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAE」がドミナントネガティブ配列であり、前記配列の残りの部分がATF5ロイシンジッパーであり、かつ前記配列が、細胞透過性配列に作動可能に連結されている、組成物。
- 細胞透過性ドミナントネガティブATF5を含む組成物であって、前記細胞透過性ドミナントネガティブATF5が、LEQENAELEGECQGLEARNRELRERAES、LEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRE LRERAES、LARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELRERAES、LEQRAEEL ARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELRERAES、LEQRAEELARENEELLE KEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELRERAESVからなる群から選択される配列からなり、前記「LEQENAE」、「LEKEAEELEQENAE」、「LARENEELLEKEAEELEQENAE」、「LEQRAEEL ARENEELLEKEAEELEQENAE」、「LEQRAEELARENEELLE KEAEELEQENAE」がドミナントネガティブ配列であり、前記配列の残りの部分がATF5ロイシンジッパーであり、かつ前記配列が、細胞透過性配列に作動可能に連結されている、組成物。
- 前記細胞透過性ドミナントネガティブATF5が
(1)MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMRQIKIWFQNRRMKWKKDYKDDDDKMAS MTGGQQMGRDPDLEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELRERAES V(ここで、「MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHM」は6XHisタグリーダー配列であり、「RQIKIWFQNRRMKWKK」はペネトラチン配列であり、「DYKDDDDK」はFLAGタグであり、「MAS MTGGQQMGRDPD」はスペーサーアミノ酸であり、「LEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAE」はd/n配列であり、かつ「LEGECQGLEARNRELRERAES V」はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);
(2)MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLEYGRKKRRQRRRYPYDVPDYAMASMTGG QQMGRDPDLEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELRERAESV(ここで、「MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE」は6XHisタグリーダー配列であり、「YGRKKRRQRRR」はTAT配列であり、「YPYDVPDYA」はHAタグであり、「MASMTGG QQMGRDPD」はスペーサーアミノ酸であり、「LEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAE」はd/n配列であり、かつ「LEGECQGLEARNRELRERAESV」はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);
(3)MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMRQIKIWFQNRRMKWKKLEQRAEELARENE ELLEKEAEELEQENAELEGECQGLEARNRELKERAESV(ここで、「MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHM」は6XHisタグリーダー配列であり、「RQIKIWFQNRRMKWKK」はペネトラチン配列であり、「LEQRAEELARENE ELLEKEAEELEQENAE」はd/n配列であり、かつ「LEGECQGLEARNRELKERAESV」はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである);および
(4)RQIKIWFQNRRMKWKKLEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAELEGECQ GLEARNRELKERAESV(ここで、「RQIKIWFQNRRMKWKK」はペネトラチン配列であり、「LEQRAEELARENEELLEKEAEELEQENAE」はd/n配列であり、かつ「LEGECQ GLEARNRELKERAESV」はその最初のバリンの後で短縮されたATF5ロイシンジッパーである)
からなる群から選択される配列を含む、請求項6に記載の組成物。 - 請求項5〜7のいずれか一項に記載の細胞透過性ドミナントネガティブATF5を含む組成物を含むキット。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021508503A (ja) * | 2018-01-03 | 2021-03-11 | サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド | Atf5ペプチド多様体及びそれらの使用 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014130758A1 (en) * | 2013-02-22 | 2014-08-28 | The Trustees Of Columbia Unversity In The City Of New York | Compositions and methods for inhibiting tumor cells by inhibiting the transcription factor atf5 |
WO2018152446A2 (en) * | 2017-02-20 | 2018-08-23 | Sapience Therapeutics, Inc. | Cell-penetrating atf5 polypeptides and uses thereof |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010512730A (ja) * | 2006-12-13 | 2010-04-30 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 肺癌の腫瘍マーカーおよび治療標的としてのttk |
US7888326B2 (en) * | 2003-04-04 | 2011-02-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods for promoting apoptosis and treating tumor cells inhibiting the expression or function of the transcription factor ATF5 |
WO2011097513A1 (en) * | 2010-02-04 | 2011-08-11 | Gilead Biologics, Inc | Antibodies that bind to lysyl oxidase-like 2 (loxl2) and methods of use therefor |
WO2013013105A2 (en) * | 2011-07-19 | 2013-01-24 | Vivoscript,Inc. | Compositions and methods for re-programming cells without genetic modification for repairing cartilage damage |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11510389A (ja) * | 1995-07-31 | 1999-09-14 | アメリカ合衆国 | 細胞タンパク質の機能を不活性化するためのタンパク質−タンパク質相互作用表面の拡張 |
FR2739621B1 (fr) * | 1995-10-05 | 1997-12-05 | Centre Nat Rech Scient | Peptides utilisables comme vecteurs pour l'adressage intracellulaire de molecules actives |
US5955593A (en) * | 1996-09-09 | 1999-09-21 | Washington University | BH3 interacting domain death agonist |
US6221355B1 (en) * | 1997-12-10 | 2001-04-24 | Washington University | Anti-pathogen system and methods of use thereof |
US6348185B1 (en) | 1998-06-20 | 2002-02-19 | Washington University School Of Medicine | Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy |
US6303576B1 (en) * | 1999-04-21 | 2001-10-16 | Adherex Technologies Inc. | Compounds and methods for modulating β-catenin mediated gene expression |
AU6857600A (en) | 1999-08-31 | 2001-03-26 | Glaxo Group Limited | Screen |
AU7577600A (en) * | 1999-09-13 | 2001-04-17 | Cornell Research Foundation Inc. | Delivering to eucaryotic cells bacterial proteins that are secreted via type iiisecretion systems |
US6962151B1 (en) | 1999-11-05 | 2005-11-08 | Pari GmbH Spezialisten für effektive Inhalation | Inhalation nebulizer |
US6936450B2 (en) * | 2000-04-12 | 2005-08-30 | Compugen Ltd. | Variants of protein kinases |
US6468754B1 (en) * | 2000-04-18 | 2002-10-22 | Iconix Pharmaceuticals, Inc. | Vector and method for targeted replacement and disruption of an integrated DNA sequence |
US20020151004A1 (en) * | 2000-07-24 | 2002-10-17 | Roger Craig | Delivery vehicles and methods for using the same |
US20050164384A1 (en) | 2003-04-04 | 2005-07-28 | Greene Lloyd A. | Methods for regulating differentiation of neural cells and uses thereof |
WO2008151037A1 (en) * | 2007-05-30 | 2008-12-11 | Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Peptide-based stat inhibitor |
DE102009007381A1 (de) * | 2009-01-29 | 2010-08-05 | Amp-Therapeutics Gmbh & Co. Kg | Antibiotische Peptide |
WO2010120931A2 (en) * | 2009-04-14 | 2010-10-21 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | E2f as a target for treatment of hormone refractory prostate cancer |
WO2014130758A1 (en) * | 2013-02-22 | 2014-08-28 | The Trustees Of Columbia Unversity In The City Of New York | Compositions and methods for inhibiting tumor cells by inhibiting the transcription factor atf5 |
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7888326B2 (en) * | 2003-04-04 | 2011-02-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods for promoting apoptosis and treating tumor cells inhibiting the expression or function of the transcription factor ATF5 |
JP2010512730A (ja) * | 2006-12-13 | 2010-04-30 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 肺癌の腫瘍マーカーおよび治療標的としてのttk |
WO2011097513A1 (en) * | 2010-02-04 | 2011-08-11 | Gilead Biologics, Inc | Antibodies that bind to lysyl oxidase-like 2 (loxl2) and methods of use therefor |
WO2013013105A2 (en) * | 2011-07-19 | 2013-01-24 | Vivoscript,Inc. | Compositions and methods for re-programming cells without genetic modification for repairing cartilage damage |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
THE JOURNAL OF NEUROSCIENCE, vol. 23, no. 11, JPN6017034145, 2003, pages 4590 - 4600, ISSN: 0003743014 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021508503A (ja) * | 2018-01-03 | 2021-03-11 | サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド | Atf5ペプチド多様体及びそれらの使用 |
JP2022031646A (ja) * | 2018-01-03 | 2022-02-22 | サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド | Atf5ペプチド多様体及びそれらの使用 |
JP7312948B2 (ja) | 2018-01-03 | 2023-07-24 | サピエンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド | Atf5ペプチド多様体及びそれらの使用 |
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