JP2016515382A5 - - Google Patents
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Description
ある特定の実施形態では、光受容体前駆細胞の生存度を維持するのに適切な培地は、培養培地、凍結保存剤およびヒト患者における注射に適切な生体適合性注射媒体からなる群より選択される。
Claims (36)
- 光受容体前駆細胞の調製物であって、
少なくともその50%が、免疫細胞化学的にPAX6+およびCHX10−であり、qPCRによって検出されるMASH1についてmRNA転写物陽性である光受容体前駆細胞である、複数の細胞、および
前記光受容体前駆細胞の生存度を維持するのに適切な培地
を含む、前記調製物。 - 細胞の90パーセント超が、免疫細胞化学的にPAX6(+)およびCHX10(−)であり、qPCRによって検出されるMASH1についてmRNA転写物陽性である前記光受容体前駆細胞である、請求項1に記載の調製物。
- 調製物が、1%未満の多能性幹細胞、網膜神経節細胞、成熟光受容体および/またはアマクリン細胞を含む、請求項1または2に記載の調製物。
- 調製物が、哺乳動物患者における使用に適切な医薬調製物であり、培地が、哺乳動物患者中への移植のために前記光受容体前駆細胞の生存度を維持するための薬学的に許容される担体を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の調製物。
- 調製物が、少なくとも109の光受容体前駆細胞を含む低温細胞調製物であり、低温細胞調製物が、解凍の際の前記光受容体前駆細胞の生存度と適合性の凍結保存剤を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、多能性幹細胞から誘導される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の調製物。
- 多能性幹細胞が、ヒト胚性幹細胞および人工多能性幹細胞からなる群より選択される、請求項6に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞がヒト細胞である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞の大部分が、qPCRによって検出されるNr2e3、Trβ2、RORβおよびNROについてmRNA転写物陽性である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、網膜神経前駆細胞と比較して、分泌されたタンパク質のイムノアッセイまたはmRNA転写物レベルのqPCRによって検出されるuPA、テネイシン−C、CXCL16、CX3CL1およびキチナーゼ3様−1から選択される1種または複数のマーカーを、少なくとも2倍多く発現する、請求項1〜9のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、細胞培養物中で少なくとも20回の集団倍加を起こす複製能力を有し、前記細胞の25パーセント未満が、20回目の倍加までに、細胞死を起こす、老化する、または表現型的に光受容体でない細胞へと分化する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、それぞれグリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼのタンパク質またはmRNAレベルよりも少なくとも25パーセント少ない、トランスフェリンタンパク質およびまたはトランスフェリンmRNAレベルを有する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞は、HLAが遺伝子型的に同一である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞がゲノム的に同一である、請求項1〜13のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、8kbよりも長い平均末端制限断片長(TRF)を有する、請求項1〜14のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、胎仔由来光受容体と比較して、統計的に有意な減少した含量および/または酵素活性の、(i)細胞周期調節および細胞加齢、(ii)細胞エネルギーおよび/または脂質代謝、ならびに(iii)アポトーシスのうちの1つまたは複数に関与するタンパク質を有する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、胎仔由来光受容体と比較して、統計的に有意な増加した含量および/または酵素活性の、細胞骨格構造およびそれに関連する細胞動態に関与するタンパク質を有する、請求項1〜16のいずれか一項に記載の調製物。
- 患者がヒト患者である、請求項4に記載の調製物。
- 患者が非ヒト獣医学的患者である、請求項4に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、共通の多能性幹細胞供給源から分化する、請求項6または7に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞の生存度を維持するのに適切な前記培地が、培養培地、凍結保存剤およびヒト患者における注射に適切な生体適合性注射媒体からなる群より選択される、請求項1に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、杆体および錐体の両方へと分化する可塑性を維持する、請求項1〜21のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、ELOVL4−TG2マウスの網膜下空間中に移植された場合に、外顆粒層へと遊走し、前記ELOVL4−TG2マウスにおいて暗順応および明順応網膜電図(ERG)応答を改善する、請求項1〜22のいずれか一項に記載の調製物。
- 発熱物質およびマイコゲンを含まない、請求項4に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、食作用活性を有し、単離された光受容体外節、pHrodo(商標)Red E.coli BioParticlesまたはそれらの両方を貪食する能力を任意選択で有する、請求項1〜24のいずれか一項に記載の調製物。
- 前記光受容体前駆細胞が、1種または複数の神経保護因子を分泌する、請求項1〜25のいずれか一項に記載の調製物。
- 多能性幹細胞由来光受容体細胞の調製物であって、
(a)多能性幹細胞由来光受容体細胞であって、前記細胞の90%超が、免疫細胞化学的にPAX6+、CHX10−であり、ロドプシン+および/またはオプシン+である、多能性幹細胞由来光受容体細胞;ならびに
(b)前記幹細胞由来光受容体細胞の生存度を維持するのに適切な培地
を含む、前記調製物。 - 哺乳動物患者における使用に適切な光受容体の医薬調製物であって、
(a)多能性幹細胞由来光受容体細胞であって、前記細胞の90%超が、免疫細胞化学的にPAX6+、CHX10−であり、ロドプシン+および/またはオプシン+である、多能性幹細胞由来光受容体細胞;ならびに
(b)哺乳動物患者中への移植のために前記光受容体細胞の生存度を維持するための薬学的に許容される担体
を含む、前記医薬調製物。 - 光受容体前駆細胞を生成する方法であって、
個々の細胞球を形成するのに十分な期間にわたって低接着条件または非接着条件との間を交互に繰り返す培養条件下で、次いで接着条件下で眼野前駆細胞を培養するステップ
を含み、
前記培養条件を交互に繰り返すことが、前記細胞の大部分が光受容体前駆細胞になるまで継続され、前記光受容体前駆細胞が、PAX6(+)およびCHX10(−)として特徴付けられ、前記光受容体前駆細胞が、レチノイン酸での処理の際に光受容体細胞へと分化する、前記方法。 - 光受容体前駆細胞を生成する方法であって、
(a)細胞クラスターが個々の細胞球を形成するのに十分な期間にわたって、神経分化培地中で、好ましくは細胞クラスターとして、好ましくは低接着条件または非接着条件下で眼野前駆細胞を培養するステップであって、前記眼野前駆細胞は、免疫染色および/またはフローサイトメトリーによって決定されるPAX6(+)およびRX1(+)およびOCT4(−)およびNANOG(−)として特徴付けられ、好ましくは、SIX3(+)、SIX6(+)、LHX2(+)、TBX3(+)、SOX2(+)およびネスチン+としても特徴付けられる、ステップ;
(b)接着条件下で、好ましくは、ゼラチン、アルギネート、1型コラーゲン、Matrigel(商標)、ポリグリコリド、コラーゲン、フィブリンまたは自己組織化ペプチドなどの生体材料足場上で、培養物中の細胞の大部分がPAX6(+)、CHX10(+)およびSOX2(−)として特徴付けられる網膜神経前駆細胞になるまで、神経分化培地中で前記細胞球を培養するステップ;
(c)その後、前記網膜神経前駆細胞が個々の細胞球を形成するのに十分な期間にわたって、低接着条件または非接着条件の間で培養条件を1回または複数回交互に繰り返し、次いで、接着条件下で細胞球を含む前記網膜神経前駆細胞を培養するステップであって、前記培養条件を交互に繰り返すことが、前記細胞の大部分が光受容体前駆細胞になるまで継続され、前記光受容体前駆細胞が、PAX6(+)およびCHX10(−)として特徴付けられ、好ましくは、qPCRによって検出されるMash1、Nr2e3、Trβ2、RORβおよびNROについてmRNA転写物陽性としても特徴付けられ、前記光受容体前駆細胞が、レチノイン酸での処理の際に光受容体細胞へと分化する、ステップ
を含む、前記方法。 - 前記光受容体前駆細胞が、多能性幹細胞から誘導される、請求項29または30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記多能性幹細胞が、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞であり、任意選択でヒト胚性幹細胞またはヒト人工多能性幹細胞である、請求項31に記載の方法。
- 生成される光受容体前駆細胞が、1%未満の多能性幹細胞を含む、請求項31または32に記載の方法。
- 前記光受容体前駆細胞が、他の細胞型に対して、少なくとも50%純粋である、請求項29〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記光受容体前駆細胞を凍結保存するさらなるステップを含む、請求項29〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 多能性幹細胞由来光受容体前駆細胞の実質的に純粋な培養物を調製するための方法であって、
(a)無フィーダー系において多能性幹細胞を培養して、1つまたは複数の眼野前駆細胞を生成するステップ;
(b)BMPシグナル伝達インヒビターの存在下の網膜誘導培地中で前記1つまたは複数の眼野前駆細胞を培養して、PAX6+、CHX10+およびSOX2+である網膜神経前駆細胞を生成するステップ;
(c)BMPシグナル伝達インヒビターの非存在下の神経分化培地中で前記網膜神経前駆細胞を培養して、PAX6+、CHX10−およびMash1+である光受容体前駆細胞(PRPC)を生成するステップ
を含む、前記方法。
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