JP2016506731A - 穀物収量増強のための育種法並びに関連材料及び方法 - Google Patents
穀物収量増強のための育種法並びに関連材料及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016506731A JP2016506731A JP2015555823A JP2015555823A JP2016506731A JP 2016506731 A JP2016506731 A JP 2016506731A JP 2015555823 A JP2015555823 A JP 2015555823A JP 2015555823 A JP2015555823 A JP 2015555823A JP 2016506731 A JP2016506731 A JP 2016506731A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- rice
- spike
- plant
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Abandoned
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/10—Seeds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
- A01H6/4636—Oryza sp. [rice]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Physiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
この出願は、2013年2月1日に出願された米国仮出願番号61/759,408に対して優先権を主張し、その全開示を、全ての目的のために参照により本明細書に明示的に組み込む。
第二のイネのゲノムの回復が、92%〜97%である、かかる方法もまた提供される。
第二のイネが、イネ(Oryza sativa)亜種のインディカから選択される、かかる方法もまた提供される。
植物細胞が、SPIKE遺伝子についてホモ接合型である、かかる方法もまた提供される。
本発明は、少なくとも一つの植物プロモーター、及びSPIKEの配列と少なくとも70%同一である少なくとも一つのポリヌクレオチド配列を含む遺伝子組換え植物であって、該プロモーター及びポリヌクレオチドが作動可能に連結されており、植物細胞の染色体DNAに組込まれている、上記遺伝子組換え植物もまた提供する。
植物が、イネである、かかる植物もまた提供される。
植物が、SPIKE遺伝子についてホモ接合型である、かかる植物もまた提供される。
本発明は、本明細書の植物の、植物の一部もまた提供する。
穀草が、イネである、かかる方法もまた提供される。
穀草の第一の変種が、ダリンガン(Daringan)である、かかる方法もまた提供される。
「収量」は、植物、植物の群、又は作物により生産される穀物の量を説明する。収量は、限定されるものではないが、m2あたりの穀物収量、t ha-1、及び植物あたりの平均穀物収量を含む幾つかの方法で測定され得る。
一つの特定の実施形態によれば、新規な遺伝子SPIKE、又はその収量改善部分を含む核酸(好ましくはDNA)配列が、穀物収量が改善されたイネの生産のために用いられ得る。この態様では、本実施形態は、穀物収量が改善されたイネを生産するためのSPIKE、又はその収量改善部分の使用を提供し、SPIKEを含む核酸配列のインディカイネ品種における導入を含む。核酸配列は、任意の好適なドナーイネに由来し得る。SPIKE、又はその収量改善部分を含む核酸配列を提供可能な好適なドナーイネは、熱帯ジャポニカ在来種のダリンガン(Daringan)、インディカ品種であるShennung 89-366とダリンガン(Daringan)の交雑種に由来するNPT品種YP9(IR68522-10-2-2)、熱帯ジャポニカBali Ontjer、(Bali Ontjer由来の)NPT IR65564-22-2-3とIRRI146の交雑種の後代である。相対的に高い穀物収量を示し、SPIKEを含む他の関連イネも、ドナー植物として利用され得る。
収量が改善されたイネを生産するための他の実施形態では、原形質融合が、ドナー植物からレシピエント植物への核酸の移行のために用いられ得る。原形質融合は、単一の二核又は多核細胞を生産する、誘導される又は自発的な結合、例えば二つ以上のプロトプラスト(細胞壁が酵素処理によって除去された細胞)間の体細胞ハイブリダイゼーションである。自然では交配し得ない植物種によってさえも得られ得る融合した細胞は、性質の所望の組み合わせを示すハイブリッド植物に組織培養される。より具体的には、第一のプロトプラストは、イネ又改善された穀物収量を示す他の植物系統から得られ得る。例えば、ダリンガン(Darigan)、YP9、又はBali Ontjer由来のプロトプラストが用いられ得る。第二のプロトプラストは、イネ又は他の植物変種、好ましくは一般的なインディカイネ品種から得られ得る。さらに、第二のプロトプラストは、商業的に望ましい特徴、例えば限定するものではないが、病害抵抗性、昆虫抵抗性、雑草抵抗性等を含むイネ変種に由来し得る。その後、プロトプラストは、本分野で知られる伝統的なプロトプラスト融合手順を用いて融合される。
SPIKEマーカー支援選抜(MAS)及びマーカー補助戻し交雑(MABC)が本明細書において記載される。
NIL-SPIKEの特徴
本明細書でSPIKE(SPIKELET NUMBER、籾数)と呼ぶ量的形質遺伝子座(QTL)qTSN4を、SPIKEのについてのNIL、NIL-SPIKEを用いて特徴づけた(図1−1A)。NIL-SPIKEは、IR64よりも長い穂(図1−1B)、葉(図1−2C)、及び穂頸(図1−2D)を有していた。収量関連形質の中でも、それはより高いTSN(一穂あたり籾数)(図1−3E)、止葉幅(FLW;図1−3F)、根の乾燥重量(RDW;図1−3G)及び登熟粒の割合(図S2A)を有していたが、より低い植物当たり穂数及び1000粒量(図2SB、C)を有していた。注目すべきことに、登熟粒の割合に加えて、おそらく維管束数(VBN;図1−4I)の増加によって、同化産物の穂への供給が強化され、玄米外観品質が改善されたと考えられる(図1−4H)。結果として、NILのm2あたりの穀物収量(GYS)は、四つの作期にわたって、一貫してIR64のそれよりも高く、この四つの作期のうち三つにおいて有意に高かった(図1−4J)。NILの平均GYSは、IR64の平均GYS(〜400 g/m2)よりも、乾期において28%高く、雨期において24%高かった。したがって、穀物の見かけの低下を伴わないNILにおけるGYSの増加は、シンクサイズ(高いTSN)、ソースサイズ(広いFLW及び高いRDW)、及び転流能(高いVBN)の増大を介して達成された。さらに、到穂日数は変化しなかった(図S2D)。したがって、SPIKEは出穂日などの地域適応性に関する形質を変えることなく収量を改善する非常に有用な遺伝子である。
SPIKEについて遺伝子を同定するために、高解像関連分析を、TSNについて7996 BC4F3植物を用いて評価した。候補領域は、Ind4及びInd12(18.0kbp)マーカーの間に存在し、その領域にはミシガン州立大学のイネゲノムアノテーションプロジェクト(Rice Genome Annotation Project)のデータベースが三つの遺伝子を予測している(図2−1A)。TSNに加えて、示唆された遺伝子は、二次枝梗数及び葉幅の増加と関連していた(図7)。幼穂における発現分析は、Os04g52479(Nal1:ナローリーフ1)のみが発現されたことが明らかになった(図8)。したがって、これがSPIKEの最も見込みのある候補である。SPIKEの予測アミノ酸配列の分析は、IR64及びNIL-SPIKE間で三つのアミノ酸置換を明らかにし、その一つはトリプシン様セリン及びシステインプロテアーゼドメインに存在する(図9−1、9−2)。さらに、SPIKEタンパク質は、ヤマカモジグサ(Brachypodium)、コムギ、ソルガム、及びトウモロコシのタンパク質と>84%の同一性を示し、トリプシン様セリン及びシステインプロテアーゼドメインにおいて高い類似性を示す。この類似性は、これらの種間のSPIKEタンパク質ファミリーの生物化学的機能の保存を示している。
SPIKEは、幾つかの器官において一貫して発現されていた(図2−2B)。植物発育器官のSPIKEの組織的発現を分析するために、β‐グルクロニダーゼ(GUS)レポーター遺伝子を、遺伝子組換えIR64植物において、ネイティブなSPIKEプロモーターの制御下で発現させた。組織化学的分析は、子葉鞘、穂首及び茎の維管束、葉(図S6A−C)、冠根、側根(図2−2C)、及び幼穂(図2−2D)におけるGUS活性を明らかにした。子葉鞘に加えて、GUS発現のパターンは、NIL-SPIKEにおいて増強された器官と一致していた。定量RT-PCRは、様々なステージにおける幼穂におけるSPIKEの発現が、NIL-SPIKEにおいてIR64におけるものより一貫して高く、21〜50 mm期ではIR64の発現の2倍であることを明らかにした(P=0.05;図2−3E)。この結果は、幼穂期でのSPIKE発現の増加が、一穂あたり籾数を増加させたことを示している。
SPIKEの発現解析データを裏付けるため及びSPIKEの機能への洞察を得るために、(恒常的プロモーターを用いる)過剰発現系統及び(人工のマイクロRNA:amiRNAを用いる)発現抑制系統を作成した。ユビキチンプロモーターと融合させたNIL-SPIKE由来のSPIKEのcDNAを含むDNAフラグメント(Ubi:SPIKE)を、形質転換によってIR64に導入した。過剰発現遺伝子組換え植物は、大きな穂及び広い止葉を含む、NIL-SPIKEと同様の表現型を示した(図3−1A、B)。単一コピーを有する植物は、IR64より有意に高いTSN及びFLWを有していた(図3−2C、D)。複数コピーを有する植物は、単一コピーを有するものよりも有意に高いTSN及びFLWを有しており、これはTSN及びFLWの増加がSPIKEの発現と連動することを示唆している。複数コピーを有する事象において、有意に高い転写産物が観察された(図S7A)。これは、SPIKE転写産物の、植物表現型に対する用量効果を示唆している。さらに、T0 Ubi:SPIKE植物のTSN及びFLWは、コピー数と共に増加した(図S7C−E)。対照的に、SPIKEを下方調節するための、SPIKEの第一(amiRNA1)及び第四(amiRNA4)のエクソンを標的とする二つのamiRNA前駆体のNIL-SPIKEへの形質転換は、NIL-SPIKEよりも有意に低いTSN及び狭い葉を有する遺伝子組換え植物を生産した(図3−4G、H)。
異なる遺伝的背景において収量を増加させることについてのSPIKEの有効性を評価するために、該遺伝子を新規な高収量インディカ品種であるIRR1146(フィリピンでは、「NSIC Rc158」としてリリースされている)に遺伝子導入した。IRRI1146への反復戻し交雑及びマーカー補助選抜により、IRRI146-SPIKE NILを作成した(図4−1A、4−2B)。IRRI146-SPIKEは、IRRI146に対し98%の遺伝的同一性を有していたので、IRRI146におけるSPIKEの多面的効果は、NIL-SPIKEにおけるものと同様であった。IRRI146-SPIKEのGYS、TSN、及びFLWは、IRRI146のものより優位に高かった(図4−3C−E)。YP9由来のSPIKEを、同様に、異なる遺伝的及び地理的背景を有する五つの一般的なインディカ品種に導入した。その効果を、一般的なインディカ品種である、フィリピン由来のPSBRc18(IR51672-62-2-1-1-2-3)、インドネシア由来のチヘラン(Ciherang)、ラオス由来のTDK1、バングラデシュ由来のBR11、インド由来のスワルナ(Swarna)の異なる遺伝的背景において確認した。SPIKEについてホモ接合性である植物は、反復親よりも優位に高いTSNを有していた(図4−4F)。
植物材料
戻し交雑育種によって、インディカ品種のIR64の遺伝的背景中に、NPT品種から遺伝した農業形質に変異を有する334 BC3由来のILを開発した。我々は、高いTSNを有するIL:インディカ品種のShennung 89-366と熱帯ジャポニカ在来種のダリンガン(Daringan)の交雑種に由来するNPT品種YP9(IR68522-10-2-2)に由来するYTH326(IR84640-11-110-6-4-2-2-4-2-2-3-B)を選択した(図5)。IR64とYTH326の交雑種に由来するBC4F2集団を用いて、高いTSNについて、染色体4の長腕のSSRマーカーであるRM3423及びRM17492の間にqTSN4を同定した。NIL-SPIKEを、BC4F2集団から選択された植物の自家受粉により開発し、農業形質の評価、形質転換、及び発現のために用いた。
高収量のインディカ品種であるIRRI146(IR77186-122-2-2-3)は、最近フィリピンにおいて「NSIC Rc158」としてリリースされた。熱帯ジャポニカのBali Ontjer由来のNPT IR65564-22-2-3とIRRI146の交雑種の後代を、IRRI146に三回戻し交雑した。各世代において、SPIKE隣接マーカーであるRM5503及びRM6909を用いてMASを行った。全ての染色体をカバーする116の多型性SSRマーカーを用いる96のBC3F1植物の全ゲノム調査を行った。一つのBC3F1植物を選択し、IRR1146の遺伝的背景中のSPIKEについてのNILを開発するために自家受粉させた。このIRRI146-SPIKEを、農学的形質及び穀物収量について、反復親と比較した。
戻し交雑及びMASによって5つの一般的な品種:PSBRc18(IR51672-62-2-1-1-2-3)(フィリピン)、チヘラン(Ciherang)(インドネシア)、TDK1(ラオス)、BR11(バングラデシュ)、及びスワルナ(Swarna)(インド)にSPIKEを遺伝子導入した。YP9と各品種の交雑種の後代を、該一般的な品種に二回戻し交雑した。各世代において、SPIKE隣接マーカーであるInd2及びRM17487を用いてMASを行った。SPIKEについてホモ接合性である植物を、各BC2F2集団から選択し、圃場においてTSNについて評価した。
全ての植物を、フィリピン、ラグナ、ロスバニョス(Los Banos)のIRRIにおいて圃場で成長させ、成熟期に1000粒重、PN、FLW、及びTSNについて評価した。穂軸を穂首の1cm下で切断し、VBNを立体顕微鏡下でカウントした。ポットで成長させた植物のRDWを、成熟期に測定した。
SPIKEについてヘテロ接合性であるBC4F2植物から作成した7996のBC4F3植物のゲノムDNAを、新鮮な葉から抽出した。隣接マーカーであるRM17450及びRM3836の間に組換えを有する1073のBC4F3植物のゲノムDNAを、セチルトリメチルアンモニウムブロミド法によって凍結乾燥した葉から個々に抽出した。RM3423とAGT3の間に組換えを示した41のBC4F3植物を選択し、AGT3を自家受粉して後代試験に用いるためのBC4F4系統を作成した。BC4F4系統の中で、各組換え体由来のホモ接合性植物を選択し、TSN及びFLWについて評価した。22のDNAマーカーを、マップの構築のために用いた(表1)。
SPIKEのコード領域の全長を包含するフラグメントを、NIL-SPIKEの幼穂由来のcDNAから、8M17-c1のプライマー対を用いて、増幅した。フラグメントをバイナリ―ベクターであるpCAMBIA1300int-prUbi1-tNOSに、トウモロコシユビキチンプロモーターとノパリンシンターゼターミネーターの間にライゲーションし、過剰発現ベクターを作った。アグロバクテリウム媒介形質転換を用いて、ベクターをIR64に導入した。再生植物を、サザンブロット分析によって導入遺伝子のコピー数について評価した。SPIKEの遺伝子発現抑制には、amiRNAアプローチを用いた。二つの21bpのamiRNA配列−amiRNA1(SPIKEの第一のエクソンのための、TATAAGAAGTATGCTGCGCTA(配列番号4))、及びamiRNA4(SPIKEの第四のエクソンのための、TTAATATCAAGTTCCAGACGC(配列番号5))を、Web MicroRNA Designer 3ソフトウェアを用いて設計した。amiRNAの前駆体(表1)は、プラスミドpNW55を鋳型として用いる重複PCRを用いて、部位特異的突然変異により作製した。前駆体をバイナリーベクターであるpCAMBIA1300int-prUbi1-tNOSにライゲーションし、発現抑制ベクターを作った。アグロバクテリウム媒介形質転換を用いて、ベクターをNIL-SPIKEに導入した。遺伝子組換え植物(T0)をポットに移植し、T1植物を、20cm及び30cmの条間で、スクリーンハウス内に移植した。これらの植物を、TSN及びFLWについて評価した。
各器官の全RNAをRNeasy Plant Mini Kit(Qiagen、California、米国)を用いて抽出した。SPIKEの候補遺伝子を同定するために、1μgの全RNAを用いてRT-PCRを行った。各候補のための遺伝子特異的プライマー(表1)と1μLのcDNAを用いてPCRを行った。異なる器官における発現の比較のために、幼穂、茎、葉鞘、葉、及び根の全RNAを、穂の開始期に抽出した。seq8M17-56プライマー対及びReverTra Ace qPCR RTキット(東洋紡、大阪、日本)を用いて、500ngの全RNAを用いてRT-PCRを行った。seq8M17-56プライマー対とLightCycler 480 SYBR Green I Master Mixを用いて、LightCycler 480 System(Roche Applied Science)において、1/5 cDNA混合物を用いてqRT-PCR反応を行った。データをハウスホールド遺伝子であるユビキチン(Os01g22490)の発現に対して標準化した。
Claims (63)
- 改善された穀物収量を有する後代イネを生産するための方法であって、
a)SPIKE遺伝子を含む第一のイネを提供するステップ、
b)第一のイネを第二のイネと交雑させて後代イネを生産するステップ、
c)SPIKE遺伝子について第二のイネを分析するステップ、
d)SPIKE遺伝子を含み、第二のイネに対して改善された穀物収量を有する後代イネを同定し選択するステップ、
を含む、上記方法。 - SPIKE遺伝子が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択される配列と少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、配列番号2と少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、RM5503、RM3423、及びInd4からなる群より選択される第一の上流分子マーカー、並びにRM6909、AGT3、RM17487、RM17486、及びInd12からなる群より選択される第二の下流分子マーカーを検出することにより同定される、請求項1に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、RM3423、及びInd4からなる群より選択される第一の上流分子マーカー、並びにAGT3、RM17487、RM17486、及びInd12からなる群より選択される第二の下流分子マーカーを検出することにより同定され、第一の上流及び第二の下流分子マーカーが、表1に記載された対応するフォワード及びリバースプライマーを用いて検出される、請求項1に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、約105塩基対の第一の分子マーカーであるInd2、及び約252塩基対の第二の分子マーカーであるRM17487を検出することによって同定される、請求項1に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、約105塩基対の第一の分子マーカーであるInd2(フォワードプライマー:ACAAGAAGCCGGGAAACCTA(配列番号27)、リバースプライマー:CTCCTCCGGTCCTCCTTAAC(配列番号28))、及び約252塩基対の第二の分子マーカーであるRM17487(フォワードプライマー:CGGAGCATGTGGAGAGGAACTCG(配列番号55)、リバースプライマー:GGAGAGGGCAAGGGCTTCTTCG(配列番号56))を検出することによって同定される、請求項1に記載の方法。
- 穀物収量が改善された純系のイネを生産する方法であって、
a)請求項1に記載の方法に従って、穀物収量が改善されたイネを生産するステップ、
b)ステップa)で生産されるイネを、それ自身と又は他のイネと交雑して後代イネ種子を得るステップ、
c)ステップb)の後代イネ種子を成長させて穀物収量が改善されたさらなるイネを得るステップ、並びに
d)交雑及び成長ステップを0〜7回反復して穀物収量が改善された純系のイネを作成するステップ、
を含む、上記方法。 - ステップc)が、改善された穀物収量を示すイネを同定及び選択するステップをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- ホモ接合型の純系イネを選択するステップをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 穀物収量が改善されたイネを生産するための方法であって、
a)SPIKE遺伝子を含む第一のイネを提供するステップ、
b)SPIKE遺伝子をコードする核酸を、第一のイネから第二のイネへ移行させるステップ、
c)SPIKE遺伝子について第二のイネを分析するステップ、
d)SPIKE遺伝子を含み、移行前の第二のイネと比べて改善された穀物収量を示す第二のイネを同定及び選択するステップ、
を含む、上記方法。 - SPIKE遺伝子が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項12に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択される配列と少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項12に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、配列番号2と少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項12に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、RM5503、RM3423、及びInd4からなる群より選択される第一の上流分子マーカー、並びにRM6909、AGT3、RM17487、RM17486、及びInd12からなる群より選択される第二の下流分子マーカーを検出することにより同定される、請求項12に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、RM3423、及びInd4からなる群より選択される第一の上流分子マーカー、並びにAGT3、RM17487、RM17486、及びInd12からなる群より選択される第二の下流分子マーカーを検出することにより同定され、第一の上流及び第二の下流分子マーカーが、表1に記載された対応するフォワード及びリバースプライマーを用いて検出される、請求項12に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、約105塩基対の第一の分子マーカーであるInd2、及び約252塩基対の第二の分子マーカーであるRM17487を検出することによって同定される、請求項12に記載の方法。
- SPIKE遺伝子が、約105塩基対の第一の分子マーカーであるInd2(フォワードプライマー:ACAAGAAGCCGGGAAACCTA(配列番号27)、リバースプライマー:CTCCTCCGGTCCTCCTTAAC(配列番号28))、及び約252塩基対の第二の分子マーカーであるRM17487(フォワードプライマー:CGGAGCATGTGGAGAGGAACTCG(配列番号55)、リバースプライマー:GGAGAGGGCAAGGGCTTCTTCG(配列番号56))を検出することによって同定される、請求項12に記載の方法。
- 第一のイネから第二のイネへの核酸の移行が、SPIKE遺伝子を含む子孫植物を生産するための第一のイネと第二のイネとの交雑によって行われ、ステップc)及びd)が、一以上の子孫植物に対して行われる、請求項12に記載の方法。
- 第一のイネから第二のイネへの核酸の移行が、遺伝子組換え法によって、交雑によって、戻し交雑によって、原形質融合によって、倍化半数体技術によって、又は胚救出(embryo rescue)によって行われる、請求項12に記載の方法。
- 戻し交雑が、SPIKE遺伝子の遺伝子移入、及び少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも94%、少なくとも96%、又は少なくとも98%の第二のイネのゲノムの回復をもたらす、請求項12に記載の方法。
- 第二のイネのゲノムの回復が、92%〜97%である、請求項22に記載の方法。
- ステップd)が、第二のイネを、穀物収量を測定するためのバイオアッセイに供するステップをさらに含む、請求項12に記載の方法。
- 請求項12に記載の方法によって生産される穀物収量が改善されたイネ、又はその一部であって、SPIKE遺伝子を含み、SPIKE遺伝子がその天然の遺伝的背景に存在しない、上記イネ又はその一部。
- 第一のイネが、新植物タイプ(New Plant Type(NPT))品種YP9由来のイネの同質遺伝子系統から選択される、請求項12に記載の方法。
- 第一のイネが、イネ(Oryza sativa)亜種の熱帯ジャポニカから選択される、請求項12に記載の方法。
- 第一のイネがダリンガン(Daringan)である、請求項12に記載の方法。
- 第二のイネが、イネ(Oryza sativa)亜種のインディカから選択される、請求項12に記載の方法。
- 第二のイネが、PSBRc18、チヘラン(Ciherang)、TDK1、BR11、及びスワルナ(Swarna)からなる群より選択される、請求項29に記載の方法。
- a)少なくとも一つの植物プロモーター、及び
b)SPIKEタンパク質(配列番号3)の配列と少なくとも70%同一であるポリペプチド配列をコードする少なくとも一つのポリヌクレオチド、
を含む遺伝子組換え植物細胞であって、該プロモーター及びポリヌクレオチドが作動可能に連結されており、植物細胞の染色体DNAに組込まれている、上記遺伝子組換え植物細胞。 - 細胞のタイプが、イネ、コムギ、ソルガム、及びトウモロコシからなる群より選択される、請求項31に記載の遺伝子組換え植物細胞。
- 植物細胞が、SPIKE遺伝子についてホモ接合型である、請求項31に記載の遺伝子組換え植物細胞。
- 請求項31に記載の複数の細胞を含む、遺伝子組換え植物。
- a)少なくとも一つの植物プロモーター、及び
b)SPIKEの配列と少なくとも70%同一である少なくとも一つのポリヌクレオチド配列であって、該SPIKEのポリヌクレオチド配列が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択される配列を含む、上記ポリヌクレオチド配列、
を含む遺伝子組換え植物であって、該プロモーター及びポリヌクレオチドが作動可能に連結されており、植物細胞の染色体DNAに組込まれている、上記遺伝子組換え植物。 - 植物が、イネ、コムギ、ソルガム、及びトウモロコシからなる群より選択される、請求項35に記載の遺伝子組換え植物。
- 植物が、イネである、請求項36に記載の遺伝子組換え植物。
- ポリヌクレオチド配列が、SPIKEの配列と少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一である、請求項35に記載の遺伝子組換え植物。
- 植物が、SPIKE遺伝子についてホモ接合型である、請求項35に記載の遺伝子組換え植物。
- 請求項35に記載の植物の種子。
- 請求項35に記載の植物の、植物の一部。
- 前記植物が、対応する非遺伝子組換え植物に対して増加したm2あたり穀物収量、対応する非遺伝子組換え植物に対して増加した一穂あたり籾数、及び対応する非遺伝子組換え植物に対して増加した止葉幅からなる群より選択される表現型を示す、請求項35に記載の遺伝子組換え植物。
- 遺伝子組換え植物を選択するための方法であって、
a)増加した穀物収量について集団をスクリーニングするステップであって、集団中の植物が、その染色体DNAに組込まれた組換えDNAを有する少なくとも一つの遺伝子組換え植物細胞を含み、前記組換えDNAが、SPIKEの配列と少なくとも70%同一であるポリヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームに機能的に連結され植物細胞において機能的であるプロモーターを含み、少なくとも一つの遺伝子組換え植物細胞を含む前記集団の個々の植物が、少なくとも一つの遺伝子組換え植物細胞を含まない対照植物における穀物収量と同等以上の穀物収量を示す上記ステップ、及び
b)該集団から、少なくとも一つの遺伝子組換え植物細胞を含まない対照植物における穀物収量より高い穀物収量を示す一以上の植物を選択するステップ、
を含む、上記方法。 - ステップb)で選択された一以上の植物から種子を回収するステップをさらに含む、請求項43に記載の方法。
- a)前記組換えDNAが選択された植物に安定に組込まれることを確認するステップ、
b)SPIKEの配列と少なくとも70%同一であるポリヌクレオチド配列の発現を決定するために選択された植物の組織を分析するステップであって、該SPIKEのポリヌクレオチド配列が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択される配列を含む上記ステップ、
をさらに含む、請求項43に記載の方法。 - ポリヌクレオチド配列が、SPIKEの配列と少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%同一である、請求項43に記載の方法。
- 遺伝子組換え植物が、イネ、コムギ、ソルガム、及びトウモロコシからなる群より選択される、請求項43に記載の方法。
- 遺伝子組換え植物が、イネである、請求項47に記載の方法。
- 穀草において穀物収量を増加させる方法であって、
a)SPIKE遺伝子と対応するポリヌクレオチド配列を含む染色体DNAを含む穀草の第一の変種の植物を、SPIKE遺伝子と対応するポリヌクレオチド配列を含む染色体DNAを含まない穀草の第二の変種と交雑するステップであって、該SPIKE遺伝子と対応するポリヌクレオチド配列が、配列番号1、配列番号2、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、及び配列番号102からなる群より選択される配列を含む上記ステップ、
b)SPIKE遺伝子と対応するポリヌクレオチド配列を含む染色体DNAを有する一以上の後代植物を選択するステップ、
c)選択された後代植物を戻し交雑し、戻し交雑後代植物を生産するステップ、
d)SPIKE遺伝子と対応するポリヌクレオチド配列を含む染色体DNAを有する一以上の戻し交雑後代交配植物を選択するステップ、
e)ステップc)及びステップd)を一回以上反復し、SPIKE遺伝子と対応するポリヌクレオチド配列を含む染色体DNA、並びに穀草の第一の変種と交雑する前の穀草の第二の変種の生理学的及び形態学的特徴の全てを有する、第三の又はそれ以降の世代の戻し交雑後代植物を生産するステップ、
を含む、上記方法。 - 穀草が、イネ、コムギ、ソルガム、及びトウモロコシからなる群より選択される、請求項49に記載の方法。
- 穀草が、イネである、請求項49に記載の方法。
- 穀草の第一の変種が、新植物タイプ(New Plant Type(NPT))品種YP9由来のイネの同質遺伝子系統から選択される、請求項49に記載の方法。
- 穀草の第一の変種が、イネ(Oryza sativa)亜種の熱帯ジャポニカから選択される、請求項49に記載の方法。
- 穀草の第一の変種が、ダリンガン(Daringan)である、請求項53に記載の方法。
- 穀草の第二の変種が、イネ(Oryza sativa)亜種のインディカから選択される、請求項49に記載の方法。
- 穀草の第二の変種が、PSBRc18、チヘラン(Ciherang)、TDK1、BR11、及びスワルナ(Swarna)からなる群より選択される、請求項55に記載の方法。
- SPIKEに対応するポリヌクレオチド配列の検出が、遺伝子マーカーを用いて行われる、請求項49に記載の方法。
- SPIKE遺伝子に対応するポリヌクレオチド配列の検出が、RM5503、RM3423、及びInd4からなる群より選択される第一の上流分子マーカー、並びにRM6909、AGT3、RM17487、RM17486、及びInd12からなる群より選択される第二の下流分子マーカーを検出することを含む、請求項57に記載の方法。
- SPIKE遺伝子に対応するポリヌクレオチド配列の検出が、RM3423、及びInd4からなる群より選択される第一の上流分子マーカー、並びにAGT3、RM17487、RM17486、及びInd12からなる群より選択される第二の下流分子マーカーを検出することを含み、第一の上流及び第二の下流分子マーカーが、表1に記載された対応するフォワード及びリバースプライマーを用いて検出される、請求項57に記載の方法。
- SPIKE遺伝子に対応するポリヌクレオチド配列の検出が、約105塩基対の第一の分子マーカーであるInd2、及び約252塩基対の第二の分子マーカーであるRM17487を検出することを含む、請求項57に記載の方法。
- SPIKE遺伝子に対応するポリヌクレオチド配列の検出が、約105塩基対の第一の分子マーカーであるInd2(フォワードプライマー:ACAAGAAGCCGGGAAACCTA(配列番号27)、リバースプライマー:CTCCTCCGGTCCTCCTTAAC(配列番号28))、及び約252塩基対の第二の分子マーカーであるRM17487(フォワードプライマー:CGGAGCATGTGGAGAGGAACTCG(配列番号55)、リバースプライマー:GGAGAGGGCAAGGGCTTCTTCG(配列番号56))を検出することを含む、請求項57に記載の方法。
- 請求項40に記載の種子を栽培するステップを含む、穀草植物を栽培するための方法。
- 請求項41に記載の植物の一部を栽培するステップを含む、穀草植物を栽培するための方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361759408P | 2013-02-01 | 2013-02-01 | |
US61/759,408 | 2013-02-01 | ||
PCT/IB2014/000607 WO2014118636A2 (en) | 2013-02-01 | 2014-02-03 | Breeding methods for enhanced grain yield and related materials and methods |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016506731A true JP2016506731A (ja) | 2016-03-07 |
Family
ID=51263077
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015555823A Abandoned JP2016506731A (ja) | 2013-02-01 | 2014-02-03 | 穀物収量増強のための育種法並びに関連材料及び方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20150376638A1 (ja) |
JP (1) | JP2016506731A (ja) |
CN (1) | CN105283069A (ja) |
BR (1) | BR112015018370A2 (ja) |
PH (1) | PH12015501686A1 (ja) |
WO (1) | WO2014118636A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020516256A (ja) * | 2017-04-06 | 2020-06-11 | チャイナ アグリカルチュラル ユニバーシティ | タンパク質nog1の植物収量と一穂粒数の調節への応用 |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104871964B (zh) * | 2015-06-12 | 2016-11-02 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种提高野生稻与栽培稻远缘杂交胚挽救育种效率的方法 |
CN104871965B (zh) * | 2015-06-12 | 2016-10-19 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种利用野生稻同时培育粳稻和籼稻的方法 |
CN106893729B (zh) * | 2015-12-18 | 2020-12-11 | 中国种子集团有限公司 | 重组核酸片段RecCR033207及其检测方法 |
CN108191980B (zh) * | 2018-01-11 | 2020-08-25 | 中国农业科学院生物技术研究所 | C4水稻底盘受体材料的设计、创制与应用 |
CN108728567B (zh) * | 2018-04-16 | 2022-03-22 | 张家口市农业科学院 | 与谷子旗叶宽性状相关的snp标记及其检测引物和应用 |
CN109913574B (zh) * | 2019-04-08 | 2022-09-13 | 鲁东大学 | 与小麦旗叶宽度主效qtl紧密连锁的分子标记及应用 |
CN110951906A (zh) * | 2019-12-11 | 2020-04-03 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 高代回交分子轮回选择(mrsab)育种方法i--一种显性早穗不降产材料的培育及利用方法 |
CN114717350B (zh) * | 2021-01-05 | 2024-03-12 | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 | 水稻株型的分子标记及其应用 |
CN112852832A (zh) * | 2021-02-20 | 2021-05-28 | 浙江师范大学 | 水稻矮化多分蘖突变体dmt1及其应用 |
CN113981127B (zh) * | 2021-11-12 | 2023-06-23 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 与燕麦产量相关的分子标记及其应用 |
-
2014
- 2014-02-03 BR BR112015018370A patent/BR112015018370A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2014-02-03 WO PCT/IB2014/000607 patent/WO2014118636A2/en active Application Filing
- 2014-02-03 JP JP2015555823A patent/JP2016506731A/ja not_active Abandoned
- 2014-02-03 CN CN201480018617.4A patent/CN105283069A/zh active Pending
- 2014-02-03 US US14/765,339 patent/US20150376638A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-07-30 PH PH12015501686A patent/PH12015501686A1/en unknown
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020516256A (ja) * | 2017-04-06 | 2020-06-11 | チャイナ アグリカルチュラル ユニバーシティ | タンパク質nog1の植物収量と一穂粒数の調節への応用 |
JP7023979B2 (ja) | 2017-04-06 | 2022-02-22 | チャイナ アグリカルチュラル ユニバーシティ | タンパク質nog1の植物収量と一穂粒数の調節への応用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014118636A2 (en) | 2014-08-07 |
WO2014118636A3 (en) | 2015-03-05 |
US20150376638A1 (en) | 2015-12-31 |
PH12015501686A1 (en) | 2015-10-19 |
BR112015018370A2 (pt) | 2017-08-22 |
CN105283069A (zh) | 2016-01-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2016506731A (ja) | 穀物収量増強のための育種法並びに関連材料及び方法 | |
US11363768B2 (en) | Maize cytoplasmic male sterility (CMS) S-type restorer Rf3 gene, molecular markers and their use | |
EP4118215A2 (en) | Autoflowering markers | |
WO2016128898A1 (en) | Semi-dwarf drought tolerant rice and related methods and materials | |
US20170235875A1 (en) | QTL Responsible for Tomato Fruit Firmness | |
JP2017530719A (ja) | キュウリ植物における収量qtl | |
US20100319083A1 (en) | Method of producing plants having enhanced transpiration efficiency and plants produced therefrom | |
WO2015103136A1 (en) | Low chalk rice plants and related materials and methods | |
US10633668B2 (en) | Extending juvenility in grasses | |
JP5087349B2 (ja) | イネの低温発芽性に関する遺伝子とその利用 | |
CN113365494B (zh) | 能够发生种子败育型的果实形成的茄子科植物 | |
CA2968515C (en) | Vernalization independent lisianthus plants | |
CN116390646A (zh) | 单性结实西瓜植物 | |
WO2021213892A1 (en) | Solanum lycopersicum plants having improved tobamovirus resistance | |
CN116056566B (zh) | 具有改进的烟草花叶病毒抗性的番茄植物 | |
CN115884674B (zh) | 具有提高的蓟马抗性的辣椒植物 | |
US10858664B2 (en) | Modifying flowering time in maize | |
AU2013322709B2 (en) | Solanum lycopersicum plants having non-transgenic alterations in the ACS4 gene | |
US20230189732A1 (en) | Didymella bryoniae internal fruit rot resistance in cucumis sativus plants | |
NL2004624C2 (en) | A new glycosyltransferase protein and its role in the metabolism of phenylpropanoid volatiles in tomato. | |
WO2024094578A1 (en) | Melon plants producing seedless fruit | |
WO2023020938A1 (en) | Lettuce plant having delayed bolting | |
US20230340620A1 (en) | Molecular markers for reduced pyruvate level trait in allium cepa | |
Jakkula | Fine mapping d2, a gene that controls plant height in pearl millet |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170131 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20170501 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20170509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170501 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170509 |
|
A762 | Written abandonment of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A762 Effective date: 20180201 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180201 |