JP2016114357A - Abo式血液型ウラ検査装置及び光学的abo式血液型ウラ検査法 - Google Patents
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Abstract
【課題】高い熟練度が求められることなく、簡便な操作によって抗原抗体反応の有無を判定することができ、且つ、高いS/N比を有するABO式血液型ウラ検査装置、及び、このABO式血液型ウラ検査装置を用いた光学的ABO式血液型ウラ検査方法を提供する。
【解決手段】導波路層6を有するチップ2と、チップ2の第一面2aに形成された抗原固定面10と、固定端20aが抗原固定面10に固定されると共に開放端20bが開放された抗原20であって、抗A抗体PA又は抗B抗体PBと抗原抗体反応を起こす抗原20と、チップ2に入射し、チップ2から出射された光の強度の波長分布に基づいて抗原20において抗原抗体反応が生じているか否かを判定する判定部40と、を備えている。
【選択図】図1
【解決手段】導波路層6を有するチップ2と、チップ2の第一面2aに形成された抗原固定面10と、固定端20aが抗原固定面10に固定されると共に開放端20bが開放された抗原20であって、抗A抗体PA又は抗B抗体PBと抗原抗体反応を起こす抗原20と、チップ2に入射し、チップ2から出射された光の強度の波長分布に基づいて抗原20において抗原抗体反応が生じているか否かを判定する判定部40と、を備えている。
【選択図】図1
Description
本発明は、ABO式血液型ウラ検査装置及び光学的ABO式血液型ウラ検査法に関する。
一般に、ABO式血液型(以下、単に血液型という)の判定をする際には、所謂オモテ検査及びウラ検査と呼ばれる二つの検査が行われる。
オモテ検査は、赤血球表面上の抗原を調べる検査である。オモテ検査では、判定対象の血液中の赤血球に、A型或いはAB型と反応する抗A抗体と、B型或いはAB型と反応する抗B抗体とを個別に加えて、赤血球が凝集する(即ち、赤血球が塊を作る)か、否かを目視で判定する。抗A抗体のみで凝集が見られた場合はA型、抗B抗体のみで凝集が見られた場合はB型、何れの抗体とも凝集が見られた場合はAB型、何れの抗体でも凝集が見られない場合はO型と判定される。
オモテ検査は、赤血球表面上の抗原を調べる検査である。オモテ検査では、判定対象の血液中の赤血球に、A型或いはAB型と反応する抗A抗体と、B型或いはAB型と反応する抗B抗体とを個別に加えて、赤血球が凝集する(即ち、赤血球が塊を作る)か、否かを目視で判定する。抗A抗体のみで凝集が見られた場合はA型、抗B抗体のみで凝集が見られた場合はB型、何れの抗体とも凝集が見られた場合はAB型、何れの抗体でも凝集が見られない場合はO型と判定される。
一方、ウラ検査は、血清又は血漿中の抗A抗体と抗B抗体を調べる検査である。ウラ検査では、判定対象の血液中の血清又は血漿(以下では、これらのうち血漿を用いる場合を例示して説明する)に血液型判定用のA型赤血球(A抗原)とB型赤血球(B抗原)を個別に加えて、これらの赤血球が凝集するか、否かを目視で判定する。通常、A型の人の血中には抗B抗体が存在し、B型の人の血中には抗A抗体が存在し、O型の人の血中には抗A抗体と抗B抗体の両方が存在する。AB型の人の血中には抗A抗体や抗B抗体は存在しない。従って、B型赤血球のみで凝集が見られた場合はA型、A型赤血球のみで凝集が見られた場合はB型、何れの赤血球とも凝集が見られた場合はO型、何れの赤血球でも凝集が見られない場合はAB型と判定される。
上記のABO式血液型の決定には、上記のオモテ検査とウラ検査の検査結果が一致することが重要である。検査結果が一致しない場合には様々な原因が考えられるため、血液型の判定は保留して精査される。従って、血液型の円滑な決定には、迅速かつ正確なオモテ検査法とウラ検査法と、これらの検査法に用いる高感度な検査装置が求められる。
オモテ検査のように判定対象の試料を抗体に接触させ、抗原抗体反応により試料中の抗原の有無を検知する検査装置が種々検討されている。例えば、特許文献1には、抗体を含むコアの領域がクラッドに設けられた開口部を介して外部に露出している光導波路型バイオセンサ及び該センサを備えたバイオセンサシステムが開示されている。この光導波路型バイオセンサにおいて、マッハツェンダー型のコアに入射された光は、伝搬方向の途中で二つのコアを伝搬する光に分岐され、一方のコアを伝搬する光が開口部に接し、その後、再び一つに集約され、その際に二つのコアを伝搬してきた光が干渉する。従って、開口部への抗原の接触前後に、二つのコアを伝搬してきた光が干渉したときの干渉光の強度変化を検出することで、抗原抗体反応の発生の有無、即ち試料中の抗原の有無を高感度で検知することができる。
上記説明した血液型のウラ検査の方法は、従来、遠心分離等により得られた血漿を判定対象とし、試薬として供給されるA型赤血球やB型赤血球の浮遊液と用手混合し、赤血球の凝集が起こるか否かをスライドガラス上にて、又は試験管等のガラス管内にて目視で判定する方法が一般的であった。
上記一般的な方法では、血漿と赤血球浮遊液の撹拌の際の手技が血液型の判定結果に影響を及ぼす。また、赤血球の凝集は、凝集塊の大きさが試料毎に異なる等、複雑な態様を示す。判定者はこのような赤血球の凝集を目視で主観的に見ている。従って、血液型の判定には高い熟練度が求められるという問題があった。
上記一般的な方法では、血漿と赤血球浮遊液の撹拌の際の手技が血液型の判定結果に影響を及ぼす。また、赤血球の凝集は、凝集塊の大きさが試料毎に異なる等、複雑な態様を示す。判定者はこのような赤血球の凝集を目視で主観的に見ている。従って、血液型の判定には高い熟練度が求められるという問題があった。
しかしながら、血液型のウラ検査を正確に実施可能とする小型な装置等は未だ提案されていない。
比較的大型の自動分析機器等により、広く知られているエライザ法で抗原抗体反応の有無を検出する方法がある。この従来の方法で抗体を検出する場合は抗原をプラスチック等の固体表面に固定し、抗体を含む溶液(試料)を加えて、固体表面をよく洗ってから、二次抗体(例えば、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトイムノグロブリン抗体)を加える。再度、固体表面をよく洗い、基質を加えて酵素反応を起こさせると、その酵素反応の程度によって、判定対象の抗原を定量することができる。但し、従来の方法では、酵素等で標識した二次抗体や酵素反応基質等の試薬が必要であり、少なくとも二度の洗浄を要する等、簡便な操作では抗原抗体反応の有無を判定できないという問題があった。仮にこの方法論をABO式血液型ウラ検査に導入しても同様である。
また、血漿には多量のタンパク質が含まれており、このタンパク質が固体表面や赤血球に吸着する等して、非常に大きな非特異的反応や非特異的凝集が生じる場合がある。従って、例え上記特許文献1に開示されている光導波路型バイオセンサの抗体を抗原に替えて、ウラ検査に適用しても、抗原抗体反応の有無の検出の際の非特異反応の除去手段を有していなければ、シグナル/ノイズ比(以下、S/N比と記載する)を高くすることができないという問題があった。
本発明は、上記事情を鑑みてなされたものであり、高い熟練度が求められることなく、簡便な操作によって抗原抗体反応の有無を判定することができ、且つ、高いS/N比を有するABO式血液型ウラ検査装置、及び、このABO式血液型ウラ検査装置を用いた光学的ABO式血液型ウラ検査方法を提供する。
本発明に係るABO式血液型ウラ検査装置は、導波路層を有するチップと、前記チップの表面に形成された抗原固定面と、一端が前記抗原固定面に固定されると共に他端が開放された抗原であって、抗A抗体又は抗B抗体と抗原抗体反応を起こす抗原と、前記チップに入射し、前記チップから出射された光の強度の波長分布に基づいて前記抗原において抗原抗体反応が生じているか否かを判定する判定部と、を備えていることを特徴とする。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、抗原の一端が化学的結合によって抗原固定面、即ちチップの表面に固定されると共に、抗原がチップの表面から突出し、抗原の他端がチップ表面から所定の長さだけ離れて、全面にわたり向きをそろえて配置される。従って、予め、チップに入射し、チップから出射された光の強度の波長分布(以下、導波モードスペクトル分布という)の判定部への取り込みが開始された状態で、抗A抗体又は抗B抗体を含む可能性がある試料(以下、単に試料という)が抗原に適量接触すれば、少量の試料であっても抗A抗体又は抗B抗体と抗原との抗原抗体反応が生じる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化が高いS/N比で検出される。そして、検出された情報が判定部で解析されることで、抗原における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定可能となる。このようにして、高い熟練度が求められることなく、簡便な操作でABO式血液型ウラ検査が実施可能となる。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、抗原の一端が化学的結合によって抗原固定面、即ちチップの表面に固定されると共に、抗原がチップの表面から突出し、抗原の他端がチップ表面から所定の長さだけ離れて、全面にわたり向きをそろえて配置される。従って、予め、チップに入射し、チップから出射された光の強度の波長分布(以下、導波モードスペクトル分布という)の判定部への取り込みが開始された状態で、抗A抗体又は抗B抗体を含む可能性がある試料(以下、単に試料という)が抗原に適量接触すれば、少量の試料であっても抗A抗体又は抗B抗体と抗原との抗原抗体反応が生じる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化が高いS/N比で検出される。そして、検出された情報が判定部で解析されることで、抗原における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定可能となる。このようにして、高い熟練度が求められることなく、簡便な操作でABO式血液型ウラ検査が実施可能となる。
本発明に係るABO式血液型ウラ検査装置では、前記抗原固定面は前記抗A抗体及び前記抗B抗体以外の物質との非特異反応を低減し得ることを特徴とする。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、抗原固定面における抗A抗体及び抗B抗体以外の物質と抗原との非特異反応が低減される。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化がより一層高いS/N比で検出される。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、抗原固定面における抗A抗体及び抗B抗体以外の物質と抗原との非特異反応が低減される。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化がより一層高いS/N比で検出される。
本発明に係るABO式血液型ウラ検査装置では、前記抗原の前記他端に抗A抗体に特異的に認識される抗A抗体認識物質(抗A抗体エピトープ)、又は、抗B抗体に特異的に認識される抗B抗体認識物質(抗B抗体エピトープ)が配置された抗原であることを特徴とする。
ここで、「抗A抗体に特異的に認識される」とは、抗A抗体と抗B抗体とを、さらには他の抗原に反応する抗体を見分けて抗A抗体のみと結合することを示す。抗B抗体についても同様である。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、チップ表面から抗原の長さだけ離れて、全面に抗A抗体認識物質又は抗B抗体認識物質が配置される。この構成により、チップに試料を滴下法等で接触させた際に、試料中の抗A抗体又は抗B抗体が速やかに効率よく、抗A抗体認識物質又は抗B抗体認識物質を認識して、これらに特異的に結合し、抗原抗体反応が起きる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布の変化が特異的に結合する手段を有していない場合より高いS/N比で検出される。また、糖鎖抗原を用いることで、抗原の長さを調整し易くなると共に、容易に合成することができる。
ここで、「抗A抗体に特異的に認識される」とは、抗A抗体と抗B抗体とを、さらには他の抗原に反応する抗体を見分けて抗A抗体のみと結合することを示す。抗B抗体についても同様である。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、チップ表面から抗原の長さだけ離れて、全面に抗A抗体認識物質又は抗B抗体認識物質が配置される。この構成により、チップに試料を滴下法等で接触させた際に、試料中の抗A抗体又は抗B抗体が速やかに効率よく、抗A抗体認識物質又は抗B抗体認識物質を認識して、これらに特異的に結合し、抗原抗体反応が起きる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布の変化が特異的に結合する手段を有していない場合より高いS/N比で検出される。また、糖鎖抗原を用いることで、抗原の長さを調整し易くなると共に、容易に合成することができる。
また、本発明に係るABO式血液型ウラ検査装置では、前記抗A抗体認識物質は下記化学式(1)で表される物質であり、前記抗B抗体認識物質は下記化学式(2)で表される物質であることを特徴とする。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、抗原の先端に、赤血球膜上に存在する糖鎖と同様の抗A抗体認識物質又は抗B抗体認識物質が設けられる。従って、試料中の抗A抗体又は抗B抗体は速やかに効率よく、抗A抗体認識物質又は抗B抗体認識物質を認識する。
また、本発明に係るABO式血液型ウラ検査装置では、前記チップはシリカを含み、前記抗原固定面はヒドロキシスクシンイミドエステル−ドデカン二酸−トリエトキシシラン化合物(C12Es)とメトキシトリエチレングリコール−トリエトキシシラン化合物(M3EG)から構成され、前記抗原の前記一端にはアミノ基が配置されていることを特徴とする。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、活性なシラン化合物であるC12Es及び不活性なシラン化合物であるM3EGとシリカとの化学結合により、抗原固定面が導波路層の開放側の面に形成される。また、抗原の一端に配置されたアミノ基とシラン化合物C12Esとの共有結合により、抗原の一端が抗原固定面に強く固定される。一方、M3EGは無関係な物質(例えば血漿中の抗A抗体、抗B抗体以外のタンパク質)の抗原固定面への結合を妨げる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化が高いS/N比で、且つ安定して再現性良く検出される。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、活性なシラン化合物であるC12Es及び不活性なシラン化合物であるM3EGとシリカとの化学結合により、抗原固定面が導波路層の開放側の面に形成される。また、抗原の一端に配置されたアミノ基とシラン化合物C12Esとの共有結合により、抗原の一端が抗原固定面に強く固定される。一方、M3EGは無関係な物質(例えば血漿中の抗A抗体、抗B抗体以外のタンパク質)の抗原固定面への結合を妨げる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化が高いS/N比で、且つ安定して再現性良く検出される。
また、本発明に係るABO式血液型ウラ検査装置では、前記チップは、平板状の反射層と、該反射層の第一板面に接する前記導波路層と、前記反射層の第一板面の裏面側の第二板面に接する基板と、を備え、前記チップの前記表面には、前記導波路層において前記反射層の第一板面に接する面の裏面側の第三板面とされていることを特徴とする。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、チップの導波路層の第三板面上に抗原固定面が設けられ、該抗原固定面に抗原の一端が固定されると共に、抗原の他端が開放されている。この構成では、抗原抗体反応の有無を判定するための導波モードスペクトル分布として、例えば導波路層の第三板面上にチップの外方から入射し、反射層、及び導波路層の第三板面上で反射してチップから出射された光の強度の波長分布を取得し、抗原抗体反応の有無の判定に用いることができる。
そして、前述のように、判定者は予め、導波モードスペクトル分布の判定部への取り込みを開始した状態で、試料を抗原に適量接触させればよい。これにより、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化が高いS/N比で検出される。そして、検出された情報を判定部において解析することで、抗原における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定することができる。
上記ABO式血液型ウラ検査装置によれば、チップの導波路層の第三板面上に抗原固定面が設けられ、該抗原固定面に抗原の一端が固定されると共に、抗原の他端が開放されている。この構成では、抗原抗体反応の有無を判定するための導波モードスペクトル分布として、例えば導波路層の第三板面上にチップの外方から入射し、反射層、及び導波路層の第三板面上で反射してチップから出射された光の強度の波長分布を取得し、抗原抗体反応の有無の判定に用いることができる。
そして、前述のように、判定者は予め、導波モードスペクトル分布の判定部への取り込みを開始した状態で、試料を抗原に適量接触させればよい。これにより、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化が高いS/N比で検出される。そして、検出された情報を判定部において解析することで、抗原における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定することができる。
本発明に係る光学的ABO式血液型ウラ検査法では、導波路層を有するチップと、前記チップの表面に形成された抗原固定面と、一端が前記抗原固定面に固定されると共に他端が開放された抗原であって、抗A抗体又は抗B抗体と抗原抗体反応を起こす抗原と、を備えた装置を用い、前記チップに光を入射させる入射ステップと、前記チップから出射された光の強度の波長分布に基づいて前記抗原において抗原抗体反応が生じているか否かを判定する判定ステップと、を備えていることを特徴とする。
上記光学的ABO式血液型ウラ検査法において、判定者は入射ステップを行い、上記チップの導波モードスペクトル分布の取り込みを開始する。次いで、試料を抗原に適量接触させてから、判定ステップを行う。判定ステップでは、前述のように抗A抗体又は抗B抗体と抗原との抗原抗体反応は起きるが、抗A抗体又は抗B抗体以外の物質と抗原との非特異反応は低減される。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化を高いS/N比で検出することができる。このようにして、高い熟練度が求められることなく、略自動的に、簡便な操作で、抗原における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定することができ、ABO式血液型ウラ検査を光学的に実施することができる。
上記光学的ABO式血液型ウラ検査法において、判定者は入射ステップを行い、上記チップの導波モードスペクトル分布の取り込みを開始する。次いで、試料を抗原に適量接触させてから、判定ステップを行う。判定ステップでは、前述のように抗A抗体又は抗B抗体と抗原との抗原抗体反応は起きるが、抗A抗体又は抗B抗体以外の物質と抗原との非特異反応は低減される。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化を高いS/N比で検出することができる。このようにして、高い熟練度が求められることなく、略自動的に、簡便な操作で、抗原における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定することができ、ABO式血液型ウラ検査を光学的に実施することができる。
本発明によれば、高い熟練度が求められることなく、簡便な操作によって抗原抗体反応の有無を判定することができ、且つ、高いS/N比を有するABO式血液型ウラ検査装置、及び、このABO式血液型ウラ検査装置を用いた光学的ABO式血液型ウラ検査方法が提供される。
以下、本発明を適用した一実施形態(以下、単に「本実施形態」という)であるABO式血液型ウラ検査装置及び光学的ABO式血液型ウラ検査法について、図面を参照して説明する。なお、以下の説明で用いる図面は模式的なものであり、長さ、幅、及び厚みの比率等は実際のものと同一とは限らず、適宜変更することができる。
図1は本実施形態のABO式血液型ウラ検査装置1を示す側面図である。
図1に示すように、ABO式血液型ウラ検査装置1は、チップ2と、抗原固定面10と、プリズム16と、抗原20と、光源部30と、判定部40と、を備えている。抗原20の固定端20aは抗原固定面10に固定されている。抗原20の開放端20bは流路60側にて何れの構成要素にも固定されずに開放されている。固定端20aを一端としたとき、開放端20bが他端である。また、抗原20は、糖鎖抗原20Aと、糖鎖抗原20Bとを含む。
図1に示すように、ABO式血液型ウラ検査装置1は、チップ2と、抗原固定面10と、プリズム16と、抗原20と、光源部30と、判定部40と、を備えている。抗原20の固定端20aは抗原固定面10に固定されている。抗原20の開放端20bは流路60側にて何れの構成要素にも固定されずに開放されている。固定端20aを一端としたとき、開放端20bが他端である。また、抗原20は、糖鎖抗原20Aと、糖鎖抗原20Bとを含む。
チップ2は、平板状の反射層4と、反射層4の第一板面4aに接する導波路層6と、反射層4の第一板面4aの裏面側の第二板面4bに接する基板8と、を備えている。
反射層4と導波路層6及び基板8は主成分としてシリカ(SiO2)を含んで構成されている。例えば、反射層4はシリコンから形成され、導波路層6及び基板8は純粋なSiO2から形成されている。
反射層4と導波路層6及び基板8の幅寸法及び厚み寸法は、チップ2に伝搬させる光の波長帯及び導波モードの種類を考慮して設定されている。
プリズム16は、チップ2の第二面2bに接して設けられている。プリズム16の厚み方向(即ち、矢印D1方向)から角度θだけ傾いて入射した光はチップ2に導光され、反射及び屈折してプリズム16の外方に出射される。
プリズム16は、チップ2の第二面2bに接して設けられている。プリズム16の厚み方向(即ち、矢印D1方向)から角度θだけ傾いて入射した光はチップ2に導光され、反射及び屈折してプリズム16の外方に出射される。
抗原固定面10は、抗原20をチップ2の第一面2a(表面)に固定するための活性分子と、非特異的な分子の結合を妨げる不活性分子とによって形成される表面であり、チップ2の第一面2aに所定の厚さで形成されている。本実施形態において、チップ2の第一面2aは導波路層6において反射層4の第一板面4aに接する面6bの裏面側の第三板面6aとされている。
抗原固定面10によれば、抗A抗体PA及び抗B抗体PB以外の試料中の物質(例えばタンパク質、脂質等)との非特異反応が低減される。
抗原固定面10によれば、抗A抗体PA及び抗B抗体PB以外の試料中の物質(例えばタンパク質、脂質等)との非特異反応が低減される。
本実施形態では、抗原固定面10は、下記化学式(3)で表されるヒドロキシスクシンイミドエステル−ドデカン二酸−トリエトキシシラン化合物(C12Es)と、下記化学式(4)で表されるメトキシトリエチレングリコール−トリエトキシシラン化合物(M3EG)を含んで構成されている。C12Es及びM3EGは導波路層6を構成するSiO2と化学結合するため、上記構成により抗原固定面10が導波路層6の開放側の面(即ち試料と反応する側の面)に形成される。また、抗原固定面10のM3EGは非特異吸着抑制分子として機能するため、抗原固定面10における非特異反応の発生が抑制される。また、抗原固定面10のC12Esは抗原20の固定端20aに配置されたアミノ基と共有結合するため、抗原20の固定端20aが抗原固定面10に強く固定される。
上記化学式(3)に示すように、C12Esはアミノ基を持つ化合物と反応する活性基を有するシラン化合物である。これに対し、上記化学式(4)に示すように、M3EGは不活性なシラン化合物である。C12EsとM3EGとのモル比が適切に(例えば1:10に)設定されることで、抗原固定面10に結合する抗原20の量が最適化され、効率よく抗A抗体PAあるいは抗B抗体PBとの抗原抗体反応を惹起する。これらによりABO式血液型ウラ検査装置1における血液型判定の特異性と検出感度がより高められる。
抗原20は、抗A抗体PA及び抗B抗体PBの少なくとも一方を含む可能性のある試料に接触した際に、抗A抗体PA及び抗B抗体PBと特異的に結合する糖鎖抗原である。
抗原20は、開放端20bに抗A抗体PAが認識して特異的に結合する抗A抗体認識物質RAが配置された糖鎖抗原20Aと、開放端20bに抗B抗体PBに特異的に認識される抗B抗体認識物質RBが配置された糖鎖抗原20Bから構成されている。抗A抗体認識物質RA及び抗B抗体認識物質RBはそれぞれ、対応する抗A抗体PA及び抗B抗体PBのそれぞれが認識して特異的に結合する物質である。
なお、以下では、糖鎖抗原20A,20Bを区別しない場合には抗原20と記載し、糖鎖抗原20Aと糖鎖抗原20Bとを区別する場合には糖鎖抗原20A,20Bと記載する。
なお、以下では、糖鎖抗原20A,20Bを区別しない場合には抗原20と記載し、糖鎖抗原20Aと糖鎖抗原20Bとを区別する場合には糖鎖抗原20A,20Bと記載する。
抗原20の固定端20a(即ち、紙面の右端)にはアミノ基が配置されている。糖鎖抗原20Aの開放端20b(即ち、紙面の左端)には、抗A抗体認識物質RAとして下記化学式(5)に示すN−アセチルガラクトコサミン(GalNAc)、ガラクトース(Gal)、フコース(Fuc)が配置されている。糖鎖抗原20Bの開放端20bには、抗B抗体認識物質RBとして下記化学式(6)に示すガラクトース(Gal)、ガラクトース(Gal)とフコース(Fuc)が配置されている。下記化学式(5),(6)からわかるように、抗A抗体認識物質RAと抗B抗体認識物質RBとの差異は、式中の二重丸で囲まれた部分である。即ち、抗A抗体認識物質RAの先端部はGalNAcであるのに対し、抗B抗体認識物質RBの先端部はGalである。
上記化学式(5),(6)の構成を有する糖鎖抗原20A,20Bとして、本実施形態では下記化学式(7),(8)に示す糖鎖抗原を用いる。但し、下記化学式(7),(8)に示す糖鎖抗原は上記化学式(5),(6)の構成を有する糖鎖抗原20A,20Bの一例であり、糖鎖抗原20A,20Bは下記化学式(7),(8)に示す糖鎖抗原に限定されない。
前述のように、固定端20aに配置されたアミノ基は、抗原固定面10に含まれるC12Esと共有結合する。従って、抗原20の固定端20aは、抗原固定面10に安定的に結合している。
これに対し、糖鎖抗原20Aの開放端20bに配置されたGalNAc及び糖鎖抗原20Aの開放端20bに配置されたGalは、抗原固定面10のC12Es及びM3EGの何れとも結合せず、チップ2から開放されている。このように、糖鎖抗原20A,20Bはチップ2の第一面2aから突出して配置されている。また、糖鎖抗原20A,20Bの開放端20bに配置された抗A抗体認識物質RA及び抗B抗体認識物質RBは、第一面2aから、糖鎖抗原20A,20Bの長さに相当する距離だけ離れて全面的に配置されている。
上記構成において、抗A抗体認識物質RAは、抗原20に血漿等の試料が接触した際に、試料中に抗A抗体PA及び抗B抗体PBが存在していれば、抗A抗体PAと抗B抗体PBとを見分けて、抗A抗体のみと特異的に結合する。また、抗B抗体認識物質RBは、同様の試料が接触した際に、抗A抗体PAと抗B抗体PBとを見分けて、抗B抗体PBのみと特異的に結合する。
なお、生理的な抗A抗体認識物質RAとしては、上記化学式(5)に示すN−アセチルガラクトコサミン(GalNAc)、ガラクトース(Gal)、フコース(Fuc)の構造を分子の一端に含むスフィンゴ糖脂質や糖タンパク質が挙げられる。また、生理的な抗B抗体認識物質RBとしては、上記化学式(6)に示すガラクトース(Gal)、ガラクトース(Gal)とフコース(Fuc)構造を分子の一端に含むスフィンゴ糖脂質や糖タンパク質が挙げられる。これらは、上記化学式(5)ないし(6)の糖鎖残基部分の構造が保たれていれば他の部分(化学式(5)、(6)におけるR)の構造は任意である。
これに対し、糖鎖抗原20Aの開放端20bに配置されたGalNAc及び糖鎖抗原20Aの開放端20bに配置されたGalは、抗原固定面10のC12Es及びM3EGの何れとも結合せず、チップ2から開放されている。このように、糖鎖抗原20A,20Bはチップ2の第一面2aから突出して配置されている。また、糖鎖抗原20A,20Bの開放端20bに配置された抗A抗体認識物質RA及び抗B抗体認識物質RBは、第一面2aから、糖鎖抗原20A,20Bの長さに相当する距離だけ離れて全面的に配置されている。
上記構成において、抗A抗体認識物質RAは、抗原20に血漿等の試料が接触した際に、試料中に抗A抗体PA及び抗B抗体PBが存在していれば、抗A抗体PAと抗B抗体PBとを見分けて、抗A抗体のみと特異的に結合する。また、抗B抗体認識物質RBは、同様の試料が接触した際に、抗A抗体PAと抗B抗体PBとを見分けて、抗B抗体PBのみと特異的に結合する。
なお、生理的な抗A抗体認識物質RAとしては、上記化学式(5)に示すN−アセチルガラクトコサミン(GalNAc)、ガラクトース(Gal)、フコース(Fuc)の構造を分子の一端に含むスフィンゴ糖脂質や糖タンパク質が挙げられる。また、生理的な抗B抗体認識物質RBとしては、上記化学式(6)に示すガラクトース(Gal)、ガラクトース(Gal)とフコース(Fuc)構造を分子の一端に含むスフィンゴ糖脂質や糖タンパク質が挙げられる。これらは、上記化学式(5)ないし(6)の糖鎖残基部分の構造が保たれていれば他の部分(化学式(5)、(6)におけるR)の構造は任意である。
チップ2の第一面2aには、糖鎖抗原20A,20Bの少なくとも一方が配置されていてもよく、両方が配置されていてもよい。ABO式血液型判定のウラ検査においては、血漿等の試料に抗A抗体PAと抗B抗体PBの両方が含まれている場合(即ち、判定対象者の血液型がO型の場合)がある。このような場合であっても、抗A抗体PA及び抗B抗体PBのそれぞれが抗B抗体認識物質RB及び抗B抗体認識物質RBのそれぞれを認識して特異的に結合可能とするため、チップ2の第一面2aを二以上の区域に区画し、各区域に糖鎖抗原20A,20Bが個別に固定されていてもよい。
上記化学式(7),(8)に示すように、抗原20の固定端20aの抗A抗体認識物質RA又は抗B抗体認識物質RBと開放端20bのアミノ基との間には、中間部が介在している。この中間部は、酸素(O)、メチレン基(CH2)が所定の長さで化学結合又はペプチド結合(CONH)したものである。「所定の長さ」により抗原20の長さが決まるが、これらの長さは特に限定されない。なお、抗A抗体認識物質RA及び抗B抗体認識物質RBがチップ2の第一面2aから抗原20の長さだけ離れることを勘案して、上記化学式(7),(8)において、例えばnを8程度としてもよい。
光源部30は、チップ2に光を照射するための構成である。本実施形態では、光源部30として、例えば波長300nm〜800nmの可視光を出射可能な白色光源や白色LEDを用いることができる。
判定部40は、チップ2に入射し、チップ2から出射された導波モードスペクトル分布に基づいて抗原20において抗原抗体反応が生じているか否かを判定するものであり、導波モードスペクトル分布を検出するフォトディテクタ等の検出部(図示略)と導波モードスペクトル分布の変化を解析するコンピュータ(図示略)と、を備えている。
[光学的ABO式血液型ウラ検査法の手順]
次いで、ABO式血液型ウラ検査装置1を用いた光学的ABO式血液型ウラ検査法について図1及び図2を参照し、説明する。
本実施形態の光学的ABO式血液型ウラ検査法は、初期状態と、入射ステップと、洗浄ステップと、判定ステップと、を備えている。
次いで、ABO式血液型ウラ検査装置1を用いた光学的ABO式血液型ウラ検査法について図1及び図2を参照し、説明する。
本実施形態の光学的ABO式血液型ウラ検査法は、初期状態と、入射ステップと、洗浄ステップと、判定ステップと、を備えている。
(初期状態)
先ず、抗原20の上にリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を約50μL接触させた流路60側の状態を初期状態とする。
先ず、抗原20の上にリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を約50μL接触させた流路60側の状態を初期状態とする。
(入射ステップ)
次に、図1に示すように、光源部30から所定の波長の光を矢印D1方向に対して角度θでプリズム16に入射させる。この際、チップ2の光の伝搬条件を考慮して、光源部30とプリズム16との間に偏光板等(図示略)を配置する。プリズム16によって屈折し、チップ2に導かれた光は、反射層4、導波路層6、基板8、抗原固定面10によって反射する。なお、図1には前記反射される光のうち、抗原固定面10によって反射される光を図示している。
また、本ステップによれば、チップ2に光が入射されると、導波路層6の内部に光が板面方向(矢印D2方向)に伝搬する。一方、チップ2及び抗原固定面10で反射された光はプリズム16により屈折し、判定部40に向かう。
次に、判定部40の検出部は、抗原20に試料を接触させる前に上記初期状態におけるチップ2から出射された光の導波モードスペクトル分布を検出する。
次に、図1に示すように、光源部30から所定の波長の光を矢印D1方向に対して角度θでプリズム16に入射させる。この際、チップ2の光の伝搬条件を考慮して、光源部30とプリズム16との間に偏光板等(図示略)を配置する。プリズム16によって屈折し、チップ2に導かれた光は、反射層4、導波路層6、基板8、抗原固定面10によって反射する。なお、図1には前記反射される光のうち、抗原固定面10によって反射される光を図示している。
また、本ステップによれば、チップ2に光が入射されると、導波路層6の内部に光が板面方向(矢印D2方向)に伝搬する。一方、チップ2及び抗原固定面10で反射された光はプリズム16により屈折し、判定部40に向かう。
次に、判定部40の検出部は、抗原20に試料を接触させる前に上記初期状態におけるチップ2から出射された光の導波モードスペクトル分布を検出する。
(判定ステップ)
次に、抗原20の上のPBSを除去し、試料を接触させる。接触時間は、例えば約5分間ないし10分間とされる。この工程により、例えば、試料に抗A抗体PAが含まれていれば、試料を糖鎖抗原20Aに接触させた後、抗A抗体PAが抗原20のうち糖鎖抗原20Aの抗A抗体認識物質RAと特異的に結合する。同様に、試料に抗B抗体PBが含まれていれば、抗B抗体PBが抗原20の抗B抗体認識物質RBと特異的に結合する。
次に、抗原20の上のPBSを除去し、試料を接触させる。接触時間は、例えば約5分間ないし10分間とされる。この工程により、例えば、試料に抗A抗体PAが含まれていれば、試料を糖鎖抗原20Aに接触させた後、抗A抗体PAが抗原20のうち糖鎖抗原20Aの抗A抗体認識物質RAと特異的に結合する。同様に、試料に抗B抗体PBが含まれていれば、抗B抗体PBが抗原20の抗B抗体認識物質RBと特異的に結合する。
(洗浄ステップ)
その後、抗原20や抗原固定面10に接触させていた試料を一端除去して、抗原20をPBSで三回洗浄する。この工程により、抗A抗体PAや抗B抗体PBは抗A抗体認識物質RA,RBと特異的に結合した状態を保持し、抗A抗体PA及び抗B抗体PB以外の試料中の物質は除去される。
その後、抗原20や抗原固定面10に接触させていた試料を一端除去して、抗原20をPBSで三回洗浄する。この工程により、抗A抗体PAや抗B抗体PBは抗A抗体認識物質RA,RBと特異的に結合した状態を保持し、抗A抗体PA及び抗B抗体PB以外の試料中の物質は除去される。
次に、再びPBSを接触させ、チップ2から出射された光の導波モードスペクトル分布を再度検出する。
図2は、チップ2から出射された光の導波モードスペクトル分布の一例を示すグラフである。ABO式血液型ウラ検査装置1は、チップ2から出射された光の強度を測定する。本実施形態の一例ではこの光の強度を反射率として測定する。
抗A抗体PA及び抗B抗体PBの少なくとも一方が抗原20に結合していれば、上記結合の状態に応じて、図2に示すように、試料を抗原20に接触させる前の導波モードスペクトル分布Xが波長方向(即ち、図2に示す黒矢印の方向)に変化するか、反射率方向(即ち、図2に示す白矢印の方向)に変化し、導波モードスペクトル分布Y,Zが得られる。この導波モードスペクトル分布の変化量を判定部40のコンピュータで解析することで、試料の血液型を判定することができる。この際、導波モードスペクトル分布Xが波長方向に変化する場合には、変化量の閾値を例えば1.5nmとし、変化量が1.5nmより大きければ、抗原20における抗原抗体反応が発生していると判定することができる。但し、この閾値は1.5nmに限定されず、予め血液サンプル等の試料による試験等の結果を勘案して設定されていることが好ましい。
図2は、チップ2から出射された光の導波モードスペクトル分布の一例を示すグラフである。ABO式血液型ウラ検査装置1は、チップ2から出射された光の強度を測定する。本実施形態の一例ではこの光の強度を反射率として測定する。
抗A抗体PA及び抗B抗体PBの少なくとも一方が抗原20に結合していれば、上記結合の状態に応じて、図2に示すように、試料を抗原20に接触させる前の導波モードスペクトル分布Xが波長方向(即ち、図2に示す黒矢印の方向)に変化するか、反射率方向(即ち、図2に示す白矢印の方向)に変化し、導波モードスペクトル分布Y,Zが得られる。この導波モードスペクトル分布の変化量を判定部40のコンピュータで解析することで、試料の血液型を判定することができる。この際、導波モードスペクトル分布Xが波長方向に変化する場合には、変化量の閾値を例えば1.5nmとし、変化量が1.5nmより大きければ、抗原20における抗原抗体反応が発生していると判定することができる。但し、この閾値は1.5nmに限定されず、予め血液サンプル等の試料による試験等の結果を勘案して設定されていることが好ましい。
上記説明したように、本実施形態のABO式血液型ウラ検査装置1及び光学的ABO式血液型ウラ検査法によれば、抗原20の固定端20aが抗原固定面10によってチップ2の表面に固定されると共に、抗原の開放端20bがチップ2の第一面2aから所定の長さだけ離れて、向きがそろった状態で全面にわたり配置される。従って、予め、チップ2に入射し、チップ2から出射された光の導波モードスペクトル分布の判定部40への取り込みを開始した状態で、試料を抗原20に適量接触させれば、少量の試料であっても抗A抗体PA又は抗B抗体PBと抗原20との抗原抗体反応が生じる。従って、抗原抗体反応の発生前後における導波モードスペクトル分布のディップ値やディップ波長等の変化を高いS/N比で正確に検出することができる。そして、検出された情報を判定部40で解析することで、抗原20における抗原抗体反応の有無を迅速且つ正確に判定することができる。このようにして、高い熟練度が求められることなく、簡便な操作でABO式血液型ウラ検査が実施可能となる。
[変形例]
以上、本発明の好ましい実施形態について詳述したが、本発明は係る特定の実施形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲内に記載された本発明の要旨の範囲内において、種々の変形・変更が可能である。
以上、本発明の好ましい実施形態について詳述したが、本発明は係る特定の実施形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲内に記載された本発明の要旨の範囲内において、種々の変形・変更が可能である。
例えば、図3に示すように、ABO式血液型ウラ検査装置1は、チップ2と、複数の光源部30と、光路52,54,64,66と、コリメータレンズアレイ56,62と、偏光板58及び判定部40と、を一体的に備えたABO式血液型ウラ検査装置1´とされてもよい。この構成により、マイクロ流路68に接する抗原20(図示略)として、チップ2に選択的に糖鎖抗原20A,20B、或いはその他の抗原・抗体等(図示略)を配置し、マイクロ流路68に導入した試料を接触させれば、複数種類の血液検査が同時に実施可能とされる。
次いで、上述した本発明の実施形態のABO式血液型ウラ検査装置1の効果を裏付けるために行った実施例について説明する。なお、本発明は以下の実施例にのみ限定されるものではない。
図1に示すABO式血液型ウラ検査装置1と、光源部30として300nm〜800nmの可視光を出射可能な可視光源とを用意した。糖鎖抗原20A,20Bには、前記化学式(7),(8)に示す糖鎖抗原を用いた。
先ず、ABO式血液型ウラ検査装置1の抗原20にPBSを接触させ、初期状態における導波モードスペクトル分布を測定した。その後、PBSを除去し抗原20に血液型がA型の被験者の血漿を約50μL接触させた。そして、抗原20をPBSで三回洗浄し、再度PBSを接触させて導波モードスペクトル分布を測定した。
先ず、ABO式血液型ウラ検査装置1の抗原20にPBSを接触させ、初期状態における導波モードスペクトル分布を測定した。その後、PBSを除去し抗原20に血液型がA型の被験者の血漿を約50μL接触させた。そして、抗原20をPBSで三回洗浄し、再度PBSを接触させて導波モードスペクトル分布を測定した。
図4は、A型被験者の血漿を抗原20に接触させる前、即ち抗原20をPBS中の初期状態(実線)と、血漿を抗原20に接触させて抗原20をPBSで洗浄した後(破線)に検出した導波モードスペクトル分布を示すグラフである。図4(a)は抗原20を糖鎖抗原20Aとした場合の結果であり、図4(b)は抗原20を糖鎖抗原20Bとした場合の結果である。上述したように、血漿中に抗A抗体PAが含まれている場合は、抗A抗体PAが糖鎖抗原20Aの抗A抗体認識物質RAを認識して特異的に結合する。一方、血漿中に抗B抗体PBが含まれている場合は、抗B抗体PBが糖鎖抗原20Bの抗B抗体認識物質RBを認識して特異的に結合する。
図4(a)に示すように、A型被験者の血漿には抗B抗体PBのみが含まれているため、抗原20として糖鎖抗原20Aを配置した場合では、抗原抗体反応は殆ど起きず、導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約1.5nmであった。一方、図4(b)に示すように、抗原20として糖鎖抗原20Bを配置した場合では、糖鎖抗原20Bの開放端20bの抗B抗体認識物質RBと血漿中の抗B抗体PBが結合して抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約8nmであった。
次に、ABO式血液型ウラ検査装置1に血液型がB型の被験者の血漿を約50μL接触させた。
図5は、初期状態(実線)と血漿を抗原20に接触させて抗原20をPBSで洗浄した後(破線)に検出した導波モードスペクトル分布を示すグラフであって、図5(a)は抗原20を糖鎖抗原20Aとした場合の結果であり、図5(b)は抗原20を糖鎖抗原20Bとした場合の結果である。
図5(a)に示すように、B型被験者の血漿には抗A抗体PAのみが含まれているため、抗原20として糖鎖抗原20Aを配置した場合では、糖鎖抗原20Aの開放端20bの抗A抗体認識物質RAと血漿中の抗A抗体PAが結合して、抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約5nmであった。一方、図5(b)に示すように、抗原20として糖鎖抗原20Bを配置した場合では、抗原抗体反応は殆ど起きず、導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約1.5nmであった。
図5は、初期状態(実線)と血漿を抗原20に接触させて抗原20をPBSで洗浄した後(破線)に検出した導波モードスペクトル分布を示すグラフであって、図5(a)は抗原20を糖鎖抗原20Aとした場合の結果であり、図5(b)は抗原20を糖鎖抗原20Bとした場合の結果である。
図5(a)に示すように、B型被験者の血漿には抗A抗体PAのみが含まれているため、抗原20として糖鎖抗原20Aを配置した場合では、糖鎖抗原20Aの開放端20bの抗A抗体認識物質RAと血漿中の抗A抗体PAが結合して、抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約5nmであった。一方、図5(b)に示すように、抗原20として糖鎖抗原20Bを配置した場合では、抗原抗体反応は殆ど起きず、導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約1.5nmであった。
次に、ABO式血液型ウラ検査装置1に血液型がO型の被験者の血漿を約50μL接触させた。
図6は、初期状態(実線)と血漿を抗原20に接触させて抗原20をPBSで洗浄した後(破線)に検出した導波モードスペクトル分布を示すグラフであって、図6(a)は抗原20を糖鎖抗原20Aとした場合の結果であり、図6(b)は抗原20を糖鎖抗原20Bとした場合の結果である。
図6(a)に示すように、O型被験者の血漿には抗A抗体PAと抗B抗体PBの両方が含まれているため、抗原20として糖鎖抗原20Aを配置した場合に、糖鎖抗原20Aの開放端20bの抗A抗体認識物質RAと血漿中の抗A抗体PAが結合して、抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約6nmであった。また、図6(b)に示すように、抗原20として糖鎖抗原20Bを配置した場合でも、糖鎖抗原20Bの開放端20bの抗B抗体認識物質RBと血漿中の抗B抗体PBが結合して、抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約5nmであった。
図6は、初期状態(実線)と血漿を抗原20に接触させて抗原20をPBSで洗浄した後(破線)に検出した導波モードスペクトル分布を示すグラフであって、図6(a)は抗原20を糖鎖抗原20Aとした場合の結果であり、図6(b)は抗原20を糖鎖抗原20Bとした場合の結果である。
図6(a)に示すように、O型被験者の血漿には抗A抗体PAと抗B抗体PBの両方が含まれているため、抗原20として糖鎖抗原20Aを配置した場合に、糖鎖抗原20Aの開放端20bの抗A抗体認識物質RAと血漿中の抗A抗体PAが結合して、抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約6nmであった。また、図6(b)に示すように、抗原20として糖鎖抗原20Bを配置した場合でも、糖鎖抗原20Bの開放端20bの抗B抗体認識物質RBと血漿中の抗B抗体PBが結合して、抗原抗体反応が生じた。導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量は約5nmであった。
以上説明したA型、B型、O型の被験者の血漿を試料としてABO式血液型ウラ検査装置1の抗原20に接触させた結果、導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量の閾値を1.5nmに設定し、導波モードスペクトル分布のディップの波長変化量が1.5nm以下であれば抗原抗体反応なし(即ち、陰性)、1.5nmより大きければ抗原抗体反応あり(即ち、陽性)とすると、何れの血液型においても正しい判定結果が得られた。このように、ABO式血液型ウラ検査装置1によれば、高い熟練度が求められることなく、簡便な操作でABO式血液型ウラ検査が実施可能となることを確認した。
1…ABO式血液型ウラ検査装置、2…チップ、6…導波路層、8…基板、10…抗原固定面、20…抗原、20A,20B…糖鎖抗原、PA…抗A抗体、PB…抗B抗体、RA…抗A抗体認識物質、RB…抗B抗体認識物質
Claims (7)
- 導波路層を有するチップと、
前記チップの表面に形成された抗原固定面と、
一端が前記抗原固定面に固定されると共に他端が開放された抗原であって、抗A抗体又は抗B抗体と抗原抗体反応を起こす抗原と、
前記チップに入射し、前記チップから出射された光の強度の波長分布に基づいて前記抗原において抗原抗体反応が生じているか否かを判定する判定部と、を備えていることを特徴とするABO式血液型ウラ検査装置。 - 前記抗原固定面は前記抗A抗体及び前記抗B抗体以外の物質との非特異反応を低減し得ることを特徴とする請求項1に記載のABO式血液型ウラ検査装置。
- 前記抗原は前記他端に抗A抗体に特異的に結合する抗A抗体認識物質、又は、抗B抗体に特異的に結合する抗B抗体認識物質が配置された抗原であることを特徴とする請求項1又は2に記載のABO式血液型ウラ検査装置。
- 前記チップはシリカを含み、
前記抗原固定面はヒドロキシスクシンイミドエステル−ドデカン二酸−トリエトキシシラン化合物とメトキシトリエチレングリコール−トリエトキシシラン化合物から構成され、
前記抗原の前記一端にはアミノ基が配置されていることを特徴とする請求項1から4の何れか一項に記載のABO式血液型ウラ検査装置。 - 前記チップは、
平板状の反射層と、
該反射層の第一板面に接する前記導波路層と、
前記反射層の第一板面の裏面側の第二板面に接する基板と、を備え、
前記チップの前記表面は、前記導波路層において前記反射層の第一板面に接する面の裏面側の第三板面とされていることを特徴とする請求項1から5の何れか一項に記載のABO式血液型ウラ検査装置。 - 導波路層を有するチップと、
前記チップの表面に形成された抗原固定面と、
一端が前記抗原固定面に固定されると共に他端が開放された抗原であって、抗A抗体又は抗B抗体と抗原抗体反応を起こす抗原と、
を備えた装置を用い、
前記チップに光を入射させる入射ステップと、
前記チップから出射された光の強度の波長分布に基づいて前記抗原において抗原抗体反応が生じているか否かを判定する判定ステップと、
を備えていることを特徴とする光学的ABO式血液型ウラ検査法。
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