JP2016113377A - インターフェロンλ産生促進剤、該インターフェロンλ産生促進剤を用いた飲食品、インターフェロンλの製造方法、及びインターフェロンλ産生促進作用を有する物質のスクリーニング方法 - Google Patents
インターフェロンλ産生促進剤、該インターフェロンλ産生促進剤を用いた飲食品、インターフェロンλの製造方法、及びインターフェロンλ産生促進作用を有する物質のスクリーニング方法 Download PDFInfo
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Abstract
Description
免疫反応時において、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進する、
インターフェロンλ産生促進剤を提供する。
本技術に用いるラクトフェリンとしては、金属飽和型、金属部分飽和型、アポ型からなる群より選択される1種又は2種以上の混合物を用いることができる。
本技術に係るインターフェロンλ産生促進剤は、飲食品に含有させることも可能である。
前記細胞に、自然免疫誘導物質を導入する導入工程と、
を含む、インターフェロンλの製造方法を提供する。
本技術に用いる前記細胞としては、腸管上皮細胞を用いることができる。
本技術に用いる前記自然免疫誘導物質としては、ポリI:C又はその誘導体を用いることができる。
本技術に係る製造方法において、前記導入工程と前記処理工程の順番は特に限定されないが、前記処理工程を行った後に、前記導入工程を行うことが可能である。
インターフェロンλ発現能を有する細胞を、被検物質で処理する処理工程と、
前記細胞に、自然免疫誘導物質を導入する導入工程と、
前記細胞において産生されたインターフェロンλの産生量を測定する測定工程と、
を含む、スクリーニング方法を提供する。
(1)ラクトフェリン
有効成分であるラクトフェリンは、乳、涙、唾液、血液等に存在する鉄結合性の糖蛋白質である。ラクトフェリンは、特に哺乳動物、例えば、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトの乳に含まれる。含有量、入手容易の点から、例えば、ウシ、ヒト等の乳が好ましい。乳は、初乳、移行乳、常乳、末期乳のいずれでもよい。
本技術の有効成分であるラクトフェリンは、後述する実施例で示す通り、非免疫反応時においてはインターフェロンλ産生促進作用を有さない。しかし、免疫反応時においては、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλ産生を促進させることが可能である。そのため、非免疫反応時において、不必要にインターフェロンλを産生させることなく、免疫反応時においてのみ、インターフェロンλ産生を促進させることができるため、インターフェロンλによる副作用の発現等の悪影響を低減させることができる。
本技術に係るインターフェロンλ産生促進剤の有効成分であるラクトフェリンは、腸管からの吸収性に優れ、かつ、前述の通り免疫反応時において、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλ産生を促進させる効果を有する。そのため、インターフェロンλ産生促進用の医薬品として用いることができる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
上述した通り、本技術に係るインターフェロンλ産生促進剤の有効成分であるラクトフェリンは、腸管からの吸収性に優れ、かつ、前述の通り免疫反応時において、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλ産生促進を促進させる効果を有する。そのため、インターフェロン−λ産生促進用の飲食品等の有効成分としてこれらに配合して使用することができる。
即席食品類としては、例えば、即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等が挙げられる。
農産加工品としては、例えば、農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル(穀物加工品)等が挙げられる。
水産加工品としては、例えば、水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等が挙げられる。
畜産加工品としては、例えば、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等が挙げられる。
乳・乳製品としては、例えば、加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等が挙げられる。
油脂類としては、例えば、バター、マーガリン類、植物油等が挙げられる。
基礎調味料としては、例えば、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等が挙げられ、前記複合調味料・食品類として、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等が挙げられる。
冷凍食品としては、例えば、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等が挙げられる。
菓子類としては、例えば、キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子等が挙げられる。
飲料類としては、例えば、炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等が挙げられる。
上記以外の市販食品としては、例えば、ベビーフード、ふりかけ、お茶潰けのり等が挙げられる。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。
本技術で有効成分として用いるラクトフェリンは、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進させる効果があるため、自然免疫誘導物質を用いたインターフェロンλの製造方法に、好適に用いることができる。
処理工程Iは、インターフェロンλ発現能を有する細胞を、ラクトフェリンで処理する工程である。処理工程Iにおいて、インターフェロンλ発現能を有する細胞のラクトフェリンを用いた処理方法は特に限定されず、公知の方法を自由に選択して用いることができる。例えば、インターフェロンλ発現能を有する細胞を含む培地中に、ラクトフェリンを添加し、所定時間、処理を行う方法等が挙げられる。
導入工程IIは、インターフェロンλ発現能を有する細胞に、自然免疫誘導物質を導入する工程である。導入工程IIにおいて、インターフェロンλ発現能を有する細胞への自然免疫誘導物質の導入方法は特に限定されず、公知の方法を自由に選択して用いることができる。例えば、インターフェロンλ発現能を有する細胞を含む培地中に、自然免疫誘導物質を添加し、所定時間、処理を行う方法等が挙げられる。
細胞培養工程IIIは、インターフェロンλ発現能を有する細胞を培養する工程である。本技術に係る製造方法では、前記導入工程I及び前記処理工程IIの前に、必要に応じて、細胞培養工程IIIを行うことも可能である。
回収工程IVは、発現されたインターフェロンλを回収する工程である。本技術に係る製造方法では、前記導入工程I及び前記処理工程IIの後に、必要に応じて、回収工程IVを行うことも可能である。
本技術では、前述した通り、ラクトフェリンに、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進させる効果があることを初めて見出しているが、ラクトフェリンの部分を被検物質とすることで、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進させる効果のある物質をスクリーニングする技術に応用することができる。即ち、本技術を応用することにより、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進させる効果のある物質をスクリーニングすることができる。
処理工程Iは、インターフェロンλ発現能を有する細胞を、被検物質で処理する工程である。なお、処理工程Iの詳細は、前述した製造方法の処理工程Iで行う前記細胞のラクトフェリンでの処理方法と同一であるため、ここでは説明を割愛する。
測定工程Vは、インターフェロンλ発現能を有する細胞において産生されたインターフェロンλの産生量を測定する工程である。測定工程Vにおけるインターフェロンλの産生量の測定方法は、特に限定されず、公知の測定方法を自由に選択して用いることができる。例えば、ELISA法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)等を採用することができる。
判定工程VIは、前記測定工程Vで測定されたインターフェロンλの産生量に基づいて、前記被検物質が、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進する作用を有するか否かを判定する工程である。より具体的には、例えば、前記測定工程Vにおいて測定されたインターフェロンλの産生量が、しきい値以上又はしきい値を超える場合には、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進する作用ありと判定し、しきい値未満又はしきい値以下の場合には、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進する作用なしと判定することができる。
本実施例では、ラクトフェリンのインターフェロンλ産生促進作用について検討を行った。
(1)培養
HT−29細胞(ATCC(American Type Culture Collection)から購入)を、75cm2フラスコで、10%FCS、100unit/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシンを添加したMaCoy’s5a培地(Gibco社製)を用いて継代培養した。80%コンフルエントの細胞にトリプシン:EDTAを加え、細胞を回収し、培地で1:3となるように希釈し、48ウェルプレートに播種して2日間培養した(95%コンフルエント)。
a.試験例1
前記培養を行った後、48ウェルプレートから培地を除去し、10%FCS及び抗生物質無添加培地で1回洗浄した後、10%FCS及び抗生物質無添加培地176μLを添加した。さらに、0.2mg/mLのウシ・ラクトフェリン(森永乳業株式会社製)を添加し、培地合計300μLで細胞を処理し、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンを添加する代わりに、終濃度0.1μg/mLのポリI:C(Invivogen社製、HMW、アニーリンング済み)、及び、1μL/ウェルのリポフェクタミン溶液(登録商標、LifeTechnologies社製)を、常法により、混合インキュベートした後に添加した以外は、試験例1と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンを添加し、1時間処理後に試験例2と同様の方法でポリI:C及びリポフェクタミンを添加した以外は、試験例1と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリン、試験例2と同様の方法でポリI:C及びリポフェクタミンを全て同時に添加した以外は、試験例1と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
試験例2と同様の方法でポリI:C及びリポフェクタミンを添加し、1時間処理後にラクトフェリンを添加した以外は、試験例1と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンを添加せずに、試験例1と同様の方法で細胞処理を行った例を、コントロールとした。
前記試験例1〜5及びコントロールについて、培地上清サンプル中のインターフェロンλ1(IL−29)の濃度を、ELISAキット(Affymetrix社製)を用いて測定した。
結果を下記表1に示す。表1に示す通り、ラクトフェリンのみを用いた試験例1では、コントロールと同等のインターフェロンλしか産生しないことが分かった。一方、自然免疫誘導物質であるポリI:C及び遺伝子導入試薬であるリポフェクタミンを用いた試験例2では、コントロールに比べて、多くのインターフェロンλを産生することが分かった。
本実施例では、ラクトフェリンの濃度の違いによるインターフェロンλ産生促進作用について検討を行った。
(1)培養
実験例1と同様の方法で培養を行った。
a.試験例6
ラクトフェリンの添加量を0.002mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンの添加量を0.006mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンの添加量を0.02mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンの添加量を0.06mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンの添加量を0.2mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンの添加量を0.6mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンの添加量を2mg/mLとした以外は、試験例3と同様の方法で細胞処理を行い、24時間後に培地上清を回収した。
ラクトフェリンを添加せずに、試験例2と同様の方法で細胞処理を行った例を、コントロールとした。
前記試験例6〜12及びコントロールについて、培地上清サンプル中のインターフェロンλ1(IL−29)の濃度を、ELISAキット(Affymetrix社製)を用いて測定した。
結果を下記表2に示す。表2に示す通り、インターフェロンλ産生量は、ラクトフェリンの濃度に依存することが分かった。また、ラクトフェリンの添加量が0.002mg/mLの場合でも、コントロールに比べると、インターフェロンλ産生量が増加することが分かった。
Claims (8)
- ラクトフェリンを有効成分とし、
免疫反応時において、自然免疫誘導物質によるインターフェロンλの産生を促進する、
インターフェロンλ産生促進剤。 - ラクトフェリンが、金属飽和型、金属部分飽和型、アポ型からなる群より選択される1種又は2種以上の混合物である、請求項1に記載のインターフェロンλ産生促進剤。
- 請求項1又は2に記載のインターフェロンλ産生促進剤を含有してなる飲食品。
- インターフェロンλ発現能を有する細胞を、ラクトフェリンで処理する処理工程と、
前記細胞に、自然免疫誘導物質を導入する導入工程と、
を含む、インターフェロンλの製造方法。 - 前記細胞は、腸管上皮細胞である、請求項4に記載の製造方法。
- 前記自然免疫誘導物質は、ポリI:C又はその誘導体である、請求項4又は5に記載の製造方法。
- 前記処理工程を行った後に、前記導入工程を行う、請求項4から6のいずれか一項に記載の製造方法。
- インターフェロンλの産生を促進する作用を有する物質のスクリーニング方法であって、
インターフェロンλ発現能を有する細胞を、被検物質で処理する処理工程と、
前記細胞に、自然免疫誘導物質を導入する導入工程と、
前記細胞において産生されたインターフェロンλの産生量を測定する測定工程と、
を含む、スクリーニング方法。
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