JP5022060B2 - インターロイキン−10産生促進剤 - Google Patents
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Description
前記課題を解決する本発明の第二の発明は、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するインターロイキン−10産生促進用食品添加剤である。
前記課題を解決する本発明の第三の発明は、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するインターロイキン−10産生促進用の飼料である。
(1)ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するインターロイキン−10産生促進剤。
(2)ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するインターロイキン−10産生促進用食品添加剤。
(3)ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するインターロイキン−10産生促進用の飼料。
(4)有効成分としてのラクトパーオキシダーゼ、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、インターロイキン−10産生促進剤。
(5)ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するインターロイキン−10産生促進用の機能性飲食品。
(6)(1)若しくは(4)に記載のインターロイキン−10産生促進剤、(2)に記載のインターロイキン−10産生促進用食品添加剤、(3)に記載のインターロイキン−10産生促進用の飼料、又は(5)に記載のインターロイキン−10産生促進用の機能性飲食品を製造するためのラクトパーオキシダーゼの使用(use)。
(7)(1)又は(4)に記載のインターロイキン−10産生促進剤を投与することにより、ほ乳類のインターロイキン−10産生を促進する方法(method)。
(1)インターロイキン−10産生を効果的に促進することが可能であり、エンドトキシンショックなどの予防及び/又は治療効果を有する。
(2)乳などの原料から安価で大量に製造することができる。
(3)ヒト及び動物に対する安全性が高く、安心して長期間にわたり日常的に摂取することができる。
(4)インターロイキン−10産生促進効果を有する食品添加剤を提供することができる。
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
本試験は、免疫担当細胞の一つであるヒト単球系細胞によるインターロイキン−10産生に対するラクトパーオキシダーゼの効果を調べるために行った。
前記特許文献3に記載の方法で精製したウシラクトパーオキシダーゼを試験物質とした。この試験物質を、10%ウシ胎児血清(インビトロジェン社製)を添加したRPMI1640培地(インビトロジェン社製)に0.625mg/mlの濃度に溶解後、フィルター除菌した。さらに、試験物質を0.0625及び0.00625mg/mlの濃度となるように、上記培地で10及び100倍に希釈した。
a)THP−1細胞の調製
ヒト単球系細胞THP−1細胞(大日本製薬社から購入)を上記10%ウシ胎児血清を添加したRPMI1640培地で培養し、3.0×106細胞/mlになるように調製した。
6穴の細胞培養用プレート(BD社製)の各ウェルに上記の細胞密度に調製したTHP−1細胞を1mlずつ添加した。次に、試験物質終濃度0.5、0.05、0.005、又は0mg/mlとなるように、試験物質をそれぞれ0.625、0.0625、0.00625、又は0mg/ml濃度で溶解した培地を4mlづつ添加し、各ウェルの培養液の全量を5mlとした。その後、5%CO2インキュベーター内で37℃、3時間培養した。
上記の培養細胞から常法によりトータルRNAを抽出し、リアルタイムRT−PCRによりインターロイキン−10遺伝子の発現量を測定した。同様の方法によって、細胞や組織中での発現量が一定しているハウスキーピング遺伝子であるβ−アクチン遺伝子の発現量も測定した。インターロイキン−10遺伝子発現量は、β−アクチン遺伝子発現量で割った値(インターロイキン−10/β−アクチン)として求めた。実験は3回ずつ行い、それらの平均値を算出した。試験物質無添加の0mg/mlでのインターロイキン−10/β−アクチンの平均を1とし、試験物質添加時の平均値と比較した。
統計解析にはt検定を行い、危険率5%未満(p<0.05)で有意差ありと判定した。
本試験の結果を表1に示す。試験物質は、用量依存的にインターロイキン−10遺伝子発現量を上昇させ、0.5mg/ml以上の濃度においては特に効果的であった。この結果から、ラクトパーオキシダーゼは効果的に単球系細胞のインターロイキン−10遺伝子発現を亢進することが明らかになった。
本試験は、ラクトパーオキシダーゼによる生体内におけるインターロイキン−10産生促進効果を調べるために行った。経口投与したラクトパーオキシダーゼの影響を最初に受けると考えられる消化管における効果を調べた。
試験例1の方法と同様で精製したラクトパーオキシダーゼを12.5質量%の濃度になるように精製水に溶解し、試験試料を調製した。この場合の対照物質として、妥当と考えられる他のタンパク質であるウシ血清アルブミン(シグマ社)を12.5質量%の濃度になるように精製水に溶解して対照試料を調製した。
7週齢のCBA/J雌性マウス(日本チャールス・リバー社より購入)を使用した。
a)試料の投与
合計12匹の上記マウスを、糞食防止ネットを設置したケージに入れ、ラボMRストック(日本農産工業社製)と飲水で一週間馴化飼育した。次に、前記マウスを6匹ずつ2群に分けた。対照群には対照試料0.5mlをゾンデで1日1回、4日間連日経口投与し、試験群には試験試料0.5mlをゾンデで1日1回、4日間連日経口投与した。
4日間の投与が終了した2群のマウスは、その翌日に麻酔下で解剖し、大腸を摘出した。大腸中部からトータルRNAを抽出し、試験例1と類似の方法でインターロイキン−10遺伝子発現量の解析を行った。
統計解析にはt検定を行い、危険率5%未満(p<0.05)で有意差ありと判定した。
本試験の結果を表2に示す。試験群では、対照群と比べてインターロイキン−10遺伝子発現量が有意に高かった。この結果から、ラクトパーオキシダーゼは生体内においてもインターロイキン−10遺伝子発現を亢進することが明らかになった。
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- ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有するエンドトキシンショックの予防及び/又は治療のためのインターロイキン−10産生促進剤。
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