JP2016041060A - ヒト細胞の単離のためのマウス細胞のディプリーション - Google Patents
ヒト細胞の単離のためのマウス細胞のディプリーション Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016041060A JP2016041060A JP2015159850A JP2015159850A JP2016041060A JP 2016041060 A JP2016041060 A JP 2016041060A JP 2015159850 A JP2015159850 A JP 2015159850A JP 2015159850 A JP2015159850 A JP 2015159850A JP 2016041060 A JP2016041060 A JP 2016041060A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- mouse
- cell
- human
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0081—Purging biological preparations of unwanted cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
a)前記異種移植片を細分化して、単細胞の懸濁液を含む試料とし、
b)前記試料を、検出手段に結合された、マウスCD9エピトープに特異的な抗体にさらし、
c)前記試料を、前記CD9抗体によって結合された細胞から前記検出手段を使用してディプリーションし、
d)前記CD9抗体によって結合されていない細胞を目的細胞として回収する
ことを特徴とする前記方法である。
用語「本質的に単細胞」とは、組織が孤立した単細胞に解離されていることを意味する。完全に自動化された様式での解離または細分化は、例えばヒーターを備えたgentle MACS(商標)Octo Dissociatorおよびそれぞれの組織解離キット(例えばエピトープ保全のために最適なTumor Dissociation Kit humanのようなキット)を使用することによって可能である(両者ともMiltenyi Biotec GmbH社から入手できる)。
目的組織を、BL6マウスとCD1マウスから取り出し、それらを、プールし、そしてヒーターを備えたgentleMACS(商標)Octo Dissociatorとエピトープ保全に最適化された各々の組織解離キットとを使用することによって完全に自動的に解離させた。フローサイトメトリー解析のために、細胞を製造元の指示に従って指定の抗体で染色し、そしてMACSQuant(商標)Analyzer(Miltenyi Biotec GmbH)を使用して解析した。マウスのCD45とMHCクラスIエピトープを認識する抗体の公知の組み合わせを用いると、解析された全ての解離された組織において赤血球細胞の解離後でさえも、図1の左から1番目の皮膚組織(A)と肺組織(B)を示す欄に示されるように、マウス細胞のたった1つのサブセットだけしか検出できなかった。
全ての器官からの全てのマウス細胞の完全な検出のために、図4と図5のプロットC)によって示されるように、CD45、CD31、CD51およびTer119に特異的な抗体を、CD9抗体と組み合わせて使用した。これらの4種の抗体とCD45に特異的な抗体およびMHCクラスIに特異的な抗体との組み合わせは、図4と図5のプロットD)によって示されるように効果的ではない。図4と図5のプロットE)は、CD45を認識する抗体、CD31を認識する抗体、CD51を認識する抗体、Ter119を認識する抗体およびCD9を認識する抗体(「抗マウス」で一致する)の組み合わせが、マウス細胞の検出のために、CD45およびMHCクラスI抗体の組み合わせよりもかなり効果的であることを指摘している。更に、CD9単独でさえも、CD45およびMHCクラスI抗体の組み合わせよりも既に効果的である。
ヒト膠芽細胞腫細胞を、解離されたマウス脳のために単離した。図6Aに示されるように、異種移植片からのマウス細胞の間接的な磁気的ディプリーションのためには、CD45およびMHCクラスIの特異抗体の組み合わせ(左上と左下のドットプロット)は不十分であるが、一方で、殆ど全てのマウス細胞はCD45、CD31、CD51、Ter119およびCD9を認識する抗体の組み合わせ(右上と右下のドットプロット「MCDK」)を使用することで取り除かれる。図6Bは、CD9抗体では、マウス生細胞のディプリーションの次に、死細胞と残渣を試料から取り除くことができることを示しているが、それはCD45/MHCをディプリーションのために使用した場合には認められない。
比較例の手順を、CD45およびMHCクラスIのエピトープの代わりに、マウスCD9を認識する抗体を使用して繰り返した。
抗マウスCD9抗体、抗マウスCD45抗体、抗マウスCD51抗体、抗マウスCD31抗体および抗マウスTer119抗体と、超常磁性ナノ粒子(マイクロビーズ)のコンジュゲートを、マイクロビーズ上への抗体結合の技術分野で公知のようにして作製する。各々の抗体を個別のマイクロビーズへと結合させ、こうして得られたコンジュゲートを混ぜることによってそのカクテルを調製した。
比較例3に記載したのと同じ手順を使用したが、それとは異なり、マイクロビーズに結合されたCD9抗体の利用はより効果的であるものの、高度に純粋なヒト腫瘍細胞分画をもたらさなかった。図6Aと図6Bを参照のこと。驚くべきことに、CD9抗体を使用することによって、死細胞と残渣は、細胞サイズ対細胞粒度を示すプロットにより示されるように効果的に除去できる。本発明のコンジュゲートカクテルを使用すると、コンタミネーションしているマウス細胞の99%超と残渣の60%超を排除することができた。この効果は、ディプリーションのためにCD45およびMHC Iを使用した場合には認められない。
1. マウス宿主でのヒト細胞の異種移植片から宿主細胞をディプリーションする方法であって、
a)前記異種移植片を細分化して、単細胞の懸濁液を含む試料とし、
b)前記試料を、検出手段に結合された、マウスCD9エピトープに特異的な抗体にさらし、
c)前記細胞懸濁液を、前記CD9抗体によって結合された細胞から前記検出手段を使用してディプリーションし、
d)前記CD9抗体によって結合されていない細胞を目的細胞として回収する
ことを特徴とする前記方法。
2. 1に記載の方法であって、ステップa)、ステップb)またはステップc)の少なくとも1つにおいて得られる細胞懸濁液を、更に、それぞれ検出手段に結合されたCD45、CD51、CD31、CD24、EpCAM、Sca1、CD81、CD44、CD11b、CD95、H2Kk、H2Kd、CD171、CD90.1、CD90.2およびTer119からなる群から選択される1つ以上のマウスエピトープに特異的な抗体にさらすことと、前記細胞懸濁液を、更に前記検出手段を使用してこれらの抗体に結合された細胞をディプリーションすることと、を特徴とする方法。
3. 1から3までのいずれかに記載の方法であって、ステップb)において、前記細胞懸濁液を、マウスエピトープCD9、CD45、CD51、CD31およびTer119に特異的な抗体にさらすことを特徴とする方法。
4. 1から4までのいずれかに記載の方法であって、前記抗体の検出手段が、磁性粒子、蛍光色素または固体担体からなる群から選択されることを特徴とする方法。
5. 1から4までのいずれかに記載の方法であって、ステップc)のディプリーションが、磁気的分離、パニングまたはFACSとして実施されることを特徴とする方法。
6. 1から5までのいずれかに記載の方法であって、マウスが宿主として使用されることを特徴とする方法。
7. 1から6までのいずれかに記載の方法であって、前記ヒト細胞がヒト腫瘍細胞であることを特徴とする方法。
8. 7に記載の方法であって、ステップe)として、ステップd)で得られた目的細胞を、検出手段に結合されたヒトマーカーに特異的な抗体にさらし、そして更に前記検出手段を用いて、性質の異なる細胞サブポピュレーションを含む少なくとも2つの分画に分離することを特徴とする方法。
Claims (8)
- マウス宿主でのヒト細胞の異種移植片から宿主細胞をディプリーションする方法であって、
a)前記異種移植片を細分化して、単細胞の懸濁液を含む試料とし、
b)前記試料を、検出手段に結合された、マウスCD9エピトープに特異的な抗体にさらし、
c)前記細胞懸濁液を、前記CD9抗体によって結合された細胞から前記検出手段を使用してディプリーションし、
d)前記CD9抗体によって結合されていない細胞を目的細胞として回収する
ことを特徴とする前記方法。 - 請求項1に記載の方法であって、ステップa)、ステップb)またはステップc)の少なくとも1つにおいて得られる細胞懸濁液を、更に、それぞれ検出手段に結合されたCD45、CD51、CD31、CD24、EpCAM、Sca1、CD81、CD44、CD11b、CD95、H2Kk、H2Kd、CD171、CD90.1、CD90.2およびTer119からなる群から選択される1つ以上のマウスエピトープに特異的な抗体にさらすことと、前記細胞懸濁液を、更に前記検出手段を使用してこれらの抗体に結合された細胞をディプリーションすることと、を特徴とする方法。
- 請求項1または2に記載の方法であって、ステップb)において、前記細胞懸濁液を、マウスエピトープCD9、CD45、CD51、CD31およびTer119に特異的な抗体にさらすことを特徴とする方法。
- 請求項1から3までのいずれか1項に記載の方法であって、前記抗体の検出手段が、磁性粒子、蛍光色素または固体担体からなる群から選択されることを特徴とする方法。
- 請求項1から4までのいずれか1項に記載の方法であって、ステップc)のディプリーションが、磁気的分離、パニングまたはFACSとして実施されることを特徴とする方法。
- 請求項1から5までのいずれか1項に記載の方法であって、マウスが宿主として使用されることを特徴とする方法。
- 請求項1から6までのいずれか1項に記載の方法であって、前記ヒト細胞がヒト腫瘍細胞であることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法であって、ステップe)として、ステップd)で得られた目的細胞を、検出手段に結合されたヒトマーカーに特異的な抗体にさらし、そして更に前記検出手段を用いて、性質の異なる細胞サブポピュレーションを含む少なくとも2つの分画に分離することを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14180939.2A EP2985289A1 (en) | 2014-08-14 | 2014-08-14 | Depletion of mouse cells for generic isolation of human cells upon xenotransplantation |
EP14180939.2 | 2014-08-14 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016041060A true JP2016041060A (ja) | 2016-03-31 |
JP6767737B2 JP6767737B2 (ja) | 2020-10-14 |
Family
ID=51352428
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015159850A Active JP6767737B2 (ja) | 2014-08-14 | 2015-08-13 | ヒト細胞の単離のためのマウス細胞のディプリーション |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10012647B2 (ja) |
EP (2) | EP2985289A1 (ja) |
JP (1) | JP6767737B2 (ja) |
CN (1) | CN105368782B (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3128518A1 (en) * | 2019-02-01 | 2020-08-06 | Actinium Pharmaceuticals, Inc. | Molecules and their derivatives directed against cd45 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012141202A1 (ja) * | 2011-04-11 | 2012-10-18 | 学校法人東邦大学 | 細胞接着性光制御基材 |
WO2013074596A1 (en) * | 2011-11-16 | 2013-05-23 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Human notch receptor mutations and their use |
JP2013541504A (ja) * | 2010-08-10 | 2013-11-14 | エコール・ポリテクニーク・フェデラル・ドゥ・ローザンヌ(ウペエフエル) | 赤血球結合療法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4212898B2 (ja) * | 2001-04-10 | 2009-01-21 | バイオイー, インコーポレイテッド | 細胞分離組成物および方法 |
WO2009045201A1 (en) * | 2006-08-02 | 2009-04-09 | Biogen Idec Ma Inc. | Cancer stem cells |
US8784772B2 (en) * | 2007-03-22 | 2014-07-22 | The Johns Hopkins University | Urothelial differentiation of urothelial carcinoma: a bladder cancer stem cell model |
CN102301002A (zh) * | 2008-11-12 | 2011-12-28 | 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 | 使用外来体来确定表现型的方法和系统 |
GB2495059A (en) * | 2010-07-23 | 2013-03-27 | Pro Cure Therapeutics Ltd | Mammalian model for amplification of cancer stem cells |
WO2014018230A2 (en) * | 2012-07-25 | 2014-01-30 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Methods to isolate human mesenchymal stem cells |
-
2014
- 2014-08-14 EP EP14180939.2A patent/EP2985289A1/en not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-07-15 US US14/799,942 patent/US10012647B2/en active Active
- 2015-08-13 EP EP15180852.4A patent/EP2985290B1/en active Active
- 2015-08-13 JP JP2015159850A patent/JP6767737B2/ja active Active
- 2015-08-14 CN CN201510498695.5A patent/CN105368782B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013541504A (ja) * | 2010-08-10 | 2013-11-14 | エコール・ポリテクニーク・フェデラル・ドゥ・ローザンヌ(ウペエフエル) | 赤血球結合療法 |
WO2012141202A1 (ja) * | 2011-04-11 | 2012-10-18 | 学校法人東邦大学 | 細胞接着性光制御基材 |
WO2013074596A1 (en) * | 2011-11-16 | 2013-05-23 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Human notch receptor mutations and their use |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
PNAS, 2012, 109(17):6662-6667, JPN6019025567, ISSN: 0004237435 * |
STEM CELLS TRANSLATIONAL MEDICINE, 2013, VOL.2, PP.233-242, JPN6019025570, ISSN: 0004237436 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105368782A (zh) | 2016-03-02 |
US10012647B2 (en) | 2018-07-03 |
EP2985290A1 (en) | 2016-02-17 |
EP2985290B1 (en) | 2017-04-26 |
CN105368782B (zh) | 2021-03-19 |
JP6767737B2 (ja) | 2020-10-14 |
EP2985289A1 (en) | 2016-02-17 |
US20160047808A1 (en) | 2016-02-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lane et al. | Extracellular vesicles as circulating cancer biomarkers: opportunities and challenges | |
Needham et al. | A gut-derived metabolite alters brain activity and anxiety behaviour in mice | |
JP6509745B2 (ja) | 標的細胞の選択的富化のための方法、組成物、キット、及びシステム | |
Raynaud et al. | Comprehensive characterization of mesenchymal stem cells from human placenta and fetal membrane and their response to osteoactivin stimulation | |
US20200049599A1 (en) | Representative diagnostics | |
Liu et al. | Sample preparation method for isolation of single‐cell types from mouse liver for proteomic studies | |
CN105452466A (zh) | 适体及其用途 | |
Kajimoto et al. | Isolation and culture of microvascular endothelial cells from murine inguinal and epididymal adipose tissues | |
Krešić et al. | Canine adipose derived mesenchymal stem cells transcriptome composition alterations: a step towards standardizing therapeutic | |
Lattuada et al. | A tag-less method for direct isolation of human umbilical vein endothelial cells by gravitational field-flow fractionation | |
Spada et al. | Isolation of DNA from exosomes | |
EP3131560B1 (en) | Method for the identification of cd4+ regulatory t-cells for use in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases | |
JP2016041060A (ja) | ヒト細胞の単離のためのマウス細胞のディプリーション | |
CN115925965B (zh) | 一种有核细胞处理试剂盒及其应用 | |
CN112469816A (zh) | 用于富集髓系来源的抑制细胞的试剂盒、组合物和方法 | |
US7638285B2 (en) | Method of the discrimination and isolation of mammary epithelial stem and colony-forming cells | |
Dray et al. | Methodological considerations for the enrichment of bone marrow endothelial and mesenchymal stromal cells | |
Munson et al. | Introduction to exosomes and cancer | |
CN102796699A (zh) | 一种新型干细胞、其筛选方法、试剂盒及其用途 | |
US7723047B2 (en) | Method for the discrimination and isolation of mammary epithelial stem and colony-forming cells | |
Swennenhuis | Unmasking circulating tumor cells | |
US20240159764A1 (en) | Compositions and methods for selective capture, purification, release and isolation of single cells | |
Clausell-Tormos et al. | Nano-volume well array chip for large-scale propagation and high-resolution analysis of individual cancer stem cells | |
Heale | A Biophysical and Molecular Characterization of Human Embryonic Stem Cell-Derived Exosomes | |
Agorku et al. | Depletion of mouse cells from human tumor xenografts significantly reduces bias in molecular analysis and improves culture of target cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180810 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190626 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190708 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20200323 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200717 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20200717 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20200728 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20200729 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200915 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200918 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6767737 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |