JP2015536685A - 対立遺伝子特異的pcrにおける修飾されたリン酸及び修飾された塩基を有するプライマー - Google Patents
対立遺伝子特異的pcrにおける修飾されたリン酸及び修飾された塩基を有するプライマー Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015536685A JP2015536685A JP2015546987A JP2015546987A JP2015536685A JP 2015536685 A JP2015536685 A JP 2015536685A JP 2015546987 A JP2015546987 A JP 2015546987A JP 2015546987 A JP2015546987 A JP 2015546987A JP 2015536685 A JP2015536685 A JP 2015536685A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- nucleotide
- sequence
- target sequence
- nucleic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6853—Nucleic acid amplification reactions using modified primers or templates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本発明は、核酸増幅の分野、特に、対立遺伝子特異的増幅の分野に関する。
核酸の対立遺伝子特異的増幅は、標的配列の同時増幅及び分析を可能にする。対立遺伝子特異的増幅は、標的核酸が標的核酸の変形(多型)を有する1以上の亜集団を有すると推測される時に一般的に使用される。DNA多型は、DNAプロファイル分析(法医学、親子鑑定、臓器移植の組織タイピング)、遺伝子マッピング、及び稀な変異、例えば正常DNAを有する細胞の背景において癌細胞を生じるもの、の検出において使用される。
修飾されたリン酸残基を含むヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドが、米国特許番号7,741,472に記載された。この修飾されたリン酸の重要な特色は、三価リン原子から始まって、安定したリン酸模倣体を形成する様式で試薬とそれが反応する点であった。保護基と共に提供される、少なくとも1個のヒドロキシル残基を含むリン原子は、構造N=N=N−Acc{式中、Accは、電子受容体又は残基Rで置換された電子受容体であって、Rがいずれかの有機置換基である}を有するアジドと反応した。このことが、N原子を介して共有結合により強電子求引性電子受容体基が結合されている五価リン原子の形成につながる。この基が、こうして生じたオリゴヌクレオチドが、ホスホルアミダート化合物とは対照的に、共鳴安定化され、加水分解に対して非感受性となるようにしている。
第1の態様において、本発明は、数種の変異配列の形態で存在する標的配列のうち1種の変異配列を対立遺伝子特異的に増幅する方法であって、
(a)第1のオリゴヌクレオチド及び第2のオリゴヌクレオチドを、前記標的配列のうち少なくとも1種の変異配列にハイブリダイズさせるステップ;ここで、前記第1のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記第2のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有し;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
(b)核酸ポリメラーゼによるオリゴヌクレオチド伸長に好適な条件を提供するステップ;
(c)前記核酸ポリメラーゼによって前記第1のオリゴヌクレオチドと前記第2のオリゴヌクレオチドを伸長させるステップ;ここで、前記核酸ポリメラーゼは、前記オリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的である標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、前記第2のオリゴヌクレオチドを効果的に伸長させる能力を有するが、前記第2のオリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的でない標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、実質的に効果的でなくなる、
を含む方法に関する。
(a)第1のオリゴヌクレオチド及び第2のオリゴヌクレオチドを、前記標的配列のうち少なくとも1種の変異配列にハイブリダイズさせるステップ;ここで、前記第1のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記第2のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有し;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
(b)核酸ポリメラーゼによるオリゴヌクレオチド伸長に好適な条件を提供するステップ;
(c)前記核酸ポリメラーゼによって前記第1のオリゴヌクレオチドと前記第2のオリゴヌクレオチドを伸長させるステップ;ここで、前記核酸ポリメラーゼは、前記オリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的である標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、前記第2のオリゴヌクレオチドを効果的に伸長させる能力を有するが、前記第2のオリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的でない標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、実質的に効果的でなくなる;
(d)前記オリゴヌクレオチド伸長の産物を検出するステップ;ここで、前記伸長は、前記第2のオリゴヌクレオチドが有する選択的ヌクレオチドと相補的な前記標的配列の変異配列の存在を意味する、
を含む方法に関する。
(a)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的である、第1のオリゴヌクレオチド;及び
(b)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有する第2のオリゴヌクレオチド;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
を含むキットに関する。
(a)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列の一部分と少なくとも部分的に相補的な配列;
(b)前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチド;
(c)環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチド;及び
(d)下記構造:
を含むオリゴヌクレオチドに関する。
(a)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的である、第1のオリゴヌクレオチド;
(b)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有し;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
(c)核酸ポリメラーゼ;
(d)ヌクレオシド三リン酸;及び
(e)前記核酸ポリメラーゼによる核酸の伸長に好適な緩衝液、
を含む反応混合物に関する。
定義
他に定義しない場合には、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本発明に関連する当業者に通常理解されるものと同じ意味を有する。本発明を記載し及び請求することにおいて、下記定義が使用される。
「プリンヌクレオチド」は、プリン塩基を含むヌクレオチドを言い、一方、「ピリミジンヌクレオチド」は、ピリミジン塩基を含むヌクレオチドを意味する。
「伸長されたプライマー」は、1以上の更なるヌクレオチドが追加されるプライマーを意味する。「プライマー伸長」は、それによって、更なるヌクレオチドが該プライマーに追加される酵素の作用である。
従って、遺伝子は、コーディング配列、及び場合により該コーディング配列の発現のために必要とされる制御配列を含む。
例えば核酸の3’末端でのヌクレオチド導入生物触媒によって、追加のヌクレオチドは核酸に導入される時に、核酸は「伸長される」か又は「延長される」。
アルキル基は、C1−C20アルキル、例えばC1−C10アルキルであり得る。
アルコキシ基は、C1−C20アルコキシ、例えばC1−C10アルコキシであり得る。
アリールは、非置換又は置換フェニル又はナフチルであり得る。
そのような修飾されたリン酸残基を含むオリゴヌクレオチドは、天然のDNAやRNAとハイブリダイズし、リアルタイムPCRなどの増幅反応におけるプローブ又はプライマーとして機能するように使用され得る。修飾されたリン酸の一実施形態は、下記構造:
ヒトEGFR遺伝子内の突然変異G719Sを検出するためのプライマー
以下に示した増幅反応を、野性型と変異配列標的の両方に共通する検出プローブ(配列番号2)及びフォワードプライマー(配列番号1)を使用して実施した。各反応におけるリバースプライマーを、以下の表1に示す:配列番号3、変異配列と野性型標的の両方に共通のプライマー;又は配列番号4、5、6、7、8、G719S変異配列の標的配列に合致し、且つ、3’末端塩基位置において野性型標的に合致しないプライマー。
ヒトEGFR遺伝子内の突然変異L858Rを検出するためのプライマー
以下に示した増幅反応を、野性型と変異配列標的の両方に共通する検出プローブ(配列番号10)及びフォワードプライマー(配列番号9)を使用して実施した。各反応におけるリバースプライマーは:配列番号11、変異配列と野性型標的の両方に共通のプライマー;又は配列番号12、13、14、15、16、17、L858R変異配列の標的配列に合致し、且つ、3’末端塩基位置において野性型標的に合致しないプライマー。
ヒトEGFR遺伝子内の突然変異T790Mを検出するためのプライマー
以下に示した増幅反応を、野性型と変異配列標的の両方に共通する検出プローブ(配列番号19)及びフォワードプライマー(配列番号18)を使用して実施した。各反応におけるリバースプライマーは:配列番号20、変異配列と野性型標的の両方に共通のプライマー;又は配列番号21、22、23、24、25、T790M変異配列の標的配列に合致し、且つ、3’末端塩基位置において野性型標的に合致しないプライマー。
Claims (16)
- 数種の変異配列の形態で存在する標的配列のうち1種の変異配列を対立遺伝子特異的に増幅する方法であって、
(a)第1のオリゴヌクレオチド及び第2のオリゴヌクレオチドを、前記標的配列のうち少なくとも1種の変異配列にハイブリダイズさせるステップ;ここで、前記第1のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記第2のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有し;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
を有する修飾されたリン酸の両方を含む;
(b)核酸ポリメラーゼによるオリゴヌクレオチド伸長に好適な条件を提供するステップ;
(c)前記核酸ポリメラーゼによって前記第1のオリゴヌクレオチドと前記第2のオリゴヌクレオチドを伸長させるステップ;ここで、前記核酸ポリメラーゼは、前記オリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的である標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、前記第2のオリゴヌクレオチドを効果的に伸長させる能力を有するが、前記第2のオリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的でない標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、実質的に効果的でなくなる、
を含む、方法。 - 前記の少なくとも1個の選択的ヌクレオチドが、3’末端ヌクレオチドに存在する、請求項1に記載の方法。
- 環外アミノ基が共有結合的に修飾された前記塩基を有する前記ヌクレオチドが、3’末端ヌクレオチドに対して−5位、−4位、−3位、−2位又は−1位に生じる、請求項1に記載の方法。
- 環外アミノ基が共有結合的に修飾された前記塩基が、N6−ベンジル−アデニン、N6−パラ−tert−ブチル−ベンジルアデニン、N4−パラ−tert−ブチル−ベンジルシトシン、N4−エチル−シトシン、及びN4−ベンジル−シトシンから成る群から選択される、請求項3に記載の方法。
- 前記修飾されたリン酸が、3’末端ヌクレオチドに対して−5位と−4位、3’末端ヌクレオチドに対して−4位と−3位、3’末端ヌクレオチドに対して−3位と−2位、3’末端ヌクレオチドに対して−2位と−1位のヌクレオチドの間、及び3’末端ヌクレオチドに対して−1位のヌクレオチドと3’末端ヌクレオチドの間に生じる、請求項1に記載の方法。
- 前記修飾されたリン酸が、P(=NSO2PhNHAc)、P=pPh−NAc、P(=N−SO2−Ph−p−N=N−Ph−p−NMe2)、及びP=NS(O)2−ローダミンBから成る群から選択される、請求項5に記載の方法。
- 前記修飾されたリン酸が、P(=NSO2PhNHAc)である、請求項6に記載の方法。
- 標的配列の前記変異配列が、ヒトEGFR遺伝子の突然変異である、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のオリゴヌクレオチドが、配列番号7、13、14、22から成る群から選択される、請求項8に記載の方法。
- 数種の変異配列の形態で存在する標的配列のうち1種の変異配列を検出する方法であって、
(a)第1のオリゴヌクレオチド及び第2のオリゴヌクレオチドを、前記標的配列のうち少なくとも1種の変異配列にハイブリダイズさせるステップ;ここで、前記第1のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記第2のオリゴヌクレオチドは、前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有し;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
を有する修飾されたリン酸の両方を含む;
(b)核酸ポリメラーゼによるオリゴヌクレオチド伸長に好適な条件を提供するステップ;
(c)前記核酸ポリメラーゼによって前記第1のオリゴヌクレオチドと前記第2のオリゴヌクレオチドを伸長させるステップ;ここで、前記核酸ポリメラーゼは、前記オリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的である標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、前記第2のオリゴヌクレオチドを効果的に伸長させる能力を有するが、前記第2のオリゴヌクレオチドが前記少なくとも1個の選択的ヌクレオチドに相補的でない標的配列の変異配列にハイブリダイズするときには、実質的に効果的でなくなる;
(d)前記オリゴヌクレオチド伸長の産物を検出するステップ;ここで、前記伸長は、前記第2のオリゴヌクレオチドが有する選択的ヌクレオチドと相補的な前記標的配列の変異配列の存在を意味する、
を含む、方法。 - 前記修飾されたリン酸が、P(=NSO2PhNHAc)、P=pPh−NAc、P(=N−SO2−Ph−p−N=N−Ph−p−NMe2)、及びP=NS(O)2−ローダミンBから成る群から選択される、請求項10に記載の方法。
- 数種の変異配列の形態で存在する標的配列を対立遺伝子特異的増幅するためのキットであって、
(a)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的である、第1のオリゴヌクレオチド;及び
(b)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有する第2のオリゴヌクレオチド;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
を有する修飾されたリン酸の両方を含む、
を含む、キット。 - 核酸ポリメラーゼ、ヌクレオシド三リン酸、前記核酸ポリメラーゼによる核酸の伸長に好適な緩衝液、及び対立遺伝子特異的増幅を実施するための一組の取扱説明書を更に含む、請求項12に記載のキット。
- 数種の変異配列の形態で存在する標的配列の対立遺伝子特異的増幅を実施するためのオリゴヌクレオチドであって、
(a)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列の一部分と少なくとも部分的に相補的な配列;
(b)前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチド;
(c)環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチド;及び
(d)下記構造:
を有する修飾されたリン酸、
を含む、オリゴヌクレオチド。 - 配列番号7、13、14、22から成る群から選択された配列を有する、請求項14に記載のオリゴヌクレオチド。
- 数種の変異配列の形態で存在する標的配列を対立遺伝子特異的増幅するための反応混合物であって、
(a)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的である、第1のオリゴヌクレオチド;
(b)前記標的配列のうち1種又は複数の変異配列と少なくとも部分的に相補的であり、前記標的配列のうち1種の変異配列のみと相補的な少なくとも1個の選択的ヌクレオチドを有し;ここで、前記第2のオリゴヌクレオチドは、環外アミノ基が共有結合的に修飾された塩基を有する1個のヌクレオチドと、下記構造:
を有する修飾されたリン酸の両方を含む、第2のオリゴヌクレオチド;
(c)核酸ポリメラーゼ;
(d)ヌクレオシド三リン酸;及び
(e)前記核酸ポリメラーゼによる核酸の伸長に好適な緩衝液、
を含む、反応混合物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261736742P | 2012-12-13 | 2012-12-13 | |
US61/736,742 | 2012-12-13 | ||
PCT/EP2013/076148 WO2014090837A1 (en) | 2012-12-13 | 2013-12-11 | Primers with modified phosphate and base in allele-specific pcr |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015536685A true JP2015536685A (ja) | 2015-12-24 |
Family
ID=49726798
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015546987A Pending JP2015536685A (ja) | 2012-12-13 | 2013-12-11 | 対立遺伝子特異的pcrにおける修飾されたリン酸及び修飾された塩基を有するプライマー |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9382581B2 (ja) |
EP (1) | EP2931917B1 (ja) |
JP (1) | JP2015536685A (ja) |
CN (1) | CN104838015B (ja) |
CA (1) | CA2888152C (ja) |
ES (1) | ES2627523T3 (ja) |
WO (1) | WO2014090837A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9476095B2 (en) | 2011-04-15 | 2016-10-25 | The Johns Hopkins University | Safe sequencing system |
EP3447495B2 (en) | 2012-10-29 | 2024-03-13 | The Johns Hopkins University | Papanicolaou test for ovarian and endometrial cancers |
US9382581B2 (en) | 2012-12-13 | 2016-07-05 | Roche Molecular Systems, Inc. | Primers with modified phosphate and base in allele-specific PCR |
US10072288B2 (en) * | 2013-11-11 | 2018-09-11 | Roche Molecular Systems, Inc. | Detecting single nucleotide polymorphism using overlapped primer and melting probe |
US11286531B2 (en) | 2015-08-11 | 2022-03-29 | The Johns Hopkins University | Assaying ovarian cyst fluid |
EP3476944A4 (en) * | 2016-06-23 | 2020-01-15 | Riken | ONE-STEP RT-PCR WITH MATRIX SWITCHING |
EP3665308A1 (en) | 2017-08-07 | 2020-06-17 | The Johns Hopkins University | Methods and materials for assessing and treating cancer |
US11384376B2 (en) * | 2018-05-31 | 2022-07-12 | Roche Molecular Systems, Inc. | Reagents and methods for post-synthetic modification of nucleic acids |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009516521A (ja) * | 2005-11-23 | 2009-04-23 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | リン酸塩模倣物を含むポリヌクレオチド |
JP2010524874A (ja) * | 2007-04-18 | 2010-07-22 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | α−リン酸擬似体を有するヌクレオチド |
JP2012505641A (ja) * | 2008-10-20 | 2012-03-08 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 改善されたアレル−特異的増幅 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5639611A (en) | 1988-12-12 | 1997-06-17 | City Of Hope | Allele specific polymerase chain reaction |
US5137806A (en) | 1989-12-11 | 1992-08-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the detection of sequences in selected DNA molecules |
EP0866071B1 (en) | 1997-03-20 | 2004-10-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Modified primers |
US7408051B2 (en) | 2004-04-14 | 2008-08-05 | Applera Corporation | Modified oligonucleotides and applications thereof |
US9238832B2 (en) | 2009-12-11 | 2016-01-19 | Roche Molecular Systems, Inc. | Allele-specific amplification of nucleic acids |
US20120164641A1 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Roche Molecular Systems, Inc. | Methods and Compositions for Detecting Mutation in the Human Epidermal Growth Factor Receptor Gene |
WO2013041194A1 (en) | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Roche Diagnostics Gmbh | Use of g-clamp for improved allele-specific pcr |
US9382581B2 (en) | 2012-12-13 | 2016-07-05 | Roche Molecular Systems, Inc. | Primers with modified phosphate and base in allele-specific PCR |
-
2013
- 2013-11-27 US US14/092,133 patent/US9382581B2/en active Active
- 2013-12-11 CA CA2888152A patent/CA2888152C/en active Active
- 2013-12-11 CN CN201380064802.2A patent/CN104838015B/zh active Active
- 2013-12-11 JP JP2015546987A patent/JP2015536685A/ja active Pending
- 2013-12-11 EP EP13802395.7A patent/EP2931917B1/en active Active
- 2013-12-11 WO PCT/EP2013/076148 patent/WO2014090837A1/en active Application Filing
- 2013-12-11 ES ES13802395.7T patent/ES2627523T3/es active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009516521A (ja) * | 2005-11-23 | 2009-04-23 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | リン酸塩模倣物を含むポリヌクレオチド |
JP2010524874A (ja) * | 2007-04-18 | 2010-07-22 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | α−リン酸擬似体を有するヌクレオチド |
JP2012505641A (ja) * | 2008-10-20 | 2012-03-08 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 改善されたアレル−特異的増幅 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2888152C (en) | 2018-08-14 |
EP2931917A1 (en) | 2015-10-21 |
CN104838015A (zh) | 2015-08-12 |
ES2627523T3 (es) | 2017-07-28 |
US9382581B2 (en) | 2016-07-05 |
CN104838015B (zh) | 2018-03-16 |
US20140170650A1 (en) | 2014-06-19 |
WO2014090837A1 (en) | 2014-06-19 |
CA2888152A1 (en) | 2014-06-19 |
EP2931917B1 (en) | 2017-04-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5624044B2 (ja) | 改善されたアレル−特異的増幅 | |
CA2781984C (en) | Allele-specific amplification of nucleic acids | |
EP2931917B1 (en) | Primers with modified phosphate and base in allele-specific pcr | |
JP2015503906A (ja) | 非特異的増幅を減少させるための方法及び試薬 | |
US20160369330A1 (en) | Compositions for improved allele-specific pcr | |
JP2017538429A (ja) | 野生型の抑制のためのブロッキングオリゴヌクレオチドを使用する、核酸の対立遺伝子特異的増幅 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161212 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170905 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20171124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180313 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180607 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20181106 |