JP2015521842A5

JP2015521842A5 -

Info

Publication number: JP2015521842A5
Application number: JP2015519348A
Authority: JP
Filing date: 2013-06-28
Publication date: 2016-07-14

Claims

環状ペプチドを作製する方法であって、
（ｉ）標的ペプチド及びＣ末端環化シグナルを含む直鎖ペプチド基質を準備すること、及び
（ｉｉ）前記ペプチド基質を単離シアノバクテリアマクロシクラーゼで処理して環状ペプチドを作製すること、
を含み、
前記Ｃ末端環化シグナルが、ＡＹＤ、ＡＹＥ、ＳＹＤ、ＡＦＤ、ＦＡＧ又はＡＹＲからなる、方法。
前記シアノバクテリアマクロシクラーゼが、ＰａｔＧ（配列番号１）の残基４９２〜８５１のアミノ配列又は表４（配列番号７〜１９）に開示されたアミノ配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
前記シアノバクテリアマクロシクラーゼがＰａｔＧ（配列番号１）のＲ５８９、Ｋ５９４、Ｋ５９８及びＨ７４６に相当する１つ又は複数の残基に置換を含み、前記直鎖ペプチド基質が修飾環化シグナルを含む、請求項１又は２に記載の方法。
前記シアノバクテリアマクロシクラーゼがＰａｔＧのＫ５９８に相当する残基にＫ５９８Ｄ置換を含み、前記直鎖ペプチド基質が環化シグナルＡＹＲを含む、請求項３に記載の方法。
前記直鎖ペプチド基質が５００ｍＭＮａＣｌ及び／又はｐＨ９において前記シアノバクテリアマクロシクラーゼで処理される、請求項４に記載の方法。
（ｉ）プロテアーゼ認識部位によってプロ配列に連結したペプチド基質を含むプロペプチドを準備すること、及び
（ｉｉ）前記プロペプチドを単離プロテアーゼで処理して直鎖ペプチド基質を作製すること、
を含む方法によって、前記直鎖ペプチド基質が準備される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
前記プロテアーゼ認識部位が異種プロテアーゼ認識部位であり、前記プロテアーゼが異種プロテアーゼであり、任意に、前記異種プロテアーゼ認識部位がＫ残基であり、前記異種プロテアーゼがトリプシンであるか、前記異種プロテアーゼ部位がＹであり、前記プロテアーゼがキモトリプシンであるか、又は前記異種プロテアーゼ部位がＥＮＬＹＦＱ（Ｇ／Ｓ）であり、前記プロテアーゼがタバコエッチ病ウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼである、請求項６に記載の方法。
（ｉ）１つ又は複数の複素環化可能なアミノ酸を含むプレプロペプチドを準備すること、及び
（ｉｉ）前記プレプロペプチドをシアノバクテリアヘテロシクラーゼで処理して前記複素環化可能なアミノ酸を複素環残基に変換し、それにより直鎖ペプチド基質又はプロペプチドを作製すること、
を含む方法によって、前記直鎖ペプチド基質又は前記プロペプチドが準備される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
前記シアノバクテリアヘテロシクラーゼが、ＰａｔＤ（配列番号３）又はＴｒｕＤ（配列番号４）に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
前記直鎖ペプチド基質、プロペプチド又は環状ペプチドを処理して前記複素環残基を酸化することを含む、請求項８又は９に記載の方法。
前記環状ペプチドがシアノバクテリアプレニラーゼで処理されて、プレニル化又はゲラニル化環状ペプチドを作製する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
前記直鎖ペプチド基質、プレプロペプチド及び／又はプロペプチドがビーズに固定化されている、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
前記直鎖ペプチド基質、プレプロペプチド及び／又はプロペプチドの参照コピーが前記ビーズに付加的に固定化され、該参照コピーが環化シグナルを欠いており、
前記シアノバクテリアマクロシクラーゼによる処理の後に前記環状ペプチドが前記ビーズから放出され、前記参照コピーが該ビーズに固定化されたままである、請求項１２に記載の方法。
生物活性を同定するために、前記環状ペプチドを単離すること、及びスクリーニングすることを含み、任意に、前記環状ペプチドを放出したビーズを特定すること、及び該ビーズに固定化された参照コピーをシークエンシングすることを含む、請求項１３に記載の方法。
（ｉ）直鎖ペプチド基質を準備すること、及び
（ｉｉ）前記ペプチド基質を単離シアノバクテリアマクロシクラーゼで処理して環状ペプチドを作製すること、
を含む、環状ペプチドを作製する方法であって、
前記直鎖ペプチド基質が、
（ｉｉｉ）異種プロテアーゼ認識部位によってプロ配列に連結した前記ペプチド基質を含むプロペプチドを準備すること、及び
（ｉｖ）前記プロペプチドを単離異種プロテアーゼで処理して前記直鎖ペプチド基質を作製すること、
を含む方法によって、準備され、
前記異種プロテアーゼ認識部位がＫ残基であり、前記異種プロテアーゼがトリプシンであるか、前記異種プロテアーゼ部位がＹであり、前記プロテアーゼがキモトリプシンであるか、又は前記異種プロテアーゼ部位がＥＮＬＹＦＱ（Ｇ／Ｓ）であり、前記プロテアーゼがタバコエッチ病ウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼである、方法。