JP2016518855A5 - - Google Patents

Claims (15)

1. ピコルナウイルス3Cプロテアーゼ及びXaaProDAPの触媒性ドメインを含む二機能性融合プロテアーゼ。
2. 式:
   X-Y-Z(I)又はZ-Y-X(II)
   (式中、
   Xは、ピコルナウイルス3Cプロテアーゼ又はその機能的変異体であり、
   Yは、任意選択のリンカーであり、
   Zは、Xaa-Pro-ジペプチジルアミノペプチダーゼ(XaaProDAP)又はその機能的変異体である)
   のタンパク質を含み、2つのタンパク質分解活性のうち少なくとも一方を低下させることができる自己切断活性を実質的に有さない、請求項1に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
3. 式(I)を有する、すなわち、前記ピコルナウイルス3Cプロテアーゼ又はその機能的変異体が前記二機能性融合プロテアーゼのN末端部分にある、請求項1又は2に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
4. Xがヒトライノウイルス3Cプロテアーゼ又はその機能的変異体である、請求項1から3のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
5. Xが配列番号2又はその機能的変異体を含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
6. Zが、E.C.3.4.14.11酵素又はその機能的変異体である、請求項1から5のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
7. Zが、乳酸菌に由来する酵素又はその機能的変異体である、請求項6に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
8. Zが配列番号1又はその機能的変異体である、請求項1から7のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
9. Zがストレプトコッカス属種に由来する酵素又はその機能的変異体である、請求項1から6のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
10. Zが配列番号24又はその機能的変異体である、請求項8に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
11. 前記機能的変異体が、対応する天然タンパク質又はタンパク質の天然部分配列と比較して1〜15アミノ酸の置換、欠失、又は付加を含む、請求項2から10のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
12. リンカーYを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
13. N末端に結合したタグタンパク質を含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼ。
14. 請求項1から13のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼを調製するための方法であって、宿主細胞中で二機能性融合プロテアーゼを含むタンパク質を組換え発現させ、続いて二機能性融合プロテアーゼを単離することを含む、方法。
15. N末端ペプチド又はタンパク質をより大きなペプチド又はタンパク質から除去するための、請求項1から13のいずれか一項に記載の二機能性融合プロテアーゼの使用。