JP2015518043A - タンパク質製剤中の凝集物含量を低減する混合型多官能金属アフィニティー表面 - Google Patents
タンパク質製剤中の凝集物含量を低減する混合型多官能金属アフィニティー表面 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015518043A JP2015518043A JP2015514964A JP2015514964A JP2015518043A JP 2015518043 A JP2015518043 A JP 2015518043A JP 2015514964 A JP2015514964 A JP 2015514964A JP 2015514964 A JP2015514964 A JP 2015514964A JP 2015518043 A JP2015518043 A JP 2015518043A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substrate
- bound
- composition
- porous
- bound ligand
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/34—Size selective separation, e.g. size exclusion chromatography, gel filtration, permeation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/362—Cation-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/363—Anion-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
- B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G, L chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
- B01D15/3828—Ligand exchange chromatography, e.g. complexation, chelation or metal interaction chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
- B01J20/3265—Non-macromolecular compounds with an organic functional group containing a metal, e.g. a metal affinity ligand
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3285—Coating or impregnation layers comprising different type of functional groups or interactions, e.g. different ligands in various parts of the sorbent, mixed mode, dual zone, bimodal, multimodal, ionic or hydrophobic, cationic or anionic, hydrophilic or hydrophobic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J39/00—Cation exchange; Use of material as cation exchangers; Treatment of material for improving the cation exchange properties
- B01J39/26—Cation exchangers for chromatographic processes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
- B01J41/20—Anion exchangers for chromatographic processes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
- B01J47/014—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor in which the adsorbent properties of the ion-exchanger are involved, e.g. recovery of proteins or other high-molecular compounds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
- B01J47/02—Column or bed processes
- B01J47/04—Mixed-bed processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/165—Extraction; Separation; Purification by chromatography mixed-mode chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
- Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
- Y10T428/2913—Rod, strand, filament or fiber
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
Description
負に帯電した0.5mLのキレート多孔質粒子(キレックス100;登録商標)と正に帯電した0.5mLの多孔質粒子(マクロ・プレップ・ハイQ;登録商標)とを混合してプロトタイプ粒子混合物を準備し、これをガラスアッセンブリ内のセルロースフィルタの間に挟み込んだ。IgGモノクローナル抗体(Her2)の精製試料をpH7.0, 10mS/cmの近生理学的条件で損失することなく粒子に通過させた。非精製抗体の実験を25mS/cm, 20mS/cm, 30mS/cmの条件で行った。全ケースにおいてヘテロ凝集物およびHMW凝集物を取り除いた。0.02%エタクリジンを含む非精製抗体の実験を同一の伝導度で行った。全ケースでヘテロ凝集物とHMW凝集物を取り除き、365nmの紫外線吸収がなかったことにより通過液中にエタクリジンが無いということが立証された。
実施例1に沿う実験の一式において、IgMモノクローナル抗体(クローン529)の精製試料をpH7.0, 20mS/cmの(塩濃度を上昇させた)上昇塩条件で粒子に通過させた。非精製抗体および0.02%エタクリジンを含む非精製抗体の実験を20mS/cm, 30mS/cm, 40mS/cmの条件で行った。全ケースにおいてヘテロ凝集物とHMW凝集物を取り除き、365nmの紫外線吸収がなかったことにより通過液中にエタクリジンが無いということが立証された。0.2%エタクリジンを添加した試料についてこれらの実験を繰り返し行った。全ケースでヘテロ凝集物とHMW凝集物を除去し、通過液中からエタクリジンが無くなった。
キレックス100とマクロ・プレップ・ハイQとの等量の混合物からなる充填床に通過させた際の、モノクローナルIgM培養上澄み液からDNAと凝集物とを除去する能力試験。それぞれ0.5mLのキレックス100およびマクロ・プレップ・ハイQをPVDFメンブレンの間に挟み込んだ。IgM-529細胞培養上澄み液を毎分1ミリリットルで負荷し、25mL,50mL,100mLの通過液サンプルをそれぞれ得た。これらのサンプルを分析的なSECにより分析した。最大限の負荷では実に、通過液からかなりの254-主要ヘテロ凝集物を除去した。(低いものから高いものまで)種々の負荷でそれぞれ58%,73%,85%のIgM回収を行った。25mS/cmの伝導度を生じさせるNaClを添加した条件で、この実験を繰り返した。ヘテロ凝集物の低減は影響を受けなかったが、IgM回収のほうはそれぞれ約85%,90%,95%増加した。
QAEセファデックスA-25(登録商標)、SPセファデックスC-25(登録商標)、ヌビアQ(登録商標)、ヌビアS(登録商標)、およびセファデックスLH-20(登録商標)を等量でミクロ多孔質脂溶性粒子に加え、ミクロ多孔質とマクロ多孔質および正の電荷と負の電荷の媒体の組合せで20mS/cmの伝導度として実施例3の実験を繰り返した。アラントイン及びエタクリジンを5%血清補充したモノクローナルIgM上澄み液に添加し、最終的に1%濃度(過飽和)と0.02%濃度とした。遠心分離により上澄み液を浄化し、浄化した上澄み液(充填床単位ミリリットル当たり20ミリリットルの上澄み液)を充填床に通過させた。カチオン交換クロマトグラフィーによりIgMを捕捉するとともに分画した。2段プロセスでIgM 回収が80%を超えた。外見上はっきりした凝集物がなく、分析的SECにより純度が90%以上になった。
負に帯電した金属キレート・イミノ二酢酸基をもつミクロ多孔質スチレンジビニルベンゼン粒子と正に帯電したキレート・リガンド・トリス(2-アミノエチル)アミンをもつマクロ多孔質アガロース粒子との等量混合物をポリエチレンフリットの間に挟み込み、50mMヘペス、100mM NaCl、pH 7.0に平衡保持した。IgG(クローンHER2)を含むろ過した哺乳類細胞培養上澄み液をアセンブリーに通り抜けさせて、サイズ交換クロマトグラフィーで分析した。非処理サンプルは約10%の凝集物を含んでいた。これに対して処理サンプルは0.2%未満の凝集物を含んでいた。アキュブルー(登録商標)試験では処理サンプルはDNAの98%が除去された。抗体回収率は99%であった。
実施例5の粒子混合物を50mMヘペス、100mM NaCl、pH 7.0に平衡を保ち、IgG(クローンHER2)を含むろ過した哺乳類の細胞培養上澄み液を加えて、1時間の培養撹拌を行い、膜ろ過により取り除いた。実施例5の凝集物の低減とDNA除去がそれぞれ概略半分になることが分析で明らかになった。4で16時間の培養撹拌を行うと実施例5の約80%の効果を示した。
負に帯電した金属キレート・スチレンジビニルベンゼン粒子と正に帯電したポリメタクリレート多孔質粒子と負に帯電したポリメタクリレート粒子との等量混合物を、20 mS/cmの最終伝導度のNaCl、1%アラントインおよび0.025%エタクリジンで予め処理されたIgM-529サンプルと混合した。サンプルにおける粒子の体積比を1:20とした。10分、20分、40分、60分の時間でサンプルを採取し、それぞれミクロろ過によって粒子を取り除いた。図1に示すように全時点で高分子凝集物の著しい低減が見られるが、宿主細胞タンパク質汚染の実質的に目に見える低減により付随して、時間を掛ければ全凝集物のより大きな低減が見られる。続いて分析により、サンプルからクロマチン残留物の併合低減を反映した凝集物と宿主タンパク質の両方の低減が明らかになった。また、全時点でサンプルからエタクリジンを取り除いた。
図2Aおよび図2Bには、実施例7と同様にNaCl、アラントイン、およびエタクリジンで処理され、次いで実施例7と同じ媒体混合物で処理されるが、粒子を十分に収容する狭いメッシュの織物ポリマーリテーナーの間に混合媒体を挟み込んだ装置にサンプルを通過させることにより処理されるIgM-84の処理前と処理後のサイズ排除クロマトグラフィー・プロファイルをそれぞれ示す。HMW凝集物は、より小さな凝集物の大部分とともに完全に除去された。以下の表1に、DNA及びヒストンがIgGフラクションを伴う全凝集物フラクションにわたり、また全タンパク質含有フラクションにわたり当初から分散していることを示す。
図3に、抗HER2モノクローナルIgG抗体の実施例16と同じ手順を施す前と後のサイズ排除クロマトグラフィー・プロファイルをそれぞれ示す。それらの結果は、本質的には同じであるが、おおよそ、少なくとも一部では、抗体の濃度が約10倍以上となることから、実施例8を超える程度には改善されている。
20 mS/cmの伝導度になるまで加えたNaClを伴うIgM-84細胞培養上澄み液を、負に帯電した表面結合キレート剤イミノ二酢酸をもつ多孔質モノリシック・ポリメタクリレート・ディスク(CIM IDA, BIA分離)に通過させ、次いで正に帯電したジエチルアミノエチル基(CIM DEAE, BIA)に直ちに通過させ、これにより上澄み液とモノリスを50:1の体積比とした。実施例7と同様に効果的に凝集物とDNAが取り除かれた。IgM回収率は98%であった。ヒストンおよび一般的な宿主タンパク質の除去は、両方とも実施例7からの凡そ70%に対して約35%であり、実施例7の到達レベルの約半分であった。両化学基を単体モノリスの表面上に種々変えて混在させることができることは当業者において明らかである。
正に帯電したモノリスを、正に帯電した4級アミノ基(登録商標「ザルトバインドQナノ」)をもつミクロろ過膜に置き換えたことを除いて、実施例10の手順を繰り返した。DNAと凝集物の除去およびIgM回収は変わらなかった。両化学基を単体モノリスの表面上に存在させることができることは当業者において明らかである。
正に帯電した膜を、拡張形態内に誘導体化されたアミノリガンドをもつグラフトしたリガンドを有する正に帯電したミクロ多孔質中空繊維( Qyu-speed D;旭化成メディカルカンパニー社)に置き換えたことを除いて、実施例11の手順を繰り返した。
正に帯電したミクロろ過膜の代わりに、織物ポリマーリテーナーの間に挟み込まれた正に帯電したキレート剤トリス(2-アミノエチル)アミン(バイオワークスTRENハイ-サブ)をもつ多孔質アガロース粒子を用いたことと、余分な塩が無添加のIgG含有細胞培養上澄み液を通液することとを除いて、実施例12の手順を繰り返した。
イミノ二酢酸モノリスのために負に帯電した膜(登録商標「ザルトバインドSナノ」)を代用したことを除いて、実施例13の手順を繰り返した。本実施例の結果は実施例12と同じであった。
負に帯電したキレート・リガンド・イミノ二酢酸(登録商標;キレックス100)をもつ多孔質スチレン・ジビニルベンゼン粒子を正に帯電したトリス(2-アミノエチル)アミン・キレート・リガンド・アガロース粒子と混合したことを除いて、実施例14の手順を繰り返した。混合した粒子を多孔質ポリエチレンリテーナーの間に挟み込んだ。そして、1%アラントインと0.025%エタクリジンで処理したIgG含有細胞培養上澄み液を混合粒子の多孔質ポリエチレンリテーナーに通液した。凝集物は除去された。IgG回収率は99%であった。両化学基を単体粒子タイプの表面上で混合できることは当業者において明らかである。
正に帯電した粒子を2部、負の電荷の疎水性粒子を1部、負に帯電したキレート粒子を1部の割合でこれらを混合した混合物に対して負に帯電した多孔質ポリメタクリレート粒子(マクロプレップT-ブチル;バイオラッド社の登録商標)上にブチル疎水性リガンドを添加することを除いて、実施例15の手順を繰り返した。抗体回収率は99%であった。凝集物は約7%から2%未満まで低減された。エタクリジンは取り除かれた。
モノクローナルIgGを含有する哺乳類細胞培養上澄み液を実施例15に記載したように処理した。凝集物は2.7%以上から0.31%まで低減した。IgG回収率は99%であった。立体排除クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、およびアニオン交換クロマトグラフィーからなる3段プロセスにより抗体を順次浄化した。最終精製IgGのなかにDNAを検出できなくなる検出限界まで低減した。原則としてサイズ排除クロマトグラフィーの検出限界である0.05%未満に凝集物を低減した。最終の抗体純度は99.999%以上と算出された。最終の抗体回収率は81%であった。
ネズミ白血病ウィルスに感染した哺乳類細胞の検査液からのろ過上澄み液を1%アラントイン及び0.025%エタクリジンで処理し、次いで処理液を実施例10に記載したモノリスに通過させた。ウィルスレベルは3.06 logsに減少した。DNAは3.5 logsに減少した。エタクリジンは処理サンプルから除去された。
ネズミの微小ウィルスに感染した哺乳類細胞の検査液から上澄みをろ過したことを除いて、実施例17の手順を繰り返した。ウィルスレベルは5.06 logsに減少した。DNAは3.5 logsに減少した。エタクリジンは処理サンプルから除去された。これら最後の2つの実施例は、本発明がウィルス汚染を低減するために価値ある実用的なものであることを示すばかりでなく、凝集物および宿主由来汚染を除去するためにも有用であることを示している。エンドトキシンをも除去できることは当業者において明らかである。
Claims (45)
- 金属アフィニティー官能基としてはたらく第1の表面結合リガンドを有する第1の基質と、第2の基質上に任意に設けられ、前記第1の基質の前記金属アフィニティー官能基のそれとは逆の電荷をもつ凝集物をもつ第2の表面結合リガンドを有する第2の基質と、を有し、
前記第1の表面結合リガンドと前記第2の表面結合リガンドは、前記タンパク質製剤が前記第1及び第2の表面結合リガンドの両方に同時に接触するように配置される、ことを特徴とするタンパク質製剤の凝集物含量を低減する組成物。 - 前記第1の表面結合リガンドまたは前記第2の表面結合リガンド、またはこれらの両方は、多座配位の金属キレート部分を有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第2の表面結合リガンドは、前記金属アフィニティー官能基として機能することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドは、負の電荷をもつ凝集物を有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質はそれに結合した付加的なケミカル部分を有し、前記第1の基質の凝集チャージに負の電荷の残留が提供されることを特徴とする請求項4記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドは、負の電荷を帯びたものであり、イミノ二酢酸( 2-(カルホ゛キシメチルアミト゛)酢酸)、エチレングリコール(アミノエチルエーテル)二酢酸、ニトリロ酢酸( 2,2’,2”-ニトリロ三酢酸)、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択されたものであることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第2の表面結合リガンドは、トリ( 2-アミノエチル)アミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ポリプロピレニミン・テトラアミン、またはデスフェロキサミンのいずれかであることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドは、イミノ二酢酸( 2-(カルホ゛キシメチルアミト゛)酢酸)であることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドは、正の電荷を帯びた凝集帯電を有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質はそれに結合した付加的なケミカル部分を有し、前記第1の基質の凝集チャージに負の電荷の残留が提供されることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドは、トリ( 2-アミノエチル)アミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ポリプロピレニミン・テトラアミン、またはデスフェリオキサミンのいずれかであることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質または前記任意の第2の基質のうちの少なくとも一方には、1つ又はそれ以上の更なる表面結合リガンドが前記第1の表面結合リガンドおよび前記第2の表面結合リガンドにさらに付加されることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、1つ又はそれ以上の逆の電荷に帯電する群と結合して負の電荷に帯電した1つ以上の金属キレート群を有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、逆の電荷に帯電する群と結合して正の電荷に帯電した1つ以上の金属キレート群を有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドおよび前記第2の表面結合リガンドは、前記第1の基質に供給結合していることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の表面結合リガンドは前記第1の基質に共有結合し、前記第2の表面結合リガンドは前記第1の基質とは異なる前記第2の基質に共有結合していることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、粒子を有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記粒子は非多孔質であることを特徴とする請求項17記載の組成物。
- 前記粒子は多孔質であることを特徴とする請求項17記載の組成物。
- 前記粒子は、タンパク質製剤中にタンパク質の進入を許容するのに十分に大きいサイズの孔を有することを特徴とする請求項17記載の組成物。
- 前記粒子は、タンパク質製剤中にタンパク質の進入を許容するのに十分に小さいサイズの孔も有することを特徴とする請求項17記載の組成物。
- 前記粒子は、約10nmから約100nmまでの間の平均孔サイズを有することを特徴とする請求項19記載の組成物。
- 前記粒子は、約10nm未満の平均孔サイズを有することを特徴とする請求項19記載の組成物。
- 前記粒子は、約100nmを超える平均孔サイズを有することを特徴とする請求項19記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、メンブレンまたはモノリスを有することを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、固体または多孔質壁の中空ファイバを有することを特徴とする請求項1乃至12のいずれか1項記載の組成物。
- 請求項1乃至26のいずれか1項記載の組成物を有する装置であって、クロマトグラフィーに任意に用いられることを特徴とする装置。
- 請求項1乃至26のいずれか1項記載の前記組成物と前記1つ又はそれ以上の更なる基質とが前記タンパク質製剤に対して任意の順序で連続的に接触させることが可能であり、前記1つ又はそれ以上の更なる基質は、負の電荷、正の電荷、中性の電荷、およびこれらの組み合わせのなかから選択されるチャージを有する1つ又はそれ以上の更なる表面結合リガンドを有するものであることを特徴とする請求項27記載の装置。
- 前記第1の基質、前記任意の第2の基質、前記1つ又はそれ以上の更なる基質、およびそれらの組み合わせがパックされたクロマトグラフィー装置であることを特徴とする請求項27または28のいずれか1項記載の装置。
- 装置入口の組成物が装置出口の組成物とは異なることを特徴とする請求項27乃至29のいずれか1項記載の装置。
- 1つ又はそれ以上の装置構成部品のケミカル表面が、実質的に不活性であるか、または、装置の化学官能性に対して重大な貢献をしない程度に十分に低面積であることを特徴とする請求項27乃至30のいずれか1項記載の装置。
- 前記1つ又はそれ以上の装置構成部品のケミカル表面は、(1)構造的完全性をつくり出す、(2)それを通して液の流れを向かせる、(3)装置の効果的な使用を阻害するそれらを防ぐためにタンパク質製剤中の不溶性材料を物理的にブロックするか、またはトラップするか、または随伴するか、のうちの1つ又はそれ以上を可能にすることを特徴とする請求項27乃至31のいずれか1項記載の装置。
- 1つ又はそれ以上の多孔質メンブレンを有し、前記1つ又はそれ以上の多孔質メンブレンのうちの少なくとも1つは前記第1の表面結合リガンドまたは前記第2の表面結合リガンドのいずれかに結合されている前記第1の基質であることを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 前記第1の基質、または前記任意の第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、パーマネント短繊維マットを有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記任意の第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、規則巻き糸(オーダード・ワウンド)、織物、または不織布繊維構造を有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の組成物。
- 前記第1の基質、または前記任意の第2の基質、または前記第1及び第2の基質の両方は、パーマネント短繊維マットおよび規則巻き糸(オーダード・ワウンド)、織物、または不織布繊維構造の組み合わせを有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の組成物。
- 中空の多孔質壁繊維または非多孔質繊維からなり、かつ、前記第1の表面結合リガンド及び前記第2の表面結合リガンドに結合される前記第1の基質である多孔質細網繊維を有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 多孔質メンブレンまたはモノリスの間に挟まれた多孔質または非多孔質の粒子を有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 多孔質または非多孔質の粒子は前記第1の表面結合リガンドまたは前記第2の表面結合リガンドのいずれかに結合された前記第1の基質であり、メンブレンまたはモノリスは前記第1の表面結合リガンドおよび前記第2の表面結合リガンド以外の他の第2の基質であることを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 多孔質または非多孔質の粒子は、織物またはアモルファス繊維フィルタの間に挟まれているか、または繊維基質のなかに埋め込まれていることを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 粒子は前記第1の表面結合リガンドまたは前記第2の表面結合リガンドのいずれかに結合される前記第1の基質または前記第2の基質を有し、繊維フィルタは前記第1及び第2の表面結合リガンド以外の他の表面結合リガンドに結合される前記第2の基質を有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 織物または結晶性フリットの間に挟まれた多孔質または非多孔質の粒子を有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 前記多孔質または非多孔質の粒子は前記第1の表面結合リガンドまたは前記第2の表面結合リガンドのいずれかに結合される前記第1の基質であり、前記織物または結晶性フリットは前記第1及び第2の表面結合リガンド以外の他の表面結合リガンドに結合される前記第2の基質であることを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 網状ポリマー組織のなかに埋め込まれた多孔質または非多孔質の粒子を有することを特徴とする請求項27乃至32のいずれか1項記載の装置。
- 前記第1の基質および前記第2の基質は、請求項27〜44に挙げられた形態のいずれかの組み合わせを有することを特徴とする請求項27乃至44のいずれか1項記載の装置。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261653716P | 2012-05-31 | 2012-05-31 | |
US61/653,716 | 2012-05-31 | ||
PCT/SG2013/000048 WO2013180649A1 (en) | 2012-05-31 | 2013-02-06 | Mixed multifunctional metal affinity surfaces for reducing aggregate content in protein preparations field |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015518043A true JP2015518043A (ja) | 2015-06-25 |
Family
ID=49673720
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015514964A Pending JP2015518043A (ja) | 2012-05-31 | 2013-02-06 | タンパク質製剤中の凝集物含量を低減する混合型多官能金属アフィニティー表面 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20150147243A1 (ja) |
EP (1) | EP2855505A4 (ja) |
JP (1) | JP2015518043A (ja) |
KR (1) | KR20150052808A (ja) |
CN (1) | CN104487447B (ja) |
IN (1) | IN2014DN09947A (ja) |
SG (1) | SG11201407806YA (ja) |
WO (1) | WO2013180649A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20160001262A1 (en) * | 2013-02-06 | 2016-01-07 | Agency For Science, Technology And Research | Mixed multifunctional metal affinity surfaces for reducing aggregate content in protein preparations |
US10525376B2 (en) * | 2015-07-20 | 2020-01-07 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Affinity chromatography devices |
SG11201809685XA (en) | 2016-06-15 | 2018-11-29 | Agency Science Tech & Res | A method of enhancing the performance of chromatography methods for purification of proteins |
CN111001189B (zh) * | 2018-12-25 | 2021-08-24 | 泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司 | 一种利用混合模式琼脂糖凝胶介质对甘草中有效组分的捕获与分离方法 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5283339A (en) * | 1988-11-23 | 1994-02-01 | California Institute Of Technology | Immobilized metal aqueous two-phase extraction and precipitation |
JP2001508815A (ja) * | 1996-05-29 | 2001-07-03 | セル ジェネシス,インコーポレイテッド | カチオン性ポリマー/脂質核酸送達ビヒクル |
JP2003512171A (ja) * | 1999-10-27 | 2003-04-02 | ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト | 多成分イオン交換樹脂 |
US7008542B2 (en) * | 2000-12-31 | 2006-03-07 | Amersham Biosciences Ab | Method for mixed mode adsorption |
JP2007528835A (ja) * | 2003-02-28 | 2007-10-18 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 金属キレートアフィニティリガンドの合成方法 |
US20090143529A1 (en) * | 2004-06-14 | 2009-06-04 | Milton Thomas William Hearn | Peptide purification by means of hard metal ion affinity chromatography |
JP2009540018A (ja) * | 2006-06-13 | 2009-11-19 | ザイモジェネティクス, インコーポレイテッド | Il−17およびil−23アンタゴニストならびにその使用方法 |
US20090306342A1 (en) * | 2005-12-30 | 2009-12-10 | Bio-Layer Pty Limited | Binding of molecules |
JP2010260994A (ja) * | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Nagoya Univ | 金属含有ブロック共重合体及びその製造方法 |
JP2012086477A (ja) * | 2010-10-20 | 2012-05-10 | Hitachi Chemical Co Ltd | 薄膜転写材及びその製造方法並びに薄膜付き成形体及びその製造方法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3716481A (en) * | 1971-07-19 | 1973-02-13 | Ici Australia Ltd | Thermal regeneration ion exchange process with triallylamine polymers |
RU2361415C2 (ru) * | 2002-06-21 | 2009-07-20 | Баркон Ньютрасайнс (Мб) Корп. | Экстракция белка из кормовой муки из жмыха семян масличной канолы |
CN101119797A (zh) * | 2005-02-14 | 2008-02-06 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 液相色谱法 |
US7691980B2 (en) * | 2007-01-09 | 2010-04-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers |
US20100310462A1 (en) * | 2007-04-18 | 2010-12-09 | Biochromix Ab | Binding of pathological forms of proteins using conjugated polyelectrolytes |
-
2013
- 2013-02-06 SG SG11201407806YA patent/SG11201407806YA/en unknown
- 2013-02-06 EP EP13796498.7A patent/EP2855505A4/en not_active Withdrawn
- 2013-02-06 CN CN201380038904.7A patent/CN104487447B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-02-06 KR KR1020147033110A patent/KR20150052808A/ko not_active Application Discontinuation
- 2013-02-06 WO PCT/SG2013/000048 patent/WO2013180649A1/en active Application Filing
- 2013-02-06 JP JP2015514964A patent/JP2015518043A/ja active Pending
-
2014
- 2014-11-24 IN IN9947DEN2014 patent/IN2014DN09947A/en unknown
- 2014-11-26 US US14/555,165 patent/US20150147243A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5283339A (en) * | 1988-11-23 | 1994-02-01 | California Institute Of Technology | Immobilized metal aqueous two-phase extraction and precipitation |
JP2001508815A (ja) * | 1996-05-29 | 2001-07-03 | セル ジェネシス,インコーポレイテッド | カチオン性ポリマー/脂質核酸送達ビヒクル |
JP2003512171A (ja) * | 1999-10-27 | 2003-04-02 | ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト | 多成分イオン交換樹脂 |
US7008542B2 (en) * | 2000-12-31 | 2006-03-07 | Amersham Biosciences Ab | Method for mixed mode adsorption |
JP2007528835A (ja) * | 2003-02-28 | 2007-10-18 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 金属キレートアフィニティリガンドの合成方法 |
US20090143529A1 (en) * | 2004-06-14 | 2009-06-04 | Milton Thomas William Hearn | Peptide purification by means of hard metal ion affinity chromatography |
US20090306342A1 (en) * | 2005-12-30 | 2009-12-10 | Bio-Layer Pty Limited | Binding of molecules |
JP2009540018A (ja) * | 2006-06-13 | 2009-11-19 | ザイモジェネティクス, インコーポレイテッド | Il−17およびil−23アンタゴニストならびにその使用方法 |
JP2010260994A (ja) * | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Nagoya Univ | 金属含有ブロック共重合体及びその製造方法 |
JP2012086477A (ja) * | 2010-10-20 | 2012-05-10 | Hitachi Chemical Co Ltd | 薄膜転写材及びその製造方法並びに薄膜付き成形体及びその製造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IN2014DN09947A (ja) | 2015-08-14 |
KR20150052808A (ko) | 2015-05-14 |
CN104487447A (zh) | 2015-04-01 |
US20150147243A1 (en) | 2015-05-28 |
EP2855505A4 (en) | 2016-04-13 |
CN104487447B (zh) | 2018-10-30 |
SG11201407806YA (en) | 2014-12-30 |
EP2855505A1 (en) | 2015-04-08 |
WO2013180649A1 (en) | 2013-12-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6268167B2 (ja) | タンパク質製剤中の凝集物含量を低減するために混合型多官能表面を使用する方法 | |
US9637724B2 (en) | Selective binding of biological targets to solid phase ureides | |
JP6410734B2 (ja) | タンパク質調製物の凝集体含有量を低減する方法 | |
US9994611B2 (en) | Chromatographic purification of antibodies from chromatin-deficient cell culture harvests | |
CN104507953B (zh) | 通过用正电性有机添加剂处理来降低蛋白质制剂中蛋白质-污染物复合物和聚集物水平的方法 | |
JP6297029B2 (ja) | 多様な官能基を有する粒子による免疫グロブリンg調製物のクロマトグラフィー精製 | |
Charlton et al. | Characterisation of a generic monoclonal antibody harvesting system for adsorption of DNA by depth filters and various membranes | |
KR20160012975A (ko) | 단백질 정제 프로세스 | |
JP2016507588A (ja) | 非イオン性有機ポリマーおよび電気陽性表面の存在下でのタンパク質精製 | |
JP2016509069A (ja) | 非イオン性有機ポリマー存在下、高導電率でのタンパク質精製 | |
JP2015518043A (ja) | タンパク質製剤中の凝集物含量を低減する混合型多官能金属アフィニティー表面 | |
JP2011036128A (ja) | 抗体製造方法 | |
JP6403790B2 (ja) | タンパク質調製物の凝集体含有量をアリールアニオン処理によって減少させる方法 | |
JP2016513245A (ja) | タンパク質製剤の凝集体含有量を減少させる混合多官能金属親和性表面 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160114 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161011 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170111 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170130 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170606 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20180213 |