JP2015505359A - 乳がん検出のための吸収紙及びその使用 - Google Patents

Abstract

乳房液又はその成分の生体試料が、吸収紙又は膜に結合された搾乳器デバイスを使用して得られ、随意にオキシトシンを被験者に投与することによって促進される。搾乳器デバイスは、乳房液の発現を刺激し、癌を含む乳腺疾患を評価するために、吸収紙又は膜上に診断試料の採取をもたらす。生体試料は、細胞又は細胞成分、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド、ヌクレオチド、又は乳腺疾患マーカを含む他の所望の構成要素のうちの１つ以上を含む流体を含むことができる。吸収紙又は膜、吸収紙又は膜に関連する方法、及び搾乳器デバイスがまた提供される。【選択図】 図１

Description

（相互参照）
本出願は、２０１１年１０月２４日に出願された米国仮出願第６１／５５０，８５５号の利益を主張し、該仮出願は、参照により本明細書に組み込まれる。

乳がんは、女性において群を抜いて最も一般的ながんであり、それは、ヒトのがんによる死亡原因の第２位である。乳がんの診断及び処置の進歩にもかかわらず、この疾患の有病率は、１９４０年以来、年間約１％の割合で着実に上昇している。現在、北米に住む女性が彼女の一生の間に乳がんを発症する可能性は、８人に１人である。

マンモグラフィの現在の広範な使用は、乳がんの検出の向上をもたらした。それにもかかわらず、乳がんによる死亡率は、１０万人の女性あたり約２７人の死亡で変わっていない。治療選択肢及び生存率が大幅に制限されるときである、あまりにも進行した段階で乳がんがあまりにも頻繁に発見される。

乳房の健康管理に助けるための乳頭吸引液の臨床的有用性は、流体を採取し、流体の存在を測定する現在の臨床方法論によって、ここ５０年間妨げられてきた。実際には、現在の技術を使用して、すべての女性の５０％までは、非分泌者である、すなわち、彼女らは、乳頭吸引液（ＮＡＦ）を生成しないと判断される；これは、言い換えれば、これらの女性は、現在の技術を用いた非侵襲的手技を用いて、早期乳がんの診断について試験できないことを意味する。

また、現在の技術を用いて非分泌型及び分泌型の女性から流体を採取するために使用される紙は、結果的にかなりの数の紙による乳頭組織の切断を伴い、それによって、試料採取は試験を受けている女性に痛みをもたらす。

本発明者は、試料採取中の紙による切断の数を大幅に減らす新しい吸収紙又は膜を初めて特定した。本発明はまた、新しい吸収紙又は膜が以前非分泌者と考えられていた女性からとても少ない試料量の採取を可能にすることを本明細書に初めて特定した。少ない低試料量の観点からしても、本発明者は、早期乳がんのリスク評価のためのタンパク質及び細胞の数について、非分泌者と考えられていた女性からの試料が成功裏にアッセイされることができることを初めて特定した。本発明以前は、非分泌者と考えられていた女性からの試料は捨てられ、女性は侵襲的手技を用いて試験されなければならなかった。したがって、本明細書に提示される実施形態は、以前では非侵襲的手技を用いてアッセイすることができなかった患者集団のための早期乳がんのリスク評価の分野における著しい進歩を表す。本方法はまた、古典的に分泌者である女性の早期乳がんのリスク評価を可能にする。本発明の方法は、試料中のタンパク質のより感度の高い検出を可能にし、それによって、疾患の進行のより早い段階において乳がんを検出する医師の能力を向上させる。本方法は、約７０ピコグラム（ｐｇ）という低い濃度の乳頭吸引液（ＮＡＦ）中のタンパク質を検出することができる。これは、約３５０ナノグラム（ｎｇ）の濃度の分泌者のＮＡＦ試料中のタンパク質を検出した従来の技術に対して著しい歩を表す。

本明細書において、将来の乳がんのリスクが低い女性を特定する方法が提供される。該方法は、乳頭吸引液の試料を得る工程と；前記試料中のタンパク質に対して試験を行う工程と；前記試料中の細胞に対して試験する工程とを含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞である試料に関連付けられている。

また、本明細書において、乳がんに対する患者のリスクを特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法が提供される。該方法は、汎用コンピュータを用いて、乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記試料中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と及び／又は乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数とを比較する工程を含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む試料に関連付けられている。

乳がんのリスクが最も低いものであると特定された患者集団は、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む試料に関連付けられている。一実施形態では、試料は、細胞を含まない（すなわち、無細胞である）。別の実施形態では、低リスクは、タンパク質を含み、かつ１つの細胞を含む試料に関連付けられている。乳がんのリスクは、細胞の数の増加と共に増加する。

本明細書において提供される方法を用いて診断されるべき患者は、古典的には、乳頭吸引液（ＮＡＦ）の非分泌者及び分泌者と指定されていた者を含む。

一実施形態では、患者は、古典的には、乳頭吸引液の非分泌者として指定される。

乳頭吸引液試料は、吸収紙又は膜上に採取される。本発明の方法において使用することができる吸収紙又は膜は、図１に示すようなサイズ及び寸法を有する紙又は膜を含む。紙又は膜は、例えば、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースで作られてもよい。この新しいデザインは、ＮＡＦ採取のために現在市販されている紙に比べて試料採取中の乳頭組織の切断を著しく少なくする結果をもたらす。

吸収紙又は膜は洗浄され、流出液は採取され、細胞の数について評価される。一実施形態では、試料中に存在する場合には、細胞の細胞診（ｃｙｔｏｌｏｇｙ）は、限定されないが、顕微鏡法、フローサイトメトリー、免疫組織化学法、又はそれらの組み合わせを含む任意の従来の方法を用いて分析される。試料中に存在する場合には、細胞ががん細胞の１つ以上の特性を含んでいれば、細胞は正常であると臨床医は判定することができる。１つの非限定的な例では、細胞試料は、溶血素及びエオシンで染色されてもよい。

本明細書に記載の方法により測定されたタンパク質は、試料の総タンパク質の含有量である。その後、紙は、コロイド状の金又はコロイド状の銀に暴露され、総タンパク質の含有量（濃度）が判定される。

一態様では、試料が約５０ｐｇ〜約０．５ｎｇのタンパクを含み、かつ細胞を含まない場合には、患者は乳がんのリスクが低いものとして特定される。

代替的には、試料が少なくとも約３００ｎｇのタンパク質及び２つ以上の細胞を含む場合には、患者は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定され、又は乳がんリスクが中又は高いとして診断される。一実施形態では、試料中のタンパク質濃度が約３００ｎｇのタンパク質〜約２μｇのタンパク質であり、患者は、乳がんのリスクが高いものであると診断され、かつ場合によっては、さらなる評価が必要であると特定される。試料の細胞画分は、このような場合には、約２つの細胞〜約５０個の細胞を含んでいるかもしない。このような細胞画分は、別の場合には、少なくとも１０個の細胞を含んでいるかもしれない。

本明細書においては、図１に示すような特性及び寸法を有する吸収紙又は膜が提供される。ここで、吸収紙又は膜は、ミクロセルロース、混合セルロースエステ患ル紙又はニトロセルロースを使用して作られる。一実施形態では、吸収紙又は膜は、混合セルロースエステルを含む。

乳頭吸引液（ＮＡＦ）の試料中のタンパク質を検出する方法は、吸収紙又は膜上にＮＡＦを採取し、コロイド状の金属粒子の懸濁液を用いてタンパク質を検出する工程を含む。ここで、方法は、試料あたり０．５ｎｇ〜５００ｎｇの濃度のタンパク質を検出することができる。一実施形態では、金属粒子の懸濁液は、コロイド状の金を含む。

本吸収紙又は膜の著しい進歩は、現在の濾紙が切断するほどには、組織を切断しないことであり、したがって、評価を受けている患者は、採取処置中に、痛みや不快をあまり感じない。一実施形態では、紙又は膜に暴露される組織は、乳頭組織である。

本明細書において、乳がんのリスクが低い患者を特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法において本明細書に記載されるような吸収紙又は膜の使用が提供される。一態様では、本明細書において記載される任意の方法において、又は任意の使用のための乳頭吸引液採取の任意の他の方法において、吸収紙又は膜が使用される。

本明細書において、患者の乳がんのリスクを特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法が提供される。該方法は、吸収紙又は膜上に乳頭吸引液を採取する工程と；緩衝溶液で前記吸収紙又は膜を洗浄して、もし存在すれば細胞を採取する工程と；前記試料中の細胞の数を計数し、随意に、もし存在すれば前記細胞の細胞診を判定する工程と；コロイド状の金又はコロイド状の銀で前記吸収紙又は膜を染色し、前記濾紙上のタンパク質の濃度を判定する工程と；前記乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記液中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と及び／又は乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数とを比較する工程と、を含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む試料に関連付けられている。

本明細書において、患者の乳がんのリスクを診断する方法が提供される。該方法は、吸収紙又は膜上に乳頭吸引液を採取する工程であって、前記ＮＡＦ試料は、古典的な提供者及び非提供者から取得される、工程と；緩衝溶液で前記吸収紙を洗浄して、もし存在すれば細胞を採取する工程と；前記試料中の細胞の数を計数し、随意に、もし存在すれば前記細胞の細胞診を判定する工程と；コロイド状の金又はコロイド状の銀で前記吸収紙又は膜を染色し、前記濾紙上のタンパク質の濃度を判定する工程と；前記乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記液中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と及び／又は乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数とを比較する工程と、を含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、１つの細胞を含む試料に関連付けられている。

また、本明細書において、個体において乳がんを発症するリスクを特定する方法が提供される。該方法は、図１に示すような吸収紙上に吸収された乳頭吸引液試料中のタンパク質の総量及び／又は細胞の数を検出する工程であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む、工程と；乳頭吸引液試料中のタンパク質の総量及び／又は細胞の数に基づいて、乳がんを発症するリスクを特定する工程と、を含む。

一実施形態では、試料は、無細胞であり、患者は、乳がんのリスクが最も低いものとして特定される。別の実施形態では、試料は、１つの細胞を含み、患者は、乳がんのリスクが低いものとして特定される。さらに別の実施形態では、試料は、２つより多い細胞を含み、患者は、さらなる評価が必要であると特定される。

一実施形態では、各乳房の総タンパク質濃度が判定され、１つ試料の総タンパク質濃度が３００ｎｇのよりも大きい場合には、患者は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定される。代替的には、各乳房の総タンパク質濃度が判定され、各試料の総タンパク質濃度が２００ｎｇ以下のタンパク質である場合には、患者は、乳がんのリスクが低いものとして識別される。

一実施形態では、乳房組織のマッサージ、及び実施例１において記載されるような乳腺穿刺吸引細胞診標本の試験（ｍａｍｍａｒｙ ａｓｐｉｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｍｅｎ ｃｙｔｏｌｏｇｙ ｔｅｓｔ：ＭＡＳＣＴ（商標））デバイスを用いる吸引に続いて、乳頭吸引液が吸収紙又は膜上に採取される。本明細書において使用されるように、「ＭＡＳＣＴ（商標）デバイス」は、Ｑｕａｙ ｅｔ ａｌ．による米国特許第６，２８７，５２１号に記載される装置を指す。その全体が本明細書に組み込まれる。１つの非限定的な例では、患者の乳器から生体試料を採取するための試料採取装置は、前記患者の乳房の少なくとも乳頭部分を受け取り、それと吸引シールを形成するようなサイズ及び寸法を有する非多孔質材料で構成された乳房係合部材と；前記乳房係合部材と流体接続している、発現乳房液の試料を受け取るための固相試料採取媒体と；前記乳房係合部材と気体接続している、乳房流体発現を容易にするために乳房係合部材を介して負圧を発生させるための真空ポンプ手段と、を備えることができ、ここで、前記固相試料採取媒体は、顕微鏡ガラススライド、毛細管、採取チューブ、カラム、マイクロカラム、ウェル、プレート、膜、フィルタ、樹脂、無機マトリックス、ビーズ、粒子状クロマトグラフ媒体、プラスチック微小粒子、ラテックス粒子、被覆されたチューブ、被覆されたテンプレート、被覆されたビーズ、被覆されたマトリックス、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。試料採取装置は、前記乳房係合部材と試料採取筐体とを取り外し可能に結合するための取り外し可能結合手段を含んでもよい。いくつかの例では、固相試料採取媒体は、前記乳房係合部材と気体接続している試料採取筐体内に一体的に又は取り外し可能に装着された支持部材によって支持されている。支持部材は、円盤状であってもよく、前記乳房係合部材と前記試料採取筐体との間に介在されている。さらに、支持部材は、上側及び下側保持リングを有してもよく、吸収性のシート又は吸着材料を支持する。支持部材は、限定されないが、毛細管、被覆されたチューブ、カラム、マイクロカラム、プレート、ウェル、顕微鏡スライド、又はそれらの組み合わせを含む固相試料採取テンプレートであってもよい。支持部材は、流体保持ウェルを定義し、少なくとも１つの空気流路を含み、それにより、負圧が空気流路を通って前記乳房係合部材に移動し、及び前記乳房係合部材から移動することを可能にする。固相試料採取媒体は、前記試料採取筐体内に取り外し可能に装着され、かつ前記乳房係合部材と流体接続している前記カートリッジの第１の端部を有するカートリッジ内に含まれる粒子状媒体であってもよい。ここで、前記カートリッジの第１の端部は、多孔質バリア材料によって覆われている。

別の態様では、本明細書において、個体からの乳頭吸引液を分析するためのシステムが提供される。該システムは、図１に示すような吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む吸収紙と；乳頭吸引液の総タンパク質を可視化し、乳頭吸引液試料からの細胞の数を計数し、又はそれらの組み合わせのための顕微鏡と、を備える。

別の態様では、本明細書において、個体からの乳頭吸引液（ＮＡＦ）試料を分析するためのシステムが提供される。該システムは、図１に示すような、乳頭吸引液試料を吸収するための吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む吸収紙と；乳頭吸引液の総タンパク質を可視化し、乳頭吸引液試料の細胞の数を計数し、又はそれらの組み合わせのための顕微鏡と、を備える。

一実施形態では、乳頭吸引液中のタンパク質の総量は、コロイド状の金属で前記吸収紙を染色することによって検出される。例えば、コロイド状の金属は、コロイド状の金又はコロイド状の銀であってもよい。

システムは、いくつかの実施形態では、実行可能な命令を実行するように構成された随意にネットワーク接続されたコンピュータ処理デバイスと；コンピュータプログラムであって、総タンパク質の含有量、乳頭吸引液の細胞の数、又はそれらの組み合わせを分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールを含むコンピュータプログラムと、をさらに含む。

一実施形態では、コンピュータプログラムは、個体の治療レジメンを指定するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、又は加えて、コンピュータプログラムは、フォトマイクログラム（ｐｈｏｔｏｍｉｃｒｏｇｒａｍ）のデータベース内にフォトマイクログラムを記憶するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、又は加えて、コンピュータプログラムは、分析のデータベース内に分析を記憶するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、又は加えて、コンピュータプログラムは、乳頭吸引液の総タンパク質の含有量又は細胞の数と標準とを比較するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、又は加えて、コンピュータプログラムは、医療提供者又は個体に分析を伝達するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、又は加えて、コンピュータプログラムは、医療提供者又は個体に診断を伝達するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、又は加えて、コンピュータプログラムは、分析を含むレポートを生成するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含んでもよい。

別の態様では、本明細書において、アプリケーションを作成するために、コンピュータ処理デバイスによって実行可能な命令を含むコンピュータプログラムで符号化された非一時的なコンピュータ可読記憶媒体が提供され、アプリケーションは、個体から乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量、個体からの乳頭吸引液試料の細胞の数、又はそれらの組み合わせを分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するように構成されたソフトウェアモジュールと；個体の治療レジメンを指定するように構成されたソフトウェアモジュールと、を含む。

さらに別の態様では、本明細書において、アプリケーションを作成するために、コンピュータ処理デバイスによって実行可能な命令を含むコンピュータプログラムで符号化された非一時的なコンピュータ可読記憶媒体が提供され、アプリケーションは、図１に示すような吸収紙上に吸収される乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量及び／又はの細胞の数を分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するように構成されたソフトウェアモジュールと；個体の治療レジメンを指定するように構成されたソフトウェアモジュールと、を含む。

一実施形態では、モデル又はアルゴリズムは、乳頭吸引液の総タンパク質の含有量又は乳頭吸引液の細胞の数と標準とを比較することを含む。

さらに別の態様では、本明細書において、将来の乳がんのリスクが低い女性を特定する方法が提供される。該方法は、（ａ）図１に示すような吸収紙上に乳頭吸引液の試料を得る工程であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む、工程と；（ｂ）前記試料中のタンパク質の総量を検出する工程と；（ｃ）前記試料から前記細胞の数を判定する工程と；（ｄ）試料がタンパク質を含み、かつ無細胞である場合、乳がんのリスクが最も低いものとして女性を特定する工程と、を含む。

さらに別の態様では、本明細書において、患者の乳がんのリスクを特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法が提供される。該方法は、（ａ）図１に示すような吸収紙上に乳頭吸引液を採取する工程であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む、工程と；（ｂ）溶液で前記吸収紙を洗浄して、もし存在すれば細胞を採取する工程と；（ｃ）前記試料中の細胞の数を計数し、随意に、もし存在すれば前記細胞の細胞診を判定する工程と；（ｄ）金属粒子の懸濁液で前記吸収紙を染色し、前記吸収紙上のタンパク質の濃度を判定する工程と；（ｅ）前記乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記液中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と、乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数又はそれらの組み合わせとを比較する工程と；（ｆ）試料がタンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む場合には、乳がんのリスクがあるものとして、又は乳がんのリスクが低いものとして患者を特定する工程と、を含む。

さらに別の態様では、本明細書において、患者の乳がんのリスクを診断する方法が提供される。該方法は、（ａ）図１に示すような吸収紙上に乳頭吸引液（ＮＡＦ）を採取する工程であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、前記ＮＡＦ試料は、古典的な提供者及び非提供者から取得される、工程と；（ｂ）緩衝溶液で前記吸収紙又を洗浄して、もし存在すれば細胞を採取する工程と；（ｃ）前記試料中の細胞の数を計数し、随意に、もし存在すれば前記細胞の細胞診を判定する工程と；（ｄ）コロイド状の金又はコロイド状の銀で前記吸収紙又は膜を染色し、前記吸収紙上のタンパク質の濃度を判定する工程と；（ｅ）前記乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記液中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と、乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数又はそれらの組み合わせとを比較する工程と；（ｆ）試料がタンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む場合には、乳がんのリスクがあるものとして患者を特定する工程と、を含む。さらに別の態様では、本明細書において、乳頭吸引液（ＮＡＦ）の試料中のタンパク質を検出する方法が提供される。該方法は、図１に示すような吸収紙上にＮＡＦを採取する工程であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む、工程と、コロイド状の金属粒子の懸濁液を用いてタンパク質を検出する工程と、を含み、ここで、方法は、試料あたり０．５ｎｇ〜５００ｎｇの濃度のタンパク質を検出することができる。

さらに別の態様では、本明細書において、乳がんに関連付けられたリスクについての試験材料が提供される。該試験材料は、図１に示すような吸収紙を含み、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、乳頭吸引液の試料は、乳頭吸引液の非産出者（ｎｏｎ−ｙｉｅｌｄｅｒ）として古典的に特徴付けられていた女性から採取され、染色剤は、吸収紙上に採取された乳頭吸引液からタンパク質の存在を検出する。

本明細書において、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙が提供される。前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙やニトロセルロースを含む。吸収紙は、図１に示すような吸収紙を含んでもよい。一実施形態では、吸収紙は、混合セルロースエステル紙を含む。別の実施形態では、吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである。別の実施形態では、吸収紙は、図１に示すようにＬ字型の要素４を含む。

本明細書において、乳頭吸引液（ＮＡＦ）と、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙とを含む組成物が提供される。前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む。

本明細書において、個体からの乳頭吸引液（ＮＡＦ）試料を分析するためのシステムが提供される。該システムは、乳頭吸引液試料を吸収するための吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙と；搾乳器デバイスと、を備える。

一実施形態では、吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである。

別の実施形態では、搾乳器デバイスは、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスです。

特定の実施形態では、本明細書において、個体からの乳頭吸引液（ＮＡＦ）試料を分析するためのシステムが提供される。該システムは、（ａ）ＮＡＦ試料を吸収するための吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙と；（ｂ）乳頭吸引液試料の総タンパク質を判定するためのコロイド状の金属染色剤と、を備える。いくつかの実施形態では、吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである。いくつかの実施形態では、システムは、乳頭吸引液試料の総タンパク質を可視化し、乳頭吸引液試料の細胞の数を計数し、又はそれらの組み合わせのための顕微鏡をさらに備える。いくつかの実施形態では、コロイド状の金属は、コロイド状の金又はコロイド状の銀である。いくつかの実施形態では、システムは、実行可能な命令を実行するように構成された随意にネットワーク接続されたコンピュータ処理デバイスと；コンピュータプログラムであって、乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量、乳頭吸引液試料の細胞の数、又はこれらの組み合わせを分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールと、をさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、個体の治療レジメンを指定するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、フォトマイクログラムのデータベース内にフォトマイクログラムを記憶するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、分析のデータベース内に分析を記憶するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量又は細胞の数と標準とを比較するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、医療提供者又は個体に分析を伝達するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、医療提供者又は個体に診断を伝達するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、分析を含むレポートを生成するために、コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記吸収紙は、図１に示すような装置である。

（参照による組み込み）
各個別の刊行物、特許、又は特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれることがまるで示されているのと同程度に、本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願が本明細書に参照により組み込まれる。

開示の特徴が添付の特許請求の範囲に具体的に記載されている。本組成物、キット及び方法の特徴及び利点のより良い理解は、本開示の実施形態の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明及び添付の図面を参照することによって得られる。

図１は、本明細書中に記載の代表的な吸収紙又は膜の２次元画像を示す。角度寸法は、インチ±１°及び度数で提供される。図１のＡは、紙又は膜の上面図を示す。図１のＢは、側面角の提示（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）を示す。

現在、乳がんのためのいくつかの試験が存在するが、より高感度で信頼性の高い方法が、乳房の初期段階の小さい上皮内がん（ｉｎ ｓｉｔｕ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を検出するために必要である。このような方法は、子宮頸がんの早期発見及び処置のためのＰａｐｉｎｉｃｏｌｏｕスミアの成功した利用よって示唆されるように、乳がんの生存率を著しく改善するはずである。

本明細書において提供される実施形態の方法は、例えば、米国特許第５，７９８，２６６号、米国特許第６，６８９，０７３号；及び米国特許第６，８８７，２１０号（その各々は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載される装置などの、試料採取のために使用することができる適切な搾乳器デバイスを用いて行うことができる。一実施形態では、装置は、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスである。

乳房流体から生物学的試料を取得し、該生物学的試料を操作し、処理するための方法及び装置もまた、本明細書において記載される。好ましくは、これらの方法は、非侵襲的である。これは、方法が非外科的であり、針又はその他の侵襲性装置による乳房への侵入を伴わないことを意味する。本明細書に記載される装置及び方法は、単独で又はオキシトシン刺激と組み合わせて乳房流体を採取するのに有効である。

簡単に言うと、非侵襲的な試料採取を実践するために、特殊化した（ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ）搾乳器デバイスは、真空ポンプ機構と結合された乳房係合部又は乳房係合部材を特長とし、固相試料採取媒体と流動的に接続されてもよい。

乳房液採取装置は、典型的には特殊化した搾乳器デバイスとして提供される。該特殊化した搾乳器デバイスは、乳頭を覆うヒト又は動物の乳房に適用され、かつ実施例１に記載されるような装置の使用に続いて以下においてより詳細に記載されるような乳頭タッチ処置（ｎｉｐｐｌｅ ｔｏｕｃｈ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）と併せて使用することができる

乳頭タッチ処置は、本明細書に記載されるような分離した吸収紙又は膜を各乳頭に適用することにより施すことができる。

吸収紙２（本明細書では「膜」ともいう）は、開示される方法において使用することができ、上皮細胞、及び例えばタンパク質、炭水化物、脂質、核酸、ＲＮＡ、ＤＮＡ、等などのバイオマーカを採取するのに適した任意の材料であり得る。吸収紙２、例えばニトロセルロース、ミクロセルロース、混合セルロースエステル、又は乳頭液試料の採取のための任意の他の適切な材料からなるものを含む。図１のＡは、円形の吸収紙を示しているが、例えば楕円形、正方形、三角形、他の多角形など他の形状もまた、それらが試料採取を収容する限りは本明細書において企図される。

いくつかの実施形態では、吸収紙２は、紙による乳頭及び／又は乳輪の切断が生じない。いくつかの実施形態では、吸収紙２は、紙による乳頭及び／又は乳輪の切断を回避するような形状を有する。

吸収紙２は、金型を用いて大きな製紙原料から紙をプレス加工（ｓｔａｍｐ）することによって形成される。吸収紙２は、乳頭を覆う又は部分的に覆うのに十分大きい。いくつかの実施形態では、吸収紙２は、乳頭を覆うのに十分大きい。ゆえに、吸収紙は、任意のサイズの吸収紙を横切る平均寸法Ａである、直径又は長さが約１．０インチ〜約３．０インチの吸収紙のであり得る。吸収紙２の直径は、例えば、約１．０、約１．１、約１．１５、約１．２、約１．２５、約１．３、約１．３５、約１．４、約１．４５、約１．５、約１．５５、約１．６、約１．６５、約１．７、約１．７５、約１．８、約１．８５、約１．９、約１．９５、約２．０、約２．１、約２．１５、約２．２、約２．２５、約２．３、約２．３５、約２．４、約２．４５、約２．５、約２．５５、約２．６、約２．６５、約２．７、約２．７５、約２．８、約２．８５、約２．９、約２．９５、又は約３．０インチであってもよい。図１のＡは、直径Ａが１．８５インチである吸収紙２の非限定的な例を提供する。いくつかの実施形態では、吸収紙２は、乳房の乳輪を覆う又は部分的に覆う。いくつかの実施形態では、吸収紙２は、乳房の乳輪を覆う。いくつかの実施形態では、吸収紙２は、乳房の乳輪を部分的に覆う。いくつかの実施形態では、吸収紙は、乳頭を覆い、乳房の乳輪まで延びていない。

吸収紙２の厚さは、最適な試料採取を可能にするように変化することができ、厚さが約０．０１インチ〜約０．１インチである材料を含む。例えば、吸収紙２の厚さは、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、約０．０９、又は約０．１インチであってもよい。図１のＢは、厚さが０．０５インチである吸収紙２の非限定的な例を提供する。図１のＢは、厚さが０．０５インチである吸収紙２の側面図を示すが、厚さも同様に変化し得ることが理解されるであろう。

Ｌ字型の要素（本明細書では「スリット」としても特定される）は随意であり、吸収紙２が圧力を低下させ、乳房の内部から流体の流出を生じさせるように圧力変更装置に配置されている場合にはＬ字型の要素は有用である。一実施形態では、吸収紙２は、改造した搾乳器に適合するようなサイズを有し、その寸法は適宜設定される。吸収紙２と関連して随意に使用することができる改造した搾乳器はが本明細書に記載される。

図１のＡのＬ字型の要素４は、ダイカット（ｄｉｅ ｃｕｔ）が紙をプレス加工した後に残る切り欠き（ｃｕｔ ｏｕｔ）である。１つの非限定的な例では、Ｌ字型の要素は、プレス加工処理において切り出したときには、両端にわたって０．０６３インチである（Ｅ）。任意のサイズの装置を横切る平均寸法である、直径又は長さが約１．８５インチ（Ａ）の吸収紙２において、Ｌ字型の要素４の両端は、吸収紙２の中央線から０．２５インチである（Ｂ）。Ｌ字型の要素４の角度（Ｄ）は、１０度〜１７０度の任意の角度（Ｄ）であり得る。１つの非限定的な実施形態では、角度Ｄは、図１のＡに示すように７５度である。図１のＡに示す内円６は、直径が約０．７５インチ（Ｃ）であり、搾乳器デバイス（例えば本明細書に記載のＭＡＳＣＴ（商標）デバイス）において使用されるときにＬ字型のフラップ８が適切に動くように設計された。内円６を指定するダッシュ記号は、図においてガイド線を示す。スリット４は、不完全な三角形で示され、図示されるように、不完全な円を形成するように形作られる。本明細書に記載の測定は、吸収紙の合計サイズに基づいて比例的に調整されることが理解される。

図１のＡは、吸収紙２の１つの非限定的な例の上面図を表す。ダッシュ線は、カット線ではなく、むしろ、吸収紙２の中心が乳頭領域の上方で適合し、それによって、フラップ８が乳頭を十分に覆うようにＬ字型の要素４を整列させるために、製造を容易にする目的で提示されている。

別の実施形態では、吸収紙２は、混合セルロースエステルで作られ、図１のＡ及び図１のＢに示すような形状及び寸法で形成される。

乳房流体を生成する搾乳器デバイスの適用中又は後に、生体試料は、吸収紙を用いて発現乳房流体から採取され、試料は、乳房流体の全乳房流体、全細胞、細胞断片、細胞膜、選択された液体、細胞又は他の固体画分、ならびに乳房流体のタンパク質、糖タンパク質、ペプチド、ヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡなどを含む）、及び生化学的及び分子成分のうちの１つ以上を含むことができる。

本発明の特定の実施形態では、発現乳房流体は、乳房流体の発現時間と同時に又はその後に、搾乳器に流体接続された固相試料採取媒体と接触される。この文脈における適切な固相媒体は、顕微鏡ガラススライド、毛細管、被覆されたチューブ、マイクロタイターウェル又はプレート、膜、フィルタ、アフィニティーカラム、ドットブロットマトリックス、ビーズ、樹脂、及び所望のアッセイに好適に組み込みのために乳房流体の所望の成分を選択的に吸着、結合、濾過、分割し、もしくは処理する他の媒体を含む。

本明細書において、将来の乳がんのリスクが低い女性を特定する方法が提供される。該方法は、乳頭吸引液の試料を得る工程と；前記試料中のタンパク質に対して試験を行う工程と；前記試料中の細胞に対して試験する工程とを含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞である試料に関連付けられている。

また、本明細書において、乳がんに対する患者のリスクを特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法が提供される。該方法は、汎用コンピュータを用いて、乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記試料中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と及び／又は乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数とを比較する工程を含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む試料に関連付けられている。

乳がんのリスクが最も低いものであると特定された患者集団は、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む試料に関連付けられている。一実施形態では、試料は、細胞を含まない（すなわち、無細胞である）。別の実施形態では、低リスクは、タンパク質を含み、かつ１つの細胞を含む試料に関連付けられている。乳がんのリスクは、細胞の数の増加と共に増加する。

本明細書において提供される方法を用いて診断されるべき患者は、古典的には、乳頭吸引液（ＮＡＦ）の非分泌者及び分泌者と指定されていた者を含む。

一実施形態では、患者は、古典的には、乳頭吸引液の非分泌者として指定される。

乳頭吸引液試料は、吸収紙又は膜上に採取される。本発明の方法において使用することができる吸収紙又は膜は、図１に示すようなサイズ及び寸法を有する紙を含む。吸収紙は、例えば、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含んでもよい。この新しいデザインは、ＮＡＦ採取のために現在市販されている紙に比べて試料採取中の乳頭組織の切断を著しく少なくする結果をもたらす。

吸収紙又は膜は洗浄され、流出液は採取され、細胞の数について評価される。一実施形態では、試料中に存在する場合には、細胞の細胞診（ｃｙｔｏｌｏｇｙ）は、限定されないが、顕微鏡法、フローサイトメトリー、免疫組織化学法、又はそれらの組み合わせを含む任意の従来の方法を用いて分析される。試料中に存在する場合には、細胞ががん細胞の１つ以上の特性を含んでいれば、細胞は正常であると臨床医は判定することができる。１つの非限定的な例では、細胞試料は、溶血素及びエオシンで染色されてもよい。

本明細書に記載の方法により測定されたタンパク質は、試料の総タンパク質の含有量である。その後、紙は、コロイド状の金又はコロイド状の銀に暴露され、総タンパク質の含有量（濃度）が、従来の方法又は本明細書において記載される方法を使用して判定される。

一態様では、試料が約５０ｐｇ〜約０．５ｎｇのタンパクを含み、かつ細胞を含まない場合には、患者は乳がんのリスクが低いものとして特定される。

代替的には、試料が少なくとも約３００ｎｇのタンパク質及び２つ以上の細胞を含む場合には、患者は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定され、又は乳がんリスクが中又は高いとして診断される。一実施形態では、試料中のタンパク質濃度が約３００ｎｇのタンパク質〜約２μｇのタンパク質であり、患者は、乳がんのリスクが高いものであると診断され、かつ場合によっては、さらなる評価が必要であると特定される。試料の細胞画分は、このような場合には、約２つの細胞〜約５０個の細胞を含んでいるかもしない。このような細胞画分は、別の場合には、少なくとも１０個の細胞を含んでいるかもしれない。

本明細書においては、図１に示すような特性及び寸法を有する吸収紙又は膜が提供される。ここで、吸収紙又は膜は、ミクロセルロース、混合セルロースエステ患ル紙又はニトロセルロースを使用して作られる。一実施形態では、吸収紙又は膜は、混合セルロースエステルを含む。

本吸収紙又は膜の著しい進歩は、現在の濾紙が切断するほどには、組織を切断しないことであり、したがって、評価を受けている患者は、採取処置中に、痛みや不快をあまり感じない。一実施形態では、吸収紙又は膜に暴露される組織は、乳頭組織である。

本明細書において、乳がんのリスクが低い患者を特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法において本明細書に記載されるような吸収紙又は膜の使用が提供される。一態様では、本明細書において記載される任意の方法において、又は任意の使用のための乳頭吸引液採取の任意の他の方法において、吸収紙又は膜が使用される。

乳頭吸引液（ＮＡＦ）の試料中のタンパク質を検出する方法は、吸収紙又は膜上にＮＡＦを採取し、コロイド状の金属粒子の懸濁液を用いてタンパク質を検出する工程を含む。ここで、方法は、試料あたり０．５ｎｇ〜５００ｎｇの濃度のタンパク質を検出することができる。金属粒子の懸濁液は、コロイド状の金又はコロイド状の銀を含んでもよい。一実施形態では、金属粒子の懸濁液は、コロイド状の金を含む。

本明細書において、患者の乳がんのリスクを特定し、又は乳がんのリスクが低い患者を診断する方法が提供される。該方法は、吸収紙又は膜上に乳頭吸引液を採取する工程と；緩衝溶液で前記吸収紙又は膜を洗浄して、もし存在すれば細胞を採取する工程と；前記試料中の細胞の数を計数し、随意に、もし存在すれば前記細胞の細胞診を判定する工程と；コロイド状の金又はコロイド状の銀で前記吸収紙又は膜を染色し、前記濾紙上のタンパク質の濃度を判定する工程と；前記乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記液中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と及び／又は乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数とを比較する工程と、を含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、又は１つの細胞を含む試料に関連付けられている。

本明細書において、患者の乳がんのリスクを診断する方法が提供される。該方法は、吸収紙又は膜上に乳頭吸引液を採取する工程であって、前記ＮＡＦ試料は、古典的な提供者及び非提供者から取得される、工程と；緩衝溶液で前記吸収紙又は膜を洗浄して、もし存在すれば細胞を採取する工程と；前記試料中の細胞の数を計数し、随意に、もし存在すれば前記細胞の細胞診を判定する工程と；コロイド状の金又はコロイド状の銀で前記吸収紙又は膜を染色し、前記濾紙上のタンパク質の濃度を判定する工程と；前記乳頭吸引液試料中のタンパク質の濃度及び前記液中の細胞の数と、乳がんを有することが知られている患者の集団と及び／又は乳がんを有しないことが知られている患者の集団におけるタンパク質の濃度及び細胞の数とを比較する工程と、を含み、ここで、最も低いリスクは、タンパク質を含み、かつ無細胞であるか、１つの細胞を含む試料に関連付けられている。

一実施形態では、試料は、無細胞であり、患者は、乳がんのリスクが最も低いものとして特定される。別の実施形態では、試料は、１つの細胞を含み、患者は、乳がんのリスクが低いものとして特定される。さらに別の実施形態では、試料は、２つより多い細胞を含み、患者は、さらなる評価が必要であると特定される。

一実施形態では、各乳房の総タンパク質濃度が判定され、１つ試料の総タンパク質濃度が３００ｎｇのよりも大きい場合には、患者は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定される。代替的には、各乳房の総タンパク質濃度が判定され、各試料の総タンパク質濃度が２００ｎｇ以下のタンパク質である場合には、患者は、乳がんのリスクが低いものとして識別される。

一実施形態では、乳房組織のマッサージ、及び以下実施例１において記載されるようなＭＡＳＣＴ（商標）デバイスを用いる吸引に続いて、乳頭吸引液が吸収紙又は膜上に採取される。本明細書において使用されるように、「ＭＡＳＣＴ（商標）デバイス」は、Ｑｕａｙ ｅｔ ａｌ．による米国特許第６，２８７，５２１号に記載される装置を指す。その全体が本明細書に組み込まれる。１つの非限定的な例では、患者の乳器から生体試料を採取するための試料採取装置は、前記患者の乳房の少なくとも乳頭部分を受け取り、それと吸引シールを形成するようなサイズ及び寸法を有する非多孔質材料で構成された乳房係合部材と；前記乳房係合部材と流体接続している、発現乳房液の試料を受け取るための固相試料採取媒体と；前記乳房係合部材と気体接続している、乳房流体発現を容易にするために乳房係合部材を介して負圧を発生させるための真空ポンプ手段と、を備えることができ、ここで、前記固相試料採取媒体は、顕微鏡ガラススライド、毛細管、採取チューブ、カラム、マイクロカラム、ウェル、プレート、膜、フィルタ、樹脂、無機マトリックス、ビーズ、粒子状クロマトグラフ媒体、プラスチック微小粒子、ラテックス粒子、被覆されたチューブ、被覆されたテンプレート、被覆されたビーズ、被覆されたマトリックス、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。試料採取装置は、前記乳房係合部材と試料採取筐体とを取り外し可能に結合するための取り外し可能結合手段を含んでもよい。いくつかの例では、固相試料採取媒体は、前記乳房係合部材と気体接続している試料採取筐体内に一体的に又は取り外し可能に装着された支持部材によって支持されている。支持部材は、円盤状であってもよく、前記乳房係合部材と前記試料採取筐体との間に介在されている。さらに、支持部材は、上側及び下側保持リングを有してもよく、吸収性のシート又は吸着材料を支持する。支持部材は、限定されないが、毛細管、被覆されたチューブ、カラム、マイクロカラム、プレート、ウェル、顕微鏡スライド、又はそれらの組み合わせを含む固相試料採取テンプレートであってもよい。支持部材は、流体保持ウェルを定義し、少なくとも１つの空気流路を含み、それにより、負圧が空気流路を通って前記乳房係合部材に移動し、及び前記乳房係合部材から移動することを可能にする。固相試料採取媒体は、前記試料採取筐体内に取り外し可能に装着され、かつ前記乳房係合部材と流体接続している前記カートリッジの第１の端部を有するカートリッジ内に含まれる粒子状媒体であってもよい。ここで、前記カートリッジの第１の端部は、多孔質バリア材料によって覆われている。

本発明の各アッセイの実行の前に又は同時に、十分な試料量が得られる場合には、試料の起源及び／又は品質を検証するために、予備的な評価を行うことは有用であり得る。このような予備的な評価の焦点は、発現乳房流体から採取された試料が実際には乳房起源であり、乳頭の周囲の皮膚からの汗などの他の潜在的な汚染物質で汚染されていないことを検証するためである。これらの試料の検証の目的として、哺乳類の乳房流体中に存在することが知られている乳房流体マーカを識別し、好ましくは乳房流体のための非常に特異的なマーカである（すなわち、典型的には乳房流体中に常に存在し、他の潜在的に汚染する体液及び組織のすべて又はほとんどが存在しないマーカ）様々なアッセイが利用可能である。しかしながら、本発明の方法内で乳房流体マーカについての特異性の許容可能なレベルは、マーカが他の体液中に存在しているかもしれないが、乳房流体に存在することが単に知られているマーカによって提供される。１つのこのようなマーカは、ヒト血清、尿、唾液、涙液、鼻汁、膣分泌物、精液、及び乳房流体の正常成分である酵素リゾチームである。リゾチーム（ムラミダーゼ）は、細胞溶解をもたらす様々な微生物のムコ多糖細胞壁におけるβ１，４−グリコシド結合を加水分解する酵素である。リゾチームの定量的測定は、Ｋａｌｌｅｓｔａｄ，Ｓａｎｏｆｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｃｈａｓｔａ，Ｍｉｎｎ．）から入手可能なＱｕａｎｔｉｐｌａｔｅ（登録商標）リゾチーム試験キットとともに提供される説明書に詳細に記載されている周知の寒天平板拡散法によって容易に達成され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

リゾチームよりも特異的である試料の検証のためのその他の乳房流体マーカは、本発明の方法の範囲内が好ましく、公開され、一般的に知られている情報に基づく方法の実施形態に容易に組み込むことができる。タンパク質、及び乳房流体中に特異的に発現又は濃縮した他の生物学的物質は、これらのマーカの中でも有用である。この文脈における多様な多数の適切なマーカは、特徴付けられており、アフィニティー精製されたモノクローナル抗体を含む特異的な抗体を開発するために前々から使用されてきた。これらの抗体は、乳房流体試料の起源及び品質を検証するために、選択された乳房流体マーカの存在又は非存在を判定し及び／又は選択された乳房流体マーカを定量化するように免疫学的プローブとして用いることができる。本発明内で使用される特に興味のある乳房流体マーカは、正常な及びがん性の乳腺上皮細胞により特徴的に発現した特異的なサイトケラチンを含む。このがん性の乳腺上皮細胞に対して抗体プローブの特異的なパネルが既に開発されている（例えばＮａｇｌｅ，Ｊ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３４：８６９−８８１，１９８６を参照，その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。また、ヒト乳脂肪グロブリン（ＨＭＦＧ）タンパク質の糖タンパク質成分に対応する対応するヒト乳腺上皮抗原（ＨＭＥ−Ａｇｓ）が乳房流体マーカとして有用であり、それに対する特異的な抗体（例えば抗ＨＭＦＧ１、Ｕｎｉｐａｔｈ、Ｕ．Ｋ．）もまた入手可能である（Ｒｏｓｎｅｒ ｅｔ aｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｖｅｓｔ．１３：５７３−５８２，１９９５；Ｃｅｒｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５８２−５８６，１９８２；Ｃｅｒｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．１５：１６１−１７４，１９９０を参照、各々のその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

この関連において使用される用語「コロイド状の金属粒子」は、金属、金属化合物、又は金属又は金属化合物又で被覆された核からなる粒子の分散液、好ましくはゾルを含むことを意味する。コロイド状の金属粒子は、金、銀、白金又は水酸化鉄等の懸濁物を調製するために記載された等の当技術分野で周知の手順に従い調製することができる。本明細書において使用される用語「コロイド状の金」及び「コロイド状の金組成物」は、流体（例えば水又は水性緩衝液）中に一様に分散したサブミクロンサイズの金粒子の懸濁液を指す。定量アッセイに利用されるコロイド状の金組成物は、高濃度の金粒子を含む。一例では、コロイド状の金組成物は、３．５×１０^１２〜７．０×１０^１２粒子／ｍｌ、例えば（３．５〜５．２５）×１０^１２粒子／ｍｌの範囲にわたる金粒子濃度を有する。

本方法は、例えば免疫金標識などの免疫細胞化学法の従来の技術を用いて行うことができる。このような処置は、例えば、参照により組み込まれる以下の文章におい記載される：（１）Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｇｏｌｄ−Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｈａｙａｔ Ｍ，（１９８９−１９９０）（３ ｖｏｌｕｍｅｓ），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．（Ｈａｒｄｂａｃｋ）；（２）Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｇｏｌｄ−Ａ Ｎｅｗ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｆｏｒ Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍａｒｋｉｎｇ，Ｂｅｅｓｌｅｙ Ｊ （１９８９），Ｒｏｙａｌ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｎｏ １７．Ｏｘｆｏｒｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．（Ｐａｐｅｒｂａｃｋ）；（３）Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｏ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｃｕｒｒｅｎｔ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｂｌｅｍｓ，Ｐｏｌａｋ Ｊ ａｎｄ Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ ５（１９８４）Ｒｏｙａｌ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｎｏ １１．Ｏｘｆｏｒｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．（Ｐａｐｅｒｂａｃｋ）；（４）Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｏｌａｋ Ｊ ａｎｄ Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ ５（１９８６）（２ｎｄ ｅｄ．），Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，Ｏｘｆｏｒｄ．（Ｈａｒｄｂａｃｋ）；及び（５）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｕｌｌｏｃｋ Ｇ ａｎｄ Ｐｅｔｍｓｚ Ｐ（１９８２−１９８９）（４ ｖｏｌｕｍｅｓ）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ。

処置はまた、例えば、以下に記載されている：Ｍａｒｃ Ｍｏｅｒｅｍａｎｓ，ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｍｅｔａｌ （Ｇｏｌｄ ｏｒ Ｓｉｌｖｅｒ）Ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｌｏｔｓ ｏｎ Ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ」ｉｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １４５，３１５−３２１（１９８５）；Ｄａｎｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｇｏｌｄ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１：Ｎｏ．１２，１３９４−１３９８（１９８３）；Ｄｅ Ｍｅｙ，Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｇｏｌｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈａｐｔ．６，ｐｐ．８２−１１２（１９８３）；及びＵ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，９２０，０５９ ｂｙ Ｍｏｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．。

最適なｐＨ及び濃度に調節される際にタンパク質及び核酸に結合するコロイド状の金属粒子の例は、白金、金、銀、銅などの金属、及び金属化合物、例えば、ヨウ化銀、臭化銀、銅水和酸化物、酸化鉄、水酸化鉄又は水和酸化物、水酸化アルミニウム又は水和酸化物、水酸化クロム又は水和酸化物、バナジウム酸化物、硫化砒素、マンガン水酸化物、硫化鉛、銅化合物、硫化水銀、硫酸バリウム及び二酸化チタンなどの金、銀、白金、鉄、又は銅化合物である。上述した金属又は金属化合物で被覆された核からなるコロイドもまた使用することができる。粒子は、金属又は金属化合物のコロイドと同様の特性を有するが、サイズ、密度及び金属含有量は最適に組み合わせることができる。一般に、結合タンパク質のための最適なｐＨに調整することができ、かつ肉眼で観察するのに十分なタンパク質染色において色強度を与えるすべてのコロイド状の金属粒子又は金属化合物を使用することができる。好ましくは、感度は、金属の金や銀を用いて得られるものと同等以上である。

タンパク質の染色のために、特に良好な結果が金、銀、及び水酸化鉄コロイドを用いて得られる。

コロイド状の金属又は金属化合物粒子の粒径は、約１〜約１００ｎｍであり得る。適切なｐＨは、結合が最大であり、かつ最も強烈な色が得られるｐＨである。タンパク質とコロイド状の金属粒子とが反対の正味電荷を有する時に最大の結合が生じ得る。このプロセスにおいて、タンパク質は、タンパク質のｐIに近いｐＨで、コロイド状の金属粒子と相互作用する。ｐＨの調整は、任意の通常のやり方で達成することができる。約１０ｍＭの最終濃度のコロイド状の金属粒子にストック用緩衝液を添加することは、本明細書において使用される１つの方法を表す。

コロイド状の金属粒子の適切な濃度は、実用的なインキュベーション時間（２、３分から１日まで）以内に全彩度（ｆｕｌｌ ｃｏｌｏｒ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）を与えるものである。これは、コロイド状の金属粒子が準備された原料の適切な濃度を選択することによって得られ、又は当技術分野で周知の方法による希釈又は濃縮によって得ることができる。

いくつかの例では、吸収紙又は膜は、染色処置の前に洗浄される。この洗浄は、付着した干渉材料を除去するように使用することができる。吸収紙又は膜のこのような洗浄は、少なくとも１つの物質で随意に補充された緩衝液又は水に吸収紙又は膜を接触させることによって行うことができる。該少なくとも１つの物質は、コロイド又は金属化合物粒子のタンパク質への特異的結合として定義される染色の特異性、及びタンパク質が固定されていないマトリックスを固定するそれらの部分のこのような特異的結合の非存在を促進する。ｐＨを調整する前又は調整した後に、コロイド状の金属粒子に、必要に応じて界面活性剤を添加してもよい。このような界面活性剤は、本明細書においては、Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、ＴｒｉｘｉｏｎＸ−１００（オクチルフェノキシポリエポキシエタノール）及びミリスチルトリメチル（ｍｙｒｉｓｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌ）アンモニウムブロミドが挙げられる。同様の界面活性剤、すなわち表面活性物質もまた使用され得ることが理解される。コロイド状の金属粒子に添加される界面活性剤はまた、コロイド状の金属粒子のタンパク質への特異的結合を促進するように用いることができる。

随意に、コロイド状の金属粒子によって形成された光信号は、例えば、銀又は金含有化合物の物理現象液などの適切なエンハンサーによって増強することができ、又は、コロイド状の金属の金属イオンへの変換後に当該技術分野で既知の金属イオンの色識別方法によって修正及び／又は増強され得る。

例えば、生成された着色信号及び結合したコロイド状の金属粒子の特性を肉眼で読み取ること、又はデンシトメトリーなど当該技術分野おいて周知の分光学的技術を用いること等の当該技術分野における従来の手段を用いて、タンパク質を検出し、定量化することができる。このような処置では、混合物の光学濃度は、５４０〜７００ｎｍの範囲の波長で測定することができ、生体分子の濃度は、光学濃度の値に基づいて判定される。一実施形態では、光学濃度は、５９０ｎｍで測定する。タンパク質は、例えば、約０．５ｐｇ、約１ｐｇ、約１００ｐｇ、約２５０ｐｇ、約３５０ｐｇ、約５００ｐｇ、７５０ｐｇ、約１ｎｇ、１００ｎｇ、約２５０ｎｇ、約５００ｎｇ、約７５０ｎｇ、及び約１μｇの濃度で本明細書に開示される方法を使用して検出することができる。一実施形態では、タンパク質は、約０．５ｎｇで検出される。

例えば、緩衝溶液を用いて吸収紙又は膜などのマトリックスからの細胞を洗浄するための方法は、当該分野で周知であり、本明細書において企図される。このような洗浄液の流出物は、限定されないが、顕微鏡法、免疫細胞化学法及びフローサイトメトリーを含む方法を用いてさらに分析することができる。例えば、乳頭吸引液試料を含む吸収紙又は膜を洗浄して細胞を取り除いた後に、洗浄溶液は、顕微鏡を用いてアッセイすることができ、溶液中の細胞の数が判定される。溶液中に存在する細胞の形態を判定することができる。さらに、細胞が存在する場合には、細胞が正常なプロファイルを有するか、又はがん細胞を示す１つ以上のマーカを有するかを判定するために、１つ以上の細胞外及び／又は細胞内マーカについて、細胞を染色することができる。例えば、細胞は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ｐ６３は、サイクリン、サイトケラチン、又はマーカの存在、非存在又はレベルに基づいて細胞ががん細胞又は正常細胞であることを示すことができる任意の他のマーカの存在又は非存在について、細胞を分析することができる。標識された抗体はまた、当技術分野で周知の従来のフローサイトメトリー技術を用いてこのような試料中の細胞を染色するように使用することができる。細胞を分析するさらなる方法が本明細書において以下の実施例２で提供される。

（デジタル処理デバイス）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法、システム、及びソフトウェアは、デジタル処理デバイス又はその使用を含む。さらなる実施形態では、デジタル処理デバイスは、デバイスの機能を実行する１つ以上のハードウェアの中央処理デバイス（ＣＰＵ）を含む。さらに別の実施形態では、デジタル処理デバイスは、実行可能な命令を実行するように構成されたオペレーティングシステムをさらに含む。いくつかの実施形態では、デジタル処理デバイスは、コンピュータネットワークに随意に接続される。さらなる実施形態では、デジタル処理デバイスは、Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂにアクセスするように、Ｉｎｔｅｒｎｅｔに随意に接続される。さらに別の実施形態では、デジタル処理デバイスは、クラウドコンピューティングインフラストラクチャに随意に接続される。他の実施形態では、デジタル処理デバイスは、イントラネットに随意に接続される。他の実施形態では、デジタル処理デバイスは、データ記憶装置に随意に接続される。

本明細書の記載によれば、適切なデジタル処理デバイスは、非限定的な例として、サーバコンピュータ、デスクトップコンピュータ、ラップトップコンピュータ、ノートブックコンピュータ、サブノートブックコンピュータ、ネットブックコンピュータ、ネットパッドコンピュータ、セットトップコンピュータ、ハンドヘルドコンピュータ、インターネット機器、モバイルスマートフォン、タブレットコンピュータ、携帯情報端末、ゲーム機、及び車両を含む。当業者は、多くのスマートフォンが本明細書に記載のシステムにおける使用に適していることを認識する。当業者はまた、随意のコンピュータネットワーク接続を有する選択テレビ、ビデオプレーヤ、及びデジタル音楽プレイヤーが本明細書に記載のシステムにおける使用に適していることを認識する。適切なタブレットコンピュータは、当業者に周知のブックレット、スレート、及びコンバーチブルの構成を有するものを含む。

いくつかの実施形態では、デジタル処理デバイスは、実行可能な命令を実行するように構成されたオペレーティングシステムを含む。オペレーティングシステムは、デバイスのハードウェアを管理し、アプリケーションの実行のためのサービスを提供するプログラム及びデータを含む、例えばソフトウェアである。当業者は、適切なサーバオペレーティングシステムが、非限定的な例として、ＦｒｅｅＢＳＤ、ＯｐｅｎＢＳＤ、ＮｅｔＢＳＤ（登録商標）、Ｌｉｎｕｘ（登録商標）、Ａｐｐｌｅ（登録商標）、Ｍａｃ ＯＳ Ｘ Ｓｅｒｖｅｒ（登録商標）、Ｏｒａｃｌｅ（登録商標）のＳｏｌａｒｉｓ（登録商標）、Ｗｉｎｄｏｗｓ Ｓｅｒｖｅｒ（登録商標）、及びＮｏｖｅｌｌ（登録商標）のＮｅｔＷａｒｅ（登録商標）を含むことを認識する。当業者は、非限定的な例として、適切なパーソナルコンピュータのオペレーティングシステムが、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）のＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）、Ａｐｐｌｅ（登録商標）のＭａｃ ＯＳ Ｘ（登録商標）、ＵＮIＸ（登録商標）、及びＧＮＵ／Ｌｉｎｕｘ（登録商標）などのＵＮIＸ（登録商標）のようなオペレーティングシステムを含むことを認識する。いくつかの実施形態では、オペレーティングシステムは、クラウドコンピューティングによって提供される。当業者はまた、適切な携帯スマートフォンのオペレーティングシステムが、非限定的な例として、Ｎｏｋｉａ（登録商標）のＳｙｍｂｉａｎ（登録商標）ＯＳ、Ａｐｐｌｅ（登録商標）のｉＯＳ（登録商標）、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｍｏｔｉｏｎ（登録商標）のＢｌａｃｋＢｅｒｒｙ ＯＳ（登録商標）、Ｇｏｏｇｌｅ（登録商標）のＡｎｄｒｏｉｄ（登録商標）、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）のＷｉｎｄｏｗｓ Ｐｈｏｎｅ（登録商標）ＯＳ、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）のＷｉｎｄｏｗｓ Ｍｏｂｉｌｅ（登録商標）ＯＳ、Ｌｉｎｕｘ（登録商標）、及びＰａｌｍ（登録商標）のＷｅｂＯＳ（登録商標）を含むことを認識する。

いくつかの実施形態では、デバイスは、記憶及び／又はメモリデバイスを含む。記憶及び／又は記憶装置は、一時的又は永続的にデータやプログラムを記憶するために使用される１つ以上の物理装置である。いくつかの実施形態では、デバイスは、揮発性メモリであり、記憶された情報を維持するために電力を必要とする。いくつかの実施形態では、デバイスは、不揮発性メモリであり、デジタル処理デバイスに電力が供給されないときに記憶された情報を保持する。さらなる実施形態では、不揮発性メモリはフラッシュメモリを含む。いくつかの実施形態では、不揮発性メモリは、ダイナミックランダムアクセスメモリ（ＤＲＡＭ）を含む。いくつかの実施形態では、不揮発性メモリは、強誘電体ランダムアクセスメモリ（ＦＲＡＭ）を含む。いくつかの実施形態では、不揮発性メモリは、相変化ランダムアクセスメモリ（ＰＲＡＭ）を含む。他の実施形態では、デバイスは、非限定的な例として、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ、フラッシュメモリデバイス、磁気ディスクドライブ、磁気テープドライブ、光学ディスクドライブ、及びクラウドコンピューティングベースのストレージを含む記憶デバイスである。さらなる実施形態では、記憶及び／又はメモリデバイスは、本明細書に開示されるデバイスなどデバイスの組合せである。

いくつかの実施形態では、デジタル処理デバイスは、ユーザに視覚情報を送信するためのディスプレイを含む。いくつかの実施形態では、ディスプレイは、陰極線管（ＣＲＴ）である。いくつかの実施形態では、ディスプレイは、液晶ディスプレイ（ＬＣＤ）である。さらなる実施形態では、ディスプレイは、薄膜トランジスタ液晶ディスプレイ（ＴＦＴ−ＬＣＤ）である。いくつかの実施形態では、ディスプレイは、有機発光ダイオード（ＯＬＥＤ）ディスプレイである。様々なさらなる実施形態では、ＯＬＥＤディスプレイ上にパッシブマトリックスＯＬＥＤ（ＰＭＯＬＥＤ）又はアクティブマトリクスＯＬＥＤ（ＡＭＯＬＥＤ）ディスプレイがある。いくつかの実施形態では、ディスプレイは、プラズマディスプレイである。他の実施形態では、ディスプレイは、ビデオプロジェクタである。さらに別の実施形態では、ディスプレイは、本明細書に開示されるデバイスなどのデバイスの組合せである。

いくつかの実施形態では、デジタル処理デバイスは、ユーザから情報を受信するための入力デバイスを含む。いくつかの実施形態では、入力デバイスは、キーボードである。いくつかの実施形態では、入力デバイスは、非限定的な例として、マウス、トラックボール、トラックパッド、ジョイスティック、ゲームコントローラ、又はスタイラスを含むポインティングデバイスである。いくつかの実施形態では、入力デバイスは、タッチスクリーン又はマルチタッチスクリーンである。他の実施形態では、入力デバイスは、音声又は他のサウンド入力をキャプチャするためのマイクロホンである。他の実施形態では、入力デバイスは、動き又は視覚入力をキャプチャするためのビデオカメラである。さらに別の実施形態では、入力デバイスは、本明細書に開示されるデバイスなどのデバイスの組合せである。

（非一時的なコンピュータ可読記憶媒体）
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法、システム、及びソフトウェアは、随意にネットワーク接続されたデジタル処理デバイスのオペレーティングシステムによって実行可能な命令を含むプログラムで符号化された１つ以上のコンピュータ可読記憶媒体を含む。さらなる実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、デジタル処理デバイスの有形（ｔａｎｇｉｂｌｅ）の構成要素である。さらに別の実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、デジタル処理デバイスから随意に取り外し可能である。いくつかの実施形態では、コンピュータ可読記憶媒体は、非限定的な例として、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ、フラッシュメモリデバイス、固体メモリ、磁気ディスクドライブ、磁気テープドライブ、光学ディスクドライブ、クラウドコンピューティングシステム及びサービス等を含む。いくつかの場合において、プログラム及び命令は、永久に、実質的に永久に、半永久的に、又は非一時に媒体において符号化される。

（コンピュータプログラム）
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法、システム、及びソフトウェアは、少なくとも１つのコンピュータプログラム、又はその使用を含む。コンピュータプログラムは、デジタル処理デバイスのＣＰＵで実行可能であり、かつ指定されたタスクを実行するために書かれた命令のシーケンスを含む。本明細書で提供される開示に照らすと、当業者は、コンピュータプログラムが様々な言語の様々なバージョンで書かれてもよいことを認識する。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、命令の１つのシーケンスを含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、命令の複数のシーケンスを含む。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、１つの場所から提供される。他の実施形態では、コンピュータプログラムは、複数の場所から提供される。様々な実施形態では、コンピュータプログラムは、１つ以上のソフトウェアモジュールを含む。様々な実施形態では、コンピュータプログラムは、１つ以上のウェブアプリケーション、１つ以上のモバイルアプリケーション、１つ以上のスタンドアロンアプリケーション、１つ以上のウェブブラウザのプラグイン、拡張、アドイン、又はアドオン、又はそれらの組み合わせの一部又は全部を含む。

（ウェブアプリケーション）
いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、ウェブアプリケーションを含む。本明細書で提供される開示に照らすと、当業者は、ウェブアプリケーションが、様々な実施形態では、１つ以上のソフトウェアフレームワーク及び１つ以上のデータベースシステムを利用することを認識する。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）の．ＮＥＴ又はＲｕｂｙ ｏｎ Ｒａｉｌｓ（ＲｏＲの）などのソフトウェアフレームワーク上に作成される。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、非限定的な例として、リレーショナル、非リレーショナル、オブジェクト指向、連想、及びＸＭＬデータベースシステムを含む１つ以上のデータベースシステムを利用する。さらなる実施形態では、適切なリレーショナルデータベースシステムは、非限定的な例として、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）のＳＱＬサーバ、ｍｙＳＱＬ（登録商標）、及びＯｒａｃｌｅ（登録商標）を含む。当業者はまた、ウェブアプリケーションが、様々な実施形態では、１つ以上の言語の１つ以上のバージョンで書かれていることを認識する。ウェブアプリケーションは、１つ以上のマークアップ言語、プレゼンテーション定義言語、クライアント側のスクリプト言語、サーバ側のコーディング言語、データベースクエリ言語、又はそれらの組み合わせで書かれてもよいことを認識する。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、Ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ Ｍａｒｋｕｐ Ｌａｎｇｕａｇｅ（ＨＴＭＬ）、Ｅｘｔｅｎｓｉｂｌｅ Ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ Ｍａｒｋｕｐ Ｌａｎｇｕａｇｅ（ＸＨＴＭＬ）、又はｅＸｔｅｎｓｉｂｌｅ Ｍａｒｋｕｐ Ｌａｎｇｕａｇｅ（ＸＭＬ）などのマークアップ言語で、ある程度書き込まれる。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、Ｃａｓｃａｄｉｎｇ Ｓｔｙｌｅ Ｓｈｅｅｔｓ（ＣＳＳ）などのプレゼンテーション定義言語で、ある程度書き込まれる。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、Ａｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ Ｊａｖａｓｃｒｉｐｔ及びＸＭＬ（ＡＪＡＸ）、フラッシュ（登録商標）のＡｃｔｉｏｎｓｃｒｉｐｔ、Ｊａｖａｓｃｒｉｐｔ、又はＳｉｌｖｅｒｌｉｇｈｔ（登録商標）などのクライアント側のスクリプト言語で、ある程度書き込まれる。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、Ａｃｔｉｖｅ Ｓｅｒｖｅｒ Ｐａｇｅｓ（ＡＳＰ）、ＣｏｌｄＦｕｓｉｏｎ（登録商標）、Ｐｅｒｌ、Ｊａｖａ（商標）、ＪａｖａＳｅｒｖｅｒ Ｐａｇｅｓ（ＪＳＰ）、Ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ Ｐｒｅｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（ＰＨＰ）、Ｐｙｔｈｏｎ（商標）、Ｒｕｂｙ、Ｔｃｌ、Ｓｍａｌｌｔａｌｋ、ＷｅｂＤＮＡ（登録商標）、又はＧｒｏｏｖｙなどのサーバ側のコーディング言語で、ある程度書き込まれる。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ Ｑｕｅｒｙ Ｌａｎｇｕａｇｅ（ＳＱＬ）などのデータベースクエリ言語で、ある程度に書き込まれる。いくつかの実施形態では、ウェブアプリケーションは、IＢＭ（登録商標）のＬｏｔｕｓ Ｄｏｍｉｎｏ（登録商標）などのエンタープライズサーバ製品を統合する。アーティストが情報及びメディアファイルをアップロードすることを可能にするアーティストのためのキャリア開発ネットワークを提供するためのウェブアプリケーションは、いくつかの実施形態では、メディアプレーヤ要素を含む。様々なさらなる実施形態では、メディアプレーヤ要素は、非限定的な例として、Ａｄｏｂｅ（登録商標）のＦｌａｓｈ（登録商標）、ＨＴＭＬ５、Ａｐｐｌｅ（登録商標）のＱｕｉｃｋＴｉｍｅ（登録商標）、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）のＳｉｌｖｅｒｌｉｇｈｔ（登録商標）Ｊａｖａ（商標）、及びＵｎｉｔｙ（登録商標）を含む多くの適切なマルチメディア技術のうちの１つ以上を利用する。

（モバイルアプリケーション）
いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、携帯デジタル処理デバイスに提供されるモバイルアプリケーションを含む。いくつかの実施形態では、モバイルアプリケーションは、モバイルデジタル処理デバイスが製造される時に、モバイルデジタル処理デバイスに提供される。他の実施形態では、モバイルアプリケーションは、本明細書に記載のコンピュータネットワークを介してモバイルデジタル処理デバイスに提供される。

本明細書で提供される開示に鑑みると、モバイルアプリケーションは、当該分野に周知のハードウェア、言語、及び開発環境を使用して当業者に周知の技術によって作成される。当業者は、モバイルアプリケーションが複数の言語で書かれることを認識する。適切なプログラミング言語は、非限定的な例として、Ｃ、Ｃ＋＋、Ｃ＃、Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ−Ｃ、Ｊａｖａ（商標）、Ｊａｖａｓｃｒｉｐｔ、Ｐａｓｃａｌ、Ｏｂｊｅｃｔ Ｐａｓｃａｌ、Ｐｙｔｈｏｎ（商標）、Ｒｕｂｙ、ＶＢ．ＮＥＴ、ＷＭＬ、及びＣＳＳを有する又は有しないＸＨＴＭＬ／ＨＴＭＬ、又はこれらの組み合わせを含む。

適切なモバイルアプリケーション開発環境は、複数の供給源から利用可能である。市販の開発環境は、非限定的な例として、ＡｉｒｐｌａｙＳＤＫ、ａｌｃｈｅＭｏ、Ａｐｐｃｅｌｅｒａｔｏｒ（登録商標）、Ｃｅｌｓｉｕｓ、Ｂｅｄｒｏｄｋ、Ｆｌａｓｈ Ｌｉｔｅ、．ＮＥＴ Ｃｏｍｐａｃｔ Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ、Ｒｈｏｍｏｂｉｌｅ、及びＷｏｒｋＬｉｇｈｔ Ｍｏｂｌｉｅ Ｐｌａｔｆｏｒｍを含む。非限定的な例として、Ｌａｚａｒｕｓ、ＭｏｂｉＦｌｅｘ、ＭｏＳｙｎｃ、及びＰｈｏｎｅＧａｐを含む他の開発環境が費用をかけずに利用可能である。また、モバイルデバイス製造者は、非限定的な例として、ｉＰｈｏｎｅ及びｉＰａｄ（ｉＯＳ）のＳＤＫ、Ａｎｄｒｏｉｄ（登録商標）のＳＤＫ、ＢｌａｃｋＢｅｒｒｙ（登録商標）のＳＤＫ、ＢＲＥＷのＳＤＫ、Ｐａｌｍ（登録商標）のＯＳのＳＤＫ、ＳｙｍｂｉａｎのＳＤＫ、ｗｅｂＯＳのＳＫＤ、及びＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）のＭｏｂｉｌｅのＳＤＫを含むソフトウェア開発キットを配布する。

当業者は、いくつかの市販フォーラムが、非限定的な例として、Ａｐｐｌｅ（登録商標）のＡｐｐ Ｓｔｏｒｅ、Ａｎｄｒｏｉｄ（登録商標）のＭａｒｋｅｔ、ＢｌａｃｋＢｅｒｒｙ（登録商標）のＡｐｐ Ｗｏｒｌｄ、Ｐａｌｍデバイス用のＡｐｐ Ｓｔｏｒｅ、ｗｅｂＯＳ用のＡｐｐ Ｃａｔａｌｏｇ、Ｍｏｂｉｌｅ用のＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）のＭａｒｋｅｔｐｌａｃｅ、Ｎｏｋｉａ（登録商標）のデバイス用のＯｖｉ Ｓｔｏｒｅ、Ｓａｍｓｕｎｇ（登録商標）のＡｐｐｓ、及びＮｉｎｔｅｎｄｏ（登録商標）のＤＳｉ Ｓｈｏｐを含むモバイルアプリケーションの配布のために利用可能であることを認識する。

（スタンドアロンアプリケーション）
いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、スタンドアロンアプリケーションを含む。該スタンドアロンアプリケーションは、独立したコンピュータプロセスとして実行されるプログラムであり、既存のプロセスへのアドオンではなく、例えばプラグインではない。当業者は、スタンドアロンアプリケーションがしばしばコンパイルされることを認識する。コンパイラは、プログラミング言語で書かれたソースコードをアセンブリ言語又はマシンコードなどのバイナリオブジェクトコードに変換するコンピュータプログラムである。適切なコンパイルされたプログラミング言語は、非限定的な例として、Ｃ、Ｃ＋＋、Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ−Ｃ、ＣＯＢＯＬ、Ｄｅｌｐｈｉ Ｅｉｆｆｅｌ、Ｊａｖａ（商標）、Ｌｉｓｐ、Ｐｙｔｈｏｎ（商標）、Ｖｉｓｕａｌ Ｂａｓｉｃ、及びＶＢ．ＮＥＴ、又はそれらの組み合わせを含む。コンパイルは、少なくとも部分的に、実行可能なプログラムを作成するためにしばしば実行される。いくつかの実施形態では、コンピュータプログラムは、１つ以上の実行可能なコンパイルされたアプリケーションを含む。

（ソフトウェアモジュール）
本明細書中に開示される方法、システム、及びソフトウェアは、様々な実施形態では、ソフトウェア、サーバ、及び／又はデータベースモジュール、又はその使用を含む。本明細書で提供される開示に鑑みると、ソフトウェアモジュールは、当技術分野に周知のマシン、ソフトウェア、及び言語を使用して、当業者に周知の技術によって作成される。本明細書に開示されたソフトウェアモジュールは、多数のやり方で実装される。様々な実施形態では、ソフトウェアモジュールは、ファイル、コードのセクション、プログラミングオブジェクト、プログラミング構造、又はそれらの組み合わせを含む。さらなる様々な実施形態では、ソフトウェアモジュールは、複数のファイル、コードの複数のセクション、複数のプログラミングオブジェクト、複数のプログラミング構造、又はそれらの組み合わせを含む。様々な実施形態では、１つ以上のソフトウェアモジュールは、非限定的な例として、ウェブアプリケーション、モバイルアプリケーション、及びスタンドアロンアプリケーションを含む。いくつかの実施形態では、ソフトウェアモジュールは、１つのコンピュータプログラム又はアプリケーションである。他の実施形態では、ソフトウェアモジュールは、１つより多いコンピュータプログラム又はアプリケーションである。いくつかの実施形態では、ソフトウェアモジュールは、１つのマシン上でホストされる。他の実施形態では、ソフトウェアモジュールは、１つより多いマシン上でホストされる。さらなる実施形態では、ソフトウェアモジュールは、クラウドコンピューティングプラットフォーム上でホストされる。いくつかの実施形態では、ソフトウェアモジュールは、１つの場所において１つ以上のマシン上でホストされる。他の実施形態では、ソフトウェアモジュールは、１つより多い場所において１つ以上のマシン上でホストされる。

（データベース）
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法、システム、及びソフトウェアは、１つ以上のデータベース、又はそれらの使用を含む。本明細書で提供される開示に鑑みると、当業者は、多くのデータベースがメタゲノムの情報、（メタゲノムプロファイルを含む）、メタトランスクリプトーム（ｍｅｔａｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ）の情報（メタトランスクリプトームプロファイルを含む）、及びマルチプレックスのプロファイルの記憶及び読み出しに適していることを認識する。様々な実施形態では、適切なデータベースは、非限定的な例として、リレーショナルデータベース、非リレーショナルデータベース、オブジェクト指向データベース、オブジェクトデータベース、エンティティ関係モデルデータベース、連想データベース、及びＸＭＬデータベースを含む。いくつかの実施形態では、データベースは、インターネットベースである。さらなる実施形態では、データベースは、ウェブベースである。さらに別の実施形態では、データベースは、クラウドコンピューティングベースである。他の実施形態では、データベースは、１つ以上のローカル記憶デバイスベースである。

当業者が本明細書に記載の組成物及び方法をより良く実施し得るために、以下の実施例が例示の目的で与えられる。
＜実施例＞
（実施例１：乳頭吸引液の評価）

この試験は、３人の健康で、非妊娠、非授乳の女性の被験者を伴う単一施設研究であった。被験者は、診療所での出現順に登録された。

試験の主要目的は、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスを使用するときにニトロセルロースフィルタ上のタンパク質の存在によって判定されるように、乳管液を生成する３０〜６５歳の女性の割合を判定することであった。

副次的な目的は、細胞（存在する場合には）の存在及びタイプについて乳頭吸引液を細胞診的に評価することであった。
（略語）

本明細書中で使用される略語は、例えば、ＭＡＦ：乳房吸引液；ＭＡＳＣＴ（商標）：乳腺穿刺吸引細胞診標本の試験；ＮＡ：利用不可；ＮＤ：未完了；ＮＲ：未記録；及びＮＡＦ：乳頭吸引液を含む

（方法論）
簡単に説明すると、風袋を量ったニトロセルロースフィルタを各乳頭（各乳房ごとに１つ）に単に接触させることによって、乳管液を採取するために風袋を量ったニトロセルロースフィルタを使用した。次に、風袋を量った試料採取ユニットとともにＭＡＳＣＴ（商標）デバイスを用いて乳房流体試料を吸引した。下記の染色技術を用いてタンパク質について、ニトロセルロースフィルタの両方のセットを試験した。乳頭吸引液標本を含むフィルタを洗浄することにより採取した細胞に、細胞診を施行した。

（アセスメント）
ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスを使用するときにニトロセルロースフィルタ上のタンパク質の存在によって判定されるように、試験の主要エンドポイントは、乳管液を生成する、試験を完了した女性の割合だった。

細胞診評価によって判定されるように、二次エンドポイントは、乳頭吸引液中の細胞の存在であった。

（結果）
これらの３人の被験者から得られたフィルタに対して行われたタンパク質試験に関して、乳頭洗浄フィルタ試料上のいずれもタンパク質の存在を示さなかった。ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスからのすべてのフィルタは、タンパク質が装置フィルタ上で検出されたことを示した。

（研究全体の設計及び計画）
ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスは、以前、５１０（ｋ）制御経路（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐａｔｈｗａｙ）を介して（ｖｉａ）市販の許可が与えられていた。ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスへの改造を試験するためにこの臨床研究を設計した。ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスの改造は、有効性及び使いやすさ、ならびに以前は非分泌者であると考えられた女性を含む女性からの乳頭吸引液中のタンパク質を検出する能力を高めるようになされた。乳房の健康管理において助となる乳頭吸引液の臨床的有用性は、流体を採取し、液体の存在を測定する現在の方法論によって、ここ５０年間、妨げられてきた。実際には、現在の技術を使用して、すべての女性の５０％までは、非分泌者、すなわち、彼女らは、乳頭吸引液（ＮＡＦ）を生成しないと判断される。

これは、最大５０人の健康で、非妊娠、非授乳の女性被験者の登録を伴う単一施設研究であった。被験者は、診療所での出現順に登録された。

研究に入る前に、治験責任医師又は指定助手は、研究の性質、その目的、手順、予想継続期間、利用可能な代替手段、及び試験参加に伴う利点及びリスクを各被験者に説明した。各被験者は、同意書を与えられ、質問をする機会を有し；権利を侵害されることなく、随時、研究から退く権利について知らされた。この説明の後、及びいずれの研究固有の処置が行われる前に、被験者は、インフォームドコンセントの文書に自主的に署名し、日付を付した。研究への参加に先立って、各被験者は、署名及び日付が書かれたインフォームドコンセントフォーム及びその他の書き込まれた情報のコピーを受け取った。

（包含／除外基準のレビュー及び妊娠評価）
必要な場合には、各患者は、研究へのさらなる参加に先立って、尿妊娠検査を受けた。妊娠検査陽性は、参加から被写体を除外する。すべての包含及び除外基準は、被験者の適格性を確保するためにレビューされた。適格性が立証された後、固有の被験者識別番号が割り当てられた。

（人口統計及び病歴）
以下の人口統計的及び病歴を各被験者から取得した：年齢及び人種；家族の病歴、特に母親や姉妹；乳がん、良性乳房状態、及び生殖疾患（例えば、卵巣がん又は子宮内膜腫瘍）を含む個人の病歴；併用薬；初潮の年齢；最初の妊娠時の年齢；最初の出産時の年齢；閉経の年齢；及び身長と体重。

（乳房の準備）
被験者を臥位に置いた。両乳房の乳頭及び周囲の乳輪領域をアルコールで洗浄して、過剰皮脂、化粧品又は上皮破片を除去した。アルコールが蒸発した後、暖かい湿った圧定布を１０〜１５分間、両方の乳房の上に置いた。圧定布を取り除き、被験者を着座位置に置いた。アルコールを用いて乳頭区域を拭いて、存在していた乳管プラグ（ｄｕｃｔａｌ ｐｌｕｇ）を取り除いた。

（乳頭タッチ処置）
フィルタ材料を取り扱うすべての者は、フィルタ汚染のリスクを最小限に抑えるために、手袋及び保護マスクを着用しなければならない。

（装置のクリーニング処置）
各被験者の使用に先立って、ＣIＤＥＸ（登録商標）などの抗菌剤溶液を用いてＭＡＳＣＴ（商標）デバイスを徹底的に洗浄した。装置は、極端な温度にさらされず、また加圧滅菌器で処理されなかった。装置の材料の劣化又は負圧を誘発する障害ついて装置を定期的に検査した。いずれかの状態が観察された場合には、ユニットを交換した。
（ＭＡＳＣＴ（商標）と乳頭タッチ処置）
ａ．１つのフィルタディスクアセンブリには「左」、第２のフィルタディスクアセンブリには「右」とラベルを付す。
ｂ．素手でフィルタには手を触れないように注意しながら、必要に応じて鉗子を使用して各アセンブリの重さを量り、記録する。
ｃ．搾乳器デバイスに１つのアセンブリに挿入する。
ｄ．胸壁から開始して、約１分間、乳頭−乳輪合成物（ｃｏｍｐｌｅｘ）に徐々に移動する手による自己乳房マッサージ行うように被験者に指示する。
ｅ．次いで、搾乳器デバイスが医師又は看護師によって６０〜９０秒間作動している間、被験者は、両手で自分の乳房を圧搾する。
ｆ．フィルタディスクアセンブリを取り外し、流体採取のためにＭＡＳＣＴ（商標）のフィルタディスクの重さを量る。
ｇ．ＣIＤＥＸ（登録商標）などの抗菌剤溶液を使用して、試料採取漏斗の表面を拭き、採取バイアルをすすぐ。
ｈ．第２の乳房について、工程ｃ、ｄ、ｅ、ｆ及びｇを繰り返す。
ｉ．タンパク質及び／又は細胞診評価のその後の評価のために冷蔵庫にフィルタディスクに保管する。各フィルタディスクアセンブリのための梱包容器に、採取した被験者のＩＤ番号及び日付で適宜ラベルを付さなければならない。

この採取処理を変更することができるが、マッサージ／採取処理の数は、いかなる時も、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスに対して承認された表示において許可されている数を超えない。

（被験者観測）
被験者は診療所に残り、吸引後３０分間の装置による副作用について観察される。その時点において、進行する（ｅｖｏｌｖｉｎｇ）又は未解決の副作用がない場合には、被験者は解放される。治験責任医師の裁量で、この観察期間の終了時に副作用を経験する被験者は、副作用が解決されるか又はフォローアップの手配がなされるまで試験場所に残る。

（試験の実施）
本明細書に記載されるプロトコルに従ってこの研究におけるすべての被験者を研究した。

３人の被験者が登録し、患者の治験を以下の表において提供する。

次の表は、人口統計のための個々の患者のデータの一覧を含む。死亡又は重篤な有害事象はなかった。

（考察及び全体的な結論）
以下の結果は、この研究で使用された個々のフィルタの試験の際に得られた。

（乳頭洗浄結果）
対照の乳頭洗浄フィルタの試料はいずれも、タンパク質の存在を示さなかった。
（搾乳器の結果）

これらの結果に基づいて、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスは、タンパク質の存在によって証明されるように、乳頭吸引液を得た。

（死亡又は重篤な有害事象）
死亡又は重篤な有害事象はなかった。

（順次データ）
１８〜６５歳の３１人の女性の研究では、本開示の方法は、タンパク質を分析するために使用され、タンパク質は、３１人すべての女性から検出され（１人の女性は、１つの乳房のみでタンパク質が検出された）、９７％の臨床的有用性を与えた。従来技術に対するこの改善は、がんの予防対策を設けることができるとき、早期の前がん変化を有する女性を特定するのにこの試験を有用にする。

（有効性評価のまとめ）
研究の主な目的は、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスを用いたときに得られるすべてのニトロセルロースフィルタ上のタンパク質の存在によって判定されるように達成された。細胞の存在及びタイプについて乳頭吸引液を細胞診的に評価する副次的な目的が達成された。すべての試料は、細胞物質について成功裏に分析された。

（実施例２：乳房流体からの生体試料における細胞診）
この実施例は、実施例１に記載した試料から得られた細胞の特定及び評価するための従来の細胞学的技術の使用を記載する。濾紙上の試料の採取に続いて、フィルタは、任意の適切な緩衝洗浄溶液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）を用いて洗浄して細胞を採取する。流体をさらに処理し、例えば、改造された細胞診バイアルにおける遠心分離によって細胞を採取することができる。次いで、清浄なガラス顕微鏡スライドの中央領域に、処理された試料を移動し、試料上にカバースリップをスライドさせて、スライドの表面に沿ってカバースリップを広げる。スライドを空気乾燥させることができ、次いで、例えば無水アルコール中にスライドを固定し、メチレンブルー、ヘマトキシリン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｎ）及びエオシン、又は他の適切な染色剤などの標準的な細胞染色剤で染色する。

次いで、周知の方法を使用して細胞の非定型増殖及び細胞の塊の証拠について光学顕微鏡によってスライドを調べる。周知の方法は、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｎ−Ｐａｌｐａｂｌｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｌｅｓｉｏｎｓ：Ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｉｃａｌｌｙ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｆｉｎｅ−Ｎｅｅｄｌｅ Ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｊａｃｑｕｅｌｉｎｅ Ｍｏｕｒｉｑｕａｎｄ，Ｓ．Ｋａｒｇｅｒ Ｐｕｂ．，Ｊｕｌｙ １９９３；Ｂｒｅａｓｔ：Ｇｕｉｄｅｓ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ Ｂｉｏｐｓｙ ｂｙ Ｔｉｌｄｅ Ｓ.ａｎｄ Ｉｒｗｉｎ Ｋ．Ｋｌｉｎｅ，Ｉｇａｋｕ−Ｓｈｏｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂ．，Ｍａｙ １９８８；Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｒｅａｓｔ（Ａｓｏｐ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｓｈａｈｌａ Ｍａｓｏｏｄ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９９５；Ｆｉｎｅ Ｎｅｅｄｌｅ Ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ Ｃｙｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｂｒｅａｓｔ ａｎｄ Ｌｕｎｇ ｂｙ Ｐｈｉｌｉｐ Ｓ．Ｆｅｌｄｍａｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ１９８４に記載されるものを含み、各々がその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

好ましい実施形態を本明細書において示し、説明してきたがそのような実施形態は例としてのみ提供されることが当業者には明らかである。多くの変形、変更、及び置換が本発明から逸脱することなく、当業者は想到する。なお、本明細書に記載される本発明の実施形態に対する様々な代替物が本発明を実施する際に使用され得ることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲及びその均等物の範囲内の方法及び構造はそれによって包含されることが意図される。

Claims (60)

1. 個体からの乳頭吸引液（ＮＡＦ）試料を分析するためのシステムであって、
   ａ．前記乳頭吸引液試料を吸収するための吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙と、
   ｂ．前記乳頭吸引液試料の総タンパク質を可視化し、前記乳頭吸引液試料の細胞の数を計数し、又はそれらの組み合わせのための顕微鏡と
   を備えたシステム。
2. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項１に記載のシステム。
3. 前記乳頭吸引液試料の総タンパク質を判定するためのコロイド状の金属染色剤をさらに備えた、請求項１に記載のシステム。
4. 前記コロイド状の金属は、コロイド状の金又はコロイド状の銀である、請求項３に記載のシステム。
5. 実行可能な命令を実行するように構成された随意にネットワーク接続されたコンピュータ処理デバイスと、
   コンピュータプログラムであって、前記乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量、前記乳頭吸引液試料の細胞の数、又はそれらの組み合わせを分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールを含むコンピュータプログラムと
   をさらに備えた、請求項１に記載のシステム。
6. 前記コンピュータプログラムは、前記個体の治療レジメンを指定するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
7. 前記コンピュータプログラムは、フォトマイクログラムのデータベース内にフォトマイクログラムを記憶するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
8. 前記コンピュータプログラムは、分析のデータベース内に分析を記憶するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
9. 前記コンピュータプログラムは、前記乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量又は細胞の数と標準とを比較するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
10. 前記コンピュータプログラムは、医療提供者又は前記個体に分析を伝達するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
11. 前記コンピュータプログラムは、医療提供者又は前記個体に診断を伝達するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
12. 前記コンピュータプログラムは、分析を含むレポートを生成するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５に記載のシステム。
13. 前記吸収紙は、図１に示す装置である、請求項１に記載のシステム。
14. アプリケーションを作成するために、コンピュータ処理デバイスによって実行可能な命令を含むコンピュータプログラムで符号化された非一時的なコンピュータ可読記憶媒体であって、
    前記アプリケーションは、
    （ａ）乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙上に吸収される乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量及び／又は細胞の数を分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するように構成されたソフトウェアモジュールと、
    （ｂ）個体の治療レジメンを指定するように構成されたソフトウェアモジュールと
    を含む、記憶媒体。
15. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項１４に記載の記憶媒体。
16. 前記モデル又はアルゴリズムは、前記乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量及び／又は前記乳頭吸引液試料の細胞の数と標準とを比較することを含む、請求項１４に記載の記憶媒体。
17. 前記アプリケーションは、コンピュータメモリにフォトマイクログラフのデータベースをさらに含む、請求項１４に記載の記憶媒体。
18. 前記アプリケーションは、コンピュータメモリに分析のデータベースをさらに含む、請求項１４に記載の記憶媒体。
19. 前記アプリケーションは、分析を含むレポートを生成するように構成されたソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項１４に記載の記憶媒体。
20. 前記吸収紙は、図１に示す装置である、請求項１４に記載の記憶媒体。
21. 乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む吸収紙。
22. 図１に示す吸収紙を含む、請求項２１に記載の吸収紙。
23. 前記吸収紙は、混合セルロースエステル紙を含む、請求項２１に記載の吸収紙。
24. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項２１に記載の吸収紙。
25. 前記紙は、図１に示すようなＬ字型の要素４を含む、請求項２１に記載の吸収紙。
26. 個体において乳がんを発症するリスクを特定する方法であって、
    前記方法は、
    ａ）吸収紙上に吸収された乳頭吸引液試料中のタンパク質の総量及び／又は細胞の数を検出する工程であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む、工程と、
    ｂ）前記乳頭吸引液試料のタンパク質の総量及び／又は細胞の数に基づいて、乳がんを発症するリスクを特定する工程と
    を含む方法。
27. 前記吸収紙は、図１に示す装置である、請求項２６に記載の方法。
28. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項２６に記載の方法。
29. 前記試料がタンパク質を含み、かつ無細胞である場合には、前記個体は、乳がんを発症するリスクが低いのもであるとして特定される、請求項２６に記載の方法。
30. 前記試料が約１ｐｇ〜約５００ｐｇのタンパク質を含み、かつ無細胞である場合には、前記個体は、乳がんのリスクが低いのもであるとして特定される、請求項２６に記載の方法。
31. 前記試料が少なくとも約３００ｎｇのタンパク質及び２つ以上の細胞を含む場合には、前記個体は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定され、又は乳がんリスクが中又は高いとして診断される、請求項３０に記載の方法。
32. 前記試料が約３００ｎｇのタンパク質〜約２μｇのタンパク質及び２つ以上の細胞を含む場合には、前記個体は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定され、又は乳がんリスクが中又は高いとして診断される、請求項３０に記載の方法。
33. 前記試料が約３００ｎｇのタンパク質〜約２μｇのタンパク質及び２つ〜５つの細胞を含む場合には、前記個体は、乳がんのさらなる評価が必要であると特定され、又は乳がんリスクが中又は高いとして診断される、請求項３０に記載の方法。
34. 前記個体は、乳頭吸引液の古典的な非分泌者又は古典的な分泌者として診断される、請求項２６に記載の方法。
35. 乳頭吸引液試料中の細胞を検出する工程は、前記吸収紙を洗浄し、流出物を採取し、前記流出物中の細胞を計数する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
36. 前記吸収紙は、前記タンパク質の総量が判定される前に洗浄される、請求項３５に記載の方法。
37. 前記タンパク質の総量は、金属粒子の懸濁液で前記吸収紙を染色することによって検出される、請求項２６に記載の方法。
38. 前記金属粒子の懸濁液は、コロイド状の金又はコロイド状の銀である、請求項３７に記載の方法。
39. 前記細胞の数は、顕微鏡を使用して検出される、請求項２６に記載の方法。
40. 前記乳頭吸引液は、乳房組織のマッサージ、及び患者の乳器から生体試料を採取するための試料採取装置を用いる吸引に続いて、吸収紙上に採取される、請求項２６に記載の方法。
41. 乳頭吸引液（ＮＡＦ）と、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙とを含む組成物であって、前記吸収紙は、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含む、組成物。
42. 図１に示すような吸収紙を含む、請求項４１に記載の組成物。
43. 前記吸収紙は、混合セルロースエステル紙を含む、請求項２６に記載の組成物。
44. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項２６に記載の組成物。
45. 個体からの乳頭吸引液（ＮＡＦ）試料を分析するためのシステムであって、
    ａ．前記乳頭吸引液試料を吸収するための吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙と、
    ｂ．搾乳器デバイスと
    を備えた、システム。
46. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項４５に記載のシステム。
47. 前記搾乳器デバイスは、ＭＡＳＣＴ（商標）デバイスである、請求項４５に記載のシステム。
48. 個体からの乳頭吸引液（ＮＡＦ）試料を分析するためのシステムであって、
    ａ．前記乳頭吸引液試料を吸収するための吸収紙であって、ミクロセルロース、混合セルロースエステル紙又はニトロセルロースを含み、乳頭を覆うようなサイズを有する吸収紙と、
    ｂ．前記乳頭吸引液試料の総タンパク質を判定するためのコロイド状の金属染色剤と
    を備えた、システム。
49. 前記吸収紙は、直径が約１．０〜約３．０インチであり、厚さが約０．０１〜約０．１インチである、請求項４８に記載のシステム。
50. 前記乳頭吸引液試料の総タンパク質を可視化し、前記乳頭吸引液試料の細胞の数を計数し、又はそれらの組み合わせのための顕微鏡をさらに備えた、請求項４８に記載のシステム。
51. 前記コロイド状の金属は、コロイド状の金又はコロイド状の銀である、請求項４８に記載のシステム。
52. 実行可能な命令を実行するように構成された随意にネットワーク接続されたコンピュータ処理デバイスと、
    コンピュータプログラムであって、前記乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量、前記乳頭吸引液試料の細胞の数、又はそれらの組み合わせを分析するためのモデル又はアルゴリズムを適用するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールを含むコンピュータプログラムと
    をさらに備えた、請求項４８に記載のシステム。
53. 前記コンピュータプログラムは、前記個体の治療レジメンを指定するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５２に記載のシステム。
54. 前記コンピュータプログラムは、フォトマイクログラムのデータベース内にフォトマイクログラムを記憶するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５２に記載のシステム。
55. 前記コンピュータプログラムは、分析のデータベース内に分析を記憶するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５２に記載のシステム。
56. 前記コンピュータプログラムは、前記乳頭吸引液試料の総タンパク質の含有量又は細胞の数と標準とを比較するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５２に記載のシステム。
57. 前記コンピュータプログラムは、医療提供者又は前記個体に分析を伝達するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求５２に記載のシステム。
58. 前記コンピュータプログラムは、医療提供者又は前記個体に診断を伝達するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５２に記載のシステム。
59. 前記コンピュータプログラムは、分析を含むレポートを生成するために、前記コンピュータ処理デバイスによって実行されるソフトウェアモジュールをさらに含む、請求項５２に記載のシステム。
60. 前記吸収紙は、図１に示す装置である、請求項４８に記載のシステム。

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