CN104040339A - 吸收性纸及其用于乳腺癌检测的用途 - Google Patents

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Abstract

利用与吸收性纸或膜结合的吸乳器设备，任选地通过向受试者施用催产素来促进，以获得乳房液或其组分的生物样品。该吸乳器设备刺激乳房液的压出，并为了在吸收性纸或膜上收集诊断样品以评价包括癌症在内的乳房疾病做准备。该生物样品可以包括流体，该流体含有细胞或细胞组分、蛋白质、糖蛋白、肽、核苷酸或其它包含乳房疾病标志物的期望的成分中的一种或多种。本发明还提供吸收性纸或膜，以及与该纸或膜相关的方法，以及吸乳器设备。

Description

吸收性纸及其用于乳腺癌检测的用途
交叉引用
本申请要求2011年10月24日提交的美国临时申请号61/550,855的权益，该申请通过引用并入本文。
背景技术
乳腺癌是迄今为止女性中最常见的癌症形式，并且是人类癌症死亡的第二大主要原因。尽管在乳腺癌诊断和治疗中已取得进展，但是该病的发病率从1940年起以每年约1％的速率稳步上升。如今，生活在北美洲的女性在其一生中发生乳腺癌的可能性为八分之一。
目前乳房X线摄影术的广泛使用已经导致乳腺癌检测的改善。尽管如此，乳腺癌引起的死亡率仍未改变，每100000名女性中大约有27例死亡。很多时候，乳腺癌在极晚期被发现，此时治疗的选择和存活率严重受限。
发明内容
乳头抽吸液在帮助乳房健康管理方面的临床应用在过去50年间受到收集和测量流体存在的现有临床方法的限制。实际上，使用当前技术，所有女性中高达50％为非分泌者，即，她们被判定为不产生乳头抽吸液(nipple aspirate fluid，NAF)；这反过来又意味着，这些女性不能使用当前技术通过非侵入性操作来进行早期乳腺癌的诊断测试。
另外，用于使用当前技术从非分泌和分泌女性收集流体的纸对乳头组织造成很多纸切口，使得样品采集对于进行测试的女性而言是痛苦的。
本发明人首次确定了一种新的吸收性纸或膜，其显著降低样品采集期间纸切口的数目。本文中，本发明人还首次确认该新的吸收性纸或膜允许从先前被认为是非分泌者的女性收集非常小的样品体积。即使在这种小样品体积的情况下，本发明人首次确认，来自被认为是非分泌者的女性的样品可以成功地评估用于早期乳腺癌风险评估的蛋白质和细胞数。在本发明之前，来自被认为是非分泌者的女性的样品被丢弃，并且这些女性不得不使用侵入性操作来进行检测。因此，本文提出的实施方案对于之前不能使用非侵入性操作进行评价的患者群体而言代表了早期乳腺癌风险评估领域的显著进步。本方法还允许对作为典型分泌者的女性进行早期乳腺癌风险评估。本方法对样品中蛋白质的检测具有更高的灵敏度，从而提高了医师在疾病进展的早期阶段检测乳腺癌的能力。本方法可以检测乳头抽吸液(NAF)中浓度低至约70皮克(pg)的蛋白质。这比现有技术表现出显著的进步，现有技术可检测分泌者的NAF样品中浓度约为350纳克(ng)的蛋白质。
本文中提供一种用于鉴定女性处于未来乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：获得乳头抽吸液的样品；检测所述样品中的蛋白质；并检测所述样品中的细胞，其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞的样品相关。
本文中还提供一种用于鉴定患者的乳腺癌风险或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：利用通用计算机，将乳头抽吸液样品中的蛋白质的浓度和所述样品中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数和/或与已知不具有乳腺癌的患者群体进行比较；其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。
确认为处于乳腺癌的最低风险下的患者群体与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。在一个实施方案中，该样品不含细胞(即，是无细胞的)。在另一实施方案中，低风险与含有蛋白质并且含有一个细胞的样品相关。乳腺癌的风险随着细胞数的增加而增加。
将要采用本文中提供的方法诊断的患者包括那些典型地被认定为乳头抽吸液(NAF)非分泌者和分泌者的患者。
在一个实施方案中，患者被典型地认定为乳头抽吸液非分泌者。
在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液样品。可在本方法中使用的吸收性纸或膜包括具有如图1中所示尺寸和大小的纸或膜。该纸或膜例如可以由微纤维素(microcellulose)、混合纤维素酯纸或硝化纤维素制成。与当前用于NAF收集的市售纸相比，这种新的设计使样品收集期间对乳头组织形成显著更少的切口。
清洗该吸收性纸或膜，收集流出物，并评估细胞的数目。在一个实施方案中，采用任何常规方法分析所述样品中的细胞(如果有的话)的细胞学，该常规方法包括但不限于：显微术、流式细胞术、免疫组织化学或其组合。临床医师可以确定细胞(如果存在于样品中)是否是正常的，或者含有癌细胞的一种或多种特性。在一个非限制性的实例中，细胞样品可以用苏木精(hemolysin)和曙红进行染色。
采用本文中描述的方法测量的蛋白质为样品中的总蛋白质含量。随后将该纸暴露于胶体金或胶体银，并确定总蛋白质含量(浓度)。
在一个方面，如果样品含有约50pg至约0.5ng的蛋白质，并且不含细胞，则将患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。
或者，如果该样品含有至少约300ng的蛋白质及两(2)个或更多个细胞，则将患者鉴定为需要进一步的乳腺癌评估或者诊断为处于乳腺癌的中等或高风险下。在一个实施方案中，样品中蛋白质的浓度为约300ng的蛋白质至约2μg的蛋白质，将患者诊断为处于乳腺癌的较高风险下，而在一些情况下，鉴定为需要进一步评估。在这样的情况下，样品的细胞部分可含有约2个细胞至约50个细胞。在另一情况下，这样的细胞部分可含有至少十(10)个细胞。
本文中提供一种具有如图1所示的特性和尺寸的吸收性纸或膜，其中该吸收性纸或膜使用微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素制成。在一个实施方案中，该吸收性纸或膜包含混合纤维素酯。
一种用于检测乳头抽吸液(NAF)样品中的蛋白质的方法，该方法包括在吸收性纸或膜上收集NAF，并用胶体金属颗粒悬浮液检测蛋白质，其中该方法可检测浓度为每个样品0.5ng至500ng的蛋白质。在一个实施方案中，该金属颗粒悬浮液包含胶体金。
本吸收性纸或膜的显著进步是：它不会切割组织达到当前滤纸所切割的程度；因此，使正进行评估的患者在收集过程中经受较少的痛苦和不适。在一个实施方案中，暴露于该纸或膜的组织为乳头组织。
本文中提供如本文所述的吸收性纸或膜在用于鉴定患者处于乳腺癌的低风险下或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法中的应用。在一个方面，该吸收性纸或膜在本文所述的任意方法中使用，或者在用于任意用途的乳头抽吸液收集的任何其它方法中使用。
本文中还提供一种用于鉴定患者的乳腺癌风险或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液；如果有细胞，用缓冲溶液清洗所述吸收性纸或膜以收集细胞；如果有细胞，对所述样品中的细胞的数目进行计数，并任选地确定所述细胞的细胞学；用胶体金或胶体银对所述吸收性纸或膜进行染色，并确定所述滤纸上的蛋白质的浓度；以及，将所述乳头抽吸液中的蛋白质的浓度和所述乳头抽吸液中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数和/或与已知不具有乳腺癌的患者群体进行比较；其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。
本文中提供一种用于诊断患者的乳腺癌风险的方法，该方法包括：在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液，其中所述NAF样品从典型的提供者和非提供者获得；如果有细胞，用缓冲溶液清洗所述吸收性纸以收集细胞；如果有细胞，对所述样品中的细胞的数目进行计数，并任选地确定所述细胞的细胞学；用胶体金或胶体银对所述吸收性纸或膜进行染色，并确定所述滤纸上的蛋白质的浓度；以及，将所述乳头抽吸液中的蛋白质的浓度和所述乳头抽吸液中的细胞数，与已知患有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数和/或与已知不具有乳腺癌的患者群体进行比较；其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。
本文中还提供一种用于在有此需要的个体中鉴定发生乳腺癌的风险的方法，该方法包括：检测吸收在如图1所示的吸收性纸上的乳头抽吸液样品中的蛋白质总量和/或细胞数，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素；以及，基于乳头抽吸液样品的蛋白质总量和/或细胞数来鉴定发生乳腺癌的风险。
在一个实施方案中，该样品无细胞，将该患者鉴定为处于乳腺癌的最低风险下。在另一实施方案中，该样品含有一个细胞，将患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。在又一实施方案中，该样品含有超过2个细胞，将患者鉴定为需要进一步评估。
在一个实施方案中，确定每个乳房的总蛋白质浓度，并且如果一个样品的总蛋白质浓度大于300ng，则将患者鉴定为需要进一步的乳腺癌评估。或者，确定每个乳房的总蛋白质浓度，并且如果每个样品的总蛋白质浓度等于或低于200ng蛋白质，则将患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。
在一个实施方案中，在按摩乳房组织并采用如实施例1中所述的乳房抽吸样品细胞学检验(MASCTTM)设备进行抽吸后，在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液。如本文中使用的，“MASCTTM设备”指在Quay等的美国专利号6,287,521中描述的设备，该专利以其整体并入本文。在一个非限制性的实例中，用于从患者的乳房器官收集生物样品的样品收集设备可包括乳房接合部件、固相样品收集介质以及真空泵装置；该乳房接合部件由无孔材料构造，且其尺寸和大小设置为至少容纳所述患者的乳房的乳头部分，并与之形成吸力密封；该固相样品收集介质与所述乳房接合部件流体连通，用于接收被挤压出的乳房液的样品；该真空泵装置与所述乳房接合部件气体连接，用于通过所述乳房接合部件产生负压，以促进乳房液的压出；其中所述固相样品收集介质选自：显微镜载玻片、毛细管、收集管、柱、微型柱、孔、板、膜、滤器、树脂、无机基质、珠、微粒层析介质、塑料微粒、胶乳颗粒、涂覆的管、涂覆的模板、涂覆的珠、涂覆的基质或其组合。该样品收集设备可包括用于将所述样品收集罩与所述乳房接合部件可拆卸地耦接的可拆卸耦接装置。在一些情况下，该固相样品收集介质被支撑部件所支撑，该支撑部件被一体地或可拆卸地安装在与所述乳房接合部件流体连接的所述样品收集罩内。该支撑部件可为圆盘形，并且插入所述乳房接合部件和所述样品收集罩之间。进一步地，该支撑部件可具有上部和下部扣环，并支撑吸收剂或吸附剂材料片。支撑部件支撑体可为固相样品收集模板，包括但不限于：毛细管、涂覆的管、柱、微型柱、平板、孔和显微镜载玻片或其组合。支撑部件限定流体保持孔，并包括至少一个气道，以使负压通过该气道到达及离开所述乳房接合部件。该固相样品收集介质可为微粒介质，其包含在可拆卸地安装在所述样品收集罩中的筒内，并在所述筒的第一末端覆盖有多孔阻隔材料的情况下，使所述筒的第一末端与所述乳房接合部件流体连接。
在另一方面，本文中提供一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液的系统，该系统包括如图1中所示的吸收性纸和显微镜；该吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，该显微镜用于使乳头抽吸液的总蛋白质可视化，对来自乳头抽吸液样品的细胞的数目进行计数，或其组合。
在另一方面，本文中提供一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液(NAF)样品的系统，该系统包括如图1中所示的吸收性纸和显微镜；该吸收性纸用于吸收该乳头抽吸液样品并且包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，该显微镜用于使该乳头抽吸液样品的总蛋白质可视化，对该乳头抽吸液样品的细胞的数目进行计数，或其组合。
在一个实施方案中，通过用胶体金属对所述吸收性纸进行染色来检测乳头抽吸液中的蛋白质的总量。例如，胶体金属可为胶体金或胶体银。
在一些实施方案中，该系统可进一步包括配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，该计算机程序包括由计算机处理设备执行的、以应用模型或算法来分析乳头抽吸液的总蛋白质含量、细胞数或其组合的软件模块。
在一个实施方案中，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以为个体指定治疗方案的软件模块。
在另一个实施方案中或者除此之外，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片数据库中的软件模块。
在另一个实施方案中或者除此之外，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将分析结果(analysis)存储于分析结果数据库中的软件模块。
在另一个实施方案中或除此之外，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将该乳头抽吸液的总蛋白质含量或细胞数与标准进行比较的软件模块。
在另一个实施方案中或者除此之外，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或者个体的软件模块。
在另一个实施方案中或者除此之外，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送给医疗服务人员或者个体的软件模块。
在另一个实施方案中或者除此之外，该计算机程序可进一步包括由该计算机处理设备执行的、以产生包含分析结果的报告的软件模块。
在另一方面，本文中提供一种编码有计算机程序的非暂时性计算机可读存储介质，所述计算机程序包括可由计算机处理设备执行的指令，以创建应用，该应用包括：配置为应用模型或算法来分析来自个体的乳头抽吸液样品的总蛋白质含量、来自个体的乳头抽吸液样品的细胞数或其组合的软件模块，以及配置为为该个体指定治疗方案的软件模块。
在又一个方面，本文中提供一种编码有计算机程序的非暂时性计算机可读存储介质，该计算机程序包括可由计算机处理设备执行的指令，以创建应用，该应用包括：配置为应用模型或算法来分析吸收在如图1所示的吸收性纸上的乳头抽吸液样品的总蛋白质含量和/或细胞数的软件模块，以及配置为为该个体指定治疗方案的软件模块。
在一个实施方案中，该模型或算法包括将该乳头抽吸液的总蛋白质含量或该乳头抽吸液样品的细胞数与标准进行比较。
在又一个方面，本文中提供一种用于鉴定女性处于未来乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：(a)在如图1中所示的吸收性纸上获得乳头抽吸液的样品，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素；(b)检测所述样品中的蛋白质的总量；(c)确定来自所述样品的细胞的数目；和(d)在样品含有蛋白质并且无细胞的情况下，将女性鉴定为处于乳腺癌的低风险下。
在又一个方面，本文中提供一种用于鉴定患者的乳腺癌风险或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：(a)在如图1中所示的吸收性纸上收集乳头抽吸液，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素；(b)如果有细胞，用溶液清洗所述吸收性纸以收集细胞；(c)如果有细胞，对所述样品中的细胞的数目进行计数，并任选地确定所述细胞的细胞学；(d)用金属颗粒悬浮液对所述吸收性纸进行染色，并确定所述吸收性纸上的蛋白质的浓度；(e)将所述乳头抽吸液中的蛋白质浓度和所述乳头抽吸液中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数、与已知不具有乳腺癌的患者群体，或者与其组合进行比较；和(f)在该样品含有蛋白质并且无细胞或者含有一个细胞的情况下，将患者鉴定为处于乳腺癌的风险下或者处于乳腺癌的低风险下。
在又一个方面，本文中提供一种用于诊断患者的乳腺癌风险的方法，该方法包括：(a)在如图1中所示的吸收性纸上收集乳头抽吸液(NAF)，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，其中所述NAF样品从典型的提供者和非提供者获得；(b)如果有细胞，用缓冲溶液清洗所述吸收性纸，以收集细胞；(c)如果有细胞，对所述样品中的细胞的数目进行计数，并任选地确定所述细胞的细胞学；(d)用胶体金或胶体银对所述吸收性纸进行染色，并确定所述吸收性纸上的蛋白质的浓度；(e)将所述乳头抽吸液中的蛋白质浓度和所述乳头抽吸液中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数、与已知不具有乳腺癌的患者群体或者与其组合进行比较；以及(f)在该样品含有蛋白质并且无细胞或者含有一个细胞的情况下，将患者诊断为处于乳腺癌的风险下。在又一个方面，本文中提供一种用于检测乳头抽吸液(NAF)样品中的蛋白质的方法，该方法包括：在如图1中所示的吸收性纸上收集NAF，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素；以及用胶体金属颗粒悬浮液检测该蛋白质，其中该方法可检测浓度为每个样品0.5ng至500ng的蛋白质。
在又一方面，本文中提供一种用于乳腺癌相关风险的测试材料，该测试材料包括：如图1中所示的吸收性纸(其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素)，从典型地特征为乳头抽吸液非生产者的女性收集的乳头抽吸液样品，以及用于检测该吸收性纸上收集的乳头抽吸液中蛋白质的存在的染色剂。
本文中提供一种尺寸设置为覆盖乳头的吸收性纸，其包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素。该吸收性纸可包括如图1中所示的吸收性纸。在一个实施方案中，该吸收性纸包含混合纤维素酯纸。在另一实施方案中，该吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。在另一实施方案中，该吸收性纸包含如图1中所示的L形元件4。
本文中提供一种包含乳头抽吸液(NAF)和尺寸设置为覆盖乳头的吸收性纸的组合物，该吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素。
本文中提供一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液(NAF)样品的系统，该系统包括：用于吸收乳头抽吸液样品的吸收性纸和吸乳器设备，该吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，其中该吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头。
在一个实施方案中，该吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
在另一实施方案中，该吸乳器设备是MASCTTM设备。
在某些实施方案中，本文中公开一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液(NAF)样品的系统，该系统包括：(a)用于吸收该乳头抽吸液样品的吸收性纸，该吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，其中该吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；以及(b)用于确定该乳头抽吸液样品的总蛋白质的胶体金属染色剂。在一些实施方案中，该吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。在一些实施方案中，该系统进一步包括用于使该乳头抽吸液样品的总蛋白质可视化、对该乳头抽吸液样品的细胞数进行计数或其组合的显微镜。在一些实施方案中，该胶体金属为胶体金或胶体银。在一些实施方案中，该系统进一步包括：配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，该计算机程序包括由计算机处理设备执行以应用模型或算法来分析乳头抽吸液样品的总蛋白质含量、乳头抽吸液样品的细胞数或其组合的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行的、以为个体指定治疗方案的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片数据库中的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将分析结果存储于分析结果数据库中的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将该乳头抽吸液样品的总蛋白质含量或细胞数与标准进行比较的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。在一些实施方案中，该计算机程序进一步包括由该计算机处理设备执行以产生包括该分析结果的报告的软件模块。在一些实施方案中，所述吸收性纸为如图1中所示的设备。
援引并入
在本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，达到与如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体且单独地表明通过引用而被并入相同的程度。
附图说明
在所附权利要求书中详细阐明了本公开内容的特征。通过参考以下阐明了说明性实施方案的详细说明(其中利用了本发明所公开的实施方案的原理)和附图，将获得对本发明的组合物、试剂盒和方法的特征和优点的更好的理解，其中：
图1A-B说明本文中描述的代表性吸收性纸或膜的二维图形。角度尺寸以英寸±1o和度数来提供。图1A显示该纸或膜的俯视图。图1B显示侧面角度的制作(side angle production)。
具体实施方式
尽管目前存在几种用于乳腺癌的检测，但仍需要更灵敏且可靠的方法来检测乳房的小的早期原位癌。正如巴式涂片(Papinicolousmear)成功用于宫颈癌的早期检测和治疗所暗示的，这样的方法将显著地改善乳腺癌的存活率。
本文中提供的实施方案的方法可采用合适的吸乳器设备来进行，该吸乳器设备可用于样品收集，例如在美国专利号5,798,266、美国专利号6,689,073和美国专利号6,887,210中描述的设备，上述各专利均通过引用并入本文。在一个实施方案中，该设备为MASCTTM设备。
本文中还描述了用于获得、操作和处理来自乳房液的生物样品的方法和设备。优选地，这些方法是非侵入性的，意指这些方法是非外科的，并且不涉及用针或其它侵入性设备侵入乳房。本文中描述的设备和方法对单独收集乳房液或者结合催产素刺激来收集乳房液是有效的。
简言之，为了实施非侵入性样品收集，专用的吸乳器设备的特点是乳房接合部分或部件与真空泵机构耦接，并且可与固相样品收集介质流体连接。
该乳房液收集设备典型地以专用的吸乳器来提供，可以按照如实施例1中描述的设备的使用，将该吸乳器施加到人类或动物的乳房，覆盖乳头，并结合如下文更详细描述的乳头接触操作来使用。
可通过向每个乳头施加单独的如本文中所述的吸收性纸或膜，来施行该乳头接触操作。
吸收性纸2(其在本文中也可被称为“膜”)，可用于公开的方法中，并且可为适于收集上皮细胞和生物标志物例如蛋白质、碳水化合物、脂类、核酸、RNA、DNA等的任何材料。吸收性纸2包括例如由硝化纤维素、微纤维素、混合纤维素酯或任何其它用于乳头流体样品收集的合适材料制成的那些吸收性纸。虽然图1A示出了圆形的吸收性纸，但本文中也设想了其它形状，例如，椭圆形、正方形、三角形、其它多边形，只要该形状适于样品收集。
在一些实施方案中，该吸收性纸2不会对乳头和/或乳晕造成纸切口。在一些实施方案中，该吸收性纸2成形为避免对乳头和/或乳晕造成纸切口。
该吸收性纸2通过采用金属模具由大的纸料冲压该纸而形成。该吸收性纸2大到足以覆盖或部分地覆盖乳头。在一些实施方案中，该吸收性纸2大到足以覆盖乳头。因此，吸收性纸的直径或者横跨吸收性纸的任意尺寸的平均尺寸A的长度可为约1.0英寸至约3.0英寸。吸收性纸2的直径可为例如约1.0、约1.1、约1.15、约1.2、约1.25、约1.3、约1.35、约1.4、约1.45、约1.5、约1.55、约1.6、约1.65、约1.7、约1.75、约1.8、约1.85、约1.9、约1.95、约2.0、约2.1、约2.15、约2.2、约2.25、约2.3、约2.35、约2.4、约2.45、约2.5、约2.55、约2.6、约2.65、约2.7、约2.75、约2.8、约2.85、约2.9、约2.95或约3.0英寸。图1A提供了吸收性纸2(其直径A为1.85英寸)的非限制性实例。在一些实施方案中，该吸收性纸2覆盖或部分覆盖乳房的乳晕。在一些实施方案中，该吸收性纸2覆盖乳房的乳晕。在一些实施方案中，该吸收性纸2部分地覆盖乳房的乳晕。在一些实施方案中，该吸收性纸覆盖乳头，并且不延伸到乳房的乳晕。
该吸收性纸2的厚度可以变化，以允许最佳的样品收集，并包括厚度为约0.01英寸至约0.1英寸的材料。例如，该吸收性纸2的厚度可为约0.01、约0.02、约0.03、约0.04、约0.05、约0.06、约0.07、约0.08、约0.09或约0.1英寸。图1B提供了0.05英寸厚的吸收性纸2的非限制性实例。人们将会理解，虽然图1B示出了0.05英寸厚的吸收性纸2的侧视图，但是该厚度也可以变化。
该L形元件(本文中也可被认定为“狭缝(slit)”)是任选的，并且如果吸收性纸2被放置于压力改变设备中以降低压力并使流体从乳房内部向外流出，则该L形元件是有用的。在一个实施方案中，该吸收性纸2的大小设置为适合于改进的吸乳器，并且相应地设置尺寸。本文描述了可以任选地与吸收性纸2一起使用的改进的吸乳器。
在图1A中的L形元件4是在冲切已经冲压出该纸之后保留的裁切物(cut out)。在一个非限制性的实例中，当在冲压过程中裁切时，该L形元件为0.063E英寸宽。在其直径或横跨该设备的任意尺寸的平均尺寸的长度为1.85英寸A的吸收性纸2中，从该吸收性纸2的中线到该L形元件4的末端为0.25英寸B。该L形元件4的角度D可为从10度到170度D的任意角度。在一个非限制性的实施方案中，该角度D为75度，如图1A中所示。图1A中所示的内圆6的直径大约为0.75英寸C，并且被设计为使得该L形翼片8当在吸乳器设备(例如，本文中描述的MASCTTM设备)中使用时可适当地移动。表示内圆6的虚线符号说明图中的引导线。狭缝4用不完整的三角形示出，并且如所示地成形以形成不完整的圆。人们将会理解，本文中描述的尺寸可以基于吸收性纸的总尺寸按比例调整。
图1A表示吸收性纸2的一个非限制性实例的俯视图。虚线不是切线，而是为了便于制造而呈现的，以对准该L形元件4，使吸收性纸2的中心安放在乳头区域上方，从而使翼片8充分地覆盖该乳头。
在另一实施方案中，该吸收性纸2由混合纤维素酯制成，并且按如图1A和1B中所示的形状和尺寸形成。
在施加该吸乳器设备以产生乳房液期间或之后，用该吸收性纸从挤压出的乳房液收集生物样品，该样品可含有以下组分中的一种或多种：全乳房液、全细胞、细胞碎片、细胞膜、选择的液体、乳房液的细胞部分或其它固体部分，以及蛋白质、糖蛋白、肽、核苷酸(包括DNA、RNA等)以及乳房液的其它类似的生物化学和分子组分。
在本发明的某些实施方案中，在乳房液被挤压出的同时或之后，挤压出的乳房液与和吸乳器流体连接的固相样品收集介质接触。在本文中，适当的固相介质包括显微镜载玻片、毛细管、涂覆的管、微量滴定孔或板、膜、滤器、亲和柱、斑点印迹基质、珠、树脂及其它类似介质，这些介质将对该乳房液中期望的组分进行选择性地吸收、结合、过滤、分配或者其他处理，以便于引入到所需的试验中。
本文中提供一种用于鉴定女性处于未来乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：获得乳头抽吸液的样品；检测所述样品中的蛋白质；并检测所述样品中的细胞，其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞的样品相关。
本文中还提供一种用于鉴定患者的乳腺癌风险或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：利用通用计算机，将乳头抽吸液样品中的蛋白质浓度和所述样品中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数和/或与已知不具有乳腺癌的患者群体进行比较；其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。
确认为处于乳腺癌的最低风险下的患者群体，与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。在一个实施方案中，该样品不含细胞(即，是无细胞的)。在另一实施方案中，低风险与含有蛋白质并且含有一个细胞的样品相关。乳腺癌的风险随着细胞数的增加而增加。
将要采用本文中提供的方法诊断的患者包括那些典型地被认定为乳头抽吸液(NAF)非分泌者和分泌者的患者。
在一个实施方案中，患者被典型地认定为乳头抽吸液非分泌者。
在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液样品。可在本方法中使用的吸收性纸或膜包括具有如图1中所示尺寸和大小的纸。该吸收性纸或膜例如可含有微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。与当前用于NAF收集的市售纸相比，这种新的设计使样品收集期间对乳头组织形成显著更少的切口。
清洗该吸收性纸或膜，收集流出物，并评估细胞的数目。在一个实施方案中，采用任何常规方法分析所述样品中的细胞(如果有的话)的细胞学，该常规方法包括但不限于：显微术、流式细胞术、免疫组织化学或其组合。临床医师可以确定细胞(如果存在于样品中)是否是正常的，或者含有癌细胞的一种或多种特性。在一个非限制性的实例中，细胞样品可采用苏木精和曙红进行染色。
采用本文中描述的方法测量的蛋白质为样品中的总蛋白质含量。随后将该纸暴露于胶体金或胶体银，并利用常规方法或本文中描述的那些方法来确定总蛋白质含量(浓度)。
在一个方面，如果样品含有约50pg至约0.5ng的蛋白质，并且不含细胞，则将患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。
或者，如果该样品含有至少约300ng的蛋白质及两(2)个或更多个细胞，则将患者鉴定为需要进一步的乳腺癌评估或者诊断为处于乳腺癌的中等或高风险下。在一个实施方案中，样品中蛋白质的浓度为约300ng的蛋白质至约2μg的蛋白质，将患者诊断为处于乳腺癌的较高风险下，而在一些情况下，鉴定为需要进一步评估。在这样的情况下，样品的细胞部分可含有约2个细胞至约50个细胞。在另一情况下，这样的细胞部分可含有至少十(10)个细胞。
本文中提供一种具有如图1所示的特性和尺寸的吸收性纸或膜，其中该吸收性纸或膜使用微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素制成。在一个实施方案中，该吸收性纸或膜包含混合纤维素酯。
本吸收性纸或膜的显著进步是：它不会切割组织达到当前滤纸所切割的程度；因此，使正进行评估的患者在收集过程中经受较少的痛苦和不适。在一个实施方案中，暴露于该吸收性纸或膜的组织为乳头组织。
本文中提供如本文所述的吸收性纸或膜在用于鉴定患者处于乳腺癌的低风险下或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法中的应用。在一个方面，该吸收性纸或膜在本文中描述的任意方法中使用，或者在用于任意用途的乳头抽吸液收集的任何其它方法中使用。
一种用于检测乳头抽吸液(NAF)样品中的蛋白质的方法，该方法包括：在吸收性纸或膜上收集NAF，并用胶体金属颗粒悬浮液检测蛋白质，其中该方法可检测浓度为每个样品0.5ng至500ng的蛋白质。该金属颗粒悬浮液可含有胶体金或胶体银。在一个实施方案中，该金属颗粒悬浮液包含胶体金。
本文中还提供一种用于鉴定患者的乳腺癌风险或诊断患者处于乳腺癌的低风险下的方法，该方法包括：在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液；如果有细胞，用缓冲溶液清洗所述吸收性纸或膜以收集细胞；如果有细胞，对所述样品中的细胞的数目进行计数，并任选地确定所述细胞的细胞学；用胶体金或胶体银对所述吸收性纸或膜进行染色，并确定所述滤纸上的蛋白质的浓度；以及，将所述乳头抽吸液中的蛋白质浓度和所述乳头抽吸液中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数和/或与已知不具有乳腺癌的患者群体进行比较；其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。
本文中提供一种用于诊断患者的乳腺癌风险的方法，该方法包括：在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液，其中所述NAF样品从典型的提供者和非提供者获得；如果有细胞，用缓冲溶液清洗所述吸收性纸或膜以收集细胞；如果有细胞，对所述样品中的细胞的数目进行计数，并任选地确定所述细胞的细胞学；用胶体金或胶体银对所述吸收性纸或膜进行染色，并确定所述滤纸上的蛋白质的浓度；以及，将所述乳头抽吸液中的蛋白质浓度和所述乳头抽吸液中的细胞数，与已知具有乳腺癌的患者群体中的蛋白质浓度和细胞数和/或与已知不具有乳腺癌的患者群体进行比较；其中最低的风险与含有蛋白质并且无细胞或含有一个细胞的样品相关。
在一个实施方案中，该样品无细胞，将该患者鉴定为处于乳腺癌的最低风险下。在另一实施方案中，该样品含有一个细胞，将该患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。在又一实施方案中，该样品含有超过2个细胞，将该患者鉴定为需要进一步评估。
在一个实施方案中，确定每个乳房的总蛋白质浓度，并且如果一个样品的总蛋白质浓度大于300ng，则将该患者鉴定为需要进一步的乳腺癌评估。或者，确定每个乳房的总蛋白质浓度，并且如果每个样品的总蛋白质浓度等于或低于200ng蛋白质，则将该患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。
在一个实施方案中，在按摩乳房组织并采用如以下实施例1中描述的MASCTTM设备进行抽吸后，在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液。如本文中使用的，“MASCTTM设备”指在Quay等的美国专利号6,287,521中描述的设备，该专利以其整体并入本文。在一个非限制性的实例中，用于从患者的乳房器官收集生物样品的样品收集设备可包括乳房接合部件、固相样品收集介质以及真空泵装置；该乳房接合部件由无孔材料构造，且其尺寸和大小设置为至少容纳所述患者的乳房的乳头部分，并与之形成吸力密封；该固相样品收集介质与所述乳房接合部件流体连接，用于接收被挤压出的乳房液的样品；该真空泵装置与所述乳房接合部件气体连接，用于通过所述乳房接合部件产生负压，以促进乳房液的压出；其中所述固相样品收集介质选自：显微镜载玻片、毛细管、收集管、柱、微型柱、孔、板、膜、滤器、树脂、无机基质、珠、微粒层析介质、塑料微粒、胶乳颗粒、涂覆的管、涂覆的模板、涂覆的珠、涂覆的基质或其组合。该样品收集设备可包括用于将所述样品收集罩与所述乳房接合部件可拆卸地耦接的可拆卸耦接构件。在一些情况下，该固相样品收集介质被支撑部件所支撑，该支撑部件被一体地或可拆卸地安装在与所述乳房接合部件流体连接的所述样品收集罩内。该支撑部件可为圆盘形，并且插入所述乳房接合部件和所述样品收集罩之间。进一步地，该支撑部件可具有上部和下部扣环，并支撑吸收剂或吸附剂材料片。支撑部件支撑体可为固相样品收集模板，包括但不限于：毛细管、涂覆的管、柱、微型柱、板、孔和显微镜载玻片或其组合。支撑部件限定流体保持孔，并包括至少一个气道，以使负压通过该气道到达及离开所述乳房接合部件。该固相样品收集介质可为微粒介质，其包含在可拆卸地安装在所述样品收集罩中的筒内，并在所述筒的第一末端覆盖有多孔阻隔材料的情况下，使所述筒的第一末端与所述乳房接合部件流体连接。
在每次运行本发明的试验之前或者同时，如果能获得足够的样品量，对于进行初步的评估以验证样品来源和/或质量是有用的。这类初步评估的重点在于检验从挤压出的乳房液收集的样品确实是乳房来源的，并且没有被其它潜在的污染物(例如来自乳头周围皮肤的汗液)所污染。为了这些样品验证目的，可使用多种试验，这些试验鉴定已知存在于哺乳动物乳房液中的乳房液标志物，并且优选为乳房液的高度特异性标志物(即：典型地总是存在于乳房液中，并且不存在于所有或大部分其它可能的污染性体液和组织中的标志物)。然而，在本发明的方法中乳房液标志物的可接受水平的特异性是由仅仅已知存在于乳房液中的标志物所提供的，即使这些标志物可能存在于其它体液中。一种这样的标志物为溶菌酶，其为人血清、尿、唾液、泪液、鼻分泌物、阴道分泌物、精液和乳房液的正常组分。溶菌酶(胞壁质酶)是将多种微生物的粘多糖细胞壁中的β1,4-糖苷键水解从而引起细胞裂解的酶。用众所周知的琼脂平板扩散法可轻易地完成溶菌酶的定量测定，该方法在可从Kallestad,Sanofi Diagnostics(Chasta,Minn.)获得的随溶菌酶检测试剂盒一起提供的说明书中详细描述，该说明书通过引用以其整体并入本文。
其它比溶菌酶更具有特异性的用于样品验证的乳房液标志物在本发明的方法中是优选的，并且可被轻易地并入基于发表的和通常已知的信息的方法实施方案中。在这些标志物中有用的是在乳房液中特异性地表达或富集的蛋白质和其它生物物质。该背景下不同系列的合适的标志物已经得到表征，并且已用于开发特异性抗体，包括亲和纯化的抗体和单克隆抗体。这些抗体反过来又可以用作免疫探针，以确定选择的乳房液标志物的存在或不存在和/或将选择的乳房液标志物进行定量，以验证乳房液样品的来源和质量。用于本发明中的特别有意义的乳房液标志物包括特定的细胞角蛋白，该细胞角蛋白被正常的和癌性的乳房上皮细胞特征性地表达，已经开发了针对该细胞角蛋白的特异性的抗体探针组。(例如参见，Nagle,J.,Histochem.Cytochem.34:869-881,1986，通过引用以其整体并入本文)。可用作乳房液标志物的还有对应于人乳脂肪球蛋白(HMFG)蛋白质的糖蛋白组分的人乳房上皮抗原(HME-Ag)，针对它的特异性抗体(例如抗HMFG1，Unipath,U.K)也是可以获得的。(参见Rosner等.Cancer Invest.13:573-582,1995；Ceriani等Proc.Natl.Acad.Sci.USA74:582-586,1982；Ceriani等,Breast Cancer Res.Treat.15:161-174,1990，各文献均通过引用以其整体并入本文)。
在这一点上使用的术语“胶体金属颗粒”意在包括颗粒的分散体，优选溶胶，其由金属、金属化合物或涂覆有金属或金属化合物的核组成。胶体金属颗粒可以按照本领域已知的程序制备，例如已经描述用于制备金、银、铂或氢氧化铁等的悬浮液的那些程序。本文中使用的术语“金胶体”和“胶体金组合物”是指亚微米大小的金颗粒均匀地分散在流体(例如，水或水性缓冲液)中的悬浮液。在定量试验中使用的胶体金组合物含有高浓度的金颗粒。在一个实例中，该胶体金组合物具有3.5×1012至7.0×1012个颗粒/毫升，例如(3.5-5.25)×1012个颗粒/毫升的金颗粒浓度。
本方法可以采用免疫细胞化学(例如免疫金标记)的常规技术来进行。这样的程序例如描述在下列通过引用而并入的书籍中：(1)Colloidal Gold-Principles,Methods and Applications,Hayat M,(1989-1990)(3卷),Academic Press.(精装本)；(2)Colloidal Gold-ANew Perspective For Cytochemical Marking,Beesley J(1989),RoyalMicroscopical Society Handbook No17.Oxford Science Publications.Oxford University Press.(平装本)；(3)An Introduction ToImmunocytochemistry:Current techniques and problems,Polak J andVan Noorden5(1984)Royal Microscopical Society Handbook No11.Oxford Science Publications.Oxford University Press.(平装本)；(4)Immunocytochemistry-Modern Methods and Applications,Polak J andVan Noorden5(1986)(第2版),Butterworth Heinemann,Oxford.(精装本)；和(5)Techniques in Immunocytochemistry,Bullock G and Petmsz P(1982-1989)(4卷)Academic Press。
该程序例如也描述在：Marc Moeremans等,“Sensitive ColloidalMetal(Gold or Silver)Staining of Protein Blots on NitrocelluloseMembranes”in Analytical Biochemistry145,315-321(1985)；Danscher等,Colloidal Gold Amplification,the Journal of Histochemistry andCytochemistry,31:No.12,1394-1398(1983)；De Mey,Colloidal GoldMethods,Immunocytochemistry,Chapt.6,pp.82-112(1983)；和Moermans等的美国专利号4,920,059中。
当调节到最佳pH和浓度时，可以与蛋白质和核酸结合的胶体金属颗粒的例子是金属铂、金、银和铜，以及金属化合物，例如金、银、铂、铁或铜化合物，例如碘化银、溴化银、水合氧化铜、氧化铁、氢氧化铁或水合氧化铁、氢氧化铝或水合氧化铝、氢氧化铬或水合氧化铬、氧化钒、硫化砷、氢氧化锰、硫化铅、硫化汞、硫酸钡和二氧化钛。也可以使用由涂覆有上述金属或金属化合物的核组成的胶体。该颗粒具有与金属或金属化合物胶体类似的性质，但可以最佳地组合尺寸、密度和金属含量。通常，可以使用所有能够调节到用于蛋白质结合的最佳pH值并且在蛋白质染色中提供足以通过肉眼观察到的颜色强度的胶体金属颗粒或金属化合物。优选地，其灵敏度等同于或优于用金属金和银获得的灵敏度。
对于蛋白质的染色，用金、银和氢氧化铁胶体获得特别好的结果。
胶体金属或金属化合物颗粒的粒径可为约1至约100nm。合适的pH是在该pH下结合达到最大并且获得最浓的颜色的pH。当蛋白质和胶体金属颗粒具有相反的净电荷时，可以发生最大的结合。在这个过程中，蛋白质与胶体金属颗粒在接近于蛋白质pI的pH下相互作用。可以按照任何常用的方式来完成pH的调节。向胶体金属颗粒中加入储备缓冲液至约10mM的最终浓度即为本文中使用的一种方法。
胶体金属颗粒的合适的浓度为在实际的温育时间(从几分钟到一天)内提供充分的色饱和度的浓度。可以通过选择用于制备胶体金属颗粒的原材料的恰当浓度，或者通过用本领域已知的方法进行稀释或浓缩来获得胶体金属颗粒的合适的浓度。
在一些情况下，在染色操作之前，清洗该吸收性纸或膜。该清洗操作可用于去除附着的干扰物质。该吸收性纸或膜的这种清洗可通过将吸收性纸或膜与缓冲溶液或水接触来进行，该缓冲溶液或水任选地补充有至少一种可促进染色特异性的物质，该染色特异性被定义为胶体或金属化合物颗粒与蛋白质的特异性结合，并且在固定基质的没有固定蛋白质的那些部分上不存在这样的特异性结合。可根据需要，在调节pH之前或之后，将去污剂加入该胶体金属颗粒中。本文中此类去污剂的示例为：吐温20(聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯)、吐温80(聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)、Triton X-100(辛基苯氧基聚环氧乙醇)和十四烷基三甲基溴化铵。应当理解，还可以使用类似的去污剂，即表面活性物质。加入到胶体金属颗粒中的去污剂也可以用于促进胶体金属颗粒与蛋白质的特异性结合。
任选地，在胶体金属转化为金属离子之后，由胶体金属颗粒形成的光信号可通过合适的增强剂(例如物理显影剂，例如含银或含金的化合物)来增强，或者通过本领域已知的金属离子颜色识别方法来改变和/或增强。
可以采用本领域的常规手段来检测和定量蛋白质，例如用肉眼来读取由结合的胶体金属颗粒产生并特有的彩色信号，或者利用本领域已知的分光光度技术，例如光密度测定法。在这样的方法中，可在540-700nm的波长下测量混合物的光密度，并基于光密度的值来确定生物分子的浓度。在一个实施方案中，在590nm下测量光密度。可以利用目前公开的方法在例如约0.5pg、约1pg、约100pg、约250pg、约350pg、约500pg、约750pg、约1ng、约100ng、约250ng、约500ng、约750ng和约1μg的浓度下检测蛋白质。在一个实施方案中，在约0.5ng下检测蛋白质。
用缓冲溶液从基质(例如吸收性纸或膜)清洗细胞的方法是本领域已知的，并且是本文中考虑的。这样清洗的流出物可以利用包括但不限于显微术、免疫细胞化学和流式细胞术的方法来进一步分析。例如，在清洗含有乳头抽吸液样品的吸收性纸或膜以除去任何细胞之后，可利用显微术评估该清洗溶液，并确定溶液中细胞的数目。可确定存在于该溶液中的任意细胞的形态。另外，可针对一种或多种细胞外和/或细胞内标志物对细胞(如果存在的活)进行染色，以确定该细胞是否具有正常的属性(profile)或者具有一种或多种指示癌细胞的标志物。例如，可分析细胞中BRCA1、BRCA2、p63、细胞周期蛋白、细胞角蛋白或任何其它的标志物(该标志物可基于其存在、不存在或水平来指示该细胞为癌细胞或正常细胞)的存在或不存在。也可利用本领域已知的常规流式细胞术技术，用标记的抗体对这样的样品中的细胞进行染色。本文在以下实施例2中提供了进一步的细胞分析方法。
数字处理设备
在一些实施方案中，本文所述的方法、系统和软件包括数字处理设备，或其应用。在其他实施方案中，该数字处理设备包括执行设备功能的一个或多个硬件中央处理器(CPU)。在其他实施方案中，数字处理设备还包含配置用于执行可执行指令的操作系统。在一些实施方案中，数字处理设备任选地连接计算机网络。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至因特网，使其接入万维网。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至云计算基础架构。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至内联网。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至数据存储设备。
根据本文的描述，合适的数字处理设备举非限制性示例而言包括服务器计算机、台式计算机、膝上型计算机、笔记本计算机、微型笔记本计算机、上网本计算机、上网平板计算机、机顶盒计算机、手持式计算机、因特网设备、移动智能电话、平板计算机、个人数字助理、视频游戏机和车辆等。本领域技术人员将会认识到，许多智能电话适合用于本文所述的系统。本领域技术人员还将认识到，经挑选的具有任选的计算机网络连接性的电视机、视频播放器和数字音乐播放器适合用于本文所述的系统。合适的平板计算机包括本领域技术人员已知的具有册页、平板和可转换配置的那些平板计算机。
在一些实施方案中，数字处理设备包括配置用于执行可执行指令的操作系统。该操作系统例如为软件，包括程序和数据，其管理设备的硬件并提供用于执行应用的服务。本领域技术人员将会认识到，举非限制性示例而言，合适的服务器操作系统包括FreeBSD、OpenBSD、Linux、Mac OS X Windows和等。本领域技术人员将会认识到，举非限制性示例而言，合适的个人计算机操作系统包括和诸如等UNIX类操作系统。在一些实施方案中，操作系统由云计算来提供。本领域技术人员还将认识到，举非限制性示例而言，合适的移动智能电话操作系统包括OS、Research InBlackBerryWindowsOS、WindowsOS、和
在一些实施方案中，该设备包括存储和/或存储器设备。存储和/或存储器设备是用于临时或永久储存数据或程序的一个或多个物理装置。在一些实施方案中，所述设备为易失性存储器，并且需要电力来维持储存的信息。在一些实施方案中，所述设备为非易失性存储器，并且在数字处理设备未被供电时保留储存的信息。在其他实施方案中，非易失性存储器包括闪速存储器。在一些实施方案中，非易失性存储器包括动态随机存取存储器(DRAM)。在一些实施方案中，非易失性存储器包括铁电随机存取存储器(FRAM)。在一些实施方案中，非易失性存储器包括相变随机存取存储器(PRAM)。在其他实施方案中，设备为存储设备，举非限制性示例而言，包括CD-ROM、DVD、闪速存储器设备、磁盘驱动器、磁带驱动器、光盘驱动器和基于云计算的存储等。在其他实施方案中，存储和/或存储器设备为诸如本文所公开的设备的组合。
在一些实施方案中，数字处理设备包括显示器，用于向用户发送视觉信息。在一些实施方案中，显示器为阴极射线管(CRT)。在一些实施方案中，显示器为液晶显示器(LCD)。在其他实施方案中，显示器为薄膜晶体管液晶显示器(TFT-LCD)。在一些实施方案中，显示器为有机发光二极管(OLED)显示器。在各其他实施方案中，OLED显示器为无源矩阵OLED(PMOLED)或有源矩阵OLED(AMOLED)显示器。在一些实施方案中，显示器为等离子显示器。在其他实施方案中，显示器为视频投影仪。在其他实施方案中，显示器为诸如本文所公开的设备的组合。
在一些实施方案中，数字处理设备包括输入设备，用于从用户接收信息。在一些实施方案中，输入设备为键盘。在一些实施方案中，输入设备为指点设备，举非限制性示例而言，包括鼠标、轨迹球、轨迹板、操纵杆、游戏控制器或触控笔。在一些实施方案中，输入设备为触摸屏或多点触摸屏。在其他实施方案中，输入设备为用于捕捉语音或其他声音输入的麦克风。在其他实施方案中，输入设备为用于捕捉动作或视觉输入的视频摄像机。在其他实施方案中，输入设备为诸如本文所公开的设备的组合。
非暂时性计算机可读存储介质
在一些实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括一个或多个计算机可读存储介质，所述计算机可读存储介质编码有程序，该程序包括可以由任选地联网的数字处理设备的操作系统执行的指令。在进一步的实施方案中，计算机可读存储介质为数字处理设备的有形组件。在更进一步的实施方案中，计算机可读存储介质任选地可以从数字处理设备移除。在一些实施方案中，计算机可读存储介质举非限制性示例而言包括CD-ROM、DVD、闪速存储器设备、固态存储器、磁盘驱动器、磁带驱动器、光盘驱动器、云计算系统及服务等。在一些情况下，程序和指令永久地、基本上永久地、半永久地或非暂时性地编码在介质上。
计算机程序
在一些实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括至少一个计算机程序，或其应用。计算机程序包括指令序列，可在数字处理设备的CPU中执行，并被编写用于执行指定的任务。根据本文所提供的公开内容，本领域技术人员将会认识到，计算机程序能够以各种版本的各种语言来编写。在一些实施方案中，计算机程序包含一个指令序列。在一些实施方案中，计算机程序包含多个指令序列。在一些实施方案中，从一个位置提供计算机程序。在其它实施方案中，从多个位置提供计算机程序。在各实施方案中，计算机程序包括一个或多个软件模块。在各实施方案中，计算机程序部分地或整体地包括一个或多个网络应用、一个或多个移动应用、一个或多个独立应用、一个或多个网络浏览器插件、扩展、附加组件或扩充组件，或者其组合。
网络应用
在一些实施方案中，计算机程序包括网络应用。根据本文所提供的公开内容，本领域技术人员将会认识到，在各实施方案中网络应用利用一个或多个软件框架以及一个或多个数据库系统。在一些实施方案中，网络应用创建于诸如NET或Ruby on Rails(RoR)等软件框架之上。在一些实施方案中，网络应用利用一个或多个数据库系统，举非限制性示例而言，包括关系型、非关系型、面向对象型、关联型及XML数据库系统。在其他实施方案中，合适的关系型数据库系统举非限制性示例而言包括SQL Server、mySQLTM和等。本领域技术人员还将认识到，在各实施方案中网络应用是以一个或多个版本的一种或多种语言所编写。网络应用能够以一种或多种标记语言、演示定义语言、客户端脚本语言、服务器端编码语言、数据库查询语言或其组合来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如超文本标记语言(HTML)、扩展超文本标记语言(XHTML)或者可扩展标记语言(XML)等标记语言来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如级联样式表(CSS)等演示定义语言来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如异步Javascript和XML(AJAX)、Actionscript、Javascript或者等客户端脚本语言来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如动态服务器页面(ASP)、Perl、JavaTM、Java服务器页面(JSP)、超文本预处理器(PHP)、PythonTM、Ruby、Tcl、Smalltalk、或Groovy等服务器端编码语言来编写。在一些实施方案中，网路应用是在一定程度上以诸如结构化查询语言(SQL)等数据库查询语言来编写。在一些实施方案中，网络应用集成诸如Lotus等企业服务器产品。在一些实施方案中，用于为艺术家提供允许艺术家上传信息和媒体文件的职业发展网络的网络应用包括媒体播放器元素。在各其他实施方案中，媒体播放器元素利用许多合适的多媒体技术中的一种或多种技术，所述多媒体技术举非限制性示例而言包括HTML5、JavaTM和等。
移动应用
在一些实施方案中，计算机程序包括提供给移动数字处理设备的移动应用。在一些实施方案中，在制造移动数字处理设备时向其提供移动应用。在其它实施方案中，经由本文所述的计算机网络将移动应用提供给移动数字处理设备。
鉴于本文所提供的公开内容，通过本领域技术人员已知的使用本领域已知硬件、语言和开发环境的技术来创建移动应用。本领域技术人员将会认识到，移动应用是以多种语言来编写的。举非限制性示例而言，合适的编程语言包括C、C++、C#、Objective-C、JavaTM、Javascript、Pascal、Object Pascal、PythonTM、Ruby、VB.NET、WML以及具有或不具有CSS的XHTML/HTML，或者其组合。
合适的移动应用开发环境可从多个来源获得。市售的开发环境举非限制性示例而言包括AirplaySDK、alcheMo、Celsius、Bedrock、Flash Lite、.NET Compact Framework、Rhomobile和WorkLight Mobile Platform等。其它可免费获得的开发环境举非限制性示例而言包括Lazarus、MobiFlex、MoSync和Phonegap等。此外，移动设备制造商发布软件开发者套件，举非限制性示例而言包括iPhone和iPad(iOS)SDK、AndroidTMSDK、SDK、BREWSDK、OS SDK、Symbian SDK、webOS SDK和MobileSDK。
本领域技术人员将会认识到，多个商业论坛可供发布移动应用，举非限制性示例而言包括App Store、AndroidTMMarket、App World、针对Palm设备的App Store、针对webOS的App Catalog、Marketplace for Mobile、针对设备的Ovi Store、Apps和DSi Shop。
独立应用
在一些实施方案中，计算机程序包括独立应用，该独立应用是作为独立的计算机过程运行的程序，而非是对现有过程的附加，例如，不是插件。本领域技术人员将会认识到，独立应用经常是编译的。编译器是将以编程语言编写的源代码变换成诸如汇编语言或机器代码等二进制目标代码的一个或多个计算机程序。举非限制性示例而言，合适的编译编程语言包括C、C++、Objective-C、COBOL、Delphi、Eiffel、JavaTM、Lisp、PythonTM、Visual Basic和VB.NET或者其组合。经常至少部分地执行编译以创建可执行程序。在一些实施方案中，计算机程序包括一个或多个可执行的经编译应用。
软件模块
在各实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括软件、服务器和/或数据库模块，或其应用。鉴于本文所提供的公开内容，通过本领域技术人员已知的使用本领域已知机器、软件和语言的技术来创建软件模块。本文所公开的软件模块以多种方式实现。在各实施方案中，软件模块包括一个文件、一段代码、一个编程对象、一个编程结构或者其组合。在其他各实施方案中，软件模块包括多个文件、多段代码、多个编程对象、多个编程结构或者其组合。在各实施方案中，所述一个或多个软件模块举非限制性示例而言包括网络应用、移动应用和独立应用。在一些实施方案中，软件模块处于一个计算机程序或应用之中。在其他实施方案中，软件模块处于不止一个计算机程序或应用之中。在一些实施方案中，软件模块被承载于一个机器上。在其他实施方案中，软件模块被承载于不止一个机器上。在其他实施方案中，软件模块被承载于云计算平台上。在一些实施方案中，软件模块被承载于位于一个位置的一个或多个机器上。在其他实施方案中，软件模块被承载于位于不止一个位置的一个或多个机器上。
数据库
在一些实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括一个或多个数据库，或其应用。鉴于本文所提供的公开内容，本领域技术人员将会认识到，许多数据库适合于宏基因组信息(包括宏基因组谱)、宏转录组信息(包括宏转录组谱)和多重谱的存储和检索。在各实施方案中，合适的数据库举非限制性示例而言包括关系型数据库、非关系型数据库、面向对象型数据库、对象数据库、实体关系模型数据库、关联型数据库以及XML数据库。在一些实施方案中，数据库是基于因特网的。在进一步的实施方案中，数据库是基于网络的。在更进一步的实施方案中，数据库是基于云计算的。在其他实施方案中，数据库基于一个或多个本地存储设备。
为了本领域技术人员能够更好地实施本文中描述的组合物和方法，提供以下实施例用于说明的目的。
实施例
实施例1：乳头抽吸液的评估
本试验是涉及三(3)名健康的、未怀孕的、非哺乳的女性受试者的单中心研究。受试者以在诊所出现的顺序而加入。
主要试验目的是确定产生导管液(ductal fluid)的30到65岁女性的百分比，如在使用MASCTTM设备装置时根据蛋白质在硝化纤维素滤器上的存在所确定的。
次要目的是在细胞学上评价乳头抽吸液中细胞的存在和类型(如果有的话)。
缩写
本文中使用的缩写包括，例如，MAF：乳房抽吸液；MASCTTM：乳房抽吸样品细胞学检验；NA：不可获得；ND：未完成；NR：未记录；和NAF：乳头抽吸液。
方法：
简言之，通过恰好将已称皮重的(tared)硝化纤维素滤器与每个乳头(每个乳房一个)接触，来使用该硝化纤维素滤器收集导管液。然后，采用具有已称皮重的样品收集单元的MASCTTM设备来抽吸出乳房液样品。用以下所述的染色技术来检测两组硝化纤维素滤器的蛋白质。将通过清洗含有乳头抽吸液样品的滤器而收集的细胞进行细胞学检查。
评估：
该试验的主要终点是当使用MASCTTM设备时，如根据蛋白质在硝化纤维素滤器上的存在所确定的，完成产生导管液的试验的女性的百分比。
次要终点是如通过细胞学评价所确定的，细胞在乳头抽吸液中的存在。
结果：
对于使用从这三名受试者获得的滤器完成的蛋白质检测，在乳头清洗滤器样品上都没有显示出蛋白质的存在。来自MASCTTM设备的所有滤器显示：在设备滤器上检测到蛋白质。
整体研究设计和计划
MASCTTM设备之前已经通过510(k)监管途径(regulatorypathway)在市场上被禁止。设计该临床研究，以测试对MASCTTM设备的改良，进行该改良以提高效力和可用性以及检测来自女性(包括那些之前被认为是非分泌者的女性)的乳头抽吸液中的蛋白质的能力。乳头抽吸液在帮助乳房健康管理方面的临床使用在过去50年间受到收集和测量流体存在的现有方法的限制。实际上，采用当前技术，所有女性中高达50％是非分泌者，也就是说，她们被判定为不产生NAF。
这是涉及高达50名健康的、未怀孕的、非哺乳的女性受试者入选的单中心研究。受试者以在诊所出现的顺序而加入。
在进入该研究之前，研究者或指定的助手向每名受试者解释该研究的性质、其目的、程序、预期持续时间、可用的备选方案和参与研究涉及的利益和风险。每名受试者被给予同意书文件，并且有机会提问；并且被告知她有权在任何时间不受妨碍地退出该研究。在这个说明之后，并且在进行任何研究特有的程序之前，受试者自愿地签署知情同意声明并写上日期。在参与该研究之前，每名受试者收到已签名并写上日期的书面知情同意表格和其它任何书面资料的副本。
入选/排除标准检查和妊娠评估
必要时，在进一步参与该研究之前，对每名患者进行尿妊娠试验。阳性妊娠试验会将该受试者从参与研究中排除。检查所有的入选和排除标准，以确保受试者的合格性。在合格性确立之后，分配唯一的受试者识别号码。
人口统计数据和病史
从每名受试者获得下列人口统计数据和病史：年龄和种族来源；家族病史，特别是母亲和姐妹；个人的病史，包括乳腺癌、良性乳房病状和生殖系统疾病(例如，卵巢或子宫内膜肿瘤)；伴随的药物治疗；初潮年龄；首次妊娠年龄；首次活产年龄；绝经年龄；以及身高和体重。
乳房准备
受试者取斜卧位。用酒精清洁两个乳房的乳头和乳晕周围区域，以除去多余的皮肤油脂、化妆品或上皮碎屑。在酒精蒸发后，将温暖潮湿的敷布放在两个乳房上10到15分钟。将敷布除去，受试者取坐立位。用酒精擦拭乳头区域，以除去任何存在的导管塞(ductal plug)。
乳头接触程序
所有操作滤器材料的人都要带手套和防护面罩，以使滤器污染的风险最小化。
设备清洁程序
在各受试者使用之前，用抗微生物溶液如彻底清洁MASCTTM设备。该设备不暴露于极端温度下或高压处理。定期检查设备的设备材料劣化或是否不能产生负压。如果观察到任一情况，则替换该单元。
MASCTTM和乳头接触程序
a.将一个滤片组件标记为“左”，并将第二滤片组件标记为“右”。
b.称重并记录每个组件的重量，注意不要用裸手接触该滤器，根据需要使用镊子。
c.将一个组件插入吸乳器设备中。
d.指示受试者进行手动乳房自我按摩，从胸壁开始并逐渐移动到乳头-乳晕联合部，持续大约1分钟。
e.随后，受试者用双手挤压她的乳房，同时由医师或护士开动吸乳器设备持续60至90秒。
f.除去滤片组件，并对用于流体收集的MASCTTM滤片进行称重。
g.利用抗微生物溶液如擦拭样品收集漏斗的表面，并清洗收集小瓶。
h.对第二个乳房重复步骤c、d、e、f和g。
i.将该滤片储存在冰箱中，以用于后续的蛋白质评价和/或细胞学评价。应采用受试者ID号码和收集日期来适当地标记每个滤片组件的包装。
可以对这个收集程序进行改变，但不能超过在MASCTTM设备批准的说明书中所允许的按摩/收集程序的次数。
受试者观察
受试者留在诊所，并在抽吸之后观察设备不良反应30分钟。如果当时没有正在进展或未消除的不良反应，可让受试者离开。根据研究者的判断，在此观察期结束时具有任何不良反应的受试者将留在研究场所，直至该反应消除或者已经作出随访安排。
研究的实施
根据本文中描述的方案对该研究中的所有受试者进行研究。
有三(3)名受试者入选，下表中提供了患者的处置情况。
下表包括关于人口统计数据的各患者的数据列表。没有死亡或严重的不良事件。
讨论和整体结论
在对该研究中使用的各个滤器进行测试后获得以下结果。
乳头清洗结果
对照乳头清洗滤器样品都没有显示存在蛋白质。
吸乳器结果
受试者 乳房 蛋白质浓度
受试者#1 左乳房 30ng蛋白质
受试者#1 右乳房 868pg蛋白质
受试者#2 左乳房 580pg蛋白质
受试者#2 右乳房 71pg蛋白质
受试者#3 左乳房 7.1ng蛋白质
受试者#3 右乳房 17.6ng蛋白质
基于这些结果，确定MASCTTM设备获得了乳头抽吸液，如由蛋白质的存在所证明的。
死亡或严重的不良事件
没有死亡或严重的不良事件。
后续数据
在31位年龄为18至65岁的女性的研究中，利用本发明所公开的方法分析了蛋白质，并在所有31位女性中检测到蛋白质(一位女性只在一个乳房中检测到蛋白质)，临床效用为97％。当可以进行癌症预防措施时，本发明的方法相对于现有技术的改善使得该试验对鉴定具有早期、癌前变化的女性是有用的。
功效评价总结
如在使用MASCTTM设备时获得的所有硝化纤维素滤器上蛋白质的存在所确定的，达到了该研究的主要目标。完成了在细胞学上评价乳头抽吸液的细胞的存在和类型的次要目标。成功地分析了所有样品的细胞物质。
实施例2：来自乳房液的生物样品的细胞学
本实施例描述了使用常规的细胞学技术来鉴定和评价从实施例1中描述的样品获得的细胞。在滤纸上收集样品之后，用任何合适的缓冲的洗液(例如，磷酸盐缓冲盐水)清洗该滤纸以收集细胞，可进一步处理该流体，并且例如通过在改进的细胞学小瓶中离心来收集细胞。然后，将处理过的样品转移到干净的显微镜载玻片的中心区域，并将盖玻片滑过该样品，以使该样品沿着该载玻片的表面扩散。使该载玻片风干，然后例如在无水酒精中固定，并用标准的细胞学染色剂例如亚甲蓝、苏木精(hematoxyln)和曙红或其它合适的染色剂进行染色。
然后，利用公知的方法，采用光学显微镜检查来考查载玻片上的细胞非典型生长和细胞团的证据，所述公知的方法包括在以下文献中描述的方法：Diagnosis of Non-Palpable Breast Lesions:Ultrasonographically Controlled Fine-Needle Aspiration:Diagnostic andPrognostic Implications of Cytology by Jacqueline Mouriquand,S.Karger Pub.,1993年7月；Breast:Guides to Clinical Aspiration Biopsyby Tilde S.and Irwin K.Kline,Igaku-Shoin Medical Pub.,1988年5月；Cytopathology of the Breast(Asop Theory and Practice of Cytopathologyby Shahla Masood,American Society of Clinical Pathology,1995年11月；Fine Needle Aspiration Cytology and Its Clinical Applications:Breast and Lung by Philip S.Feldman,American Society of ClinicalPathology,1984年11月；将每个文献通过引用以其整体并入本文。
尽管本文中已经示出并描述了优选的实施方案，但对本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案仅仅是以示例的方式提供的。本领域技术人员在不偏离本发明的情况下，现将想到多种变化、改变和替代。应当理解，本文中描述的本发明实施方案的各种替代方案可用于实践本发明。目的在于用下面的权利要求限定本发明的范围，从而涵盖在这些权利要求的范围内的方法和结构及其等同物。

Claims (60)

1.一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液(NAF)样品的系统，其包括：
a.用于吸收所述乳头抽吸液样品的吸收性纸，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；以及
b.用于使所述乳头抽吸液样品的总蛋白质可视化、对所述乳头抽吸液样品的细胞的数目进行计数或其组合的显微镜。
2.根据权利要求1所述的系统，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
3.根据权利要求1所述的系统，进一步包括用于确定所述乳头抽吸液样品的总蛋白质的胶体金属染色剂。
4.根据权利要求3所述的系统，其中所述胶体金属为胶体金或胶体银。
5.根据权利要求1所述的系统，进一步包括：配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，所述计算机程序包括由所述计算机处理设备执行的、以应用模型或算法来分析所述乳头抽吸液样品的总蛋白质含量、所述乳头抽吸液样品的细胞数或其组合的软件模块。
6.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以为所述个体指定治疗方案的软件模块。
7.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片数据库中的软件模块。
8.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果存储于分析结果数据库中的软件模块。
9.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将所述乳头抽吸液样品的总蛋白质含量或细胞数与标准进行比较的软件模块。
10.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或所述个体的软件模块。
11.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或所述个体的软件模块。
12.根据权利要求5所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以产生包括所述分析结果的报告的软件模块。
13.根据权利要求1所述的系统，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
14.一种编码有计算机程序的非暂时性计算机可读存储介质，所述计算机程序包括可由计算机处理设备执行的指令，以创建应用，所述应用包括：
(a)配置为应用模型或算法来分析吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液样品的总蛋白质含量和/或细胞数的软件模块，所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；以及
(b)配置为为所述个体指定治疗方案的软件模块。
15.根据权利要求14所述的存储介质，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
16.根据权利要求14所述的存储介质，其中所述模型或算法包括将所述乳头抽吸液样品的总蛋白质含量和/或所述乳头抽吸液样品的细胞数与标准进行比较。
17.根据权利要求14所述的存储介质，其中所述应用进一步包括在计算机存储器中的显微照片的数据库。
18.根据权利要求14所述的存储介质，其中所述应用进一步包括在计算机存储器中的分析结果的数据库。
19.根据权利要求14所述的存储介质，其中所述应用进一步包括配置为产生包括分析结果的报告的软件模块。
20.根据权利要求14所述的存储介质，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
21.一种尺寸设置为覆盖乳头的吸收性纸，其包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素。
22.根据权利要求21所述的吸收性纸，包括如图1中所示的吸收性纸。
23.根据权利要求21所述的吸收性纸，其中所述吸收性纸包含混合纤维素酯纸。
24.根据权利要求21所述的吸收性纸，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
25.根据权利要求21所述的吸收性纸，其中所述纸包含如图1中所示的L形元件4。
26.一种用于在有此需要的个体中鉴定发生乳腺癌的风险的方法，包括：
a)检测吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液样品中的蛋白质的总量和/或细胞的数目，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素；以及
b)基于所述乳头抽吸液样品的蛋白质的总量和/或细胞的数目，来鉴定发生乳腺癌的风险。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
29.根据权利要求26所述的方法，其中在所述样品含有蛋白质并且无细胞的情况下，将所述个体鉴定为处于发生乳腺癌的低风险下。
30.根据权利要求26所述的方法，其中在所述样品含有约1pg至约500ng蛋白质并且无细胞的情况下，将所述个体鉴定为处于乳腺癌的低风险下。
31.根据权利要求30所述的方法，其中如果所述样品含有至少约300ng蛋白质及两个或更多个细胞，则将所述个体鉴定为需要进一步的乳腺癌评估，或者诊断为处于乳腺癌的中等或高风险下。
32.根据权利要求30所述的方法，其中如果所述样品含有约300ng蛋白质至约2μg蛋白质以及两个或更多个细胞，则将所述个体鉴定为需要进一步的乳腺癌评估，或者诊断为处于乳腺癌的中等或高风险下。
33.根据权利要求30所述的方法，其中如果所述样品含有约300ng蛋白质至约2μg蛋白质以及两个至五十个细胞，则将所述个体鉴定为需要进一步的乳腺癌评估，或者诊断为处于乳腺癌的中等或高风险下。
34.根据权利要求26所述的方法，其中所述个体被诊断为乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者。
35.根据权利要求26所述的方法，其中检测乳头抽吸液样品中的细胞包括：清洗所述吸收性纸，收集流出物，并对流出物中的细胞进行计数。
36.根据权利要求35所述的方法，其中在确定蛋白质的总量之前清洗所述吸收性纸。
37.根据权利要求26所述的方法，其中通过用金属颗粒悬浮液对所述吸收性纸进行染色来检测蛋白质的总量。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述金属颗粒悬浮液为胶体金或胶体银。
39.根据权利要求26所述的方法，其中使用显微镜来检测所述细胞数。
40.根据权利要求26所述的方法，其中在按摩乳房组织，并采用用于从患者的乳房器官收集生物样品的样品收集设备进行抽吸后，在吸收性纸上收集所述乳头抽吸液。
41.一种包含乳头抽吸液(NAF)和尺寸设置为覆盖乳头的吸收性纸的组合物，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素。
42.根据权利要求41所述的组合物，其包含如图1中所示的吸收性纸。
43.根据权利要求26所述的组合物，其中所述吸收性纸包含混合纤维素酯纸。
44.根据权利要求26所述的组合物，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
45.一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液(NAF)样品的系统，包括：
a.用于吸收所述乳头抽吸液样品的吸收性纸，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；以及
b.吸乳器设备。
46.根据权利要求45所述的系统，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
47.根据权利要求45所述的系统，其中所述吸乳器设备为MASCTTM设备。
48.一种用于分析来自有此需要的个体的乳头抽吸液(NAF)样品的系统，包括：
a.用于吸收所述乳头抽吸液样品的吸收性纸，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯纸或硝化纤维素，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；以及
b.用于确定所述乳头抽吸液样品的总蛋白质的胶体金属染色剂。
49.根据权利要求48所述的系统，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
50.根据权利要求48所述的系统，进一步包括用于使所述乳头抽吸液样品的总蛋白质可视化、对所述乳头抽吸液样品的细胞的数目进行计数或其组合的显微镜。
51.根据权利要求48所述的系统，其中所述胶体金属为胶体金或胶体银。
52.根据权利要求48所述的系统，进一步包括：配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，所述计算机程序包括由所述计算机处理设备执行的、以应用模型或算法来分析所述乳头抽吸液样品的总蛋白质含量、所述乳头抽吸液样品的细胞数或其组合的软件模块。
53.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以为所述个体指定治疗方案的软件模块。
54.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片数据库中的软件模块。
55.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果存储于分析结果数据库中的软件模块。
56.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将所述乳头抽吸液样品的总蛋白质含量或细胞数与标准进行比较的软件模块。
57.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或所述个体的软件模块。
58.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或所述个体的软件模块。
59.根据权利要求52所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以产生包括所述分析结果的报告的软件模块。
60.根据权利要求48所述的系统，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
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