JP2015500039A - 新規なo−ホスホセリンスルフヒドリラーゼを用いたシステイン又はその誘導体の製造方法 - Google Patents
新規なo−ホスホセリンスルフヒドリラーゼを用いたシステイン又はその誘導体の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015500039A JP2015500039A JP2014547104A JP2014547104A JP2015500039A JP 2015500039 A JP2015500039 A JP 2015500039A JP 2014547104 A JP2014547104 A JP 2014547104A JP 2014547104 A JP2014547104 A JP 2014547104A JP 2015500039 A JP2015500039 A JP 2015500039A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- opss
- cysteine
- ops
- derivative
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/12—Methionine; Cysteine; Cystine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y205/00—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5)
- C12Y205/01—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5) transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5.1)
- C12Y205/01065—O-Phosphoserine sulfhydrylase (2.5.1.65)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
本発明の一態様として、配列番号1又は2で表されるアミノ酸配列を有するO-ホスホセリンスルフヒドリラーゼ(OPSS)又はこれを発現する微生物の存在下に、O-ホスホセリン(OPS)を硫化物と反応させてシステイン又はこの誘導体を製造するステップを含む、システイン又はこの誘導体の製造方法を提供する。
〔発明の実施のための形態〕
以下、本発明を実施例により、より詳しく説明する。しかし、これら実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれら実施例により制限されるものではない。
トリコモナス・バギナリス(Trichomonas vaginalis)由来のOPSSは、OPSS以外に2種類の補助酵素を必要とするマイコバクテリアム・テュバーキュローシス(Mycobacterium tuberculosis)由来のOPSSとは異なり、補助酵素の非存在下においても活性を示し、60℃で最適の活性を示すアエロピュルム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)のOPSSとは異なり、37℃で最適活性を示すことが報告されている。前記事実を基づき、本発明者らはトリコモナス・バギナリスのOPSSアミノ酸配列を基盤として、これとタンパク質配列類似性が高い微生物由来の新規なOPSSを確保した。前記新規なOPSSは、それぞれ配列番号1及び2のアミノ酸配列を有し、Dac-OPSS及びDal-OPSSと命名した。また、前記配列番号1及び2のアミノ酸配列を有する新規なOPSSは、それぞれ配列番号9及び10の塩基配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。
OPSを基質としたシステインの合成が成されるかを把握するために確保した総3種のOPSS酵素のシステインの合成活性を測定した。システインの合成活性の評価(cysM enzyme assay)の条件及び方法は、文献報告(非特許文献1、非特許文献2、非特許文献3)に記載された方法を引用した。酵素活性を測定するための条件は、下記表2の通りである。
システイン合成過程においてpHがどのような影響を及ぼすかを調べるために、Dal-OPSSのpH別システイン転換率を確認した。100 mMのバッファー条件で50μg/mlを用いて37℃で、30分間反応させた。リン酸カリウムバッファー のpH 6.4/7.0/7.4/8.0, Tris-HCl バッファー pH 7.0/7.4/8.0/8.5/8.8, 炭酸ナトリウムバッファー pH 8.0/8.5/9.0/10.0 HEPES バッファー pH 7.4, クエン酸ナトリウムバッファー pH 4.0/5.0/6.0を用いた。生成されたシステインはGaitondeの方法で定量した。図2に示された通り、pH 7.0〜7.4で最も高い活性を示し、最も高い活性を示した条件はTris-HCl(pH 7.0)であり、クエン酸ナトリウム, 炭酸ナトリウムバッファーでは活性がほとんど見られなかった。また、バッファー別に最適pHは異なった。
大腸菌W3110菌株にserBが欠損し、変異型serA*が導入されてOPS製造能を有するKCCM11103P(CA07-0022/pCL-prmf-serA*(G336V)-serC;特許文献2)をMMYE固体培地に塗抹した後、30℃のインキュベーターで一晩培養した。MMYE固体培地で一晩培養した菌株を25 mlの力価培地に1ループずつ接種した後、これを30℃、200 rpmのインキュベーターで48時間培養した。前記方法で製造されたOPS醗酵液を基質としてTva-OPSS、Dac-OPSS及びDal-OPSSのシステイン転換率を確認した。5.4 mMのOPS醗酵液、10 mMのNa2S、0.2 mMのPLP条件で各OPSS濃度を50μg/mlの条件で37℃でシステイン転換反応を行った。生成されたシステインはGaitondeの方法で定量した。図3及び表4は37℃で3種のOPSSの時間別システイン転換率を示し、前記転換反応条件で3種のOPSSのうち、Dal-OPSSを用いた時に最も高い転換率を示したことが確認された。
システイン転換反応において助酵素要求性を確認するために、Dal-OPSSを用いてPLP(pyridoxal-5’-phosphate) 及びDTT(dithiothreitol)の有無によるシステイン転換率を確認した。5.4 mMのOPS醗酵液、10 mMのNa2Sを基質として25 mMのDTT及び/又は0.2 mMのPLPの条件において、37℃で30分間反応させ、生成されたシステインはGaitondeの方法で定量した。その結果を下記表5に示した。
Claims (7)
- 配列番号1又は2で表されるアミノ酸配列を有するO-ホスホセリンスルフヒドリラーゼ(O-phosphoserine sulfhydrylase, OPSS)、又はこれを発現する微生物の存在下に、O-ホスホセリン(O-phosphoserine, OPS)を硫化物と反応させてシステイン又はこの誘導体を製造するステップを含む、システイン又はこの誘導体の製造方法。
- 前記OPSSが、配列番号9〜12からなる群から選択される塩基配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項1に記載の方法。
- 前記OPSが、精製されたOPS又はOPSを含む微生物の醗酵液である請求項1に記載の方法。
- 前記硫化物が、Na2S、H2S、NaSH,(NH4)2S及びS2O3からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記硫化物の添加量が、反応時に添加されるOPSモル濃度の0.1〜3倍である、請求項1に記載の方法。
- 前記反応時に補助因子として0.001〜2mMのPLP(pyridoxal-5’-phosphate) 又0.001〜100mMのDTT(dithiothreitol)を添加する、請求項1に記載の方法。
- 前記システイン又はこの誘導体を分離及び精製するステップを含む、請求項1に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020110135665A KR101404376B1 (ko) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | 신규 o-포스포세린 설프하이드릴라아제를 이용하여 시스테인 또는 이의 유도체를 생산하는 방법 |
KR10-2011-0135665 | 2011-12-15 | ||
PCT/KR2012/010900 WO2013089478A2 (ko) | 2011-12-15 | 2012-12-14 | 신규 o-포스포세린 설프하이드릴라아제를 이용하여 시스테인 또는 이의 유도체를 생산하는 방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015500039A true JP2015500039A (ja) | 2015-01-05 |
JP5860550B2 JP5860550B2 (ja) | 2016-02-16 |
Family
ID=48613316
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014547104A Active JP5860550B2 (ja) | 2011-12-15 | 2012-12-14 | 新規なo−ホスホセリンスルフヒドリラーゼを用いたシステイン又はその誘導体の製造方法 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9243268B2 (ja) |
EP (1) | EP2792748B1 (ja) |
JP (1) | JP5860550B2 (ja) |
KR (1) | KR101404376B1 (ja) |
CN (1) | CN104039963B (ja) |
BR (2) | BR122019023670B1 (ja) |
CA (2) | CA2914131C (ja) |
ES (1) | ES2634683T3 (ja) |
MY (2) | MY164371A (ja) |
PH (1) | PH12014501353A1 (ja) |
RU (1) | RU2579689C1 (ja) |
WO (1) | WO2013089478A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018526017A (ja) * | 2015-09-11 | 2018-09-13 | シージェイ チェイルジェダン コーポレーション | 新規o‐ホスホセリン排出タンパク質変異体並びにそれを用いたo‐ホスホセリン、システイン及びその誘導体の生産方法 |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101677328B1 (ko) * | 2014-08-12 | 2016-11-18 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
KR101825310B1 (ko) * | 2016-12-29 | 2018-03-15 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린을 생산하는 에스케리키아 속 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인을 생산하는 방법 |
KR102025867B1 (ko) | 2017-07-13 | 2019-09-27 | 씨제이제일제당 주식회사 | 인산을 발효액 또는 발효 폐액으로부터 회수 및 재사용하는 방법 |
KR20190092951A (ko) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 씨제이제일제당 (주) | 연속식 크로마토그래피 공정을 이용한 천연 l-시스테인 결정의 제조 방법 |
KR20190092950A (ko) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 씨제이제일제당 (주) | 연속식 크로마토그래피 공정을 이용한 천연 l-시스테인 염산염 수화물 결정의 제조 방법 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006304673A (ja) * | 2005-04-28 | 2006-11-09 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | システイン合成酵素のホスホセリンに対する基質特異性を高める方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1299128C (en) * | 1986-11-19 | 1992-04-21 | Tooru Miyahara | Method of producing l-cystine |
US6579705B2 (en) | 2001-04-04 | 2003-06-17 | Consortium Fur Elektrochemische Industrie Gmbh | Process for preparing non-proteinogenic L-amino acids |
RU2279477C2 (ru) * | 2003-12-05 | 2006-07-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Мутантная серинацетилтрансфераза, фрагмент днк, кодирующий мутантную серинацетилтрансферазу (варианты), бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-цистеина, и способ продукции l-цистеина |
DE102004035052A1 (de) * | 2004-07-20 | 2006-02-16 | Basf Ag | Mikroorganismen zur Herstellung von schwefelhaltigen Verbindungen |
WO2006138689A2 (en) * | 2005-06-17 | 2006-12-28 | Microbia, Inc. | Improved amino acid and metabolite biosynthesis |
KR101381048B1 (ko) * | 2010-10-20 | 2014-04-14 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린 생산 균주 및 이로부터 생산된 o-포스포세린으로부터 l-시스테인 또는 이의 유도체의 생산방법 |
-
2011
- 2011-12-15 KR KR1020110135665A patent/KR101404376B1/ko active IP Right Grant
-
2012
- 2012-12-14 CA CA2914131A patent/CA2914131C/en active Active
- 2012-12-14 MY MYPI2014001730A patent/MY164371A/en unknown
- 2012-12-14 US US14/365,571 patent/US9243268B2/en active Active
- 2012-12-14 ES ES12858268.1T patent/ES2634683T3/es active Active
- 2012-12-14 MY MYPI2016000752A patent/MY176977A/en unknown
- 2012-12-14 BR BR122019023670-4A patent/BR122019023670B1/pt active IP Right Grant
- 2012-12-14 CN CN201280067058.7A patent/CN104039963B/zh active Active
- 2012-12-14 BR BR112014014762-0A patent/BR112014014762B1/pt active IP Right Grant
- 2012-12-14 EP EP12858268.1A patent/EP2792748B1/en active Active
- 2012-12-14 WO PCT/KR2012/010900 patent/WO2013089478A2/ko active Application Filing
- 2012-12-14 JP JP2014547104A patent/JP5860550B2/ja active Active
- 2012-12-14 RU RU2014125851/10A patent/RU2579689C1/ru active
- 2012-12-14 CA CA2859125A patent/CA2859125C/en active Active
-
2014
- 2014-06-13 PH PH12014501353A patent/PH12014501353A1/en unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006304673A (ja) * | 2005-04-28 | 2006-11-09 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | システイン合成酵素のホスホセリンに対する基質特異性を高める方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6015026096; Journal of Biological Chemistry Vol.283, No.46, 2008, p.31567-31574 * |
JPN6015026097; Extremophiles Vol.12, 2008, p.431-439 * |
JPN6015026098; Pesticide Biochemistry and Physiology Vol.69, 2001, p.189-197 * |
JPN6015026099; Standards in Genomic Sciences Vol.1, 2009, p.242-253 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018526017A (ja) * | 2015-09-11 | 2018-09-13 | シージェイ チェイルジェダン コーポレーション | 新規o‐ホスホセリン排出タンパク質変異体並びにそれを用いたo‐ホスホセリン、システイン及びその誘導体の生産方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MY164371A (en) | 2017-12-15 |
MY176977A (en) | 2020-08-28 |
PH12014501353B1 (en) | 2014-09-22 |
CA2859125C (en) | 2018-05-01 |
CA2914131A1 (en) | 2013-06-20 |
WO2013089478A2 (ko) | 2013-06-20 |
US20150004657A1 (en) | 2015-01-01 |
EP2792748B1 (en) | 2017-04-26 |
BR112014014762A2 (pt) | 2018-05-22 |
EP2792748A2 (en) | 2014-10-22 |
PH12014501353A1 (en) | 2014-09-22 |
BR112014014762B1 (pt) | 2021-06-29 |
CN104039963B (zh) | 2016-08-31 |
RU2579689C1 (ru) | 2016-04-10 |
BR122019023670B1 (pt) | 2021-06-29 |
CN104039963A (zh) | 2014-09-10 |
BR112014014762A8 (pt) | 2019-11-19 |
US9243268B2 (en) | 2016-01-26 |
ES2634683T3 (es) | 2017-09-28 |
JP5860550B2 (ja) | 2016-02-16 |
KR20130068135A (ko) | 2013-06-25 |
CA2859125A1 (en) | 2013-06-20 |
CA2914131C (en) | 2018-05-01 |
EP2792748A4 (en) | 2015-08-05 |
WO2013089478A3 (ko) | 2013-08-22 |
KR101404376B1 (ko) | 2014-06-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5789670B2 (ja) | O−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ変異体及びそれを用いたシステインの生成方法 | |
DK2444481T3 (en) | Microorganism producing O-phosphoserine and process for preparing L-cysteine or derivatives thereof from O-phosphoserine using the same | |
JP5860550B2 (ja) | 新規なo−ホスホセリンスルフヒドリラーゼを用いたシステイン又はその誘導体の製造方法 | |
TWI654305B (zh) | 生產o-磷絲胺酸之微生物及使用該微生物生產o-磷絲胺酸或l-半胱胺酸之方法 | |
TW200402471A (en) | Method for fermentative production of amino acids and amino acid derivatives of the phosphoglycerate family | |
CN101715490A (zh) | 谷胱甘肽及γ-谷氨酰半胱氨酸的制造方法 | |
Angelaccio | Extremophilic SHMTs: from structure to biotechnology | |
US9080155B2 (en) | O-acetylhomoserine sulfhydrylase or mutant protein thereof, and method for converting to methionine using the same | |
KR101404325B1 (ko) | 신규 o-포스포세린 설프하이드릴라아제를 이용하여 시스테인 또는 이의 유도체를 생산하는 방법 | |
KR20120108844A (ko) | 신규 o-아세틸호모세린 설피드릴라아제 또는 변이체 및 이를 이용한 메치오닌 전환 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140611 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150630 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150925 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151029 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20151201 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20151218 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5860550 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |