JP2015205841A - キサンテン化合物及びその用途 - Google Patents
キサンテン化合物及びその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015205841A JP2015205841A JP2014087933A JP2014087933A JP2015205841A JP 2015205841 A JP2015205841 A JP 2015205841A JP 2014087933 A JP2014087933 A JP 2014087933A JP 2014087933 A JP2014087933 A JP 2014087933A JP 2015205841 A JP2015205841 A JP 2015205841A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- compound
- compound according
- reaction
- molecular species
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- -1 Xanthene compound Chemical class 0.000 title claims description 14
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 25
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims abstract description 21
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 14
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 76
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 40
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 claims description 35
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 claims description 35
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 32
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 29
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 22
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000005239 aroylamino group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000005236 alkanoylamino group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 7
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 7
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 7
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 6
- KNXKVRLAMOHMOY-UHFFFAOYSA-N C1=CC=C(C=C1)COC2=CC(=O)C=C3C2=CC4=CC=CC=C4O3 Chemical compound C1=CC=C(C=C1)COC2=CC(=O)C=C3C2=CC4=CC=CC=C4O3 KNXKVRLAMOHMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 claims 2
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 241000894007 species Species 0.000 description 19
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- ZJQWKLCFUMLLGQ-UHFFFAOYSA-N 6-hydroxy-9-(4-methoxy-2-methylphenyl)xanthen-3-one Chemical compound CC1=CC(OC)=CC=C1C1=C2C=CC(=O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C21 ZJQWKLCFUMLLGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WVKLERKKJXUPIK-UHFFFAOYSA-N 7-phenylmethoxy-4-(trifluoromethyl)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=2C(C(F)(F)F)=CC(=O)OC=2C=C1OCC1=CC=CC=C1 WVKLERKKJXUPIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 230000004783 oxidative metabolism Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyldimethylsilyl chloride Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)Cl BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical class 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004029 Immune dysregulation-polyendocrinopathy-enteropathy-X-linked syndrome Diseases 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- KQTXIZHBFFWWFW-UHFFFAOYSA-L disilver;carbonate Chemical compound [Ag]OC(=O)O[Ag] KQTXIZHBFFWWFW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 2
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 2
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 125000001834 xanthenyl group Chemical group C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 2
- 0 *C1C=CCCC1 Chemical compound *C1C=CCCC1 0.000 description 1
- BLZNSXFQRKVFRP-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-4-methoxy-2-methylbenzene Chemical compound COC1=CC=C(Br)C(C)=C1 BLZNSXFQRKVFRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHSQGVCRNVEWIA-UHFFFAOYSA-N 2-(bromomethyl)-1,4-bis(trifluoromethyl)benzene Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=C(C(F)(F)F)C(CBr)=C1 CHSQGVCRNVEWIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQLRKZSMYDILQZ-UHFFFAOYSA-N 3,6-bis[[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy]xanthen-9-one Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)OC1=CC=C2C(=O)C3=CC=C(O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C=C3OC2=C1 HQLRKZSMYDILQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POARTHFLPKAZBQ-UHFFFAOYSA-N 3,6-dihydroxyxanthen-9-one Chemical compound OC1=CC=C2C(=O)C3=CC=C(O)C=C3OC2=C1 POARTHFLPKAZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMXQIFXZMOANFG-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxy-3-(trifluoromethyl)chromen-2-one Chemical compound C1=C(C(F)(F)F)C(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 VMXQIFXZMOANFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMOGFQRZGSQGOU-UHFFFAOYSA-N 7-phenylmethoxy-3,4-bis(trifluoromethyl)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=2C(C(F)(F)F)=C(C(F)(F)F)C(=O)OC=2C=C1OCC1=CC=CC=C1 RMOGFQRZGSQGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100497957 Caenorhabditis elegans cyn-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 102100038739 Cytochrome P450 2B6 Human genes 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000957383 Homo sapiens Cytochrome P450 2B6 Proteins 0.000 description 1
- 101100298362 Homo sapiens PPIG gene Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-L NADH(2-) Chemical group C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-L 0.000 description 1
- 108010045510 NADPH-Ferrihemoprotein Reductase Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000006959 Williamson synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 1
- URSXEWIUGXKDLR-UHFFFAOYSA-N bis(2,4-dihydroxyphenyl)methanone 3,6-dihydroxyxanthen-9-one Chemical compound OC1=C(C(=O)C2=C(C=C(C=C2)O)O)C=CC(=C1)O.OC=1C=CC=2C(C3=CC=C(C=C3OC2C1)O)=O URSXEWIUGXKDLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 125000004369 butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000480 butynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 101150055214 cyp1a1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000003028 enzyme activity measurement method Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 125000006038 hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000005980 hexynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000056262 human PPIG Human genes 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 1
- DDLIGBOFAVUZHB-UHFFFAOYSA-N midazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NC=C2CN=C1C1=CC=CC=C1F DDLIGBOFAVUZHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003793 midazolam Drugs 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 125000005981 pentynyl group Chemical group 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004368 propenyl group Chemical group C(=CC)* 0.000 description 1
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002098 pyridazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000010956 selective crystallization Methods 0.000 description 1
- LKZMBDSASOBTPN-UHFFFAOYSA-L silver carbonate Substances [Ag].[O-]C([O-])=O LKZMBDSASOBTPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VFWRGKJLLYDFBY-UHFFFAOYSA-N silver;hydrate Chemical compound O.[Ag].[Ag] VFWRGKJLLYDFBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000005415 substituted alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003732 xanthenes Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
Abstract
【課題】優れたチトクロームＰ−４５０分子種選択性を有し検出感度にも優れた、チトクロームＰ−４５０の分子種3A活性測定用の蛍光プローブの提供。
【解決手段】式（Ｉ）で表されるキサンテン系蛍光化合物。
（Ｒ１は一価の基；Ｒ２はＨ又は一価の基；Ｒ３及びＲ４はＨ、ハロゲン原子等；Ｒ５は式（Ｉ）の6位O-ベンジル部のエーテル結合がチトクロームP-450の分子種3Aにより酸化的に開裂可能な一価の基；ｎは１から５の整数；ｎが２以上の場合、Ｒ５は同じであっても異なっていてもよい）
【選択図】なし
【解決手段】式（Ｉ）で表されるキサンテン系蛍光化合物。
（Ｒ１は一価の基；Ｒ２はＨ又は一価の基；Ｒ３及びＲ４はＨ、ハロゲン原子等；Ｒ５は式（Ｉ）の6位O-ベンジル部のエーテル結合がチトクロームP-450の分子種3Aにより酸化的に開裂可能な一価の基；ｎは１から５の整数；ｎが２以上の場合、Ｒ５は同じであっても異なっていてもよい）
【選択図】なし
Description
本発明は、キサンテン化合物及びその用途に関する。
チトクロームP-450（Cytochrome P-450；以下、ＣＹＰと記すこともある。）は、ステロイドや脂肪酸等の内因性物質のみならず、医薬、農薬、食品添加物又は環境汚染物質等の化学物質の酸化的代謝において中心的役割を担う酵素である。ＣＹＰは、これら化学物質の活性、或いは、毒性や発がん性の発現にも関与している。ＣＹＰは多くの哺乳動物の各組織に広く分布しており、化学物質の投与によりその発現量が変動することもある。ＣＹＰには、構造や基質特異性或いは誘導剤に対する感受性の異なる多種類の分子種が存在することが明らかにされている。各種化学物質の活性や毒性を評価する上で、ＣＹＰ分子種の関与を把握する必要があることから、ＣＹＰ分子種特異的な活性測定法の開発が求められている。
チトクロームP-450の分子種3A（以下、CYP3Aと記すこともある。）は、多様な化学物質の代謝に係わる主要な分子種である。
CYP3A活性の測定方法としては、例えば、CYP3Aによるテストステロン6β-水酸化やミダゾラム1-水酸化の産物をLC-MS/MSを用いて定量する方法が用いられているが、これらの方法はMS測定前のサンプル精製やMS測定に手間と時間を要する。
ＣＹＰ分子種特異的に代謝される蛍光プローブを用いる酵素活性測定法は、当該蛍光プローブがＣＹＰにより代謝されて生ずる蛍光分子の蛍光強度を計測する方法であり、マルチウエルプレート上で多数サンプルを同時に測定可能な手法である。CYP3A活性測定用の蛍光プローブとして、7-benzyloxy-4-trifluoromethylcoumarin（ＢＦＣ）が市販されているが、ＢＦＣは、CYP3Aの他にCYP1A及びCYP2Bの基質としても代謝を受けることが知られている。ＢＦＣの類縁体である2,5-bis(trifluoro-methyl)-7-benzyloxy-4-trifluoromethylcoumarin（ＢＦＢＦＣ)が、CYP3A特異的な蛍光プローブとして、非特許文献１に記載されている。
CYP3A活性の測定方法としては、例えば、CYP3Aによるテストステロン6β-水酸化やミダゾラム1-水酸化の産物をLC-MS/MSを用いて定量する方法が用いられているが、これらの方法はMS測定前のサンプル精製やMS測定に手間と時間を要する。
ＣＹＰ分子種特異的に代謝される蛍光プローブを用いる酵素活性測定法は、当該蛍光プローブがＣＹＰにより代謝されて生ずる蛍光分子の蛍光強度を計測する方法であり、マルチウエルプレート上で多数サンプルを同時に測定可能な手法である。CYP3A活性測定用の蛍光プローブとして、7-benzyloxy-4-trifluoromethylcoumarin（ＢＦＣ）が市販されているが、ＢＦＣは、CYP3Aの他にCYP1A及びCYP2Bの基質としても代謝を受けることが知られている。ＢＦＣの類縁体である2,5-bis(trifluoro-methyl)-7-benzyloxy-4-trifluoromethylcoumarin（ＢＦＢＦＣ)が、CYP3A特異的な蛍光プローブとして、非特許文献１に記載されている。
キサンテン系蛍光分子は、クマリン系蛍光分子より優れた強度の蛍光量子収率を有する。キサンテン系蛍光分子においてキサンテン環部の6位水酸基にβ-ガラクトピラノシル基を導入した化合物が、β-ガラクトシダーゼ活性測定用の蛍光プローブとして使用できることが、特許文献１に記載されている。
Xenobiotica, 2001, Vol. 31, No. 12, 861.
CYP3Aに特異的な基質として優れたＣＹＰ分子種選択性を有し、検出感度にも優れた、CYP3A活性測定用の蛍光プローブの開発が望まれている。
本発明は、キサンテン系蛍光分子である6-hydroxy-9-aryl-xanthenoneにおいて、キサンテン環部の6位水酸基に置換されていてもよいベンジル基が導入された化合物、及びそのCYP3A活性測定用蛍光プローブとしての用途等を提供する。
即ち、本発明は、
［１］
式（Ｉ）：
式中、Ｒ１は一価の基を表し、Ｒ２は水素原子又は一価の基を表し、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基又はアルコキシ基を表し、Ｒ５は式（Ｉ）で表される化合物の6位O-ベンジル部のエーテル結合がチトクロームP-450の分子種3Aにより酸化的に開裂可能となるように選ばれる一価の基を表し、ｎは１から５の整数を表し、ｎが２以上の場合、複数存在するＲ５の全部又は一部は同じであっても異なっていてもよい；
で表される化合物、又はその溶媒和物；
［２］
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立に、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基であり、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい［１］記載の化合物；
［３］
Ｒ１が炭素数１から６のアルキル基であり、該アルキル基に含まれる水素原子はハロゲン原子で置換されていてもよく、Ｒ２が炭素数１から６のアルコキシ基であり、該アルコキシ基に含まれる水素原子はハロゲン原子、カルボキシル基又はアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい［１］又は［２］記載の化合物；
［４］
Ｒ５が水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、ニトロ基又はシアノ基である［１］から［３］のいずれか一項に記載の化合物；
［５］
Ｒ５が炭素数１から６のアルキル基又は炭素数１から６のハロアルキル基である［１］から［４］のいずれか一項に記載の化合物；
［６］
ｎが１又は２である［１］から［５］のいずれか一項に記載の化合物；
［７］
Ｒ３及びＲ４が水素原子である［１］から［６］のいずれか一項に記載の化合物；
［８］
9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン；
［９］
CYP3A活性測定用蛍光プローブとしての［１］から［８］のいずれか一項に記載の化合物の使用；
［１０］
チトクロームP-450の分子種3Aの活性測定方法であって、
（１）［１］から［８］のいずれか一項に記載の化合物をチトクロームP-450の分子種3Aと反応させる工程；及び
（２）上記工程（１）により得られる反応産物の蛍光強度を計測する工程；
を含む方法；
［１１］
工程（２）における反応産物の蛍光強度の計測が、工程（１）の反応後の反応液の蛍光強度を計測することにより行われ、工程（２）で得られた計測値と対照の反応液の蛍光強度とを比較する工程を更に含む、［１０］に記載の方法；及び
［１２］
対照の反応液が、工程（１）の反応前の反応液、または、［１］から［８］のいずれか一項に記載の化合物もしくはチトクロームP-450の分子種3Aを含まないこと以外は工程（１）で用いられる反応液と同じ組成を有する反応液である、［１１］に記載の方法；
等を提供する。
［１］
式（Ｉ）：
式中、Ｒ１は一価の基を表し、Ｒ２は水素原子又は一価の基を表し、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基又はアルコキシ基を表し、Ｒ５は式（Ｉ）で表される化合物の6位O-ベンジル部のエーテル結合がチトクロームP-450の分子種3Aにより酸化的に開裂可能となるように選ばれる一価の基を表し、ｎは１から５の整数を表し、ｎが２以上の場合、複数存在するＲ５の全部又は一部は同じであっても異なっていてもよい；
で表される化合物、又はその溶媒和物；
［２］
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立に、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基であり、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい［１］記載の化合物；
［３］
Ｒ１が炭素数１から６のアルキル基であり、該アルキル基に含まれる水素原子はハロゲン原子で置換されていてもよく、Ｒ２が炭素数１から６のアルコキシ基であり、該アルコキシ基に含まれる水素原子はハロゲン原子、カルボキシル基又はアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい［１］又は［２］記載の化合物；
［４］
Ｒ５が水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、ニトロ基又はシアノ基である［１］から［３］のいずれか一項に記載の化合物；
［５］
Ｒ５が炭素数１から６のアルキル基又は炭素数１から６のハロアルキル基である［１］から［４］のいずれか一項に記載の化合物；
［６］
ｎが１又は２である［１］から［５］のいずれか一項に記載の化合物；
［７］
Ｒ３及びＲ４が水素原子である［１］から［６］のいずれか一項に記載の化合物；
［８］
9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン；
［９］
CYP3A活性測定用蛍光プローブとしての［１］から［８］のいずれか一項に記載の化合物の使用；
［１０］
チトクロームP-450の分子種3Aの活性測定方法であって、
（１）［１］から［８］のいずれか一項に記載の化合物をチトクロームP-450の分子種3Aと反応させる工程；及び
（２）上記工程（１）により得られる反応産物の蛍光強度を計測する工程；
を含む方法；
［１１］
工程（２）における反応産物の蛍光強度の計測が、工程（１）の反応後の反応液の蛍光強度を計測することにより行われ、工程（２）で得られた計測値と対照の反応液の蛍光強度とを比較する工程を更に含む、［１０］に記載の方法；及び
［１２］
対照の反応液が、工程（１）の反応前の反応液、または、［１］から［８］のいずれか一項に記載の化合物もしくはチトクロームP-450の分子種3Aを含まないこと以外は工程（１）で用いられる反応液と同じ組成を有する反応液である、［１１］に記載の方法；
等を提供する。
本発明により、優れたＣＹＰ分子種選択性を有し検出感度にも優れた、CYP3A活性測定用の蛍光プローブ、当該プローブを用いるCYP3A活性測定法等が提供可能となる。
以下、本発明を詳細に説明する。
本明細書中で用いられる「アルキル」とは、特定数の炭素原子を含有する直鎖状又は分枝鎖状の飽和炭化水素を意味し、これらに含まれる１以上の水素原子は、それぞれ独立に、ハロゲン原子又は本発明に含まれる置換基で置換されていてもよい。かかる「アルキル」の例として、炭素数１から６のアルキルが挙げられ、具体的には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、n-ブチル、t-ブチル、ペンチル、イソペンチル、n-ペンチル、ヘキシル等が挙げられる。
本明細書中で用いられる「アルケニル」とは、２以上の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素二重結合を含有する直鎖状又は分枝鎖状の脂肪族炭化水素を意味し、これらに含まれる１以上の水素原子は、それぞれ独立に、ハロゲン原子又は本発明に含まれる置換基で置換されていてもよい。かかる「アルケニル」の例として、炭素数２から６アルケニルが挙げられ、具体的には、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等が挙げられる。
本明細書中で用いられる「アルキニル」とは、２以上の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素三重結合を含有する直鎖状又は分枝鎖状の脂肪族炭化水素を意味し、これらに含まれる１以上の水素原子は、それぞれ独立に、ハロゲン原子又は本発明に含まれる置換基で置換されていてもよい。かかる「アルキニル」の例として、炭素数２から６のアルキニルが挙げられ、具体的には、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル等が挙げられる。
本明細書中で用いられる「アルコキシ」とは、−ＯＲａで表される基を意味し、ここでＲａは上記で定義されているアルキルを表す。かかる「アルコキシ」の例として、メトキシが挙げられる。
本明細書中で用いられる「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。
本明細書に用いられる「アリール」とは、炭素原子と水素原子とからなる芳香族基、又は、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子からなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する単環又は多環の芳香族基を意味し、これらに含まれる１以上の水素原子は、それぞれ独立に、ハロゲン原子又は本発明に含まれる置換基で置換されていてもよい。かかる「アリール」の例として、炭素数６から１０のアリールが挙げられ、具体的には、フェニル基、ビフェニル基、ナフチル基等、チエニル基、フリル基、ピロリル基、ピラゾリル基、イソチアゾリル基、イソオキサゾリル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基等が挙げられる。アリール又はヘテロアリールを有する基（アロイル基及びヘテロアロイル基など）のアリール又はヘテロアリールについても同様である。
本明細書中で用いられる「ハロアルキル」とは、該基に含まれる少なくとも１つの水素原子がハロゲン原子で置換された、本明細書中で定義されているアルキル基を意味する。本発明において有用な分枝状又は直鎖状の「ハロアルキル」の具体例には、該基に含まれる１以上の水素原子がそれぞれ独立にハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）で置換された、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル及びt-ブチルが含まれる。「ハロアルキル」のより具体的な例として、-ＣＦ３、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｆが挙げられる。
「置換されていてもよい」とは、対象となる基に含まれる水素原子のうち少なくとも１つが、上記いずれかのハロゲン原子又は置換基で置換されていてもよいことを表す。
本明細書に用いられる「溶媒和物」とは、溶質（本発明の場合には、式（Ｉ）の化合物）と溶媒との種々の化学量論の複合体を意味する。そのような溶媒は、本発明の目的においては、溶質の有益な機能を妨げるものであるべきではない。適当な溶媒の具体例には、水、メタノール及びエタノールが含まれる。
式（Ｉ）において、Ｒ１は一価の基を表す。
この一価の基としては、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基、又はヘテロアロイルアミノ基が挙げられ、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい。
Ｒ１としては炭素数１から６のアルキル基が好ましく、該アルキル基に含まれる１以上の水素原子はそれぞれ独立にハロゲン原子で置換されていてもよい。
この一価の基としては、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基、又はヘテロアロイルアミノ基が挙げられ、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい。
Ｒ１としては炭素数１から６のアルキル基が好ましく、該アルキル基に含まれる１以上の水素原子はそれぞれ独立にハロゲン原子で置換されていてもよい。
式（Ｉ）において、Ｒ２は水素原子又は一価の基を表す。
この一価の基としては、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基、又はヘテロアロイルアミノ基が挙げられ、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい。
Ｒ２としては炭素数１から６のアルコキシ基が好ましく、該アルコキシ基に含まれる１以上の水素原子はハロゲン原子、カルボキシル基又はアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい。Ｒ２が示す置換アルコキシ基としては、例えば、カルボキシル置換Ｃ１−６アルコキシ基又はアルコキシカルボニル置換Ｃ１−６アルコキシ基等が挙げられる。
この一価の基としては、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基、又はヘテロアロイルアミノ基が挙げられ、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい。
Ｒ２としては炭素数１から６のアルコキシ基が好ましく、該アルコキシ基に含まれる１以上の水素原子はハロゲン原子、カルボキシル基又はアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい。Ｒ２が示す置換アルコキシ基としては、例えば、カルボキシル置換Ｃ１−６アルコキシ基又はアルコキシカルボニル置換Ｃ１−６アルコキシ基等が挙げられる。
式（Ｉ）において、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子、アルキル基又はアルコキシ基を表す。
Ｒ３及びＲ４としては、水素原子が好ましい。
Ｒ３及びＲ４としては、水素原子が好ましい。
式（Ｉ）において、Ｒ５はそれぞれ独立に、式（Ｉ）で表される化合物の6位O-ベンジル部のエーテル結合がチトクロームP-450の分子種3Aにより酸化的に開裂可能となるように選ばれる一価の基を表す。ｎが２以上の場合、複数存在するＲ５の全部又は一部は同じであっても異なっていてもよい。
かかる一価の基としては、例えば、水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、ニトロ基又はシアノ基を挙げることができる。
Ｒ５としては、炭素数１から６のアルキル基又は炭素数１から６のハロアルキル基が好ましい。
かかる一価の基としては、例えば、水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、ニトロ基又はシアノ基を挙げることができる。
Ｒ５としては、炭素数１から６のアルキル基又は炭素数１から６のハロアルキル基が好ましい。
式（Ｉ）で表される化合物の例として：
Ｒ１が炭素数１から６のアルキル基であり、Ｒ２が炭素数１から６のアルコキシ基であり、Ｒ３及びＲ４が水素原子であり、Ｒ５が炭素数１から６のハロアルキル基であり、ｎが２である化合物；及び
Ｒ１がメチル基であり、Ｒ２がメトキシ基であり、Ｒ３及びＲ４が水素原子であり、Ｒ５がトリフルオロメチル基であり、ｎが２である化合物；
を挙げることができる。
式（Ｉ）で表される化合物のより具体的な例として、9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オンを挙げることができる。
Ｒ１が炭素数１から６のアルキル基であり、Ｒ２が炭素数１から６のアルコキシ基であり、Ｒ３及びＲ４が水素原子であり、Ｒ５が炭素数１から６のハロアルキル基であり、ｎが２である化合物；及び
Ｒ１がメチル基であり、Ｒ２がメトキシ基であり、Ｒ３及びＲ４が水素原子であり、Ｒ５がトリフルオロメチル基であり、ｎが２である化合物；
を挙げることができる。
式（Ｉ）で表される化合物のより具体的な例として、9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オンを挙げることができる。
本明細書に記載の特定の化合物は、１以上のキラル中心を含有し、複数の立体異性体として存在しうる。立体異性体の混合物及び精製されたエナンチオマー又はエナンチオ的／ジアステレオ的に富化された混合物も本発明に包含される。式（Ｉ）の化合物の個々の異性体及びそれらの任意の完全に又は部分的に平衡化した混合物も本発明に包含される。１以上のキラル中心が反転した対応異性体との混合物としての、式（Ｉ）の化合物の個々の異性体も本発明に包含される。特定の光学異性体は、キラル固定相でのクロマトグラフィー又はキラル塩形成及びその後の選択的結晶化による分離のような当該分野での公知の技術により分離及び回収が可能である。出発物質として特定の光学異性体を使用することにより、最終生成物として対応する異性体を取得することも可能である。
式（Ｉ）の化合物は結晶であっても良く、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても式（Ｉ）の化合物に包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、化合物を結晶化することによって製造することができる。同位元素（例えば、3Ｈ、14Ｃ、18Ｆ、35Ｓ、125Ｉなど）等で標識された化合物も、式（Ｉ）の化合物に包含される。
式（Ｉ）の化合物は結晶であっても良く、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても式（Ｉ）の化合物に包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、化合物を結晶化することによって製造することができる。同位元素（例えば、3Ｈ、14Ｃ、18Ｆ、35Ｓ、125Ｉなど）等で標識された化合物も、式（Ｉ）の化合物に包含される。
式（Ｉ）の化合物は、多形として公知の特徴である２以上の形態として結晶化することが可能であり、そのような多形形態（多形体）は式（Ｉ）の化合物に包含される。多形は、一般には、温度、圧力又はそれらの両方の変化に対する反応として生じうる。多形は結晶化過程における変動からも生じうる。多形は、Ｘ線回折パターン、溶解度及び融点のような当該技術分野で公知の種々の物理的特徴により識別されうる。
式（Ｉ）で表される化合物（以下、化合物（Ｉ）と記すこともある。）又はその溶媒和物の製造方法について、以下に説明する。
化合物（Ｉ）又はその溶媒和物は、例えば、下記スキームに記載の反応により製造することができる。かかる反応は、例えば、エーテルを合成する一般的な合成反応の１つであるWilliamson反応である。キサンテン系蛍光分子（Ａ）のフェノール性水酸基とベンジルハライド（Ｘはハロゲン原子を表す）を塩基存在下で反応させることにより、化合物（Ｉ）を合成することができる。ハロゲン（Ｘ）としては、臭素又は塩素が好ましい。塩基としては、例えば、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水素化ナトリウム、炭酸銀(I)、酸化銀(I)などが挙げられる。反応溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、アセトニトリルなどの非プロトン性極性溶媒が好ましい。
式（Ｉ）で表される化合物、又はその溶媒和物（以下、一括して本発明化合物と記すこともある。）は、CYP3A活性測定用の蛍光プローブとして使用することができる。本発明化合物は、CYP3Aに特異的な基質であり、該酵素の共存下で酸化的代謝を受けると強蛍光性のキサンテン系蛍光分子を生成する。例えば、6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オンの水酸基に2,5-bis(trifluoromethyl)benzyl基が導入された本発明化合物（9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン）は、波長482nmの励起光の照射に対して微弱の蛍光を発するのみであるが、当該化合物とCYP3Aとの反応により得られる反応産物においては、代謝により生じた6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オンによる極めて強い蛍光（波長520nm）を観測することができる。従って、本発明化合物を基質としてCYP3Aと反応させ、本発明化合物が代謝されて生じる強蛍光分子を蛍光測定することにより、CYP3A酵素活性を定量することが可能である。本発明化合物を蛍光プローブとして用いることにより、多数サンプルのCYP3A酵素活性をマルチウエルプレート上で同時に測定することも可能である。
本発明のCYP3A活性測定方法は、以下の工程：
（１）本発明化合物をCYP3Aと反応させる工程；及び
（２）上記工程（１）により得られる反応産物の蛍光強度を測定する工程；
を含む。
本発明化合物を基質としてCYP3Aと反応させ、本発明化合物が酸化的代謝を受けて生成する蛍光分子から発する蛍光の強度を測定することにより、生成した蛍光分子を定量し、CYP3A活性を測定する。必要に応じて、本発明化合物とCYP3Aとの反応の前後に反応液の蛍光強度を測定して両者を比較してもよく、CYP3Aとの反応後の蛍光強度を本発明化合物と対照物質との間で比較してもよい。例えば、工程（２）における反応産物の蛍光強度の計測を、工程（１）の反応後の反応液の蛍光強度を計測することにより行い、工程（２）で得られた計測値と対照の反応液の蛍光強度とを比較する。かかる対照の反応液としては、工程（１）の反応前の反応液、または、本発明化合物もしくはCYP3Aを含まないこと以外は工程（１）で用いられる反応液と同じ組成を有する反応液を挙げることができる。
本発明化合物とCYP3Aとの反応は、NADPH-P450還元酵素とその補酵素NADPHの共存下に、化合物のCYPによる代謝速度の測定に通常用いられる反応液組成及び反応条件で行うことができる。反応液における本発明化合物の濃度としては、約0.1μMから約100μMを挙げることができる。反応液へのCYP3Aの添加量としては、約0.1pmolから約100pmolを挙げることができる。反応温度は、通常約20℃から約37℃の範囲である。
本発明の方法によるCYP3A酵素活性の測定は中性条件下に行うことができ、例えば、pH約5からpH約9の範囲、好ましくはpH約6からpH約8の範囲、より好ましくはpH6.8からpH7.6の範囲で行うことができる。
（１）本発明化合物をCYP3Aと反応させる工程；及び
（２）上記工程（１）により得られる反応産物の蛍光強度を測定する工程；
を含む。
本発明化合物を基質としてCYP3Aと反応させ、本発明化合物が酸化的代謝を受けて生成する蛍光分子から発する蛍光の強度を測定することにより、生成した蛍光分子を定量し、CYP3A活性を測定する。必要に応じて、本発明化合物とCYP3Aとの反応の前後に反応液の蛍光強度を測定して両者を比較してもよく、CYP3Aとの反応後の蛍光強度を本発明化合物と対照物質との間で比較してもよい。例えば、工程（２）における反応産物の蛍光強度の計測を、工程（１）の反応後の反応液の蛍光強度を計測することにより行い、工程（２）で得られた計測値と対照の反応液の蛍光強度とを比較する。かかる対照の反応液としては、工程（１）の反応前の反応液、または、本発明化合物もしくはCYP3Aを含まないこと以外は工程（１）で用いられる反応液と同じ組成を有する反応液を挙げることができる。
本発明化合物とCYP3Aとの反応は、NADPH-P450還元酵素とその補酵素NADPHの共存下に、化合物のCYPによる代謝速度の測定に通常用いられる反応液組成及び反応条件で行うことができる。反応液における本発明化合物の濃度としては、約0.1μMから約100μMを挙げることができる。反応液へのCYP3Aの添加量としては、約0.1pmolから約100pmolを挙げることができる。反応温度は、通常約20℃から約37℃の範囲である。
本発明の方法によるCYP3A酵素活性の測定は中性条件下に行うことができ、例えば、pH約5からpH約9の範囲、好ましくはpH約6からpH約8の範囲、より好ましくはpH6.8からpH7.6の範囲で行うことができる。
CYP3A活性測定用蛍光プローブとしては、本発明化合物をそのまま用いても良いが、必要に応じて、試薬の調製に通常用いられる添加剤を配合して組成物として用いても良い。例えば、生理的環境で試薬を用いるための添加剤として、溶解補助剤、pH調節剤、緩衝剤、等帳化剤などを本発明化合物に配合して用いることができる。これら添加剤の配合量は当業者により適宜選択可能である。これらの組成物は、粉末形態の混合物、凍結乾燥物、顆粒剤、錠剤、液剤など適宜の形態の組成物として提供され得る。
以下に実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例においては以下の略語が用いられうる：
NMR（核磁気共鳴）；g（グラム）；mg（ミリグラム）；mL（ミリリットル）；μL（マイクロリットル）；mmol（ミリモル）；pmol（ピコモル）；mM（ミリモル濃度）；μM（マイクロモル濃度）；N（規定濃度）；nm（ナノメーター）；Hz（ヘルツ）；eq（モル等量）；THF（テトラヒドロフラン）；DMF（N,N-ジメチルホルムアミド）；DMSD（ジメチルスルホキシド）；CDCl3（重水素化クロロホルム）；DMSD-d6（重水素化ジメチルスルホキシド）； Mg（マグネシウム）；NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）；MgSO4（硫酸マグネシウム）；TBDMSCl（t-ブチルジメチルシリルクロリド）；TBDMSO{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}；NADPH（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸／還元型）。
NMR（核磁気共鳴）；g（グラム）；mg（ミリグラム）；mL（ミリリットル）；μL（マイクロリットル）；mmol（ミリモル）；pmol（ピコモル）；mM（ミリモル濃度）；μM（マイクロモル濃度）；N（規定濃度）；nm（ナノメーター）；Hz（ヘルツ）；eq（モル等量）；THF（テトラヒドロフラン）；DMF（N,N-ジメチルホルムアミド）；DMSD（ジメチルスルホキシド）；CDCl3（重水素化クロロホルム）；DMSD-d6（重水素化ジメチルスルホキシド）； Mg（マグネシウム）；NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）；MgSO4（硫酸マグネシウム）；TBDMSCl（t-ブチルジメチルシリルクロリド）；TBDMSO{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}；NADPH（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸／還元型）。
以下の分析機器を使用して、各種データを計測した。
1H-NMR：AV300M, AV600（BRUKER）
Quantum Efficiency（QE）：QE-1100（大塚電子）
Microplate reader：Safire2（TECAN）
1H-NMR：AV300M, AV600（BRUKER）
Quantum Efficiency（QE）：QE-1100（大塚電子）
Microplate reader：Safire2（TECAN）
1H-NMRスペクトルについては、化学シフトをピーピーエム（ppm，δ値）で、結合定数はヘルツ（Hz， J値）単位で示した。分離パラメーターは見掛け多重度を示し、s（一重項）、d（二重項）、t（三重項）、q（四重項）、m（多重項）又は br（ブロード）として表記した。
実施例１−１：3,6-ジヒドロキシ-9H-キサンテン-9-オンの製造
2,2’,4,4’-テトラヒドロキシベンゾフェノン 6.00g(24.4mmol)と蒸留水40mLを反応器(Storage bottle, ACE GLASS)に仕込み、195℃乃至200℃で4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却した後、析出した粗製生成物を濾取し、次いで、蒸留水50mLを加えて、還流条件下で再結晶することにより、3,6-ジヒドロキシ-9H-キサンテン-9-オン 5.18g(収率93%)を淡黄色結晶として得た。
1H-NMR(300MHz, DMSO-d6):δ6.82-6.89(m,4H), 8.26(d, J=8.7Hz, 2H), 10.83(brs, 2H).
2,2’,4,4’-テトラヒドロキシベンゾフェノン 6.00g(24.4mmol)と蒸留水40mLを反応器(Storage bottle, ACE GLASS)に仕込み、195℃乃至200℃で4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却した後、析出した粗製生成物を濾取し、次いで、蒸留水50mLを加えて、還流条件下で再結晶することにより、3,6-ジヒドロキシ-9H-キサンテン-9-オン 5.18g(収率93%)を淡黄色結晶として得た。
1H-NMR(300MHz, DMSO-d6):δ6.82-6.89(m,4H), 8.26(d, J=8.7Hz, 2H), 10.83(brs, 2H).
実施例１−２：3,6-ビス{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-9H-キサンテン-9-オンの製造
実施例１−１に従って得た3,6-ジヒドロキシ-9H-キサンテン-9-オン 4.95g(21.7mmol)及びイミダゾール 7.39g(5.0eq)をDMF 25mLに溶解し、氷冷却でt-ブチルジメチルシリルクロリド 8.18g(2.5eq)を添加して、窒素雰囲気下、室温で５時間攪拌した。反応混合物を水に注いで、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、MgSO4で乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝3/1）により精製し、3,6-ビス{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-9H-キサンテン-9-オン 9.07g（収率95%）を白色結晶として得た。
1H-NMR(300MHz, CDCl3): δ0.34(s, 12H), 1.08(s, 18H), 6.74-6.79(m, 4H), 8.10(dd, J=1.5, 7.5 Hz, 2H).
実施例１−１に従って得た3,6-ジヒドロキシ-9H-キサンテン-9-オン 4.95g(21.7mmol)及びイミダゾール 7.39g(5.0eq)をDMF 25mLに溶解し、氷冷却でt-ブチルジメチルシリルクロリド 8.18g(2.5eq)を添加して、窒素雰囲気下、室温で５時間攪拌した。反応混合物を水に注いで、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、MgSO4で乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝3/1）により精製し、3,6-ビス{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-9H-キサンテン-9-オン 9.07g（収率95%）を白色結晶として得た。
1H-NMR(300MHz, CDCl3): δ0.34(s, 12H), 1.08(s, 18H), 6.74-6.79(m, 4H), 8.10(dd, J=1.5, 7.5 Hz, 2H).
実施例１−３：6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オン（以下、化合物（１）と記すこともある。）の製造
Mg 165mg（2.0eq）及びTHF 10mLを反応器に仕込み、窒素雰囲気下、2-ブロモ-5-メトキシトルエン 1.37g（2.0eq）を加えて60℃で5時間攪拌した。反応混合物を氷浴で冷却した後、実施例１−２に従って得た3,6-ビス{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-9H-キサンテン-9-オン 1.50g（3.40mmol）のTHF溶液10mLを滴下し、室温に戻して30分間攪拌した。次いで、2N塩酸水溶液20mLを氷冷下で反応混合物へ徐々に加え、室温で15時間攪拌した後、クロロホルムを加えて、有機層を分液し、飽和NaHCO3水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。MgSO4で乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた結晶性残渣をジエチルエーテルで洗浄することにより、6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オン 0.77g（収率68%）を橙色結晶として得た。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6): δ1.98(s, 3H), 3.86(s, 3H), 6.96(d, J=9.2 Hz, 2H), 7.03(m, 3H),7.10(s, 1H), 7.23(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.28(d, J=9.2 Hz, 2H).
Mg 165mg（2.0eq）及びTHF 10mLを反応器に仕込み、窒素雰囲気下、2-ブロモ-5-メトキシトルエン 1.37g（2.0eq）を加えて60℃で5時間攪拌した。反応混合物を氷浴で冷却した後、実施例１−２に従って得た3,6-ビス{[t-ブチル(ジメチル)シリル]オキシ}-9H-キサンテン-9-オン 1.50g（3.40mmol）のTHF溶液10mLを滴下し、室温に戻して30分間攪拌した。次いで、2N塩酸水溶液20mLを氷冷下で反応混合物へ徐々に加え、室温で15時間攪拌した後、クロロホルムを加えて、有機層を分液し、飽和NaHCO3水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。MgSO4で乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた結晶性残渣をジエチルエーテルで洗浄することにより、6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オン 0.77g（収率68%）を橙色結晶として得た。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6): δ1.98(s, 3H), 3.86(s, 3H), 6.96(d, J=9.2 Hz, 2H), 7.03(m, 3H),7.10(s, 1H), 7.23(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.28(d, J=9.2 Hz, 2H).
化合物（１）の合成スキームを以下に示す。
実施例２： 9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン(以下、化合物（２）と記すこともある。)の製造
実施例１−３に従って得た6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オン 200mg（0.60mmol）をDMF 5mLに溶解して、氷冷下で水素化ナトリウム／油性26mg（1.1eq）を添加し、室温で30分間攪拌した。この反応混合物に氷冷下で2,5-ビス(トリフルオロメチル)ベンジルブロミドを加え、同温度にて30分間攪拌した後、反応温度を室温まで戻して、更に1時間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注いで、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、MgSO4で乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝3/1）により精製し、9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン 296mg（収率88%）を橙色結晶として得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3): δ2.06(s, 3H), 3.90(s, 3H), 5.39(s, 2H), 6.45(d, J=2.0 Hz, 1H), 6.58(dd, J=2.0, 10.0 Hz, 1H), 6.86-6.99(m, 3H), 7.01-7.04(m, 2H), 7.07-7.10(m, 2H), 7.76(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.0 Hz, 1H), 8.02(s, 1H).
実施例１−３に従って得た6-ヒドロキシ-9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-3H-キサンテン-3-オン 200mg（0.60mmol）をDMF 5mLに溶解して、氷冷下で水素化ナトリウム／油性26mg（1.1eq）を添加し、室温で30分間攪拌した。この反応混合物に氷冷下で2,5-ビス(トリフルオロメチル)ベンジルブロミドを加え、同温度にて30分間攪拌した後、反応温度を室温まで戻して、更に1時間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注いで、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、MgSO4で乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝3/1）により精製し、9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン 296mg（収率88%）を橙色結晶として得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3): δ2.06(s, 3H), 3.90(s, 3H), 5.39(s, 2H), 6.45(d, J=2.0 Hz, 1H), 6.58(dd, J=2.0, 10.0 Hz, 1H), 6.86-6.99(m, 3H), 7.01-7.04(m, 2H), 7.07-7.10(m, 2H), 7.76(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.0 Hz, 1H), 8.02(s, 1H).
化合物（２）の合成スキームを以下に示す。
化合物（１）、化合物（２）及びtrifluoromethyl-7-hydroxycoumarin（ＦＨＣ）の分光学的特性を表１に示す。
試験例１：ヒト及びラットＣＹＰ分子種による本発明化合物の代謝試験（分子種選択性評価）
実施例２に従って合成した化合物（２）3μM、NADPH（和光純薬）1mM及び0.1% DMSOを含む100 mMリン酸バッファー溶液（pH 7.4）を調製した。96ウエルプレートの各ウエルにCYPの各種分子種を発現する組換昆虫細胞のミクロゾーム（CYP 2pmol, BD SupersomesTM、日本BD）を2μL入れ、上記リン酸バッファー溶液198μLを加えて反応を開始し、37℃で20分間インキュベートした。アセトニトリル（ナカライテスク）100μLを添加して反応を停止させ、得られた反応液の蛍光強度を、励起波長482nm、蛍光波長520nmにて測定した。化合物（１）の0、0.01μM、0.05μM、0.1μM、0.50μM及び1μM 溶液（100mM リン酸バッファー／アセトニトリル=2/１）を用いて検量線を作成した。化合物（２）とヒトCYPの各種分子種を反応させることにより生じた化合物（１）の量を表２に示し、化合物（２）とラットCYPの各種分子種を反応させることにより生じた化合物（１）の量を表３に示す。化合物（２）は、ヒト及びラットのCYP3Aに対する特異的な基質であること、及び、化合物（２）とCYP3Aとの反応により得られる産物の蛍光強度を測定することによりCYP3A酵素活性が測定可能であることが判った。
実施例２に従って合成した化合物（２）3μM、NADPH（和光純薬）1mM及び0.1% DMSOを含む100 mMリン酸バッファー溶液（pH 7.4）を調製した。96ウエルプレートの各ウエルにCYPの各種分子種を発現する組換昆虫細胞のミクロゾーム（CYP 2pmol, BD SupersomesTM、日本BD）を2μL入れ、上記リン酸バッファー溶液198μLを加えて反応を開始し、37℃で20分間インキュベートした。アセトニトリル（ナカライテスク）100μLを添加して反応を停止させ、得られた反応液の蛍光強度を、励起波長482nm、蛍光波長520nmにて測定した。化合物（１）の0、0.01μM、0.05μM、0.1μM、0.50μM及び1μM 溶液（100mM リン酸バッファー／アセトニトリル=2/１）を用いて検量線を作成した。化合物（２）とヒトCYPの各種分子種を反応させることにより生じた化合物（１）の量を表２に示し、化合物（２）とラットCYPの各種分子種を反応させることにより生じた化合物（１）の量を表３に示す。化合物（２）は、ヒト及びラットのCYP3Aに対する特異的な基質であること、及び、化合物（２）とCYP3Aとの反応により得られる産物の蛍光強度を測定することによりCYP3A酵素活性が測定可能であることが判った。
本発明により、優れたＣＹＰ分子種選択性を有し検出感度にも優れた、CYP3A活性測定用の蛍光プローブ、当該プローブを用いるCYP3A活性測定法等が提供可能となる。
Claims (12)
- 式（Ｉ）：
式中、Ｒ１は一価の基を表し、Ｒ２は水素原子又は一価の基を表し、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基又はアルコキシ基を表し、Ｒ５は式（Ｉ）で表される化合物の6位O-ベンジル部のエーテル結合がチトクロームP-450の分子種3Aにより酸化的に開裂可能となるように選ばれる一価の基を表し、ｎは１から５の整数を表し、ｎが２以上の場合、複数存在するＲ５の全部又は一部は同じであっても異なっていてもよい；
で表される化合物、又はその溶媒和物。 - Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立に、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、シアノ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基であり、該アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アルカノイルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、アロイルアミノ基又はヘテロアロイルアミノ基に含まれる水素原子は置換されていてもよい請求項１記載の化合物。
- Ｒ１が炭素数１から６のアルキル基であり、該アルキル基に含まれる水素原子はハロゲン原子で置換されていてもよく、Ｒ２が炭素数１から６のアルコキシ基であり、該アルコキシ基に含まれる水素原子はハロゲン原子、カルボキシル基又はアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい請求項１または２記載の化合物。
- Ｒ５が水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、ニトロ基又はシアノ基である請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
- Ｒ５が炭素数１から６のアルキル基又は炭素数１から６のハロアルキル基である請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物；
- ｎが１又は２である請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
- Ｒ３及びＲ４が水素原子である請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
- 9-(4-メトキシ-2-メチルフェニル)-6-ビス(2,5-トリフルオロメチル)ベンジルオキシ-3H-キサンテン-3-オン。
- CYP3A活性測定用蛍光プローブとしての請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
- チトクロームP-450の分子種3Aの活性測定方法であって、
（１）請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物をチトクロームP-450の分子種3Aと反応させる工程；及び
（２）上記工程（１）により得られる反応産物の蛍光強度を計測する工程；
を含む方法。 - 工程（２）における反応産物の蛍光強度の計測が、工程（１）の反応後の反応液の蛍光強度を計測することにより行われ、工程（２）で得られた計測値と対照の反応液の蛍光強度とを比較する工程を更に含む、請求項１０に記載の方法。
- 対照の反応液が、工程（１）の反応前の反応液、または、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物もしくはチトクロームP-450の分子種3Aを含まないこと以外は工程（１）で用いられる反応液と同じ組成を有する反応液である、請求項１１に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014087933A JP6360345B2 (ja) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | キサンテン化合物及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014087933A JP6360345B2 (ja) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | キサンテン化合物及びその用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2015205841A true JP2015205841A (ja) | 2015-11-19 |
| JP6360345B2 JP6360345B2 (ja) | 2018-07-18 |
Family
ID=54603005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014087933A Active JP6360345B2 (ja) | 2014-04-22 | 2014-04-22 | キサンテン化合物及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6360345B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017068612A1 (ja) * | 2015-10-21 | 2017-04-27 | 住友化学株式会社 | キサンテン化合物及びその用途 |
| CN112679569A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-04-20 | 山西大学 | 一种荧光探针及其制备方法和应用 |
Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0710869A (ja) * | 1985-12-16 | 1995-01-13 | Polaroid Corp | 新規な化合物およびこれを用いる新規な記録材料 |
| JPH09262099A (ja) * | 1996-03-28 | 1997-10-07 | Aisin Seiki Co Ltd | フルオレセイン誘導体リン酸エステルによる核酸等の検出方法 |
| JPH10109990A (ja) * | 1996-10-02 | 1998-04-28 | Aisin Seiki Co Ltd | フルオレセインモノエーテル体の製造方法 |
| JPH10108693A (ja) * | 1996-10-04 | 1998-04-28 | Aisin Seiki Co Ltd | 核酸等の検定方法 |
| JP2002531830A (ja) * | 1998-11-30 | 2002-09-24 | ナノスフェアー インコーポレイテッド | ポリマー殻を有するナノ粒子 |
| JP2002532487A (ja) * | 1998-12-14 | 2002-10-02 | オーロラ バイオサイエンシーズ コーポレイション | シトクロムｐ４５０活性に対する光学分子センサ |
| JP2003507466A (ja) * | 1999-08-19 | 2003-02-25 | ジェンテスト・コーポレーション | ハイスループットチトクロームｐ４５０阻害アッセイにおけるフルオレセインアリールエーテル類の使用 |
| WO2005024049A1 (ja) * | 2003-09-05 | 2005-03-17 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | 蛍光プローブ |
| JP2006241133A (ja) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | Univ Of Tokyo | 光分解性保護基 |
| WO2006100417A1 (en) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Ge Healthcare Uk Limited | Enzyme detection method and reagent |
| WO2008105376A1 (ja) * | 2007-02-27 | 2008-09-04 | The University Of Tokyo | グルクロン酸転移酵素測定用蛍光プローブ |
| JP2008213487A (ja) * | 2003-02-28 | 2008-09-18 | Zink Imaging Llc | 画像化システム |
| US20090082495A1 (en) * | 2007-09-20 | 2009-03-26 | Rene Jean Zimmer | Pneumatic Tire |
| JP2013506582A (ja) * | 2009-10-05 | 2013-02-28 | ズィンク イメージング， インコーポレイテッド | 多色サーマル画像生成材料 |
| WO2013173519A1 (en) * | 2012-05-15 | 2013-11-21 | The Texas A&M University System | Beta-lactamase substrates and methods of their use for the diagnosis of tuberculosis |
| WO2013192377A1 (en) * | 2012-06-20 | 2013-12-27 | Global Biodiagnostics | Portable diagnostic system and uses thereof |
-
2014
- 2014-04-22 JP JP2014087933A patent/JP6360345B2/ja active Active
Patent Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0710869A (ja) * | 1985-12-16 | 1995-01-13 | Polaroid Corp | 新規な化合物およびこれを用いる新規な記録材料 |
| JPH09262099A (ja) * | 1996-03-28 | 1997-10-07 | Aisin Seiki Co Ltd | フルオレセイン誘導体リン酸エステルによる核酸等の検出方法 |
| JPH10109990A (ja) * | 1996-10-02 | 1998-04-28 | Aisin Seiki Co Ltd | フルオレセインモノエーテル体の製造方法 |
| JPH10108693A (ja) * | 1996-10-04 | 1998-04-28 | Aisin Seiki Co Ltd | 核酸等の検定方法 |
| JP2002531830A (ja) * | 1998-11-30 | 2002-09-24 | ナノスフェアー インコーポレイテッド | ポリマー殻を有するナノ粒子 |
| JP2002532487A (ja) * | 1998-12-14 | 2002-10-02 | オーロラ バイオサイエンシーズ コーポレイション | シトクロムｐ４５０活性に対する光学分子センサ |
| JP2003507466A (ja) * | 1999-08-19 | 2003-02-25 | ジェンテスト・コーポレーション | ハイスループットチトクロームｐ４５０阻害アッセイにおけるフルオレセインアリールエーテル類の使用 |
| JP2008213487A (ja) * | 2003-02-28 | 2008-09-18 | Zink Imaging Llc | 画像化システム |
| WO2005024049A1 (ja) * | 2003-09-05 | 2005-03-17 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | 蛍光プローブ |
| JP2006241133A (ja) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | Univ Of Tokyo | 光分解性保護基 |
| WO2006100417A1 (en) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Ge Healthcare Uk Limited | Enzyme detection method and reagent |
| WO2008105376A1 (ja) * | 2007-02-27 | 2008-09-04 | The University Of Tokyo | グルクロン酸転移酵素測定用蛍光プローブ |
| US20090082495A1 (en) * | 2007-09-20 | 2009-03-26 | Rene Jean Zimmer | Pneumatic Tire |
| JP2013506582A (ja) * | 2009-10-05 | 2013-02-28 | ズィンク イメージング， インコーポレイテッド | 多色サーマル画像生成材料 |
| WO2013173519A1 (en) * | 2012-05-15 | 2013-11-21 | The Texas A&M University System | Beta-lactamase substrates and methods of their use for the diagnosis of tuberculosis |
| WO2013192377A1 (en) * | 2012-06-20 | 2013-12-27 | Global Biodiagnostics | Portable diagnostic system and uses thereof |
Non-Patent Citations (22)
| Title |
|---|
| ACS MED. CHEM. LETT., vol. ５, JPN6017047855, 2014, pages 321 - 325, ISSN: 0003701987 * |
| ANAL. BIOCHEM., vol. ２８４, JPN6017047853, 2000, pages 427 - 430, ISSN: 0003701985 * |
| ARCH. ENVIRON. CONTAM. TOXICOL., vol. ６１, JPN6017047850, 2011, pages 578 - 589, ISSN: 0003701982 * |
| BIOCHEM. PHARMCOL., vol. ７５, JPN6017047849, 2008, pages 1161 - 1169, ISSN: 0003701981 * |
| BIOPHARM. DRUG DISPOS., vol. ２４, JPN6017047846, 2003, pages 375 - 384, ISSN: 0003701978 * |
| CAN. J. CHEM., vol. ６３, JPN6017047828, 1985, pages 1320 - 1327, ISSN: 0003701968 * |
| CHEM. LETT., vol. ２７, JPN6017047837, 1998, pages 907 - 908, ISSN: 0003701971 * |
| CHEMBIOCHEM., vol. １４, JPN6017047854, 2013, pages 593 - 598, ISSN: 0003701986 * |
| DRUG METAB. DISPOS., vol. ２８, JPN6017047845, 2000, pages 1440 - 1448, ISSN: 0003701977 * |
| DRUG METAB. DISPOS., vol. ３０, JPN6017047848, 2002, pages 845 - 852, ISSN: 0003701980 * |
| DRUG METAB. DISPOS., vol. ３２, JPN6017047847, 2004, pages 699 - 706, ISSN: 0003701979 * |
| DYES AND PIGMENTS, vol. ３９, JPN6017047838, 1998, pages 371 - 382, ISSN: 0003701972 * |
| HETEROCYCLES, vol. ３１, JPN6017047843, 1990, pages 1975 - 1982, ISSN: 0003701975 * |
| J. AM. CHEM. SOC., vol. １２９, JPN6017047835, 2007, pages 6696 - 6697, ISSN: 0003701970 * |
| J. AM. CHEM. SOC., vol. １３４, JPN6017047832, 2012, pages 11153 - 11160, ISSN: 0003701969 * |
| J. CHEM. INF. MODEL., vol. ４７, JPN6017047852, 2007, pages 583 - 590, ISSN: 0003701984 * |
| J. MED. CHEM., vol. ４５, JPN6017047851, 2002, pages 1983 - 1993, ISSN: 0003701983 * |
| J. PHOTOCHEMISTRY AND PHOTOBIOLOGY A: CHEMISTRY, vol. ２２８, JPN6017047840, 2012, pages 60 - 67, ISSN: 0003701973 * |
| MOL. PHARMACOL., vol. ８０, JPN6017047844, 2011, pages 518 - 528, ISSN: 0003701976 * |
| NAT. CHEM., vol. ４, JPN6017047826, 2012, pages 802 - 809, ISSN: 0003701967 * |
| RSC ADV., vol. ３, JPN6017047842, 2013, pages 4876 - 4879, ISSN: 0003701974 * |
| XENOBIOTICA, vol. ３１, JPN6017047858, 2001, pages 861 - 878, ISSN: 0003701988 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017068612A1 (ja) * | 2015-10-21 | 2017-04-27 | 住友化学株式会社 | キサンテン化合物及びその用途 |
| CN112679569A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-04-20 | 山西大学 | 一种荧光探针及其制备方法和应用 |
| CN112679569B (zh) * | 2020-10-22 | 2022-05-27 | 山西大学 | 一种荧光探针及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP6360345B2 (ja) | 2018-07-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4899046B2 (ja) | 新規ルシフェリン誘導体 | |
| Li et al. | Direct synthesis of α-ketothioamides from aryl methyl ketones and amines via I2-promoted sp3 C–H functionalization | |
| EP3567043B1 (en) | 2-[[5-[(4-hydroxy-3-chloro-2-methyl)-phenyl]-thieno[2,3-d]pyrimidin-4-yl]oxy]-3-(2-methoxybenzene)propanoic acid derivatives as mcl-1 and bcl-2 inhibitors for treating cancer | |
| KR20150093229A (ko) | Ｐ２ｘ７ 수용체 길항제로서의 인돌 카르복사미드 유도체 | |
| BRPI0915365B1 (pt) | processo para a preparação de 2-triflúor-metil-5-alquil-piridinas substituídas na posição 1 | |
| Gruzdev et al. | A comparative study on the acylative kinetic resolution of racemic fluorinated and non-fluorinated 2-methyl-1, 2, 3, 4-tetrahydroquinolines and 3, 4-dihydro-3-methyl-2H-[1, 4] benzoxazines | |
| WO1999051586A1 (fr) | Reactif de determination d'oxygene singulet | |
| Botha et al. | Recognition of chiral anions using calix [4] arene-based ureido receptor in the 1, 3-alternate conformation | |
| JP6360345B2 (ja) | キサンテン化合物及びその用途 | |
| JP5077969B2 (ja) | ２−置換５−（１−アルキルチオ）アルキルピリジンの調製方法 | |
| TWI714702B (zh) | 一種吡啶衍生物類化合物的製備方法及其中間體和晶型 | |
| RU2635659C1 (ru) | Способ получения производных бензилового эфира 2-аминоникотиновой кислоты | |
| KR20200092946A (ko) | 결정질 리나글립틴 중간체 및 리나글립틴 제조 공정 | |
| Montaña et al. | [4+ 3] Cycloaddition of C-3 substituted furans. Stereoselectivity induced by coordination effects | |
| CN110590664A (zh) | 一种荧光探针的制备方法及该荧光探针的应用 | |
| WO2017068612A1 (ja) | キサンテン化合物及びその用途 | |
| CN114516878B (zh) | 三环化合物及其医药用途 | |
| Stavber et al. | Kinetic investigations of the reactions of hinderedphenols with N‐fluoro‐1, 4‐diazoniabicyclo [2.2. 2] octanesalt analogues | |
| JP2009132624A (ja) | ２，３−ジシアノナフタレン誘導体 | |
| JP6831496B2 (ja) | ベンゾオキサゾール誘導体の結晶 | |
| JP2019014675A (ja) | フェニルフェノール誘導体とこれを用いるジベンゾフラン誘導体の製造方法 | |
| JP2017218381A (ja) | チオフェン環縮合芳香族化合物及びその製造方法 | |
| Hayakawa et al. | Late-stage modification of π-electron systems based on asymmetric oxidation of a medium-sized sulfur-containing ring | |
| JP2005201773A (ja) | 第二銅イオン測定用プローブ及びそれを用いた第二銅イオンの測定方法 | |
| JP4899385B2 (ja) | ３−アミノメチルオキセタン化合物の製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A625 | Written request for application examination (by other person) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A625 Effective date: 20170317 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20171207 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171219 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20180110 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180110 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180205 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180411 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180612 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180622 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6360345 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |