JP2015086145A - ヒダカミセバヤエキスを含有する外用剤又は内用剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ヒダカミセバヤの抽出物は、優れた活性酸素消去作用、コラーゲン分解抑制作用、メラニン生成抑制作用及び細胞増殖促進作用を有し、安定性にも優れていた。ヒダカミセバヤの抽出物は、皮膚の老化や美白といった美容分野だけでなく、老化による機能低下の抑制、ガンの予防、治療や創傷治癒などといった医療分野にも利用ででき、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。
Description
ヒダカミセバヤの葉の細胞を10−5Mナフタレン酢酸、10−5Mカイネチンを含むMS寒天培地に置床し、常法によりカルスを誘導した。一ヶ月後、このカルスを同液体培地に入れて90rpmで回転振とう培養し、その懸濁培養細胞を調製した。この培養細胞を10−5Mナフタレン酢酸、10−5Mカイネチンを含むMS液体培地6Lに接種し、暗所で2週間、回転振とう培養した。得られた培養細胞を凍結乾燥し、乾燥物を100g得た。
製造例1 ヒダカミセバヤの地上部の熱水抽出物
ヒダカミセバヤの地上部の乾燥物20gに精製水400mLを加え、95〜100℃で2時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してヒダカミセバヤの地上部の熱水抽出物を2.5g得た。
ヒダカミセバヤのカルスの乾燥物(製造例A)20gに精製水400mLを加え、95〜100℃で2時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してヒダカミセバヤのカルスの熱水抽出物を3.6g得た。
ヒダカミセバヤの地上部の乾燥物100gに50%エタノール水溶液1Lを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ヒダカミセバヤの地上部の50%エタノール抽出物を9.5g得た。
ヒダカミセバヤのカルスの乾燥物(製造例A)100gに50%エタノール水溶液1Lを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ヒダカミセバヤのカルスの50%エタノール抽出物を9.7g得た。
ヒダカミセバヤの地上部の乾燥物100gにエタノール1Lを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ヒダカミセバヤの地上部のエタノール抽出物を6.5g得た。
ヒダカミセバヤのカルスの乾燥物(製造例A)100gにエタノール1Lを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、ヒダカミセバヤのカルスのエタノール抽出物を7.8g得た。
ヒダカミセバヤの地上部の乾燥物20gに50%1,3−ブチレングリコール水溶液400mLを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、ヒダカミセバヤの地上部の50%1,3−ブチレングリコール抽出物を337g得た。
ヒダカミセバヤのカルスの乾燥物(製造例A)20gに50%1,3−ブチレングリコール水溶液400mLを加え、常温で7日間抽出した後、濾過し、ヒダカミセバヤのカルスの50%1,3−ブチレングリコール抽出物を349g得た。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤの地上部の熱水抽出物(製造例1) 2.0
2.1,3−ブチレングリコール 8.0
3.グリセリン 2.0
4.キサンタンガム 0.02
5.クエン酸 0.01
6.クエン酸ナトリウム 0.1
7.エタノール 5.0
8.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
9.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(40E.O.) 0.1
10.香料 適量
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜6及び11と、成分7〜10をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
処方例1において、ヒダカミセバヤの地上部の熱水抽出物(製造例1)を精製水に置き換えたものを、従来の化粧水とした。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスの50%エタノール抽出物(製造例4) 1.0
2.スクワラン 5.5
3.オリーブ油 3.0
4.ステアリン酸 2.0
5.ミツロウ 2.0
6.ミリスチン酸オクチルドデシル 3.5
7.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
8.ベヘニルアルコール 1.5
9.モノステアリン酸グリセリン 2.5
10.香料 0.1
11.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
12.パラオキシ安息香酸エチル 0.05
13.1,3−ブチレングリコール 8.5
14.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜9を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び11〜14を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分10を加え、更に30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスのエタノール抽出物(製造例6) 0.01
2.スクワラン 5.0
3.オリーブ油 5.0
4.ホホバ油 5.0
5.セタノール 1.5
6.モノステアリン酸グリセリン 2.0
7.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 3.0
8.ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(20E.O.) 2.0
9.香料 0.1
10.プロピレングリコール 1.0
11.グリセリン 2.0
12.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
13.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜8を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1及び10〜13を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45℃で成分9を加え、更に30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスの50%エタノール抽出物(製造例4) 1.0
2.エタノール 5.0
3.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
4.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(60E.O.) 0.1
5.香料 適量
6.1,3−ブチレングリコール 5.0
7.グリセリン 5.0
8.キサンタンガム 0.1
9.カルボキシビニルポリマー 0.2
10.水酸化カリウム 0.2
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜5と、成分1及び6〜11をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスの熱水抽出物(製造例2) 1.0
2.ヒダカミセバヤのカルスの
50%1,3−ブチレングリコール抽出物(製造例8) 5.0
3.ポリビニルアルコール 12.0
4.エタノール 5.0
5.1,3−ブチレングリコール 8.0
6.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
7.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(20E.O.) 0.5
8.クエン酸 0.1
9.クエン酸ナトリウム 0.3
10.香料 適量
11.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分1〜11を均一に溶解し製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤの地上部のエタノール抽出物(製造例5) 1.0
2.ステアリン酸 2.4
3.ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート(20E.O.) 1.0
4.ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 2.0
5.セタノール 1.0
6.液状ラノリン 2.0
7.流動パラフィン 3.0
8.ミリスチン酸イソプロピル 6.5
9.カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.1
10.ベントナイト 0.5
11.プロピレングリコール 4.0
12.トリエタノールアミン 1.1
13.パラオキシ安息香酸メチル 0.2
14.二酸化チタン 8.0
15.タルク 4.0
16.ベンガラ 1.0
17.黄酸化鉄 2.0
18.香料 適量
19.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分2〜8を加熱溶解し、80℃に保ち油相とする。成分19に成分9をよく膨潤させ、続いて、成分1及び10〜13を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分14〜17を加え、ホモミキサーで撹拌し75℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後、冷却し、45℃で成分18を加え、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスのエタノール抽出物(製造例6) 1.0
2.炭酸水素ナトリウム 50.0
3.黄色202号(1) 適量
4.香料 適量
5.硫酸ナトリウムにて全量を100とする
[製造方法]成分1〜5を均一に混合し製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスの熱水抽出物(製造例2) 1.0
2.ヒダカミセバヤの地上部の
50%1,3−ブチレングリコール抽出物2(製造例7) 5.0
3.ポリオキシエチレンセチルエーテル(30E.O.) 2.0
4.モノステアリン酸グリセリン 10.0
5.流動パラフィン 5.0
6.セタノール 6.0
7.パラオキシ安息香酸メチル 0.1
8.プロピレングリコール 10.0
9.精製水にて全量を100とする
[製造方法]成分3〜6を加熱溶解して混合し、70℃に保ち油相とする。成分1、2及び7〜9を加熱溶解して混合し、75℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら30℃まで冷却して製品とする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスの熱水抽出物(製造例2) 1.0
2.乾燥コーンスターチ 39.0
3.微結晶セルロース 60.0
[製造方法]成分1〜3を混合し、散剤とする。
処方例13において、ヒダカミセバヤのカルスの熱水抽出物を製造例1に置き換えたものを散剤2とした。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスのエタノール抽出物(製造例6) 5.0
2.乾燥コーンスターチ 25.0
3.カルボキシメチルセルロースカルシウム 20.0
4.微結晶セルロース 40.0
5.ポリビニルピロリドン 7.0
6.タルク 3.0
[製造方法]成分1〜4を混合し、次いで成分5の水溶液を結合剤として加えて顆粒成型する。成型した顆粒に成分6を加えて打錠する。1錠0.52gとする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤの地上部のエタノール抽出物(製造例5) 2.0
2.乾燥コーンスターチ 49.8
3.エリスリトール 40.0
4.クエン酸 5.0
5.ショ糖脂肪酸エステル 3.0
6.香料 0.1
7.精製水 0.1
[製造方法]成分1〜4及び7を混合し、顆粒成型する。成型した顆粒に成分5及び6を加えて打錠する。1粒1.0gとする。
処方 配合量(部)
1.ヒダカミセバヤのカルスの熱水抽出物(製造例2) 0.05
2.ステビア 0.05
3.リンゴ酸 5.0
4.香料 0.1
5.精製水 94.8
[製造方法]成分2及び3を少量の水に溶解する。次いで、成分1、4及び5を加えて混合する。
フリーラジカル捕捉除去作用の評価を行った。陽性対照としてはアスコルビン酸を用いた。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα,α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル(以下DPPHとする)を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長517nmの吸光度の減少量から測定した。
各試料を、最終濃度1mg/mL(アスコルビン酸は0.1mg/mL)となるように加えた0.1M酢酸緩衝液(pH5.5)2mLに無水エタノール2mL及び0.5mMDPPH無水エタノール溶液1mLを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール2mLに試料を加えて反応液とした。その後、37℃で30分間反応させ、水を対照として波長517nmの吸光度(A)を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度(B)を測定した。フリーラジカル捕捉除去率は、以下に示す式より算出した。
フリーラジカル捕捉除去率(%)=(1−A/B)×100
試料液50μL(最終濃度が1mg/mL)に酵素液として50U/mLのコラゲナーゼ Type IV(シグマ製)水溶液を50μL加えた。基質溶液として0.39mg/mLのPz−ペプタイド(Pz−Pro−Leu−Gly−Pro−D−Arg−OH、シグマ製)を含む20mM塩化カルシウム入りトリス塩酸緩衝液(pH7.1)を400μL加えて混合し、37℃、30分反応させた後、25mMクエン酸0.5mLを加えて反応を停止させた。酢酸エチル2.5mLを加え、酢酸エチル層について320nmにおける吸光度を測定した。また、各試料の阻害作用は、次の式から求められる阻害率で算出した。なお、対照には試料の代わりに精製水を用い、ブランクとしてコラゲナーゼの代わりに20mM塩化カルシウム入りトリス塩酸緩衝液(pH7.1)を用いた。
阻害率(%)=〔1−(C−D)/(A−B)〕×100
A:対照の320nmにおける吸光度(O.D.320)
B:対照ブランクのO.D.320
C:試料のO.D.320
D:試料ブランクのO.D.320
対数増殖期にあるB16マウスメラノーマをφ60mmdishに3×104個の細胞を播種し、各試料(最終濃度100μg/mL)を含むEagles’MEM(10%牛胎児血清含有)培地を加え、37℃、5%CO2の条件下にて培養した。培養5日後に細胞をdishから剥離し、細胞を超音波破砕した後、4NNaOHを加え60℃で2時間の処理を行い、分光光度計でO.D.475nmを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液をLowryの方法(J.Biol.Chem.,193,265−275,1951)でタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を比較することによって、メラニン生成抑制効果の指標とした。
HaCaT細胞を、0.1%FBSを含むDMEM培養液にて、96wellプレートに1wellあたり5,000個播種し、各試料を添加した後、37℃、5%CO2条件下にて3日間培養した。細胞数の測定は、MTT法により行った。すなわち、培養終了後、培養液を除き、500μg/mLの濃度にて、MTTを溶解させたDMEMに培地を入れ替え、2時間培養した後、150μLのDMEMに細胞を溶解させ、マイクロプレートリーダーをもちいて590及び650nmにおける吸光度を測定した。細胞数は、590nmの吸光度値から、650nmの吸光度値を引いた値にて算出し、試料を添加しない細胞群(未添加細胞群)を100%とした換算値として示した。
処方例1の化粧水及び比較処方例1の従来の化粧水を用いて、しわ、たるみに悩む女性10人(23〜50才)を対象に1ヶ月間の使用試験を行った。使用後、しわ、たるみの改善効果をアンケートにより判定した。
Claims (5)
- ヒダカミセバヤの抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
- ヒダカミセバヤの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
- ヒダカミセバヤの抽出物を含有することを特徴とするコラーゲン分解抑制剤。
- ヒダカミセバヤの抽出物を含有することを特徴とする美白剤。
- ヒダカミセバヤの抽出物を含有することを特徴とする細胞増殖促進剤。
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