JP2014526239A - 昆虫病原性菌類から単離された殺虫性脂質薬およびその使用 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
1種以上の子嚢菌門真菌の培養物を提供するステップと、
本発明の少なくとも1種の脂質の生成に適する条件下でこの培養物を維持するステップと、i)本発明の少なくとも1種の脂質と担体とを混合するステップ、または
ii)本発明の少なくとも1種の脂質と本明細書に記載の1種以上の昆虫病原性菌類とを混合するステップ、または
iii)この菌類もしくは菌類の培養物から本発明の少なくとも1種の脂質を分離するステップ、または
iv)本発明の少なくとも1種の脂質を少なくとも部分的に精製もしくは単離するステップ、または
v)(i)〜(iv)の2つ以上の任意の組み合わせ、と
を含む方法を提供する。
1種以上の子嚢菌門真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供するステップと、
1つ以上の他の化合物から本発明の1つ上の脂質を少なくとも部分的に分離するステップと、
1種以上の脂質を回収するステップと、
を含む方法に関する。
1種以上の子嚢菌門真菌の培養物の有機溶媒抽出物を提供するステップと、
1つ以上の他の化合物から本発明の1つ上の脂質を少なくとも部分的に分離するステップと、
1種以上の脂質を回収するステップと、
を含む方法に関する。
Beauveria bassiana K4B3 V08/025855の培養物を提供するステップと、
本発明の少なくとも1種の脂質の生成に適する条件下で培養物を維持するステップと、
i)本発明の少なくとも1種の脂質と担体を混合するステップ、または
ii)本発明の少なくとも1種の脂質と本明細書に記載の1種以上の昆虫病原性菌類とを混合するステップ、または
iii)Beauveria bassiana K4B3 V08/025855から本発明の少なくとも1種の脂質を分離するステップ、または
iv)(i)〜(iii)のうちの2つ以上の任意の組み合わせ
とを含む。
i)少なくとも1種のビューベリシン(beauvericin)、
ii)少なくとも1種のバシアノリド(bassianolide)、
iii)少なくとも1種の昆虫病原性菌類
iv)上記の(i)〜(iv)のうちの任意の2つ以上。
と共に、本発明の少なくとも1種の脂質を含む。
本明細書で用いる場合、用語「ベタイン脂質」は、グリセロール部分のsn−3位でエーテル結合によって結合したベタイン部分を含み、sn−1位およびsn−2位でエステル化された脂肪酸を有するエーテル結合グリセロ脂質を意味する。ベタイン脂質は、藻類、苔植物、菌類、いくつかの原始的な原虫、光合成細菌、ならびにシダ類およびトクサ植物に属する種などのいくつかの胞子生成植物中に生じることが報告されている。
植物病原体の防除
脂質を単離するための方法
昆虫病原性糸状菌を含む組成物
脂質組成物および使用方法
本発明者らは、本明細書に開示の脂質組成物は、例えば、畑作物、草、果物および野菜、芝生、樹木および/または観葉植物への局所的および/または全体的適用のための、BCA組成物としての、特定の有用性が見出される。あるいは、本明細書に開示された脂質は、昆虫を殺すまたは昆虫の個体数を制御するための、噴霧、ダスト、粉末または、他の水性の霧状エアロゾルとして、処方され得る。本明細書に開示された脂質組成物を、予防的に用いることができる、または代わりに、標的昆虫が、処理される特定の環境において同定された後に、環境へ投与することができる。脂質組成物は、個々の脂質を含み得るまたは、本明細書に開示される様々な脂質の組み合わせを含み得る。
例示的な一実施形態において、生物殺虫組成物は、必要に応じて、本明細書に開示された一つ以上の新規のタンパク質を発言する一つ以上の真菌細胞を含む、一つ以上の真菌細胞とともに、本発明の1種以上の脂質、その機能的変異体または機能的断片の油流動性懸濁液を含む。
別の重要な例示的な実施形態において、生物殺虫剤組成物は、水分散性顆粒を含む。この顆粒物は、必要に応じて、本明細書に開示の本発明の脂質を生成する一つ以上の真菌細胞を含む、一つ以上の真菌細胞とともに、本発明の1種以上の脂質、その機能的変異体または機能的断片を含む。
第三の重要な例示的な実施形態において、生物殺虫剤組成物は、水和剤、ダスト、胞子製剤、細胞ペレットまたはコロイド濃縮物を含む。この粉末は、必要に応じて、本明細書に開示の本発明の脂質を生成する一つ以上の真菌細胞を含む、一つ以上の真菌細胞とともに、本発明の1種以上の脂質、その機能的変異体または機能的断片を含む。そのような乾燥形態の殺虫剤組成物を、湿潤時に直ちに溶解するように、または代わりに、制御放出、持続放出または他の時間依存的な様式で溶解するように、製剤化することができる。そのような組成物を、標的昆虫へ適用することができる、または、標的昆虫により摂取することができ、そのようにして、昆虫の数、または所与の環境における昆虫の蔓延を制御するために、使用することができる。
第四の重要な例示的な実施形態において、生物殺虫剤組成物は、必要に応じて、本明細書に開示される本発明の脂質を産生することができる、一つ以上の真菌細胞を含む一つ以上の真菌細胞とともに、本発明の1種以上の脂質、それらの機能的変異体または機能的断片の水性懸濁液を含む。そのような水性懸濁液を、適用前に希釈される濃縮ストック溶液として、または代わりに、すぐに適用される希釈液として、提供することができる。
特定の実施形態において、例えば、複数の昆虫手の制御が所望される場合、本明細書に記載の殺虫製剤は、さらに、一つ以上の化学殺虫剤(化学殺虫剤、殺線虫剤、殺真菌剤、殺ウイルス剤、殺菌剤、殺アメーバ剤、殺虫剤など)および/または、本明細書で同定した殺虫性脂質と同じもしくは異なる殺虫活性もしくは殺虫特異性を有する1種以上の脂質を含んでいても良い。製剤の単一適用を伴う標的領域の長期投薬を可能にする、肥料、除草剤、凍結防止剤、界面活性剤、洗剤、殺虫性石鹸、休眠油、ポリマーおよび/または持続放出担体製剤もしくは生分解性担体製剤などの他の処理と併用して、殺虫性脂質を使用することもできる。同様に、殺虫性製剤の標的昆虫による接触または摂取を可能にするために、食用の「餌」または昆虫「罠」中へ製剤を調製することができる。
生物的防除剤として使用するために、組成物中に存在する場合、本発明の昆虫病原性真菌を、繁殖可能な形態へする必要がある。本明細書中で使用される用語である繁殖可能は、真菌の菌糸および胞子の形態を含む。例えば、ほとんどの目的のために、真菌株は、望ましくは、胞子の形態(分生子または芽)で、組成物中へ組み込まれる。胞子は、本明細書に記載の全ての真菌株から得ることが可能であり、公知の技術を用いて製造することができる。必要に応じて、本明細書に記載の真菌株から得られた一つ以上の胞子を含む、一つ以上の真菌細胞とともに、本発明の1種以上の脂質、それらの機能的変異体または機能的断片を含む本発明の組成物は、本発明のさらなる態様を形成する。組成物中の真菌の胞子の濃度は、組成物が置かれる有用性に依存する。例示的な濃度範囲は、mL当たり、約1×106〜1×1012胞子、好ましくは、1×107〜2×1010、より好ましくは、mL当たり、1×107〜1×108胞子である。
銅抗真菌剤の一例としては、コサイド2000DF(グリフィン社、米国)が挙げられる。
エリシターの非限定的な例としては、キトサン、バイオン(商標)、BAB A(dl-3-アミノ-nブタン酸(β-アミノ酪酸))およびミルサナ(商標)(ウェスタンファームサービス社、米国)を挙げることができる。
この実施例では、各種脂質の殺虫の効力を決定するための確固としたバイオアッセイの開発を記載する。
この実施例は、殺虫の効力を決定するため、バイオアッセイの範囲を広げる開発を記載する。
コナジラミは主要なターゲット生物種であり、現在適切な制御剤を欠いている。コナジラミ若虫は、バイオフォース社(オークランド、ニュージーランド)から得られた。K4B3脂質画分および対照ブロースのサンプルを用いて、ポッタータワーを通して約100の若虫群に接種した。
ゴミムシダマシ幼虫は、生物供給者から得られる。10匹の幼虫にK4B3脂質サンプルまたは水対照がスプレー、2週間モニターされた。
コナガは、世界中のアブラナ作物および最も多くの防除用化学薬品に耐性を示すようになった昆虫の主要な害虫である。培養株は、試験用K4B3脂質サンプルでリンカーン大学から得られる。
バイオアッセイが行われ、異なる量のK4B3脂質画分が、イエカ(Culex perviligan)の幼虫を含む約12.5mlの水ボトルに加わられる。幼虫は蛹化に近づき、一部は実験中に蛹化してもよい。
序論
この実施例では、ボーベリア・バシアーナK4B3から調製される殺虫脂質の同定を説明する。
ボーベリア・バシアーナK4B3の培養株は、振盪フラスコ内および200Lのバイオ発酵用容器内で成長した。凍結乾燥したサンプルを、メタノールで抽出し、乾燥した。残留物を50%エチルアルコール中に溶解し、ジクロロメタンで抽出した。望まない共抽出物を除去するため、ジクロロメタンを水で洗浄した。残存しているジクロロメタンエキストラクトの少ない方の部分を、乾燥し、メタノール中で再溶解し、MS分析を行った。
第1のメタノール/ジクロロメタン分画ステップ中、ベタイン脂質が、20〜40%メタノールと60〜80%ジクロロメタンの混合液でシリカカラムから溶出された。
有機溶媒抽出された画分のクロマトグラフィーが、図1に示され、例示的な当該着目脂質を備えるピークを見ることができる。
この実施例は、ボーベリア・バシアーナK4B3からの例示的な殺虫脂質の構造を解明し、生体制御化合物の新規の型式を提供する。
序論
この実施例では、ボーベリア・バシアーナK4B3から調製される殺虫脂質の同定を記載する。
ボーベリア・バシアーナK4B3の培養株は、振盪フラスコ内および200Lのバイオ発酵用容器内で成長した。凍結乾燥したサンプルを、メタノールで抽出し、乾燥した。
ナノスプレーMS/MS(フラグメンテーション解析)を実行し、メタノール小分画中に存在する化合物の構造を解像した。m/zが736.6、738.6、758.6 760.6、762.6および764.6の7つのベタイン脂質を観察した。
これらのベタイン脂質の脂肪酸構成を、下記表3に示す。
表3:ベタイン脂質中の脂肪酸
この実施例は、ボーベリア・バシアーナK4B3から例示的な殺虫脂質の構造を解明し、生体制御化合物の新規の型式を提供する。
序論
この実施例では、異なる時間点でボーベリア・バシアーナK4B3から調製される殺虫脂質の評価を説明する。
ボーベリア・バシアーナK4B3の培養株は、振盪フラスコ内および上記のバイオ発酵用容器内で成長した。16gのサンプルを、10日にわたって、各24時間の時間点で抽出し、脂質を上記のようにメタノールで抽出した。上記の実施例1および2に記載されるバイオアッセイ中の評価に先立ち、1.28mlのH2O中で全強度(FS)を、および0.2mlのFSを0.8mlでH2Oで希釈することによって1:5希釈物(1:5)を、再構成する前に、全てのサンプルを乾燥凍結した。手短に言えば、各サンプル300ulを、40個のアブラムシの上にスプレーした。4つのネガティブ対照(H2Oのみ)を、アッセイの中に含めた。
表4から分かるように、全ての全強度サンプル(すなわち、10日の各日)がアブラムシを殺虫した。1日〜5日でサンプルにより殺虫されたアブラムシは、非常に乾燥していたが、5日〜10日でサンプルにより殺虫されたアブラムシは、あまり乾燥していなかった。
この実施例は、殺虫脂質が成長中に迅速に生成され、殺虫活性の生成が長期に維持されることを示す。繰り返すと、抽出された脂質は、有力な殺虫の活性を有し、典型的には全強度でターゲット昆虫100%を殺し、これよりも希釈すると、約50%のターゲット昆虫を頻繁に殺す。
序論
この実施例では、ボーベリア・バシアーナK4B3から調製される殺虫脂質の評価を説明する。
ボーベリア・バシアーナK4B3からの脂質画分は、上記のように50%メタノール:50%CH2Cl2で抽出された。バイオアッセイ中の評価に先立ち、全強度(FS)を、および1:5希釈物(1:5)を、再構成する前に、全てのサンプルを乾燥凍結した。手短に言えば、各サンプル20ulを、蚊(イエカ:Culex perviligan)の幼虫に投与した。また、ネガティブ対照(MeOHのみ)およびポジティブ対照(SII)を、アッセイ中に含めた。死亡率は、曝露後23時間および48時間で評価した。
以下の表5は、各種処理群中で蚊の死亡率を示すデータである。
表5から分かるように、希釈した場合であっても、画分S5およびS8が特に、蚊幼虫(ボウフラ)の顕著な死滅を示した。
この実施例は、本発明の殺虫脂質は有力な殺虫の活性を有し、広範囲にわたるターゲット昆虫生物種を殺すことを示す。
序論
この実施例は、哺乳動物モデルにおけるK4B3脂質の毒性の評価を記載する。
K4B3脂質は、実施例1で上記のように単離する。
試験は、OECDガイドライン425によって(急性経口毒性-上下手順で)マウスに行われる。この材料は、有毒が高いと予想されないため、経口用挿管法による2,000mg/kg単一服用レベルによる境界試験を選択する。このドーズは、例外的な状況以外で、急性毒性の評価OECDによって推奨される最高のものである。
午後4時頃に、マウスうちの一体からエサを回収し、その体重を測定する。翌朝、そのマウスの体重を測定し、2,000mg/kgドーズの提供に必要なK4B3脂質の重量を計算する。この量を秤量し、150μLの水で希釈する。全容量を、強制栄養によってマウスに投与する。
K4B3複合体の投与後の毒作用はなく、マウスは観察期間を通して健康のままであり、ドーズ直後にエサも食べ、ドーズ日の間および実験を通して、普通に振る舞っていた結果から、毒性を示さない。
K4B3脂質を2,000mg/kgの用量でのマウスへ経口投与しても、識別できる副作用を引き起こさないことを示す結果および死亡が生じず、異常状態が屍検で発見されず、器官重量が正常な範囲内にあり、マウスの行動は完全に正常であることを示す結果は、低い急性毒性を示す。
上記の説明から明らかなように、本発明は、植物病原性昆虫等の昆虫の防除に使用可能な前記脂質を備えている組成物と共に、糸状菌からの殺虫脂質を提供する。
この脂質および脂質画分の使用ならびに植物病原性昆虫等の昆虫を防除する方法が、提供される。本発明の脂質および組成物は、広範囲にわたる農業のおよび園芸の用途に効用を有する。
Claims (84)
- 1種以上の昆虫の防除用の、請求項1記載の脂質。
- R1およびR2が独立に、C16飽和脂肪酸、C18飽和脂肪酸、C18モノ不飽和脂肪酸、C18ジ不飽和脂肪酸およびC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分からなる群より選択される、請求項1または請求項2に記載の脂質。
- R1もしくはR2またはR1およびR2の両方が、C16飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1もしくはR2またはR1およびR2の両方が、C18飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1もしくはR2またはR1およびR2の両方が、C18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1もしくはR2またはR1およびR2の両方が、C18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1もしくはR2またはR1およびR2の両方が、C18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18モノ不飽和脂肪酸である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18ジ不飽和脂肪酸である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC16飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1記載の脂質。
- R2がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18モノ不飽和脂肪酸の脂肪酸族分であり、R1がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18ジ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R1がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R1がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分であり、R2がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R2がC18トリ不飽和脂肪酸の脂肪族部分である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R3、R4、R5がそれぞれHまたはメチルである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- R3、R4、R5がそれぞれメチルである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- 前記脂質が、1,2−ジアシルグリセリル−3−O−4’−(N,N,N−トリメチル)−ホモセリン(ジアシルグリセリル−N,N,N−トリメチルホモセリン、DGTS)である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- 前記脂質が、1,2−ジアシルグリセリル−3−O−2’−(ヒドロキシメチル)−(N,N,N−トリメチル)−β−アラニン、または1,2−ジアシルグリセリル−3−O−カルボキシ−(ヒドロキシメチル)−コリンである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の脂質。
- 殺虫に有効な量の、1種以上の請求項1記載の脂質を、1種以上の基剤と共に含む、組成物。
- 1種以上の請求項1記載の脂質に富む組成物であって、前記組成物が、1種以上の子嚢菌門真菌の培養物の、またはその培養物からの、細胞抽出物、細胞懸濁液、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞上清、細胞ろ液、細胞ペレット、または1種もしくは2種以上の細胞である、あるいはそれを含む、組成物。
- 1種以上の請求項1記載の脂質が添加された、請求項44または45に記載の組成物。
- 1種以上の子嚢菌門真菌の培養物からの有機溶媒による抽出物が添加された、請求項44〜46のいずれか一項に記載の組成物であって、前記有機溶媒による抽出物が、1種以上の請求項1記載の脂質を含む、組成物。
- 再現性よく生存可能な形態および量にある1種以上の真菌を含む、請求項44〜47のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記1種以上の真菌が胞子として存在する、請求項48記載の組成物。
- 粉体、微粉、ペレット、顆粒、スプレー液、乳化液、コロイド、または溶液として処方された、請求項44〜49のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記1種以上の脂質が、約1重量%〜約99重量%の濃度で存在する、前記請求項44〜50のいずれか一項に記載の組成物。
- 約2ヶ月よりも長い期間、殺虫剤としての効能を保持可能な安定した組成物である、請求項44〜52のいずれか一項に記載の組成物。
- 真菌の単一株を含むまたは真菌の単一株に由来する、請求項44〜52のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記子嚢菌門真菌が、ボーベリア・バシアーナ 菌株K4B3(NMIA番号V08/025855号、2008年10月14日寄託)である、請求項45〜53のいずれか一項に記載の組成物。
- ボーベリア・バシアーナ K4B3 NMIA番号V08/025855号またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・マスカリウム 菌株K4V1(NMIA番号NM05/44593号)またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・マスカリウム 菌株K4V2(NMIA受託番号第NM05/44594号)またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・マスカリウム 菌株K4V4(NMIA受託番号第NM06/00007号)またはその同定のための特徴を有する菌株、ボーベリア・バシアーナ 菌株K4B1(NMIA受託番号第NM05/44595号)またはその同定のための特徴を有する菌株、ボーベリア・バシアーナ 菌株K4B2(NMIA受託番号第NM06/00010号またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・ロンギスポラム 菌株KT4L1(NMIA受託番号第NM06/00009号)またはその同定のための特徴を有する菌株、およびパエシロマイセス・フモソロセウス 菌株K4P1(NMIA受託番号第NM06/00008号)またはその同定のための特徴を有する菌株より選択される、再現性よく生存可能な形態および量にある1種以上の菌株を含む、請求項44〜52または請求項54のいずれか一項に記載の組成物。
- i)少なくとも1種のボーベリシン、または
ii)少なくとも1種のバシアノリド、または
iii)少なくとも1種の昆虫病原性真菌、または
iv)上記(i)〜(iv)の任意の2種以上
を更に含む、請求項44〜55のいずれか一項に記載の組成物。 - 1種以上の殺虫剤を更に含む、請求項44〜56のいずれか一項に記載の組成物。
- 1種以上の昆虫の防除用組成物の製造における、1種以上の請求項1〜43のいずれか一項に記載の脂質の使用。
- 1種以上の昆虫の防除用組成物の製造における、1種以上の子嚢菌門真菌の培養物からの有機溶媒による抽出物の使用であって、前記有機溶媒による抽出物が、1種以上の請求項1〜43のいずれか一項に記載の脂質を含む、使用。
- 前記1種以上の真菌が、ボーベリア・バシアーナ 菌株K4B3 NMIA番号V08/025855号またはその同定のための特徴を有する菌株である、請求項59記載の使用。
- 1種以上の昆虫の防除方法であって、前記1種以上の昆虫を、有効な量の1種以上の請求項1〜43のいずれか一項に記載の脂質、または有効な量の請求項44〜57のいずれか一項に記載の組成物に接触させるステップを含む、方法。
- 1種以上の昆虫の防除方法であって、1種以上の請求項1記載の脂質もしくはその機能性変形体、または請求項44〜57のいずれか一項に記載の組成物を、任意に少なくとも1種の昆虫病原性真菌と共に、現場に散布するステップを含む、方法。
- 1種以上の殺虫剤または1種以上の昆虫病原性物質に対する昆虫の耐性の全てまたは一部を奪う方法であって、1種以上の請求項1記載の脂質もしくはその機能性変形体、または請求項44〜57のいずれか一項の組成物を現場に散布するステップ、あるいは昆虫をこれに接触させるステップを含む、方法。
- 1種もしくは2種以上の殺虫剤または1種もしくは2種以上の昆虫病原性物質、またはそれらの任意の組み合わせと共に、前記1種以上の脂質を現場に散布するステップ、あるいは昆虫をこれに接触させるステップを含む、請求項63記載の方法。
- 前記投与される1種以上の殺虫剤または1種以上の昆虫病原性物質が、当該昆虫が耐性を有している、または耐性を有していることもしくは耐性を有することになることが予想される殺虫剤または昆虫病原性物質と同一である、請求項63または64に記載の方法。
- 1種以上の請求項1記載の脂質に接触した1種以上の昆虫の防除方法であって、前記1種以上の昆虫を防除するために有効な量の殺虫剤または昆虫病原性物質を現場に散布するステップ、あるいは前記1種以上の昆虫をこれに接触させるステップを含む、方法。
- 前記1種以上の本発明の脂質の散布または接触と、前記1種以上の殺虫剤または昆虫病原性物質の散布または接触とが、同時、連続的、または別途である、請求項66記載の昆虫の防除方法。
- 1種以上の殺虫剤または1種以上の昆虫病原性物質に対する昆虫の耐性の全てまたは一部を奪う方法であって、昆虫病原性真菌を、任意に殺虫剤または昆虫病原性物質と共に現場に散布するステップ、あるいは1種以上の昆虫をこれに接触させるステップを含む、方法。
- 昆虫病原性真菌を、1種以上の請求項1記載の脂質もしくはその機能性変形体、または請求項44〜57のいずれか一項に記載の組成物と共に現場に散布するステップ、あるいは1種以上の昆虫をこれに接触させるステップを含む、請求項68記載の方法。
- 存在する場合に、1種以上の真菌が、ボーベリア・バシアーナ K4B3 NMIA番号V08/025855号またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・マスカリウム 菌株K4V1(NMIA番号NM05/44593号)またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・マスカリウム 菌株K4V2(NMIA受託番号第NM05/44594号)またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・マスカリウム 菌株K4V4(NMIA受託番号第NM06/00007号)またはその同定のための特徴を有する菌株、ボーベリア・バシアーナ 菌株K4B1(NMIA受託番号第NM05/44595号)またはその同定のための特徴を有する菌株、ボーベリア・バシアーナ 菌株K4B2(NMIA受託番号第NM06/00010号)またはその同定のための特徴を有する菌株、レカニシリウム・ロンギスポラム 菌株KT4L1(NMIA受託番号第NM06/00009号)またはその同定のための特徴を有する菌株、およびパエシロマイセス・フモソロセウス 菌株K4P1(NMIA受託番号第NM06/00008号)またはその同定のための特徴を有する菌株より選択される、1種以上の菌株である、請求項62〜69のいずれか一項に記載の方法。
- 1種以上の前記1種以上の昆虫が、植物病原性昆虫である、請求項61〜70のいずれか一項に記載の方法。
- 1種以上の前記1種以上の昆虫が、半翅目の昆虫である、請求項61〜71のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物病原性昆虫が、蚊、コナガを含む蛾、アザミウマ(アザミウマ類)、アブラムシ、キジラミ、カイガラムシまたはコナジラミから構成される群より選択される、請求項72記載の方法。
- 前記1種以上の脂質または前記組成物が予防的に散布される、請求項62〜65または69〜73のいずれか一項に記載の方法。
- 前記1種以上の脂質または前記組成物が、前記1種以上の昆虫が現場に存在するときに散布される、請求項62〜65または69〜74のいずれか一項に記載の方法。
- 前記1種以上の脂質または前記組成物が、間接的に現場に散布される、請求項62〜65または69〜75のいずれか一項に記載の方法。
- 昆虫に対する殺虫活性を有する組成物の調製方法であって、1種以上の請求項1記載の脂質を合成することが可能な細胞の培養物から、前記1種以上の脂質を単離するステップと、前記1種以上の脂質を基剤と組み合わせて前記組成物を形成するステップと、を含む、方法。
- 前記培養物が1種以上の子嚢菌門真菌の培養物である、請求項77記載の方法。
- 生物学的防除組成物の製造方法であって、
1種以上の子嚢菌門真菌の培養物を用意するステップと、
少なくとも1種の請求項1記載の脂質の産生に好適な条件下に前記培養物を保持するステップと、
i)前記少なくとも1種の脂質を基剤と組み合わせるステップ、または
ii)前記少なくとも1種の脂質を1種若しく2種以上の本願に記載の昆虫病原性真菌と組み合わせるステップ、または
iii)前記少なくとも1種の脂質を前記真菌培養物から分離するステップ、または
iv)前記少なくとも1種の脂質を少なくとも部分的に精製もしくは単離するステップ、または
v)(i)〜(iv)の2つ以上の任意の組み合わせ、と
を含み、それにより前記組成物を形成する、方法。 - 前記保持するステップの後に、1つまたは2つ以上の溶菌ステップを更に含む、請求項79記載の方法。
- 1種以上の子嚢菌門真菌の培養物の有機溶媒抽出または培養抽出物を用意するステップと、
1種以上の請求項1記載の脂質を、1種以上の他の化合物から、少なくとも部分的に分離するステップと、
前記1種以上の脂質を回収するステップと、
を含む、殺虫性脂質の調製方法。 - 前記有機溶媒が、クロロホルム、二塩化メタン、それらに限定されないが、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどの短鎖アルキルアルコールを含むアルカノール、またはそれらの任意の2種以上の組み合わせである、あるいはそれを含む、請求項81記載の方法。
- 前記分離が、アニオン交換クロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラフィーを含むクロマトグラフィーによる、請求項81または82に記載の方法。
- 前記培養物が、ボーベリア・バシアーナ K4B3 NMIA番号V08/025855号またはその同定のための特徴を有する菌株の培養物である、請求項77〜83のいずれか一項に記載の方法。
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