JP2014524260A - Bacteroidesxylanisolvens種の微生物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明者らは、Bacteroides xylanisolvens種の微生物が、食品産物に使用するため、具体的にはヒトによる消費に適していることを見いだした。したがって、第1の態様では、本発明は、Bacteroides xylanisolvens種の微生物を含む食品産物を対象とする。
a)DNA間ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、DSM18836またはDSM23964として寄託されたBacteroides xylanisolvensに対して少なくとも30%、好ましくは少なくとも50%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%もしくは少なくとも99%のDNA間の関連性を示すこと;
b)DSM18836またはDSM23964として寄託されたBacteroides xylanisolvensに対して少なくとも95%、好ましくは少なくとも97%、少なくとも98%、または少なくとも99%、より好ましくは少なくとも99.5%の16S rRNA遺伝子配列類似性のレベルを示すこと;
c)以下の特性:
i)DSM18836として寄託されたBacteroides xylanisolvensと同様に、デンプンを分解することができないこと;
ii)マンニトール、特にD−マンニトール、メレジトースおよび/もしくはソルビトール、特にD−ソルビトールを使用および/もしくは代謝する能力、ならびに/またはグリセロールから酸を産生する能力を有すること;
iii)グルタミルグルタミン酸アリールアミダーゼ活性を発現すること;
iv)インドールを産生することができないこと;
v)カタラーゼ活性を示さないこと
の1つもしくは複数を有すること;
d)以下の特性:
i)嫌気性微生物であること;
ii)非胞子形成性であること;
iii)非運動性であること;および
iv)グラム陰性であること
の1つもしくは複数を有すること
の1つまたは複数を有する微生物を指す。
(i)抗生物質であるメトロニダゾール、メロペネムおよび/またはクリンダマイシンに対して感受性であること;
(ii)プラスミドRP4(DSM3876)および/またはプラスミドpSC101(DSM6202)を含有しないこと;
(iii)β−ラクタマーゼ遺伝子であるcfiAおよび/またはcfxAを含有しないこと;
(iv)ビルレンス因子であるBacteroides fragilisの多糖Aおよび/またはBacteroides fragilisのエンテロトキシンBftおよび/またはompW遺伝子によりコードされる「Ton B−結合外膜タンパク質」を含有しないこと;
(v)細胞外デオキシリボヌクレアーゼ活性、細胞外コンドロイチナーゼ活性、細胞外ヒアルロニダーゼ活性および/または細胞外ノイラミニダーゼ活性のいずれも示さないこと;ならびに
(vi)ヒト結腸の上皮細胞に付着しないこと
の1つまたは複数を有する。
a)2010年9月1日に、Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(DSMZ)、Inhoffenstrasse 7B、38124 Braunschweig(DE)においてthe Glycotope GmbH、Robert−Roessle−Str.10、13125 Berlin(DE)によりブタペスト条約の要件に従って受託番号DSM23964の下で寄託されたCTC1(DSM23964)、
b)CTC1に由来する微生物、または
c)CTC1ホモログ
である。
a)上で定義されたBacteroides xylanisolvensの種に属すること;
b)DNA間ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも30%、好ましくは少なくとも50%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%または少なくとも99%のDNA間の関連性を示すこと;
c)DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも95%、好ましくは少なくとも97%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%、より好ましくは少なくとも99.5%、および最も好ましくは約100%の16S rRNA遺伝子配列類似性のレベルを示すこと;
d)短鎖脂肪酸を産生することができること;
e)上に開示されている安全特性のうちの1つもしくは複数を有すること;ならびに/または
f)ヒトの胃内および/もしくは腸内の条件で生存すること
の1つまたは複数を有することが好ましい。
−食品原材料に、必要に応じてBacteroides xylanisolvens種の微生物を含有するスターター培養物を接種するステップ;
−少なくとも1つの糖、好ましくはグルコースを添加するステップ;および
−発酵用スターター培養物を含有する食品原材料を、好ましくは嫌気条件下でインキュベートするステップ
の少なくとも1つを含むことが好ましい。
i)DSM18836として寄託されたBacteroides xylanisolvensと同様に、デンプンを分解することができないこと;
ii)マンニトール、特にD−マンニトール、メレジトースおよび/もしくはソルビトール、特にD−ソルビトールを使用および/もしくは代謝する能力、ならびに/またはグリセロールから酸を産生する能力を有すること;
iii)グルタミルグルタミン酸アリールアミダーゼ活性を発現すること;
iv)インドールを産生することができないこと;
v)カタラーゼ活性を示さないこと
の1つまたは複数を有する。
(i)抗生物質であるメトロニダゾール、メロペネムおよび/またはクリンダマイシンに対して感受性であること;
(ii)プラスミドRP4(DSM3876)および/またはプラスミドpSC101(DSM6202)を含有しないこと;
(iii)β−ラクタマーゼ遺伝子であるcfiAおよび/またはcfxAを含有しないこと;
(iv)ビルレンス因子であるBacteroides fragilisの多糖Aおよび/またはBacteroides fragilisのエンテロトキシンBftおよび/またはompW遺伝子によりコードされる「Ton B−結合外膜タンパク質」を含有しないこと;
(v)細胞外デオキシリボヌクレアーゼ活性、細胞外コンドロイチナーゼ活性、細胞外ヒアルロニダーゼ活性および/または細胞外ノイラミニダーゼ活性のいずれも示さない;ならびに
(vi)ヒト結腸の上皮細胞に付着しないこと
の1つまたは複数を有する。
本発明による微生物は、Bacteroides xylanisolvens種の別個の菌株である
DNA間ハイブリダイゼーションは、分類学におけるゴールドスタンダードであると考えられている。CTC1菌株の全ゲノムを、Bacteroides xylanisolvens DSM18836、Bacteroides ovatus DSM1896、Bacteroides thetaiotaomicron DSM2079およびBacteroides finegoldii DSM17565の全ゲノムとのハイブリダイゼーションにかけた(これらの分析は、DMSZ(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)において、DMSZによって実行された。簡単に述べると、比較しようとする各菌株のバイオマテリアル3gをDNA調製のために使用した。単離されたDNAの純度を分析し、DNAを、フレンチプレスを使用してせん断し、高温で変性させた(100℃、10分)。DNAは、200kDaから600kDaの間のサイズを有し、主要な画分が約450+/−100kDaである断片にせん断することが好ましい。各菌株のDNAならびに両方の菌株のDNAの等濃度の混合物(試料中の最終的なDNA濃度は基本的に同一であり、好ましくは約20μg/mlから100μg/mlの間、特に約30μg/mlである)の復元を、260nmにおける吸光度を用いて分光光度的に測定した。溶液をDNAの融解温度を下回る温度25℃まで直ちに冷却することによって復元を開始し、測定を30分にわたって実施した。DNA関連性を、単一の細菌株および両方の菌株のDNAの混合物のそれぞれのDNAの復元曲線の種々の傾きから算出した。具体的には、復元速度v’を1分当たりの吸光度の減少(ΔA/t)として決定し、結合の程度(D)、すなわちDNA関連性をDe Leyら(上記を参照されたい)によって示された式に従って算出した:
刺激された胃液および腸液の影響
ビルレンス因子の分析
毒物学的試験
Claims (18)
- Bacteroides xylanisolvens種の微生物を含む食品産物。
- Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物が、DSM23964として寄託されたCTC1、それに由来する微生物またはCTC1ホモログである、請求項1に記載の食品産物。
- Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物が、以下の特性:
a)DNA間ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも70%、好ましくは少なくとも90%、少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%、最も好ましくは少なくとも99%のDNA間の関連性を示すこと;
b)DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも98%、好ましくは少なくとも99%もしくは少なくとも99.5%、より好ましくは100%の16S rRNA遺伝子配列類似性のレベルを示すこと;ならびに/または、
c)短鎖脂肪酸を産生することができること;ならびに/または
d)摂取された後にヒトの胃内および必要に応じて腸内の条件で生存することができること;ならびに/または
e)以下の安全特性:
(i)抗生物質であるメトロニダゾール、メロペネムおよび/もしくはクリンダマイシンに対して感受性であること;
(ii)プラスミドRP4(DSM3876)および/もしくはプラスミドpSC101(DSM6202)を含有しないこと;
(iii)β−ラクタマーゼ遺伝子であるcfiAおよび/もしくはcfxAを含有しないこと;
(iv)ビルレンス因子であるBacteroides fragilisの多糖Aおよび/もしくはBacteroides fragilisのエンテロトキシンBftおよび/もしくはompW遺伝子によりコードされる「Ton B−結合外膜タンパク質」を含有しないこと;
(v)細胞外デオキシリボヌクレアーゼ活性、細胞外コンドロイチナーゼ活性、細胞外ヒアルロニダーゼ活性および/もしくは細胞外ノイラミニダーゼ活性のいずれも示さないこと;および
(vi)該ヒト結腸の上皮細胞に付着しないこと
の1つもしくは複数を有すること;ならびに/または
f)表面炭水化物構造を安定および/もしくは均一に発現すること
の1つまたは複数を有する、請求項1または2に記載の食品産物。 - Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物を、消費者に微生物約106〜約1013個の日用量をもたらす量または濃度で含む、請求項1から3までのいずれか一項に記載の食品産物。
- Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物を、生育可能な形態、非生殖形態、生育不能な形態または溶解された形態で含む、請求項1から4までのいずれか一項に記載の食品産物。
- 発酵食品、プロバイオティクス食品、機能性食品、栄養補助食品および食品添加物からなる群から選択される、請求項1から5までのいずれか一項に記載の食品産物。
- 食品原材料を、Bacteroides xylanisolvens種の微生物が添加されることを特徴とする発酵用スターター培養物と組み合わせる、発酵食品を生成するための方法。
- 以下の特性:
a)Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物が、単独で、もしくは別のスターター培養物と組み合わせて、スターター培養物として使用されること;
b)Bacteroides xylanisolvens種の該微生物を、発酵中もしくは発酵後に発酵食品に添加すること;および/または
c)Bacteroides xylanisolvens種の該微生物が、生育可能な形態、非生殖形態、生育不能な形態もしくは溶解された形態で使用されること;
d)Bacteroides xylanisolvens種の該微生物を、原材料1ミリリットル当たり少なくとも細胞106個の量で、好ましくは原材料1ミリリットル当たり細胞約109〜1010個の量で添加すること
の1つまたは複数を有する、請求項7に記載の方法。 - 以下の方法のステップ:
−前記食品原材料に、必要に応じてBacteroides xylanisolvens種の微生物を含有するスターター培養物を接種するステップ;
−少なくとも1つの糖、好ましくはグルコースを添加するステップ;および
−発酵用該スターター培養物を含有する該食品原材料を、好ましくは嫌気条件下でインキュベートするステップ
の少なくとも1つを含む、請求項7または8に記載の方法。 - Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物が、以下の特性:
a)CTC1(DSM23964)、それに由来する微生物もしくはCTC1ホモログであること
b)DNA間ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも70%、好ましくは少なくとも90%、少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%、最も好ましくは少なくとも99%のDNA間の関連性を示すこと;
c)DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも98%、好ましくは少なくとも99%もしくは少なくとも99.5%、より好ましくは100%の16S rRNA遺伝子配列類似性のレベルを示すこと;ならびに/または、
d)短鎖脂肪酸を産生することができること;ならびに/または
e)摂取された後にヒトの胃内および必要に応じて腸内の条件で生存することができること;ならびに/または
f)以下の安全特性:
(i)抗生物質であるメトロニダゾール、メロペネムおよび/もしくはクリンダマイシンに対して感受性であること;
(ii)プラスミドRP4(DSM3876)および/もしくはプラスミドpSC101(DSM6202)を含有しないこと;
(iii)β−ラクタマーゼ遺伝子であるcfiAおよび/もしくはcfxAを含有しないこと;
(iv)ビルレンス因子であるBacteroides fragilisの多糖Aおよび/もしくはBacteroides fragilisのエンテロトキシンBftおよび/もしくはompW遺伝子によりコードされる「Ton B−結合外膜タンパク質」を含有しないこと;
(v)細胞外デオキシリボヌクレアーゼ活性、細胞外コンドロイチナーゼ活性、細胞外ヒアルロニダーゼ活性および/もしくは細胞外ノイラミニダーゼ活性のいずれも示さないこと;および
(vi)該ヒト結腸の上皮細胞に付着しないこと
の1つもしくは複数を有すること
の1つまたは複数を有する、請求項7から9までのいずれか一項に記載の方法。 - 請求項7から10までのいずれか一項に記載の方法によって得ることができる発酵食品。
- DSM23964として寄託された菌株CTC1の微生物、それに由来する微生物またはCTC1ホモログ。
- CTC1に由来する前記微生物または前記CTC1ホモログが、以下の特性:
a)Bacteroides xylanisolvens種の微生物であること;
b)DNA間ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも70%、好ましくは少なくとも90%、少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%、最も好ましくは少なくとも99%のDNA間の関連性を示すこと;
c)DSM23964として寄託されたCTC1に対して少なくとも98%、好ましくは少なくとも99%もしくは少なくとも99.5%、より好ましくは100%の16S rRNA遺伝子配列類似性のレベルを示すこと;ならびに/または、
d)短鎖脂肪酸を産生することができること;ならびに/または
e)摂取された後にヒトの胃内および必要に応じて腸内の条件で生存することができること;ならびに/または
f)以下の安全特性:
(i)抗生物質であるメトロニダゾール、メロペネムおよび/もしくはクリンダマイシンに対して感受性であること;
(ii)プラスミドRP4(DSM3876)および/もしくはプラスミドpSC101(DSM6202)を含有しないこと;
(iii)β−ラクタマーゼ遺伝子であるcfiAおよび/もしくはcfxAを含有しないこと;
(iv)ビルレンス因子であるBacteroides fragilisの多糖Aおよび/もしくはBacteroides fragilisのエンテロトキシンBftおよび/もしくはompW遺伝子によりコードされる「Ton B−結合外膜タンパク質」を含有しないこと;
(v)細胞外デオキシリボヌクレアーゼ活性、細胞外コンドロイチナーゼ活性、細胞外ヒアルロニダーゼ活性および/もしくは細胞外ノイラミニダーゼ活性のいずれも示さないこと;および
(vi)該ヒト結腸の上皮細胞に付着しないこと
の1つもしくは複数を有すること
の1つまたは複数を有する、請求項12に記載の微生物。 - 請求項12または13に記載の微生物を含む組成物。
- Bacteroides xylanisolvens種の微生物を、少なくとも1つの食品原材料を含む組成物または加工された食品材料に添加するステップを含む、請求項1から6までのいずれか一項に記載の食品産物を生成するための方法。
- Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物が、請求項12または13に記載の微生物である、請求項15に記載の方法。
- Bacteroides xylanisolvens種の微生物の、食品産物を生成するための、特に発酵用のスターター培養物としての使用。
- Bacteroides xylanisolvens種の前記微生物が、請求項12または13に記載の微生物である、請求項17に記載の使用。
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