JP2014515759A - 扁平上皮がんを治療する方法関連出願 - Google Patents
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Abstract
本開示は、治療有効量の、少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト、例えば抗体1、2、3、4または5などの抗スクレロスチン抗体用いるスクレロスチン発現がん、例えば扁平上皮がん(SCC)、例えば上部気道消化管、食道または肺のSCCを治療するための方法に関する。
Description
本出願は、本明細書に参照によりその全体が組み込まれる2011年4月29日出願の米国仮特許出願第61/480679号の優先権を主張する。
本開示は、スクレロスチンの発現、分泌、シグナル伝達および/または機能を拮抗することによって、扁平上皮がん(SCC)、例えば肺のSCCを治療するための方法に関する。
肺がんは、肺がん患者の大部分の主な死因となる遠隔臓器への転移を伴って、世界中の女性および男性におけるがん死の主な原因である。InamuraおよびIshikawa(2010)Clin.Exp.Metastasis 27:389-97。肺がんは、小細胞肺がん(SCLC)型または非SCLC(NSCLC)型のいずれかに分類される。NSCLCは、腺がん、扁平上皮がん(SCC)および大細胞がん(LCC)に細分される。SCCは、全肺がんの約30%を占め、喫煙と最も強く関連する肺がんである。白金ベースのダブレット化学療法は、進行性NSCLC患者を治療するための第一選択療法でありつづけている。G.Selvaggi(2009)Oncology 23:13。しかし、組織学とNSCLC治療結果との相互関係を検討したほとんどのデータは、近年承認された治療選択肢が腺がんと比較してSCCを有する患者ではあまり良くないことを示している(例えばベバシズマブおよびペメトレキセドの表示は非扁平上皮細胞NSCLCを有する患者に限定されている)。Langer(2010)J.Clin.Oncology 28:5311-5320。扁平上皮形態のNSCLCを治療するためにベバシズマブまたはソラフェニブを用いることに関連して安全性に関する顕著な危険性もある。Langerら(2010)上記。
SCCは、扁平上皮の悪性腫瘍であることから、肺以外の臓器および組織(すなわち扁平上皮を有する臓器)、例えば頭部もしくは頸部、肺、皮膚、口唇、口、食道、膀胱、前立腺、膣または子宮頸部に生じる。SCCは、皮膚がんの2番目に高頻度の種類であり、頭部または頸部のがんの90%はSCC型のものである。SCCの種々の分類がある、例えばアデノイド扁平上皮がん(偽腺様扁平上皮がん)、明細胞扁平上皮がん(例えば皮膚の明細胞がん)、紡錘細胞扁平上皮がん、印環細胞扁平上皮がん、類基底扁平上皮がん(例えば胸腺、肛門、外陰部、膣、子宮頸部および気道消化管(例えば喉頭、咽頭、扁桃腺、舌、副鼻腔、結膜、鼻、耳、顎下領域、食道など)において生じる)、疣状がん、ケラトアカントーマ。SCCの種類(生じた臓器、侵襲性または非侵襲性など)に応じて治療は、外科的切除、化学外科、局所的薬物療法、放射線治療ならびに電気乾燥法および掻爬を含む。非肺SCCに対するこれらの治療法の病的状態および不快感は過酷である場合がある。
(他のNSCLCと比較して)肺のSCCを有する患者についてのあまり好ましくない治療および安全性の結果を考慮すると、肺のSCCに対処するための新規化学療法剤に対する必要性がある。さらに、非肺SCCの(例えば皮膚、食道ならびに頭部および頸部がんの)罹患率および現在利用可能な療法による不快感により、非肺SCCを治療するために用いられうる新規治療剤を設計する必要がある。
正常組織対腫瘍範囲におけるSOST mRNA発現/遺伝子増幅を評価する生物情報学的分析が実施された。この分析は、ヒト患者試料だけでなくがん細胞株および腫瘍モデルにも及んだ。顕著な染色体増幅/欠落は観察されなかったが、扁平上皮亜型の腫瘍サブセット、特に肺、食道および上部気道消化管のがんにおいて著しい過発現が見出された。本発明者らの機能的研究は、3つのSCC細胞モデル(原発腫瘍モデル2つおよび細胞株1つ)において抗スクレロスチン抗体を検査することを含んでいた。これらの研究により、本発明者らは、スクレロスチンを高発現しているSCCの原発腫瘍モデルに抗体1が静脈内に導入された場合に腫瘍増殖を60%阻害したことを示す。
これらの発見は、スクレロスチンが肺の発達、維持または形態において認められた役割を有さない骨同化タンパク質であることを考慮すると驚くべきことである。スクレロスチンは、BMP(骨形態タンパク質)に結合し、in vitroでBMPアンタゴニストとして作用する分泌タンパク質として最初は同定された(Winklerら(2003)EMBO J.22(23):6267-76)。SOST遺伝子によってコードされるスクレロスチンが、LRP5/LRP6への結合によって直接的にまたは別の機構を介して間接的にのいずれかで古典的Wntシグナル伝達の負の制御因子としとして作用することはいまや理解されている(例えばオンラインで2010年7月1日に発表されたMasonおよびWilliams(2010)J.Osteoporos ID No.460120、Winklerら(2005)J.Biol.Chem.28;280(4):2498-502を参照されたい)。この機能の結果として、スクレロスチンは、ヒトおよびマウスにおける骨形成の強力な負の制御因子であり、スクレロスチンの欠失は高い骨形成をもたらし、硬結性骨化症およびバン・ブッヘム病を生じる(Balemansら(2001)Hum Mol Genet.10(5):537-43、Brunkowら(2001)Am.J.Hum.Genet.68(3):577-89、Lootsら(2005)Genome Res. 15(7):928-35)。異常なWntシグナル伝達は、いくつかのがんの発症に関与している一方で、本出願の出願前にはスクレロスチンがSCCの病態に関与している証拠はなかった(例えばTennisら(2007)J.Thoracic Oncology 2:889-892、Geryk-HallおよびHughes(2009)Curr.Oncol.Rep.11:446-53、Niemannら(2007)Cancer Res.67:2916-21)。近年の刊行物Huら(October 2011)PLoS One 10:e25807は、本明細書で報告される結果を確認している。Huらは、Wnt経路構成成分がSCC試料において差次的に発現されていること(つまり、非古典的Wnt PCPシグナル伝達カスケードの増強を伴ったWnt経路の古典的分岐点の阻害)を示している。特にHuらは、SOST過発現がSCC試料において強化されることを報告しており、本発明者らの発見を確認している。
したがって、本明細書で開示されるのは、扁平上皮がん(SCC)を有する患者(例えばヒト)に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗体1、2、3、4もしくは5などの抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片)を投与するステップを含む扁平上皮がん(SCC)を治療する方法である。同様に本明細書で開示されるのは、必要とする患者において扁平上皮がん(SCC)(例えば肺、尿路、上部気道消化管のSCC)を治療するのに使用するためのスクレロスチンのアンタゴニストである。同様に本明細書で開示されるのは、必要とする患者において扁平上皮がん(SCC)を治療する薬剤の製造のためのスクレロスチンのアンタゴニストの使用である。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)SCCを有する患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびb)前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、SCCを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、SCCを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびb)前記患者由来の前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がSCCを発症する可能性の増大を示すステップ、を含む、患者がSCCを発症する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がSCCを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がSCCを発症する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップ、およびb)前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するステップを含む、患者においてSCCを治療する方法である。いくつかの実施形態ではこれらの方法は、投与のステップより前に前記患者由来の生物学的対照試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップをさらに含む。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)生物学的検査試料をSCCを有する患者から得る、b)前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびc)前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与することを特徴とする、SCCを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびb)前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与することを特徴とする、SCCを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、b)任意選択で、前記スクレロスチンアンタゴニストを患者に投与するための手段、c)任意選択で、白金、タキサン、EGFR−i、セツキシマブ、5−FU、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも1つの追加的薬剤、ならびにd)前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書を含む、SCCを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、b)SCCを有する患者由来の生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量を検出できる少なくとも1つのプローブ、c)任意選択で、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための手段、ならびにd)対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較して前記患者由来の前記生物学的検査試料がより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するための説明書を含む、SCCを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブ、およびb)SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、スクレロスチンアンタゴニストでのSCCの治療に前記患者が応答する可能性の増大を示す説明書を含む、SCCを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブ、およびb)患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がSCCを発症する可能性の増大を示す説明書を含む、患者がSCCを発症する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
本開示の方法、使用、キットおよび組成物のさらなる実施形態は、発明の詳細な説明および特許請求の範囲において見出されうる。
本開示は、不適当なおよび/または過剰なスクレロスチン活性によって調節される腫瘍およびがん(そのようながんは本明細書において「スクレロスチン発現がん」または「スクレロスチン発現腫瘍」と称される)においてスクレロスチンの発現、シグナル伝達、分泌および/または機能を阻害することによって腫瘍増殖に影響を与える(例えば遅延させる、体積を減少させる、逆行させる、改善させるなど)方法を提供する。
したがって、本明細書で提供されるのは、とりわけ、必要とする患者(例えばヒト)においてスクレロスチン発現がん、例えばSCC(例えば肺のSCC)を治療する方法であって、前記患者に治療有効量の、少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片、例えば抗体1、2、3、4または5)を投与するステップを含む方法である。同様に本明細書で開示されるのは、必要とする患者においてスクレロスチン発現がん、例えばSCC(例えば肺のSCC)を治療するのに使用するためのスクレロスチンのアンタゴニストである。さらに本明細書で開示されるのは、必要とする患者においてスクレロスチン発現がん、例えばSCC(例えば肺のSCC)を治療するための薬剤の製造のためのスクレロスチンのアンタゴニストの使用である。好ましい実施形態では、スクレロスチン発現がんはSCCである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップ、およびb)前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを投与するステップを含む、患者におけるSCCを治療する方法である。いくつかの実施形態ではこれらの方法は、投与するステップより前に前記患者由来の生物学的対照試料をスクレロスチンの発現の量についてアッセイするステップをさらに含む。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)生物学的検査試料をSCCを有する患者から得る、b)前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびc)前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを前記患者に投与することを特徴とする、SCCを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、およびb)前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを前記SCC患者に投与することを特徴とする、SCCを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニストである。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、スクレロスチン発現の量は、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブの使用によって測定される。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは抗スクレロスチン抗体である。本明細書で用いられる「扁平上皮がん」および「SCC」は、肺のSCCおよび非肺SCCの両方を含む。SCCは、扁平上皮を有する任意の臓器、例えば肺、胆管、骨、子宮頸部、子宮内膜、眼、生殖器、大腸、食道、卵巣、唾液腺、皮膚、胃、胸腺、上部気道消化管、尿路、膀胱、前立腺、陰茎、子宮頸部、膣、外陰部などにおいて生じうる。肺のSCCは、肺に生じる扁平上皮のがんである。非肺SCCは、肺以外の臓器または組織において生じる扁平上皮のがんである。本開示の方法、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、患者は肺のSCCを有する。本開示の方法、キットおよび使用のいくつかの実施形態では患者は、非肺SCCを有する。
本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態では、SCCは、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部に生じる。本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態では、SCCは上部気道消化管、食道、尿路または肺に生じる。本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態ではSCCは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔に生じる。本開示の方法、使用またはキットのいくつかの実施形態ではSCCは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連(oral commissure)、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝(oral sulcus)、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭(nasopharnyx)、中咽頭(orpharynx)または副鼻腔に生じる。
本明細書において用いる「上部気道消化管」に生じるSCCは、気道または消化管の上部において見出されるSCCを意味する。とりわけそれは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔において生じるSCCを含む。上部気道消化管のSCCは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔に生じるSCCを含む。
本明細書において用いる「頭部または頸部」は、口唇、口腔、鼻腔、副鼻腔、咽頭および喉頭を含む上部気道消化管内の生物学的に類似するがんの群を意味する。頭部のおよび頸部のがんは、鼻腔、副鼻腔、口腔(例えば内唇、舌口腔底、歯肉、硬口蓋)、上咽頭、中咽頭(例えば軟口蓋、舌根、扁桃腺)、舌咽頭(梨状窩、後咽頭壁、輪状後部)および喉頭(例えば声門、声門上、声門下のがん)の腫瘍を含む。頭部および頸部がんは、上部気道消化管のがんと実質的な重複を有する。便宜上臨床医は、これらの種類のがんを集合的に「頭部および頸部」がんと一般的に称する。混乱を減らすために本開示は、語句「頭部および頸部」よりも「頭部または頸部」を用いる。したがって頭部または頸部がんを有する患者は、例えば眼窩のがんまたは喉頭のがんを有する場合があるが、眼窩のがんおよび喉頭のがんの両方を有する必要はない。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、患者は頭部または頸部のSCCを有する。本明細書において用いる「スクレロスチン」は、ヒトスクレロスチン、配列番号1に記載のアミノ酸配列を意味することが意図される。
SCC(例えば上部気道消化管、食道、尿路または肺のSCC)を有する、SCCを有すると疑われるまたは将来SCCを発症すると疑われる患者は、本開示のスクレロスチンアンタゴニストでの治療が必要であると考えられる。用語「治療」、「治療する(treating)」または「治療する(treat)」は、がんを罹患している危険があるまたはがんを罹患すると疑われる患者および病気であるまたはがんもしくは医学的状態を罹患していると診断されている患者の治療を含み、予防的または防止的治療の両方および治癒的治療または疾患修飾治療を意味し、臨床的再発の抑制を含む。治療は、SCCを有する対象にまたは最終的にSCCを罹患する可能性がある対象に、SCCの1つもしくは複数の症状または再発SCCを予防する、治癒させる、発症を遅延させる、重症度を低下させるもしくは回復させるためにまたはそのような治療が無い場合に期待されるものを越えて対象の生存を延長するために投与されうる。治療は、SCCを有する対象に腫瘍体積を減少させるためまたは腫瘍増殖を遅延させるために投与されうる。
本明細書において用いられる語句「治療への応答」は、具体的な療法の投与に続く所与の障害の徴候および症状の改善、例えばスクレロスチンアンタゴニスト(例えばスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド、スクレロスチン阻害ポリペプチド、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片および拮抗性小分子)の投与に続く腫瘍体積の減少、腫瘍増殖の遅延などを意味する。
本明細書において用いられる「治療有効量」は、患者(ヒト患者など)への単回または複数回用量の投与において、障害(例えばSCC)の少なくとも1つの症状をもしくは障害の再発を治療する、予防する、その発症を予防する、治癒させる、遅延させる、その重症度を低下させる、回復させることまたはそのような治療が無い場合に予測されるものを越えて対象の生存を延長するために有効であるスクレロスチンアンタゴニスト(例えばスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド、スクレロスチン阻害ポリペプチド、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片および拮抗性小分子、例えばその内容全体が参照により本明細書に組み込まれるWO09047356における開示に記載の抗体1)の量を意味する。単独で投与される個々の活性成分(例えば抗スクレロスチン抗体)に適用する場合、用語はその成分だけを意味する。組合せに適用する場合用語は、組合せで、連続的にまたは同時に投与されるかにかかわらず治療効果をもたらす活性成分の組み合わされた量を意味する。
本明細書で用いられる用語「患者」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は全ての脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物および非哺乳動物を含む。本開示のいくつかの実施形態では、患者はヒトである。
本明細書で用いられる用語「生物学的試料」は、患者由来で同定、診断、予測またはモニタリングの目的のために用いられうる試料を意味する。本開示の方法、使用またはキットにおける使用のための好ましい検査および対照試料は、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部由来の組織を含む。当業者は、いくつかの検査試料が分画または精製手順(例えば全血からのDNAの単離)後により容易に分析されることを認識するであろう。したがって「生物学的試料」は、例えば患者試料から抽出されたDNA、RNAおよびタンパク質の使用を含む。
本明細書で用いられる語句「生物学的検査試料」は、対象の患者から得られる生物学的試料を意味する。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
本明細書で用いられる語句「生物学的対照試料」は、標準的供給源から得られる生物学的試料を意味する。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はSCCを発症していないことが知られている対照患者から得られる。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はSCCを有さない検査患者の組織由来である。いくつかの実施形態では対照試料は参照基準(例えばSCCを発症していないことが判っている患者におけるスクレロスチンまたはSOSTの発現の平均レベル)であってもよい。
本明細書で用いられる語句「SCCを発症していないことが判っている患者」は、SCCを罹患していないと既に判定されている患者(例えばヒト患者)を意味する。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、患者はSCCを発症していないことが判っている者である。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、試料(例えば生物学的対照試料)は、SCCを発症していないことが判っている患者由来である。
本明細書で用いられる語句「SCCを有さない患者の組織由来」は、SCCを罹患していないと判定されている患者から採取された生物学的試料を意味する。これらの供給源由来の試料は、本開示の方法で生物学的対照試料として用いられうる。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、試料(例えば生物学的対照試料)は、SCCを有さない患者の組織由来である。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得られる。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得られる。本開示の方法、使用およびキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得られる。
用語「アッセイする」は、検査するおよび/または測定することを意味して用いられる。語句「生物学的試料をアッセイする」などは、試料が所与の物質の存在または非存在のいずれかについて検査されうることを意味して用いられる。物質の存在が1つの可能性を示し、物質の不在が異なる可能性を示す状況において、そのような物質の存在または不在のいずれかが治療決定を導くために用いられうることは理解される。
本明細書で用いられる語句「スクレロスチン発現の量」は、試料中のSOST遺伝子の産物のレベル(例えばスクレロスチン核酸の発現のレベルまたはスクレロスチンポリペプチドの発現のレベル)を意味する。本明細書で用いられる語句「スクレロスチン発現の量の増加」は、スクレロスチンの発現レベルの意味のある増加、例えば統計学的に有意な増加を意味する。
本明細書で用いられる「SOST遺伝子の産物」は、スクレロスチン核酸産物(例えばmRNA、マイクロRNA、RNAの断片など)およびスクレロスチンポリペプチド産物(例えばSOST遺伝子によってコードされるポリペプチド、SOST遺伝子によってコードされるポリペプチドの断片など)を含む。本明細書で用いられる「スクレロスチンポリペプチド」は、SOST遺伝子(例えばヒトSOST遺伝子)によってコードされるポリペプチドを意味する。本明細書で用いられる「スクレロスチン核酸」は、SOST遺伝子およびその断片の任意のRNA産物ならびにSOST遺伝子およびその断片の任意のRNA産物から産生されるcDNAを意味する。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では試料中のスクレロスチン発現の量は、SOST遺伝子の産物について試料をアッセイするステップによって決定される。本開示の方法、使用および組成物のさらなる実施形態では、試料中のスクレロスチン発現の量はスクレロスチン核酸について試料をアッセイするステップによって決定される。本開示の方法、使用および組成物のさらなる実施形態では試料中のスクレロスチン発現の量は、スクレロスチンポリペプチドについて試料をアッセイするステップによって決定される。
本明細書で用いられる用語「より多い」は、意味のある方法、例えば統計的有意差でより多い量を意味する。
本明細書で用いられる「予測する」は、SCCを有する個体がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答するもしくはより好都合に応答する可能性または患者が最終的にSCCを発症する可能性を医療従事者が決定できるようにする情報を本明細書に記載の方法が提供することを示す。それは、100%の正確さを有して応答を予測する能力を意味しない。むしろ当業者は、それが確率の増大を意味することを理解するであろう。
本明細書で用いられる「可能性(likelihood)」および「可能性がある(likely)」は、ある事象がどの程度生じるかの尺度である。それは「確率(probability)」と互換的に用いられる場合がある。可能性は、推測を越えるが確実には満たない確率を意味する。したがって事象は、常識、訓練または経験を用いて良識のある人物が所与の状況で事象がほぼ確実であると結論する場合に可能性がある。いくつかの実施形態では、可能性が確認された時点で患者は、スクレロスチンアンタゴニストで治療される(もしくは治療が継続されるもしくは用量を増加させて治療が進行する)場合があるまたは患者は、スクレロスチンアンタゴニストで治療されない(もしくは治療が継続されないもしくは用量を低下させて治療が進行する)場合がある。本明細書で用いられる語句「患者がSCCを発症する可能性」は、患者がSCCを患う確率を意味する。
語句「増大した可能性」は、事象が生じる確率の増大を意味する。例えば本明細書に記載の方法は、患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性の増大またはスクレロスチンアンタゴニストでの治療により良く応答する可能性の増大を示すかどうかの予測を可能にする。
語句「減少した可能性」は、事象が生じる確率の減少を意味する。例えば本明細書の方法は、患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性の減少またはスクレロスチンアンタゴニストでの治療により良く応答する可能性の減少を示すかどうかの予測を可能にする。
用語「プローブ」は、別の物質(例えばスクレロスチンに関連する物質)を特異的に検出するために有用な任意の物質を意味する。プローブは、スクレロスチン核酸(例えばmRNA、cDNA)に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドまたはコンジュゲートしたオリゴヌクレオチドである場合がある。「コンジュゲートしたオリゴヌクレオチド」は、発色団または、受容体分子に高度に特異的であるリガンド(例えば抗原)を含有する分子(例えば抗原に特異的な抗体)に共有結合したオリゴヌクレオチドを意味する。プローブは、(別のプライマーと共に)スクレロスチン核酸の特定の領域を増幅するためのPCRプライマーであってもよい。さらにプローブは、スクレロスチンポリペプチドを(すなわち、抗原またはスクレロスチンのエピトープに結合することによって)特異的に認識する抗体であってもよい。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、プローブはスクレロスチン核酸を検出する。本開示の方法、使用および組成物のいくつかの実施形態では、プローブはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示の方法、使用および組成物のさらなる実施形態では、プローブは抗スクレロスチン抗体、例えば表1に記載の抗体、例えば抗体1、2、3、4または5である。
用語「できる」は、所与の結果を達成する能力を意味して用いられ、例えば、特定の物質の存在を検出できるプローブは、プローブが特定の物質を検出する能力があることを意味する。
本明細書で用いられる語句「スクレロスチンの存在を検出できる」は、所与の試料中のスクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドの存在(または不在)に関する情報を提供するプローブの能力を意味する。
本明細書で用いられる用語「得る(obtain)」、「得た」および「得る(obtaining)」は、入手すること、例えば任意の方法によって所有権を獲得することを意味する。
患者を参照して本明細書で用いられる「選択する」および「選択される」は、具体的な患者が予め決定された基準、例えば患者がSOSTまたはスクレロスチンの存在または特定のレベルを有する、(例えば生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合)を有することに基づいて(によって)患者のより大きな群から特異的に選ばれることを意味して用いられる。同様に「SCCを有する患者を選択的に治療する」は、具体的な患者が予め決定された基準、例えば患者がSOSTまたはスクレロスチンの存在または特定のレベルを有する(例えば生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合)を有することに基づいて(によって)患者のより大きな群から特異的に選ばれるSCC患者に治療を提供することを意味する。同様に「選択的に投与する」は、具体的な患者が予め決定された基準(例えば具体的な遺伝的または他の生物学的マーカー)を有することに基づいて(によって)患者のより大きな群から特異的に選ばれるSCC患者に薬を投与することを意味する。選択する、選択的に治療するおよび選択的に投与することによって、SCCを有することだけに基づいて標準的治療計画を与えられるよりも患者の生態に基づいてSCCに対する個別化された療法を患者が与えられることが意味される。
スクレロスチンアンタゴニスト
本方法、キットおよび使用は、SCC(例えば頭部もしくは頸部、尿路、食道または肺のSCC)の治療のためにスクレロスチンアンタゴニスト(例えば少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト、例えば1つのスクレロスチンアンタゴニスト)を用いる。スクレロスチンアンタゴニストは、例えばマウスおよびヒトスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド(すなわち、直接的または間接的のいずれかでスクレロスチンレベルおよび/または活性を低下させるポリヌクレオチド、例えばアンチセンス分子、siRNA、アプタマー)、スクレロスチン阻害ポリペプチド(すなわち、直接的または間接的のいずれかでスクレロスチンレベルおよび/または活性を低下させるポリペプチド、例えばBMPおよび/またはLRP相互作用ドメインを含有する可溶性断片などのスクレロスチンの断片ならびにその融合タンパク質)、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片(すなわち、全長スクレロスチンおよび/またはスクレロスチン断片に結合する拮抗性抗体およびその抗原結合断片を含む直接的または間接的のいずれかでスクレロスチン活性および/または発現を低下させる抗体または抗原結合抗体断片)、ならびに拮抗性小分子(例えばsiRNA、アプタマーならびに無機および/または有機の小分子または化合物)を含み、スクレロスチン活性、シグナル伝達、発現および/または分泌を抑制するために用いられうるならびに、スクレロスチン活性、発現および/または分泌の増加に関連してSCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道もしくは肺のSCC)を診断する、経過を見通す、モニタリングする、治療する、回復させるおよび/または予防するために用いられうる。
本方法、キットおよび使用は、SCC(例えば頭部もしくは頸部、尿路、食道または肺のSCC)の治療のためにスクレロスチンアンタゴニスト(例えば少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト、例えば1つのスクレロスチンアンタゴニスト)を用いる。スクレロスチンアンタゴニストは、例えばマウスおよびヒトスクレロスチン阻害ポリヌクレオチド(すなわち、直接的または間接的のいずれかでスクレロスチンレベルおよび/または活性を低下させるポリヌクレオチド、例えばアンチセンス分子、siRNA、アプタマー)、スクレロスチン阻害ポリペプチド(すなわち、直接的または間接的のいずれかでスクレロスチンレベルおよび/または活性を低下させるポリペプチド、例えばBMPおよび/またはLRP相互作用ドメインを含有する可溶性断片などのスクレロスチンの断片ならびにその融合タンパク質)、拮抗性抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片(すなわち、全長スクレロスチンおよび/またはスクレロスチン断片に結合する拮抗性抗体およびその抗原結合断片を含む直接的または間接的のいずれかでスクレロスチン活性および/または発現を低下させる抗体または抗原結合抗体断片)、ならびに拮抗性小分子(例えばsiRNA、アプタマーならびに無機および/または有機の小分子または化合物)を含み、スクレロスチン活性、シグナル伝達、発現および/または分泌を抑制するために用いられうるならびに、スクレロスチン活性、発現および/または分泌の増加に関連してSCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道もしくは肺のSCC)を診断する、経過を見通す、モニタリングする、治療する、回復させるおよび/または予防するために用いられうる。
好ましい実施形態では、本開示の使用および方法における使用のためのスクレロスチンアンタゴニストは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片である。抗体は、エピトープ(例えばスクレロスチンに見出されるエピトープ)に特異的に結合および認識する免疫グロブリン遺伝子またはその部分由来のフレームワーク領域を含むポリペプチドである。本明細書で用いられる用語「抗体」は、全抗体および任意の抗原結合断片またはその一本鎖を含む。全「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも2本の重(H)鎖および2本の軽(L)鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変(VH)領域および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、3つのドメインCH1、CH2およびCH3からなる。各軽鎖は、軽鎖可変(VL)領域および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、1つのドメインCLからなる。VLおよびVH領域は、フレームワーク領域(FR)と呼ばれるより保存された領域内に散在する相補性決定領域(CDR)と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分されうる。各VLおよびVHは、アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順番:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で配置される3つのCDRおよび4つのFRからなる。重鎖のCDRは、本明細書でHCDR1、HCDR2およびHCDR3と称される。軽鎖のCDRは、本明細書でLCDR1、LCDR2およびLCDR3と称される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原上のエピトープと相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞(例えばエフェクター細胞)および古典的補体系の第1成分(C1q)を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を調節できる。
用語「抗体」は、単一ドメインン抗体、マキシボディー(maxibodies)、ナノ抗体(nanobodies)、ペプチボディー(Amgen)、ミニ抗体、イントラボディー(intrabodies)、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、v−NARおよびbis−scFvを含む(例えばHollinger & Hudson,Nature Biotechnology,23,9,1126-1136(2005)を参照されたい)。抗体の抗原結合断片は、III型フィブロネクチン(Fn3)などのポリペプチドに基づくスキャホールドに移植されうる(フィブロネクチンポリペプチドモノボディーを記載している米国特許第6,703,199号を参照されたい)。本開示の方法における使用のための抗体およびその抗原結合断片の種々種類の詳細は、WO09047356において見出されうる。
「抗体」の定義内に同様に含まれるのは、一本鎖抗体である。Fv断片の2つのドメインVLおよびVHは別々の遺伝子にコードされているが、それらをVLおよびVH領域の対が一価の分子(一本鎖Fv(scFv)として周知、例えばBirdら、1988 Science 242:423-426およびHustonら、1988 Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883を参照されたい)を形成する単一のタンパク質鎖とすることができる合成リンカーによって組換え法を用いてそれらは結合されうる。そのような一本鎖抗体が用語抗体の「抗原結合領域」内に包含されることも意図される。一本鎖抗体は、抗体可変領域を単独で、または次のポリペプチド成分、ヒンジ領域、抗体分子のCH1、CH2およびCH3ドメインの全てまたは部分との組合せでも含みうる。
「抗体」の定義に同様に含まれるのは、抗体の抗原結合断片である。抗体の抗原結合機能が全長抗体の断片によって実施されうることが示されている。したがって「抗原結合断片」は、抗原(例えばスクレロスチンの抗原)に特異的に結合する能力を保持している抗体の1つまたは複数の断片を意味する。抗原結合断片は、これだけに限らないが、例えば、Fab、Fab’およびF(ab’)2、Fd、一本鎖Fvs(scFv)、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Fvs(sdFv)ならびにVLまたはVHドメインのいずれかを含む断片を含む。例は、(i)Fab断片、VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価断片、(ii)F(ab’)2断片、ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された2つのFab断片を含む二価断片、(iii)VHおよびCH1ドメインからなるFd断片、(iv)抗体の単一腕のVLおよびVHドメインからなるFv断片、(v)VHドメインからなるdAb断片(Wardら、Nature 341:544-546,1989、Muyldermansら、TIBS 24:230-235,2001)、ならびに(vi)単離された相補性決定領域(CDR)を含む。「抗体」の定義内に同様に含まれるのは、可変領域ならびにヒンジ領域CH1、CH2、およびCH3ドメインの任意の組合せである。抗原結合断片は、相補的軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合領域の対を形成する縦列Fvセグメント(VH−CH1−VH−CH1)の対を含む一本鎖分子に組み込まれうる(Zapataら、Protein Eng.8(10):1057-1062(1995)および米国特許第5,641,870号)。抗体断片は、当業者に周知の従来技術を用いて得られ、断片は全抗体と同じ方法で抗原結合能力についてスクリーニングされる。
抗体が種々の翻訳後修飾を受ける場合があることは、当業者に理解される。これらの修飾の種類および程度は、タンパク質を発現するために用いられる宿主細胞株および培養条件にしばしば依存する。そのような修飾は、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペリジン形成、アスパラギン酸異性化およびアスパラギン脱アミドにおける変種を含みうる。高頻度の修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用によるカルボキシ末端塩基性残基(リシンまたはアルギニンなど)の欠損である(Harris,RJ.Journal of Chromatography 705:129-134,1995に記載のとおり)。下の表1は、カルボキシ末端リシンを保持しているまたは放棄する場合がある本開示の使用、方法およびキットにおける使用のための抗体を示す。
抗体定常領域は、種々のアイソタイプのものであってよい。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体のクラス(例えばIgM、IgE、IgG(IgG1、IgG4またはIgG2など))を意味する。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは、IgG1、IgG4またはIgG2アイソタイプの抗スクレロスチン抗体である。
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、単一分子組成の抗体分子の調製物由来の抗体分子を意味する。したがってモノクローナル抗体は、具体的なエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは、モノクローナル抗スクレロスチン抗体である。
本開示のキメラまたはヒト化抗体は、本明細書に記載の抗体および抗体断片の配列(例えば表1を参照されたい)を用いる当技術分野において認識される技術を用いて調製されうる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードしているDNAは、目的のマウス融合細胞から得ることができ、標準的分子生物学技術を用いて非マウス(例えばヒト)免疫グロブリン配列を含有するように操作されうる。例えばキメラ抗体を作製するためにマウス可変領域は、当技術分野において周知の方法(例えばCabillyらへの米国特許第4,816,567号を参照されたい)を用いてヒト定常領域に連結されうる。ヒト化抗体を作製するためにマウスCDR領域は、当技術分野において周知の方法を用いてヒトフレームワークに挿入されうる。例えばWinterへの米国特許第5,225,539号およびQueenらへの米国特許第5,530,101号、第5,585,089号、第5,693,762号および第6,180,370号を参照されたい。本開示の方法および使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストはキメラまたはヒト化抗スクレロスチン抗体である。
本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、フレームワーク領域およびCDR領域の両方がヒト由来の配列由来である可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらに抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もそのようなヒト配列(例えばヒト生殖系列配列もしくはヒト生殖系列配列の変異バージョンまたはKnappikら(2000.J Mol Biol 296,57-86)に記載のヒトフレームワーク配列分析由来の定常フレームワーク配列を含有する抗体)由来である。本開示の方法における使用のためのヒト抗体は、ヒト配列によってコードされていないアミノ酸残基を含みうる(例えばin vitroランダムもしくは部位特異的な変異誘発によってまたはin vivo体細胞変異によって導入された変異)。しかし、本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種生殖系列由来のCDR配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図せず、これらは代わりに「キメラ」抗体および/または「ヒト化」ヒト化抗体と称される。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストはヒト抗体である。
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、単一の結合特性を示し、フレームワークおよびCDR領域の両方がヒト配列由来である可変領域を有する抗体を意味する。一実施形態ではヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する遺伝子導入非ヒト動物(例えば遺伝子導入マウス)から得られるB細胞を含む融合細胞によって産生される。そのような動物は、企業Medarex and Kirnから入手可能である。別の実施形態ではヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有する遺伝子導入マウスによって産生される。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストはヒトモノクローナル抗体である。
本明細書で用いられる用語「組換えヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子についての遺伝子導入もしくは染色体導入である動物(例えばマウス)またはそれから調製される融合細胞から単離される抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から(例えば形質移入体から)単離される抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体および、ヒト免疫グロブリン遺伝子の全体または部分の配列から他のDNA配列へのスプライシングに関する任意の他の手段によって調製、発現、作製または単離される抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製または単離される全てのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびCDR領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を有する。しかし特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、in vitro変異誘発(またはヒトIg配列についての遺伝子導入の動物が用いられる場合はin vivo体細胞変異誘発)に供されることができ、したがって組換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列VHおよびVL配列に由来するおよび関するがin vivoヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然では存在しない場合がある配列である。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは組換えヒト抗体である。
本明細書で用いられる「スクレロスチンポリペプチドに特異的に結合する」抗体は、スクレロスチンポリペプチドに約1×10−8M以下、約1×10−9M以下または約1×10−10M以下のKDで結合する抗体を意味すると意図される。「スクレロスチン以外の抗原と交差反応する」抗体(または同様のもの)は、抗原に約0.5×10−8M以下、約5×10−9M以下または約2×10−9M以下のKDで結合する抗体を意味すると意図される。「特定の抗原と交差反応しない」抗体(または同様のもの)は、特定の抗原に約1.5×10−8M以上のKDでまたは約5×10−8Mから約10×10−8Mの間のまたは約1×10−7M以上のKDで結合する抗体を意味すると意図される。特定の抗原と交差反応しない抗体は、標準的結合アッセイにおいて特定の抗原に対する顕著な結合の欠失を示す。本開示の方法および使用の特定の実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンに特異的に結合する。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンに特異的に結合し、スクレロスチン以外の抗原に交差反応しない。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンに特異的に結合し、ダン(Dan)またはグレムリン(Gremlin)に交差反応しない。
本開示の方法、組成物、使用およびキットのいくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体はスクレロスチンへの結合に関して抗体1、2、3、4または5と競合する。競合する抗体は、典型的には同じエピトープを認識する。したがって例えば本開示の方法、組成物、使用およびキットのいくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体は、抗体1、2、3、4または5によって結合されるのと同じエピトープに結合する。抗体1、2、3、4および5によって結合されるスクレロスチンエピトープは、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるUS7758858、US7381409、US7578999、WO05003158、WO06119062、WO06119107、WO08115732およびUS7744874に例えば記載されている。
数値xに関連する用語「約」は、例えば+/−10%を意味する。
数値に関連して本明細書で用いられる「有意」は統計的有意を意味する。
本明細書で用いられる「細胞に基づくWntシグナル伝達アッセイ」は、細胞(例えばHEK293)に基づくスーパートップフラッシュ(super top flash)(STF)アッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイは、WO09047356により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では、スクレロスチンの存在下でHEK293細胞株における細胞に基づくWntシグナル伝達アッセイにおける測定で抗体は約1μM未満、好ましくは約100nM未満およびより好ましくは約20nM未満のIC50を有する。
一実施形態では、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗スクレロスチン抗体は、in vitro骨石灰化のスクレロスチン阻害を逆行させる能力を有する。関連する実施形態ではそれらは、Wnt−1調節シグナル伝達経路のスクレロスチン阻害を逆行させる能力を有する。別の関連する実施形態では、それらはスクレロスチンLRP6結合を破壊し、スクレロスチンが高用量でBMP誘導Smad1リン酸化に有する阻害効果を遮断できる。
スクレロスチンは、HEK293細胞においてSTF(スーパートップフラッシュ、基準Wntシグナル伝達レポーター読み取り)のWnt1調節活性化を阻害する。いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、高度に再現性のある方法でWntシグナル伝達レポーター読み取りを回復させる。
非造骨性細胞でのWntシグナル伝達レポーターアッセイにおけるスクレロスチン作用への本開示による抗体の観察された阻害効果は、in vivoでのスクレロスチン阻害による骨形成応答の誘導に変換されることが示されている。実際に老齢げっ歯類でのin vivo実験は、本開示による抗体が強い骨同化作用を促進することを示す。骨量増加は、非常に高い同化量の副甲状腺ホルモン(陽性対照として用いられた)での連日間歇治療での効果レベルに達した。したがって、別の実施形態により、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、低pM範囲(好ましくは約100pM以下、好ましくは約50pM以下、好ましくは約10pM以下、より好ましくは約1pM以下)でスクレロスチンに対する親和性を有し、約10nM付近のIC50でwntシグナル伝達へのスクレロスチンの影響を阻害する。
本明細書で用いられる「BMP2誘導石灰化アッセイ」は、細胞に基づくアッセイにおいて(例えばMC3T3細胞において)スクレロスチンの存在下でBMP2誘導石灰化の回復を測定するアッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイはWO09047356により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では抗体は、スクレロスチンの存在下でMC3T3細胞でのBMP2誘導石灰化アッセイにおける測定で約1μM未満、好ましくは約500nM未満およびより好ましくは約200nM未満のIC50を有する。
本明細書で用いられる「Smad1リン酸化アッセイ」は、細胞に基づくアッセイにおいて(例えばMC3T3−E1細胞において)スクレロスチンの存在下でBMP6誘導Smad1リン酸化の回復を測定するアッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイはWO09047356により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では抗体は、スクレロスチンの存在下でMC3T3−E1細胞株でのBMP6 Smad1リン酸化アッセイにおける測定で約1μM未満、好ましくは約500nM未満、好ましくは約200nM未満のIC50を有する。
本明細書で用いられる「LRP6/スクレロスチンELISA」は、スクレロスチンとLRP−6との相互作用を測定するために用いられるELISAアッセイを意味することが意図される。そのようなアッセイはWO09047356により詳細に記載されている。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用の特定の実施形態では抗体は、LRP6/スクレロスチンELISAにおける測定で約1μM未満、好ましくは約100nM未満、より好ましくは約10nM未満(例えば約6nM)、より好ましくは約5nM未満、より好ましくは約3nM未満のIC50を有する。本開示の方法および使用の特定の実施形態では抗体は、LRP6/スクレロスチンELISAにおいて約5.8nM、約6.0nM、約6.5nM、約7.0nM、約9.6nM、約10.6nM、約12.1nMまたは約19.4nMのIC50を有する。
当技術分野において周知の方法および本明細書に記載により決定される、1つまたは複数のスクレロスチン機能特性(例えば上に記載のとおり、生化学的、免疫化学的、細胞性、生理的または他の生物学的活性など、例えばBMP−2誘導石灰化)を「阻害」する抗体は、抗体の非存在下で(または無関係な特異性の対照抗体が存在する場合に)観察されるものと比較した特定の活性における統計的に有意な減少と関連することは理解される。スクレロスチン活性を阻害する抗体は、測定されるパラメーターの少なくとも10%、少なくとも50%、80%または90%の統計的に有意な減少などの効果を及ぼし、特定の実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられる抗体は、スクレロスチン機能活性を95%、98%または99%より大きく阻害できる。
本明細書で用いられる用語「Kassoc」または「Ka」は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を意味することが意図され、一方、本明細書で用いられる用語「Kdis」または「KD」は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を意味することが意図される。本明細書で用いられる用語「KD」は、KdのKaに対する比(すなわちKd/Ka)から得られ、モル濃度(M)として表される解離速度を意味することが意図される。抗体についてのKD値は当技術分野において確立された方法を用いて決定されうる。抗体のKDを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴法を用いることによる、またはBiacore(登録商標)系、KinExAに基づく系、Electrochemiluminescene(BioVeris)、溶液平衡滴定、受容体結合阻害効力アッセイなどのバイオセンサー系を用いることによる。これらのアッセイはWO09047356、WO06119107およびUS7744874に詳細に記載されている。
本明細書で用いられる「親和性」は、単一抗原部位での抗体と抗原との間の相互作用の強さを意味する。各抗原部位において抗体「腕」の可変領域は、弱い非共有結合力を通じて抗原と多数の部位で相互作用し、相互作用が多いほど親和性は強くなる。
本明細書で用いられる「結合力」は、抗体−抗原複合体の全体的安定性または強さの有益な測定値を意味する。それは、3つの主な因子:抗体親和性、抗原および抗体の両方の結合価ならびに相互作用部分の構造的配置によって調節される。最終的にはこれらの因子が、正確な抗原エピトープに具体的な抗体が結合する可能性である抗体の特異性を定義する。
本明細書で用いられるIgG抗体についての「高親和性」は、標的抗原に対して約10−8M以下、約10−9M以下または約10−10M以下のKDを有する抗体を意味する。しかし「高親和性」結合は他の抗体アイソタイプについて変化する場合がある。例えばIgMアイソタイプについての「高親和性」結合は、約10−7M以下または約10−8M以下のKDを有する抗体を意味する。本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用のいくつかの実施形態では、スクレロスチンアンタゴニストは、高親和性抗スクレロスチン抗体である。
いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、表面プラズモン共鳴法による測定で約10nM、約1nM未満、約100pM未満、約50pM未満または約25pM未満、例えば約15〜25pM、例えば約21pM+/−4pMのKDを有する。いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、WO06119107の実施例10に記載のとおりKinExAに基づく測定実験における測定で約0.5から約10pM、例えば約0.6pM、約1pM、約3pM、約4pMまたは約6pMのKDを有する。いくつかの実施形態では本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための抗体は、US7744874の実施例3に記載のとおりKinExAに基づく測定実験における測定で約0.2から約2.5pM、例えば約0.3pM、約0.6pM、約2.2pMのKDを有する。
種々のスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるWO09047356、WO2000/32773、WO2006102070、US20080227138、US20100028335、US20030229041、WO2005003158、WO2009039175、WO2009079471、WO03106657、WO2006119062、WO08115732、WO2005/014650、WO2005/003158、WO2006/119107、WO2008/061013、WO2008/133722、WO2008/115732、US7592429、US7879322、US7744874において開示されている。これらの参考文献において開示される任意の(またはいくつかの)スクレロスチンアンタゴニストは、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられうる。本開示の方法および使用において用いられうるさらなる抗スクレロスチン抗体は、AMG167およびAMG785(Amgen)(例えばPadhiら(2011)J.Bone Miner.Res.26:19-26を参照されたい)として周知のものならびにOminskyら(2010)J.Bone Min. Res (Epub Dec.2)、Liら(2010)J.Bone Miner.Res.25:2371-80、Liら(2009)J.Bone Miner Res.24:578-88、Ominskyら(2010)J. Bone Miner Res.25:948-59において見出されるものを含む。いくつかの実施形態では本開示の方法および使用における使用のための抗スクレロスチン抗体は、WO2006/119062、WO2005014650またはWO2005003158またはWO09047356に記載のスクレロスチンのエピトープに結合する。
本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用における使用のための好ましい抗スクレロスチン抗体およびその抗原結合断片は、WO09047356(US7879322に相当)、WO06119107(US7872106およびUS7592429に相当)ならびにWO08115732(US7744874に相当)において見出され、例えば、
本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられる抗体がスクレロスチンに結合できることおよび抗原結合特異性が主にCDR1、2および3領域によって与えられることを考慮すると、各抗体は他の抗スクレロスチン抗体を作製するためにHCDR1、HCDR2およびHCDR3ならびにLCDR1、LCDR2およびLCDR3を含有するが、VH CDR1、2および3配列ならびにVL CDR1、2および3配列は「混合および対応」されるうる(つまり異なる抗体由来のCDRが混合および対応されうる)。そのような「混合および対応」された抗体のスクレロスチン結合は、WO2009/047356に記載の結合アッセイを用いて検査されうる。VH CDR配列が混合および対応される場合、具体的なVH配列由来のHCDR1、HCDR2および/またはHCDR3配列は、構造的に類似のCDR配列(複数可)で置き換えられるべきである。同様にVL CDR配列が混合および対応される場合、具体的なVL配列由来のLCDR1、LCDR2および/またはLCDR3配列は、構造的に類似のCDR配列(複数可)で置き換えられるべきである。新規VHおよびVL配列が、1つまたは複数のVHおよび/またはVL CDR領域配列を、本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用において用いられうるモノクローナル抗体に関して本明細書に示す(例えば表1)CDR配列由来の構造的に類似の配列で置換することによって作製されうることは当業者に容易に明らかである。
本開示の方法、医薬組成物、キットおよび使用での使用のために特に好ましい抗体は、WO09047356(その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる)に記載の抗スクレロスチン抗体である。一実施形態では本開示の方法および使用における使用のための抗スクレロスチン抗体は、WO09047356において見出され、本明細書において「抗体1」と称される(表1を参照されたい)。抗体1は、アミノ酸配列番号4を含むVHドメインおよびアミノ酸配列番号5を含むVLドメインを有する。本開示において有用な他の抗スクレロスチン抗体は、抗体1由来の1個または複数個(1、2、3、4、5または6個)のCDRを含みうる。重鎖中のCDRは、配列番号6〜8である。軽鎖中のCDRは、配列番号9〜11である。抗体1VH CDRは、VHフレームワーク領域(例えばVHヒトフレームワーク領域)と共に発現される場合があり、抗体1 VL CDRは、VLフレームワーク領域(例えばVLヒトフレームワーク領域)と共に発現される場合があり、抗体1 VHおよびVL CDRは、VHおよびVLフレームワーク領域(例えばVHおよびVLヒトフレームワーク領域)と共に発現される場合があり(例えばヒトまたはヒト化)、ならびに抗体1可変ドメインは配列番号2および3として発現されうる。
本明細書で開示されるのは、不適当なおよび/または過剰なスクレロスチン活性によって調節される腫瘍およびがんにおいてスクレロスチン発現および/または機能を阻害することによって腫瘍増殖に影響を与える(例えば遅延させる、体積を低下させる、逆行させる、改善させるなど)ための方法、使用およびキットである。好ましい実施形態では不適当なおよび/または過剰なスクレロスチン活性によって調節されるがんは、SCCである。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、スクレロスチンアンタゴニストは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴法またはバイオセンサー系による測定で10nM未満のKDでヒトスクレロスチンに結合する、スクレロスチンの存在下でHEK293細胞株での細胞に基づくWntシグナル伝達アッセイにおける測定で1μM未満のIC50を有する、スクレロスチン存在下でMC3T3細胞でのBMP2誘導石灰化アッセイにおける測定で1μM未満のIC50を有する、LRP6/スクレロスチンELISAでの測定で1μM未満のIC50を有する、および/またはスクレロスチン存在下でMC3T3−E1細胞株でのBMP6 Smad1リン酸化アッセイにおける測定で1μM未満のIC50を有する。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号4に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号5に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号4に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号5に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号4に記載のアミノ酸配列の3つの相補性決定領域(CDR)および配列番号5に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
さらなる実施形態では配列番号4に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号6、配列番号7および配列番号8に記載されている。さらなる実施形態では配列番号5に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号9、配列番号10および配列番号11に記載されている。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号14に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号15に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号14に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号15に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号14に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号15に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
さらなる実施形態では配列番号14に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号16、配列番号17および配列番号18に記載されている。さらなる実施形態では配列番号15に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号19、配列番号20および配列番号21に記載されている。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号25に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号25に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号24に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号25に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
さらなる実施形態では配列番号24に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号26、配列番号27および配列番号28に記載されている。さらなる実施形態では配列番号25に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号29、配列番号30および配列番号31に記載されている。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号34に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号35に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号34に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号35に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号34に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号35に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、からなる群から選択される。
さらなる実施形態では配列番号34に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号36、配列番号37および配列番号38に記載されている。さらなる実施形態では配列番号35に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号39、配列番号40および配列番号41に記載されている。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、配列番号44に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号45に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、配列番号44に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号45に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または配列番号44に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号45に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片からなる群から選択される。
さらなる実施形態では配列番号44に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号46、配列番号47および配列番号48に記載されている。さらなる実施形態では配列番号45に記載のアミノ酸配列の3つのCDRは、配列番号49、配列番号50および配列番号51に記載されている。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、抗スクレロスチン抗体である。本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。上の方法および使用のいくつかでは、抗スクレロスチン抗体はモノクローナル抗スクレロスチン抗体またはヒト組換え抗スクレロスチン抗体である。本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体は、IgG1、IgG2またはIgG4アイソタイプのものである。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片は、抗体の抗原結合断片である。本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、抗原結合断片は、F(ab’)2、Fab、Fab’、Fv、FcまたはFd断片を含む。
医薬組成物
本開示の治療方法または使用の実施において、治療有効量の少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)をSCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道または肺のSCC)を有する患者、例えば哺乳動物(例えばヒト)に投与する。
本開示の治療方法または使用の実施において、治療有効量の少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)をSCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道または肺のSCC)を有する患者、例えば哺乳動物(例えばヒト)に投与する。
スクレロスチンアンタゴニスト(例えば、抗体1、2、3、4または5などの抗スクレロスチン抗体)は、本開示の方法および使用により単独でまたは他の薬剤(例えば1つまたは複数の追加的薬剤)および療法との組合せ(例えば追加的化学療法剤および化学療法計画との組合せで、または追加的スクレロスチンアンタゴニストとの組合せでなど)で投与されうる。1つまたは複数の薬剤と同時投与される場合、スクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)は、他の薬剤と同時に、または連続的にのいずれかで投与されうる。連続的に投与される場合、担当医は、他の薬剤との組合せで投与するスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)の適切な順序を決定する。本開示のスクレロスチンアンタゴニストとの組合せでの使用のための追加的薬剤は、例えば、白金、タキサン、EGFR−i(EGFR変異化LC)、セツキシマブ(EGFR増幅LC)、放射線/白金組合せ、放射線/セツキシマブ組合せ、5−FU、アントラサイクリン、ビンフルニン、REOLYSIN(登録商標)、カルボプラチン、パクリタキセル、ベバシツマブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、エルロチニブ、ペメトレキセド、ソラフェニブ、モテサニブ、セジラニブ、エトポシド、デクスラゾキサン、G−CSF、PEG−フィルグラスチン、メスナ、ロイコボリン、ミファムルチド、エンドスター、エベロリムス、ソラフェニブ、ビスホスホネート(例えばゾレドロン酸)、フィギツムマブ、セツキシマブ、シロリムス、ラパマイシン、Affinitor(登録商標)、テムシロリムス、インターフェロンアルファ(2aまたは2b、ペグ化および非ペグ化形態を含む、)、パミドロネート、チオテパ、レキシンG、L−MTP−PE、グルカルピダーゼ、サルグラモスチム、ベバシズマブ、Nimotuzumab、ドセタキセル、5−フルオロウラシル、ロスバスタチン、トキソテール、アザシチジン、スリンダク、API31510、ZD1839、リバビリン、セレコキシブ、Pazopanib(GW786034)、ARQ510、パニツムマブ、ロミデプシン、ゲムシチビン、OncoLar、ペメトレキセド、トラベクテジン、LY2523355、VM4−037、MLN8237、ジロートン、モテキサフィンガドリニウム、メトトレキサート、シスプラチン、トラスツズマブ、ドキソルビシン、イホスファミド、VEGF受容体阻害物質(AZD2171)、シクロホスファミド、ビンクリスチン、トポテクタン、IGF受容体アンタゴニスト(例えば19D12[SCH 717454])、MEK1/2阻害物質(例えばAZD6244)、プロテオソーム阻害物質(例えばボルテゾミブ)、BCL−2阻害物質(例えばABT−263)、オーロラAキナーゼ阻害物質(例えばMLN8237)、ヒストン脱アセチル化酵素阻害物質(例えばボリノスタット)、EGFRおよびERBB2の阻害物質(例えばラピチニブ)、スニチニブ、リポソーマルムラミルトリペプチドホスファチジルエタノールアミン(L−MTP−PE)、イホスファミドおよびこれらの組合せを含む。
治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)を経口で投与する場合、結合剤は錠剤、カプセル、粉剤、液剤またはエリキシル剤の形態である。錠剤形態で投与される場合、本開示の医薬組成物は、ゼラチンなどの固形担体またはアジュバントを追加的に含有できる。液剤形態で投与される場合、水、石油、ピーナッツ油(ピーナッツアレルギーに関する注意を喚起する)、鉱物油、大豆油もしくはゴマ油などの動物もしくは植物由来の油または合成油などの液体担体を添加しうる。医薬組成物の液体形態は、生理食塩水、ブドウ糖もしくは他の糖類溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールなどのグリコールなどの成分をさらに含みうる。
治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体)を静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する場合、スクレロスチンアンタゴニストは発熱物質不含有で非経口に許容される溶液の形態である。静脈内、皮膚または皮下注射のための医薬組成物は、スクレロスチンアンタゴニストに加えて塩化ナトリウム、リンゲル、ブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは当技術分野において周知の他のビヒクルなどの等張ビヒクルを含有しうる。
本開示の方法における使用のための医薬組成物は、従来法で製造されうる。一実施形態では医薬組成物は、好ましくは凍結乾燥形態で提供される。迅速な投与のために、好適な水性担体、例えば注射用滅菌水または滅菌緩衝生理食塩水に溶解させる。ボーラス注入よりも点滴による投与のためのより多量の溶液を作製することが望ましいと考えられる場合、製剤時にヒト血清アルブミンまたは患者自身のヘパリン処置血液を食塩水に加えることが有利である場合がある。そのような生理学的に不活性なタンパク質の過剰な存在は、輸液溶液と共に用いられる容器およびチューブの壁への吸着による抗体の損失を予防する。アルブミンが用いられる場合好適な濃度は、重量で生理食塩水の約0.5から約4.5%である。他の製剤は液体製剤または凍結乾燥製剤を含む。
適切な用量は、当然ながら、例えば用いられる具体的なスクレロスチンアンタゴニスト、宿主、投与の様式ならびに治療される状態の性質および重症度、ならびに患者が受けた先行する治療の性質に応じて変化する。最終的には担当医が個々の対象を治療するためのスクレロスチンアンタゴニストの量を決定する。いくつかの実施形態では担当医は、スクレロスチンアンタゴニストの低用量を投与し、対象の応答を観察する場合もある。他の実施形態では、対象に投与されるスクレロスチンアンタゴニストの初期用量(複数可)は高く、次いで再発の徴候が生じるまで漸減しうる。対象に最適な治療効果が得られるまでスクレロスチンアンタゴニストのより高用量を投与することができ、一般的にはその時点では用量はさらには増量しない。
スクレロスチンアンタゴニストは、非経口、静脈内(例えば前腕前部または他の末梢静脈に)、筋肉内または皮下に好都合に投与される。本開示の医薬組成物を用いる静脈内(i.v.)療法の期間は、治療される疾患の重症度ならびに個々の患者の状態および個別の応答に応じて変化する。同様に考慮されるのは、本開示の医薬組成物を用いる皮下(s.c.)療法である。担当医は、本開示の医薬組成物を用いるi.vまたはs.c.療法の適切な期間および治療投与の時期を決定する。
満足のいく結果(治療、予防、症状の発症の遅延など)は、体重1キログラムあたり約0.05mgから約30mg、通例では体重1キログラムあたり約0.1mgから約20mgの用量で得られると一般に示される。投与の頻度は、約1日1回から約3カ月ごとに1回までの範囲内、例えば約2週間ごとに1回から約12週間ごとに1回、例えば4から8週間ごとに1回でありうる。投与頻度は、とりわけ治療計画の局面に依存する。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体用量は、約1mg/kgから約500mg/kg、または約10mg/kgから約400mg/kg、または約100mg/kgから約350mg/kg、または約200mg/kgから約300mg/kgでありうる。
一般に抗体は複数回投与される。単回投与間の間隔は、例えば1週間ごと、1カ月ごと、3カ月ごと、または1年ごとであってもよい。間隔は、患者における標的抗原に対する抗体の血中レベルを測定することによって示される不定期であってもよい。いくつかの方法では用量は、約1から約1000μg/mlおよびいくつかの方法では約25から300μg/mlの血漿抗体濃度を達成するために調節される。
代替的に抗体は、徐放性放出製剤として投与される場合があり、その場合は低頻度投与が必要である。用量および頻度は患者における抗体の半減期に応じて変化する。一般にヒト抗体は最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体が続く。ペグ化技術は、抗体半減期を増加させるために用いられうる。投与の用量および頻度は、治療が予防的であるかまたは治療的であるかどうかに応じて変化する場合がある。予防的適用の場合、比較的低い用量が比較的低頻度の間隔で長期間にわたって投与される。いくらかの患者は彼らの生涯にわたって治療を受け続ける。治療的適用の場合、比較的高い用量が比較的短い間隔で疾患の進行が低下するもしくは終結するまでまたは患者が疾患の症状の部分的もしくは完全な回復を示すまで時には必要とされる。その後、患者は予防的計画を投与されうる。
本開示の医薬組成物における活性成分の実際の用量レベルは、具体的な患者、組成物および投与様式について(患者に毒性となることなく)望ましい治療応答を達成するために有効である活性成分の量を得るために変更される場合がある。選択された用量レベルは、用いられる本開示の具体的な組成物もしくはそのエステル、塩、アミドの活性、投与の経路、投与の時期、用いられる具体的な化合物の排出速度、治療期間、用いられる具体的な組成物との組合せで用いられる他の薬、化合物および/または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全身状態および先行する医療歴ならびに医学分野において十分に周知の因子を含む種々の薬物動態的因子に依存する。
いくつかの抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1、2、3、4または5について、用量は約5mg/kgから約300mg/kg、または約10mg/kgから約200mg/kg、または約20mg/kgから約100mg/kg、または約30mg/kgから約50mg/kgであってよい。好ましい実施形態では抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1は、約20mg/kgで投与されうる。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1、2、3、4または5は、約0.1、約0.3、約1、約3、約5もしくは約10mg/kgで皮下に、または約1もしくは約5mg/kgで静脈内に投与される。いくつかの実施形態では抗スクレロスチン抗体、、例えば抗体1、2、3、4または5は、毎日、1週間に2回、毎週、隔週、1カ月ごと、隔月、年4回、6カ月ごとまたは1年ごとに投与される。いくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体は、例えば抗体1、2、3、4または5は、単回で(すなわち1回だけ)または複数回投与される。
「mg/kg」は、治療される患者の体重1kgあたりの薬mgを意味する。
一実施形態では1年間にわたって患者に与えられる抗スクレロスチン抗体の総用量は、約500mgから約50,000mgまたは約1000mgから約10,000mgである場合がある。
いくつかの方法、医薬組成物、キットおよび使用では、2つ以上の抗スクレロスチン抗体、例えば同じまたは異なる結合特異性を有する(例えば同じエピトープに結合するが異なる結合親和性を有するまたは異なるエピトープに結合する)が同時にまたは連続的に(追加的薬剤を含んでまたは含まずに)投与され、そのような場合、投与される各抗体の用量は示された範囲内にある。
本開示の方法、使用およびキットのいくつかでは、スクレロスチンアンタゴニストは、白金、タキサン、EGFR−i(EGFR変異LC)、セツキシマブ(EGFR増幅LC)、5−FU、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも1つの追加的薬剤(例えば化学療法剤)と共に投与される。
診断方法
本開示は、扁平上皮亜型の腫瘍のサブセット、特に肺、食道および上部気道消化管のがんにおけるスクレロスチンの著しい過発現の発見に部分的に基づく。そのようにスクレロスチン発現の量(例えばスクレロスチンタンパク質、スクレロスチンmRNAレベル)は、SCCの発症についてのマーカーとしておよびSCC患者がスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗体1、2、3、4もしくは5などの抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片)での治療に好都合に応答する可能性のマーカーとして用いられうる。
本開示は、扁平上皮亜型の腫瘍のサブセット、特に肺、食道および上部気道消化管のがんにおけるスクレロスチンの著しい過発現の発見に部分的に基づく。そのようにスクレロスチン発現の量(例えばスクレロスチンタンパク質、スクレロスチンmRNAレベル)は、SCCの発症についてのマーカーとしておよびSCC患者がスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗体1、2、3、4もしくは5などの抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片)での治療に好都合に応答する可能性のマーカーとして用いられうる。
したがって本明細書で開示されるのは、a)SCCを有する患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびb)前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、スクレロスチンアンタゴニストでの治療にSCCを有する患者が応答する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、SCCを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)患者から生物学的検査試料を得るステップ、およびb)前記患者由来の前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がSCCを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がSCCを発症する可能性を予測する方法である。
追加的に本明細書で開示されるのは、患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がSCCを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がSCCを発症する可能性を予測する方法である。
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、スクレロスチン発現の量は、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブの使用によって測定される。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、抗スクレロスチン抗体である。
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はSCCを発症していないことが判っている対照患者から得られる。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はSCCを有さない患者の組織由来である。
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
本開示の予測方法のいくつかの実施形態ではSCCは、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部に生じる。本開示の予測方法のいくつかの実施形態では、SCCは上部気道消化管、食道、尿路または肺に生じる。本開示の予測方法のいくつかの実施形態ではSCCは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔に生じる。予測方法のいくつかの実施形態ではSCCは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔に生じる。
キットおよび製造品
本明細書で開示されるのは、SCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道もしくは肺のSCC)を治療するおよび/またはSCCを有する患者がスクレロスチンでの治療に応答する可能性を予測するおよび/または患者がSCCを発症する可能性を予測するために有用なキット(すなわち製造品)でもある。そのようなキットは、少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体、例えば、抗体1、2、3、4もしくは5、好ましくは抗体1)または少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1)を含む医薬組成物を含みうる。そのようなキットは、スクレロスチアンタゴニストを投与するための手段(例えばシリンジ、自動注入装置または充填型ペン)および使用のための説明書を含んでもよい。これらのキットは、SCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道または肺のSCC)を治療するための、封入されたスクレロスチアンタゴニスト(複数可)(例えば抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1、2、3、4もしくは5、好ましくは抗体1)との組合せでの送達のための追加的治療剤を含有してもよい。
本明細書で開示されるのは、SCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道もしくは肺のSCC)を治療するおよび/またはSCCを有する患者がスクレロスチンでの治療に応答する可能性を予測するおよび/または患者がSCCを発症する可能性を予測するために有用なキット(すなわち製造品)でもある。そのようなキットは、少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体、例えば、抗体1、2、3、4もしくは5、好ましくは抗体1)または少なくとも1つのスクレロスチンアンタゴニスト(例えば抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1)を含む医薬組成物を含みうる。そのようなキットは、スクレロスチアンタゴニストを投与するための手段(例えばシリンジ、自動注入装置または充填型ペン)および使用のための説明書を含んでもよい。これらのキットは、SCC(例えば上部気道消化管、尿路、食道または肺のSCC)を治療するための、封入されたスクレロスチアンタゴニスト(複数可)(例えば抗スクレロスチン抗体、例えば抗体1、2、3、4もしくは5、好ましくは抗体1)との組合せでの送達のための追加的治療剤を含有してもよい。
したがって、本明細書で提供されるのは、a)治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、b)任意選択で、前記スクレロスチンアンタゴニストをSCCを有する患者に投与するための手段、c)任意選択で、白金、タキサン、EGFR−i、セツキシマブ、5−FU、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも1つの追加的薬剤、ならびにd)前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書を含む、SCCを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、b)SCCを有する患者由来の生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量を検出できる少なくとも1つのプローブ、c)任意選択で、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための手段、ならびにd)対照検査試料におけるスクレロスチン発現の量と比較して前記患者由来の前記生物学的検査試料がより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書を含む、SCCを有する患者を治療するのに使用するためのキットである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブ、およびb)SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、スクレロスチンアンタゴニストでのSCCの治療に前記患者が応答する可能性の増大を示す説明書を含む、SCCを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
追加的に本明細書で開示されるのは、a)スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブ、およびb)患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がSCCを発症する可能性の増大を示す説明書を含む、患者がSCCを発症する可能性を予測するのに使用するためのキットである。
本開示のキットのいくつかの実施形態では、スクレロスチン発現の量は、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブの使用によって測定される。本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、抗スクレロスチン抗体である。
本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、SCCを発症していないことが判っている対照患者から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料はSCCを有さない患者の組織由来である。
本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的対照試料は、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る。本開示のキットのいくつかの実施形態では、生物学的検査試料は、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る。
本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する。本開示のキットのいくつかの実施形態では、少なくとも1つのプローブは、抗スクレロスチン抗体である。
本開示のキットのいくつかの実施形態ではSCCは、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部に生じる。本開示の方法キットのいくつかの実施形態では、SCCは上部気道消化管、食道、尿路または肺に生じる。本開示のキットのいくつかの実施形態ではSCCは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔に生じる。本開示のキットのいくつかの実施形態ではSCCは、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔に生じる。
全ての特許、公開された特許出願、刊行物、参考文献および本開示において参照される他の資料は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施例
実施例
発現データ生成および統合
発現データは、Novartis、NCBI GEO、EBI ArrayExpressおよび追加的供給源からのAffymetrix U133plus2データを統合するOncExpressデータベースを用いて生成および分析された。全ての試料についてのデータを全ての試料にわたって一貫した方法でAffymetrix MAS5アルゴリズムに供した。試料を150の2%トリム平均に標準化した。試料アノテーションを、原発部位および組織像についてのアノテーションの階層的レベルを含むCOSMICオントロジーに確認するために行った。
発現データは、Novartis、NCBI GEO、EBI ArrayExpressおよび追加的供給源からのAffymetrix U133plus2データを統合するOncExpressデータベースを用いて生成および分析された。全ての試料についてのデータを全ての試料にわたって一貫した方法でAffymetrix MAS5アルゴリズムに供した。試料を150の2%トリム平均に標準化した。試料アノテーションを、原発部位および組織像についてのアノテーションの階層的レベルを含むCOSMICオントロジーに確認するために行った。
原発ヒト腫瘍異種移植片から得られたデータは、次の方法で生成された、腫瘍標本は、1時間未満の虚血時間で外科的切除の際に患者から1%ペニシリン/ストレプトマイシンを補充したRPMI中に回収した。壊死性組織を含まない15〜30mm3の断片をイソフルラン麻酔下の6〜8週齢メスヌードマウスの肩甲骨間の脂肪パッドの皮下へ移植した。マウスは、特定の病原体を含まない動物舎で維持し、Novartis Animal Care and Use Committeeプロトコールおよび規則に従って扱った。異種移植片は、移植の2から8カ月後に移植部位に出現した。次に、妥当で安定した増殖速度が達成されるまで腫瘍が700〜800mm3に達した時点でそれらをマウスからマウスに移植した。50%FBSおよび10%DMSOを補充したRPMI中の凍結保存物をマウスにおける連続継代の際に生成し、異種移植片モデルの良好な確立を確実にするために検査した。
患者および各継代時の異種移植片由来の30〜50mg断片を遺伝子発現プロファイリング、コピー数および変異の分析のために急速凍結した。良好に移植された各異種移植片モデルの断片150mgも回収し、組織学的分析に供した。確立された腫瘍異種移植片モデルを4回継代後にin vivo研究のためにさらに用いた。遺伝子発現プロファイリングのために全RNAをアフィニティーレジン(QIAGEN RNeasy Mini Kit;QIAGEN AG)を用いて単離した。RNA完全性および純度をBioanalyzer 2100(Agilent Technologies)のRNA 6000 Nano LabChip systemで評価した。
SOSTの発現分析
データをSOST(probe set 223869_at)に関するOncexpressから抽出し、以下の分類に分けた、
次の「原発部位」のヒト扁平上皮がん原発腫瘍(「組織学的亜型1」=「扁平上皮がん」によって定義される)
・肺扁平上皮がん
・食道扁平上皮がん
・上部気道消化管扁平上皮がん
・尿路扁平上皮がん
データをSOST(probe set 223869_at)に関するOncexpressから抽出し、以下の分類に分けた、
次の「原発部位」のヒト扁平上皮がん原発腫瘍(「組織学的亜型1」=「扁平上皮がん」によって定義される)
・肺扁平上皮がん
・食道扁平上皮がん
・上部気道消化管扁平上皮がん
・尿路扁平上皮がん
上部気道消化管(原発部位)群で表されるのは、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔由来の試料であり(亜型1)、さらなる亜型(亜型2)は、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔において見出される。
ヒト非扁平上皮原発腫瘍
・全ての原発部位での全ての入手可能なヒト非扁平上皮原発腫瘍
正常ヒト組織
・肺
・食道
・上部気道消化管
・尿路
マウスで継代した原発ヒト腫瘍異種移植片
・肺扁平上皮がん
・全ての非扁平上皮腫瘍
他の扁平細胞異種移植片原発部位は1つより多い試料を入手できなかった。
これらの分類にわたるSOSTの発現を表2に要約する。
ヒト非扁平上皮原発腫瘍
・全ての原発部位での全ての入手可能なヒト非扁平上皮原発腫瘍
正常ヒト組織
・肺
・食道
・上部気道消化管
・尿路
マウスで継代した原発ヒト腫瘍異種移植片
・肺扁平上皮がん
・全ての非扁平上皮腫瘍
他の扁平細胞異種移植片原発部位は1つより多い試料を入手できなかった。
これらの分類にわたるSOSTの発現を表2に要約する。
扁平上皮がん(SCC)における潜在的標的としてのSOSTの好適性を評価するために、上記分類1〜4のそれぞれにおけるSOSTの発現を分類5に対して、および対応原発部位の分類6〜9に対しても算出した。統計的有意差を等分散的両側t検定を用いて対数変換発現値について評価した、p値<0.05を有意とした。結果を倍数変化として表3に要約する。
発現研究からの結論
1)扁平上皮腫瘍の4つの原発部位(肺、食道、上部気道消化管、尿路)それぞれについて、SOST発現は非扁平上皮腫瘍よりも有意に高い。
2)扁平上皮原発腫瘍(肺、食道、上部気道消化管、尿路)の4つの原発部位の内3つについて、SOST発現はそれぞれの正常組織よりも有意に高い。尿路扁平上皮がんは、正常尿路組織よりも6.8倍高いSOST発現を有するが、この結果はおそらく小さな試料サイズのため有意ではない。
3)肺原発扁平上皮がん異種移植片モデル(1つより多い試料が入手可能である唯一の扁平上皮異種移植片モデル)は、検査された回収物における全ての他の原発異種移植片モデルに対して高度に(および有意に)上昇したSOST発現を示す。これは、ヒト原発(非異種移植片)腫瘍における発見を確認し、扁平上皮肺腫瘍におけるWnt特徴(SOST上方制御を含む)を記載する近年の文献報告と一致する(Huら、2011,PLoS One,6(10),e25807)。
1)扁平上皮腫瘍の4つの原発部位(肺、食道、上部気道消化管、尿路)それぞれについて、SOST発現は非扁平上皮腫瘍よりも有意に高い。
2)扁平上皮原発腫瘍(肺、食道、上部気道消化管、尿路)の4つの原発部位の内3つについて、SOST発現はそれぞれの正常組織よりも有意に高い。尿路扁平上皮がんは、正常尿路組織よりも6.8倍高いSOST発現を有するが、この結果はおそらく小さな試料サイズのため有意ではない。
3)肺原発扁平上皮がん異種移植片モデル(1つより多い試料が入手可能である唯一の扁平上皮異種移植片モデル)は、検査された回収物における全ての他の原発異種移植片モデルに対して高度に(および有意に)上昇したSOST発現を示す。これは、ヒト原発(非異種移植片)腫瘍における発見を確認し、扁平上皮肺腫瘍におけるWnt特徴(SOST上方制御を含む)を記載する近年の文献報告と一致する(Huら、2011,PLoS One,6(10),e25807)。
ヒト腫瘍細胞株のパネルおよび原発腫瘍異種移植片試料におけるSOST発現の評価
SOSTの発現をmRNAおよびタンパク質レベルの両方について細胞株のパネルおよびヒト原発異種移植片試料において評価した。
SOSTの発現をmRNAおよびタンパク質レベルの両方について細胞株のパネルおよびヒト原発異種移植片試料において評価した。
mRNA分析については、全RNAをRNeasy Mini Kit(Qiagen、catalog#74106)を用いて単離し、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Applied Biosystems,Inc.、catalog#4368813)を用いてcDNAに転換した。2X TaqMan Universal PCR Master Mix、Human B2M(ベーター−2−ミクログロブリン)Endogenous ControlおよびHuman Sclerostin primer/probe sets(それぞれApplied Biosystems、catalog#4304437、4310886E、Hs01072801_m1)を含むQPCR反応物10μlあたりcDNA 3μlを用いた。リアルタイムPCRを温度プロファイル:95℃で10分間、95℃で15秒間/60℃で1分間を40サイクルでApplied Biosystems 7900HT Fast Real−Time PCR Systemにおいて実行した。次の方程式:
ΔCT=CT(B2M)−CT(SOST) 相対発現=2−ΔCT
を用いて内在性B2M対照と比較したmRNA発現を決定するために閾値サイクル数を用いた。
ΔCT=CT(B2M)−CT(SOST) 相対発現=2−ΔCT
を用いて内在性B2M対照と比較したmRNA発現を決定するために閾値サイクル数を用いた。
結果を図1に示し、ヒト原発肺異種移植片HLUX1795およびHLUX1726が測定した他の異種移植片および細胞株と比較して最も高い(4〜6倍高い)SOST mRNA発現を有することを示唆している。
スクレロスチン(SOST)タンパク質発現をウエスタンブロッティングによって評価した。凍結原発腫瘍異種移植片または細胞株を、プロテアーゼおよびホスファターゼの阻害剤(それぞれRoche catalog#11836153001および4906837001)を補充したRIPA細胞溶解/タンパク質抽出緩衝液(50mM Tris−HCl、1%TritonX−100、150mM NaCl、10%グリセロール、0.25%デオキシコール酸)で処置した。溶解物を遠心分離で沈殿させ、清澄化抽出物を回収し、BCA ELISA(Pierce Biotechnology、catalog#23227)によって定量した。総タンパク質30μgを還元剤ジチオスレイトールと合わせ、5分間、85℃で熱変性させ、15ウエル、4〜12%Bis−Trisゲルにロードし、MES緩衝液中で55分間、200Vで分離し、0.2μmニトロセルロース膜に10%メタノール中で1.5時間、40Vで移行させた(それぞれInvitrogen、catalog#15508013、#NP0323BOX、NP0002、LC2000)。膜を1時間、室温でOdyssey Buffer(LiCor、catalog#927−40000)でブロックし、HRPコンジュゲート二次抗体(Jackson Immunoresearch、catalog#705−036−147、111−036−045)との1時間、室温でのインキュベーションの前にHuman SOST Affinity Purified Polyclonal Ab、Goat IgG(R&D Systems、catalog#AF1406)でまたはRabbit anti−Actin(Bethyl Laboratories、catalog#A300−485A)で一晩4℃で探索した。次いで膜をSuperSignal West Pico chemiluminescent substrate(Pierce、catalog#34078)中でインキュベートし、フィルムに暴露した(アクチン、10秒間暴露;SOST、5分間)。
結果を図2に表し、タンパク質発現が細胞株LC1sqSFにおいて、ならびにヒト肺原発腫瘍異種移植片HLUX1726、HLUX1644、HLUX1367およびヒト食道原発腫瘍異種移植片HESX2530において観察されたことを示す。
抗SOST抗体のin vivo活性の決定
抗SOST抗体、抗体1の抗腫瘍活性をHLUX1726原発ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて評価した。100%マトリゲル100μl中のHLUX1726腫瘍スラリーをメスヌードマウスへ皮下(s.c.)で移植した。腫瘍が100〜200mm3に達した時点で、HLUX1726腫瘍を保持しているマウス(各群あたりn=6)をビヒクルIgGまたは抗体1(100mg/kg、i.v.、qwまたは20mg/kg、i.v.2qw)で処置した。腫瘍増殖を1週間に2回デジタルノギスを用いて記録した。抗体1で処置した腫瘍は、対照腫瘍と比較して低下した増殖を示し(T/C:40%、図3A)、抗体1処理群と対照群との間の体重における差異によって明らかなとおり処置は十分に許容された(図3B)。
抗SOST抗体、抗体1の抗腫瘍活性をHLUX1726原発ヒト腫瘍異種移植片モデルにおいて評価した。100%マトリゲル100μl中のHLUX1726腫瘍スラリーをメスヌードマウスへ皮下(s.c.)で移植した。腫瘍が100〜200mm3に達した時点で、HLUX1726腫瘍を保持しているマウス(各群あたりn=6)をビヒクルIgGまたは抗体1(100mg/kg、i.v.、qwまたは20mg/kg、i.v.2qw)で処置した。腫瘍増殖を1週間に2回デジタルノギスを用いて記録した。抗体1で処置した腫瘍は、対照腫瘍と比較して低下した増殖を示し(T/C:40%、図3A)、抗体1処理群と対照群との間の体重における差異によって明らかなとおり処置は十分に許容された(図3B)。
HLUX1726腫瘍におけるWntシグナル伝達への抗SOST抗体、抗体1の効果を測定するために、HLUX1726腫瘍を移植されたマウスに単回用量20または100mg/kgの抗体をi.v.投与し、ウエスタンブロットによるリン酸化LRP6(pLRP6)評価のために試料を7および24時間で採取した。試料は、効能研究の完了後、抗体1の最終投与の7および24時間後にも採取した。ウエスタンブロッティングについては、全細胞および原発ヒト腫瘍異種移植片溶解物をRIPA緩衝液(50mM Tris−HCl、pH7.4、150mM NaCl、1%NP−40、0.5%デオキシコール酸ナトリウム、0.1% SDS、1mM EDTA)中に調製した。溶解物をタンパク質濃度について標準化し、SDS−PAGEで分離し、ニトロセルロース膜に移行させ、全LRP6(Cell Signaling Technology、catalog#3395)を添加対照として用いて抗pLRP6抗体(ウサギ抗pS1490、Cell Signaling Technology、catalog#2568)で探索した。結果は図4に示し、抗腫瘍効能研究の最後の最終投与の7もしくは24時間後(上パネル)または抗体の単回投与後(下パネル)に回収されたいずれの場合でも抗体1処置試料においてさらに安定したLRP6のリン酸化を示す。
付加的に抗体1の抗腫瘍効果を、HLUX1644およびLC1sqsfモデルにおいて上に記載したのと同様の条件下で評価した。しかし顕著な抗腫瘍活性は、これらのモデルにおいて観察されなかった。SOSTタンパク質発現のレベルは、HLUX1726モデルと比較してHLUX1644モデルにおいて低く(図2)、このモデルにおける抗体1の効果の欠如を説明できる。付加的に、HLUX1726モデルと比較してLC1sqsf細胞はSOSTタンパク質の同様のレベルを発現したが(図2)、これは原発腫瘍モデルというよりも細胞株であり、効果の欠如は発生経路について以前報告されたようにプラスチック上での増殖に続く経路依存性における変化を反映する可能性があることは注目に値する(例えば、Yauchら、2008,Nature,455,406を参照されたい)。
さらなる研究において抗体1、2、3および4をHLUX1726モデルにおいて評価した。簡潔には、100%マトリゲル100μl中のHLUX1726腫瘍スラリーをメスヌードマウスに皮下(s.c.)で移植した。腫瘍が100〜200mm3に達した時点で、HLUX1726腫瘍を保持しているマウス(各群あたりn=6)をビヒクルIgGまたは抗体1、2、3もしくは4で処置した。しかし、抗体2、3および4の凝集のために、全ての抗体は以前の研究と同じi.v.ではなく100mg/kg、i.p.qwで投与する必要があった。腫瘍増殖は1週間に2回デジタルノギスを用いて記録した。これらの条件下で抗体1での処置は64%のT/Cをもたらし、T/C>90%が抗体2、3または4で観察された。
Claims (56)
- 扁平上皮がん(SCC)を有する患者に治療有効量のスクレロスチンアンタゴニストを投与するステップを含む扁平上皮がんを治療する方法。
- 必要とする患者において扁平上皮がん(SCC)を治療するのに使用するためのスクレロスチンのアンタゴニスト。
- 必要とする患者において扁平上皮がん(SCC)を治療するための薬物の製造のためのスクレロスチンのアンタゴニストの使用。
- a.SCCを有する患者から生物学的検査試料を得るステップ、および
b.前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に応答する可能性の増大を示すステップ
を含む、スクレロスチンアンタゴニストでの治療にSCCを有する患者が応答する可能性を予測する方法。 - SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者がスクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に応答する可能性の増大を示すステップを含む、スクレロスチンアンタゴニストでの治療にSCCを有する患者が応答する可能性を予測する方法。
- a.患者から生物学的検査試料を得るステップ、および
b.前記患者由来の前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者が前記SCCを発症する可能性の増大を示すステップ
を含む、患者がSCCを発症する可能性を予測する方法。 - 患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップであって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者が前記SCCを発症する可能性の増大を示すステップを含む、患者がSCCを発症する可能性を予測する方法。
- a.患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップ、および
b.前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量より多い場合に、前記患者にスクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するステップ
を含む、患者におけるSCCを治療する方法。 - 投与のステップより前に前記患者由来の生物学的対照試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするステップをさらに含む、請求項8に記載の方法。
- a.生物学的検査試料をSCCを有する患者から得る、
b.前記生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、および
c.前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与する
ことを特徴とする、SCCを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニスト。 - a.SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイする、および
b.前記患者由来の前記生物学的検査試料が生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較してより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、治療有効量の前記スクレロスチンアンタゴニストを前記SCC患者に選択的に投与する
ことを特徴とする、SCCを治療するのに使用するためのスクレロスチンアンタゴニスト。 - スクレロスチン発現の量が、スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブの使用によって決定される、請求項4から11のいずれかに記載の方法。
- 前記少なくとも1つのプローブが、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する、請求項12に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのプローブが抗スクレロスチン抗体である、請求項13に記載の方法。
- 前記生物学的対照試料をSCCを発症していないことが判っている対照患者から得る、請求項4から14のいずれかに記載の方法。
- 前記生物学的対照試料が、SCCを有していない前記患者の組織由来である、請求項4から14のいずれかに記載の方法。
- 前記生物学的対照試料を、前記患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る、請求項4から14のいずれかに記載の方法。
- 前記生物学的対照試料を、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る、請求項17に記載の方法。
- 前記生物学的対照試料を、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連(oral commissure)、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝(oral sulcus)、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭(nasopharnyx)、中咽頭(orpharynx)または副鼻腔から得る、請求項18に記載の方法。
- 前記生物学的検査試料を、患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部から得る、請求項4から19のいずれかに記載の方法。
- 前記生物学的検査試料を、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔から得る、請求項20に記載の方法。
- 前記生物学的検査試料を、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔から得る、請求項21に記載の方法。
- a.治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、
b.任意選択で、前記スクレロスチンアンタゴニストをSCCを有する患者に投与するための手段、
c.任意選択で、白金、タキサン、EGFR−i、セツキシマブ、5−FU、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも1つの追加的薬剤、ならびに
d.前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための説明書
を含む、SCCを有する患者を治療するのに使用するためのキット。 - a.治療有効量のスクレロスチンアンタゴニスト、
b.SCCを有する患者由来の生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量を検出できる少なくとも1つのプローブ、
c.任意選択で、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを投与するための手段、および
d.対照検査試料におけるスクレロスチン発現の量と比較して前記患者由来の前記生物学的検査試料がより多いスクレロスチン発現の量を有する場合に、前記患者に前記スクレロスチンアンタゴニストを選択的に投与するための説明書
を含む、SCCを有する患者を治療するのに使用するためのキット。 - a.スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブ、および
b.SCCを有する患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いるステップのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記患者由来の前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記スクレロスチンアンタゴニストでの前記SCCの治療に前記患者が応答する可能性の増大を示す説明書、
を含む、SCCを有する患者がスクレロスチンアンタゴニストでの治療に応答する可能性を予測するのに使用するためのキット。 - 前記少なくとも1つのプローブが、スクレロスチン核酸またはスクレロスチンポリペプチドを検出する、請求項23から25のいずれかに記載のキット。
- 前記少なくとも1つのプローブが抗スクレロスチン抗体である、請求項26に記載のキット。
- 前記SCCが、前記患者の肺、皮膚、口唇、上部気道消化管、尿路、食道、膀胱、前立腺、陰茎、膣または子宮頸部において生じる、前記請求項のいずれかに記載の方法、使用またはキット。
- 前記SCCが、上部気道消化管、食道、尿路または肺において生じる、請求項28に記載の方法、使用またはキット。
- 前記SCCが、頭部もしくは頸部、喉頭、口、咽頭、副鼻腔または鼻腔において生じる、請求項29に記載の方法、使用またはキット。
- 前記SCCが、眼窩、声門、声門下、声門上、歯槽、歯槽堤、頬粘膜、頬、口腔交連、歯肉、口唇、下顎骨、上顎骨、上顎洞、口腔底、口蓋、口腔傍領域、臼歯後隙、口腔溝、舌、扁桃窩、口蓋垂、口腔前庭、喉頭蓋、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭または副鼻腔において生じる、請求項30に記載の方法、使用またはキット。
- 前記スクレロスチンアンタゴニストが、抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片である、前記請求項のいずれかに記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、
a.表面プラズモン共鳴法もしくはバイオセンサー系によって10nM未満として決定されるKDでヒトスクレロスチンに結合する、
b.スクレロスチンの存在下でのHEK293細胞株における細胞に基づくWntシグナル伝達アッセイで1μM未満と測定されるIC50を有する、
c.スクレロスチンの存在下でのMC3T3細胞におけるBMP2誘導石灰化アッセイで1μM未満と測定されるIC50を有する、
d.LRP6/スクレロスチンELISAで1μM未満と測定されるIC50を有する、および/または
e.スクレロスチン存在下でのMC3T3−E1細胞株におけるBMP6 Smad1リン酸化アッセイで1μM未満と測定されるIC50を有する、
請求項32に記載の方法、使用またはキット。 - 前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、
a.配列番号4に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
b.配列番号5に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
c.配列番号4に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号5に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
d.配列番号4に記載のアミノ酸配列の3つの相補性決定領域(CDR)および配列番号5に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項32または33に記載の方法、使用またはキット。 - 配列番号4に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号6、配列番号7および配列番号8に記載されている、請求項34に記載の方法、使用またはキット。
- 配列番号5に記載のアミノ酸配列の前記3つのCDRが、配列番号9、配列番号10および配列番号11に記載されている、請求項34または35に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、
a.配列番号14に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
b.配列番号15に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
c.配列番号14に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号15に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
d.配列番号14に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号15に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項32または33に記載の方法、使用またはキット。 - 配列番号14に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号16、配列番号17および配列番号18に記載されている、請求項37に記載の方法、使用またはキット。
- 配列番号15に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号19、配列番号20および配列番号21に記載されている、請求項37または38に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片が、
a.配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
b.配列番号25に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
c.配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号25に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
d.配列番号24に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号25に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項32または33に記載の方法、使用またはキット。 - 配列番号24に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号26、配列番号27および配列番号28に記載されている、請求項40に記載の方法、使用またはキット。
- 配列番号25に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号29、配列番号30および配列番号31に記載されている、請求項40または41に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片が、
a.配列番号34に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
b.配列番号35に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
c.配列番号34に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号35に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
d.配列番号34に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号35に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項32または33に記載の方法、使用またはキット。 - 配列番号34に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号36、配列番号37および配列番号38に記載されている、請求項43に記載の方法、使用またはキット。
- 配列番号35に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号39、配列番号40および配列番号41に記載されている、請求項43または44に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片が、
a.配列番号44に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
b.配列番号45に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、
c.配列番号44に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号45に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片、または
d.配列番号44に記載のアミノ酸配列の3つのCDRおよび配列番号45に記載のアミノ酸配列の3つのCDRを含む抗スクレロスチン抗体もしくはその抗原結合断片
からなる群から選択される、請求項32または33に記載の方法、使用またはキット。 - 配列番号44に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号46、配列番号47および配列番号48に記載されている、請求項46に記載の方法、使用またはキット。
- 配列番号45に記載のアミノ酸配列の3つのCDRが、配列番号49、配列番号50および配列番号51に記載されている、請求項46または47に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、抗スクレロスチン抗体である、請求項32から47のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項49に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体が、モノクローナル抗スクレロスチン抗体またはヒト組換え抗スクレロスチン抗体である、請求項49から50のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体が、IgG1、IgG2またはIgG4アイソタイプである、請求項49から51のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗スクレロスチン抗体またはその抗原結合断片が、抗体の抗原結合断片である、請求項32から48のいずれか一項に記載の方法、使用またはキット。
- 前記抗原結合断片が、F(ab’)2、Fab、Fab’、Fv、FcまたはFd断片を含む、請求項53に記載の方法、使用またはキット。
- 前記スクレロスチンアンタゴニストが、白金、タキサン、EGFR−i、セツキシマブ、5−FU、アントラサイクリンおよびビンフルニンからなる群から選択される少なくとも1つの追加的薬剤と共に投与される、前記請求項のいずれかに記載の方法、使用またはキット。
- a.スクレロスチンの存在を検出できる少なくとも1つのプローブ、および
b.患者由来の生物学的検査試料をスクレロスチン発現の量についてアッセイするためにプローブを用いることのための説明書であって、生物学的対照試料におけるスクレロスチン発現の量と比較した前記生物学的検査試料におけるスクレロスチン発現の量の増加が、前記患者が前記SCCを発症する可能性の増大を示す説明書、
を含む、患者がSCCを発症する可能性を予測するのに使用するためのキット。
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