JP2014511381A - ケラチノサイトへの結合のための環状ペプチドおよびその結合体 - Google Patents
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Abstract
Description
X1−X2−X3−X4−X5−X6 −X8−X9−X10−X11−Lys−L(配列番号1)
[ここで、
X1は、Ser、Thr、LeuおよびIleからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X2は、ThrおよびSerからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X3はArg、LysおよびHisからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X4はLysおよびArgからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X5はLysおよびArgからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X6はHisおよびLysからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X7はAsp、Glu、Ala、AsnおよびGlnからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X8はGln、Asn、Ala、GluおよびAspからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X9はAla、Gly、Val、LeuおよびIleからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X10はGln、Asn、GluおよびAspからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X11はSerおよびThrからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
Lは、薬剤含有担体粒子に結合するのに適当なリンカー部である。]
を有する。
本明細書で使用する用語「ペプチド」は、隣接するカルボキシル基とアミノ基の間の反応によって形成されるペプチド結合により結合しているアミノ酸残基の配列を示すことを意図する。
本発明の環状ペプチドの態様の一において、X1はSerである。
ペプチド合成
ヘッドトゥテイルで環状化したペプチドを、JPT Peptide Technologies GmbH(Berlin, Germany)による、N−スクシンイミジル−S−アセチルチオールアセテート(SATA)リンカーを用いて、製造者の通常の手法により、Fmoc保護アミノ酸を用いた固相合成法により合成した。ヘッドトゥテイルで環状化したターゲティングペプチドは、H−KHDNAQS−(SATA)KSTRK−OH(RKK12と表記)の配列を、対照ペプチドは、H−KHDNRQS−(SATA)KSTAK−OH(AKK12と表記)の配列を有していた。両方のペプチドは、後にリポソームの表面の末端PEG鎖に結合するのに用いるLys(SATA)基を含んでいた(R.J. Kok et al., Bioconjug. Chem. 13, 2002, pp. 128−135)。
リポソーム製剤は、Bangham et al.(A.D. Bangham et al., J. Mol. Biol. 13, 1965, pp. 238−252)に記載された薄膜法により製造した。簡潔には、DSPC(62mol%)、PEG2000−DSPE(2.5mol%)、Mal−PEG2000−DSPE(2.5mol%)およびコレステロール(33mol%)をクロロホルム:メタノール(9:1 w/w)に溶解した。1ml量のDiD(エタノール中、200μg/ml)を標識目的で添加した。有機溶媒を蒸発させ、脂質フィルムを窒素ガスで5分間フラッシュした。脂質フィルムをHBS−E緩衝液(10mM HEPES、136mM NaClおよび1mM EDTA、pH=7.4)で水和し、最終濃度15mMの脂質に、大きな多重膜小胞(LMV)を形成させた。小さな一枚膜小胞(SUV)を得るために、積み重ねた2つのWhatman(GE Healthcare, Little Chalfont, United Kingdom)の100nmフィルターにLMVを通して、Northern Lipids inc.(Burnaby, BC, Canada)のLiplex押し出し機を用いて10回押し出し、4℃で暗所保存した。
カルシポトリオールで充填したリポソーム製剤は、以下の例外を除き、本質的には上述したように薄膜法により製造した:製剤はDSPC(84mol%)、コーレート(11mol%)、PEG2000−DSPE(2.5mol%)、Mal−PEG2000−DSPE(2.5mol%)および1mol% カルシポトリオールを含有した。脂質フィルムを65℃にて、HBS−Eで1時間水和した。水和脂質分散液は、最終濃度8.5mMの脂質および濃度50μg/ml(0.121mM)のカルシポトリオールを含有した。LMVを2つ積み重ねた200nmフィルター(Whatman)を通して2回押し出し、その後、2枚の100nmフィルターを通して8回押し出した。
リポソームの外部表面の末端PEG鎖のマレイミド基へのペプチドの結合は、以前に記載されているように行った(R.M. Schiffelers et al., J. Control. Release 91, 2003, pp. 115−122)。環状アセチル−保護SATAペプチドを、0.5M HEPES、0.5M ヒドロキシルアミン−HClおよび25mM EDTA(pH7.0)の水溶液中で、30分間室温にて脱アセチル化した。該リポソームを活性化SATA−ペプチドともに、ローラーベンチ上で、4℃で一晩インキュベートした。リポソームを超遠心により、結合していないペプチドから分離した。DiDで標識したリポソームをHBS緩衝液(10mM HEPESおよび136mM NaCl、pH=7.4)で1:9に希釈し、60.000rpmで1時間、4℃で遠心(Beckman LE−80K Ultracentrifuge fixed angle roter Type 70.1 Ti)し、沈殿化させた。沈殿をHBS緩衝液10mlに再懸濁し、再び遠心した。リポソームを、次の実験でのMg2+イオンの枯渇を避けるためにEDTAを含まない、HBS緩衝液で再懸濁した。これはRKKH−結合部位とインテグリン受容体の相互作用にMg2+イオンの存在が重要だからである。カルシポトリオールを含むリポソームをトリス緩衝液(13mM トリス、pH=8.5)で1:3に希釈し、50.000rpm、4℃で1時間遠心して沈殿させた(Beckman L−80 XP−ULTRA fixed angle rotor type 50.2 Ti)。沈殿をトリス緩衝液25mlで再び懸濁し、再び遠心した。トリス緩衝液は、カルシポトリオール含有リポソームのために用いた。これは、カルシポトリオールは、HEPES緩衝液がもたらす低いpHでは安定性が低くなるためである。最終的に、全てのリポソーム分散液を、最終脂質濃度15mMに希釈し、4℃で暗所保存した。結合していないペプチドをWaters(Milford, MA, USA)の、BEH300 C18 カラム、1.7μm、2.1mm x 500mmを用いた超高速液体クロマトグラフィー(UPLC)により検出した。溶出液勾配は、100%のアセトニトリル:水:トリフルオロ酢酸(5:95:0.1、v/v)からアセトニトリル:トリフルオロ酢酸(100:0.1、v/v)で、12分間に設定した。該ペプチドは、210nmの吸光度により検出され、結合ペプチドの量は、全体量のペプチドから結合していないペプチドの量を引くことによって算出した。
リポソーム製剤中のカルシポトリオールの最終濃度は、Sunfire C18, 3.5μm, 150x 4.6mmカラム(Waters)を用いて、アセトニトリル:水(60:40、v/v)を移動相として、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で定量した。検出は264nmで行った。DiD標識したリポソームの最終脂質濃度は、Rouser定量法(G. Rouser et al., Lipids 5, 1970, pp. 494−496)により評価した。簡潔には、約50nmolのリン脂質を180℃に加熱した。液体を完全に蒸発させた後、過塩素酸300μlを添加し、蒸発を防ぐために、mateblesをのせた。サンプルを180℃で45分間インキュベートし、室温に冷却し、水1ml、モリブデン酸0.5mlおよび新しく調製した5%アスコルビン酸0.5mlを添加した。サンプルを100℃の水浴で5分間インキュベートし、室温に冷却し、797nmにおける吸光度を計測した。カルシポトリオール含有リポソームについての、脂質濃度は、以前に記載したように(H. Grohganz et al., AAPS; Pharm. Sci. Tech. 4, 2003, E63)、MTI−Diagnostics Gmbh,(Idstein, Germany)のcolorimetric phospholipids B enzymatic assayを用いて評価した。簡潔には、リポソーム分散液を1:40に希釈し、2.5% Triton X100を添加し、サンプルをTmよりも高温に20分間加熱した。全てのサンプル45μLを、マイクロタイタープレートに移し、比色試薬溶液180μlを添加し、プレートを37℃でインキュベートした。1時間後、490nmでの吸光度を、Perkin Elmer(Waltham, MA, USA)のVICTORTM X3 Multilabel Plate Readerを用いて測定した。
ペプチド−結合リポソームの細胞取り込み
ヒト表皮がん細胞A431を3.7g/l炭酸水素ナトリウムおよび4.5g/lグルコースを含有し、抗菌剤、2mM L−グルタミンおよび7.5%(v/v)ウシ胎児血清を補充した、ダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)中で、5% CO2を含む加湿雰囲気下で継代培養した。ほぼコンフルエントな単層のA431細胞をPBSで洗浄し、細胞をPBS中の1mM トリス−EDTAを用いて剥離した。続いて、細胞を、4℃で、1.26mM CaCl2および0.81mM MgSO4を補充した冷PBSで懸濁した。遠心後、細胞数を数え、100μlの培地中の105個の細胞を、100μlの、1.26mM CaClおよび0.81mM MgSO4を補充したPBSで希釈したリポソーム、様々な濃度のDiD−標識リポソーム(全脂質、10〜200nmol)、RKK12−結合リポソーム(RKK12−リポソーム)またはAKK12−結合リポソーム(AKK12−リポソーム)とともに1時間4℃でインキュベートした。
カルシポトリオールを充填したペプチド−結合リポソームとケラチノサイトの相互作用
ヒト成人表皮ケラチノサイト(HEKa)はCascade Biologics(Portland, OR, USA)より入手し、ヒトケラチノサイト増殖補助栄養剤およびゲンタマイシン/アンフォテリシンB(Cascade Biologics)を含有するEpiLife培地(Cascade Biologics)中で、37℃にて、5% CO2を含む加湿雰囲気下で培養した。細胞相互作用アッセイについて、2x105個の指数関数的に増殖するケラチノサイトを処理の1日前に播種した。次の日、(80%コンフルエント)、培地を交換し、細胞培養培地にウェル中のカルシポトリオールの最終濃度が10−7Mになるように、リポソーム懸濁液15μl、プラシーボリポソーム懸濁液15μl、または最終濃度10−7Mになるように、0.1% DMSO中のカルシポトリオール溶液を加え、37℃で1時間インキュベートした。リポソームはRKK12−ペプチドまたはAKK12−ペプチドのどちらかと結合させた。1時間後、細胞を、1% BSAを添加したPBSで3回洗浄し、培地1.5mlを添加して、24時間37℃で培養した。続いて、培地を除き、mRNAをQuiagen(Hilden, Germany)の、RNeasy kitを用いて抽出した。80ng量のRNAをApplied Biosystems(Foster City, CA, USA)のHigh−Capacity cDNA Reverse Transcription kitを用いて、cDNAに翻訳した。cDNAを、製造者のプロトコールにしたがって、3つ組みで増幅させた(Applied Biosystems, カテリシジン抗菌ペプチド(CAMP)Hs00189038_m1およびGAPDH Hs99999905_m1)。CAMPの発現レベルは、ハウスキーピング遺伝子のグリセリアルデヒド−3−リン酸脱水素酵素(GAPDH)の発現レベルで基準化した。CAMPの発現の相対的な変化を、比較CT法(2−ΔΔCt)(K.J. LivakおよびT.D. Schmittgen, Methods 25, 2001, pp. 402−408)を用いて定量した。
カルシポトリオールを含有する、ペプチド−結合リポソームのUV−B照射インテグリンα2β1トランスジェニックマウス(α1β2 transgenic mice)における試験
動物
α2β1インテグリン受容体を、インボルクリンプロモーターの調節下で発現する、ダブルトランスジェニックマウスを、上記非特許文献9で示すように、C57/Bl6をバックグラウンドとして作製した。動物実験は、上記非特許文献10で述べたものと同様の条件下で行った。動物は、Taconic Europe, Denmarkの特定病原菌除去(SPF)施設で繁殖させ、LEO Pharma, Ballerup, DenmarkのSPF施設に移動させた。マウスは実験を始める3週間前に気候順応させた。全てのマウスは、実験の開始時点で、16〜30週齢であった。全ての動物実験は、デンマーク法務省、動物実験検査官の承認を得ている。
0日目、齢および性別を合わせた群のマウスを100mg/kgケタラールで麻酔し、背中の毛を剃り、UV−B 2J/cmで照射した。その後、マウスに0.05mg/kgのTemgesicを投与し、痛みから解放した。実験の間を通じて、マウスをモニターした。動物のうち、最初の体重から20%以上体重が減ったものも、傷が大きくなったものもいなかった。従って、早めて安楽死をさせたマウスはいなかった。UV−B照射からの回復は、照射した領域の紅斑および落屑について毎日評価した。
7日目に、マウスをイソフランにより安楽死させ、2つの8mm組織標本を 照射領域から採取した。組織標本の1つは、4%ホルマリンで固定し、脱水し、パラフィン封入し、無作為に3μmで切片をつくり、マッソントリクローム染色し、皮膚組織と表皮組織を明確に分離した。組織切片は、顕微鏡観察により評価し、Nikon ECLIPSE E400 顕微鏡に接続したOlympus DP71カメラを用いて4倍の倍率で、各切片の写真を撮った。表皮の平均の厚さを、表皮表面長によってわけられた表皮領域として、Visiopharm Integrator System(VIS)プログラム(Visiopharm, Horsholm, Denmark)を用いて、算出した。もう一つの組織標本は、液体N2で急冷し、サイトカイン発現の解析に用いた。
組織標本を、プロテアーゼ阻害剤を加えた、Cell Signaling Technology Inc.(Danvers, MA, USA)の細胞溶解緩衝液 300μl中で、Precellys(登録商標)組織ホモジナイザーをCryolys cooling(Bertin Technologies, Montigny−le−Bretonneux, France)とともに用いて、ホモジナイズした。標本は30分間氷上に静置し、15,000xgで15分間遠心して、可溶化液を除いた。蛋白質濃度は、BCA Protein Assay kit(Pierce Biotechnology, Rockford, IL, US)を製造者の手順書にしたがって用いて、定量した。可溶化液を、−80℃で保存した。インターフェロンガンマ(IFN−γ)、IL−1β、IL−2、IL−4、IL−5、ケラチノサイト由来ケモカイン(KC)(ヒトIL−8のホモログ)、IL−10、IL−12および腫瘍壊死因子アルファ(TNF−α)の具体的なレベルを、MULTI−SPOT assay system、mouse TH1/TH2 9−plex assay(Meso scale discovery, Gaithersburg, MD, US)を製造者の手順書にしたがって用い、決定した。
リポソーム製剤は、50μg/mlカルシポトリオールを用いて調製され、実施例1で述べたような特徴をもつ。インテグリンα2β1受容体を標的とする様々なリガンドを、リポソーム表面に結合させた。全ての製剤は、84mol%DSPC、5mol% PEG−DSPCおよび11mol%コーレートを含有した。最終製剤は全て、13mMトリス、pH=8.5中の、50μg/ml濃度のカルシポトリオールを含むリポソーム懸濁剤であった。20μl量の該製剤を、1日目、UV−B照射の18時間後から、1日2回、7日間投与した。
全てのデータは平均±SD(各群に8〜9匹のマウス)で表される。結果の統計的有意さは、エクセルで、変動が等しいと仮定して2つの変動を比較するt−検定を用いて評価した(p<0.05を有意とみなした)。
UV−B照射からの治癒を、顕微鏡的に、毎日紅斑と落屑を点数化(0−なし、1−わずか、2−中程度、3−顕著、4−非常に顕著)することで評価した。wtマウスはUV−B照射から、水疱を発生させて回復したが、このことは4日目の、落屑のピークに反映されている。水疱は、約5〜6日後にはじけ、その後、目立った紅斑が生じた。インテグリンα2β1トランスジェニックマウスでは、落屑を伴う紅斑がよりはやく増加し、水疱ができるものはなかった。7日目、インテグリンα2β1トランスジェニックマウスでは、境界の決まった紅斑を伴う肥厚した鱗片様(scalp−like)の病変が形成されたが、これは臨床的には乾癬に似た表現型である。wtマウスでは、同様の病変は見られず、病変ではより紅斑が見られ、鱗変(scalp)は全く観察されなかった。インテグリンα2β1トランスジェニックマウスの肉眼での評価は、乾癬のモデルとしてのトランスジェニックマウスに適合するものである。
皮膚のサイトカインレベルを評価すると、照射したマウスでは、照射していないマウスに比べ、炎症促進性のサイトカインIL−1β、IL−12、KCおよびTNF−αレベルの有意な上昇が観察された。IL−1βおよびKCのレベルは、UV−B照射したインテグリンα2β1トランスジェニックマウスでは、UV−B 照射したwtマウスに比べ、有意に減少していた(t−検定、p<0.05)。IL−10が減少しているという傾向もまた見られたが、インテグリンα2β1トランスジェニックマウスとwtの差異は有意なものではなかった(t−検定、p=0.1)。以前、IL−10レベルの減少が、通常の創傷治癒と乾癬を区別しているということが示唆されていた(B.J. Nickoloff et al., J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 11(1), 2006, pp. 16−29)。全体的に見て、サイトカインレベルの減少により、インテグリンα2β1トランスジェニックマウスでは、wtマウスに比べて、UV−B照射への炎症応答が変化していることは確認されたが、これがヒト尋常性乾癬における不均衡なサイトカインレベルと類似しているかどうかは確かではない。
様々なカルシポトリオール含有リポソーム製剤を、インテグリンα2β1トランスジェニックマウスで試験した。処理を受けたインテグリンα2β1トランスジェニックマウスと処理を受けていないトランスジェニックマウスで、統計的に有意な差は見られなかったが、カルシポトリオール処理は、IL−10のレベルに影響を与える傾向にある(図7)。UV−Bを照射し、カルシポトリオールを充填したRKK12−ペプチド結合リポソーム処理したマウスからの組織標本では、未処理のマウス、プラシーボRKK12−ペプチド結合リポソームまたはカルシポトリオールを充填したAKK12−ペプチド結合リポソームで処理したマウス由来の組織標本に比べて、IL−10レベルの上昇が見られた。
Claims (32)
- コラーゲン結合インテグリン受容体のサブグループの、インテグリン受容体α2Iドメインに特異的に結合できる環状ペプチドであって、アミノ酸配列
X1−X2−X3−X4−X5−X6− X8−X9−X10−X11−Lys−L(配列番号:1)
[ここで、
X1はSer、Thr、LeuおよびIleからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X2はThrおよびSerからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X3はArg、LysおよびHisからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X4はLysおよびArgからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X5はLysおよびArgからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X6はHisおよびLysからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X7はAsp、Glu、Ala、AsnおよびGlnからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X8はGln、Asn、Ala、GluおよびAspからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X9はAla、Gly、Val、LeuおよびIleからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X10はGln、Asn、GluおよびAspからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
X11はSerおよびThrからなる群より選択されるアミノ酸残基であり;
Lは薬剤含有担体粒子を結合するのに適したリンカー部である。]
を有する、ペプチド。 - X1がSerである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X2がThrである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X3がArgである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X4がLysである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X5がLysである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X6がHisである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X7がAspである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X8がAsnである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X9がAlaである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X10がGlnである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- X11がSerである、請求項1に記載の環状ペプチド。
- 請求項1〜12のいずれかに記載の環状ペプチドであって、
Ser−Thr−Arg−Lys−Lys−His−Asp−Asn−Ala−Gln−Ser−Lys−L(配列番号: 2)
で、Lが上で定義したとおりである、アミノ酸配列を有する環状ペプチド。 - LがS−スクシンイミジル−S−チオアセテート(SATA)、N−ヒドロキシスクシンイミジル3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート(SPDP)、SATP、SAT−PEO4−Acまたはカルボジイミド(例えば、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド)である、
請求項1〜13のいずれかに記載の環状ペプチド。 - インテグリンα2β1受容体のα2Iドメインに特異的に結合できる、請求項1〜14のいずれかに記載の環状ペプチド。
- 請求項1〜15のいずれかに記載の環状ペプチドと、リンカー部Lに結合した、薬剤含有担体粒子とを含む結合体。
- リンカー部がSATA、SPDP、SATPまたはSAT−PEO4−Ac カルボジイミド(例えば1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド)である、請求項16に記載の結合体。
- 薬剤含有担体粒子がリポソーム、ニオソーム、トランスファーソーム、高分子ナノ粒子または脂質ナノ粒子である、請求項16または17に記載の結合体。
- リポソームが、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、大豆ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、コレステロールまたはコーレートのうち、1つ以上の脂質を含む、請求項18に記載の結合体。
- リポソームに含まれる少なくとも1つの脂質が、リポソームに結合するPEG基を含んでいる、請求項19に記載の結合体。
- 高分子ナノ粒子が、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(ε−カプロラクトン)、ポリビニルアルコール、ポリ(メタクリル酸メチル)、ポリジメチルシロキサンまたはキトサンのうち、1つ以上を含む、請求項18に記載の結合体。
- 担体粒子に含有されている薬剤が、ビタミンD類似体、コルチコステロイド、カルシニューリン阻害剤、PDE4阻害剤、p38 MAPキナーゼ阻害剤、JAK阻害剤、ヒスタミン受容体アンタゴニスト、インゲノール−3−アンゲレートまたは天然起源もしくは合成ヌクレオチド、例えばsiRNA、miRNA、LNAもしくはPNAである、請求項19〜21のいずれかに記載の結合体。
- ビタミンD類似体が、カルシポトリオールである、請求項22に記載の結合体。
- 治療剤が、インテグリンα1β1、α2β1、α10β1およびα11β1受容体を含むコラーゲン結合インテグリン受容体のサブグループのインテグリン受容体を表面に発現している細胞を標的とする、請求項19〜23のいずれかに記載の結合体。
- 細胞がケラチノサイトである、請求項24に記載の結合体。
- 皮膚疾患または症状の処置に用いるための、請求項16〜25のいずれかに記載の結合体。
- 皮膚疾患または症状が、皮膚炎症疾患または障害、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、ざ瘡、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性皮膚炎、スキンバリア欠損障害、例えばネザートン症候群、創傷、疣贅、日光角化症または皮膚がん、例えば基底細胞がんもしくは扁平上皮がんである、請求項26に記載の結合体。
- 請求項16〜23のいずれかに記載の結合体と、薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
- 皮膚疾患または症状を処置するための請求項28に記載の組成物。
- 皮膚疾患または症状が、皮膚炎症疾患または障害、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、ざ瘡、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性皮膚炎、スキンバリア欠損障害、例えばネザートン症候群、創傷、疣贅、日光角化症または皮膚がん、例えば基底細胞がんもしくは扁平上皮がんである、請求項29に記載の結合体。
- 皮膚疾患や症状を処置する方法であって、必要としている患者に、請求項16〜23のいずれかに記載の結合体を有効量投与することを含む、方法。
- 皮膚疾患または症状が皮膚炎症疾患または障害、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、ざ瘡、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性皮膚炎、スキンバリア欠損障害、例えばネザートン症候群、創傷、疣贅、日光角化症または皮膚がん、例えば基底細胞がんもしくは扁平上皮がんである、請求項31に記載の方法。
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