JP2014508579A - 飲食物容器の過酢酸蒸気滅菌 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
この方法は、過酸化水素開始剤の非存在下で実施されるのが好ましく、特にポリエチレンテレフタレートボトルの滅菌に適している。
蒸発装置の作製
様々な温度および濃度における蒸気滅菌剤を調製するために、以下の蒸発装置が作製された。直径1/2インチのステンレス鋼管は、100psigの圧縮空気供給機に接続された。管は、(気流を調整するための)ステンレス鋼製ニードル弁に接続され、この弁は、キング・モデル7910シリーズ ガラス管ロータメータ(0−40標準リットル/分)風量計に接続された。風量計は、(過酢酸溶液の沸点を優に上回る)300°Fまで空気を加熱する機能を備えた電熱器に接続され、この電熱器は、蒸発ボックスに接続された。これは、ステンレス鋼製容器であり、過酢酸溶液の導入および蒸発を観察するためのガラス窓を上部に有する。蒸発ボックスは、熱損失を最小限にするために5つの面で断熱された。蒸発ボックスの底部は、バイオメガ・リサーチ・プロダクツ社の実験用加熱板の上に設置された。この加熱板は、PAA溶液の沸点を優に上回る温度まで蒸発ボックスの底部を加熱することが可能である。
飲料用ボトル中のバチルス・アトロフェーアスATCC9372に対する過酢酸蒸気(約60℃、約5および10秒間)の有効性評価
上記の蒸発装置は、B.アトロフェーアスATCC9372(飲料加工の検認試験において滅菌試験生物として通常用いられる芽胞形成バクテリア)の芽胞に対する過酢酸(PAA)蒸気の有効性評価に使用された。PET水ボトルの底面は、調製バチルス・アトロフェーアス芽胞懸濁液を105芽胞/ボトルとなるように接種された。接種して乾燥したボトルは、クラリティー(Clarity、登録商標)過酢酸(FMC社製)を適当に希釈して製造された様々な濃度のPAA溶液の蒸気に、約60℃で5および10秒間曝され、蒸気の放出時に5秒間の紫外線(過酸化水素活性剤)による処理が有りの場合と無しの場合が行われた。ボトルが計数され、好気性プレートカウント(「APC」)培地上に接種された。残りの培養液は、増殖確認のために以下に詳述するように培養された。
調製B.アトロフェーアス芽胞懸濁液は、プレスク・アイル・カルチャーズより購入した。溶液は、40%エタノールを含有し、試験時まで実験用冷蔵庫に保管された。懸濁液は、1.3x1010コロニー形成単位(CFU)/mLの芽胞を含有していた。希釈液が40%エタノールにより各試験用に調整され、PAAが4,300ppmの試験では約1x106芽胞/mL(目標値1x104芽胞/ボトル)の芽胞を含有し、2014ppmおよび7947ppmの試験では約1x107芽胞/mL(目標値1x105芽胞/ボトル)の芽胞を含有し、試験における接種材料とされた。
市販のPET水ボトル(0.5L.)は、内面を殺菌するため、空にされて無水エタノールでリンスされ、生物学的安全キャビネット内で一晩乾かされた。次に、ボトルは、10μLの適切な接種材料を内側の底面上に作業培地とともに接種された。その後、ボトルは生物学的安全キャビネット内で乾燥するまで一晩乾かされた。接種済みのボトルは、調整から1週間以内に試験に用いられた。
接種済みのボトルは、蒸発装置に隣接したドラフトチャンバ内にある蒸気輸送管の末端上に設置され、ラボタイマーによる時間測定で約5および10秒間の間、蒸気に曝された。蒸気輸送管から取り外された後すぐに、レセーン+0.5%チオ硫酸ナトリウムを含有する50mLの中和培養液が無菌法にてボトルに注がれた。側面上で液化したすべての蒸気が中和剤と確実に混合するように、ボトルは蓋をされて振られた。続いて、ボトルは5分間ソニケートされ、ボルテックスで30秒間攪拌された後、バターフィールド緩衝液で希釈され、APC培地上に接種された。中和培養液入りのすべての試験ボトル、およびすべてのプレートは、予備測定前に35±2℃で約24時間培養され、最終測定のためにさらに数日〜2週間培養された。試験は1回だけ行われた。接種材料の対照群については、接種済みで未処理のボトルを上記のように計数して、2回実施された。培養が終了次第、ボトルは濁度により増殖を評価された。この試験の結果を以下の表1および2にまとめる。
残留試験
実施例1で説明した蒸発装置を用いて試験が行われ、滅菌されたボトルの表面上に残留した過酸化水素の量が測定された。PETボトル(0.5L.)は、空にされ、純水で3回リンスされた後、約4,000および14,000ppmの濃度のPAA蒸気に5秒間曝された。この処理の後、ボトルは純水で満たされ、水は低レベルの過酸化水素についてラモットHP−40滴定キットを用いて試験された。蒸気中に放出されたPAAの量についても試験が行われた。このために、高範囲PAA試験紙は予め純水で湿らされ、接種されていない代表ボトルに設置された。ボトルは蒸気に曝され、試験紙は蒸気中に存在するPAAを示す色の変化について評価された。これらの試験の結果を以下の表3および4にまとめる。
蒸気相のPAA濃度が2000、3000、および4000ppmの時のバチルス・サブティリスの防除評価
実施例1で説明した装置および方法を用い、クラリティー(登録商標)過酢酸を純水で下記のように希釈して、PAA濃度が2000ppm、3000ppm、および4000ppmであるPAA溶液の蒸気が調整された。この試験は、接種済みボトルをPAA蒸気に約60℃で5秒間曝し、5秒間の紫外線処理が有る場合と無い場合の処理に関するものだった。
調製B.サブティリス19659芽胞懸濁液は、プレスク・アイル・カルチャーズより購入した。溶液は、40%エタノールを含有し、試験時まで冷蔵庫に保管された。懸濁液は、1.6x1010CFU/mLの芽胞を含有していた。希釈液が40%エタノールにより各試験用に調整され、約1x108芽胞/mL(目標値1x106芽胞/ボトル)となるようにして、試験における接種材料とされた。
市販のPET水ボトル(0.5L)は、空にされ、10μLの適切な接種材料を内側の底面上に作業培地とともに接種された。その後、ボトルは一晩乾かされた。
クラリティー(登録商標)過酢酸(FMC社製)は、自動滴定装置を用いて滴定され、初期濃度が測定された。この初期濃度は、PAAの純水溶液のための希釈液を決定し、調整するのに用いられた。11.85gのクラリティー(登録商標)過酢酸と1Lの水から2000ppmの溶液を、17.77gのクラリティー(登録商標)過酢酸と1Lの純水から3000ppmの溶液を、そして23.70gのクラリティー(登録商標)過酢酸と1Lの純水から4000ppmの溶液を得ることで、分取した殺生物剤が調整された。各溶液のうち少量は自動滴定装置での滴定用に取り置かれ、残りは蒸発装置のシリンダーに注がれた。この滴定の結果を表5に示す。
実施例1で説明した装置および方法を用い、接種済みのボトルはPAA溶液の蒸気で処理された。蒸気輸送管から取り外された後すぐに、ボトルは5秒間保持されるか、または紫外線で5秒間処理された。この工程の後すぐに、レセーン+0.5%チオ硫酸ナトリウムを含有する50mLの中和培養液が無菌法にてボトルに注がれた。側面上で液化した蒸気が中和剤と確実に混合するように、ボトルは蓋をされて振られた。続いて、ボトルは5分間ソニケートされ、ボルテックスで30秒間攪拌された後、バターフィールド緩衝液で希釈され、APC培地上に接種された。中和培養液入りのすべての試験ボトル、およびすべてのプレートは、予備測定前に35±2℃で約24〜72時間培養され、最終測定のためにさらに数日〜2週間培養された。試験は2回行われた。接種材料の対照群についても、接種済みで未処理のボトルを上記のように計数して、2回実施された。培養が終了次第、ボトルは濁度により増殖を評価された。
Log10減少=平均Log10(対照群)−Log10(試験試料)
5秒間処理した飲料用ボトルにおけるバチルス・サブティリスATCC19659に対し、約50、55、および60℃において、4000ppmのPAAと比較した35%過酸化水素蒸気の有効性評価
実施例1で説明した装置および方法を使用し(但し、以下の記載を除く)、B.サブティリス19659の芽胞を用いて、50、55、および60℃で5秒間暴露させた飲料用PETボトルにおいて、4000ppmの蒸気相過酢酸(PAA)と比較した濃縮(約35%)蒸気相過酸化水素の有効性を評価した
調製B.サブティリス19659芽胞懸濁液は、プレスク・アイル・カルチャーズより購入した。溶液は、40%エタノールを含有し、1.6x1010CFU/mLの芽胞を含んでいた。約1x108芽胞/mLとなるように1:100希釈液が40%エタノールにより調整され、本実施例の作業接種材料とされた。
この試験では、市販の飲料用PETボトル(0.5L)が使用された。ボトルは、1.6x106芽胞/ボトルとなるように、10μLの芽胞接種材料を内側の底面上に作業培地とともに接種された。その後、ボトルは生物学的安全キャビネット内で一晩乾かされた。ボトルは、試験前に乾燥しているのが観察された。
ヴィゴロックス(VigorOx、登録商標)SP−15過酢酸(FMC社製)は、自動滴定装置を用いて滴定され、初期濃度は15.2929%であると測定された。この初期濃度は、4000ppmのPAA純水溶液のための希釈液を決定し、調整するのに用いられた。比較として、デュロックス(Durox、登録商標)過酸化水素(過酸化水素35.7%を含有、FMC社製)の試料ボトルが用いられた。
実施例1で説明した蒸発装置を用いて、指定温度の製剤が調整された。接種済みのボトルは、蒸気輸送管の末端上に設置され、ラボタイマーによる時間測定で約5秒間の間、蒸気に曝された。蒸気輸送管から取り外された後すぐに、レセーン+0.5%チオ硫酸ナトリウムを含有する50mLの中和培養液が無菌法にてボトルに注がれた。次に、分取した100uLずつのカタラーゼ(ワージントン・バイオケミカル、85.583部/mgPおよび0.48mgP/mL)が、すべての残留過酸化水素を中和するために各ボトルに添加された。側面上で液化したすべての蒸気が中和剤と確実に混合するように、ボトルは蓋をされて振られた。ボトルは5分間ソニケートされ、ボルテックスで30秒間攪拌された後、バターフィールド緩衝液で希釈され、APCペトリフィルム培地上に接種された。中和培養液入りのすべての試験ボトル、およびすべてのプレートは、35±2℃で約72時間培養された後、培養器から取り出され、さらに24時間室温に置かれた後、計数された。試験は2回行われた。接種材料の対照群についても、接種済みで未処理のボトルを上記のように計数して、2回実施された。
Log10減少=平均Log10(対照群)−Log10(試験試料)
Claims (10)
- 約57〜約75℃において少なくとも約3500ppmの濃度で過酢酸を含有する蒸気により表面を処理する工程を含む、
表面滅菌方法。 - 前記表面がプラスチックで構成されている、
請求項1に記載の方法。 - 前記表面がポリエチレンテレフタレートである、
請求項1に記載の方法。 - 前記処理が過酸化水素開始剤の非存在下で実施される、
請求項1に記載の方法。 - 過酢酸の濃度が少なくとも約3750ppmである、
請求項1に記載の方法。 - 過酢酸の濃度が約3750〜約10,000ppmである、
請求項1に記載の方法。 - 過酢酸の濃度が約3750〜約4250ppmである、
請求項6に記載の方法。 - 蒸気の飽和度が100%未満である、
請求項1に記載の方法。 - 蒸気の飽和度が約85%未満である、
請求項8に記載の方法。 - 蒸気の飽和度が約75〜約85%である、
請求項9に記載の方法。
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