JP2014149235A - キャリブレーション方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】細胞集塊を含む画像を取得し、当該画像内における細胞集塊の濃度を測定する。また、共焦点顕微鏡を用いた観察または物理的切断によって、細胞集塊の断面情報を取得する。そして、当該断面情報に基づいて、細胞集塊の上下方向の高さを求める。その後、上述した濃度と高さとの関係を示すデータを取得する。これにより、濃度を高さに換算する処理の精度を高めることができる。したがって、細胞集塊の体積を精度よく推定することができる。
【選択図】図8
Description
図1は、画像取得装置1にセットされるウェルプレート9の一例を示す斜視図である。ウェルプレート9は、複数の窪部91を有する略板状の試料容器である。ウェルプレート9の材料には、例えば、透明な樹脂が使用される。このため、各窪部91の少なくとも底部は、上下方向に光を透過する。図1に示すように、複数の窪部91は、ウェルプレート9の上面に、規則的に配列されている。各窪部91内には、培養液92とともに、複数の細胞集塊(スフェロイド)93が保持される。また、各窪部91内の培養液92には、濃度や組成の異なる化合物が、それぞれ添加される。
図3は、画像取得装置1において、観察対象となる細胞集塊93の体積を推定する処理の流れを示したフローチャートである。図3の処理は、コンピュータ60が、入力部50からの入力信号、コンピュータプログラム651、および相関データ652を参照しながら、画像切り出し部61、オブジェクト抽出部62、濃度測定部63、および推定体積算出部64を動作させることにより、実行される。以下、図2および図3を参照しつつ、当該処理の流れについて説明する。
続いて、上述した体積推定処理の精度を向上させるためのキャリブレーション処理について、説明する。図8は、キャリブレーション処理の流れを示すフローチャートである。
以上、本発明の一実施形態について説明したが、本発明は、上記の実施形態に限定されるものではない。
2 共焦点顕微鏡
9 ウェルプレート
10 プレート保持部
20 投光部
30 撮像部
40 表示部
50 入力部
60 コンピュータ
61 画像切り出し部
62 オブジェクト抽出部
63 濃度測定部
64 推定体積算出部
65 記憶部
91 窪部
92 培養液
93 細胞集塊
651 コンピュータプログラム
652 相関データ
930 オブジェクト
931 断面
932 薄片
D1 撮影画像データ
D2 窪部画像データ
D3 濃度データ
D4 高さデータ
Claims (6)
- 細胞集塊を含む画像から前記細胞集塊の体積を推定する処理の精度を向上させるキャリブレーション方法であって、
a)少なくとも底部が透光性を有する窪部内に保持された細胞集塊の上側および下側の一方から他方へ向けて光を照射するとともに、前記細胞集塊の他方側に配置された撮像装置で前記光を受光することにより、前記細胞集塊を含む画像を取得する工程と、
b)前記工程a)により取得された画像内における前記細胞集塊の濃度を測定する工程と、
c)前記窪部内に保持された前記細胞集塊の断面情報を取得し、前記断面情報に基づいて前記細胞集塊の上下方向の高さを求める工程と、
d)前記工程b)において測定された濃度と、前記工程c)において求められた高さとの関係を示すデータを取得する工程と、
を含むキャリブレーション方法。 - 請求項1に記載のキャリブレーション方法であって、
前記工程c)では、前記窪部内に保持された前記細胞集塊の断面情報を、共焦点顕微鏡を用いて光学的に取得するキャリブレーション方法。 - 請求項1または請求項2に記載のキャリブレーション方法であって、
前記工程c)では、前記窪部内に保持された前記細胞集塊を固定化した後、前記細胞集塊を物理的に切断することにより、前記細胞集塊の断面情報を取得するキャリブレーション方法。 - 請求項1から請求項3までのいずれかに記載のキャリブレーション方法であって、
前記工程a)より前に、前記窪部内の前記細胞集塊を、免疫染色により標識化する工程をさらに含むキャリブレーション方法。 - 請求項1から請求項3までのいずれかに記載のキャリブレーション方法であって、
前記工程c)より前に、前記窪部内の前記細胞集塊を、免疫染色により標識化する工程をさらに含むキャリブレーション方法。 - 請求項1から請求項5までのいずれかに記載のキャリブレーション方法であって、
前記窪部内に複数の細胞集塊が保持され、
前記工程b)では、前記画像内に含まれる複数の前記細胞集塊から選択された1つ以上の細胞集塊の濃度を測定し、
前記工程c)では、前記1つ以上の細胞集塊の上下方向の高さを求めるキャリブレーション方法。
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