JP2014091727A

JP2014091727A - Ｍｉｆ分泌抑制剤

Info

Publication number: JP2014091727A
Application number: JP2012244390A
Authority: JP
Inventors: Yukiko Enomoto; 有希子榎本
Original assignee: Fancl Corp
Current assignee: Fancl Corp
Priority date: 2012-11-06
Filing date: 2012-11-06
Publication date: 2014-05-19

Abstract

【課題】ＭＩＦ分泌抑制剤の提供。
【解決手段】トウヒの抽出物を含有するマクロファージ遊走阻止因子分泌抑制
剤。
【選択図】図１

Description

本発明は、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）分泌抑制剤、炎症性疾患の改善剤に関する。

マクロファージ遊走阻止因子（以下、ＭＩＦと記載する）は、炎症・免疫のメディエーターの１つであり、マクロファージの遊走を制御し、炎症部位にマクロファージを集め、貪食能を高める液性因子である。ＭＩＦは慢性関節リウマチ(非特許文献１：Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003)、腎炎(非特許文献２：Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003)、アトピー性皮膚炎(非特許文献３：Biochem Biophys Res Commun, 240, 11, 173-8, 1997)、乾癬（非特許文献４：B J Dermatol, 141, 1061-66, 1999)、潰瘍性大腸炎、敗血症、接触性皮膚炎(非特許文献５：Eur J Immunol, 33, 1478-87, 2003)、紫外線による炎症(非特許文献６：J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999)、遅延性アレルギー(非特許文献７：Pro Natl Acad Sci USA, 93, 7849-54, 1996)などの急性・慢性炎症疾患(J End, 179, 15-23, 2003)、関節炎、移植片拒絶反応、腫瘍成長、血管新生、貧血、脳脊髄炎等の炎症性疾患の病理過程に関与しており、ＭＩＦを阻害することにより、これら炎症性疾患を軽減させることが期待される。
ＭＩＦの活性阻害剤は種々開発されている（特許文献１：特表２００３−５１３０６５号公報、特許文献２：特表２００５−５００２６６号公報、特許文献３：特表２００６−５１７９７７号公報）。
本発明者は、ＭＩＦの分泌抑制に着目し、ＭＩＦの分泌抑制剤に関する研究開発を継続している。本発明者は、ヒメジョオン又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献４：特開２００９−２０３２２１号)、ヒルガオ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献５：特開２０１０−７０４８３号)、マユマメ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献６：特開２０１０−７０４８４号)、アジョワン又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献７：特開２０１０−７０４８５号)、トウガシ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献８：特開２０１０−７０４８６号)、シナヤグルマカエデ又はその抽出物をＭＩＦの分泌抑制剤とする技術(特許文献９：特開２０１０−７０４８７号)、を提案した。
一方、本発明で使用するトウヒ（橙皮）は、ダイダイ（橙、学名：Citrus aurantium）の果実を乾燥させたものの生薬名である。トウヒは漢方薬として去痰薬・健胃薬として用いられる。あるいは、香りづけに用いられる。
その他のダイダイの果皮の用途としては皮膚乾癬の予防剤としての用途（特許文献１０：特開２０１１−８８５４号公報）、果皮から得られる精油を用いる睡眠改善剤の用途（特許文献１１：特開２０１１−３７７２１号公報）、皮膚のセラミド産生促進剤としての用途（特許文献１２：特開２０１０−７０４９９号公報）、皮膚のトランスグルタミナーゼ産生促進剤の用途（特許文献１３：特開２００８−７４１１号公報）など多数の用途が知られている。またトウヒについてはインスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）の発現促進剤としての用途（特許文献１４：特開２００９−２５６２７０号公報）、更年期症状の予防治療剤の用途など多数の利用方法が提案されている。

特表２００３−５１３０６５号公報特表２００５−５００２６６号公報特表２００６−５１７９７７号公報特表２００９−２０３２２１号公報特表２０１０−７０４８３号公報特表２０１０−７０４８４号公報特表２０１０−７０４８５号公報特表２０１０−７０４８６号公報特表２０１０−７０４８７号公報特開２０１１−８８５４号公報特開２０１１−３７７２１号公報特開２０１０−７０４９９号公報特開２００８−７４１１号公報特開２００９−２５６２７０号公報

Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003 Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003 Biochem Biophys res Commun, 240, 11, 173-8, 1997 B J Dermatol, 141, 1061-66, 1999 Eur J Immunol, 33, 1478-87, 2003 J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999 Pro Natl Acad Sci USA, 93, 7849-54, 1996

本発明は新しいＭＩＦ分泌抑制剤を提供することを課題とする。

本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）トウヒの抽出物を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）分泌抑制剤。
（２）抽出溶媒が水又はアルコールである（１）記載のＭＩＦ分泌抑制剤。
（３）（１）又は（２）に記載のＭＩＦ分泌抑制剤を含有する皮膚外用剤。
（４）（１）又は（２）に記載のＭＩＦ分泌抑制剤を含有する炎症性疾患の改善剤。

本発明により、ＭＩＦ異常分泌に伴うアトピー性皮膚炎等の新たな治療剤または予防剤の提供が可能となる。
また、ＭＩＦの異常分泌や関与が推定されている、乾癬や紫外線による皮膚炎症、血管腫、蕁麻疹、敗血症、呼吸器炎症、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、腎炎、接触性皮膚炎、遅延性アレルギーなどの急性・慢性炎症疾患、関節炎、移植片拒絶反応、腫瘍成長、血管新生、貧血、脳脊髄炎、その他菌感染による炎症への治療や予防に使用することが可能となる。さらに又本発明のＭＩＦ分泌抑制剤は、皮膚外用剤として皮膚の炎症部位に塗布することで、マクロファージ遊走阻止因子の働きを抑えて、炎症部位におけるマクロファージの機能を抑制し、炎症を治療することができる。

ケラチノサイトを用いたＵＶＢ誘導性ＭＩＦ分泌抑制試験結果のグラフである。

本発明で使用するトウヒは前述したように民間療法に広く利用されている。また原料となるダイダイは果汁を得るための果樹植物としても広く栽培されている。この熟したダイダイの果皮を乾燥させたものが本発明で言うトウヒである。

トウヒ抽出物としてはトウヒをそのまま粉砕して、水あるいはエタノール等のアルコール、エーテル、アセトン、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、プロピレングリコール、酢酸エチルなどの有機溶媒により抽出した粗抽出物、および粗抽出物を分配抽出やカラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出物画分を含む。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
生薬であるトウヒはダイダイの果実の果皮を乾燥させたものとして流通している。これを購入して抽出を行なう方が品質の安定なものが得られるため、ダイダイから剥皮して乾燥させてトウヒとしたのち抽出するより効率がよい。抽出は抽出溶媒に浸漬して行なうことができる。抽出効率を上げる為に、抽出溶媒を攪拌したり、抽出溶媒中で破砕均一化したり、抽出溶媒中で圧力をかけることもできる。抽出温度は5〜100℃程度が適切であり、抽出時間は5分〜1ヶ月程度である。これらの条件は適宜設定することができる。
前記トウヒ抽出物はそのまま、また、水、エタノール等の有機溶媒に溶解又は分散させた状態で、ＭＩＦ分泌抑制剤、炎症性疾患の改善剤、特に皮膚の炎症性疾患改善剤として使用できる。また、必要に応じて抽出溶媒を留去し、その乾燥物を用いてもよい。
一方、すでにトウヒ抽出物も市販されている。市販品としては「トウヒリキッド」一丸ファルコス株式会社、「トウヒ抽出液」香栄興業株式会社などを例示することができる。これらの市販品は次の表１に示すエキス濃度で販売されている。なお表１に示す溶媒ＢＧはブチレングリコール、ＥｔＯＨはエタノールである。

トウヒ抽出物は、乾燥物として、0.0001〜1000mg／日の範囲で適用することができ、さらに、この範囲に限らず、対象、適用形態、症状に応じてその量を適宜設定することができる。
本発明のトウヒ抽出物の配合量としては、0.0001〜10質量％程度が好ましいが、用いる剤型、使用対象等の様々の条件に応じて、100質量％までの広範囲でその配合量を適宜設定できる。

本発明の製剤は、経口で又は非経口で投与することができる。
本発明の製剤は、例えば水溶液、油剤、乳液、懸濁液等の液剤、ゲル、クリーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、マイクロカプセル、固形等の固形剤の形態で適用可能である。従来から公知の方法でこれらの形態に調製し、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、硬膏、ハップ剤、エアゾル剤、坐剤、注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、シロップ剤、トローチ剤等の種々の剤型とすることができる。これらを身体に塗布、貼付、噴霧、飲用等により適用することができる。特にこれら剤型の中で、皮膚外用剤であるローション剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、ハップ剤、エアゾル剤等が適している。通常、医薬において使用される製剤化方法にしたがって、これらの剤型、組成物として製造することができる。
以下、実施例に基づき本発明を詳細に説明する。

〔トウヒ抽出物のケラチノサイトを用いたＵＶＢ誘導性ＭＩＦ分泌抑制試験〕
ＭＩＦは皮膚の構成細胞の一つであるケラチノサイトで強く発現することが知られている。そして、ケラチノサイトにＵＶＢを照射することにより、ＭＩＦの分泌が促進されることが知られている(J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999)。
ケラチノサイトにＵＶＢを照射したときのＭＩＦの分泌をトウヒ抽出物が抑制するか否かを試験した。
なお本試験で用いたトウヒ抽出物は、表１に示した市販されているトウヒ抽出液である。

＜試験方法＞
１．ヒトケラチノサイトを1.0×10⁴ cells/cm²でφ35mm dishに播種し、EpiLife-KG2培地(倉敷紡績製)で3日間培養した。EpilLife-KG2・BPE(-)培地に各サンプルを所定の抽出物濃度を添加したサンプル添加培地に交換し、1晩培養後、HANKS(-)存在下でＵＶＢを2.0W/m²、15mJ/cm²照射し、サンプル含有EpilLife-KG2・BPE(-)培地に交換し、24時間培養した。培養上清を回収し、hMIF ELISA kit を用いて、定法に従い上清中ＭＩＦ量を測定し、ＭＩＦ分泌量を算出した。さらに、細胞をCell lysys bufferで溶解し、溶解液中のたんぱく質量をプロテインアッセイキットで測定し、dishあたりのタンパク質量を算出した。

２．ＵＶＢ照射した試料無添加で溶媒添加（0.1%ＢＧ）処理群の単位タンパク質当たりのＭＩＦ分泌率を100%とした。
ＭＩＦ分泌率(%)を求める式を以下に示す。

ＭＩＦ分泌率（％）＝(Ｍ_x／Ｐ_x)／(Ｍ₀／Ｐ₀)×100
Ｍ₀：ＵＶＢ照射・サンプルＡ無添加で溶媒添加（0.1％ＢＧ）のＭＩＦ分泌量_、
Ｐ₀：Ｍ₀測定時のタンパク質量_、
Ｍ_x：各試料のＭＩＦ分泌量_、
Ｐ_x：各試料のタンパク質量

＜結果＞
測定結果を表２、図１に示す。なお、本試験における試料無添加群とトウヒ抽出物添加群の細胞のタンパク質の量を比較したところ、両群に差は認められなかった。したがって、トウヒの細胞毒性は認められないものと判断した。

以上の試験結果から、ケラチノサイトにトウヒ抽出物を添加することにより、紫外線誘導性のＭＩＦの分泌が顕著に抑制された。
したがって、ＭＩＦの分泌量が増加することによって皮膚の症状が悪化することが知られている紫外線による皮膚障害・炎症、アトピー性皮膚炎、乾癬、接触性皮膚炎等のＭＩＦが関与する皮膚の炎症性疾患に対して改善効果が期待できる。

Claims

トウヒの抽出物を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）分泌抑制剤。
抽出溶媒が水又はアルコールである請求項１記載のＭＩＦ分泌抑制剤。
請求項１又は請求項２に記載のＭＩＦ分泌抑制剤を含有する皮膚外用剤。
請求項１又は請求項２に記載のＭＩＦ分泌抑制剤を含有する炎症性疾患の改善剤。