JP2014077014A

JP2014077014A - Antioxidant and preventive against liver dysfunction

Info

Publication number: JP2014077014A
Application number: JP2014008770A
Authority: JP
Inventors: Hiroko Tsutsumi; 浩子堤; Makiko Mizumoto; 真紀子水本; Arata Oura; 新大浦
Original assignee: Gekkeikan Sake Co Ltd
Current assignee: Gekkeikan Sake Co Ltd
Priority date: 2008-02-22
Filing date: 2014-01-21
Publication date: 2014-05-01
Anticipated expiration: 2029-02-19
Also published as: JP2009221193A; JP5809714B2; JP5474369B2

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new application of rice-derived peptides.SOLUTION: This invention provides a preventive against liver dysfunction (excluding food) including Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys-Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and/or Tyr-Lys-Pro, Tyr-Gly-Gly-Tyr.

Description

本発明は、米由来のペプチドを含む抗酸化剤、酸化防止方法、肝機能障害抑制剤、及び食品組成物に関する。 The present invention relates to an antioxidant containing a peptide derived from rice, an antioxidant method, a liver dysfunction inhibitor, and a food composition.

酒粕は、蒸米に麹及び酵母を作用させて得られるものであり、麹菌や酵母の生産する酵素により米の糖類が分解されて高分子化合物としてタンパク質やペプチドが高比率で含まれている。これらのタンパク質やペプチドをプロテアーゼ処理して得られる低分子量のペプチドは種々の有用な生理活性を有することが期待される。また、酒粕の糖類はある程度分解されているため、酒粕をプロテアーゼ処理して得られる処理物中のペプチドは単離、精製が容易である。
例えば、特許文献１には酒粕を原料とした新規なアンギオテンシン変換酵素阻害剤が開示されている。また特許文献２には米タンパクのタンパク質分解酵素分解物として酒粕を用いたＡＣＥ阻害用経口摂取物が開示されている。 Sake lees are obtained by allowing koji and yeast to act on steamed rice, and the sugars of rice are decomposed by enzymes produced by koji molds or yeasts, so that proteins and peptides are contained in a high ratio as polymer compounds. Low molecular weight peptides obtained by protease treatment of these proteins and peptides are expected to have various useful physiological activities. In addition, since the saccharides of sake lees are decomposed to some extent, the peptides in the processed product obtained by treating the sake lees with proteases can be easily isolated and purified.
For example, Patent Document 1 discloses a novel angiotensin converting enzyme inhibitor using sake lees as a raw material. Patent Document 2 discloses an oral intake for ACE inhibition using sake lees as a proteolytic enzyme degradation product of rice protein.

特許第３０５４４６２号Japanese Patent No. 3054462 特許第３４１４７６１号Patent No. 3414761

本発明は、米由来ペプチドの新たな用途を提供することを主な課題とする。 The main object of the present invention is to provide new uses of rice-derived peptides.

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行い、以下の知見を得た。
(ｉ) 酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の原料をプロテアーゼ処理して得られるペプチド混合物は、肝機能障害抑制活性、及び抗酸化活性を併せ持つ。
(ｉｉ) 上記混合物中に含まれるＴｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒの各ペプチドは、肝機能障害抑制活性、及び抗酸化活性を併せ持つ。
(ｉｉｉ) 上記混合物中に含まれるＩｌｅ−Ｔｙｒのペプチドは、抗酸化活性を有する。
(ｉｖ) 上記混合物中に含まれるＬｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒの各ペプチドは肝機能障害抑制活性を有する。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have conducted intensive research and obtained the following knowledge.
(i) A peptide mixture obtained by subjecting at least one raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, cooked rice, and koji to protease treatment has both liver dysfunction inhibiting activity and antioxidant activity.
(ii) Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile contained in the above mixture Each peptide of -Lys-Tyr and Leu-Lys-Tyr has both liver dysfunction inhibiting activity and antioxidant activity.
(iii) The Ile-Tyr peptide contained in the mixture has an antioxidant activity.
(iv) Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Each peptide of Tyr-Lys-Pro and Tyr-Gly-Gly-Tyr has liver dysfunction inhibiting activity.

本発明は、上記知見に基づき完成されたものであり、以下の肝機能障害抑制剤、抗酸化剤、酸化防止方法、及び食品組成物を提供する。
項１．Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも1種のペプチドを含む肝機能障害抑制剤。
項２．酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物を含む肝機能障害抑制剤。
項３．米原料が液化粕である項２に記載の肝機能障害抑制剤。
項４．肝機能障害が、アルコール性肝障害、ウィルス性肝障害、薬物性肝障害、自己免疫低下による肝障害、自己免疫疾患による肝障害、慢性又は急性肝炎、アルコール性脂肪肝、胆石、肝硬変、胆道癌、及び肝臓癌からなる群より選ばれるものである、項１〜３のいずれかに記載の肝機能障害抑制剤。
項５．Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも１種のペプチドを含む抗酸化剤。
項６．酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物を含む抗酸化剤。
項７．米原料が液化粕である項６に記載の抗酸化剤。
項８．Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも1種のペプチドを医薬品、食品、又は化粧品に添加する工程を含む、医薬品、食品、又は化粧品の酸化防止方法。
項９．酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物を医薬品、食品、又は化粧品に添加する工程を含む、医薬品、食品、又は化粧品の酸化防止方法。
項１０．米原料が液化粕である項９に記載の医薬品、食品、又は化粧品の酸化防止方法。
項１１．酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物を０．００１〜１００重量％含む食品組成物。
項１２．米原料が液化粕である項１１に記載の食品組成物。
項１３．Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも1種のペプチドを０．００１〜１００重量％含む食品組成物。 The present invention has been completed based on the above findings, and provides the following liver dysfunction inhibitor, antioxidant, antioxidant method, and food composition.
Item 1. Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -A liver dysfunction inhibitor comprising at least one peptide selected from the group consisting of Gly-Gly-Tyr.
Item 2. A liver dysfunction inhibitor comprising a peptide mixture obtained by a method comprising a step of subjecting at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and rice bran to protease treatment.
Item 3. Item 3. The liver dysfunction inhibitor according to Item 2, wherein the rice raw material is liquefied koji.
Item 4. Liver dysfunction is alcoholic liver disorder, viral liver disorder, drug-induced liver disorder, liver disorder due to decreased autoimmunity, liver disorder due to autoimmune disease, chronic or acute hepatitis, alcoholic fatty liver, gallstone, cirrhosis, biliary tract cancer Item 4. A liver dysfunction inhibitor according to any one of Items 1 to 3, which is selected from the group consisting of liver cancer.
Item 5. Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, And an antioxidant comprising at least one peptide selected from the group consisting of Leu-Lys-Tyr.
Item 6. An antioxidant comprising a peptide mixture obtained by a method comprising a step of subjecting at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and rice bran to protease treatment.
Item 7. Item 7. The antioxidant according to Item 6, wherein the rice raw material is liquefied koji.
Item 8. Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, And a method for preventing oxidation of a pharmaceutical, food, or cosmetic comprising a step of adding at least one peptide selected from the group consisting of Leu-Lys-Tyr to a pharmaceutical, food, or cosmetic.
Item 9. Including the step of adding a peptide mixture obtained by a method comprising protease treatment of at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and rice bran to pharmaceuticals, foods, or cosmetics, Antioxidation method for pharmaceuticals, foods or cosmetics.
Item 10. Item 10. The method for preventing oxidation of pharmaceuticals, foods, or cosmetics according to Item 9, wherein the rice raw material is liquefied koji.
Item 11. A food composition comprising 0.001 to 100% by weight of a peptide mixture obtained by a method comprising a step of subjecting at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and rice bran to protease.
Item 12. Item 12. The food composition according to Item 11, wherein the rice raw material is liquefied rice cake.
Item 13. Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys-Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys -A food composition comprising 0.001 to 100% by weight of at least one peptide selected from the group consisting of Pro and Tyr-Gly-Gly-Tyr.

本発明により米由来のペプチドからなる新規な肝機能障害抑制剤、及び抗酸化剤が提供された。このペプチドは、酒粕、米焼酎粕、加熱米、又は／及び糠をプロテアーゼ処理することにより得ることができる。このように、本発明で使用するペプチドは米由来であるため、摂取しすぎても人体に害はなく、また長期継続摂取による副作用の心配もない。よって、本発明で使用するペプチドは副作用や過剰摂取を気にすることなく安心して長期間服用できる。また、本発明で使用するペプチドは、清酒製造の副産物である粕や、産業廃棄物となる糠などから製造できる点でも有用である。 According to the present invention, a novel liver dysfunction inhibitor and an antioxidant comprising a peptide derived from rice are provided. This peptide can be obtained by subjecting sake lees, rice shochu, heated rice, and / or koji to protease treatment. As described above, since the peptide used in the present invention is derived from rice, there is no harm to the human body even if it is excessively consumed, and there is no worry of side effects due to long-term continuous intake. Therefore, the peptide used in the present invention can be taken for a long period of time without worrying about side effects or excessive intake. Moreover, the peptide used by this invention is useful also in the point which can be manufactured from the koji which is a by-product of sake production, the koji used as an industrial waste, etc.

Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒの各ペプチドは、肝機能障害から肝細胞を保護するため、アルコール性肝障害、ウィルス性肝障害、薬物性肝障害、自己免疫低下による肝障害、自己免疫疾患による肝障害、慢性又は急性肝炎、アルコール性脂肪肝、胆石、肝硬変、胆道癌、肝臓癌などのあらゆる肝機能障害ないしは肝臓疾患の抑制剤、予防、緩和、又は治療剤の有効成分として有用である。
また、Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒの各ペプチドは、脂質などの物質の酸化防止や活性酸素の除去などの酸化抑制活性を有することから酸化防止剤の有効成分として好適である。活性酸素の発生はあらゆる疾患の一因となり、また疾患を助長することから上記のペプチドは各種の医薬品や機能性食品の有効成分として好適に使用できる。さらに、本発明のペプチドは、食品由来の安全なペプチドであることから、医薬品、食品、化粧品などに添加してそれらの酸化を防止する目的でも好適に使用できる。
上記の各ペプチドは、酒粕、米焼酎粕、加熱米、又は／及び糠をプロテアーゼ処理して得られる処理物ごと使用しても同様に肝機能障害抑制活性や、抗酸化活性を示す。 Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -Gly-Gly-Tyr peptide protects hepatocytes from liver dysfunction; alcoholic liver damage, viral liver damage, drug-induced liver damage, liver damage due to decreased autoimmunity, liver damage due to autoimmune disease Any liver machine such as chronic or acute hepatitis, alcoholic fatty liver, gallstones, cirrhosis, biliary tract cancer, liver cancer Inhibitors of failure or liver disease, prevention, mitigation, or are useful as an active ingredient of a therapeutic agent.
Also, Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys- Each peptide of Tyr and Leu-Lys-Tyr is suitable as an active ingredient of an antioxidant because it has an oxidation-inhibiting activity such as antioxidation of substances such as lipids and removal of active oxygen. The generation of active oxygen contributes to all diseases and promotes the diseases, so that the above peptides can be suitably used as active ingredients in various pharmaceuticals and functional foods. Furthermore, since the peptide of the present invention is a safe peptide derived from food, it can be suitably used for the purpose of adding to pharmaceuticals, foods, cosmetics and the like to prevent their oxidation.
Each of the above peptides similarly exhibits liver dysfunction inhibiting activity and antioxidant activity even when used as a processed product obtained by subjecting sake lees, rice shochu, heated rice, and / or koji to protease treatment.

肝障害モデルマウスに対する、酒粕ペプチドの血清GOT・GPT値低下作用を示すグラフである（４週間摂取）。It is a graph which shows the serum GOT * GPT value reduction effect | action of a liquor peptide with respect to a liver disorder | damage | failure model mouse (4 weeks intake). 肝障害モデルマウスに対する、酒粕ペプチドの血清GOT・GPT値低下作用を示すグラフである（６週間摂取）。It is a graph which shows the serum GOT * GPT level decreasing effect of the sake lees peptide with respect to a liver injury model mouse (taken for 6 weeks). 肝障害モデルマウスに対する、酒粕ペプチドの血清LDH値低下作用を示すグラフである（４週間摂取）。It is a graph which shows the serum LDH level reduction effect | action of a sake lees peptide with respect to a liver disorder | damage | failure model mouse (4-week intake). 肝障害モデルマウスに対する、酒粕ペプチドの血清LDH値低下作用を示すグラフである（６週間摂取）。It is a graph which shows the serum LDH level reduction effect | action of a liquor peptide with respect to a liver disorder | damage | failure model mouse (6-week intake).

以下、本発明を詳細に説明する。先ず、本発明で使用するペプチドについて説明し、次いで、これらのペプチドの用途を説明する。
（Ｉ）ペプチド
本発明では、Ｔｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ(配列番号１)、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ(配列番号２)を有効成分として使用する。
これらのペプチドは、化学合成することができる。また、酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び／又は糠の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法によっても得ることができる。本発明の肝機能障害抑制剤及び抗酸化剤では、上記米原料をプロテアーゼ処理して得られるペプチド混合物をそのまま有効成分として使用することもできる。このペプチド混合物は、好ましくは、上記米原料にセルラーゼを作用させる第１工程と、第１工程により得られる混合物から液体画分を除去する第２工程と、第２工程により得られる固形分に中性プロテアーゼ及び／又は酸性プロテアーゼを作用させる第３工程とを含む方法により得ることができる。 Hereinafter, the present invention will be described in detail. First, peptides used in the present invention will be described, and then uses of these peptides will be described.
(I) Peptide In the present invention, Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser- Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys-Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr (SEQ ID NO: 1), Val-Arg -Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr-Gly-Gly-Tyr (SEQ ID NO: 2) are used as active ingredients.
These peptides can be chemically synthesized. Moreover, it can also obtain by the method including the process of protease-treating the rice raw material of sake lees, rice shochu, heated rice, and / or rice bran. In the liver dysfunction inhibitor and antioxidant of the present invention, a peptide mixture obtained by subjecting the rice raw material to protease treatment can be used as an active ingredient as it is. The peptide mixture is preferably a first step in which cellulase is allowed to act on the rice raw material, a second step in which the liquid fraction is removed from the mixture obtained in the first step, and a solid content obtained in the second step. And a third step in which an acidic protease and / or an acidic protease are allowed to act.

米原料
米原料としては、米由来のタンパク質加水分解物が用いられる。具体的には酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び／又は精米するときに出る糠が使用される。中でも、夾雑物である糖質が少なくタンパク質が多く含まれる点や、酒類製造の副産物であり入手し易い点で、酒粕及び米焼酎粕が好ましく、酒粕がより好ましい。酒粕は、蒸米、米麹から醸造した場合の酒粕でも、液化した米、米麹を用いる液化仕込みによって醸造した場合の液化粕でもどちらでもよい。特に、液化粕は、タンパク質含量が多く夾雑物も少ないため有効成分が濃縮されている点で、好ましい。 Rice raw material As the rice raw material, protein hydrolyzate derived from rice is used. Specifically, sake lees, rice shochu, heated rice, and / or rice koji that is produced when milling is used. Among these, sake lees and rice shochu are preferred, and sake lees are more preferred in that they are low in carbohydrates, which are impurities, contain a lot of protein, and are by-products of liquor production and are easily available. The sake lees may be either sake rice brewed from steamed rice or rice bran, or liquefied rice or liquefied rice koji brewed by liquefaction preparation using rice koji. In particular, liquefied soot is preferable because the active ingredient is concentrated because the protein content is high and the amount of impurities is small.

第１工程
第１工程は、上記原料にセルラーゼを作用させる工程である。セルラーゼは公知のセルラーゼを制限なく使用できる。セルラーゼには、セルロース鎖をランダムに切断するエンドグルカナーゼと、セルロースの還元末端から切断してセルビオースを生成するセロビオヒドロラーゼとが含まれる。いずれを使用してもよいが両者を併用することにより、効率よくセルロースを分解することができる。
また、セルラーゼの由来は特に限定されないが、本発明方法の原料に対して機能し易い点で、トリコデルマ属菌由来のセルラーゼが好ましい。
セルラーゼの使用量は、原料（酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び／又は糠）に対して約０．００５〜０．２重量％が好ましく、約０．０５〜０．１重量％がより好ましい。上記範囲であれば、実用的な時間内にセルロースが十分に分解されて液体画分に可溶化される。また、反応温度と反応時間は使用する原料とセルラーゼの種類によって異なるが、反応温度は約４０〜６０℃が好ましく、反応時間は約２〜２０時間が好ましい。また、反応時のｐＨは酵素が機能し易い約３．５〜６が好ましい。上記範囲であれば、セルラーゼが失活することなく、かつその機能を十分に発揮できる。セルラーゼによる反応は、必ずしも停止させなくてもよいが、反応混合物を例えば約８０〜９０℃で約３０〜６０分間加熱することにより停止させることができる。 First Step The first step is a step of allowing cellulase to act on the raw material. As the cellulase, a known cellulase can be used without limitation. Cellulases include endoglucanases that randomly cleave cellulose chains and cellobiohydrolase that cleaves from the reducing end of cellulose to produce cellobiose. Either may be used, but cellulose can be efficiently decomposed by using both in combination.
The origin of the cellulase is not particularly limited, but a cellulase derived from Trichoderma spp. Is preferred because it easily functions with respect to the raw material of the method of the present invention.
The amount of cellulase used is preferably about 0.005 to 0.2% by weight, more preferably about 0.05 to 0.1% by weight, based on the raw material (sake lees, rice shochu, heated rice, and / or koji). preferable. If it is the said range, a cellulose will fully be decomposed | disassembled within a practical time, and it will solubilize in a liquid fraction. Moreover, although reaction temperature and reaction time change with the raw material to be used and the kind of cellulase, about 40-60 degreeC is preferable for reaction temperature, and about 2-20 hours are preferable for reaction time. In addition, the pH during the reaction is preferably about 3.5 to 6 where the enzyme easily functions. If it is the said range, a cellulase can fully exhibit the function, without inactivating. The reaction with cellulase does not necessarily need to be stopped, but can be stopped by heating the reaction mixture at about 80 to 90 ° C. for about 30 to 60 minutes, for example.

第１工程では夾雑物である糖質を除去するために、さらにアミラーゼを使用することができる。アミラーゼとはデンプンを加水分解する酵素の総称であり、アミラーゼとしては、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼなどが挙げられる。アミラーゼは、１種を単独で、または２種以上を組み合わせて使用できる。中でも、β−アミラーゼ、α−アミラーゼ、及びα−グルコシダーゼが好ましく、β−アミラーゼがより好ましく、小麦由来のβ−アミラーゼがさらにより好ましい。
アミラーゼの使用量は、原料（酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び／又は糠）に対して約０．００５〜０．２重量％が好ましく、約０．０５〜０．１重量％がより好ましい。上記範囲であれば、実用的な時間内に糖質が十分に可溶化される。反応温度と反応時間は使用する原料及び酵素の種類によって異なるが、反応温度は約５０〜６０℃が好ましく、反応時間は約５〜２０時間が好ましい。アミラーゼによる反応は、必ずしも停止させなくてもよいが、反応混合物を例えば約８０〜９０℃で約３０〜６０分間加熱することにより停止させることができる。反応時のｐＨは酵素が機能し易い約５〜６が好ましい。 In the first step, amylase can be further used to remove saccharides that are contaminants. Amylase is a general term for enzymes that hydrolyze starch, and examples of amylase include α-amylase, β-amylase, glucoamylase, α-glucosidase, pullulanase, and isoamylase. Amylase can be used singly or in combination of two or more. Among these, β-amylase, α-amylase, and α-glucosidase are preferable, β-amylase is more preferable, and wheat-derived β-amylase is even more preferable.
The amount of amylase used is preferably about 0.005 to 0.2% by weight, more preferably about 0.05 to 0.1% by weight relative to the raw material (sake lees, rice shochu, heated rice, and / or koji). preferable. If it is the said range, carbohydrate will fully be solubilized within a practical time. The reaction temperature and reaction time vary depending on the raw materials and enzymes used, but the reaction temperature is preferably about 50 to 60 ° C., and the reaction time is preferably about 5 to 20 hours. The reaction with amylase is not necessarily stopped, but can be stopped by heating the reaction mixture at about 80 to 90 ° C. for about 30 to 60 minutes, for example. The pH during the reaction is preferably about 5 to 6 where the enzyme is easy to function.

第２工程
第２工程は、上記第１工程により得られる混合物から液体画分を除去する工程である。この工程により低分子化された糖質をはじめ、主に水溶性成分が除去される。固液分離の方法としては、圧搾、ろ過、遠心分離などが挙げられるが、ある程度の水分が除去できればよい。この工程により米由来のタンパク質を多く含む固形分が得られる。 Second Step The second step is a step of removing the liquid fraction from the mixture obtained in the first step. The water-soluble components are mainly removed, including carbohydrates that have been reduced in molecular weight by this process. Examples of the solid-liquid separation method include squeezing, filtration, and centrifugal separation, but it is sufficient that a certain amount of water can be removed. By this step, a solid content rich in rice-derived protein is obtained.

第３工程
第３工程は、上記第２工程で得られた固形分にプロテアーゼを作用させる工程である。この工程では、原料中のタンパク質から有効成分となるペプチドを得るためにプロテアーゼを使用する。この工程により米由来のタンパク質からＡＣＥ阻害活性を有するペプチド混合物が生成する。
本発明方法では、プロテアーゼとして、中性プロテアーゼと酸性プロテアーゼを単独で使用、又は併用する。各プロテアーゼの由来は特に限定されない。バチルス属細菌由来、アスペルギルス属菌由来、リゾプス属菌由来のプロテアーゼなどが知られているが、中でも、バチルス属細菌由来の中性プロテアーゼとアスペルギルス属菌由来の酸性プロテアーゼが好ましい。本発明において用いられるプロテアーゼはエンド型でもエキソ型でも、どちらでも良いが、目的とするペプチドがさらに断片化されないためにはエンド型が好ましい。中性プロテアーゼは１種を単独で使用しても良いし、２種以上を組み合わせて使用しても良い。酸性プロテアーゼも同様に１種を単独で使用しても良いし、２種以上を組み合わせて使用しても良い。 Third Step The third step is a step of causing protease to act on the solid content obtained in the second step. In this step, a protease is used to obtain a peptide as an active ingredient from the protein in the raw material. This process produces a peptide mixture having ACE inhibitory activity from rice-derived protein.
In the method of the present invention, neutral protease and acidic protease are used alone or in combination as proteases. The origin of each protease is not particularly limited. Known are proteases derived from Bacillus bacteria, Aspergillus bacteria, Rhizopus bacteria, etc. Among them, neutral proteases derived from Bacillus bacteria and acidic proteases derived from Aspergillus bacteria are preferred. The protease used in the present invention may be either an endo-type or an exo-type, but the endo-type is preferable so that the target peptide is not further fragmented. A neutral protease may be used individually by 1 type, and may be used in combination of 2 or more type. Similarly, one type of acidic protease may be used alone, or two or more types may be used in combination.

プロテアーゼの使用量は、中性プロテアーゼも酸性プロテアーゼも、それぞれ第２工程後に得られる混合物、即ち糖質分解後の圧搾物に対して約０．1〜０．８重量％が好ましく、約０．３〜０．６重量％がより好ましい。上記範囲であれば、実用的な時間内に原料中のタンパク質を、肝機能障害抑制活性及び／又は抗酸化活性を有するペプチド（以下、「活性ペプチド」ということがある）にまで分解できる。 The amount of protease used is preferably about 0.1 to 0.8% by weight based on the mixture obtained after the second step for each of the neutral protease and acidic protease, that is, the compressed product after saccharide decomposition. 3 to 0.6% by weight is more preferable. If it is the said range, the protein in a raw material can be decomposed | disassembled to the peptide (henceforth "active peptide" may be called) which has liver dysfunction disorder inhibitory activity and / or antioxidant activity within a practical time.

反応温度と反応時間は使用する酵素の種類によって異なるが、中性プロテアーゼの場合は、反応温度は約４０〜６０℃が好ましく、反応時間は約５〜２０時間が好ましい。また、酸性プロテアーゼの場合は、反応温度は約５０〜６０℃が好ましく、反応時間は約５〜２０時間が好ましい。各プロテアーゼによる反応は、反応混合物を例えば約８０〜１００℃で約１０〜３０分間加熱することにより停止させればよい。プロテアーゼによる反応を停止させることにより、切り出された活性ペプチドがさらに分解されて、阻害活性が低下することが回避される。または、活性ペプチド以外の夾雑ペプチドが切り出されることによる、活性ペプチドの純度の低下を防止できる。
反応時のｐＨは、中性プロテアーゼの場合、約６〜９が好ましく、酸性プロテアーゼの場合、約３〜５が好ましい。上記範囲であれば、各プロテアーゼが機能し易い。
中性プロテアーゼと酸性プロテアーゼは、それぞれ単独で作用させてもよく、併用しても良い。併用する場合は、いずれを先に反応させてもよいが、より活性の強いペプチド混合物を得ることができる点で、中性プロテアーゼを先に反応させるのが好ましい。また、両プロテアーゼが機能するｐＨが重複する場合は、同時に反応させてもよい。 Although the reaction temperature and reaction time vary depending on the type of enzyme used, in the case of a neutral protease, the reaction temperature is preferably about 40 to 60 ° C., and the reaction time is preferably about 5 to 20 hours. In the case of acidic protease, the reaction temperature is preferably about 50 to 60 ° C., and the reaction time is preferably about 5 to 20 hours. The reaction with each protease may be stopped by heating the reaction mixture at, for example, about 80 to 100 ° C. for about 10 to 30 minutes. By stopping the reaction by the protease, it is avoided that the excised active peptide is further decomposed to reduce the inhibitory activity. Alternatively, it is possible to prevent a decrease in the purity of the active peptide due to excision of contaminating peptides other than the active peptide.
The pH during the reaction is preferably about 6 to 9 for a neutral protease and about 3 to 5 for an acidic protease. If it is the said range, each protease will function easily.
Neutral protease and acidic protease may be allowed to act alone or in combination. When they are used in combination, any of them may be reacted first, but it is preferable to react a neutral protease first in that a more active peptide mixture can be obtained. Moreover, when the pH which both proteases function overlaps, you may make it react simultaneously.

上記第３工程で得られた混合物から固形分を除去してもよい。これにより、固体の夾雑物が除去されて、活性ペプチドが溶解した液体画分を得ることができる。固体分の除去は、例えば圧搾、ろ過、遠心分離等により行うことができる。この液体画分は、そのまま食品に添加する、あるいは医薬品の有効成分として用いることができる。
さらに、この液体画分を濃縮したり、乾燥させて粉末化したりすることも出来る。これにより、より長期間保存が可能で、加工しやすいペプチド混合物を得ることができる。
さらに、この混合物から、各種クロマトグラフィーにより目的ペプチドを単離すればよい。 You may remove solid content from the mixture obtained at the said 3rd process. Thereby, solid impurities can be removed and a liquid fraction in which the active peptide is dissolved can be obtained. The removal of the solid content can be performed by, for example, pressing, filtration, centrifugation, or the like. This liquid fraction can be added to food as it is, or used as an active ingredient of a pharmaceutical product.
Further, the liquid fraction can be concentrated or dried to be powdered. Thereby, the peptide mixture which can be preserve | saved for a long period of time and is easy to process can be obtained.
Furthermore, the target peptide may be isolated from this mixture by various chromatography.

（ＩＩ）肝機能障害抑制剤
本発明の肝機能障害抑制剤は、酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物、又はＴｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも1種のペプチドを有効成分として含む。ペプチドは、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏが好ましく、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏがより好ましい。
肝機能障害の種類は特に限定されず、アルコール性肝障害、ウィルス性肝障害、薬物性肝障害、自己免疫の低下による肝障害などのあらゆる肝機能障害を対象とすることができる。
肝機能の障害は、例えば血中のアスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＧＯＴ）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）、アルカリ性フォスファターゼ、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、総ビリルビン、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の増加または総蛋白質およびアルブミン量、コリンエステラーゼ活性の変化を指標に知ることができる。本発明のペプチドは、肝機能障害を抑制することから、慢性又は急性肝炎、アルコール性脂肪肝、胆石、肝硬変、胆道癌、肝臓癌などのあらゆる肝臓疾患の予防、軽減、又は治療剤の有効成分とすることができる。肝機能障害抑制剤は、医薬品、食品組成物などとして使用できる。 (II) Liver dysfunction inhibitor The liver dysfunction inhibitor of the present invention is a method comprising a step of subjecting at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and koji to protease treatment. The resulting peptide mixture, or Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys- Tyr, Leu-Lys-Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr -At least one peptide selected from the group consisting of Lys-Pro and Tyr-Gly-Gly-Tyr Comprising as an active ingredient. The peptide is preferably Arg-Phe, Gln-Trp, Ile-Lys-Tyr, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, and more preferably Arg-Phe, Gln-Trp, Phe-Pro-Pro.
The type of liver dysfunction is not particularly limited, and can be any liver dysfunction such as alcoholic liver dysfunction, viral liver dysfunction, drug-induced liver dysfunction, and liver dysfunction due to decreased autoimmunity.
Impaired liver function may be, for example, an increase in blood aspartate aminotransferase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT), alkaline phosphatase, γ-glutamyl transpeptidase, total bilirubin, lactate dehydrogenase (LDH) or Changes in total protein and albumin amount and cholinesterase activity can be known as indicators. Since the peptide of the present invention suppresses liver dysfunction, it is an active ingredient for the prevention, reduction, or treatment of any liver disease such as chronic or acute hepatitis, alcoholic fatty liver, gallstones, cirrhosis, biliary tract cancer, and liver cancer. It can be. The liver dysfunction inhibitor can be used as a pharmaceutical, a food composition or the like.

（ＩＩＩ）抗酸化剤
本発明の抗酸化剤は、酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物、又はＴｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも1種のペプチドを有効成分として含む。
脂質などの生体成分の酸化抑制活性や、活性酸素を除去する活性を有することから抗酸化剤として好適である。生体成分の酸化、及びそれによる活性酸素の発生はあらゆる疾患の元となったり、疾患を助長したりするため、抗酸化剤は医薬品、食品組成物などとして使用できる。また、医薬品、化粧品、食品などの酸化防止のための抗酸化剤としても使用できる。 (III) Antioxidant The antioxidant of the present invention is a peptide mixture obtained by a method comprising a step of protease-treating at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and rice bran. Or Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys- It contains at least one peptide selected from the group consisting of Tyr and Leu-Lys-Tyr as an active ingredient.
It is suitable as an antioxidant because it has the activity of inhibiting the oxidation of biological components such as lipids and the activity of removing active oxygen. Since the oxidation of biological components and the generation of active oxygen thereby cause disease or promote disease, antioxidants can be used as pharmaceuticals, food compositions and the like. It can also be used as an antioxidant for antioxidants such as pharmaceuticals, cosmetics and foods.

（ＩＶ）医薬品製剤
上記ペプチド又はペプチド混合物を肝機能障害抑制用途又は抗酸化用途の医薬品の有効成分として使用する場合、ペプチドは、そのまま又はジペプチドやアミノ酸にまで分解されて容易に吸収されることから、これらの医薬品は各種の経口投与形態を有する製剤とすることができる。固形製剤としては、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、タブレット剤、丸剤、カプセル剤、チュアブル剤などが挙げられ、液体製剤としては、乳剤、液剤、シロップ剤などが挙げられる。 (IV) Pharmaceutical preparations When the above peptide or peptide mixture is used as an active ingredient of a medicine for inhibiting liver function disorder or for antioxidant use, the peptide is easily absorbed as it is or is decomposed into dipeptides or amino acids. These pharmaceuticals can be made into preparations having various oral dosage forms. Examples of solid preparations include powders, granules, tablets, tablets, pills, capsules, chewable agents, and the like, and examples of liquid preparations include emulsions, solutions, syrups and the like.

固形製剤は、有効成分であるペプチド又はペプチド混合物に、薬学的に許容される担体や添加剤を配合して調製される。例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、でんぷん、マンニットのような賦形剤；アラビアゴム、ゼラチン、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロースのような結合剤；カルメロース、デンプンのような崩壊剤；無水クエン酸、ラウリン酸ナトリウム、グリセロールのような安定剤などが配合される。さらに、ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなどでコーティングしたり、カプセル化したりしてもよい。また、液体製剤は、例えば、本発明のペプチドを、水、エタノール、グリセリン、単シロップ、又はこれらの混液などに、溶解又は分散させることにより調製される。これらの製剤には、甘味料、防腐剤、粘滑剤、希釈剤、緩衝剤、着香剤、着色剤のような添加剤が添加されていてもよい。
肝機能障害抑制剤中の上記ペプチド又はペプチド混合物の含有量は、乾燥重量に換算して、剤全体に対して、約０．００１〜１００重量％が好ましく、約１〜９５重量％がより好ましく、約１０〜９０重量％がさらにより好ましく、約３０〜８５重量％がさらにより好ましい。
抗酸化剤中の上記ペプチド又はペプチド混合物の含有量は、乾燥重量に換算して、剤全体に対して、約０．００１〜１００重量％が好ましく、約１〜９５重量％がより好ましく、約１０〜９０重量％がさらにより好ましく、約３０〜８５重量％がさらにより好ましい。 The solid preparation is prepared by blending a pharmaceutically acceptable carrier or additive with a peptide or peptide mixture which is an active ingredient. For example, excipients such as sucrose, lactose, glucose, starch, mannitol; binders such as gum arabic, gelatin, crystalline cellulose, hydroxypropylcellulose, methylcellulose; disintegrants such as carmellose, starch; anhydrous citric acid Stabilizers such as sodium laurate and glycerol are blended. Further, it may be coated or encapsulated with gelatin, white sugar, gum arabic, carnauba wax or the like. The liquid preparation is prepared, for example, by dissolving or dispersing the peptide of the present invention in water, ethanol, glycerin, simple syrup, or a mixture thereof. In these preparations, additives such as sweeteners, preservatives, demulcents, diluents, buffers, flavoring agents, and coloring agents may be added.
The content of the peptide or peptide mixture in the liver dysfunction inhibitor is preferably about 0.001 to 100% by weight, more preferably about 1 to 95% by weight, based on the whole agent, in terms of dry weight. About 10 to 90% by weight is even more preferred, and about 30 to 85% by weight is even more preferred.
The content of the peptide or peptide mixture in the antioxidant is preferably about 0.001 to 100% by weight, more preferably about 1 to 95% by weight, more preferably about 1% to 95% by weight, based on the total weight of the agent. 10-90% by weight is even more preferred, and about 30-85% by weight is even more preferred.

医薬品製剤の使用方法
本発明の肝機能障害抑制剤の１日使用量は、対象者の症状、体重などによっても異なるが、有効成分であるペプチド又はペプチド混合物の乾燥重量に換算した１日使用量が、例えば約０．１〜２０ｇ、好ましくは約０．５〜１０ｇ、より好ましくは約１〜５ｇになるようにすればよい。
本発明の肝機能障害抑制剤は、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、肝臓癌などの肝臓疾患に罹患している人や、アルコール依存症の人、薬物依存症の人、肝炎ウィルス陽性の人など肝臓疾患になる可能性の高い人も好適な対象となる。
本発明の抗酸化剤の１日使用量は、対象者の症状、体重などによっても異なるが、有効成分であるペプチドの乾燥重量に換算した１日使用量が、例えば約０．１〜２０ｇ、好ましくは約０．５〜１０ｇ、より好ましくは約１〜５ｇになるようにすればよい。
本発明の抗酸化剤は、あらゆる疾患の治療剤の補助剤として使用できることから、どのような疾患の人も対象とすることができる。また、未病状態の人の発症予防にも有効であるため、これらの人も好適な対象となる。 Method of using pharmaceutical preparation The daily use amount of the liver dysfunction inhibitor of the present invention varies depending on the subject's symptoms, body weight, etc., but the daily use amount converted to the dry weight of the peptide or peptide mixture as the active ingredient For example, about 0.1 to 20 g, preferably about 0.5 to 10 g, more preferably about 1 to 5 g.
The liver dysfunction inhibitor of the present invention is a person suffering from liver diseases such as acute hepatitis, chronic hepatitis, cirrhosis, liver cancer, alcohol-dependent persons, drug-dependent persons, hepatitis virus-positive persons, etc. People who are highly likely to have liver disease are also suitable subjects.
The daily use amount of the antioxidant of the present invention varies depending on the subject's symptoms, body weight, etc., but the daily use amount converted to the dry weight of the peptide as the active ingredient is, for example, about 0.1 to 20 g, Preferably it may be about 0.5 to 10 g, more preferably about 1 to 5 g.
Since the antioxidant of the present invention can be used as an adjunct to a therapeutic agent for any disease, it can be used for persons with any disease. Moreover, since it is effective also in the onset prevention of the non-disease state person, these persons also become a suitable object.

（Ｖ）食品組成物
本発明の肝機能障害抑制剤、又は抗酸化剤が食品組成物である場合、この食品組成物は、上記ペプチド又はペプチド混合物を、乾燥重量に換算して、食品組成物全体に対して、例えば約０．００１〜１００重量％、好ましくは約１〜９５重量％、より好ましくは約１０〜９０重量％、さらにより好ましくは約３０〜８５重量％含んでいればよい。この食品組成物は、栄養補助食品（サプリメント）として用いるのに適している。また、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）として好適に使用できる。この食品組成物は、上記ペプチド又はペプチド混合物を上記範囲で含むことにより、無理なく摂取できる食品量中に、十分な肝機能障害抑制作用又は／及び十分な酸化抑制作用を示すペプチドが含まれることになる。 (V) Food composition When the liver dysfunction inhibitor or antioxidant of the present invention is a food composition, the food composition is obtained by converting the peptide or peptide mixture into a dry weight, and the food composition. For example, it may contain about 0.001 to 100% by weight, preferably about 1 to 95% by weight, more preferably about 10 to 90% by weight, and still more preferably about 30 to 85% by weight. This food composition is suitable for use as a dietary supplement (supplement). Moreover, it can be conveniently used as a health functional food (food for specified health use, nutritional functional food). This food composition contains the peptide or peptide mixture in the above range, so that the amount of food that can be taken without difficulty includes a peptide that exhibits a sufficient liver dysfunction inhibiting action and / or a sufficient oxidation inhibiting action. become.

この食品組成物は、食品に通常用いられる賦形剤または添加剤を配合して、錠剤、タブレット剤、丸剤、顆粒剤、散剤、粉剤、カプセル剤、水和剤、乳剤、液剤、エキス剤、またはエリキシル剤等の剤型に調製することができる。中でも、ペプチド粉末の劣化を防止できる点で、カプセル剤が好ましい。
食品に通常用いられる賦形剤としては、シロップ、アラビアゴム、ショ糖、乳糖、粉末還元麦芽糖、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、デンプン類、ゼラチン、ソルビット、トラガント、ポリビニルピロリドンのような結合剤；ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、ポリエチレングリコールのような潤沢剤；ジャガイモ澱粉のような崩壊剤；ラウリル硫酸ナトリウムのような湿潤剤等が挙げられる。添加剤としては、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤などが挙げられる。 This food composition is blended with excipients or additives usually used in foods, tablets, tablets, pills, granules, powders, powders, capsules, wettable powders, emulsions, liquids, extracts. Or a dosage form such as an elixir. Among these, capsules are preferable in that the deterioration of the peptide powder can be prevented.
Common excipients used in food include syrup, gum arabic, sucrose, lactose, powdered reduced maltose, cellulose sugar, mannitol, maltitol, dextran, starches, gelatin, sorbit, tragacanth, polyvinylpyrrolidone Agents; sucrose fatty acid esters, glycerin fatty acid esters, magnesium stearate, calcium stearate, talc, polyethylene glycol, etc .; disintegrants such as potato starch; wetting agents such as sodium lauryl sulfate. Examples of additives include fragrances, buffers, thickeners, colorants, stabilizers, emulsifiers, dispersants, suspending agents, preservatives, and the like.

また、この食品組成物は、汁物（味噌汁、吸い物、コーンスープ、ポテトスープ、コンソメスープ、たまごスープ、野菜スープ、カレー、シチュー）、飲料（スポーツ飲料、ドリンク剤、乳飲料、乳酸菌飲料、果汁飲料、炭酸飲料、野菜飲料、茶飲料等）、菓子類（クッキー等の焼き菓子、ゼリー、ガム、グミ、飴、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン等）を含むものであってもよい。中でも、毎日の食生活で無理なく摂取できるという点で汁物食品が好ましく、その中でも食習慣が確立している味噌汁が好ましい。
本発明には、(i)上記ペプチド又はペプチド混合物を含有する肝機能障害抑制用食品組成物、又は抗酸化用食品組成物、(ii)肝機能障害抑制用食品組成物、又は抗酸化用食品組成物の製造における上記ペプチド又はペプチド混合物の使用、(iii)上記ペプチド又はペプチド混合物を含有する肝機能障害抑制作用、又は抗酸化作用を有する食品組成物も包含される。
本発明の食品組成物の摂取量は、摂取者の健康状態、体重などによって異なるが、１日あたりの摂取量が、上記ペプチド又はペプチド混合物の乾燥重量に換算して、例えば約０．００１〜１０ｇ、好ましくは約０．０１〜５ｇ、より好ましくは約０．１〜２ｇとなる量とすればよい。上記ペプチド及びペプチド混合物は、米由来であるため、摂取しすぎても人体に害はなく、また長期継続摂取による副作用の心配もない。 In addition, this food composition includes soup (miso soup, soup, corn soup, potato soup, consommé soup, egg soup, vegetable soup, curry, stew) and beverages (sports drinks, drinks, milk drinks, lactic acid bacteria drinks, fruit juice drinks) , Carbonated beverages, vegetable beverages, tea beverages, etc.) and confectionery (baked confectionery such as cookies, jelly, gum, gummi, rice cake, yogurt, ice cream, pudding, etc.). Among these, soup foods are preferable in that they can be taken without difficulty in daily eating habits, and miso soup having established eating habits is particularly preferable.
In the present invention, (i) a food composition for suppressing liver dysfunction or a food composition for antioxidant containing the peptide or peptide mixture, (ii) a food composition for suppressing liver dysfunction, or a food for antioxidant Use of the peptide or peptide mixture in the manufacture of the composition, (iii) a food composition containing the peptide or peptide mixture and having a liver dysfunction inhibiting action or an antioxidant action are also included.
The intake amount of the food composition of the present invention varies depending on the health condition, body weight, etc. of the intake person, but the intake amount per day is, for example, about 0.001 to 0.001 in terms of the dry weight of the peptide or peptide mixture. The amount may be 10 g, preferably about 0.01 to 5 g, more preferably about 0.1 to 2 g. Since the above peptides and peptide mixtures are derived from rice, there is no harm to the human body even if they are consumed excessively, and there are no side effects due to long-term continuous intake.

（Ｖ）酸化防止方法
さらに、酒粕、米焼酎粕、加熱米、及び糠からなる群より選ばれる少なくとも1種の米原料をプロテアーゼ処理する工程を含む方法により得られるペプチド混合物、又はＴｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒからなる群より選ばれる少なくとも1種のペプチドは、医薬品、化粧品、食品などに添加することにより、それらの成分の酸化を防止することができる。即ち、本発明は、上記ペプチドを医薬品、化粧品、又は食品に添加する、医薬品、化粧品、又は食品の防止方法も提供する。
ペプチド又はペプチド混合物の使用量は、対象物の組成によって異なるが、乾燥重量に換算して、対象物全体に対して、例えば約０．００１〜１００重量％、好ましくは約１〜９５重量％、より好ましくは約１０〜９０重量％、さらにより好ましくは約３０〜８５重量％とすればよい。
[実施例] (V) Antioxidation method Furthermore, a peptide mixture obtained by a method comprising a step of subjecting at least one rice raw material selected from the group consisting of sake lees, rice shochu, heated rice, and koji to protease, or Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, and Leu-Lys By adding at least one peptide selected from the group consisting of -Tyr to pharmaceuticals, cosmetics, foods, etc., oxidation of those components can be prevented. That is, this invention also provides the prevention method of a pharmaceutical, cosmetics, or foodstuff which adds the said peptide to a pharmaceutical product, cosmetics, or foodstuff.
The amount of the peptide or peptide mixture to be used varies depending on the composition of the object, but in terms of dry weight, for example, about 0.001 to 100% by weight, preferably about 1 to 95% by weight, More preferably, it may be about 10 to 90% by weight, and even more preferably about 30 to 85% by weight.
[Example]

以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail based on an Example, this invention is not limited to these Examples.

酒粕分解ペプチド混合物の製造
酒粕６０ｋｇ（湿重量、固形分５８．４％）に水１２０Ｌを添加し十分に攪拌した。この混合物を５０℃に保温した状態でセルラーゼ（セルロイシンＴ２；エイチビィアイ社製）３０ｇとβ−アミラーゼ（ビオザイムＭ；天野エンザイム社製）３０ｇを添加し、５０℃で１６時間分解した。分解終了後、９０℃で１０分間加熱して反応を停止した。圧搾機（ＮＳＫエンジニアリング（株）；ＯＮＳ自動圧濾圧搾機500型）にて５kg/ｃｍ^２で３時間圧搾し、タンパク高含有酒粕４１．９ｋｇ（湿重量、固形分５６．８％）を得た。 Manufacture of a sake lees decomposition peptide mixture 120 L of water was added to 60 kg (wet weight, solid content 58.4%) of sake lees and stirred sufficiently. While maintaining this mixture at 50 ° C., 30 g of cellulase (Cellleucine T2; manufactured by HIBI) and 30 g of β-amylase (Biozyme M; manufactured by Amano Enzyme) were added and decomposed at 50 ° C. for 16 hours. After the decomposition, the reaction was stopped by heating at 90 ° C. for 10 minutes. It is squeezed at 5 kg / cm ² for 3 hours with a press (NSK Engineering Co., Ltd .; ONS automatic press filter press 500 type) to obtain 41.9 kg (wet weight, solid content 56.8%) of sake lees with high protein content. It was.

次いで、得られたタンパク高含有酒粕４１．９ｋｇに水１８０Ｌを加え、ＫＯＨでｐＨ６．８に調製し、よく攪拌した。５０℃に保温した状態で、中性プロテアーゼ（バチルス属細菌由来、プロテアーゼＮアマノＧ；天野エンザイム社製）２１０ｇを添加し、５０℃で１６時間分解した。さらに、ＨＣｌでｐＨ４．２に調製し、よく攪拌した後、酸性プロテアーゼ（アスペルギルス属菌由来、スミチームＡＰ；新日本化学工業社製）２５０ｇを添加して６０℃で２２時間さらに分解した。分解終了後、９０℃で１０分間加熱して反応を停止した。圧搾機（ＮＳＫエンジニアリング（株）、ＯＮＳ自動圧濾圧搾機 500型）にて５kg/ｃｍ^２で３時間圧搾し、ＡＣＥ阻害作用を有するペプチド混合液２００Ｌを得た。
得られたペプチド混合物を減圧濃縮法で濃縮し、さらにフリーズドライ法で粉末化した。減圧濃縮はロータリーエバポレーター（日本ビュッヒ株式会社製 RE121 Rotavapor：湯浴温度50℃、100rpm）とアスピレーター（ヤマト科学製 Neocool Aspirator BP-51：冷却温度5℃）を用いて行なった。フリーズドライは凍結乾燥機（EYELA 東京理化器械株式会社製 FDU-2100）を用いてマイナス８０℃、真空度０．４Paで粉末になるまで除湿乾燥させることにより行った。 Next, 180 L of water was added to 41.9 kg of the protein-rich sake lees obtained, adjusted to pH 6.8 with KOH, and stirred well. While maintaining the temperature at 50 ° C., 210 g of neutral protease (derived from the genus Bacillus, protease N Amano G; manufactured by Amano Enzyme) was added and decomposed at 50 ° C. for 16 hours. Furthermore, after adjusting to pH 4.2 with HCl and stirring well, 250 g of acidic protease (derived from Aspergillus sp., Sumiteam AP; manufactured by Shin Nippon Chemical Industry Co., Ltd.) was added and further decomposed at 60 ° C. for 22 hours. After the decomposition, the reaction was stopped by heating at 90 ° C. for 10 minutes. The mixture was squeezed at 5 kg / cm ² for 3 hours with a squeezing machine (NSK Engineering Co., Ltd., ONS automatic squeezing press 500 type) to obtain 200 L of a peptide mixture having an ACE inhibitory action.
The obtained peptide mixture was concentrated by a vacuum concentration method, and further powdered by a freeze-dry method. Concentration under reduced pressure was performed using a rotary evaporator (RE121 Rotavapor manufactured by Nihon Büch Co., Ltd .: hot water bath temperature 50 ° C., 100 rpm) and an aspirator (Neocool Aspirator BP-51 manufactured by Yamato Scientific Co., Ltd .: cooling temperature 5 ° C.). Freeze-drying was performed by dehumidifying and drying to a powder at −80 ° C. and a vacuum degree of 0.4 Pa using a freeze dryer (EYELA Tokyo Rika Kikai Co., Ltd. FDU-2100).

ペプチドの定量
上記ペプチド画分中に含まれるペプチドをＬＣ／ＭＳ分析法により定量した。分析条件を以下に示す。
＜ペプチド標準試料の測定＞
(ｉ)ペプチド標準溶液の調製
分取した各ペプチド、Ｔｈｒ−Ｔｒｐ（東レリサーチセンター社製）、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ（東レリサーチセンター社製）、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（シグマ社製）、Ｖａｌ−Ｔｙｒ（シグマ社製）、Ａｓｎ−Ｔｒｐ（東レリサーチセンター社製）、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（シグマ社製）、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（東レリサーチセンター社製）、Ａｒｇ−Ｐｈｅ（シグマ社製）、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ（国産化学社製）、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ（東レリサーチセンター社製）、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ（東レリサーチセンター社製）、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ（国産化学社製）、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ（国産化学社製）、Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ（東レリサーチセンター社製）、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ（東レリサーチセンター社製）、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（東レリサーチセンター社製）、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（東レリサーチセンター社製）、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ（ペプチド合成装置により自社製造）、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ（国産化学社製）、Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ（国産化学社製）、及びＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ（東レリサーチセンター社製）、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（ペプチド合成装置により自社製造）１０ｍｇをそれぞれ量り取り、水または0.1N塩酸水溶液を加え完全に溶解させ、１ｍｌに定容し、各々のペプチド標準溶液を作成した。 Peptide quantification Peptides contained in the peptide fraction were quantified by LC / MS analysis. The analysis conditions are shown below.
<Measurement of peptide standard sample>
(i) Preparation of peptide standard solution Each of the collected peptides, Thr-Trp (manufactured by Toray Research Center), Ile-Trp (manufactured by Toray Research Center), Pro-Tyr (manufactured by Sigma), Val-Tyr (Sigma) ), Asn-Trp (manufactured by Toray Research Center), Phe-Phe (manufactured by Sigma), Ile-Tyr (manufactured by Toray Research Center), Arg-Phe (manufactured by Sigma), Phe-Trp (domestic chemistry) Gln-Trp (manufactured by Toray Research Center), Ser-Trp (manufactured by Toray Research Center), Ile-Lys-Tyr (manufactured by Kokusan Kagaku), Leu-Lys-Tyr (manufactured by Kokusan Kagaku), Ile-Gln-Pro (manufactured by Toray Research Center), Leu-Gln-Pro (manufactured by Toray Research Center), Ile-Tyr-Pr (Manufactured by Toray Research Center), Phe-Pro-Pro (manufactured by Toray Research Center), Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr (manufactured by a peptide synthesizer), Val-Arg-Tyr (manufactured by Kokusan Kagaku Co.) , Val-Arg-Pro (manufactured by Kokusan Kagaku Co., Ltd.), Tyr-Lys-Pro (manufactured by Toray Research Center), Tyr-Gly-Gly-Tyr (manufactured in-house by a peptide synthesizer), 10 mg each, 0.1N hydrochloric acid aqueous solution was added to completely dissolve the solution, and the volume was adjusted to 1 ml to prepare each peptide standard solution.

(ｉｉ)内部標準物質溶液の調製
Ｎ−ｃａｒｂａｍｙｌ−Ｌ−Ａｒｇ（ＳＩＧＭＡ社製）１０ｍｇを量り取り、０．０６Ｎ塩酸水溶液１ｍｌで完全に溶解させ、内部標準原液とした。
(ｉｉｉ)標準溶液の調製
ペプチド標準溶液と内部標準原液を混合し、ペプチドと内部標準物質が各0.0１ｍｇ／ｍｌ、0.1ｍｇ／ｍｌになるよう各々のペプチド標準溶液を調製した。下記のＬＣ／ＭＳ分析条件により、ペプチドのＭＳピーク面積を測定した。
装置：Waters Alliance 2695-2996-ZQ4000(LC-フォトダイオードアレイ検出器-MS検出器)
カラム： Imtakt UK-C18 4.6×75mm
移動相：A液：0.05% HCOOH/水、B液：アセトニトリル（0-25%/0-7.5分、100%/7.5-8.5分）
注入量：10 μＬ
流速：1.0ｍｌ/分
カラム温度：35℃
検出条件：UV 190-300 nm
MS エレクトロスプレーイオン（ESI）法 positive ＳＩＲモード＋25V (ii) Preparation of internal standard substance solution 10 mg of N-carbamyl-L-Arg (manufactured by SIGMA) was weighed and completely dissolved in 1 ml of 0.06N hydrochloric acid aqueous solution to obtain an internal standard stock solution.
(iii) Preparation of standard solution The peptide standard solution and the internal standard stock solution were mixed, and each peptide standard solution was prepared so that the peptide and the internal standard substance would be 0.01 mg / ml and 0.1 mg / ml, respectively. The MS peak area of the peptide was measured under the following LC / MS analysis conditions.
Equipment: Waters Alliance 2695-2996-ZQ4000 (LC-photodiode array detector-MS detector)
Column: Imtakt UK-C18 4.6 × 75mm
Mobile phase: Liquid A: 0.05% HCOOH / water, liquid B: Acetonitrile (0-25% / 0-7.5 minutes, 100% / 7.5-8.5 minutes)
Injection volume: 10 μL
Flow rate: 1.0 ml / min Column temperature: 35 ° C
Detection condition: UV 190-300 nm
MS electrospray ion (ESI) method positive SIR mode + 25V

＜ペプチドの測定＞
酒粕ペプチドとして、実施例１で調製したペプチド混合物（以下、「酒粕ペプチド２」と称する。）、及び特許第３４１４７６１号公報（特許文献２）に記載の方法で得たペプチド混合物（以下、「酒粕ペプチド１」と称する。）を使用した。酒粕ペプチド１は、次の方法で調製した。即ち、液化液による清酒醸造法により米から清酒を醸造したときの酒粕（水分３６％）１０ｇを０．２ｌの水に懸濁し、大和化成製蛋白分解酵素（サモアーゼ）を０．２ｇ加え、３７℃で反応させた。その後沸騰水浴中で１０分間加熱した後５０００回転１０分間の遠心分離により溶解物を得、凍結乾燥によりペプチド画分を得た。

(ｉ) 酒粕ペプチド１０ｍｇを純水1ｍｌに溶解し、ペプチド水溶液とした。
(ｉｉ) ペプチド水溶液と内部標準原液と混合し、酒粕ペプチドと内部標準物質が各0.002ｇ／ｍｌ、0.1ｍｇ／ｍｌになるよう試料溶液を調製し、標準溶液の場合と同様に各ペプチドのMSピーク面積を測定した。
(ｉｉｉ) 得られたペプチドのMSピーク面積より、以下の式に従ってペプチド含有量を算出した。
試料のペプチド含有量（ｍｇ/g）＝
［標準溶液のペプチド濃度（mｇ/ml）×（試料溶液のペプチドピーク面積/試料のＩＳピーク面積）/（標準溶液のペプチドピーク面積/標準溶液のＩＳピーク面積）/試料のペプチド濃度（ｇ/ml）］ <Measurement of peptide>
As the sake lees peptide, the peptide mixture prepared in Example 1 (hereinafter referred to as “Sake lees peptide 2”) and the peptide mixture obtained by the method described in Japanese Patent No. 3447761 (Patent Literature 2) (hereinafter referred to as “Sake lees”). Used as peptide 1 ”). Sake lees peptide 1 was prepared by the following method. That is, 10 g of sake lees (moisture 36%) when sake was brewed from rice by the liquor brewing method was suspended in 0.2 l of water, 0.2 g of Daiwa Kasei's proteolytic enzyme (Samoase) was added, and 37 The reaction was carried out at ° C. Thereafter, the mixture was heated in a boiling water bath for 10 minutes, then centrifuged at 5000 rpm for 10 minutes to obtain a lysate, and freeze-dried to obtain a peptide fraction.

(i) 10 mg of sake cake peptide was dissolved in 1 ml of pure water to obtain a peptide aqueous solution.
(ii) Mix the peptide aqueous solution with the internal standard stock solution to prepare sample solutions so that the sake lees peptide and the internal standard substance are 0.002 g / ml and 0.1 mg / ml, respectively. The peak area was measured.
(iii) The peptide content was calculated from the MS peak area of the obtained peptide according to the following formula.
Sample peptide content (mg / g) =
[Peptide concentration of standard solution (mg / ml) × (peptide peak area of sample solution / IS peak area of sample) / (peptide peak area of standard solution / IS peak area of standard solution) / peptide concentration of sample (g / ml)]

＜結果＞
酒粕ペプチド１及び酒粕ペプチド２中の各ペプチドの含有量（ｗ／ｗ％）を以下の表２に示す。

<Result>
The content (w / w%) of each peptide in sake bottle peptide 1 and sake bottle peptide 2 is shown in Table 2 below.

肝機能障害抑制活性
＜細胞の前培養＞
ヒト肝臓細胞HepG2（HS研究資源バンク製）を、10％FBS入りのDMEM培地（大日本製薬製）に懸濁して、細胞密度2.0×10⁵個／mlに調製した。これを24穴培養プレートに1ウェルあたり500μlずつ播種して、5％CO₂気流下37℃で、コンフルエントになるまで７日間培養した。
＜肝障害モデルの作製＞
肝障害モデルを作製するため、イソアミルアルコールを添加することによって、細胞死を誘発させた。具体的には、まず、細胞を懸濁している培地をDMEM培地（FBS無し、フェノールレッド無し；大日本製薬製）500μｌに交換後、イソアミルアルコールを2.5μｌずつ、90分間隔で2回に分けて添加した。培地中のアルコール濃度を合計1.0％としてから（即ち、２回目のイソアミルアルコール添加直後から）１２０分間、細胞生存率を測定した。またアルコールを添加しない群をブランクとした。 Liver dysfunction inhibitory activity
<Pre-culture of cells>
Human liver cells HepG2 (manufactured by HS Research Resource Bank) were suspended in DMEM medium (manufactured by Dainippon Pharmaceutical) containing 10% FBS to prepare a cell density of 2.0 × 10 ⁵ cells / ml. This was seeded in a 24-well culture plate at 500 μl per well and cultured at 37 ° C. in a 5% CO ₂ stream until it became confluent for 7 days.
<Production of liver injury model>
To create a liver injury model, cell death was induced by adding isoamyl alcohol. Specifically, first, the medium in which the cells are suspended is replaced with 500 μl of DMEM medium (no FBS, no phenol red; manufactured by Dainippon Pharmaceutical), and then 2.5 μl of isoamyl alcohol is divided into two portions at 90-minute intervals. Added. The cell viability was measured for 120 minutes after the alcohol concentration in the medium was adjusted to 1.0% in total (that is, immediately after the second addition of isoamyl alcohol). Moreover, the group which does not add alcohol was made into the blank.

＜生細胞数の測定＞
市販の細胞数測定キット；Cell Counting Kit-8（同仁化学研究所製）を用いて、生細胞数を測定した。アルコール濃度を1.0％にしたのと同時に、本試薬溶液を1ウェルあたり5μｌ添加して、そのまま培養を続けた。120分後に細胞内酵素反応による試薬の発色を測定し、生細胞数の指標とした。吸光度の測定は、培地上清を100μｌずつマイクロプレートに採取し、プレートリーダーを用いて、450nmと600nmの２波長で行った。
＜細胞生存率の算出＞
まずアルコール無添加群（ブランク）では死滅が起こっていないとみなし、その生細胞数を各群共通の総細胞数と近似した。各群の生細胞数を、ブランクの総細胞数で割った値をもって、各群の細胞生存率とした。
細胞生存率（％）＝100×（被験区の吸光度450nm−被験区の吸光度600nm）
÷（ブランクの吸光度450nm−ブランクの吸光度600nm） <Measurement of the number of living cells>
The number of viable cells was measured using a commercially available cell count kit; Cell Counting Kit-8 (manufactured by Dojindo Laboratories). At the same time that the alcohol concentration was adjusted to 1.0%, 5 μl of this reagent solution was added per well, and the culture was continued as it was. 120 minutes later, color development of the reagent due to intracellular enzyme reaction was measured and used as an index of the number of living cells. Absorbance was measured by collecting 100 μl of the culture supernatant on a microplate and using a plate reader at two wavelengths of 450 nm and 600 nm.
<Calculation of cell viability>
First, it was considered that no death occurred in the alcohol-free group (blank), and the number of living cells was approximated to the total number of cells common to each group. The cell viability of each group was obtained by dividing the number of viable cells in each group by the total number of blank cells.
Cell viability (%) = 100 × (absorbance 450 nm of test area−absorbance 600 nm of test area)
÷ (Blank absorbance 450 nm-Blank absorbance 600 nm)

＜被験物質の添加＞
１．０％被験物質水溶液を調製し、アルコール添加の30分前に、無色無血清培地500μｌに対して10μｌ添加することによって、被験物質を最終濃度200ppmの添加とした。これによりアルコールによる生存率の低下がいかに抑制されるかを検討した。コントロールでは、被験物質の代わりに水のみを10μｌ添加した。尚、いずれの被験物とも本濃度において、Cell Counting Kit-8の着色反応そのものに影響しないことを事前に確認した。
＜被験物質＞
酒粕ペプチド１、酒粕ペプチド２、酒粕ペプチドに含有されるペプチド、並びにポジティブコントロールとしてグルタチオン、カルノシン、及びフェルラ酸を用いた。表３中のブランクはアルコール無添加細胞を用いたものであり、コントロールはペプチドを使用しなかったものである。 <Addition of test substance>
A test substance was added to a final concentration of 200 ppm by preparing a 1.0% aqueous test substance solution and adding 10 μl to 500 μl of a colorless serum-free medium 30 minutes before the addition of alcohol. This study examined how the decrease in survival rate due to alcohol was suppressed. In the control, 10 μl of water alone was added instead of the test substance. In addition, it was confirmed in advance that none of the test substances affected the coloring reaction itself of Cell Counting Kit-8 at this concentration.
<Test substance>
Sake lees peptide 1, liquor peptide 2, peptides contained in sake lees peptide, and glutathione, carnosine, and ferulic acid were used as positive controls. Blanks in Table 3 were obtained using cells without addition of alcohol, and controls were those using no peptide.

＜結果＞
結果を以下の表３に示す。

本発明のペプチド及びそれらの混合物は、極めて強い肝機能障害抑制活性を有することが分る。 <Result>
The results are shown in Table 3 below.

It can be seen that the peptides of the present invention and mixtures thereof have extremely strong liver dysfunction inhibiting activity.

抗酸化活性測定（リノール酸自動酸化抑制活性）
＜測定原理＞
リノール酸過酸化物が、β-カロテンの二重結合と反応することによって、β-カロテンの色（470nm）が消失する。被験物添加時の470nm退色抑制をもって、抗酸化活性と評価する（津志田ら；日食工誌、41(9)、611-618、1994）。
＜操作手順＞
(ｉ)リノール酸-β-カロテンエマルジョンの調製
15ml遠心チューブに、リノール酸（1％溶液/クロロホルム）80μｌ、Ｔｗｅｅｎ40（20％溶液/クロロホルム）40μｌ、β−カロテン（1％溶液/クロロホルム）20μｌを入れ、遠心エバポレーターで濃縮乾固した。乾固物に蒸留水4mlを加え、0.2M PBS（pH7.0）400μｌを添加し、必要最小限度の強さで撹拌して、リノール酸-β-カロテンエマルジョンを調製した。
(ｉｉ)退色反応
96穴マイクロプレートに、被験物溶液10μｌ、上記調製したエマルジョン190μｌ、470nmと600nmの2波長の吸光度を45℃で30分間自動計測し、反応速度を自動印字し、コントロールと被験区の反応速度から阻害活性％を計算した。 Antioxidant activity measurement (linoleic acid autooxidation inhibitory activity)
<Measurement principle>
Linoleic acid peroxide reacts with the β-carotene double bond, and the color of β-carotene (470 nm) disappears. Antioxidant activity is evaluated by suppressing the fading of 470 nm when the test substance is added (Tushida et al .; Eclipse Journal, 41 (9), 611-618, 1994).
<Operation procedure>
(i) Preparation of linoleic acid-β-carotene emulsion
In a 15 ml centrifuge tube, 80 μl of linoleic acid (1% solution / chloroform), 40 μl of Tween 40 (20% solution / chloroform) and 20 μl of β-carotene (1% solution / chloroform) were concentrated and dried with a centrifugal evaporator. A linoleic acid-β-carotene emulsion was prepared by adding 4 ml of distilled water to the dried product, adding 400 μl of 0.2M PBS (pH 7.0), and stirring with the minimum necessary strength.
(ii) Fading reaction
In a 96-well microplate, test solution 10 μl, the above prepared emulsion 190 μl, absorbance at 2 wavelengths of 470 nm and 600 nm are automatically measured for 30 minutes at 45 ° C., and the reaction rate is automatically printed. The% inhibitory activity was calculated.

＜被験物＞
上記酒粕ペプチド１、上記酒粕ペプチド２、酒粕ペプチドに含有されるＴｈｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ａｓｎ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｇｌｎ−Ｔｒｐ、Ｓｅｒ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、及びＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒを用いた。また、ポジティブコントロールとして、グルタチオン、フェルラ酸を用いた。 <Subject>
Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe- contained in the sake lees peptide 1, the sake lees peptide 2, and the sake lees peptide Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, and Leu-Lys-Tyr were used. Moreover, glutathione and ferulic acid were used as positive controls.

＜結果＞
結果を以下の表４に示す。

上記ペプチド及びペプチド混合物は強い抗酸化活性を示した。 <Result>
The results are shown in Table 4 below.

The peptides and peptide mixtures showed strong antioxidant activity.

マウス肝機能障害保護試験
“伊豆ら、日本醸造協会誌、101、893-899（2006）Biosci. Biotechnol. Biochem., 71(4) 951-957、2007”に従い試験を行った。以下、詳述する
＜マウス群構成＞
Balb/cマウス雄８週齢を１週間予備飼育の後、１群n=18（ブランク群のみｎ＝6）として４群とした。４群は、それぞれ、基本試料を摂取させたブランク群(肝機能障害を誘発しない)、基本試料を摂取させたコントロール群（肝機能障害を誘発する）、実施例１で得た酒粕ペプチド１を添加した基本試料を摂取させた酒粕ペプチド群（肝機能障害を誘発する）、及び液化粕を添加した基本試料を摂取させた酒粕群（肝機能障害を誘発する）である。
基本飼料は日本クレア製のCE-2を用いた。酒粕ペプチド、及び液化粕の基本試料への添加量は、それぞれ１０重量％とした。飼料は、６週間経口自由摂取させた。 The test was conducted according to the mouse liver dysfunction protection test “Izu et al., Japan Brewing Institute Journal, 101, 893-899 (2006) Biosci. Biotechnol. Biochem., 71 (4) 951-957, 2007”. The details are as follows.
<Mouse group composition>
Balb / c mice, 8 weeks old, were preliminarily raised for 1 week, and 1 group n = 18 (blank group only n = 6) was divided into 4 groups. The four groups were the blank group (does not induce liver dysfunction) ingested the basic sample, the control group (induced liver dysfunction) ingested the basic sample, and the sake lees peptide 1 obtained in Example 1, respectively. A rosacea peptide group (inducing liver dysfunction) ingested with the added basic sample, and a rosacea group (inducing liver dysfunction) ingested with the basic sample to which liquefied koji was added.
The basic feed used was CE-2 manufactured by CLEA Japan. The addition amount of the sake lees peptide and the liquefied lees into the basic sample was 10% by weight, respectively. The feed was orally ad libitum for 6 weeks.

＜肝障害誘発＞
肝機能障害を誘発するために、ブランク群をのぞく３つの群に対し、ガラクトサミン1200mg/Kgを、上記飼料摂取開始後、1週目、２週目、３週目、４週目、５週目、及び６週目の計６回腹腔内投与した。
＜血清分析＞
ガラクトサミン投与の24時間後に尾部採血をしたのち、血液を15000rpmで15分間遠心分離し、遠心上清を血清画分とした。血清画分を用いて肝障害マーカーであるGPT値、GOT値、LDH値を測定した。
なお、GPT、GOTは、肝細胞が障害を受けると肝細胞から血液などの中に流出する。従って、アルコール性肝障害、ウィルス性肝障害、薬物性肝障害、自己免疫低下による肝障害、慢性・急性肝炎、アルコール性脂肪肝などの肝障害ないしは肝臓疾患時にはGPT値、GOT値が高くなり、GPT値、GOT値の低下は、これらの疾患の抑制、改善、治癒などを示す。
また、LDHは、肝臓で生成した胆汁が胆管を通って十二指腸に分泌される通路に何らかの障害が発生すると、血清中濃度が上昇する酵素である。従って、胆石、胆道癌、肝臓癌などの場合、その他、自己免疫疾患による肝障害、薬物性肝障害などの場合に、血清中LDH値が上昇し、LDH値の低下は、これらの疾患の抑制、改善、治癒などを示す。 <Hepatopathy induction>
In order to induce liver dysfunction, galactosamine 1200mg / Kg was applied to the three groups except the blank group in the 1st, 2nd, 3rd, 4th, 5th weeks after the start of the above feed intake. And a total of 6 intraperitoneal administrations at 6 weeks.
<Serum analysis>
Tail blood was collected 24 hours after galactosamine administration, and the blood was centrifuged at 15000 rpm for 15 minutes, and the centrifuged supernatant was used as a serum fraction. The serum fraction was used to measure GPT, GOT, and LDH levels, which are liver injury markers.
Note that GPT and GOT flow from hepatocytes into blood when hepatocytes are damaged. Therefore, alcoholic liver disorder, viral liver disorder, drug-induced liver disorder, liver disorder due to decreased autoimmunity, chronic / acute hepatitis, liver disorders such as alcoholic fatty liver or liver disease, GPT value, GOT value is high, A decrease in GPT value or GOT value indicates suppression, improvement or cure of these diseases.
LDH is an enzyme that increases in serum concentration when some disturbance occurs in the passage of bile produced in the liver through the bile duct and secreted into the duodenum. Therefore, in cases of gallstones, biliary tract cancer, liver cancer, etc., and in other cases such as liver damage due to autoimmune disease, drug-induced liver damage, etc., serum LDH levels increase, and a decrease in LDH levels is a suppression of these diseases. Show improvement, healing, etc.

(i)GOT測定
トランスアミナーゼ CII−テストワコー（和光純薬製）キットを用い、その添付マニュアルに従って血清中GOT濃度を測定した。具体的には、GOT用酵素液（ピルビン酸オキシダーゼ５．４単位/mL、オキサロ酢酸脱炭酸酵素14単位/ML、4-アミノアンチピリン 2.0mmol/L、アスコルビン酸オキシダーゼ 0.90単位/L、カタラーゼ270単位/mL）と発色剤（ペルオキシダーゼ5.9単位/ｍL）を等量添加したものをGOT用基質発色液とした。GOT用基質発色液0.5mLを37℃で5分間加温した後、血清試料0.02mLを添加し、37℃で正確に20分間加温した後、反応停止液を2.0mL添加し、混和後、吸光度555nmを測定した。
GOT活性値は下記の式から算出した。
GOT活性値（Karmen単位）
＝[サンプル吸光度（Es）／スタンダード吸光度（Estd）]×100 (i) GOT measurement Using a transaminase CII-Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) kit, the serum GOT concentration was measured according to the attached manual. Specifically, GOT enzyme solution (pyruvate oxidase 5.4 units / mL, oxaloacetate decarboxylase 14 units / ML, 4-aminoantipyrine 2.0 mmol / L, ascorbate oxidase 0.90 units / L, catalase 270 units / mL) and a color developing agent (peroxidase 5.9 units / mL) added in equal amounts were used as GOT substrate coloring solution. Heat 0.5 mL of GOT substrate coloring solution for 5 minutes at 37 ° C, then add 0.02 mL of serum sample, warm for exactly 20 minutes at 37 ° C, add 2.0 mL of reaction stop solution, mix, Absorbance was measured at 555 nm.
The GOT activity value was calculated from the following formula.
GOT activity value (Karmen unit)
= [Sample absorbance (Es) / standard absorbance (Estd)] x 100

(ii)GPT測定
トランスアミナーゼ CII−テストワコー（和光純薬製）キットを用い、その添付マニュアルに従って血清中GOT濃度を測定した。具体的には、GPT用酵素液（ピルビン酸オキシダーゼ５．４単位/mL、4-アミノアンチピリン 2.0mmol/L、アスコルビン酸オキシダーゼ 0.90単位/L、カタラーゼ270単位/mL）と発色剤（ペルオキシダーゼ5.9単位/mL）を等量添加したものをGPT用基質発色液とした。GPT用基質発色液0.5mLを37℃で5分間加温した後、血清試料0.02mLを添加し、37℃で正確に20分間加温した後、反応停止液（クエン酸 50mmol/L）を2.0mL添加し、混和後、吸光度555nmを測定した。
GPT活性値は下記の式から算出した。
GPT活性値（Karmen単位）
＝[サンプル吸光度（Es）／スタンダード吸光度（Estd）]×100 (ii) GPT measurement The transaminase CII-Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) kit was used, and the serum GOT concentration was measured according to the attached manual. Specifically, GPT enzyme solution (pyruvate oxidase 5.4 units / mL, 4-aminoantipyrine 2.0 mmol / L, ascorbate oxidase 0.90 units / L, catalase 270 units / mL) and color former (peroxidase 5.9 units) / mL) was added as an equivalent amount of GPT substrate coloring solution. Heat 0.5 mL of GPT substrate coloring solution at 37 ° C for 5 minutes, add 0.02 mL of serum sample, and warm accurately at 37 ° C for 20 minutes. Then, stop the reaction solution (citric acid 50 mmol / L) in 2.0. After adding mL and mixing, the absorbance at 555 nm was measured.
The GPT activity value was calculated from the following formula.
GPT activity value (Karmen unit)
= [Sample absorbance (Es) / standard absorbance (Estd)] x 100

(iii)LDH測定
MTX-LDH（極東製薬工業株式会社製）キットを用い、その添付マニュアルに従って血清中GOT濃度を測定した。具体的には、96穴マイクロプレートに血清を50μL分注し、基質発色試薬（3.7mg/5mlニトロテトラゾリウムブルー）を50μL添加後、37℃で正確に30分間反応をさせた。反応停止液を100μL分注し混和した後、90分以内に、マイクロプレートリーダーにて波長560nmで、試薬ブランクに対する吸光度を測定した。LDH濃度はスタンダードの吸光度から算出した。 (iii) LDH measurement
Serum GOT concentration was measured using an MTX-LDH (Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) kit according to the attached manual. Specifically, 50 μL of serum was dispensed into a 96-well microplate, and 50 μL of a substrate coloring reagent (3.7 mg / 5 ml nitrotetrazolium blue) was added, followed by reaction at 37 ° C. for exactly 30 minutes. After 100 μL of the reaction stop solution was dispensed and mixed, the absorbance of the reagent blank was measured with a microplate reader at a wavelength of 560 nm within 90 minutes. The LDH concentration was calculated from the absorbance of the standard.

＜結果＞
試験開始（被験試料の摂取開始）４週間後のGOT活性値及びGPT活性値を図１に示し、試験開始６週間後のGOT活性値及びGPT活性値を図２に示す。また、試験開始４週間後のLDH値を図３に示し、試験開始６週間後のLDH値を図４に示す。
また、試験開始２〜６週間後の血清GOT値、血清GPT値、及び血清LDH値を、後掲の表５〜７にそれぞれ示す。
(i)GOT測定結果
血清GOT値は、試験（被験試料の摂取）開始２週間後から、コントロール群がブランク群に比べて上昇し始めた。試験開始４週間後より、酒粕ペプチド投与群のGOT値が、コントロール群のGOT値に比べて有意に低くなり始め（T検定片側）、６週間後にも、酒粕ペプチド投与群の血清GOT値とコントロール群の血清GOT値との間に、有意差が認められた（T検定両側およびDunnett検定；ｐ＜0.05）。試験開始６週間後には、酒粕投与群でも血清GOT値の抑制傾向が見られたが、コントロール群に対して有意差は認められなかった。
このように、本発明の酒粕ペプチドは、血清GOT値を有意に低下させ、その低下効果は液化粕に比べて高かった。 <Result>
The GOT activity value and GPT activity value 4 weeks after the start of the test (start of ingestion of the test sample) are shown in FIG. 1, and the GOT activity value and GPT activity value 6 weeks after the start of the test are shown in FIG. Moreover, the LDH value 4 weeks after the start of the test is shown in FIG. 3, and the LDH value 6 weeks after the start of the test is shown in FIG.
Moreover, the serum GOT value, the serum GPT value, and the serum LDH value 2 to 6 weeks after the start of the test are shown in Tables 5 to 7 below, respectively.
(i) GOT measurement results The serum GOT value started to increase in the control group compared to the blank group 2 weeks after the start of the test (ingestion of the test sample). From 4 weeks after the start of the test, the GOT value in the sake-dose peptide administration group began to become significantly lower than the GOT value in the control group (one side of the T test), and 6 weeks later, the serum GOT value in the sake-dose peptide administration group and the control Significant differences were observed between the group serum GOT values (T-test two-sided and Dunnett test; p <0.05). Six weeks after the start of the test, a tendency to suppress the serum GOT value was also observed in the alcoholic beverage administration group, but no significant difference was observed with respect to the control group.
Thus, the sake lees peptide of the present invention significantly reduced the serum GOT value, and the reduction effect was higher than that of liquefied koji.

(ii)GPT測定結果
血清GPT値は、試験（被験試料の摂取）開始２週間後より、コントロール群がブランク群に比べて上昇し始めた。
試験開始２週間後より、酒粕ペプチド投与群のGPT値がコントロール群のGPT値より低くなり始め、試験開始６週間後には、酒粕ペプチド投与群とコントロール群との間に有意差が認められた（T検定両側およびDunnett検定；ｐ＜0.05）。試験開始６週間後には、酒粕投与群でも血清GPT値の抑制傾向が見られたが、コントロール群に対して有意差は認められなかった。
このように、本発明の酒粕ペプチドは、血清GPT値を有意に低下させ、その低下効果は液化粕に比べて高かった。 (ii) GPT measurement result The serum GPT value started to increase in the control group compared to the blank group 2 weeks after the start of the test (ingestion of the test sample).
From 2 weeks after the start of the test, the GPT value of the rosacea peptide administration group began to be lower than the GPT value of the control group, and after 6 weeks of the test, a significant difference was observed between the rosacea peptide administration group and the control group ( T-test two-sided and Dunnett test; p <0.05). Six weeks after the start of the test, a tendency to suppress the serum GPT value was also observed in the alcoholic beverage administration group, but no significant difference was observed with respect to the control group.
Thus, the sake lees peptide of the present invention significantly reduced the serum GPT value, and the reduction effect was higher than that of liquefied koji.

(iii)LDH測定結果
血清LDH値は、試験開始３週間後より、コントロール群がブランク群に比べて上昇し始めた。
試験開始４週間後より、酒粕ペプチド投与群のLDH値がコントロール群のLDH値に
比べて低くなり始め、試験開始４週間後、及び６週間後に、コントロール群との間に有意差が認められた（T検定片側）。一方、全試験期間において、酒粕投与群のLDH値はコントロール群のLDH値とほぼ同等であった。
このように、本発明の酒粕ペプチドは、血清LDH値を有意に低下させた。これに対して、液化粕には血清LDH低下作用は全く認められなかった。 (iii) Results of LDH measurement Serum LDH levels began to rise in the control group compared to the blank group 3 weeks after the start of the test.
From 4 weeks after the start of the study, the LDH value of the sake lees peptide administration group began to become lower than the LDH value of the control group, and a significant difference was observed between the control group and 4 weeks and 6 weeks after the start of the study. (T test one side). On the other hand, the LDH value in the sake lees administration group was almost equivalent to the LDH value in the control group during the entire test period.
Thus, the sake lees peptide of the present invention significantly reduced serum LDH levels. In contrast, liquefied sputum had no serum LDH lowering effect.

処方例
以下に、本発明の食品組成物の処方例を示す。
＜処方例１クッキー＞
小麦粉（薄力粉）１００ｇ、ベーキングパウダー２．５ｇ、食塩１．５ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）1ｇを配合し、これにバター４０ｇとミルク５０ｇを加え、これをオーブンで１８０℃、１０分間焼き上げ、抗酸化クッキーを得た。得られたクッキーには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.02ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例２ゼリー＞
ゼラチン５ｇ、ショ糖２０ｇ、水５０ｇから膨潤ゼラチンを作る。プレーンヨーグルト１４０ｇにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.5ｇを加え、上記膨潤ゼラチンを加えて冷やす。これを固めて抗酸化ゼリーを得た。得られたゼリーには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.01ｍｇ/g含まれていた。
＜処方例３アイスクリーム＞
牛乳１２００ｇ、生クリーム３１０ｇ、上白糖３００ｇ、脱脂粉乳６０ｇ、脱脂卵黄蛋白分解物１ｇ、増粘安定剤６ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）4ｇに水を加えて全量２０００ｍｌにして溶解した。これを８０℃まで加熱した後、ホモミキサーで予備乳化し、引き続きホモゲナイズした。冷却し熟成させた後バニラエッセンス２ｇを加えフリージングを行った。その後−４０℃まで急冷して抗酸化アイスクリームを得た。得られたアイスクリームには酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.01ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例４羊羹＞
糸寒天７．５ｇを溶かし、これに小豆飴６６０ｇ、グラニュー糖３００ｇ、水５５０ｍｌ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）15ｇを混ぜて溶かして煮詰め、冷やして抗酸化羊羹を得た。得られた羊羹には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.05ｍｇ/gが含まれていた。 Formulation Examples Formulation examples of the food composition of the present invention are shown below.
<Prescription Example 1 Cookie>
100 g of wheat flour (weak flour), 2.5 g baking powder, 1.5 g sodium chloride, 1 g peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2), 40 g butter and 50 g milk are added to this, and this is 180 ° C. in an oven. Baked for 10 minutes to obtain an antioxidant cookie. The obtained cookie contained 0.02 mg / g of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 2 Jelly>
Swelled gelatin is made from 5 g of gelatin, 20 g of sucrose, and 50 g of water. To 140 g of plain yogurt, add 0.5 g of the peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2), add the above swollen gelatin and cool. This was hardened to obtain an antioxidant jelly. The obtained jelly contained 0.01 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 3 Ice Cream>
Add milk to 1200 g of milk, 310 g of fresh cream, 300 g of super white sugar, 60 g of skim milk powder, 1 g of defatted egg yolk proteolysate, 6 g of thickening stabilizer, 4 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) to make a total volume of 2000 ml. Dissolved. This was heated to 80 ° C., pre-emulsified with a homomixer, and then homogenized. After cooling and aging, 2 g of vanilla essence was added and freezing was performed. Thereafter, it was rapidly cooled to −40 ° C. to obtain an antioxidant ice cream. The obtained ice cream contained 0.01 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 4 Yokan>
7.5 g of thread agar was dissolved, 660 g of red soybean cake, 300 g of granulated sugar, 550 ml of water, and 15 g of a peptide mixture (sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2) were mixed, dissolved, boiled and cooled to obtain an antioxidant sheep. The obtained yokan contained 0.05 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.

＜処方例５ヨーグルト＞
２０％脱脂乳を１２０℃で、３秒間殺菌した後、ストレプトコッカサス・サーモフィルス及びラクトバチルス・カゼイの種菌を培養してヨーグルトベース４００ｇを得た。さらに砂糖７０ｇ、ペクチン３ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）1ｇを水に溶解させ、上記のヨーグルトベースとシロップを混合し、香料１ｇを添加した後、均質化して、抗酸化ヨーグルトを得た。得られたヨーグルトには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.01ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例６牛乳＞
牛乳１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを入れてよく攪拌し、抗酸化牛乳を得た。得られた牛乳には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.005ｍｇ/ｍｌ含まれていた。
＜処方例７チョコレート＞
カカオマス２５ｇ、カカオバター１５ｇ、全脂粉乳１５ｇ、粉砂糖３０ｇ、粉ミルク１５ｇとペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）1ｇを混和し、４５℃で暖めた後に冷却し、抗酸化チョコレートを得た。えられたチョコレートには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.04ｍｇ/ｇふくまれていた。
＜処方例９マヨネーズ＞
卵黄２０ｇに食塩２．５ｇ、ショ糖１．５ｇ、マスタード１．５ｇ、胡椒０．１ｇ、レモン汁５ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）4ｇを加え、これに酢１０ｇとサラダ油１６０ｇとを加えてよく攪拌して抗酸化マヨネーズを得た。得られたマヨネーズには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.10ｍｇ/ｇ含まれていた。 <Prescription Example 5 Yogurt>
After 20% skim milk was sterilized at 120 ° C. for 3 seconds, inoculums of Streptococcus thermophilus and Lactobacillus casei were cultured to obtain 400 g of yogurt base. Furthermore, 70 g of sugar, 3 g of pectin, and 1 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) are dissolved in water, the above yogurt base and syrup are mixed, 1 g of fragrance is added, and then homogenized and antioxidant yogurt Got. The obtained yogurt contained 0.01 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 6 Milk>
Antioxidant milk was obtained by adding 0.1 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) to 100 ml of milk and stirring well. The obtained milk contained 0.005 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 7 Chocolate>
Mix cacao mass 25g, cacao butter 15g, full fat powdered milk 15g, powdered sugar 30g, powdered milk 15g and 1g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2), warm at 45 ° C and cool to obtain antioxidant chocolate It was. The chocolate obtained contained 0.04 mg / g of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 9 Mayonnaise>
To 20 g of egg yolk, add 2.5 g of salt, 1.5 g of sucrose, 1.5 g of mustard, 0.1 g of pepper, 5 g of lemon juice, 4 g of a peptide mixture (sake peptide 1 or 2), 10 g of vinegar and salad oil 160 g was added and stirred well to obtain antioxidant mayonnaise. The obtained mayonnaise contained 0.10 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.

＜処方例１０ケチャップ＞
トマト１Ｋｇ皮をむいてミキサーにかけ、加熱して煮詰めた後、すりおろしたタマネギ１０ｇ、ニンニク３ｇを加え、さらに砂糖１０ｇ、塩２ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）２２ｇを加え、弱火にして香辛料（シナモンスティック、クローブ、胡椒、唐辛子）１ｇ、酢を３０ｇ加え、一度加熱した後、冷まして抗酸化ケチャップを得た。得られたケチャップは、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.12ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例１１カレールウ＞
小麦粉（薄力粉）１２５ｇ、バター１００ｇ、カレー粉２０ｇとペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）2.5ｇに少量の水を加えて混合し、固めて抗酸化カレールウを得た。得られたカレールウには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.05ｍｇ／g含まれていた。
＜処方例１２蒲鉾＞
魚のすり身１００ｇ、マッシュポテト１０ｇ、小麦粉５ｇ、卵白５０ｇ、塩２ｇ、砂糖０．２ｇ、みりん１０ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.8ｇを加えこれらを混ぜてペースト状にし、蒸し器で蒸して抗酸化蒲鉾を得た。得られた蒲鉾には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.02ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例１３佃煮＞
戻した昆布２５ｇ、かつおだし１５０ｍｌ、砂糖１５ｇ、醤油１５ｇ、酢１０ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）1ｇを混合し、沸騰させてから中火で煮詰めて抗酸化佃煮を得た。得られた佃煮には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.03ｍｇ/ｇ含まれていた。 <Prescription Example 10 Ketchup>
Tomato 1Kg peeled, put on a mixer, heated and boiled, added 10g of grated onion and 3g of garlic, then added 10g of sugar, 2g of salt, 22g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2), Slowly heat, add 1 g of spices (cinnamon sticks, cloves, pepper, chili) and 30 g of vinegar, heat once, cool and obtain antioxidant ketchup. The obtained ketchup contained 0.12 mg / g of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 11 Carreau>
A small amount of water was added to and mixed with 125 g of wheat flour (weak flour), 100 g of butter, 20 g of curry powder and 2.5 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2), and solidified to obtain antioxidant curry roux. The resulting curry roux contained 0.05 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 12>
Add fish surimi 100g, mashed potato 10g, flour 5g, egg white 50g, salt 2g, sugar 0.2g, mirin 10g, peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) 0.8g and mix them into a paste, steamer Steamed to obtain antioxidant soot. The obtained koji contained 0.02 mg / g of sake koji peptide 1 or koji peptide 2.
<Prescription example 13
25g returned kelp, 150ml bonito dashi, 15g sugar, 15g soy sauce, 10g vinegar, 1g peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2) were mixed and boiled, then boiled over medium heat to obtain anti-oxidant koji . The obtained boiled sake contained 0.03 mg / g of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.

＜処方例１４米飯＞
白米１５０ｇ、水２２０ｇとペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.7ｇを混合し、炊飯器で炊き上げ、抗酸化米飯を得た。得られた米飯には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.01ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例１５うどん麺＞
水４００ｇ、塩５０ｇを混合して塩を溶かし、これに小麦粉（中力粉）１０００ｇ、ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）3ｇを混ぜ、よくこねた。固まったらこれをよく伸ばし、５ｍｍ幅にきった。これを１０分茹でて、その後冷やして抗酸化うどん麺を得た、得られたうどん麺には酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.01ｍｇ/ｇ含まれていた。
＜処方例１６清酒＞
清酒１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化清酒を得た。得られた清酒には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.005ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例１７焼酎＞
焼酎１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化焼酎を得た。得られた焼酎には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.05ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例１８ワイン＞
ワイン１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化ワインを得た。得られたワインには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.05ｍｇ/ｍｌが含まれていた。 <Prescription Example 14 Rice>
150 g of white rice, 220 g of water and 0.7 g of a peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) were mixed and cooked in a rice cooker to obtain antioxidant rice. The resulting cooked rice contained 0.01 mg / g of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 15 Udon noodles>
400 g of water and 50 g of salt were mixed to dissolve the salt, and 1000 g of flour (medium flour) and 3 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2) were mixed and kneaded well. When solidified, this was stretched well and cut to a width of 5 mm. This was boiled for 10 minutes and then cooled to obtain antioxidant udon noodles. The obtained udon noodles contained 0.01 mg / g of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 16 Sake>
To 100 ml of sake, 0.1 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant sake. The obtained sake contained 0.005 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 17 Shochu>
To 100 ml of shochu, 0.1 g of peptide mixture (sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant shochu. The obtained shochu contained 0.05 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 18 Wine>
Antioxidant wine was obtained by adding 0.1 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) to 100 ml of wine and stirring well. The resulting wine contained 0.05 mg / ml of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.

＜処方例１９ビール＞
ビール１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.05ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化ビールを得た。得られたビールには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.025ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２０ウイスキー＞
ウイスキー１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.2ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化ウイスキーを得た。得られたウイスキーには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.010ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２１ブランデー＞
ブランデー１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.2ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化ブランデーを得た。得られたブランデーには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.010ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２２スピリッツ＞
スピリッツ１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.2ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化スピリッツを得た。得られたスピリッツには、酒粕ペプチド２が0.010ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２３リキュール＞
リキュール１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化リキュールを得た。得られたリキュールには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.005ｍｇ/ｍｌが含まれていた。 <Prescription Example 19 Beer>
To 100 ml of beer, 0.05 g of a peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant beer. The obtained beer contained 0.025 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 20 Whiskey>
Antioxidant whiskey was obtained by adding 0.2 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) to 100 ml of whiskey and stirring well. The obtained whiskey contained 0.010 mg / ml of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 21 Brandy>
To 100 ml of brandy, 0.2 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant brandy. The obtained brandy contained 0.010 mg / ml of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 22 Spirits>
Antioxidant spirits were obtained by adding 0.2 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) to 100 ml of spirits and stirring well. The obtained spirit contained 0.010 mg / ml of sake lees peptide 2.
<Prescription Example 23 Liqueur>
To 100 ml of liqueur, 0.1 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant liqueur. The obtained liqueur contained 0.005 mg / ml of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.

＜処方例２４みりん＞
みりん１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化みりんを得た。得られたみりんには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.05ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２５茶＞
お茶１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.05ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化お茶を得た。得られたお茶には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.002ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２６コーヒー＞
コーヒー１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化コーヒーを得た。得られたコーヒーには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.005ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２７スポーツドリンク＞
水１００ｍｌ、果糖５ｇ、ショ糖２ｇ、クエン酸０．３ｇ、ナトリウム２０ｍｇ、カルシウム２ｍｇ、カリウム２０ｍｇ、アルギニン２０ｍｇ、イソロイシン１０mg、バリン１０ｍｇ、ロイシン１０ｍｇ、ビタミンＣ１００ｍｇ、β―カロチン１ｍｇにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.05ｇを加え、よく攪拌して抗酸化ウイスキーを得た。得られたスポーツドリンクには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.002ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例２８清涼飲料水＞
バレンシアオレンジ果汁３０ｍｌ、レモン果汁３ｍｌ、果糖１．５ｇ、クエン酸０．５ｇ、ビタミンＣ１００ｍｇにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.05ｇを加え、これに水を加えて１００ｍｌとし、よく攪拌した後に炭酸ガスを封入し、抗酸化清涼飲料水を得た。得られた清涼飲料水には、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.002ｍｇ/ｍｌが含まれていた。 <Prescription Example 24 Mirin>
To 100 ml of mirin, 1 g of a peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) was added and stirred well to obtain antioxidant mirin. The obtained mirin contained 0.05 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 25 Tea>
To 100 ml of tea, 0.05 g of a peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant tea. The obtained tea contained 0.002 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 26 Coffee>
To 100 ml of coffee, 0.1 g of a peptide mixture (sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2) was added and stirred well to obtain antioxidant coffee. The obtained coffee contained 0.005 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.
<Prescription Example 27 Sports Drink>
100 ml of water, 5 g of fructose, 2 g of sucrose, 0.3 g of citric acid, sodium 20 mg, calcium 2 mg, potassium 20 mg, arginine 20 mg, isoleucine 10 mg, valine 10 mg, leucine 10 mg, vitamin C 100 mg, β-carotene 1 mg 1 or liquor peptide 2) 0.05 g was added and stirred well to obtain antioxidant whiskey. The obtained sports drink contained 0.002 mg / ml of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 28 Soft Drinks>
Add 30g of Valencia orange juice, 3ml of lemon juice, 1.5g of fructose, 0.5g of citric acid, 100mg of vitamin C and 0.05g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2), add water to make 100ml, After stirring, carbon dioxide gas was sealed to obtain an antioxidant soft drink. The obtained soft drink contained 0.002 mg / ml of sake cake peptide 1 or sake cake peptide 2.

＜処方例２９スープ＞
ポタージュスープ１００ｍｌにペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）0.1ｇを加え、よく攪拌して、抗酸化スープを得た。得られたスープには、酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２が0.005ｍｇ/ｍｌが含まれていた。
＜処方例３０錠剤＞
ペプチド混合物（酒粕ペプチド１、又は酒粕ペプチド２）８５％、結晶セルロース１４％に増粘剤１％を含む錠剤を作製した。酒粕ペプチド１又は酒粕ペプチド２が0.85g/g含まれていた。 <Prescription Example 29 Soup>
To 100 ml of potage soup, 0.1 g of peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2) was added and stirred well to obtain an antioxidant soup. The resulting soup contained 0.005 mg / ml of sake lees peptide 1 or sake lees peptide 2.
<Prescription Example 30 Tablet>
A tablet containing 85% peptide mixture (sake lees peptide 1 or liquor peptide 2), 14% crystalline cellulose and 1% thickener was prepared. Sake lees peptide 1 or liquor peptide 2 was contained at 0.85 g / g.

本発明で使用する酒粕ペプチドは、肝機能障害を効果的に抑制するので、医薬、保健機能食品などとして好適に使用できる。また、抗酸化作用にも優れるため、医薬、保健機能食品などとして好適に使用できるとともに、医薬品、食品、化粧品などの酸化防止に好適に使用できる。 Since the sake lees peptide used in the present invention effectively suppresses liver dysfunction, it can be suitably used as a medicine, health functional food or the like. Moreover, since it is excellent also in an antioxidant effect | action, while being able to use suitably as a medicine, a health functional food, etc., it can be used conveniently for oxidation prevention of a pharmaceutical, foodstuff, cosmetics, etc.

Claims

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -Liver dysfunction inhibitor (except food) comprising at least one peptide selected from the group consisting of Gly-Gly-Tyr.

Liver dysfunction is alcoholic liver disorder, viral liver disorder, drug-induced liver disorder, liver disorder due to decreased autoimmunity, liver disorder due to autoimmune disease, chronic or acute hepatitis, alcoholic fatty liver, gallstone, cirrhosis, biliary tract cancer The liver dysfunction inhibitor (except food) according to claim 1, which is selected from the group consisting of, and liver cancer.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, And an antioxidant (except food) comprising at least one peptide selected from the group consisting of Leu-Lys-Tyr.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, And a method for preventing oxidation of a pharmaceutical product or cosmetic, comprising a step of adding at least one peptide selected from the group consisting of Leu-Lys-Tyr to the pharmaceutical product or cosmetic.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr A food composition for inhibiting liver dysfunction, comprising 0.001 to 100% by weight of at least one peptide selected from the group consisting of -Gly-Gly-Tyr, in terms of dry weight, based on the total composition .

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -Containing at least one peptide selected from the group consisting of Gly-Gly-Tyr, tablets, tablets, pills, granules, powders, powders, capsules, wettable powders, emulsions, liquids, extracts, or A food composition for suppressing hepatic dysfunction prepared in an elixir dosage form.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -Liver dysfunction comprising at least one peptide selected from the group consisting of -Gly-Gly-Tyr and ingested so that the daily intake in terms of dry weight of this peptide is 0.001-10 g Inhibitory food composition.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -Antioxidant food composition containing 0.001 to 100 wt% of at least one peptide selected from the group consisting of Gly-Gly-Tyr, in terms of dry weight, with respect to the entire composition.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -Containing at least one peptide selected from the group consisting of Gly-Gly-Tyr, tablets, tablets, pills, granules, powders, powders, capsules, wettable powders, emulsions, liquids, extracts, or An antioxidant food composition prepared in an elixir form.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, Leu-Lys- Tyr, Leu-Gln-Pro, Ile-Tyr-Pro, Phe-Pro-Pro, Ile-Tyr-Pro-Arg-Tyr, Val-Arg-Tyr, Val-Arg-Pro, and Tyr-Lys-Pro, Tyr -It contains at least one peptide selected from the group consisting of -Gly-Gly-Tyr, and is ingested so that the daily intake in terms of dry weight of this peptide is 0.001 to 10 g. Food composition.

Thr-Trp, Ile-Trp, Pro-Tyr, Val-Tyr, Asn-Trp, Phe-Phe, Ile-Tyr, Arg-Phe, Phe-Trp, Gln-Trp, Ser-Trp, Ile-Lys-Tyr, And at least one peptide selected from the group consisting of Leu-Lys-Tyr, to an object selected from the group consisting of pharmaceuticals, foods, and cosmetics, converted to dry weight for the entire object, A method for preventing oxidation of pharmaceuticals, foods or cosmetics, comprising a step of adding 0.001 to 100% by weight.