JP2014009212A

JP2014009212A - Collagen production promoter

Info

Publication number: JP2014009212A
Application number: JP2012148366A
Authority: JP
Inventors: Masanori Hamaguchi; 雅則浜口; Fumihiro Hattori; 文弘服部; Kazunori Sakaida; 和則阪井田
Original assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-07-02
Filing date: 2012-07-02
Publication date: 2014-01-20
Anticipated expiration: 2032-07-02
Also published as: JP6029875B2

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an external preparation for skin, suitable for preventing wrinkle formation and rough skin by promoting collagen production, specifically by promoting collagen production in human skin fibroblasts.SOLUTION: The inventors have found that a conchiolin hydrolysate is effective to promote collagen production and have expanded its use. They also have found that, when used as an origin of conchiolin, black-lip pearl oysters are effective to promote collagen production.

Description

本発明はコラーゲン産生促進剤に関し、詳細には、ヒト皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生を促進させることにより、シワ形成の予防、肌荒れ防止等に好適な皮膚外用剤に関する。 The present invention relates to a collagen production promoter, and in particular, to a skin external preparation suitable for preventing wrinkle formation and preventing rough skin by promoting collagen production of human skin fibroblasts.

皮膚の構造を支持する成分にはエラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、ラミニン等があり、皮膚の柔軟性、弾力性、水分保持がなされ、外見的にもハリや艶のあるみずみずしい状態を呈する。
しかし、老化、光等による、皮膚構造支持物質の減少や構造の変化により、期待する皮膚の柔軟性、弾力性、水分が失われなされ、外見的にもハリや艶のあるみずみずしい状態が保たれない。
このなかでも、コラーゲンは重要な役割を持ち、コラーゲンを配合した製品は勿論、皮膚中でのコラーゲン産生を促進する物質を配合した皮膚外用剤も上梓されている。 Ingredients that support the structure of the skin include elastin, collagen, hyaluronic acid, chondroitin sulfate, heparan sulfate, dermatan sulfate, laminin, etc. It has a fresh state with no.
However, due to aging, light, etc., the decrease in skin structure-supporting substances and changes in structure result in the loss of expected skin flexibility, elasticity, and moisture, and the appearance of the skin is refreshing and glossy. Absent.
Among these, collagen plays an important role, and not only products containing collagen, but also external preparations for skin containing substances that promote collagen production in the skin are listed.

コンキオリンは真珠層を形成する蛋白質を主成分とする物質で、真珠蛋白とも呼ばれ、真珠あるいは貝殻の真珠光沢に関与している。
コンキオリンは必要に応じて加水分解され、化粧品、食品、医薬品に利用されており、皮膚の外用剤等での効果としては、ヒスタミン抑制、活性酸素抑制、抗炎症、損傷治癒、皮膚角化促進が知られている。（特許文献１〜５） Conchiolin is a substance mainly composed of a protein that forms a pearl layer, also called a pearl protein, and is involved in the pearl luster of pearls or shells.
Conchiolin is hydrolyzed as needed, and is used in cosmetics, foods, and pharmaceuticals. The effects of topical skin preparations include histamine suppression, active oxygen suppression, anti-inflammation, damage healing, and promotion of skin keratinization. Are known. (Patent Documents 1 to 5)

特開平０６−２１１６２５号公報Japanese Patent Application Laid-Open No. 06-211625 特開平０６−２１１６４０号公報Japanese Patent Laid-Open No. 06-21640 特開平０６−２２８００３号公報Japanese Patent Laid-Open No. 06-228003 特開平０８−３３３２７５号公報Japanese Patent Laid-Open No. 08-333275 特開２０１０−１０５９２５号公報JP 2010-105925 A

本発明の目的は、安全で、シワ形成予防や弾力のある皮膚を得るためのコラーゲン産生促進作用を有する製剤を得ることにある。 An object of the present invention is to obtain a preparation having a collagen production promoting action for obtaining a safe, wrinkle-preventing and elastic skin.

本発明者らが鋭意検討した結果、コンキオリンの加水分解物が上記目的を達することがわかった。
コンキオリンは、アコヤガイ、クロチョウガイ、シロチョウガイ、マベ、アワビ、イケチョウガイ等の真珠または貝殻の真珠層に含まれるので、これらの真珠あるいは貝殻から炭酸カルシウムを除いた（脱灰）のちに加水分解することによって、コンキオリンの加水分解物が得られる。
脱灰は酸類（通常は安価な塩酸がもっともよく利用されるが）で、水不溶性の炭酸カルシウムから塩化カルシウム等の水によく溶解する物質に変化させ、デカンテーション、遠心分離、濾過等の方法で、不溶のコンキオリンと分ける。コンキオリン以外の物質も不溶物の中に含まれるが特に問題ない。
このコンキオリンを酸、アルカリや蛋白分解酵素で分解する。コンキオリンは通常、蛋白分解酵素では分解しないので、酸やアルカリで分解するが酸を用いることが一般的である。
酸は、塩酸、硫酸、リン酸、乳酸、蟻酸、シュウ酸、マレイン酸、サリチル酸、酒石酸、フマル酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸が例示され、この中から１種以上を選択して加水分解する。また、酸加水分解した後、蛋白分解酵素でさらに分解することもできる。
必要な加水分解を行ったら、酸を用いた場合は中和し、製剤として用いやすいようにｐＨを中性付近にしておく。中和剤としては特に限定はないが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等が一般的に利用される。
中和すると塩が生じるので、場合によっては製剤を作成する場合に障害になるので塩を除く操作を行う。
脱塩の方法は特に限定はなく、イオン交換樹脂、電気透析等の方法がある。しかしコストがかかるので、特開昭６２−２２３１０４号公報や特願２０１２−１４８２２８号等の方法を取ると安価にそして不純物も減少させたコンキオリンの加水分解物を得ることができる。 As a result of intensive studies by the present inventors, it was found that a hydrolyzate of conchiolin achieves the above object.
Conchiolin is contained in the nacreous layer of pearls or shells such as pearl oysters, black butterflies, white butterflies, abalone, and skeletal oysters. A hydrolyzate of conchiolin is obtained.
Decalcification is an acid (usually cheap hydrochloric acid is most commonly used), but it is changed from water-insoluble calcium carbonate to a substance that dissolves well in water, such as calcium chloride, and decantation, centrifugation, filtration, etc. Separate it from insoluble conchiolin. Substances other than conchiolin are also included in the insoluble matter, but there is no particular problem.
This conchiolin is decomposed with acid, alkali or proteolytic enzyme. Since conchiolin is not normally decomposed by proteolytic enzymes, it is generally decomposed with acid or alkali, but acid is generally used.
Examples of the acid include hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, lactic acid, formic acid, oxalic acid, maleic acid, salicylic acid, tartaric acid, fumaric acid, citric acid, malic acid, and succinic acid. Decompose. Further, after acid hydrolysis, it can be further decomposed with a proteolytic enzyme.
After the necessary hydrolysis, the acid is neutralized when it is used, and the pH is kept near neutral so that it can be easily used as a preparation. Although there is no limitation in particular as a neutralizing agent, Sodium hydroxide, potassium hydroxide, etc. are generally utilized.
When neutralized, a salt is formed. In some cases, it becomes an obstacle when preparing a preparation.
There is no particular limitation on the desalting method, and there are methods such as ion exchange resin and electrodialysis. However, since the cost is high, it is possible to obtain a hydrolyzate of conchiolin at a low cost and with reduced impurities by adopting methods such as JP-A-62-2223104 and Japanese Patent Application No. 2012-148228.

本発明のコラーゲン産生促進剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現するが、皮膚外用剤として用いるのが好ましい。皮膚外用剤には、皮膚化粧料、外用医薬部外品、医療用皮膚外用剤が含まれる。 The collagen production promoter of the present invention exhibits drug efficacy for oral, injection, and external use, but is preferably used as a skin external preparation. Skin external preparations include skin cosmetics, external quasi-drugs, and medical skin external preparations.

また、本発明の製剤には、上記成分の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。 In addition to the above ingredients, the preparations of the present invention include surfactants, oily ingredients, moisturizers, polymer compounds, ultraviolet absorbers, anti-inflammatory agents, bactericides, and other agents used in various pharmaceutical and cosmetic preparations. Antioxidants, sequestering agents, preservatives, vitamins, pigments, fragrances, water and the like can be blended.

上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。 As the surfactant, any of anionic, cationic, nonionic, natural, and synthetic surfactants can be used, but it is preferable to use a nonionic surfactant in consideration of irritation to the skin. Examples of the nonionic surfactant include glycerin fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbite fatty acid ester, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol. , Polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether, polyethylene glycol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, alkylglycoside and the like.

油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が；ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が；炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が；高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が；高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等が；エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル等が；精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が；シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。 Examples of the oil component include fats and oils, waxes, hydrocarbons, higher fatty acids, higher alcohols, esters, essential oils, silicone oils, and the like. Examples of the fats and oils include soybean oil, nutka oil, jojoba oil, avocado oil, almond oil, olive oil, cacao oil, sesame oil, persic oil, castor oil, coconut oil, mink oil, beef fat, pork fat and the like, and these Hardened oil obtained by hydrogenation of natural fats and oils and synthetic triglycerides such as myristic acid glyceride and 2-ethylhexanoic acid triglyceride; waxes include, for example, carnauba wax, whale wax, beeswax, lanolin and the like; hydrocarbons For example, liquid paraffin, petrolatum, paraffin microcrystalline wax, ceresin, squalane, bristan etc .; higher fatty acids include, for example, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, linoleic acid, Linolenic acid, lanolinic acid, isostearic acid, etc .; Examples of the class alcohols include lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, 2-hexyldecanol, etc .; examples of the esters include cetyl octanoate, triglyceride octanoate, myristyl lactate, cetyl lactate, Examples of essential oils include mint oil, jasmine, isopropyl myristate, myristyl myristate, octyldodecyl myristate, isopropyl palmitate, isopropyl adipate, butyl stearate, decyl oleate, cholesterol isostearate, POE sorbite fatty acid ester, etc. Oil, pepper brain oil, cypress oil, spruce oil, ryu oil, turpentine oil, cinnamon oil, bergamot oil, mandarin oil, ginger oil, pine , Lavender oil, bay oil, clove oil, hiba oil, rose oil, eucalyptus oil, lemon oil, thyme oil, peppermint oil, rose oil, sage oil, menthol, cineole, eugenol, citral, citronellal, borneol, linalool, geraniol, Camphor, thymol, spirantol, pinene, limonene, terpene compounds, etc .; examples of silicone oils include dimethylpolysiloxane. These oily components described above can be used alone or in combination of two or more. In the present invention, among these, myristic acid glyceride, 2-ethylhexanoic acid triglyceride, lanolin, liquid paraffin, petrolatum, paraffin microcrystalline wax, squalane, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, linoleic acid, linolenic acid, isostearic acid , Cetyl alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, cholesterol, cetyl octanoate, triglyceride octanoate, isopropyl myristate, octyldodecyl myristate, cholesterol isostearate, POE sorbite fatty acid ester, peppermint oil, spruce oil, cinnamon oil, rose Oil, menthol, cineol, eugenol, citral, citronellal, geraniol, pinene, limonene, dimethylpolysiloxane It is preferable to use.

本発明の製剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類；黄色４号、青色１号、黄色２０２号等の厚生省令に定められたタール色素別表Ｉ及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等。
その他；殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。 The following components can be further added to the preparation of the present invention, but the components are not limited thereto.
Colors: Yellow color No. 4, Blue No. 1 and Yellow No. 202 are recognized as food additives such as tar color dyes I and II, chlorophyll, riboflavin, crocin, safflower, anthraquinone, etc. Natural pigments.
Vitamins; vitamin A, vitamin C, vitamin D, vitamin E, etc.
Others: bactericides, preservatives, other ingredients necessary for formulation.

本発明の製剤は、前記必須成分に必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って製造することができ、クリーム、乳液、化粧水等の形態とすることができる。 The preparation of the present invention can be produced according to a conventional method by adding the optional components to the essential components as necessary, and can be in the form of cream, emulsion, lotion or the like.

次に実施例（製造例）を挙げて本発明を詳細に説明する。 Next, an Example (manufacturing example) is given and this invention is demonstrated in detail.

製造例１
細断したクロチョウガイ貝殻１kgに水１２０kgを加え、ゆっくり撹拌しながら徐々に塩酸を１kg加え、１日放置した。さらに塩酸を１kg加え、２日放置した。さらに塩酸を２００g加え、１日放置した。
これに水酸化ナトリウムを撹拌しながらゆっくりと加え、ｐＨ７．０になるように調整した。
これを遠心分離し、沈殿を得た。この沈殿に水２kgを加えよく撹拌した後遠心分離し、沈殿を得た。これをもう２回繰り返した。
この沈殿に水１０kgを加えよく撹拌した後、１日放置後遠心分離し、沈殿を得た。（固形分として１２．８ｇ）
冷却器の付いたフラスコに入れ、水を１００ｇと硫酸３０ｇを加え、１１０℃に設定したマントルヒーターで加温しながら１８時間加温した。
冷却後、撹拌しながら、水酸化カルシウムを２５ｇ徐々に加えて１時間撹拌した。
さらに徐々に水酸化カルシウムを加えてｐＨが７．０にした。
この液を遠心分離（３０００rpm×１５分間）し、上澄みを得た。これにエタノールをえ２倍量l加え撹拌した。
４℃で２日間静置した後、濾過し、濾液を得た。
これをエバポレートした後、凍結乾燥した。 Production Example 1
120 kg of water was added to 1 kg of shredded black mussel shells, and 1 kg of hydrochloric acid was gradually added while stirring slowly, and left for 1 day. Further, 1 kg of hydrochloric acid was added and left for 2 days. Further, 200 g of hydrochloric acid was added and left for 1 day.
Sodium hydroxide was slowly added to this while stirring to adjust the pH to 7.0.
This was centrifuged to obtain a precipitate. 2 kg of water was added to this precipitate and stirred well, followed by centrifugation to obtain a precipitate. This was repeated twice more.
10 kg of water was added to the precipitate and stirred well, then allowed to stand for 1 day and then centrifuged to obtain a precipitate. (12.8g as solid content)
It put into the flask with a cooler, 100g of water and 30g of sulfuric acid were added, and it heated for 18 hours, heating with the mantle heater set to 110 degreeC.
After cooling, 25 g of calcium hydroxide was gradually added with stirring and stirred for 1 hour.
Further, calcium hydroxide was gradually added to adjust the pH to 7.0.
This liquid was centrifuged (3000 rpm × 15 minutes) to obtain a supernatant. Ethanol was added to this, and 2 times volume 1 was added and stirred.
After leaving still at 4 degreeC for 2 days, it filtered, and the filtrate was obtained.
This was evaporated and then lyophilized.

確認試験
線維芽細胞（クラボウ社製正常ヒト皮膚繊維芽細胞）を６穴プレートに７．５×１０³個
づつ播種し、４８時間培養した。製造例１を加えた培地に変更後、４日間培養した。
Ｓｅｍｉ−ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＣｏｌｌａｇｅｎＡｓｓａｙＫｉｔ（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社製）にてコラーゲン量を測定し、コントロール（製造例１を添加していない培地で培養）と比較した。
結果を図１に示す。 Confirmation test Fibroblasts (normal human skin fibroblasts manufactured by Kurabo Industries Inc.) were seeded in a 6-well plate at 7.5 × 10 ³ pieces and cultured for 48 hours. After changing to the medium added with Production Example 1, the cells were cultured for 4 days.
Collagen amount was measured by Semi-Quantitative Collagen Assay Kit (manufactured by Chondrex), and compared with control (cultured in a medium not added with Production Example 1).
The results are shown in FIG.

また、製造例１を配合した、外用剤を作成し、実際に使用してみた結果、シワ形成抑制、肌荒れ防止の改善がみられた。 Moreover, the external preparation which mix | blended the manufacture example 1 was created, and as a result of actually using it, the improvement of wrinkle formation suppression and rough skin prevention was seen.

製造例１の終濃度０．００１％、０．０１％、０．１％で線維芽細胞を培養後のコラーゲンの生成量を、製造例１を含まない培地で培養したコントロールと比較した図である。縦軸は生成したコラーゲンの量である。The figure which compared the production amount of collagen after culture | cultivating a fibroblast with final concentration 0.001% of 0.01% of manufacture example 1, 0.01%, and the control culture | cultivated in the culture medium which does not contain manufacture example 1. is there. The vertical axis represents the amount of collagen produced.

Claims

Collagen production promoter containing a conchiolin hydrolyzate.

2. The collagen production promoter containing a conchiolin hydrolyzate according to claim 1, wherein the source of conchiolin is pearl or / and shell of black scallop.