JP2013527437A - 関節リウマチを診断する方法および試薬 - Google Patents
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Abstract
Description
この章で使用される章の表題、および本明細書における全開示は、限定的であることを意図していない。
本明細書で使用するとき、「抗体」という用語は、免疫グロブリン遺伝子、または免疫グロブリン遺伝子の断片により実質的にコードされた1種以上のポリペプチドからなるタンパク質を表し、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体およびこれらの断片、ならびに免疫グロブリン遺伝子配列から操作された分子を包含する。認められている免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、εおよびμの定常部の遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖は、κまたはλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δまたはεとして分類され、免疫グロブリンの綱をそれぞれIgG、IgM、IgA、IgDおよびIgEと規定する。
本明細書で使用するとき、「検出可能な標識」という用語は、結合している分子(単数)または分子(複数)の状態の変化である、光学的、電気的または他の物理的な指標を介して測定可能な信号を生じる任意の部分を表す。こうした物理的指標は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電磁気的、放射化学的および化学的な手段を包含し、蛍光発光、化学蛍光発光、化学ルミネセンスなどであるがこれらに限定されない。好ましい検出可能な標識は、本明細書の下のB章において述べた式Iの構造を有するアクリジニウム−9−カルボキシイミド、また同様に本明細書の下のB章において述べた式IIの構造を有するアクリジニウム−9−カルボキシレートアリールエステルなどのアクリジニウム化合物を含む。
本明細書において互換的に使用される用語「マーカー」または「バイオマーカー」とは、対象から得た試験サンプルを分析する標的として使用される任意の分子を表し、タンパク質またはポリペプチド自体を包含し、試験サンプル中に存在するタンパク質またはポリペプチドに対する抗体も包含する。マーカーとして使用されるタンパク質またはポリペプチドは、任意の、これらの変異体および断片、特に免疫学的に検出可能な断片を含む。例えば、マーカーポリペプチドの変異体は、同じ遺伝子によりコードされるが、選択的スプライシングなどの選択的処理および/または翻訳後の改変(例えばグリコシル化、アシル化および/またはリン酸化)の差の結果として、等電点もしくは分子量または双方において異なり得ることが理解される。細胞タンパク質は、炎症などの疾患過程の結果として損傷され得、断片化されることがあり、このため、本開示によるマーカーとして使用されるタンパク質またはポリペプチドはこれらの断片を含むことがさらに理解される。さらに、特定のマーカーは、不活性形態において合成され得、続いてタンパク質分解により活性形態に転換されることが認められる。タンパク質またはこれらの断片は、錯体の部分としても生じ得る。本開示によるマーカーとして使用されるタンパク質またはポリペプチドは、こうした錯体も含む。
本明細書で使用するとき、「対象」および「患者」という用語は、その対象が任意の形態の治療を受けているか、または今は試験段階であるかの別なく、互換的に使用される。本明細書で使用するとき、「対象(単数)」および「対象(複数)」という用語は、哺乳類(例えばウシ、ブタ、ラクダ、リャマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラットおよびマウス、非ヒト霊長類(例えばカニクイザル、チンパンジーなどのサル)およびヒト)を含むがこれらに限定されない任意の脊椎動物を表す。好ましくは、対象はヒトである。
本明細書で使用するとき、「試験サンプル」という用語は、一般に、興味のある分析対象物を含有しているかどうか試験される、および/または含有していると疑われている生体物質を表す。生体物質は、任意の生物源から抽出され得るが、興味のある分析対象物質を含有していそうな生体液であることが好ましい。生体物質の例は、ふん便、全血、血清、血漿、赤血球、血小板、間質液、唾液、眼球液、脳脊髄液、汗、尿、腹水、粘液、鼻汁、痰、滑液、腹水、膣液、月経、羊水、精液、汚物などを含むがこれらに限定されない。好ましくは、試験サンプルは、血清または血漿のサンプルである。
本開示による方法は、対象において関節リウマチを診断する方法を含み、対象から得た試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が測定することによる。試験サンプルは、例えば針刺しなどの一般に使用される任意の静脈切開法を使用して患者から得る、全血、血清または血漿のサンプルであり、検査後に廃棄される。CCL8タンパク質によって示されるRAへの高レベルの特異性および感受性は、RA診断への単独使用が支持されるが、この診断法は一般に、少なくともその対象の臨床的評価、および可能であればX線と共に使用、あるいは、CRP、a−CCP、CARF IgG、MMP−3およびリウマチ因子(RF)を含む他のRAマーカーの存在のためのインビトロ検査と共に使用されることが理解される。本明細書に記載の方法は、関節リウマチの任意の臨床指標が対象中に存在することが指摘される前に、RAの存在または非存在を決定するのに使用され得る。しかしながら、100%の特異性および100%の感受性を有するRA診断用の生化学的マーカーは無い。したがって、各生化学的マーカーは、RAが対象中に存在するかしないかを一定レベルの可能性で決定するのに使用され得ることが理解される。このため、本開示による方法は、RAの存在または非存在の決定を補助する付加的なツールを提供する。この方法は例えば、変形性関節症などの、同種の臨床徴候および症状を伴う他の疾患または状態からRAを識別するのに特に有用であり得る。
本開示は、試験サンプル中のCCL8タンパク質濃度を測定するための抗CCL8抗体を含む診断用試薬を含んだキットなどの、本明細書で開示された方法を実施するためのキットも企画する。キットは、他の任意のRAマーカーに対する抗体などの、付加的なRAマーカーを測定するための1種以上の付加的な診断用試薬を含むことができる。キットは、1種以上の別の組成物としての、または場合によって試薬の相容性を可能にする混合物としての試薬を保持する、1個または複数個の容器を伴うパッケージを一般に含む。検査キットは、緩衝剤(複数可)、希釈剤(複数可)、標準物質(複数可)、標識などの、利用者の立場から所望であり得る他の材料(複数可)、および/またはサンプルの処理、洗浄、またはこのアッセイの他の任意のステップを実行するのに有用な、他の任意の材料も含むことができる。検査キットは、RA診断の精度を向上させるためのRAマーカーパネルとして使用するために、マイクロタイタープレートなどの固相に結合する抗CCL8抗体、および同様に固相に結合する少なくとも1種の付加的なRAマーカーを含むことができる。本開示による検査キットは、CCL8タンパク質および少なくとも1種の他のRAマーカーを検出する、1種以上のイムノアッセイを実施するための説明書を含むことが好ましい。本開示のキットに含められた説明書は、包装材料に貼付され得、またはパッケージ挿入物として含まれ得る。一般に説明書は、文書による、または印刷された材料であるが、こうした物に限定されない。このような説明書を貯え、エンドユーザーに説明書を伝達できる任意の媒体が、本開示により企画される。こうした媒体は、電子記憶媒体(例えば磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ)、光学媒体(例えばCD ROM)などであるがこれらに限定されない。本明細書で使用するとき、「説明書」という用語は、説明書を提供するインターネットサイトのアドレスを含むことができる。
RA治療用の抗CCL8抗体または抗体断片は、経口で投与され得、例えば、不活性希釈剤または同化性食用担体を伴う。化合物(および所望であれば他の成分)は、硬質または軟質のシェルのゼラチンカプセルに封入されてもよく、錠剤、口内錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ、オブラートなどへと圧縮されてもよい。非経口投与以外で抗CCL8抗体または抗体断片を投与するために、化合物を、その不活性化を防ぐ材料で覆う、またはこれと同時投与することが必要であり得る。
例として、限定することなく、本開示の実施例が今付与される。
CCL8血清濃度と関節リウマチ診断との相関
59個のヒト血清検体を、ProMedDx LLC(マサチューセッツ州ノートン)から取得した。59個のうち、39個は正常な被験者から、10個はマウス由来抗体の治療的投与によってヒト抗マウス抗体(HAMA)を呈した患者から、10個は関節リウマチ(RA)の陽性診断を有する被験者からであった。各検体について、CCL8タンパク質の濃度を、株式会社免疫生物研究所(日本)からのCCL8イムノアッセイキット(RUO)を使用して、キットの添付書の指示に従い測定した。表1は、各RA被験者において得たCCL8の濃度を列挙し、(a)においては連続希釈法を使用し、(b)においては異好抗体干渉を阻害または減少させるためにHBRを伴わせた。
関節リウマチの検出における、CCL8血清濃度の低い偽陽性率および低い偽陰性率
図2は、正常およびHAMAの被験者において上昇したCCL8濃度を偽陽性と観察した率に対して、RA被験者において上昇したCCL8濃度を真陽性と観察した率の、受信者動作特性(ROC)プロットである。プロットを横切るグレーの対角線は、CCL8濃度が、RA被験者と、正常またはHAMA被験者とを全く識別されないであろうという最悪可能性予測法から予期されたプロットを指し示す。最良可能性予測法は、ROC空間の左上隅、即ち座標(0,1)にある点を生じさせると予期され、100%感受性(偽陰性なし)および100%特異性(偽陽性なし)を表す。このように、実際のデータのプロットから導き出された1.0値に近似する曲線下面積(AUC)は、最良可能性予測法を表している。図2で分かる通り、AUCは0.990であり、上昇したCCL8濃度(即ち94pg/mLのカットオフを上回るCCL8タンパク質の値)が極めて強力なRA予測分類指標であることを示す。
Claims (22)
- 対象から得た試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度を測定することを含む、対象における関節リウマチを診断する方法であって、試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が、対象における関節リウマチの存在または非存在を指し示す前記方法。
- 対象に関節リウマチの臨床指標が存在する前に、関節リウマチの存在または非存在が決定される、請求項1に記載の方法。
- 試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が、抗CCL8抗体を使用して測定される、請求項1または2に記載の方法。
- 試験サンプルが、血漿または血清のサンプルである、請求項1または2に記載の方法。
- 試験サンプル中の1種以上の関節リウマチマーカーの濃度を測定することをさらに含み、前記マーカーが、CRP、a−CCP、CARF IgG、MMP−3およびリウマチ因子からなる群から選択され、試験サンプル中の1種以上の前記マーカーの濃度が、対象における関節リウマチの存在または非存在をさらに指し示す、請求項1または2に記載の方法。
- 試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が、質量分析法、高速液体クロマトグラフィーおよび二次元電気泳動法からなる群から選択される方法を使用して測定される、請求項1または2に記載の方法。
- 対象から得た試験サンプル中の上昇したCCL8タンパク質濃度の存在または非存在を決定することを含む、対象における関節リウマチの重症度を決定する方法であって、上昇したCCL8タンパク質濃度の存在が、対象の関節リウマチが重度であることを指し示す前記方法。
- 試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が、抗CCL8抗体を使用して測定される、請求項7に記載の方法。
- 試験サンプルが、血漿または血清のサンプルである、請求項7に記載の方法。
- 試験サンプル中の1種以上の関節リウマチマーカーの濃度を測定することをさらに含み、前記マーカーが、CRP、a−CCP、CARF IgG、MMP−3およびリウマチ因子からなる群から選択され、試験サンプル中の1種以上の前記マーカーの濃度が、対象における関節リウマチの存在または非存在をさらに指し示す、請求項7に記載の方法。
- 試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が、質量分析法、高速液体クロマトグラフィーおよび二次元電気泳動法からなる群から選択される方法を使用して測定される、請求項7に記載の方法。
- 抗CCL8抗体またはこの断片、およびCRP、a−CCP、CARF IgG、MMP−3およびリウマチ因子からなる群から選択される少なくとも1種の関節リウマチマーカーに対する抗体を含む、関節リウマチの診断用試薬。
- 請求項12に記載の診断用試薬を含むキット。
- 関節リウマチを治療するための治療剤候補物質を特定する方法であって、
a 試験物質を、関節リウマチの動物モデルである動物対象に投与する工程と、
b 動物対象から得た試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度を測定する工程と、
c 前記試験サンプル中の前記CCL8タンパク質の濃度が、前記試験物質を投与されていない比較用の動物対象からの試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度よりも低い場合に、前記試験物質を、関節リウマチを治療する治療剤候補物質として選択する工程と
を含む前記方法。 - 対象における関節リウマチの診断のための診断用試薬としての、抗CCL8抗体またはこの断片の使用。
- 対象における関節リウマチの治療のための医薬組成物の有効成分としての、抗CCL8抗体またはこの断片の使用。
- 対象における関節リウマチの診断のための試薬の製造における、抗CCL8抗体またはこの断片の使用。
- 対象における関節リウマチの治療のための医薬組成物の製造における、抗CCL8抗体またはこの断片の使用。
- 対象における関節リウマチの治療の効果をモニタリングする方法であって、
a 治療前に対象から得た第1の試験サンプル中の第1のCCL8タンパク質濃度を測定する工程と、
b 治療開始後に対象から得た第2の試験サンプル中の第2のCCL8タンパク質濃度を測定する工程と、
c 第1のCCL8タンパク質濃度と第2のCCL8タンパク質濃度とを比較する工程とを含み、第1のCCL8タンパク質濃度より低い第2のCCL8タンパク質濃度が、対象における治療の治療効果を指し示す前記方法。 - 第1および第2の試験サンプル中のCCL8タンパク質濃度が、抗CCL8抗体を使用して測定される、請求項19に記載の方法。
- 試験サンプルが、血漿または血清のサンプルである、請求項19に記載の方法。
- 試験サンプル中のCCL8タンパク質の濃度が、質量分析法、高速液体クロマトグラフィーおよび二次元電気泳動法からなる群から選択される方法を使用して測定される、請求項19に記載の方法。
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