JP2013517789A5 - - Google Patents
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Description
さらに別の態様では、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１〜２４、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１種または複数種の単離オリゴヌクレオチドプライマーが含まれる。
[本発明1001]
母体血液の試料を使用した胎児異数性の出生前診断の方法であって、
ａ）高メチル化ＤＮＡ試料を得るために、母体の血液試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡと物理的に分離する工程；
ｂ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を得るために、高メチル化ＤＮＡ試料において、複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）のレベルを決定する工程；
ｃ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を前記複数のＤＭＲの標準参照高メチル化値と比較する工程；および
ｄ）前記比較に基づき、胎児異数性を診断する工程
を含む、前記方法。
[本発明1002]
母体血液試料が母体の末梢血試料である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
高メチル化ＤＮＡが、メチル化ＤＮＡ免疫沈降（ＭｅＤｉＰ）により低メチル化ＤＮＡから物理的に分離される、本発明1001の方法。
[本発明1004]
高メチル化ＤＮＡが低メチル化ＤＮＡから物理的に分離された後、該高メチル化ＤＮＡが増幅される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
高メチル化ＤＮＡがライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）により増幅される、本発明1004の方法。
[本発明1006]
複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されたリストから選択される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも3個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1008]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも5個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1009]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも8個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1010]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも10個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1011]
複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されるリストから選択される、本発明1007〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
高メチル化ＤＮＡ試料における複数のＤＭＲレベルが、リアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＱＰＣＲ）により決定される、本発明1001の方法。
[本発明1013]
ＬＭ−ＰＣＲ効率のコントロールとして、複数のＤＭＲのレベルが未処理の母体血液ＤＮＡ試料全体においても決定される、本発明1005の方法。
[本発明1014]
高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値と比較し、高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値が正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値よりも高ければ、胎児異数性の診断が下される、本発明1001の方法。
[本発明1015]
21トリソミー診断のための複数のＤＭＲが21番染色体上にある、本発明1001の方法。
[本発明1016]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される3個またはそれ以上の領域を含む、本発明1001の方法。
[本発明1017]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される8個またはそれ以上の領域を含む、本発明1001の方法。
[本発明1018]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）および塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）のヌクレオチド配列を有する8個の領域から成る、本発明1017の方法。
[本発明1019]
複数のＤＭＲが、13番染色体、18番染色体、Ｘ染色体およびＹ染色体から成る群から選択された染色体上にある、本発明1001の方法。
[本発明1020]
母体の末梢血試料を使用した21トリソミーの出生前診断の方法であって、
ａ）高メチル化ＤＮＡ試料を得るために、母体末梢血の試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡと物理的に分離する工程；
ｂ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を得るために、高メチル化ＤＮＡ試料において、21番染色体上の複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）レベルを決定する工程であって、
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される8個またはそれ以上の領域を含み、および
複数のＤＭＲレベルがリアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＱＰＣＲ）により決定される、工程；
ｃ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を21番染色体上の前記複数のＤＭＲの標準正常参照高メチル化値と比較する工程；ならびに
ｄ）前記比較に基づき21トリソミーを診断する工程
を含む、前記方法。
[本発明1021]
高メチル化ＤＮＡが、メチル化ＤＮＡ免疫沈降（ＭｅＤｉＰ）により低メチル化ＤＮＡから物理的に分離される、本発明1020の方法。
[本発明1022]
高メチル化ＤＮＡが低メチル化ＤＮＡから物理的に分離された後、高メチル化ＤＮＡが増幅される、本発明1020の方法。
[本発明1023]
高メチル化ＤＮＡがライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）により増幅される、本発明1022の方法。
[本発明1024]
ＬＭ−ＰＣＲ効率のコントロールとして、複数のＤＭＲレベルが未処理の母体血液ＤＮＡ試料全体においても決定される、本発明1020の方法。
[本発明1025]
高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値と比較し、高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値が、正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値よりも高ければ21トリソミーの診断が下される、本発明1020の方法。
[本発明1026]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、および塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）のヌクレオチド配列を有する8個の領域から成る、本発明1020の方法。
[本発明1027]
胎児異数性の診断に利用するのに適し、関心対象の染色体上にある特異的メチル化領域（ＤＭＲ）を同定する方法であって、
ａ）以下：
（ｉ）正常の成人女性の末梢血ＤＮＡ試料（ＰＢ試料）；および
（ｉｉ）正常な胎盤ＤＮＡ試料（ＰＬ試料）
を提供する工程；
ｂ）以下：
（ｉ）分離されたＰＢ試料；および
（ｉｉｉ）分離されたＰＬ試料
を得るために、ａ）の各試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する工程；
ｃ）ｂ）の分離された各試料において、関心対象の染色体上の複数の領域のレベルを決定する工程；および
ｄ）分離されたＰＢ試料では低メチル化され、かつ分離されたＰＬ試料では高メチル化されている領域を選択する工程であって、それによって関心対象の染色体上の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）を同定する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1028]
ＰＬ試料が二つの異なる試料、すなわち、第1トリメスターＰＬ試料および第3トリメスターＰＬ試料を含み、前記工程ｄ）が、第1トリメスターの分離ＰＬ試料および第3トリメスターの分離ＰＬ試料の中で同じメチル化度を有する領域を選択する工程をさらに含む、本発明1027の方法。
[本発明1029]
関心対象の染色体が21番染色体である、本発明1027の方法。
[本発明1030]
関心対象の染色体が、13番染色体、18番染色体、Ｘ染色体およびＹ染色体から成る群から選択される、本発明1027の方法。
[本発明1031]
異数性がトリソミーまたはモノソミーである、本発明1027の方法。
[本発明1032]
以下を含む21トリソミーの出生前診断キット：
ａ）21番染色体上の複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）のレベルを決定するための、1種または複数種の核酸組成物；および
ｂ）21トリソミーの出生前診断のための核酸組成物の利用ガイド。
[本発明1033]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されたリストから選択される、本発明1032のキット。
[本発明1034]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される3個またはそれ以上の領域を含む、本発明1032のキット。
[本発明1035]
染色体21上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される8個またはそれ以上の領域を含む、本発明1032のキット。
[本発明1036]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： 43）、および塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）のヌクレオチド配列を有する8個の領域から成る、本発明1032のキット。
[本発明1037]
核酸組成物が、
、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される1種または複数種のオリゴヌクレオチドプライマーを含む、本発明1032のキット。
[本発明1038]
血液試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する手段をさらに含む、本発明1032のキット。
[本発明1039]
高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する手段が、メチル化ＤＮＡを免疫沈降させる抗体を含む、本発明1038のキット。
[本発明1040]
高メチル化ＤＮＡを増幅する手段をさらに含む、本発明1038のキット。
[本発明1041]
高メチル化ＤＮＡを増幅する手段が、ライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）を行うためのオリゴヌクレオチドリンカーまたはオリゴヌクレオチドプライマーを含む、本発明1040のキット。
[本発明1042]
、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される1種または複数種の単離オリゴヌクレオチドプライマーを含む、核酸組成物。
[本発明1001]
母体血液の試料を使用した胎児異数性の出生前診断の方法であって、
ａ）高メチル化ＤＮＡ試料を得るために、母体の血液試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡと物理的に分離する工程；
ｂ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を得るために、高メチル化ＤＮＡ試料において、複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）のレベルを決定する工程；
ｃ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を前記複数のＤＭＲの標準参照高メチル化値と比較する工程；および
ｄ）前記比較に基づき、胎児異数性を診断する工程
を含む、前記方法。
[本発明1002]
母体血液試料が母体の末梢血試料である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
高メチル化ＤＮＡが、メチル化ＤＮＡ免疫沈降（ＭｅＤｉＰ）により低メチル化ＤＮＡから物理的に分離される、本発明1001の方法。
[本発明1004]
高メチル化ＤＮＡが低メチル化ＤＮＡから物理的に分離された後、該高メチル化ＤＮＡが増幅される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
高メチル化ＤＮＡがライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）により増幅される、本発明1004の方法。
[本発明1006]
複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されたリストから選択される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも3個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1008]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも5個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1009]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも8個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1010]
複数のＤＭＲレベルが、少なくとも10個のＤＭＲに関して決定される、本発明1001の方法。
[本発明1011]
複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されるリストから選択される、本発明1007〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
高メチル化ＤＮＡ試料における複数のＤＭＲレベルが、リアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＱＰＣＲ）により決定される、本発明1001の方法。
[本発明1013]
ＬＭ−ＰＣＲ効率のコントロールとして、複数のＤＭＲのレベルが未処理の母体血液ＤＮＡ試料全体においても決定される、本発明1005の方法。
[本発明1014]
高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値と比較し、高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値が正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値よりも高ければ、胎児異数性の診断が下される、本発明1001の方法。
[本発明1015]
21トリソミー診断のための複数のＤＭＲが21番染色体上にある、本発明1001の方法。
[本発明1016]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される3個またはそれ以上の領域を含む、本発明1001の方法。
[本発明1017]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される8個またはそれ以上の領域を含む、本発明1001の方法。
[本発明1018]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）および塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）のヌクレオチド配列を有する8個の領域から成る、本発明1017の方法。
[本発明1019]
複数のＤＭＲが、13番染色体、18番染色体、Ｘ染色体およびＹ染色体から成る群から選択された染色体上にある、本発明1001の方法。
[本発明1020]
母体の末梢血試料を使用した21トリソミーの出生前診断の方法であって、
ａ）高メチル化ＤＮＡ試料を得るために、母体末梢血の試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡと物理的に分離する工程；
ｂ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を得るために、高メチル化ＤＮＡ試料において、21番染色体上の複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）レベルを決定する工程であって、
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される8個またはそれ以上の領域を含み、および
複数のＤＭＲレベルがリアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＱＰＣＲ）により決定される、工程；
ｃ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を21番染色体上の前記複数のＤＭＲの標準正常参照高メチル化値と比較する工程；ならびに
ｄ）前記比較に基づき21トリソミーを診断する工程
を含む、前記方法。
[本発明1021]
高メチル化ＤＮＡが、メチル化ＤＮＡ免疫沈降（ＭｅＤｉＰ）により低メチル化ＤＮＡから物理的に分離される、本発明1020の方法。
[本発明1022]
高メチル化ＤＮＡが低メチル化ＤＮＡから物理的に分離された後、高メチル化ＤＮＡが増幅される、本発明1020の方法。
[本発明1023]
高メチル化ＤＮＡがライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）により増幅される、本発明1022の方法。
[本発明1024]
ＬＭ−ＰＣＲ効率のコントロールとして、複数のＤＭＲレベルが未処理の母体血液ＤＮＡ試料全体においても決定される、本発明1020の方法。
[本発明1025]
高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値と比較し、高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値が、正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値よりも高ければ21トリソミーの診断が下される、本発明1020の方法。
[本発明1026]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、および塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）のヌクレオチド配列を有する8個の領域から成る、本発明1020の方法。
[本発明1027]
胎児異数性の診断に利用するのに適し、関心対象の染色体上にある特異的メチル化領域（ＤＭＲ）を同定する方法であって、
ａ）以下：
（ｉ）正常の成人女性の末梢血ＤＮＡ試料（ＰＢ試料）；および
（ｉｉ）正常な胎盤ＤＮＡ試料（ＰＬ試料）
を提供する工程；
ｂ）以下：
（ｉ）分離されたＰＢ試料；および
（ｉｉｉ）分離されたＰＬ試料
を得るために、ａ）の各試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する工程；
ｃ）ｂ）の分離された各試料において、関心対象の染色体上の複数の領域のレベルを決定する工程；および
ｄ）分離されたＰＢ試料では低メチル化され、かつ分離されたＰＬ試料では高メチル化されている領域を選択する工程であって、それによって関心対象の染色体上の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）を同定する、工程
を含む、前記方法。
[本発明1028]
ＰＬ試料が二つの異なる試料、すなわち、第1トリメスターＰＬ試料および第3トリメスターＰＬ試料を含み、前記工程ｄ）が、第1トリメスターの分離ＰＬ試料および第3トリメスターの分離ＰＬ試料の中で同じメチル化度を有する領域を選択する工程をさらに含む、本発明1027の方法。
[本発明1029]
関心対象の染色体が21番染色体である、本発明1027の方法。
[本発明1030]
関心対象の染色体が、13番染色体、18番染色体、Ｘ染色体およびＹ染色体から成る群から選択される、本発明1027の方法。
[本発明1031]
異数性がトリソミーまたはモノソミーである、本発明1027の方法。
[本発明1032]
以下を含む21トリソミーの出生前診断キット：
ａ）21番染色体上の複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）のレベルを決定するための、1種または複数種の核酸組成物；および
ｂ）21トリソミーの出生前診断のための核酸組成物の利用ガイド。
[本発明1033]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されたリストから選択される、本発明1032のキット。
[本発明1034]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される3個またはそれ以上の領域を含む、本発明1032のキット。
[本発明1035]
染色体21上の複数のＤＭＲが、塩基対39279856−39280004（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33）、塩基対44161178−44161323（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34）、塩基対44161239−44161371（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35）、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対29136735−29136844（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43）、塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される8個またはそれ以上の領域を含む、本発明1032のキット。
[本発明1036]
21番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対33320735−33320829（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36）、塩基対42189557−42189683（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37）、塩基対42355712−42355815（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38）、塩基対42357215−42357341（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：39）、塩基対22403649−22403792（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40）、塩基対32268843−32268943（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42）、塩基対44079235−44079322（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： 43）、および塩基対37841284−37841411（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44）のヌクレオチド配列を有する8個の領域から成る、本発明1032のキット。
[本発明1037]
核酸組成物が、
[本発明1038]
血液試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する手段をさらに含む、本発明1032のキット。
[本発明1039]
高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する手段が、メチル化ＤＮＡを免疫沈降させる抗体を含む、本発明1038のキット。
[本発明1040]
高メチル化ＤＮＡを増幅する手段をさらに含む、本発明1038のキット。
[本発明1041]
高メチル化ＤＮＡを増幅する手段が、ライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）を行うためのオリゴヌクレオチドリンカーまたはオリゴヌクレオチドプライマーを含む、本発明1040のキット。
[本発明1042]
Claims (30)
- 母体血液の試料を使用した胎児異数性の出生前検出の方法であって、
ａ）高メチル化ＤＮＡ試料を得るために、母体の血液試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡと物理的に分離する工程；
ｂ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を得るために、高メチル化ＤＮＡ試料において、複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）のレベルを決定する工程；
ｃ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を前記複数のＤＭＲの標準参照高メチル化値と比較する工程；および
ｄ）前記比較に基づき、胎児異数性を検出する工程
を含む、前記方法。 - 母体血液試料が母体の末梢血試料である、請求項１に記載の方法。
- 高メチル化ＤＮＡが、メチル化ＤＮＡを免疫沈降する抗体を用いて低メチル化ＤＮＡから分離される、請求項１または２に記載の方法。
- 複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されたリストから選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
- 複数のＤＭＲレベルが、少なくとも３、５、８または１０個のＤＭＲに関して決定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
- 高メチル化ＤＮＡ試料における複数のＤＭＲレベルが、リアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＱＰＣＲ）により決定される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
- 高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値と比較し、高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値が正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値よりも高ければ、胎児異数性の検出がされる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
- ２１トリソミー検出のための複数のＤＭＲが２１番染色体上にある、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
- 複数のＤＭＲが２１番染色体上にあり、かつ
（ａ）複数のＤＭＲが、塩基対３９２７９８５６−３９２８０００４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、塩基対４４１６１１７８−４４１６１３２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、塩基対４４１６１２３９−４４１６１３７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対２９１３６７３５−２９１３６８４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される３個またはそれ以上の領域を含む、
（ｂ）複数のＤＭＲが、塩基対３９２７９８５６−３９２８０００４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、塩基対４４１６１１７８−４４１６１３２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、塩基対４４１６１２３９−４４１６１３７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対２９１３６７３５−２９１３６８４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される８個またはそれ以上の領域を含む、または
（ｃ）複数のＤＭＲが、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）および塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）のヌクレオチド配列を有する８個の領域から成る、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。 - 複数のＤＭＲが、２１番染色体、１３番染色体、１８番染色体、Ｘ染色体およびＹ染色体から成る群から選択された染色体上にある、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
- 母体の末梢血試料を使用した２１トリソミーの出生前検出の方法であって、
ａ）高メチル化ＤＮＡ試料を得るために、母体末梢血の試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡと物理的に分離する工程；
ｂ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を得るために、高メチル化ＤＮＡ試料において、２１番染色体上の複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）レベルを決定する工程であって、
２１番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対３９２７９８５６−３９２８０００４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、塩基対４４１６１１７８−４４１６１３２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、塩基対４４１６１２３９−４４１６１３７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対２９１３６７３５−２９１３６８４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される８個またはそれ以上の領域を含み、および
複数のＤＭＲレベルがリアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＱＰＣＲ）により決定される、工程；
ｃ）高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を２１番染色体上の前記複数のＤＭＲの標準正常参照高メチル化値と比較する工程；ならびに
ｄ）前記比較に基づき２１トリソミーを検出する工程
を含む、前記方法。 - 高メチル化ＤＮＡが、メチル化ＤＮＡ免疫沈降（ＭｅＤｉＰ）により低メチル化ＤＮＡから物理的に分離される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
- 高メチル化ＤＮＡが低メチル化ＤＮＡから物理的に分離された後、高メチル化ＤＮＡが増幅される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
- 高メチル化ＤＮＡがライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）により増幅される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
- ＬＭ−ＰＣＲ効率のコントロールとして、複数のＤＭＲレベルが未処理の母体血液ＤＮＡ試料全体においても決定される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
- 高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値を正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値と比較し、高メチル化ＤＮＡ試料の高メチル化値が、正常な母体血液ＤＮＡ試料の標準正常参照高メチル化値よりも高ければ２１トリソミーの検出がされる、請求項１１に記載の方法。
- ２１番染色体上の複数のＤＭＲが、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、および塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）のヌクレオチド配列を有する８個の領域から成る、請求項１１に記載の方法。
- 胎児異数性の診断に利用するのに適し、関心対象の染色体上にある特異的メチル化領域（ＤＭＲ）を同定する方法であって、
ａ）以下：
（ｉ）正常の成人女性の末梢血ＤＮＡ試料（ＰＢ試料）；および
（ｉｉ）正常な胎盤ＤＮＡ試料（ＰＬ試料）
を提供する工程；
ｂ）以下：
（ｉ）分離されたＰＢ試料；および
（ｉｉｉ）分離されたＰＬ試料
を得るために、ａ）の各試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する工程；
ｃ）ｂ）の分離された各試料において、関心対象の染色体上の複数の領域のレベルを決定する工程；および
ｄ）分離されたＰＢ試料では低メチル化され、かつ分離されたＰＬ試料では高メチル化されている領域を選択する工程であって、それによって関心対象の染色体上の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）を同定する、工程
を含む、前記方法。 - ＰＬ試料が二つの異なる試料、すなわち、第１トリメスターＰＬ試料および第３トリメスターＰＬ試料を含み、前記工程ｄ）が、第１トリメスターの分離ＰＬ試料および第３トリメスターの分離ＰＬ試料の中で同じメチル化度を有する領域を選択する工程をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
- 関心対象の染色体が、２１番染色体、１３番染色体、１８番染色体、Ｘ染色体およびＹ染色体から成る群から選択される、請求項１８または１９に記載の方法。
- 異数性がトリソミーまたはモノソミーである、請求項１８または１９に記載の方法。
- 以下を含む２１トリソミーの出生前診断キット：
ａ）２１番染色体上の複数の特異的メチル化領域（ＤＭＲ）のレベルを決定するための、１種または複数種の核酸組成物；および
ｂ）２１トリソミーの出生前診断のための核酸組成物の利用ガイド。 - ２１番染色体上の複数のＤＭＲが、添付Ａ〜Ｅに示されたリストから選択される、請求項２２に記載のキット。
- ２１番染色体上の複数のＤＭＲが、
（ａ）塩基対３９２７９８５６−３９２８０００４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、塩基対４４１６１１７８−４４１６１３２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、塩基対４４１６１２３９−４４１６１３７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対２９１３６７３５−２９１３６８４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される３個またはそれ以上の領域を含む、
（ｂ）塩基対３９２７９８５６−３９２８０００４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、塩基対４４１６１１７８−４４１６１３２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、塩基対４４１６１２３９−４４１６１３７１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対２９１３６７３５−２９１３６８４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される８個またはそれ以上の領域を含む、または
（ｃ）塩基対３３３２０７３５−３３３２０８２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、塩基対４２１８９５５７−４２１８９６８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、塩基対４２３５５７１２−４２３５５８１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、塩基対４２３５７２１５−４２３５７３４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、塩基対２２４０３６４９−２２４０３７９２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、塩基対３２２６８８４３−３２２６８９４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、塩基対４４０７９２３５−４４０７９３２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４３）、および塩基対３７８４１２８４−３７８４１４１１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）のヌクレオチド配列を有する８個の領域から成る、
請求項２２に記載のキット。 - 核酸組成物が、
、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１種または複数種のオリゴヌクレオチドプライマーを含む、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載のキット。 - 血液試料において、高メチル化ＤＮＡまたは低メチル化ＤＮＡを化学的に変性させることなく、または酵素的に消化させることなく、高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する手段をさらに含む、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載のキット。
- 高メチル化ＤＮＡを低メチル化ＤＮＡから物理的に分離する手段が、メチル化ＤＮＡを免疫沈降させる抗体を含む、請求項２６に記載のキット。
- 高メチル化ＤＮＡを増幅する手段をさらに含む、請求項２６に記載のキット。
- 高メチル化ＤＮＡを増幅する手段が、ライゲーション仲介ポリメラーゼ連鎖反応（ＬＭ−ＰＣＲ）を行うためのオリゴヌクレオチドリンカーまたはオリゴヌクレオチドプライマーを含む、請求項２８に記載のキット。
- 、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される１種または複数種の単離オリゴヌクレオチドプライマーを含む、核酸組成物。
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