JP2013511960A - フィブロネクチン:増殖因子キメラ - Google Patents
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Abstract
Description
(i)増殖因子または少なくとも、同族増殖因子受容体と結合することができる増殖因子のドメイン;および
(ii)フィブロネクチン、または少なくともフィブロネクチンのインテグリン結合ドメインを含むフィブロネクチンの断片
のアミノ酸配列を含む合成キメラタンパク質の形態にある、単離されたタンパク質複合体を提供する。
好ましくは、インテグリン受容体はα1またはα4インテグリンである。
本発明のこの態様はまた、その範囲内に、上記(i)および(ii)に相当するアミノ酸配列の、ならびにフィブロネクチンの1つ以上の付加的断片に相当するアミノ酸配列の、アミノ酸欠失、付加、置換および/または突然変異も含む。
第3の態様において、本発明は、発現ベクターにおいて1つ以上の調節配列に作動可能に連結された第2の態様の単離された核酸を含む、遺伝子構築物を提供する。
第4の態様において、本発明は、第3の態様の遺伝子構築物を含む宿主細胞を提供する。
本発明のこの態様はまた、合成タンパク質を発現する第4の態様の宿主細胞を含む医薬組成物も意図する。
第7の態様において、本発明は、合成タンパク質を用いて、増殖因子受容体とインテグリン受容体の双方に結合させるステップを含む、細胞遊走を促進する方法を提供する。
好ましくは、インテグリン受容体はα1またはα4インテグリンである。
第8の態様において、本発明は、増殖因子とフィブロネクチンとを含む複合体によって、増殖因子受容体とインテグリン受容体の双方の結合を防止、阻害、または他の方法で低減するステップを含む、細胞の遊走および/または増殖を防止する方法を提供する。
好ましくは、前記インテグリン受容体はα1またはα4インテグリンである。
本発明のこの態様により意図される特定の例は、乳癌転移の防止または阻害である。
第9の態様において、本発明は、
(i)増殖因子とフィブロネクチンを含むタンパク質複合体のアゴニストであるか;または
(ii)増殖因子とフィブロネクチンを含むタンパク質複合体のアンタゴニストである
分子を生成するための、第1の態様の単離されたタンパク質複合体の使用を提供する。
(i)IGF−I:FN、IGF−II:FN、EGF:FN、bFGF:FN、KGF:FN、もしくはIGF−I:IGFBP:FNタンパク質複合体のアゴニストであるか;または
(ii)IGF−I:FN、IGF−II:FN、EGF:FN、bFGF:FN、GF:FN、もしくはIGF−I:IGFBP:FNタンパク質複合体のアンタゴニストである
分子を生成するための、第1の態様の合成タンパク質の使用を提供する。
特定の実施形態では、生体材料は、本発明の単離されたタンパク質複合体を、好適には含浸、または被覆、あるいは他の方法により含ませた外科用インプラント、人工補綴物、スキャフォールド、創傷用または火傷用包帯などであり得る。
本発明の目的では、「単離された」とは、その天然状態から取り出された、またはそうでなければ、人間の操作を施された材料を意味する。単離された材料は、その天然状態において通常付随する成分を実質的もしくは本質的に含まないものであり得るか、またはその天然状態において通常付随する成分を伴っているが、操作されて人為的状態となったものであり得る。単離された材料は、天然型、化学合成型または組換え型であり得る。
「ポリペプチド」とは、50個以上のアミノ酸を有するタンパク質である。
以上に記載されるように、本発明は、1つの特定の態様において、
(i)増殖因子、または少なくとも、同族増殖因子受容体と結合することができる増殖因子のドメイン;および
(ii)フィブロネクチン、または少なくともフィブロネクチンのインテグリン結合ドメインを含むフィブロネクチンの断片
のアミノ酸配列を含む合成キメラタンパク質の形態にある、単離されたタンパク質複合体を提供する。
増殖因子の例としては、限定するものではないが、IGF(JonesおよびClemmons, 1995, Endocrine Rev. 16 3; WoodおよびYee, 2000, J. Mammary Gland Biology and Neoplasia 5 1; Keissら, 1994, Hormone Research 41 66)(例えば、IGF−I(UniProtKB/Swiss-Prot: #P05019、成熟タンパク質は全長配列のアミノ酸残基49〜118を含む)およびIGF−II(UniProtKB/Swiss-Prot: #P01344、成熟タンパク質は全長配列のアミノ酸残基25〜91を含む))、VEGF(Neufeldら, 1999, FASEB J. 13 9-22)、PDGF(Heldin, 1992, EMBO J. 11 4251-4259)、EGF(Heldinら, 1981, Science 4 1122-1123; UniProtKB/Swiss-Prot: #P01133、成熟タンパク質は全長配列のアミノ酸残基971〜1023を含む)、線維芽細胞増殖因子(FGF; Nurcombeら, 2000, J. Biol. Chem. 275 30009-30018)、bFGF(Tarabolettiら, 1997, Cell Growth. Differ. 8 471-479; UniProtKB/Swiss-Prot: #P09038、成熟タンパク質は全長配列のアミノ酸残基143〜288を含む)、オステオポンチン(Namら, 2000, Endocrinol. 141 1100)、トロンボスポンジン−1(Namら, 2000, 前掲)、テネイシン−C(Araiら, 1996, J. Biol. Chem. 271 6099)、PAI−1(Namら, 1997, Endocrinol. 138 2972)、プラスミノーゲン(Campbellら, 1998, Am. J. Physiol. 275 E321)、フィブリノーゲン(Campbellら, 1999, J. Biol. Chem 274 30215)、フィブリン(Campbellら, 1999,前掲)、トランスフェリン(Weinzimerら, 2001, J. Clin. Endocrinol. Metab. 86 1806)、およびKGF(Marcheseら, 1990, J. Cell Physiol. 144 326-32; UniProtKB/Swiss-Prot: #P21781、成熟タンパク質は全長配列のアミノ酸残基32〜194を含む)が挙げられる。
一般に、該残基はチロシンである。
一般に、該残基はチロシンである。
別の実施形態では、該ドメインはIGF−Iの残基4〜70からなる。
好ましくは、インテグリン受容体はα1またはα4インテグリンである。
ここで、「断片」とは、フィブロネクチンのドメイン、部分配列または部分を意味する。断片は好ましくは、成熟フィブロネクチン配列の500個未満、400個未満、300個未満またはより好ましくは、約80〜280個の連続するアミノ酸を構成する。フィブロネクチンの複数の断片も意図される。
好ましくは、上記のような合成キメラタンパク質は、増殖因子配列とフィブロネクチンアミノ酸配列の間に連続して位置する「リンカー配列」をさらに含む。
リンカー配列の特定の例は、Gly4 Ser(配列番号7);Gly4 Ser3(配列番号8);(Gly4 Ser)3(配列番号9);および(Gly4 Ser)4(配列番号10)から選択され得るが、これらに限定されない。
Leu Ile Lys Met Lys Pro(配列番号11)
に従うものを含む。
Gln Pro Gln Gly Leu Ala Lys(配列番号12)
に従うものを含む。
典型的には、タンパク質に関して、「変異型」タンパク質は、1つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されたものである。当技術分野では、いくつかのアミノ酸を、そのタンパク質の活性の性質を変化させることなく、幅広い類似の特性を有する他のアミノ酸に変化させ得ることが十分に理解されている(保存的置換)。
本発明はまた、増殖因子の受容体結合ドメイン、フィブロネクチンのインテグリン結合ドメインまたはそれを含む単離されたタンパク質複合体の誘導体も意図する。
アルギニン残基のグアニジン基は、2,3−ブタンジオン、フェニルグリオキサールおよびグリオキサールなどの試薬で複素環式縮合生成物を形成することによって修飾され得る。
ヒスチジン残基のイミダゾール環は、ジエチルピロカーボネートによるN−カルボエトキシル化によって、またはヨード酢酸誘導体によるアルキル化によって修飾され得る。
単離されたタンパク質複合体、およびその個々のタンパク質成分(断片、変異体、誘導体およびホモログを含む)は、当業者に公知の任意の好適な手順によって作製され得る。
組換えタンパク質の生成は当技術分野で周知であるが、当業者は、例えばSambrookら, MOLECULAR CLONING. A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Press, 1989)の特に第16章および第17章;CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Ausubelら編(John Wiley & Sons, Inc. 1995-1999)の特に第10章および第16章;ならびにCURRENT PROTOCOLS IN PROTEIN SCIENCE, Coliganら編(John Wiley & Sons, Inc. 1995-1999)の特に第1章、第5章および第6章に記載されているような標準的プロトコールを参照してもよい。
(i)発現ベクターにおいて1つ以上の調節ヌクレオチド配列に作動可能に連結された当該タンパク質をコードする核酸を含む発現構築物を作製するステップ;
(ii)宿主細胞をその発現構築物でトランスフェクションまたは形質転換するステップ;および
(iii)宿主細胞内で組換えタンパク質を発現させるステップ
を含む方法によって産生される。
「作動可能に連結された」または「作動可能に接続された」とは、調節ヌクレオチド配列(複数可)が、その核酸の転写、またはその核酸によりコードされているタンパク質の翻訳を開始、調節、または他の方法で制御するように、本発明の組換え核酸に対して配置されていることを意味する。
本明細書において「核酸」とは、一本鎖または二本鎖mRNA、RNA、cRNA、RNAiならびにDNA(cDNAおよびゲノムDNAおよびDNA−RNAハイブリッドを含む)を表す。
「プローブ」は、例えばノーザンブロット法またはサザンブロット法で相補配列を検出するために適宜標識された一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり得る。
本明細書において「増幅産物」とは、核酸増幅技術によって作製された核酸産物を指す。
一実施形態では、核酸ホモログは、本明細書に記載される合成キメラタンパク質構築物のいずれか1つをコードする核酸と少なくとも70%、好ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも90%、さらにより好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有する。
本明細書において高ストリンジェンシーという場合には、
(i)42℃でのハイブリダイゼーションには、少なくとも約31%v/v〜少なくとも約50%v/vのホルムアミドおよび少なくとも約0.01M〜少なくとも約0.15Mの塩、42℃での洗浄には、少なくとも約0.01M〜少なくとも約0.15Mの塩;
(ii)65℃でのハイブリダイゼーションには、1%BSA、1mM EDTA、0.5M NaHPO4(pH7.2)、7%SDS、65℃を超える温度での約1時間の洗浄には、(a)0.1×SSC、0.1%SDS;または(b)0.5%BSA、1mM EDTA、40mM NaHPO4(pH7.2)、1%SDS;ならびに
(iii)68℃またはそれ以上での約20分の洗浄には、0.2×SSC、0.1%SDS
を含み、包含する。
上記のことにもかかわらず、Ausubelら、前掲の第2.9章および第2.10章の、特に2.9.1〜2.9.20頁に記載されているようなストリンジェント条件が当技術分野で周知である。
標識は色素原、触媒、酵素、蛍光団、化学発光分子、ユウロピウム(Eu34)などのランタニドイオン、放射性同位元素、および直接的可視標識(direct visual label)を含む群から選択し得る。直接的可視標識の場合、コロイド金属粒子もしくは非金属粒子、色素粒子、酵素もしくは基質、有機ポリマー、ラテックス粒子、リポソーム、またはシグナル生成分子を含有するその他の小胞などを使用し得る。
このような単離されたタンパク質複合体は、本発明の合成キメラタンパク質を含むいずれの形態であってもよいが、これに限定されない。
好ましくは、薬学上許容される担体、希釈剤または賦形剤は、哺乳類、より好ましくはヒトへの投与に好適なものである。
本発明の組成物を患者に提供するには、安全な投与経路であればいずれを用いてもよい。例えば、経口、直腸、非経口、舌下、口内、静脈内、関節内、筋肉内、皮内、皮下、吸入、眼内、腹腔内、脳室内および経皮などが使用可能である。
本発明の医薬組成物はまた、ウイルスベクター(ワクシニアなど)などの発現ベクターおよび遺伝子療法において有用なウイルスベクターを含み得る。後者には、Braun-Falcoら(1999, Gene Ther. 6 432)に記載されているようなアデノウイルスおよびアデノウイルス随伴ウイルス(AAV)、Buchshacherら(2000, Blood 95 2499)に記載されているものなどのレトロウイルスおよびレンチウイルスベクター、ならびに単純ヘルペスウイルスおよびサイトメガロウイルスに由来するベクターが含まれる。内分泌遺伝子療法に有用なウイルスベクターの概論はStoneら(2000, J. Endocrinol. 164 103)に示されている。
あるいは、二次的な部位への腫瘍細胞遊走を遮断することにより腫瘍転移が防止または阻害される処置方法も意図される。さらに、細胞増殖を遮断することにより癌を処置する方法も意図される。
また、例えば所望の増殖因子発現を遺伝的に操作することにより、皮膚代用を作製するために皮膚細胞を遺伝的に改変し得る方法も存在する(Suppら, 2000, J. Invest. Dermatol. 114 5)。この分野の総説の一例がBevanら(Biotechnol. Gent. Eng.Rev. 16 231)に示されている。
これらの方法は細胞遊走を刺激し、それにより、創傷および火傷の治癒、潰瘍などの皮膚損傷部の修復、例えば自己皮膚のin vitro培養による組織置換および移植、腎臓および肺などの内部器官の再上皮化、ならびに損傷した神経組織の修復を助長する、または進行させるために使用可能である。
より詳しくは、頭蓋顔面手術に有用な代用口腔粘膜の作製が、Izumiら(2000, J. Dent. Res. 79 798)に記載されている。胎児ケラチノサイトおよび皮膚線維芽細胞は、Fauzaら(J. Pediatr. Surg. 33 357)に記載されているものなど、皮膚損傷部を処置する目的で、移植用の皮膚を作製するためにin vitroで増殖させることができるが、in vitroにおいてヒアルロン酸由来生体材料上で培養された皮膚および表皮要素からの皮膚置換は火傷の処置に有用である可能性があることが示されている(Zacchiら, 1998, J. Biomed. Mater. Res. 40 187)。
(実施例)
実施例1
IGF−I、IGFBPおよびFNは細胞遊走を刺激する
IGFBP−3または−5の存在下、予め結合させたFN(1μg/mL)および漸増濃度のIGF−Iで被覆したトランスウェル(Transwell)(登録商標)にMCF−10A細胞を播種した。これらの細胞を5時間遊走させた。その後、各処理に応答して膜を通り抜ける細胞の数を、FN単独(SFM)で遊走した細胞に対するパーセンテージとして表した。3回の実験(各反復実験において4ウェルで処理を試験した)からMCF−10データをプールし、図2に示す。エラーバーはSEMを示す。SFM=無血清培地。IGF−I:FN、IGF−I:IGFBP−3:FNおよびIGF−I:IGFBP−5:FNは、FN単独の対照ウェルよりも有意に高い遊走を刺激することができた(応答はFN対照ウェルの、それぞれ153.7+/−7.3%、192.5+/−6.8%および187.5+/−6.5%)(p<0.05)。また、IGF−I:IGFBP−3:FNおよびIGF−I:IGFBP−5:FN処置に対するMCF7−10A細胞の応答は、FNとIGFBPまたはIGF−Iのいずれか一方とのみを含む場合に得られた応答よりも有意に高かった(p<0.05)。このデータは、トリマーIGF−I:IGFBP−3/5:FN複合体が存在する場合に最大応答が生じることを示す。このことは、FNと結合したIGF−Iを含むキメラがFN結合インテグリンおよび同族増殖因子受容体を活性化することを示唆する。
実施例2
合成キメラフィブロネクチン:増殖因子タンパク質
ここでは、FN:増殖因子(例えば、IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFおよびKGF)キメラの形態の本発明の合成キメラタンパク質の例を示す。
A)FN III型ドメイン8[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
B)FN III型ドメイン8〜9[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
C)FN III型ドメイン8〜10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
D)FN III型ドメイン9[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
E)FN III型ドメイン9〜10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
F)FN III型ドメイン10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはGF);
G)FN I型ドメイン1〜5[リンカー]FN III型ドメイン8[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
H)FN I型ドメイン1〜5[リンカー]FN III型ドメイン8〜9[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
I)FN I型ドメイン1〜5[リンカー]FN III型ドメイン8〜10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
J)FN I型ドメイン1〜5[リンカー]FN III型ドメイン9[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
K)FN I型ドメイン1〜5[リンカー]FN III型ドメイン9〜10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
L)FN I型ドメイン1〜5[リンカー]FN III型ドメイン10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
M)FN I型ドメイン4〜5[リンカー]FN III型ドメイン8[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
N)FN I型ドメイン4〜5[リンカー]FN III型ドメイン8〜9[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
O)FN I型ドメイン4〜5[リンカー]FN III型ドメイン8〜10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
P)FN I型ドメイン4〜5[リンカー]FN III型ドメイン9[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
Q)FN I型ドメイン4〜5[リンカー]FN III型ドメイン9〜10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF);
R)FN I型ドメイン4〜5[リンカー]FN III型ドメイン10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF)
が挙げられる。
Claims (25)
- 合成キメラタンパク質の形態にある、単離されたタンパク質複合体であって、
(i)増殖因子、または少なくとも同族増殖因子受容体と結合することができる前記増殖因子のドメイン、および
(ii)少なくともフィブロネクチン(FN)のインテグリン結合ドメインを含むFNの1つ以上のIII型ドメイン
のアミノ酸配列を含む単離されたタンパク質複合体。 - 前記増殖因子がインスリン様増殖因子−I(IGF−I)、インスリン様増殖因子−II(IGF−II)、上皮細胞増殖因子(EGF)、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)およびケラチノサイト増殖因子(KGF)から選択される、請求項1に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記インテグリン結合ドメインがα1インテグリン結合ドメインまたはα4インテグリン結合ドメインである、請求項1または2に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記FNの1つ以上のIII型ドメインがFN配列(配列番号1)のアミノ酸1266〜1536を含む、請求項1または2に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記FNの1つ以上のIII型ドメインがFN配列(配列番号1)のアミノ酸1447〜1536を含む、請求項1または2に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記FNの1つ以上のIII型ドメインがFN配列(配列番号1)のアミノ酸1173〜1536を含む、請求項1または2に記載の単離されたタンパク質複合体。
- IGFBPアミノ酸配列を含まない、請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体。
- FNの付加的断片をさらに含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記FNの付加的断片がFN配列(配列番号1)のアミノ酸50〜273を含む、請求項8に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記FNの付加的断片がFN配列(配列番号1)のアミノ酸184〜273を含む、請求項8に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 少なくとも1つのリンカー配列をさらに含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記リンカー配列がプロテアーゼ切断部位を含む、請求項11に記載の単離されたタンパク質複合体。
- 前記リンカー配列が
(i)Gly4 Ser(配列番号7)、
(ii)Gly4 Ser3(配列番号8)、
(iii)(Gly4 Ser)3(配列番号9)、
(iv)(Gly4 Ser)4(配列番号10)、
(v)Leu Ile Lys Met Lys Pro(配列番号11)、および
(vi)Gln Pro Gln Gly Leu Ala Lys(配列番号12)
からなる群から選択される、請求項11に記載の単離されたタンパク質複合体。 - 請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体をコードする、単離された核酸。
- ベクターにおいて1つ以上の調節ヌクレオチド配列に作動可能に連結された請求項14に記載の単離された核酸を含む、遺伝子構築物。
- 前記単離された核酸がプロモーターに作動可能に連結されている発現構築物である、請求項15に記載の遺伝子構築物。
- 請求項15に記載の遺伝子構築物を含む、宿主細胞。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体と、薬学上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体を、含浸、または被覆、あるいは他の方法で含ませた外科用インプラント、スキャフォールドまたは人工補綴物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体を含む、創傷用または火傷用包帯。
- 細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を促進する方法であって、請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体を、細胞により発現された増殖因子受容体およびインテグリン受容体の双方と結合させることにより、前記細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を誘導し、増大させ、または他の態様で促進するステップを含む方法。
- 前記単離されたタンパク質複合体がin situで細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を促進するために動物に投与される、請求項21に記載の方法。
- 予防的にまたは治療的に、上皮細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を誘導し、増大させ、または他の態様で促進し、それにより、in situでの創傷治癒を助長するための、請求項21に記載の方法。
- 前記動物がヒトである、請求項22または23に記載の方法。
- 前記単離されたタンパク質複合体がin vitroで1つ以上の細胞または組織に投与される、請求項21に記載の方法。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022528132A (ja) * | 2019-04-05 | 2022-06-08 | 韓國セラミック技術院 | Csq-タグを用いたタンパク質の発現及び精製方法 |
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007523598A (ja) * | 2003-02-05 | 2007-08-23 | クイーンズランド ユニバーシティ オブ テクノロジー | 成長因子複合体ならびに細胞の移動および増殖の調節 |
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---|---|---|---|---|
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---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
JPN6014053735; Biotechnology Letters,2004,26,p.1837-40 * |
JPN6014053736; Connective tissue,1998,30(1),p.57-62 * |
JPN6015037621; J Mol Biol.,2003 Mar 7,326(5),p.1475-88 * |
JPN6015037626; J Biol Chem.,1994 Apr 8,269(14),p.10856-63 * |
JPN6015037630; Mol Biol Cell.,1997 Dec,8(12),p.2563-73 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022528132A (ja) * | 2019-04-05 | 2022-06-08 | 韓國セラミック技術院 | Csq-タグを用いたタンパク質の発現及び精製方法 |
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