JP2013509890A - invivoでのニューロン特異的な最適化された連続DOPA合成用の新規ウイルスベクター構築物 - Google Patents
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- C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
- C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
- C12Y305/04016—GTP cyclohydrolase I (3.5.4.16)
Abstract
【解決手段】本発明は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)及びGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)といった2つのポリペプチドをコードする配列を含む1ベクター発現系に関する。2つのポリペプチドは、3:1乃至15:1、例として3:1乃至7:1の比で選択的に発現させることができる。本発明は、限定はされないが、パーキンソン病を含むドーパミン欠乏障害等、カテコールアミン欠乏障害の治療に有用である。更に、本発明は、カテコールアミンの生産増加を制限するために、必要とする細胞へ、ベクター構築物を送達する方法を提供する。
【選択図】図1
Description
本願は、米国仮出願第61/259,502号に基づく優先権を主張する国際出願である。本願において引用した全ての特許及び非特許文献は、出典を明記することによりその開示内容全体を本願明細書の一部とする。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合された前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合された前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復は、作動可能に連結されたポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える、1ベクター発現系に関する。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一である、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合された前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合された前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されたポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記末端反復は、作動可能に連結されたポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える、1ベクター発現系に関する。
a.ポリペプチドの酵素活性、又は
b.生産されたBH4の量、又は
c.前記ポリペプチドの発現量、又は
d.GTPシクロヒドロキシラーゼ1ポリペプチド及びチロシンヒドロキシラーゼのポリペプチドにそれぞれ対応する転写mRNAのレベル、を測定することを備える方法に関する。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第2のヌクレオチド配列に結合された前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合された前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復は、作動可能に連結されたポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える。
ii)所定のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、又は
iii)ポリヌクレオチド(i)又は(ii)によりコードされたポリペプチドの断片であり、本明細書で指定する少なくとも1つの所定の活性を有する断片をコードするポリヌクレオチド、及び
iv)相補鎖が(i)、(ii)、及び(iii)の何れかに定めたポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、本明細書で指定する所定の少なくとも1つの活性を有するポリペプチド又はその断片をコードするポリヌクレオチド、及び
v)ポリヌクレオチド(iii)又は(iv)のヌクレオチド配列へ縮重するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、
又はこうしたポリヌクレオチドの相補鎖。
i)極性側鎖を有するアミノ酸(Asp、Glu、Lys、Arg、His、Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr、及びCys)、
ii)非極性側鎖を有するアミノ酸(Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Pro、及びMet)
iii)脂肪族側鎖を有するアミノ酸(Gly、Ala、Val、Leu、Ile)
iv)環状側鎖を有するアミノ酸(Phe、Tyr、Trp、his、Pro)
v)芳香族側鎖を有するアミノ酸(Phe、Tyr、Trp)
vi)酸性側鎖を有するアミノ酸(Asp、Glu)
vii)塩基性側鎖を有するアミノ酸(Lys、Arg、His)
viii)アミド側鎖を有するアミノ酸(Asn、Glu)
ix)ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸(Ser、Thr)
x)硫黄含有側鎖を有するアミノ酸(Cys、Met)、
xi)天然弱疎水性アミノ酸(Pro、Ala、Gly、Ser、Thr)
xii)親水性の酸性アミノ酸(Gln、Asn、Glu、Asp)
xiii)疎水性アミノ酸(Leu、Ile、Val)
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結された第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合された前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合された前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復は、作動可能に連結されたポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える、1ベクター発現系に関する。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記末端反復は、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える、1ベクター発現系に関する。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、例として少なくとも80%同一であり、例えば少なくとも90%同一であり、例として少なくとも92%同一であり、例えば少なくとも95%同一であり、例として少なくとも97%同一であり、例えば少なくとも98%同一であり、例として少なくとも99%同一であり、例えば少なくとも99.5%同一であり、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、例として少なくとも80%同一であり、例えば少なくとも90%同一であり、例として少なくとも92%同一であり、例えば少なくとも95%同一であり、例として少なくとも97%同一であり、例えば少なくとも98%同一であり、例として少なくとも99%同一であり、例えば少なくとも99.5%同一であり、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、例として少なくとも80%同一であり、例えば少なくとも90%同一であり、例として少なくとも92%同一であり、例えば少なくとも95%同一であり、例として少なくとも97%同一であり、例えば少なくとも98%同一であり、例として少なくとも99%同一であり、例えば少なくとも99.5%同一であり、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、例として少なくとも80%同一であり、例えば少なくとも90%同一であり、例として少なくとも92%同一であり、例えば少なくとも95%同一であり、例として少なくとも97%同一であり、例えば少なくとも98%同一であり、例として少なくとも99%同一であり、例えば少なくとも99.5%同一であり、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、例として少なくとも80%同一であり、例えば少なくとも90%同一であり、例として少なくとも92%同一であり、例えば少なくとも95%同一であり、例として少なくとも97%同一であり、例えば少なくとも98%同一であり、例として少なくとも99%同一であり、例えば少なくとも99.5%同一であり、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記末端反復は、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える、1ベクター発現系に関する。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合しており、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復は、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える。
(1)Chakos et al. Striatal enlargement in rats chronically treated with neuroleptic. Biol Psychiatry (1998) vol. 44 (8) pp. 675-84
(2)Yin et al. Striatal volume differences between non-human and human primates. J Neurosci Methods (2009) vol. 176 (2) pp. 200-5
(3)Beyer et al. Weight change and body composition in patients with Parkinson's disease. J Am Diet Assoc (1995) vol. 95 (9) pp. 979-83
(4)Uc et al. Predictors of weight loss in Parkinson's disease. MovDisord (2006) vol. 21 (7) pp. 930-6
(5)Delikanaki-Skaribas et al. Daily energy expenditure, physical activity, and weight loss in Parkinson's disease patients. MovDisord (2009) vol. 24 (5) pp. 667-71
SEQ ID NO 2:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH-2(ヒト)
SEQ ID NO 3:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH-3(ヒト)
SEQ ID NO 4:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH-4(ヒト)
SEQ ID NO 5:GTPシクロヒドロラーゼ1(ラット)
SEQ ID NO 6:GTPシクロヒドロラーゼ1(マウス)
SEQ ID NO 7:チロシン3-ヒドロキシラーゼ(ヒト)
SEQ ID NO 8:チロシン3-モノオキシゲナーゼ(ヒト)
SEQ ID NO 9:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
SEQ ID NO 10:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
SEQ ID NO 11:チロシン3-モノオキシゲナーゼ(ヒト)
SEQ ID NO 12:チロシン3-モノオキシゲナーゼ(ヒト)
SEQ ID NO 13:チロシン3-ヒドロキシラーゼ(ラット)
SEQ ID NO 14:チロシン3-ヒドロキシラーゼ(マウス)
SEQ ID NO 15:アデノ随伴ウイルス2左末端配列
SEQ ID NO 16:アデノ随伴ウイルス2右末端配列
SEQ ID NO 17:ヒトシナプシン1(SYN1)プロモーター配列
SEQ ID NO 18:ヒトGTPシクロヒドロラーゼ(GCH1)、転写変異体1
SEQ ID NO 19:サルウイルス40初期ポリアデニル化配列
SEQ ID NO 20:サルウイルス40後期ポリアデニル化配列
SEQ ID NO 21:ヒトチロシンヒドロキシラーゼ(TH)、転写変異体2
SEQ ID NO 22:ウッドチャック肝炎Bウイルス(WHV8)転写後調節要素配列
[実施態様1]
1ベクター発現系であって、
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復の少なくとも1つは、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える1ベクター発現系。
[実施態様2]
前記第1の発現カセットにより発現される前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットにより発現される前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様1a)記載のベクター。
[実施態様3]
発現される前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットにより発現される前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様1b)記載のベクター。
[実施態様4]
コードされたGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、コードされたチロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様1c)記載のベクター。
[実施態様5]
コードされたGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、コードされたチロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様1d)記載のベクター。
[実施態様6]
前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まない、実施態様1乃至5記載のベクター。
[実施態様7]
前記ベクターは、1乃至40kb、例えば1乃至30kb、例として1乃至20kb、例えば1乃至15kb、例として1乃至10、例えば1乃至8kb、例として2乃至7kb、例えば3乃至6kb、例として4乃至5kbのパッケージング容量を有する、実施態様1記載のベクター。
[実施態様8]
前記ベクターは、4.5乃至4.8kbのパッケージング容量を有する、実施態様1記載のベクター。
[実施態様9]
前記ベクターは、ウイルスベクターである、実施態様1乃至8記載のベクター。
[実施態様10]
前記ベクターは、プラスミドベクターである、実施態様1乃至8記載のベクター。
[実施態様11]
前記ベクターは、合成ベクターである、実施態様1乃至8記載のベクター。
[実施態様12]
前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、及びレトロウイルスベクターから成る群から選択される、実施態様9記載のベクター。
[実施態様13]
前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、実施態様9記載のベクター。
[実施態様14]
前記アデノ随伴ベクター(AAV)は、AAV2ベクターである、実施態様12記載のベクター。
[実施態様15]
前記AAV2ベクターのカプシドは、AAV2カプシド以外のAAVカプシドにパッケージされる、実施態様14記載のベクター。
[実施態様16]
前記AAV2ベクターは、AAV5カプシドにパッケージされる、実施態様15記載のベクター。
[実施態様17]
前記ベクターは、哺乳類細胞において機能する、実施態様1乃至16の何れかに記載のベクター。
[実施態様18]
前記生物活性を有する断片は、少なくとも50個の隣接アミノ酸を含み、選択される配列において指定された任意のアミノ酸が異なるアミノ酸へ変化するのは、このように変化する配列内のアミノ酸残基が15個以内の場合である、実施態様1乃至5の何れかに記載のベクター。
[実施態様19]
前記生物活性を有する断片は、チロシンヒドロキシラーゼの触媒ドメインである、実施態様18記載のベクター。
[実施態様20]
前記生物活性を有する変異体は、突然変異したチロシンヒドロキシラーゼポリペプチドであり、残基S19、S31、S40、又はS404の1つ以上が別のアミノ酸残基に変化している、実施態様1記載のベクター。
[実施態様21]
前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチドは、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも80%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも85%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも90%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも95%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも96%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも97%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも98%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも99%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと100%同一である、実施態様1乃至20の何れかに記載のベクター。
[実施態様22]
前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチドは、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも80%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも85%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも90%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも95%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも96%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも97%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも98%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも99%同一であり、より好ましくはSEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと100%同一である、実施態様1乃至20の何れかに記載のベクター。
[実施態様23]
前記第1及び/又は第2のプロモーターは、哺乳類細胞に特異的なプロモーターである、実施態様1記載のベクター。
[実施態様24]
前記哺乳類細胞は、神経細胞である、実施態様23記載のベクター。
[実施態様25]
前記神経細胞は、ニューロンである、実施態様34記載のベクター。
[実施態様26]
前記第1及び前記第2のプロモーターは、シナプシン1プロモーターである、実施態様1記載のベクター。
[実施態様27]
前記第1又は前記第2のプロモーターは、シナプシン1プロモーターである、実施態様1記載のベクター。
[実施態様28]
前記プロモーターは、構成的プロモーターである、実施態様1記載のベクター。
[実施態様29]
前記構成的活性プロモーターは、CAG、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF-1α、SV40、Mt1から成る群から選択される、実施態様28記載のベクター。
[実施態様30]
前記プロモーターは、誘導性プロモーターである、実施態様1記載のベクター。
[実施態様31]
前記誘導性プロモーターは、Tet-On、Tet-Off、Mo-MLV-LTR、Mx1、プロゲステロン、RU486、及びラパマイシン誘導プロモーターから成る群から選択される、実施態様30記載のベクター。
[実施態様32]
前記第1の発現カセット又は前記第2の発現カセットは、更に、ポリアデニル化配列を含む、実施態様1記載のベクター。
[実施態様33]
前記第1の発現カセット及び前記第2の発現カセットは、更に、ポリアデニル化配列を含む、実施態様1記載のベクター。
[実施態様34]
前記ポリアデニル化配列は、SV40ポリアデニル化配列である、実施態様32又は33記載のベクター。
[実施態様35]
前記ポリアデニル化配列の5’は、前記第1及び/又は前記第2のヌクレオチド配列の3’と作動可能に連結される、実施態様32乃至34の何れかに記載のベクター。
[実施態様36]
GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする前記第1のヌクレオチド配列は、SEQ ID NO.18の配列を含む、実施態様1記載のベクター。
[実施態様37]
チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする前記第2のヌクレオチド配列は、SEQ ID NO.21の配列を含む、実施態様1記載のベクター。
[実施態様38]
前記第2のヌクレオチド配列は、転写後調節要素と作動可能に連結される、実施態様1乃至37の何れかに記載のベクター。
[実施態様39]
前記転写後調節要素は、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素(WPRE)である、実施態様38記載のベクター。
[実施態様40]
前記ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素は、SEQ ID NO.22の配列を含む、実施態様39記載のベクター。
[実施態様41]
前記ベクターの発現カセットは、5’末端反復及び3’末端反復を含む、実施態様1乃至40の何れかに記載のベクター。
[実施態様42]
前記5’及び3’末端反復は、逆方向末端反復 [ITR]及び長末端反復 [LTR]から選択される、実施態様41記載のベクター。
[実施態様43]
前記5’及び3’末端反復は、AAV逆方向末端反復 [ITR]である、実施態様41記載のベクター。
[実施態様44]
前記逆方向末端反復は、SEQ ID NO.15及びSEQ ID NO.16の配列を含む、実施態様43記載のベクター。
[実施態様45]
TH:GCH1の比は、少なくとも3:1、例として4:1、例えば5:1、例として6:1、例えば7:1、例として10:1、例えば15:1、例として20:1、例えば25:1、例として30:1、例えば35:1、例として40:1、例えば45:1、例として50:1である、実施態様1乃至44の何れかに記載のベクター。
[実施態様46]
TH:GCH1の比は、7:1である、実施態様1乃至44の何れかに記載のベクター。
[実施態様47]
前記比は、発現したTH及びGCH1酵素の活性を測定することにより決定される、実施態様45乃至46の何れかに記載のベクター。
[実施態様48]
前記比は、テトラヒドロビオプテリン(BH 4 )の量を測定することにより決定される、実施態様45乃至46の何れかに記載のベクター。
[実施態様49]
前記比は、転写されたmRNAの量を測定することにより決定される、実施態様45乃至46の何れかに記載のベクター。
[実施態様50]
前記比は、発現したタンパク質の量を測定することにより決定される、実施態様45乃至46の何れかに記載のベクター。
[実施態様51]
前記ベクターは、図6において定義されたベクターである、先行実施態様の何れかに記載のベクター。
[実施態様52]
前記ベクターは、最小限の組み込みを行うベクターである、実施態様1乃至51の何れかに記載のベクター。
[実施態様53]
薬剤として使用するための実施態様1乃至52の何れかに記載のベクター。
[実施態様54]
実施態様1乃至53の何れかに記載のベクターを含む単離宿主細胞。
[実施態様55]
前記細胞は、真核細胞、好ましくは哺乳類細胞、より好ましくは霊長類細胞、より好ましくはヒト細胞から成る群から選択される、実施態様54記載の宿主細胞。
[実施態様56]
前記細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞、CHO-K1、ベビーハムスター腎臓細胞、マウス線維芽細胞-3T3細胞、アフリカミドリザル細胞株、ラット副腎褐色細胞腫、AT3細胞、ラットグリア腫瘍細胞、ラット神経細胞、及びラット海馬細胞から成る群から選択される、実施態様55記載の宿主細胞。
[実施態様57]
カテコールアミン機能不全に関連する疾患を治療する薬剤の調製のための実施態様1乃至56の何れかに記載のベクターの使用
[実施態様58]
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン欠乏である、実施態様57記載の使用。
[実施態様59]
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン過多である、実施態様57記載の使用。
[実施態様60]
前記カテコールアミン欠乏は、ドーパミン欠乏である、実施態様58記載の使用。
[実施態様61]
前記カテコールアミン過多は、ドーパミン過多である、実施態様59記載の使用。
[実施態様62]
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害、又は損傷である、実施態様57乃至61の何れかに記載の使用。
[実施態様63]
中枢及び/又は末梢神経系の前記疾患、障害、又は損傷は、神経変性障害である、実施態様62記載の使用。
[実施態様64]
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、大脳基底核の疾患である、実施態様57乃至63の何れかに記載の使用。
[実施態様65]
前記疾患は、パーキンソン病(PD)、DOPA反応性ジストニア、ADHD、統合失調症、鬱病、血管性パーキンソニズム、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝的ドーパミン受容体異常、慢性的なオピオイド、コカイン、アルコール、又はマリファナの使用、副腎不全、高血圧、ノルアドレナリン欠乏、外傷後ストレス障害、病的賭博障害、認知症、レヴィー小体認知症から成る群から選択される、実施態様64記載の使用。
[実施態様66]
前記神経変性障害は、パーキンソン病(PD)である、実施態様65記載の使用。
[実施態様67]
カテコールアミン機能不全に関連する疾患を治療する方法において使用するための実施態様1乃至53の何れかに記載のベクター。
[実施態様68]
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン欠乏である、実施態様67記載のベクター。
[実施態様69]
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン過多である、実施態様67記載のベクター。
[実施態様70]
前記カテコールアミン欠乏は、ドーパミン欠乏である、実施態様68記載のベクター。
[実施態様71]
前記カテコールアミン過多は、ドーパミン過多である、実施態様69記載のベクター。
[実施態様72]
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害、又は損傷である、実施態様67乃至71の何れかに記載のベクター。
[実施態様73]
中枢及び/又は末梢神経系の前記疾患、障害、又は損傷は、神経変性障害である、実施態様72記載のベクター。
[実施態様74]
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、大脳基底核の疾患である、実施態様67乃至73の何れかに記載のベクター。
[実施態様75]
前記疾患は、パーキンソン病(PD)、DOPA反応性ジストニア、ADHD、統合失調症、鬱病、血管性パーキンソニズム、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝的ドーパミン受容体異常、慢性的なオピオイド、コカイン、アルコール、又はマリファナの使用、副腎不全、高血圧、ノルアドレナリン欠乏、外傷後ストレス障害、病的賭博障害、認知症、レヴィー小体認知症から成る群から選択される、実施態様74記載のベクター。
[実施態様76]
前記神経変性障害は、パーキンソン病(PD)である、実施態様75記載のベクター。
[実施態様77]
必要とする患者において、カテコールアミン機能不全に関連する疾患を治療する方法であって、実施態様1乃至53の何れかに記載のベクターを前記個体に投与することを備える方法。
[実施態様78]
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン欠乏である、実施態様77記載の方法。
[実施態様79]
前記カテコールアミン機能不全は、カテコールアミン過多である、実施態様77記載の方法。
[実施態様80]
前記カテコールアミン欠乏は、ドーパミン欠乏である、実施態様78記載の方法。
[実施態様81]
前記カテコールアミン過多は、ドーパミン過多である、実施態様79記載の方法。
[実施態様82]
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害、又は損傷である、実施態様77乃至81の何れかに記載の方法。
[実施態様83]
中枢及び/又は末梢神経系の前記疾患、障害、又は損傷は、神経変性障害である、実施態様82記載の方法。
[実施態様84]
カテコールアミン機能不全に関連する前記疾患は、大脳基底核の疾患である、実施態様77乃至83の何れかに記載の方法。
[実施態様85]
前記疾患は、パーキンソン病(PD)、DOPA反応性ジストニア、ADHD、統合失調症、鬱病、血管性パーキンソニズム、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝的ドーパミン受容体異常、慢性的なオピオイド、コカイン、アルコール、又はマリファナの使用、副腎不全、高血圧、ノルアドレナリン欠乏、外傷後ストレス障害、病的賭博障害、認知症、レヴィー小体認知症から成る群から選択される、実施態様84記載の方法。
[実施態様86]
前記神経変性障害は、パーキンソン病(PD)である、実施態様84記載の方法。
[実施態様87]
パーキンソン病の治療方法において使用するための医薬組成物であって、前記組成物は、1ベクター発現系と、前記ベクターを大脳基底核へ送達するための処方とを含み、前記1ベクター発現系は、
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復は、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える組成物。
[実施態様88]
前記第1の発現カセットにより発現される前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットにより発現される前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様87a)記載の組成物。
[実施態様89]
発現される前記GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、前記第2の発現カセットにより発現される前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様87b)記載の組成物。
[実施態様90]
コードされたGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、コードされたチロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様87c)記載の組成物。
[実施態様91]
コードされたGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、及びSEQ ID NO.6から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、コードされたチロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体は、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、及びSEQ ID NO.14から成る群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、実施態様87d)記載の組成物。
[実施態様92]
前記処方は、マニトール、ヘパリン、又はガドリニウムに基づくMRI造影剤を含む、実施態様91記載の医薬組成物。
[実施態様93]
更に、栄養素又は可逆的プロテアソーム阻害剤を含む、実施態様91乃至92の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様94]
、実施態様1乃至53の何れかに記載のベクターと、医薬的に許容可能な担体又は希釈剤とを含む医薬組成物。
[実施態様95]
注入、舌下錠又はスプレー、皮膚投与、又は吸入による投与用に処方される、実施態様94記載の医薬組成物。
[実施態様96]
前記注入は、頭蓋内、大脳内、静脈内、硝子体内、鼻腔内、筋肉内、髄腔内、腹腔内、皮下、ボーラス又は連続投与である、実施態様95記載の医薬組成物。
[実施態様97]
前記組成物のpHは、pH4乃至pH10である、実施態様91乃至96の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様98]
ベクターの用量は、被殻灰白質1ミリリットル当たり1.5E+10乃至2.2E+12のベクターゲノムコピーである、実施態様91乃至97の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様99]
投与は、30分乃至24時間の間隔で行われる、実施態様91乃至98の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様100]
投与は、1乃至6時間の間隔で行われる、実施態様91乃至98の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様101]
治療の継続時間は、6乃至72時間である、実施態様91乃至98の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様102]
治療の継続時間は、一生涯である、実施態様91乃至98の何れかに記載の医薬組成物。
[実施態様103]
GTPシクロヒドロキシラーゼ1ポリペプチド(SEQ ID NO.1、2、3、4、5、及び6)及びチロシンヒドロキシラーゼポリペプチド(SEQ ID NO.7、8、9、10、11、12、13、及び14)それぞれの、又はその変異体の、発現比を決定する方法であって、前記ポリペプチドは、実施態様1乃至53の何れかに記載のベクターによりコードされ、
a.前記ポリペプチドの酵素活性、又は
b.生成されたBH 4 の量、又は
c.前記ポリペプチドの発現量、又は
d.GTPシクロヒドロキシラーゼ1ポリペプチド及びチロシンヒドロキシラーゼのポリペプチドにそれぞれ対応する転写mRNAのレベル、を測定することを備える方法。
[実施態様104]
前記比は、前記ポリペプチドの活性と前記ポリペプチドの存在量との組み合わせにより決定される、実施態様103記載の方法。
[実施態様105]
複数の部分に分かれたキットであって、実施態様91乃至102の何れかに記載の医薬組成物と、投与に関する指示とを備えるキット。
Claims (105)
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復の少なくとも1つは、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える1ベクター発現系。
a)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まないことを条件とする、第1及び第2の発現カセット、又は
b)第1及び第2の発現カセットであり、前記第1の発現カセットは、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第1のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記第2の発現カセットは、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする第2のヌクレオチド配列と作動可能に連結される第2のプロモーター配列を含むヌクレオチド配列を含み、前記ベクターは、アデノ随伴ベクター(AAV)である、第1及び第2の発現カセット、又は
c)プロモーター、第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記プロモーターは、前記第1のヌクレオチド配列と作動可能に連結され、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードする、発現カセット、又は
d)第1のヌクレオチド配列、内部リボソーム進入部位(IRES)等の翻訳開始ヌクレオチド配列、及び第2のヌクレオチド配列を含む発現カセットであり、前記翻訳開始ヌクレオチド配列は、前記第1及び前記第2のヌクレオチド配列を結合し、前記第2のヌクレオチド配列に結合される前記翻訳開始ヌクレオチド配列に結合される前記第1のヌクレオチド配列を含む配列は、5’及び3’末端反復に隣接し、前記第1のヌクレオチド配列は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記第2のヌクレオチド配列は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又は生物活性を有するその断片若しくは変異体をコードし、前記末端反復は、作動可能に連結されるポリペプチドの発現を指揮することが可能な配列を含む、発現カセット、を備える組成物。
a.前記ポリペプチドの酵素活性、又は
b.生成されたBH4の量、又は
c.前記ポリペプチドの発現量、又は
d.GTPシクロヒドロキシラーゼ1ポリペプチド及びチロシンヒドロキシラーゼのポリペプチドにそれぞれ対応する転写mRNAのレベル、を測定することを備える方法。
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