JP2018522595A - L−dopaの全身合成及び調節 - Google Patents
L−dopaの全身合成及び調節 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018522595A JP2018522595A JP2018526302A JP2018526302A JP2018522595A JP 2018522595 A JP2018522595 A JP 2018522595A JP 2018526302 A JP2018526302 A JP 2018526302A JP 2018526302 A JP2018526302 A JP 2018526302A JP 2018522595 A JP2018522595 A JP 2018522595A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- expression system
- promoter
- group
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/16—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with reduced pteridine as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.16)
- C12Y114/16002—Tyrosine 3-monooxygenase (1.14.16.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
- C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
- C12Y305/04016—GTP cyclohydrolase I (3.5.4.16)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/03—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on phosphates (4.2.3)
- C12Y402/03012—6-Pyruvoyltetrahydropterin synthase (4.2.3.12)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/13—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.13)
- C12Y114/13162—2,5-Diketocamphane 1,2-monooxygenase (1.14.13.162), i.e. camphor 1,2-monooxygenase
Abstract
本発明は、発現系の全身投与により実現される、個体の血中で一定レベルのL−DOPAを得ること、又は維持することを目的とする、酵素置換療法のための発現系に関する。したがって発明は、パーキンソン病を含むドパミン欠乏障害などのカテコールアミン欠乏障害の処置において有用である。
Description
本出願で引用された全ての特許及び非特許参考資料は、全体として参照により本明細書に組み入れられる。
本発明は、標的細胞中で差示的に発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現系であって、カテコールアミン機能障害に関連する医療状態、特にパーキンソン病及びL−DOPA誘発性ジスキネジアをはじめとする関連の障害などのドパミン欠乏に関連する疾患を処置するために必要とする患者へ末梢投与される、発現系に関する。
パーキンソン病(PD)は、臨床的には安静時振戦、強剛、随意運動の緩慢、及び姿勢不安定を特徴とする一般的な神経変性疾患である。黒質緻密部(SNpc)内のドパミン作動性ニューロン、ニューロン内細胞質封入体又は「レビー小体」の喪失、グリオーシス、及び線条体ドパミン欠損が、主な神経病理学的所見である。症例の10%を占める特異的遺伝子欠損に関係する遺伝性の症例を除き、PDは、原因不明の散発性疾病である。
ドパミンは、血液脳関門を通過しない。線条体ドパミン欠損は、ドパミンの末梢投与によって解決することができない。ドパミン(DA)前駆体L−3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン(L−DOPA)での治療が、パーキンソン病への最も有効な処置である。しかし処置の応答は、最初は優れているが、数年経過すると、ほとんどの患者がL−DOPA誘発性ジスキネジアなどの治療関連の有害作用を発症する(Obeso, Olanow, & Nutt, 2000)、(Ahlskog & Muenter, 2001)。これらの合併症は、線条体ニューロン上の過感受性DA受容体の間欠的かつパルス状の刺激により生じると考えられている(Chase, 1998)、(Nutt, Obeso, & Stocchi, 2000)。
黒質ドパミンニューロンは、およそ4サイクル/秒の一定速度で持続性に発火する。このバックグランド発火は、食物などの予期されない、又は有益な刺激の提供の際に相動性バーストにより一時的に中断される。神経伝達物質の放出量は一般に、ニューロン発火の速度を反映するため、線条体ドパミン濃度はかなり狭い範囲内になり、黒質線条体シナプスでのドパミン受容体はかなり安定した濃度の同族の神経伝達物質に暴露される。黒質線条体ドパミン作動性ニューロンの除神経が増加すると、外因性DOPAから形成される線条体ドパミンへの暴露がますます短時間になり、ドパミン濃度の相対的上昇及び降下が、生理学的に生じる振幅よりも大きな振幅を生じる。早期疾患の場合、経口投与の際に結果として生じるDOPAの送達における必然的な可変性は、大部分が気づかなくなり、ほとんどの患者が、持続的な効果を感じる。この安定した反応は、残りのドパミン作動性ニューロンの能力を反映して、外因性DOPAを長期間の運動反応に変換する。これらの観察は、初期パーキンソン病における黒質ドパミン作動性ニューロンの適切な残存補体の存在が線条体を脳DOPAの変遷から防護する、という概念と一致する。
処置が続くにつれ、L−DOPAの薬物動態特性で、より大きな臨床関連性が推測され始め、90分の半減期から予測されたより短期の運動反応が、明白になる。
L−DOPAの十二指腸(Syed, Murphy, Zimmerman, Mark, & Sage, 1998)、(Nyholm et al., 2003)若しくは静脈内(Mouradian, Heuser, Baronti, & Chase, 1990)輸液、又はDA受容体アゴニストアポモルフィンの皮下輸液(Poewe & Wenning, 2000)を利用した継続的なDA受容体刺激が、パーキンソン病患者における異常な不随意運動の頻度及び重症度を著しく低減することが示された。
経皮管及び携帯ポンプを介した十二指腸へのレボドパ/カルビドパのゲル配合剤の連続送達が、経口薬物療法よりも一定した血漿濃度をもたらす。治療薬(Duodopa)が、USAで、そして希少疾病用医薬品免除の下、EUで認可され、現在およそ800名の患者で用いられている。この治療薬のエビデンスベースは、依然として進展しつつある。Nyholmは、無作為化クロスオーバー試験を実施して、重度のジスキネジアのオフ期間(off periods)及びオンタイム(on time)の低減における経口多剤療法を越える十二指腸レボドパ輸液の優越性を立証した(Nyholm et al., 2005)。この兆候の効果は、非盲検試験において確認された(Nilsson, Nyholm, & Aquilonius, 2001)、(Nyholm et al., 2008)。より近年になり、(Antonini, Chaudhuri, Martinez-Martin, & Odin, 2010)で、進行したパーキンソン病の患者9名における健康関連の生活の質に及ぼす該治療の長期影響が前向きに評価された。該治療は、オフ期間及びジスキネジアの日常的な持続時間を有意に短縮させた。これにより、PDQ−39の4つのドメイン(運動性、ADL、恥辱及び身体的不快感)における有意な改善が得られた(Wolters, Lees, Volkmann, van Laar, & Hovestadt, 2008)。
PDのためのDuodopaの薬物動態・薬力学的試験から、1.55mg/L L−Dopaの50%の効果の濃度が示された(Westin et al., 2011)。レボドパメチルエステルの腸内輸液を利用した類似の試験で、血漿レベル3000〜4000ng/mlのレボドパによるPD及びジスキネジアのコントロール改善が実現された。
パーキンソン病の脳へのウイルスベクターの直接注射が、脳の特異的標的部位、即ちDAが欠如した線条体を中心とするL−DOPAの連続的かつ局所的産生をもたらす。DA合成酵素チロシンヒドロキシラーゼ(TH)の線条体内遺伝子導入を利用したインビボ遺伝子療法による局所L−DOPA送達が、パーキンソン病の潜在的な治療的介入として探究された(Horellou et al., 1994) (Kaplitt et al., 1994)。THの発現がTHの補因子であるテトラヒドロビオプテリンの外因性投与、又は律速合成酵素であるGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)の共発現と組み合わせない限り、DOPA産生レベルが非常に低くなることが示された(Mandel, Spratt, Snyder, & Leff, 1997)、(Bencsics et al., 1996)、(Corti et al., 1999)。これまでで最も有望な長期結果は、組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターを用いて得られた(Mandel et al., 1998)、(Kirik, Rosenblad, & Bjorklund, 1998)、(Szczypka et al., 1999)。線条体DOPA産生のレベルが、臨界閾値を超えていることを条件に、TH及びGCH1のための遺伝子をコードする高力価rAAVベクターの線条体内注射が、6−ヒドロキシドパミン(6−OHDA)の注射によりパーキンソン病様にされたラットにおいて顕著な行動回復を提供する可能性が示された(Kirik et al., 2002)。さらなる試験で、線条体におけるDOPA合成酵素、TH及びGCH1のrAAV介在性発現が、ラットパーキンソン病モデルにおいてL−DOPA誘発性ジスキネジアを排除し得ることが示された。rAAV−TH及びrAAV−GCH1ベクターによるインビボ遺伝子療法は、二重の作用:(i)全身の間欠的L−DOPA処置により誘発されるジスキネジアの軽減;及び(ii)自発的な運動行動における病変誘発性欠損のほぼ完全な回復、を有する。これらの変化は、線条体オピオイド遺伝子発現の正常化、及び異常なDFosB発現の回復に関連し、両者ともL−DOPA処置により誘発された不適応な可塑性のマーカーと見なされている(Carlsson et al., 2005)。
パーキンソン病のための改善された処置が、介入的脳手術、長期の静脈輸液を必要としない経路、又は経皮内視鏡胃瘻造設チューブの外科的移植を必要とする経路により、L−DOPAの長期の一定した投与を可能にするが、各投与経路に関連するリスク及び合併症を伴う。
意図される使用部位での直接の生成は、複数の利点(用量の要件が最少であること及び末梢作用を含まないこと)を有するが、投与経路は、神経外科術を必要とする。線条体注射の必要性により、臨床適用が介入により利益を受けると予測される患者の一部へ限定され得る。現在は、全ての適格な患者がそのような方法により確実に処置され得るには不十分な神経外科施設及び神経外科医が存在する。
治療レベル又は治療以下のレベルのL−DOPAを直接連続で末梢循環へ分泌すれば、摂取された食物による消化管内での望ましくないデカルボキシル化及び不調和な吸収、ヘリコバクターピロリ感染、消化管の運動性及び胃の酸性度の変動、食物中の中性アミノ酸から胃壁を通した吸収での競合、並びに消化管フローラにより形成されたDOPA代謝産物など、腸内投与に関連する問題が回避されよう。
治療レベルのL−DOPAを血管系へ直接連続分泌するのが最適であり得るが、治療以下のレベルの連続分泌でさえも有意義であり得、したがって線条体ドパミンの十分な一定したバックグランドレベルが促されて、ジスキネジアの発症が予防又は遅延されて、有効性に必要な経口L−DOPA補助物質の用量が最小限に抑えられる。
消化管を介した、又は非経口でのL−DOPAの連続輸液よりむしろ、肝臓又は筋肉などの1つ又は複数の組織によりL−DOPAを末梢循環へ連続分泌させることが提案される。これは、L−DOPAを可能にする遺伝子を標的組織へ導入することにより実現される。チロシンヒドロキシラーゼ(TH)は、L−DOPAへのチロシンのヒドロキシル化を触媒し、補因子としてのテトラヒドロビオプテリン(BH4)を必要とする。BH4の生合成は、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)を必要とする場合がある。
末梢循環へL−DOPAレベルを分泌すれば、パーキンソン病などのドパミン欠乏による病気では経口L−DOPA又はドパミンアゴニストなどの他の形態のドパミン作動性療法の必要性が低減する。最適レベルのL−DOPA分泌は、追加的なドパミンアゴニストの必要性を排除するであろう。L−DOPA分泌が最適レベル未満であっても、追加的なアゴニストの用量を低減するであろう。これにより、経口若しくは非経口のL−DOPA若しくは非経口のL−DOPA若しくはドパミンアゴニスト、又はドパミン欠乏のための他の処置の利用に関連する有害事象が低減し得る。
L−DOPA誘発性ジスキネジア及びオン/オフ症候群などの経口及び非経口L−DOPA療法及びドパミン作動性アゴニストの厄介な合併症は、経口又は非経口投与後のこれらの薬剤の薬物動態ピーク及びトラフ値の高下によるものと考えられている。治療レベル又は治療以下レベルでの末梢循環へのL−DOPAの一定分泌を実現すれば、血漿L−DOPAのベースラインレベルの上昇が確定され、追加的なドパミン作動薬の用量低減が促され、これによりピーク−トラフ変動が低減されるであろう。
本発明の目的は、現在の処置戦略が不十分である、又は現在の処置が重度の副作用に関連する、及び/若しくは処置された個体が前記処置への抵抗性を発症するような障害の処置のための新しい分子ツールを開発することであった。より具体的には本発明は、カテコールアミン生合成に関与する酵素レベルを調節し、これにより必要とする対象における正常なカテコールアミンバランスに向けて回復する方法において有用となる、新規な発現構築物に関する。
詳細には本発明は、患者の大部分が長期処置の間に処置応答の減少及び有害事象増加を経験する神経障害、好ましくは非治癒性変性神経障害の処置方法における前記発現構築物の使用に関する。
本発明は第一に、現在の処置戦略にL−DOPA又は他のドパミン受容体刺激剤の投与が含まれる、パーキンソン病及びL−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)の処置に関する。現行の処置レジメンは、主に疾患の初期段階で効率的であるが、長期処置の間に、ほとんどの患者がL−DOPA誘発性ジスキネジアを発症する。ジスキネジアの発症は、L−DOPA又は他のドパミン受容体刺激剤の非連続送達に関連すると考えられる。したがって本発明の主な目的は、必要に応じて局所的に、そして任意の有害作用を減少させる連続速度で、特にパーキンソン病の処置に必要となる該化合物を供給することにより、現在の処置を洗練することである。
本発明は、L−DOPAの全身レベルを調節するために末梢組織へ投与される発現系を含む発現系に関する。
一態様において、本発明は、
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び/或いは
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、
を含む発現系に関する。
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び/或いは
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、
を含む発現系に関する。
一態様において、本発明は、
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド(N1)であって、該生物活性がGCH1の酵素活性である、第一のポリヌクレオチド(N1)、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド(N2)であって、該生物活性がTHの酵素活性である、第二のポリヌクレオチド(N2)、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のプロモーターに動作可能に結合された第三のポリヌクレオチド(N3)であって、該生物活性がPTPSの酵素活性である、第三のポリヌクレオチド(N3)、
を含む発現系に関する。
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド(N1)であって、該生物活性がGCH1の酵素活性である、第一のポリヌクレオチド(N1)、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド(N2)であって、該生物活性がTHの酵素活性である、第二のポリヌクレオチド(N2)、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のプロモーターに動作可能に結合された第三のポリヌクレオチド(N3)であって、該生物活性がPTPSの酵素活性である、第三のポリヌクレオチド(N3)、
を含む発現系に関する。
一態様において、本発明は、本明細書の先に定義された発現系により形質導入又はトランスフェクトされる、単離された宿主細胞に関係する。
別の態様において、本発明は、本明細書の先に定義された発現系と、場合により医薬的に許容し得る塩、担体又はアジュバントと、を含む医薬組成物に関係する。
一態様において、本発明は、医療使用のための本明細書の先に定義された発現系に関する。
さらなる態様において、本発明は、カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置方法における使用のために、末梢へ投与される、即ちCNSの外部へ投与される、本明細書の先に定義された発現系に関係する。
別の態様において、本発明は、発現の際に、
チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び/或いは
GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
からなる群から選択される1つ又は複数のポリペプチドをコードする1つ又は複数のヌクレオチド配列を含む発現系であって、
カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置の方法における使用のために末梢に投与される、発現系に関係する。
チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び/或いは
GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
からなる群から選択される1つ又は複数のポリペプチドをコードする1つ又は複数のヌクレオチド配列を含む発現系であって、
カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置の方法における使用のために末梢に投与される、発現系に関係する。
本発明は、本明細書の先に定義された発現系の、必要なヒトへの末梢投与(即ち、CNSの外部への投与)を含む、血中のL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法に関係する。
別の態様において、本発明は、本明細書の先に定義された発現系の治療有効量を、必要とするヒトへ、必要とする患者へ末梢投与することを含む、カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置及び/又は予防の方法に関係する。
さらに別の態様において、本発明は、患者の血中でL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法であって、本明細書の先に定義された発現系を、前記患者へ投与することを含む、方法に関係する。
さらに別の態様において、本発明は、本明細書の先に定義された発現系を、必要とする患者へ末梢投与することを含む、L−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)の発生を低減、遅延及び/又は予防する方法に関係する。
さらに別の態様において、本発明は、発現の際に、少なくとも1種の治療性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現系を末梢投与することを含む、血中のL−DOPAの治療有効濃度を得る、そして/又は維持する方法であって、該少なくとも1種の治療性ポリペプチドがチロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体である、方法に関係する。
一態様において、本発明は、先に定義された医薬組成物及び使用説明書を含むキットに関係する。
定義
バイシストロン性:本明細書で用いられる用語「バイシストロン性」は、発現系、ベクター又はプラスミドを指し得る。バイシストロン性プラスミド又はベクターは、1つのプラスミド又はベクターの中に2つの遺伝子を含む。バイシストロン性発現系は、少なくとも1つのバイシストロン性プラスミド又は少なくとも1つのバイシストロン性ベクターを含む発現系を指す。
バイシストロン性:本明細書で用いられる用語「バイシストロン性」は、発現系、ベクター又はプラスミドを指し得る。バイシストロン性プラスミド又はベクターは、1つのプラスミド又はベクターの中に2つの遺伝子を含む。バイシストロン性発現系は、少なくとも1つのバイシストロン性プラスミド又は少なくとも1つのバイシストロン性ベクターを含む発現系を指す。
生物活性:本発明の発現系構築物によりコードされる酵素に関連して本明細書で用いられる場合の用語「生物活性」は、前記酵素の酵素活性を指し、特定の酵素反応を触媒する能力を意味する。詳細には生物活性は、チロシンヒドロキシラーゼ(TH)、GTPシクロヒドロラーゼ(GCH−1)若しくは6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS)の酵素活性、又は本開示の発現系によりコードされ、治療効果の実現を支援し得る任意の他の酵素を指し得る。
生物活性断片:本明細書で用いられる用語「生物活性断片」は、全長ポリペプチドの生物活性を共有する酵素をはじめとするポリペプチドの一部を指す。該断片の生物活性は、ネイティブ全長ポリペプチドの酵素活性よりも小さく、大きく、又はそれと等しくなり得る。ポリペプチドの生物活性断片は、配列番号:1、2、3、4、5、6、40、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17又は18の任意の1つと少なくとも70%の配列同一性を有する断片を包含する。所与のポリペプチドの生物活性断片はまた、前記ポリペプチドのアミノ酸残基の30%以下が欠失された、前記ポリペプチドのアミノ酸残基の29%以下など、例えば28%以下、27%以下など、例えば26%以下、25%以下など、例えば24%以下、23%以下など、例えば22%以下、21%以下など、例えば20%以下、19%以下など、例えば18%以下、17%以下など、例えば16%以下、15%以下など、例えば14%以下、13%以下など、例えば12%以下、11%以下など、例えば10%以下、9%以下など、例えば8%以下、7%以下など、例えば6%以下、5%以下など、例えば4%以下、3%以下など、例えば2%以下、1%以下などが欠失された断片を包含する。
生物活性変異体:本明細書で用いられる用語「生物活性変異体」は、ネイティブ全長タンパク質と同じ生物活性を有する、酵素などのタンパク質のポリペプチド部分を指す。該断片の生物活性は、ネイティブ全長ポリペプチドの酵素活性よりも小さく、大きく、又はそれと等しくなり得る。
カテコールアミン機能障害:本明細書で用いられる用語カテコールアミン機能障害は、健常個体の同じパラメータと比較した、カテコールアミンの合成、調節、貯蔵、放出、取込み又は代謝の異常を指す。特に、該カテコールアミン機能障害は、ドパミン欠乏などのドパミン機能障害である。当業者は、カテコールアミン機能障害を診断することが可能である。
認知障害:本明細書で用いられる用語「認知障害」は、錯乱、忘却及び集中困難に関連する精神機能の低下を伴う状態を指す。
発現:用語ポリペプチドをコードする核酸配列の「発現」は、タンパク質の産生をもたらす、mRNAとしての核酸配列の転写、並びに/又はその核酸配列の転写及び翻訳を意味する。
発現カセット:本明細書で用いられる用語「発現カセット」は、インビボでタンパク質の合成をもたらすのに必要な全てのエレメントを提供するゲノム配列を指す。これには、DNAからmRNAへの転写を誘導する配列、即ちプロモーター配列、該当するタンパク質のためのゲノム配列を含むオープンリーディングフレーム、及びmRNAのポリアデニル化を可能にする3’非翻訳領域を挙げることができるが、必ずしもこれらに限定されない。
発現系:本明細書で用いられる用語「発現系」は、遺伝子産物、詳細にはポリペプチドの産生のために特異的に設計された系を指す。発現系は、発現の際にポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。発現系は、ウイルスベクターなどのベクター、例えばAAVベクター構築物であり得るが、これらに限定されない。
哺乳動物細胞中で機能的:本明細書で用いられる用語「哺乳動物細胞中で機能的」は、哺乳動物細胞へ導入されると、生物活性ポリペプチド内への翻訳をもたらす配列、例えば発現系などのヌクレオチド配列を意味する。
HLP:本明細書で用いられる用語「ハイブリッド肝特異性プロモーター」又は「HLP」は、McIntosh J et. al Blood 2013 121(17) 3335に記載されたプロモーターを指す。本発明のHLPは、ヒト肝特異性エンハンサー、ヒト肝特異性プロモーター、及び修飾されたイントロンを含む。一実施形態において、該LP1は、配列番号:45のポリヌクレオチド配列、又はその生物活性断片若しくは変異体を有する。
相同性:本出願の目的では、本明細書で用いられる用語、配列「相同性」及び「相同的な」配列は、配列「同一性」及び「同一の」配列と等しいと理解されなければならない。
LP1:本明細書で用いられる用語「肝臓プロモーター/エンハンサー1」又は「LP1」は、Nathwani AC et al. Blood. 2006;107(7):2653-2661、及びMiao HZ et al. Blood. 2004;103(9):3412-3419に記載されるプロモーターを指す。本発明者のLP1は、トランケート型肝特異性エンハンサー及びトランケート型肝特異性プロモーターを含む。一実施形態において、該LP1は、配列番号:39のポリヌクレオチド配列、又はその生物活性断片若しくは変異体を有する。
動作可能に結合された:本明細書で用いられる用語「動作可能に結合された」は、該当する1つ又は複数のポリペプチドをコードする核酸配列及び転写調節配列が、細胞に導入された時に該核酸配列の発現を可能にするような方法で連結されていることを示す。
末梢投与:本明細書で用いられる用語「末梢投与」は、中枢神経系(CNS)に関係する末梢を指す。詳細には末梢投与は、骨格筋及び肝臓組織への投与を指す。当業者は、医薬組成物及びその原材料を前記組織へ投与する手段を熟知している。
医薬組成物:又は薬物、薬品若しくは薬剤は、患者へ適当に投与された時に、所望の治療効果を誘発することが可能な任意の化学的又は生物学的材料、化合物、又は組成物を指す。一部の薬物は、不活性形態の固体であり、インビボで医薬活性を有する代謝産物へ変換される。本発明の目的では、用語「医薬組成物」及び「薬品」は、不活性薬物及び活性代謝産物の両方を包含する。
プラスミド:用語「プラスミド」は、本明細書ではベクター内で裸になり得る、又は包まれ得るポリヌクレオチドを指す。本開示において、プラスミドは、好ましくは転移された細胞の染色体DNAから物理的に分離されており、独立して複製し得る。幾つかの実施形態において、本開示の発現系は、当該技術分野で公知の通り裸である、即ちベクターに包まれていないか、又は包まれている、1つ又は複数のプラスミドを含む。
ポリペプチド:本明細書で用いられる用語「ポリペプチド」は、少なくとも2個のアミノ酸を含む分子を指す。該アミノ酸は、天然又は合成であり得る。「オリゴペプチド」は、本明細書では100アミノ酸長以下のポリペプチドであると定義される。用語「ポリペプチド」は、タンパク質、即ち少なくとも1つのポリペプチドを含む機能性生体分子を含むものとし、少なくとも2種のポリペプチドを含む場合、これらは複合体を形成し得るか、共有結合でつながり得るか、又は非共有結合でつながり得る。タンパク質内の該ポリペプチドは、グリコシル化され得、そして/又は脂質付加され得、そして/又は補欠分子族を含み得る。
ポリヌクレオチド:本明細書で用いられる用語「ポリヌクレオチド」は、鎖の中で共有結合されたヌクレオチドモノマーで構成された有機ポリマー分子である分子を指す。本明細書で用いられる「ポリヌクレオチド」は、少なくとも2つの核酸を含む分子を指す。該核酸は、天然由来又は修飾されたもの、例えば架橋型人工核酸(LNA)、又はペプチド核酸(PNA)などであり得る。本明細書で用いられるポリヌクレオチドは一般に、
i)所定のコード配列を含むポリヌクレオチド、又は
ii)所定のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、又は
iii)ポリヌクレオチド(i)若しくは(ii)によりコードされたポリペプチドの断片をコードするポリヌクレオチドであって、前記断片が本明細書で指定された少なくとも1種の所定の活性を有する、ポリヌクレオチド、並びに
iv)ストリンジェントな条件下で、(i)、(ii)及び(iii)のうちの任意の1つに定義されたポリヌクレオチドとハイブリダイズし、本明細書で指定された少なくとも1種の所定の活性を有するポリペプチド又はその断片をコードする、相補鎖のポリヌクレオチド、並びに
v)ポリヌクレオチド(iii)又は(iv)のヌクレオチド配列に変性するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、
或いはそのようなポリヌクレオチドの相補鎖、
に属する。
i)所定のコード配列を含むポリヌクレオチド、又は
ii)所定のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、又は
iii)ポリヌクレオチド(i)若しくは(ii)によりコードされたポリペプチドの断片をコードするポリヌクレオチドであって、前記断片が本明細書で指定された少なくとも1種の所定の活性を有する、ポリヌクレオチド、並びに
iv)ストリンジェントな条件下で、(i)、(ii)及び(iii)のうちの任意の1つに定義されたポリヌクレオチドとハイブリダイズし、本明細書で指定された少なくとも1種の所定の活性を有するポリペプチド又はその断片をコードする、相補鎖のポリヌクレオチド、並びに
v)ポリヌクレオチド(iii)又は(iv)のヌクレオチド配列に変性するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、
或いはそのようなポリヌクレオチドの相補鎖、
に属する。
プロモーター:本明細書で用いられる用語「プロモーター」は、特定の遺伝子の転写を促進するDNAの領域を指す。したがってプロモーターは、RNAポリメラーゼの初期結合部位として作用するオペロンの領域である。プロモーターは、典型的には同じ鎖及び上流でそれらが調節する遺伝子の付近に位置する。本明細書で用いられる用語「プロモーター」は、古典的なプロモーターの構造に限定されず、上記の機能を有するヌクレオチド配列の領域として理解されなければならない。
トリシストロン性:本明細書で用いられる用語「トリシストロン性」は、発現系、ベクター又はプラスミドを指し得る。トリシストロン性プラスミド又はベクターは、1つのプラスミド又はベクター内に3つの遺伝子を含む。トリシストロン性発現系は、少なくとも1つのトリシストロン性プラスミド又は少なくとも1つのトリシストロン性ベクターを含む発現系を指す。
ベクター:本発明によるベクターは、外来遺伝子材料を別の細胞に転移するビヒクルとして用いられるDNA分子である。ベクターの4つの主な型が、プラスミド、ウイルス、コスミド及び人工染色体である。
ウイルスベクター:ウイルスベクターは、カプシド及びゲノムを含むウイルス粒子と理解されるべきである。ゲノムは、典型的にはカプシドに封入されている。
発現系
一定した基礎的L−DOPAの末梢産生及び循環内への分泌は、PDを処置するために現在用いられている治療方式である経皮胃瘻造設術を介して小腸内に一定の輸液と類似の治療効果を実現し得る。
一定した基礎的L−DOPAの末梢産生及び循環内への分泌は、PDを処置するために現在用いられている治療方式である経皮胃瘻造設術を介して小腸内に一定の輸液と類似の治療効果を実現し得る。
本発明を支持する論拠は、パーキンソン病、又はL−DOPAの内因性末梢分泌の増加が示され得る任意の他の病気、例えば遺伝性チロシンヒドロキシラーゼ欠乏(Wevers et al., 1999)及び下肢静止不能症候群などの患者の全身循環へのL−DOPAの連続日中又は連続24時間分泌を提供することである。
本発明は、パーキンソン病、又はチロシンヒドロキシラーゼ欠乏若しくは下肢静止不能症候群をはじめとする別の病気の処置において治療的に有用になるのに十分な循環L−Dopaの基礎レベルを産生する末梢組織の形質導入又はトランスフェクションである。
末梢組織の形質導入は、チロシンをL−3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン(L−DOPA)に変換することが可能な酵素を標的末梢組織に産生させる遺伝子材料を転移する発現系からなる遺伝子療法系の投与により実現される。発現系は、本明細書の以下に詳述される通り、1つ又は複数のベクターとして提供され得る。好ましくは該発現系は、少なくとも3つのポリペプチド、即ちTH、GCH1及びPTPSの、そして場合により第四のポリペプチドの発現を可能にする。幾つかの実施形態において、該発現系は、2つのバイシストロン性ベクター又はプラスミドとして提供される。他の実施形態において、該発現系は、場合によりモノシストロン性ベクター又はプラスミドを有する、トリシストロン性ベクター又はプラスミドとして提供される。他の実施形態において、該発現系は、3つ又は4つのモノシストロン性ベクター又はプラスミドとして提供される。
本発明の発現系により標的とされる細胞は、好ましくは少なくとも成体対象において、低い細胞ターンオーバーを有する細胞であり得る。理論に束縛されるものではないが、これは、本開示のベクター又はプラスミドが標的細胞の染色体DNAに取り込まれないため、該ベクター又はプラスミドが細胞分化ごとに希釈されると考えられるためである。したがって、細胞が再生するにつれ、治療効果が次第に薄れると予測される。本発明の発現系を用いた遺伝子療法にとって特に有利な標的になり得る細胞は、筋肉細胞、特に横紋筋細胞及び肝臓細胞である。
例えば本発明は、少なくとも1つの、例えば2つのアデノ随伴ウイルスベクターセロタイプ8(肝臓の形質導入を標的とする)を含み、ヒトチロシンヒドロキシラーゼ(例えば、hTH2)をコードする遺伝子配列を送達する発現系に基づく遺伝子療法の形態をとり得る。該ゲノムをトランスフェクトすることで、TH遺伝子配列の上流に肝特異性プロモーターを含み得、TH遺伝子配列の下流に最大発現のためのウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント(WPRE)を含み得る。処置は、好ましくは経口補助物質の、又はGPT−シクロヒドロラーゼ−1(GCH1)遺伝子のコトランスフェクションにより内因的に産生されるテトラヒドロビオプテリンの供給を必要とする。コトランスフェクションにより、経口補充の必要性が除外されるが、経口補充への依存は、トランスフェクション部位での「ターンオフ」L−DOPA産生の能力を提起するが、これは、毒性を管理すること、又は夜間のL−DOPA産生を減少させる期間を提供することが望ましくなければならない。GCH1が必要とされる程度は、標的組織の型に応じて変動し得る(例えば肝臓組織は、横紋筋組織に比較してより高い内因性レベルのGCH1を有する)。好ましい実施形態において、処置はまた、7,8−ジヒドロネオプテリン三リン酸塩から6−ピルボイルテトラヒドロプテリン及び三リン酸塩への変換を触媒する6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)の供給を必要とする。好ましくはPTPSは、本明細書に記載されたPTPS遺伝子のコトランスフェクションにより内因的に産生される。
別の実施形態において、該発現系は、少なくとも1つ、例えば2つのアデノ随伴ウイルスベクターセロタイプ1(横紋筋を標的とする)を含み得る。そのような実施形態において、発現系内に含まれるポリヌクレオチドに結合されたプロモーターのいずれも、筋肉特異性であり得る。筋細胞、特に成熟した横紋筋細胞のターンオーバーは非常に低いため、筋細胞、特に成熟した横紋筋細胞の標的化は、特に有利であると考えられる。
該発現系は、バイシストロン性であり得、即ち少なくとも1つのバイシストロン性ベクター又はプラスミドを含み得る。該バイシストロン性の系は、モノシストロン性ベクター又はプラスミドをさらに含み得る。或いは該発現系は、トリシストロン性であり得、即ち少なくとも1つのトリシストロン性ベクター又はプラスミドを含み得る。該トリシストロン性の系は、モノシストロン性ベクター又はプラスミドをさらに含み得る。
現行の経口L−DOPA薬物治療と同様に、末梢デカルボキシラーゼ阻害剤(例えば、ベンセラジン(benserazine)又はカルビドパ)は、好ましくはドパミンへのL−DOPAの末梢変換を遮断し、これにより耐容性及び線条体への生物学的利用性を改善するために投与される。
一態様において、本発明は、
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び/或いは
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、
を含む発現系に関する。
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び/或いは
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、
を含む発現系に関する。
一態様において、本発明は、
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド(N1)であって、該生物活性がGCH1の酵素活性である、第一のポリヌクレオチド(N1)、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド(N2)であって、該生物活性がTHの酵素活性である、第二のポリヌクレオチド(N2)、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のプロモーターに動作可能に結合された第三のポリヌクレオチド(N3)であって、該生物活性がPTPSの酵素活性である、第三のポリヌクレオチド(N3)、
を含む発現系に関する。
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド(N1)であって、該生物活性がGCH1の酵素活性である、第一のポリヌクレオチド(N1)、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド(N2)であって、該生物活性がTHの酵素活性である、第二のポリヌクレオチド(N2)、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のプロモーターに動作可能に結合された第三のポリヌクレオチド(N3)であって、該生物活性がPTPSの酵素活性である、第三のポリヌクレオチド(N3)、
を含む発現系に関する。
一態様において、本発明は、
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び/或いは
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、
を含む発現系に関する。
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び/或いは
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、
を含む発現系に関する。
一実施形態において、本発明の発現系は、
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一プロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド、
を含む。
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一プロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド、
を含む。
一実施形態において、本発明の発現系は、
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のプロモーターに動作可能に結合された第三のポリヌクレオチド、
を含む。
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチド、及び
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のプロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチド、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のプロモーターに動作可能に結合された第三のポリヌクレオチド、
を含む。
一態様において、本発明は、発現の際に、
− チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
− GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするヌクレオチド配列を含むバイシストロン性発現系に関する。
− チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
− GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするヌクレオチド配列を含むバイシストロン性発現系に関する。
本開示全体を通して、用語「第一」、「第二、「第三」及び「第四」が特定の序列を指すのではなく、代わりに明瞭にするために用いられていることは、理解されよう。したがって、幾つかの実施形態の第三のポリヌクレオチドは、第一のポリヌクレオチドと第二のポリヌクレオチドの間に位置し得る。
本発明のバイシストロン性発現系は、疾患及び障害の処置のために、ヒトなどの個体に投与するのに適する。
したがって一態様において、本発明は、医療使用のための本明細書の先に定義された発現系に関する。
本発明の発現系は、カテコールアミンレベルの不均衡に関連する、そして/又はそれから生じる、そして/又はそれをもたらす疾患及び障害を処置するのに特に有用である。したがって一態様において、本発明は、カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置方法において使用され、末梢投与される、即ちCNSの外部へ投与される、本明細書の先に定義された発現系に関係する。
即ち、前記態様における本発明は、発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、をコードするヌクレオチド配列を含むバイシストロン性発現系であって、カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置方法において使用され、末梢投与される、即ちCNSの外部へ投与される、バイシストロン性発現系に関係する。
別の態様において、本発明は、発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び/又はGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体からなる群から選択される1つ又は複数のポリペプチドをコードする1つ又は複数のヌクレオチド配列を含む発現系であって、カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置方法において使用され、末梢投与される、発現系に関係する。
一実施形態において、前記使用のための発現系は、本明細書の先に定義されたバイシストロン性発現系を含む。
該発現系はまた、3つのモノシストロン性発現系、又は1つのモノシストロン性発現系と1つのバイシストロン性発現系、のいずれかの組み合わせであり得る。該発現系が発現の際に4つのポリヌクレオチドをコードする実施形態において、該系は、1つのモノシストロン性発現系と1つのトリシストロン性発現系との組み合わせ、又は2つのモノシストロン性発現系と1つのバイシストロン性発現系の組み合わせ、又は4つのモノシストロン性発現系の組み合わせであり得る。
したがって一実施形態において、本発明の発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系、
を含む。
別の実施形態において、本発明の発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と;
b)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と;
b)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
さらに別の実施形態において、本発明の発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と;
b)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と;
b)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
一実施形態において、本発明の発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と;
b)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と;
b)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
したがって一実施形態において、本発明の発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、
iii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、
をコードするトリシストロン性発現系、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、
iii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体と、
をコードするトリシストロン性発現系、
を含む。
別の実施形態において、該発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
iii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
iii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
別の実施形態において、該発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
iii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
iii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
別の実施形態において、該発現系は、
a)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
iii)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、及び
ii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするバイシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
iii)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
別の実施形態において、本発明の発現系は、
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
c)発現の際に、
iii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
a)発現の際に、
i)チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
b)発現の際に、
ii)GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
c)発現の際に、
iii)6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体、
をコードするモノシストロン性発現系と、
を含む。
該発現系は追加として、発現の際に、本明細書の以下に詳述される第四のポリペプチドをコードし得る。
本発明の発現系の使用目的は、本発明の発現系で処置される個体の血液におけるL−DOPAの治療有効濃度を得ること、及び/又は維持することである。
本発明において適用されるL−DOPAのインビボ生合成に必要とされる酵素置換療法は、3種の酵素チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)及び/又はGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)及び/又は6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)のうちの1つ又は複数を頼りにする。
前記酵素は、全長ポリペプチドとして、又は全長酵素の生物活性断片若しくは変異体として発現され得る。生物活性とは、野生型全長酵素の触媒活性の少なくとも一部を実施する能力が、該断片又は変異体によって保持されているはずであることを意味する。
したがって一実施形態において、本発明による発現系は、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であるGTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体を発現することが可能である。
一実施形態において、本発明による発現系は、配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16、及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であるチロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体を発現することが可能である。
一実施形態において、本発明による発現系は、配列番号:41と少なくとも70%同一である6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体を発現することが可能である。
該発現系は、基本的に任意の適切な形態又は構造を有し得るが、但し、前記形態又は構造が、本明細書の先に定義された酵素又はその断片若しくは変異体の任意の1つと同一の、又は本質的に同一の、又は少なくとも本明細書に定義された同一性の度合いを有する遺伝子産物をもたらすことを条件とする。
ウイルスベクター
広範には遺伝子療法は、新しい遺伝子材料を患者の細胞に転移して患者への治療効果を得ることを探求する。そのような効果としては、広範囲の疾患、障害及び他の状態の処置又は防護が挙げられる。
広範には遺伝子療法は、新しい遺伝子材料を患者の細胞に転移して患者への治療効果を得ることを探求する。そのような効果としては、広範囲の疾患、障害及び他の状態の処置又は防護が挙げられる。
エクスビボ遺伝子療法のアプローチは、単離された細胞(幹細胞、神経及びグリア前駆細胞、並びに胎児幹細胞が挙げられるが、これらに限定されない)を修飾し、その後、患者へ輸注、グラフト、又は他の方法で移植することを含む。例えば、米国特許第4,868,116号、同第5,399,346号及び同第5,460,959号を参照されたい。インビボ遺伝子療法は、宿主となる患者組織をインビボで直接標的とすることを探求する。
遺伝子転移ベクターとして有用なウイルスとしては、パポバウイルス、アデノウイルス、ワクチンウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレトロウイルスが挙げられる。適切なレトロウイルとしては、HIV、SIV、FIV、EIAV、MoMLVからなる群が挙げられる。適切なレトロウイルスのさらなる群としては、HIV、SIV、FIV、EAIV、CIVからなる群が挙げられる。好ましいウイルスベクターの別の群としては、アルファウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、バキュロウイルス、HSV、コロナウイルス、ウシパピローマウイルス、MoMLV、好ましくはアデノ随伴ウイルスからなる群が挙げられる。
肝細胞又は横紋筋細胞の形質導入に好ましいウイルスは、アデノ随伴ウイルス及びレンチウイルスである。
AAVの調製方法は、当該技術分野、例えば米国特許第5,677,158号に記載される。
レンチウイルスベクターは、複製欠損レンチウイスル粒子である。そのようなレンチウイルス粒子は、5’レンチウイルスLTR、tRNA結合部位、パッケージングシグナル、前記融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドシグナルに動作可能に結合されたプロモーター、第二の鎖のDNA合成の起点、及び3’レンチウイルスLTRを含むレンチウイルスベクターから生成され得る。
発現ベクター
本発明で使用するためのTH及び/又はGCH1及び/又はPTPSポリペプチドの組換え発現のためのベクターの構築は、当業者への詳細な説明を必要としない従来の技術を利用して完遂され得る。しかし再調査のために、当業者は、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (NY 1982)においてManiatisらに助言を求めることができる。発現ベクターは、医療使用でのTH及び/又はGCH1及び/又はPTPSポリペプチドの組換え産生のために、そして裸の、又はカプセル化療法でTH及び/又はGCH1及び/又はPTPSポリペプチドを分泌する治療細胞を作製するために用いられ得る。
本発明で使用するためのTH及び/又はGCH1及び/又はPTPSポリペプチドの組換え発現のためのベクターの構築は、当業者への詳細な説明を必要としない従来の技術を利用して完遂され得る。しかし再調査のために、当業者は、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (NY 1982)においてManiatisらに助言を求めることができる。発現ベクターは、医療使用でのTH及び/又はGCH1及び/又はPTPSポリペプチドの組換え産生のために、そして裸の、又はカプセル化療法でTH及び/又はGCH1及び/又はPTPSポリペプチドを分泌する治療細胞を作製するために用いられ得る。
手短に述べると、組換え発現ベクターの構築は、標準のライゲーション技術を用いる。構築されたベクターにおける正しい配列を確認するための分析では、例えばMessingらの方法(Nucleic Acids Res., 9: 309-, 1981)、Maxamらの方法(Methods in Enzymology, 65: 499, 1980)、又は当業者に公知の他の適切な方法を用いて、遺伝子を配列決定する。
切断された断片のサイズ分離は、例えばManiatisら(Molecular Cloning, pp. 133-134,1982)により記載された通り従来のゲル電気泳動を利用して実施される。
効率的な発現ベクターの作製では、これらは、コードされた遺伝子の発現に必要な調節配列を正しいリーディングフレーム内に含まなければならない。遺伝子の発現は、転写、翻訳、又は翻訳後レベルで制御される。転写開始は、遺伝子発現における早期で、かつ重大なイベントである。これは、プロモーター及びエンハンサー配列に依存し、これらの配列と相互作用する特異的細胞因子によって影響を受ける。多くの遺伝子の転写単位は、プロモーターと、幾つかの例ではエンハンサー又は調節エレメントと、からなる(Banerji et al., Cell 27: 299 (1981); Corden et al., Science 209: 1406 (1980);及びBreathnach and Chambon, Ann. Rev. Biochem. 50: 349 (1981))。本発明の強力なプロモーター及び他の調節エレメントを、本明細書の以下にさらに詳細に記載する。
一実施形態において、該発現系は、ウイルスベクターなどのベクター、例えばウイルスベクター発現系である。
別の実施形態において、該発現系は、プラスミドベクター発現系である。
さらに別の実施形態において、該発現系は、合成ベクターを基にしている。
さらに別の実施形態において、該発現系は、コスミドベクター又は人工染色体である。
特定の実施形態において、ベクター内へのAADCの封入は、複数の理由のいずれかのために不利になり得る。第一にそれは、調整せずにチロシンをドパミンへ変換し得る新しい系を生成する。形質導入された細胞は、ドパミンを小胞へ封鎖するメカニズムが欠如するため、ドパミンが、細胞質内へ急速に蓄積し得る。TH酵素が、N−末端調節ドメインと共に残されると、生成されたドパミンが、処置の有効性を大きく限定し得るネガティブフィードバックによってDOPA合成を直接阻害し得る。その一方で、TH酵素が切断されると(例えば、配列番号:40)、切断された細胞もまたドパミンを放出するメカニズムが欠如するため、細胞質ドパミンレベルが急速に上昇し得る。
本発明の一実施形態において、先に定義された発現系は、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まない。
一実施形態において、本発明による発現系は、1〜40kb、例えば1〜30kb、1〜20kbなど、例えば1〜15kb、1〜10kbなど、例えば1〜8kb、2〜7kbなど、例えば3〜6kb、4〜5kbなどのパッケージング能力を有する。
一実施形態において、本発明による発現系は、4.5〜4.8kbのパッケージング能力を有するウイルスベクターである。
一実施形態において、本発明による発現系は、アデノ随伴ベクター(AAV)、アデノウイルスベクター及びレトロウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである。
一実施形態において、該ベクターは、組み込み型ベクターである。別の実施形態において、該ベクターは、非組み込み型ベクターである。
一実施形態において、本発明のベクターは、最小限に組み込むベクターである。
好ましい実施形態において、本発明による発現系は、アデノ随伴ベクター(AAV)である。
AAVベクターの調製方法は、当業者に公知である。例えば中枢神経系へのAAV送達の例を記載した米国特許第5,677,158号、同第6,309,634号、及び同第6,451,306号を参照されたい。
一実施形態において、本発明によるAAVベクターは、セロタイプAAV5、AAV1、AAV6、AAV9及びAAV2ベクターからなる群から選択される。これらは好ましくは、筋細胞又は筋芽細胞などの筋肉細胞を標的とするために用いられる。
別の実施形態において、本発明によるAAVベクターは、セロタイプAAV8、AAV5、AAV2、AAV9及びAAV7ベクターからなる群から選択される。これらは好ましくは、肝臓の細胞、好ましくは肝細胞を標的とするために用いられる。
研究により、組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)遺伝子送達ベクターの有効性が実証され(McCarty (2008) Mol Ther.16(10):1648-56)、近年の臨床試験で、見込みのある結果が示された。しかし、形質導入に必要となるゲノム含有粒子の数に関するこれらのベクターの効率は、発現前に一本鎖DNA(ssDNA)ゲノムを二本鎖DNA(dsDNA)に変換する必要性によって妨害される。このステップは、複数のベクターゲノム間のDNA合成又は塩基対合を必要とせずに、dsDNAへフォールディングすることが可能な逆位反復ゲノムをパッケージングする自己相補性ベクターの使用により全体として回避され得る。この効率のための重要なトレードオフは、小さなタンパク質コード遺伝子(最大55kd)によるベクターのコード能力の半分を喪失することであり、任意の現在利用可能なRNAに基づく治療では、適応され得る。自己相補性AAV(scAAV)ベクターで増進された効率の上昇は、組織、細胞型、及び投与経路に応じて、控えめ〜驚くほどの量の範囲内であった。自己相補性ベクターの構築及び物理的性質と同様に、肝臓、筋肉及び中枢神経系(CNS)をはじめとする複数の組織での種々の応答の基本原理は、McCarthyによる論評に概説されている。
したがって一実施形態において、本発明のAAVベクターは、自己相補性AAV(scAAV)ベクターである。
一実施形態において、AAV8ベクターのゲノムは、AAV5、AAV9、AAV7、AAV6、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV8カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる。
別の実施形態において、AAV7ベクターのゲノムは、AAV8、AAV9、AAV5、AAV6、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV7カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる。
さらに別の実施形態において、AAV6ベクターのゲノムは、AAV8、AAV9、AAV7、AAV5、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV6カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる。
さらに別の実施形態において、AAV5ベクターのゲノムは、AAV8、AAV9、AAV7、AAV6、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV5カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる。
別の実施形態において、AAV2ベクターのゲノムは、AAV8、AAV9、AAV7、AAV6、AAV5又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV2カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる。
別の実施形態において、AAV1ベクターのゲノムは、AAV8、AAV9、AAV7、AAV6、AAV2又はAAV5カプシド内にパッケージングされるなど、AAV1カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる。
別の好ましい実施形態において、該発現系は、1つ又は複数プラスミドであり、それは先に列挙されたベクターのいずれかにパッケージングされ得る、又は裸、即ち非パッケージングであり得る。好ましい実施形態において、プラスミドは裸である。
一実施形態において、本発明によるベクターは、哺乳動物細胞を感染又は形質導入させることができる。
実施形態において、本発明によるベクターは、配列番号:31、配列番号:32、配列番号:33、配列番号:34、配列番号:35、配列番号:36、配列番号:37、配列番号:52及び配列番号:53を含む群から選択されるベクターである。
プロモーター
プロモーターは、特定の遺伝子の転写を開始するヌクレオチド配列である。プロモーターは、該ヌクレオチド配列上の同じ鎖上及び上流で(テンプレート鎖及び非コード鎖とも呼ばれるアンチセンス鎖の3’領域に向かって)、それらが転写する遺伝子付近に位置する。プロモーターは、典型的には約100〜1000塩基対からなる。
プロモーターは、特定の遺伝子の転写を開始するヌクレオチド配列である。プロモーターは、該ヌクレオチド配列上の同じ鎖上及び上流で(テンプレート鎖及び非コード鎖とも呼ばれるアンチセンス鎖の3’領域に向かって)、それらが転写する遺伝子付近に位置する。プロモーターは、典型的には約100〜1000塩基対からなる。
一実施形態において、本発明の発現系は、本明細書に記載された第一及び第二のプロモーターを含む。一実施形態において、前記第一及び第二のプロモーター配列は、異なるプロモーター配列である。別の実施形態において、前記第一及び第二のプロモーター配列は、同一のプロモーター配列である。
一実施形態において、該発現系は、IRESと共に、3つのポリペプチドTH、GCH1及びPTPSをコードするポリヌクレオチドのうちの2つの間に位置する1つのプロモーターを含む。
別の実施形態において、本発明の発現系は、発現の際に、本明細書の先に記載されたチロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、肝特異性プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチドを含む。
別の実施形態において、本発明による発現系は、発現の際に、本明細書の先に記載されたGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、肝特異性プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチドを含む。
別の実施形態において、本発明による発現系は、発現の際に、本明細書の先に記載された6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS;EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、肝特異性プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチドを含む。
さらなる実施形態において、本発明による発現系は、本明細書の先に記載されたプロモーターを含み、該プロモーターは、肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)又はその生物活性断片若しくは変異体、及び/或いはハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)又はその生物活性断片若しくは変異体からなる群から選択される肝特異性プロモーターである。
別の実施形態において、本発明による発現系は、本明細書の先に記載されたプロモーターを含み、該プロモーターは、配列番号:38(HLP)及び/又は配列番号:39(LP1)からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも70%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも75%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも80%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも85%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも90%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも95%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも96%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも97%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも98%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも99%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと100%同一である、肝特異性プロモーターである。
別の実施形態において、本発明の発現系は、発現の際に、本明細書の先に記載されたチロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、筋肉特異性プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチドを含む。
別の実施形態において、本発明による発現系は、発現の際に、本明細書の先に記載されたGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、筋肉特異性プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチドを含む。
別の実施形態において、本発明による発現系は、発現の際に、本明細書の先に記載された6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS;EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、筋肉特異性プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチドを含む。
さらなる実施形態において、本発明による発現系は、本明細書の先に記載されたプロモーターを含み、該プロモーターは、pMCK−1350、dMCK、tMCK及びヒト・スロートロポニンI(slow troponin I)遺伝子エンハンサーの複数のコピーであるプロモーター、又はその生物活性断片若しくは変異体からなる群から選択される筋肉特異性プロモーターである。
別の実施形態において、本発明による発現系は、本明細書の先に記載されたプロモーターを含み、該プロモーターは、配列番号:38(HLP)及び/又は配列番号:39(LP1)からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも70%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも75%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも80%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも85%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも90%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも95%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも96%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも97%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも98%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも99%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと100%同一である、肝特異性プロモーターである。
一実施形態において、本発明による発現系は、哺乳動物細胞、例えば非限定的に肝臓及び骨格筋又は平滑筋の哺乳動物細胞に選択性のあるプロモーターを含む。一実施形態において、本発明のプロモーターは、幹細胞、筋細胞及び筋芽細胞からなる群から選択される哺乳動物細胞に特異性がある。
該プロモーターは、天然由来プロモーター又は合成プロモーターであり得る。
一実施形態において、本発明による発現系は、非限定的にp−MCK(筋肉クレアチンキナーゼ用のプロモーター)、例えばp−MCK1350、複数のコピーのヒト・スロートロポニンI遺伝子エンハンサー、LB1、HLP、CAG、CBA、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF−1α、SV40、Mt1、pGK、H1及び/又はU3であるプロモーターからなる群から選択される1つ又は複数のプロモーターなどの構成プロモーターを含む。
幾つかの実施形態において、該発現系は、EF−1αプロモーターを含む。EF−1αプロモーターは、TH又はGCH1の上流に位置し得る。
一実施形態において、本発明による発現系は、非限定的にTet−On、Tet−Off、Mo−MLV−LTR、Mx1、プロゲステロン、RU486及び/又はラパマイシン誘導性プロモーターなどの誘導性プロモーターを含む。
一実施形態において、本発明による発現系は、肝臓細胞、例えば肝細胞に特異性のあるプロモーターを含む。そのようなプロモーターとしては、LP1、hAPO−HCR及び/又はhAATが挙げられる。任意の肝特異性プロモーター、例えばhttp://rulai.cshl.edu/LSPD/で見出され得る“The Liver Specific Gene Promoter Database”など、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/で見出され得るGenbankなどのゲノムデータベースで見出されるプロモーターなどが、本発明において有用になり得る。
別の実施形態において、本発明による発現系は、非限定的に、
a.肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)、
b.ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)(McIntosh J et. al Blood 2013 121(17) 3335-3344参照)、
c.CMVプロモーター及びSPc5−12のエレメントを用いた筋肉特異性組み合わせ又は二重プロモーター、
d.SPc5−12合成筋肉特異性プロモーター、
e.dMCK若しくはtMCK、pMCK−1350、又は複数のコピーのヒト・スロートロポニンI遺伝子エンハンサーであるプロモーターなどの筋肉特異性クレアチンキナーゼプロモーター、又はそれらの簡略型、
f.CMVプロモーター、
g.筋肉CATプロモーター、
h.骨格αアクチン448プロモーター、
i.a〜fのいずれかの任意の活性類似体又は断片、
からなる群から選択されるプロモーターなどの筋肉細胞に特異性のある1つ又は複数のプロモーターを含む。
a.肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)、
b.ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)(McIntosh J et. al Blood 2013 121(17) 3335-3344参照)、
c.CMVプロモーター及びSPc5−12のエレメントを用いた筋肉特異性組み合わせ又は二重プロモーター、
d.SPc5−12合成筋肉特異性プロモーター、
e.dMCK若しくはtMCK、pMCK−1350、又は複数のコピーのヒト・スロートロポニンI遺伝子エンハンサーであるプロモーターなどの筋肉特異性クレアチンキナーゼプロモーター、又はそれらの簡略型、
f.CMVプロモーター、
g.筋肉CATプロモーター、
h.骨格αアクチン448プロモーター、
i.a〜fのいずれかの任意の活性類似体又は断片、
からなる群から選択されるプロモーターなどの筋肉細胞に特異性のある1つ又は複数のプロモーターを含む。
一実施形態において、該プロモーターの発現パターンは、全身投与可能な物質、例えばテトラサイクリン・オン遺伝子又はテトラサイクリン・オフ遺伝子発現系によって調節され得る。
好ましい実施形態において、本発明による発現系は、LB1及びHLPを含む群から選択される1つ又は複数のプロモーターを含む。より好ましい実施形態において、本発明による発現系は、配列番号:38及び配列番号:39を含む群から選択される1つ又は複数のプロモーターを含む。
幾つかの実施形態において、該発現系は、発現の際にTHをコードするポリヌクレオチドと、発現の際にGCH1をコードし、さらに2つのプロモーターを含むポリヌクレオチドと、を含み、該第一のプロモーターは、THに動作可能に結合され、第二のプロモーターは、GCH1に動作可能に結合されている。
2つのプロモーターの一方又は両方は、LB1、HLP、CAG、CBA、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF−1α、SV40、Mt1、pGK、H1及び/又はU3からなる群から選択される構成プロモーターであり得る。一実施形態において、両方のプロモーターが、EF−1αである。
2つのプロモーターの一方は、LB1、HLP、CAG、CBA、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF−1α、SV40、Mt1、pGK、H1及び/又はU3からなる群から選択される構成プロモーターであり得、2つのプロモーターの他方は、非限定的に、
a.肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)、
b.ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)(McIntosh J et. al Blood 2013 121(17) 3335-3344参照)、
c.CMVプロモーター及びSPc5−12のエレメントを用いた筋肉特異性組み合わせ又は二重プロモーター、
d.SPc5−12合成筋肉特異性プロモーター、
e.dMCK若しくはtMCK、p−MCK1350、又は複数のコピーのヒト・スロートロポニンI遺伝子エンハンサーであるプロモーターなどの筋肉特異性クレアチンキナーゼプロモーター、又はそれらの簡略型、
f.CMVプロモーター、
g.筋肉CATプロモーター、
h.骨格αアクチン448プロモーター、
a〜fのいずれかの任意の活性類似体又は断片、
からなる群から選択されるプロモーターなどの筋肉細胞に特異性のあるプロモーターであり得る。
a.肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)、
b.ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)(McIntosh J et. al Blood 2013 121(17) 3335-3344参照)、
c.CMVプロモーター及びSPc5−12のエレメントを用いた筋肉特異性組み合わせ又は二重プロモーター、
d.SPc5−12合成筋肉特異性プロモーター、
e.dMCK若しくはtMCK、p−MCK1350、又は複数のコピーのヒト・スロートロポニンI遺伝子エンハンサーであるプロモーターなどの筋肉特異性クレアチンキナーゼプロモーター、又はそれらの簡略型、
f.CMVプロモーター、
g.筋肉CATプロモーター、
h.骨格αアクチン448プロモーター、
a〜fのいずれかの任意の活性類似体又は断片、
からなる群から選択されるプロモーターなどの筋肉細胞に特異性のあるプロモーターであり得る。
2つのプロモーターの一方は、LB1、HLP、CAG、CBA、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF−1α、SV40、Mt1、pGK、H1及び/又はU3からなる群から選択される構成プロモーターであり得、2つのプロモーターの他方は、非限定的に、Tet−On、Tet−Off、Mo−MLV−LTR、Mx1、プロゲステロン、RU486及び/又はラパマイシン誘導性プロモーターなどの誘導性プロモーターであり得る。
2つのプロモーターの一方は、LB1、HLP、CAG、CBA、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF−1α、SV40、Mt1、pGK、H1及び/又はU3からなる群から選択される構成プロモーターであり得、2つのプロモーターの他方は、本明細書の先に詳述された肝臓細胞、例えば肝細胞に特異性のあるプロモーターであり得る。
調節エレメント
本発明による発現系はまた、先に議論されたプロモーターに加えて、含まれれば、TH及び/又はGCH1をコードする遺伝子の1つ又は複数の転写の調整をもたらす他の調節エレメントを含み得る。
本発明による発現系はまた、先に議論されたプロモーターに加えて、含まれれば、TH及び/又はGCH1をコードする遺伝子の1つ又は複数の転写の調整をもたらす他の調節エレメントを含み得る。
一実施形態において、本発明による発現系は、SV40ポリアデニル化配列などのポリアデニル化配列を含む。
該ポリアデニル化配列は典型的には、TH及び/又はGCH1をコードする核酸配列の3’末端に動作可能に結合されている。
一実施形態において、本発明による発現系はさらに、転写後調節エレメント、例えばウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント(WPRE)を含む。
様々な実施形態において、前記ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメントは、配列番号:28又は29の配列を含む。好ましい実施形態において、前記ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメントは、配列番号:29の配列を含む。
一実施形態において、該発現系はさらに、典型的にはTH及び/又はGCH1転写産物の5’末端に動作可能に結合されたイントロンを含む。
幾つかの実施形態において、該発現系は、内部リボソーム進入部位(IRES)を含む。そのようなIRESは、mRNAの内部で開始されるヌクレオチド配列の翻訳を可能にする。したがって幾つかの実施形態において、該発現系は、発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
少なくとも1つの内部リボソーム進入部位、
を含む。そのような実施形態において、該発現系はさらに、発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド及び6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)からなる群から選択される第三のポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチドを含み得る。
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
少なくとも1つの内部リボソーム進入部位、
を含む。そのような実施形態において、該発現系はさらに、発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド及び6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)からなる群から選択される第三のポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチドを含み得る。
幾つかの実施形態において、GCH1をコードするポリヌクレオチドは、THをコードするポリヌクレオチドの上流に位置し、IRESは、GCH1をコードするポリヌクレオチドの下流及びTHをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する。別の実施形態において、THをコードするポリヌクレオチドは、GCH1をコードするポリヌクレオチドの上流に位置し、IRESは、THをコードするポリヌクレオチドの下流及びGCH1をコードするポリヌクレオチドの上流に位置する。
したがって幾つかの実施形態において、該発現系は、TH及びGCH1の独立した翻訳開始事象を可能にする。したがってTHとGCH1のタンパク質合成レベルは、異なり得る。
一実施形態において、TH:GCH1の比などの発現される酵素間の比を調節することに、特に関心を持たれている。
一実施形態において、TH:GCH1比は、7:1である。
幾つかの実施形態において、該発現系は、
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
少なくとも1つの内部リボソーム進入部位、
を含む。
発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
少なくとも1つの内部リボソーム進入部位、
を含む。
そのような実施形態において、該発現系はさらに、発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチドを含み得る。
幾つかの実施形態において、GCH1をコードするポリヌクレオチドは、PTPSをコードするポリヌクレオチドの上流に位置し、IRESは、GCH1をコードするポリヌクレオチドの下流及びPTPSをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する。別の実施形態において、PTPSをコードするポリヌクレオチドは、GCH1をコードするポリヌクレオチドの上流に位置し、IRESは、PTPSをコードするポリヌクレオチドの下流及びGCH1をコードするポリヌクレオチドの上流に位置する。
したがって幾つかの実施形態において、該発現系は、PTPS及びGCH1の独立した翻訳開始事象を可能にする。したがってPTPSとGCH1のタンパク質合成レベルは、異なり得る。
一実施形態において、PTPS:GCH1の比などの発現される酵素間の比を調節することに、特に関心が持たれる。
一実施形態において、本発明の発現系のプロモーター及び/又は他の調節エレメントは、PTPS及びGCH1の両方の発現を誘導することができ、発現されたPTPS:GCH1の比は、少なくとも3:1、少なくとも4:1など、例えば少なくとも5:1、少なくとも6:1など、例えば少なくとも7:1、少なくとも10:1など、例えば15:1、20:1など、例えば25:1、30:1など、例えば35:1、40:1など、例えば45:1、50:1などである。
一実施形態において、PTPS:GCH1比は、7:1である。
幾つかの実施形態において、該発現系は、
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
少なくとも1つの内部リボソーム進入部位、
を含む。
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合されたポリヌクレオチド、及び
少なくとも1つの内部リボソーム進入部位、
を含む。
そのような実施形態において、該発現系はさらに、発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、プロモーターに動作可能に結合された第二のポリヌクレオチドを含み得る。
幾つかの実施形態において、THをコードするポリヌクレオチドは、PTPSをコードするポリヌクレオチドの上流に位置し、IRESは、THをコードするポリヌクレオチドの下流及びPTPSをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する。別の実施形態において、PTPSをコードするポリヌクレオチドは、THをコードするポリヌクレオチドの上流に位置し、IRESは、PTPSをコードするポリヌクレオチドの下流及びTHをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する。
したがって幾つかの実施形態において、該発現系は、PTPS及びTHの独立した翻訳開始事象を可能にする。したがってPTPSとTHのタンパク質合成レベルは、異なり得る。
一実施形態において、TH:GCH1の比などの発現される酵素間の比を調節することに、特に関心が持たれる。
一実施形態において、本発明の発現系のプロモーター及び/又は他の調節エレメントは、PTPS及びTHの両方の発現を誘導することができ、発現されたPTPS:THの比は、少なくとも3:1、少なくとも4:1など、例えば少なくとも5:1、少なくとも6:1など、例えば少なくとも7:1、少なくとも10:1など、例えば15:1、20:1など、例えば25:1、30:1など、例えば35:1、40:1など、例えば45:1、50:1などである。
一実施形態において、PTPS:TH比は、7:1である。
TH:GCH1、PTPS:TH又はPTPS:GCH1の比は、本明細書の先に定義されたベクターでトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中の発現されたTH及びGCH1の活性を測定することにより、決定され得る。
或いはその比は、本明細書の先に定義されたベクターでトランスフェクト又は形質導入された試料宿主からの試料中のテトラヒドロビオプテリン(BH4)の量を測定することにより、決定される。
或いはその比は、本明細書の先に定義されたベクターでトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中の転写されたmRNAの量により、決定される。
或いはその比は、本明細書の先に定義されたベクターでトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中の発現されたタンパク質の量により、決定される。
チロシンヒドロキシラーゼ
THと略されるチロシンヒドロキシラーゼは、チロシンから、ドパミンの前駆体である3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン(DOPA)への変換を触媒するモノオキシゲナーゼである。TH活性は、環境の変化、並びに神経及びホルモンの刺激に応答した転写及び翻訳後メカニズムにより調整される。TH活性の最も急性期の調節は、リン酸化によるタンパク質の翻訳後修飾を通して起こり得る。
THと略されるチロシンヒドロキシラーゼは、チロシンから、ドパミンの前駆体である3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン(DOPA)への変換を触媒するモノオキシゲナーゼである。TH活性は、環境の変化、並びに神経及びホルモンの刺激に応答した転写及び翻訳後メカニズムにより調整される。TH活性の最も急性期の調節は、リン酸化によるタンパク質の翻訳後修飾を通して起こり得る。
上述の通り、チロシンヒドロキシラーゼの主な機能は、チロシンからドパミンへの変換である。THは主として、ドパミン作動性ニューロンにおいて見出されるが、これらに制限されない。THノックアウト遺伝子型は、マウスの胎生期14日以内は致命的であるため、TH遺伝子は、胎児発生に必須であるが、TH突然変異に関してヘテロ接合性のマウスは、カテコールアミンレベルがわずかに減少するだけで正常に発達する。
TH酵素は、高特異性でありインドール誘導体を受け入れず、カテコールアミンの産生に関与する多くの他の酵素に比べ異質である。カテコールアミンの合成における律速段階酵素として、THは、アドレナリン作動性ニューロンの生理学的作用において重要な役割を有する。ドパミンなどのカテコールアミンは、前記アドレナリン作動性ニューロンのシグナル伝達における重要な担い手である。アドレナリン作動性ニューロンの機能不全は、一般には末梢神経症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、虚血発作、急性脳損傷、急性脊髄損傷、神経系腫瘍、多発性硬化症、末梢神経傷害若しくは損傷、神経毒への暴露、糖尿病若しくは腎機能障害などの代謝疾患、及び感染性物質により誘発された損傷、又はうつ病などの気分障害などの複数の神経変性障害を起こす。
本発明の構築物及び方法を用いて投与されるTHは、パーキンソン病を処置する際に用いられ得る。図1で実証される通り、L−DOPAは、酵素チロシンヒドロキシラーゼ(TH)によりアミノ酸L−チロシンから生合成される。
L−チロシンは、酵素フェニルアラニンヒドロラーゼ(PAH)によりアミノ酸フェニルアラニンから生合成される。
フェニルアラニンは、肝細胞及び横紋筋細胞をはじめとする細胞の形質膜を通して運搬される(Thony, 2010)。
チロシンヒドロキシラーゼは、カテコールアミンの合成における律速段階である。
プレmRNAのスプライシングは、met30に続いて追加のアミノ酸をもたらすため、ヒトは、Rドメインが異なるTHの4つのアイソザイムを有する。
その酵素の複雑な調節が起こることは公知で、それらは2つの広範なカテゴリー:酵素活性の短期の直接的調節(チロシンによる基質阻害(Reed, Lieb, & Nijhout, 2010)、フィードバック阻害(Kumer & Vrana, 1996)、アロステリック調節、及び酵素リン酸化)と、遺伝子発現の中期〜長期調節(転写調節、選択的RNAスプライシング、RNA安定性、翻訳調節、及び酵素安定性)に分けられる。
THが合成されたら、該酵素は、カテコールアミンと結合しない限りはリン酸化せずに活性であり、カテコールアミンと結合すれば、その後、活性化されるのにリン酸化が必要になる(Bobrovskaya et al., 2007)。
THは、芳香族アミノ酸ヒドロキシラーゼ(AAAH)、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ(PheH)及びトリプトファンヒドロキシラーゼ(TrpH)も含む酵素ファミリーのメンバーである。3つの酵素は全て、アミノ酸の芳香族環のヒドロキシル化を実施する。それらは全て、結合された鉄イオン原子との反応において、二原子酸素及び還元されたビオプテリンを利用しする。鉄原子は、2つのヒスチジン残基及びグルタミン酸残基により開裂された活性部位に代わって保持され、それは触媒作用を実施するのに第一鉄の状態でなければならない。活性部位におけるこれらの類似性に加えて、該ファミリーは、三次元構造の他の特色を共有する。THは、160のアミノ酸残基のアミノ末端調節ドメイン(R)と、その後の触媒ドメイン(C)及びカルボキシル末端のかなり短いコイルドコイルドメインを備えたマルチドメイン構造を有する。該酵素は、テトラマーを形成する。
Rドメインは、8位、19位、31位及び40位にセリンを含有する。それらは全て、cAMP依存性プロテインキナーゼ(PKA)によりリン酸化される(Fitzpatrick, 1999)。THは、PKAによりリン酸化されると、それは、カテコールアミンによるフィードバック阻害を受けにくくなる(Daubner, Lauriano, Haycock, & Fitzpatrick, 1992)。結晶構造からはそれが立証されないが、リン酸化により、Rドメインが活性部位の最初の部分から移動し、それがホスファターゼで脱リン酸化されることにより、妨害される位置へ戻る、と推定するのが論理的である(Daubner, Le, & Wang, 2011)
THは、調節ドメイン内の3つのセリン残基のいずれかのリン酸化後に活性化される。ser40は、主にPKAによりリン酸化され、カテコールアミンへの親和性を低下させる。ser31は、複数のキナーゼによりリン酸化されて、テトラヒドロビオプテリンに関するKM値を低下させる。ser19は、ser19のみ、又はser19とser40の両方を修飾する酵素によりリン酸化されるが、他の因子の非存在下では活性化されない。CaMKIIによるser19のリン酸化は、同じキナーゼによるser40のリン酸化を促進する。多点リン酸化の他の結果はいずれもまだ確定されていないが、安定化及びシャペロンタンパク質へのより堅い結合が可能である。ドパミン、ノルエピネフリン、及びエピネフリンは全て、THのフィードバック阻害剤であり、ser40リン酸化の際のTH活性の最も大きな改変が、カテコールアミンに関するKd値の変動である。THのDA親和性は、この酵素がリン酸化されると、300倍低下する(Ramsey & Fitzpatrick, 1998)。
最初の32(THΔ32)、最初の68の(THΔ68)、最初の76の、又は最初の120のアミノ酸が欠如しているrTHの欠失変異体のドパミン阻害は、研究されている(Daubner & Piper, 1995)。欠失変異体を、理論量のドパミンとのプレインキュベートにより阻害について試験したところ、TyrHD32は、ドパミンにより90%阻害されたが、TyrHD68及び他のトランケート型は、阻害されなかった。さらに、ドパミン結合及び放出速度を検討すると、ドパミンはTHΔ32から放出されず、THΔ68から急速に放出された(Ramsey & Fitzpatrick, 1998)。ドパミンは、DOPAよりも1000倍堅く結合し、ジヒドロキシフェニル酢酸塩は、DOPAよりも100倍緩く結合する(Ramsey & Fitzpatrick, 2000)。
THはまた、第二の低親和性(K(D)=90nM)ドパミン結合部位を含有し、それは、該酵素の非リン酸化形態及びser40リン酸化形態の両方に存在する。高親和性部位へのドパミンの結合は、補因子であるテトラヒドロビオプテリンに関してV(max)を低下させ、KMを上昇させるが、低親和性部位へのドパミンの結合は、テトラヒドロビオプテリンに関するKMを上昇させることによりTH活性を調節する。反応速度分析から、両方の部位が4つのヒトTHアイソフォームのそれぞれに存在することが示される。低親和性部位からのドパミンの解離は、TH活性を、非リン酸化された酵素では12倍、そしてser40リン酸化された酵素では9倍上昇させる。低親和性ドパミン結合部位は、ほとんどの条件下でカテコールアミン合成の調節を担う主要なメカニズムである可能性を有する(Gordon, Quinsey, Dunkley, & Dickson, 2008)。
N末端調節ドメインの最初の160のアミノ酸がほぼ欠如したトランケート型THは、チロシンからDOPA(例えば、配列番号:40)への変換を触媒することにおいて依然として活性である。THの他のトランケート型は、最初の155のアミノ酸を除去する。8位、19位、31位、40位のセリンは、フィードバック制御又はTHの調節におけるリン酸化/脱リン酸化で特に重要な部位と見なされる。したがって他のトランケート型もまた、本発明において有用であり得る。一実施形態において、本発明のTHは、最初の10〜300のアミノ酸が欠如しており、最初の100〜250のアミノ酸が欠如するなど、最初の130〜210のアミノ酸が欠如するなど、好ましくは140〜170のアミノ酸が欠如するなど、より好ましくは最初の150〜160のアミノ酸が欠如するなどである。
3つの芳香族アミノ酸ヒドロキシラーゼTH、フェニルアラニンヒドロラーゼ(PAH)及びトリプトファンヒドロキシラーゼ(TRPH)の全てが、C末端のおよそ330のアミノ酸の高相同性触媒ドメインを共有することを条件とし、基質特異性が一部としてそれぞれの調節ドメインによることが提案された。各酵素のRドメインが他の酵素のCドメインに結合している、TH及びPAHのキメラ突然変異体が構築された(Daubner, Hillas, & Fitzpatrick, 1997)。これらのキメラ突然変異体に加え、それらのN末端Rドメインが欠如したトランケート型突然変異体及び野生型酵素を用いて、Daubnerらが、これらの酵素のアミノ酸基質特異性を定義する上でのアミノ末端ドメインの役割を実証した。トランケート型タンパク質は、いずれかのアミノ酸とも低い結合特異性を示した。いずれかの調節ドメインの結合が、特異性を大幅に上昇させたが、その特異性は、キメラタンパク質中の触媒ドメインによって決定された、
本発明のTHをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25、配列番号:26及び配列番号:27に示される。好ましい実施形態において、本発明は、配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25、配列番号:26及び配列番号:27と少なくとも70%の配列同一性、より好ましくは配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25、配列番号:26及び配列番号:27と75%の配列同一性、例えば少なくとも80%の配列同一性、少なくとも85%の配列同一性など、例えば少なくとも90%の配列同一性、少なくとも95%の配列同一性など、例えば少なくとも96%の配列同一性、少なくとも97%の配列同一性など、例えば少なくとも98%の配列同一性、少なくとも99%の配列同一性などを含むTHポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。
本発明の発現系構築物中に含まれる、THをコードするポリヌクレオチドはまた、THポリペプチドの生物活性断片又は変異体をコードし得る。
好ましい実施形態において、THポリヌクレオチドのそのような断片又は変異体は、少なくとも50の連続するアミノ酸、75の連続するアミノ酸など、例えば100の連続するアミノ酸、150の連続するアミノ酸など、例えば200の連続するアミノ酸、250の連続するアミノ酸など、例えば300の連続するアミノ酸、350の連続するアミノ酸など、例えば400の連続するアミノ酸、450の連続するアミノ酸などを含むTHポリペプチドをコードする。
一実施形態において、該生物活性断片は、チロシンヒドロキシラーゼの触媒ドメイン(配列番号:13)又は(配列番号:40)である。
特定の実施形態において、本発明のコードされたTHポリペプチドの配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17の突然変異及び/又は置換された変異体である指定されたチロシンヒドロキシラーゼもまた、含まれる。一実施形態において、アミノ酸配列内の置換は、保存的であり、該アミノ酸が、類似の化学的及び/又は物理的特性を有する別のアミノ酸で置換されている。突然変異は、配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17中の1つ若しくは複数の部位で、並びに/又はコードされたTHポリペプチドで起こり得る。好ましい実施形態において、本発明は、例えば中立突然変異又はサイレント突然変異など、THを生物活性にする任意の突然変異に関する。より好ましい実施形態において、本発明は、配列番号:7の任意の1つのセリン残基S8、S19、S31、S40若しくはS404のうちの1つ若しくは複数、又は配列番号:40、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17のうちの任意の1つの等しいアミノ酸残基が改変されている突然変異に関する。
一実施形態において、該生物活性変異体は、配列番号:7のS19、S31、S40又はS404のうちの1つ又は複数が、別のアミノ酸残基に改変されている、突然変異したチロシンヒドロキシラーゼポリペプチドである。
一実施形態において、本発明による発現系構築物によって発現されたチロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチドは、配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも80%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも85%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも90%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも95%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも96%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも97%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも98%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも99%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと100%同一である。
GTP−シクロヒドロラーゼ1
GTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)は、酵素のGTPシクロヒドロラーゼファミリーのメンバーである。GCH1は、葉酸及びビオプテリン生合成経路の一部である。GCH1Dは、テトラヒドロビオプテリン(BH4)生合成の最初及び律速段階の酵素であり、GTPから7,8−DHNP−3’−TPへの変換を触媒する。BH4は、モノアミン神経伝達物質であるセロトニン(5−ヒドロキシトリプタミン(5−HT))、メラトニン、ドパミン、ノルアドレナリン、及びアドレナリンの生合成において芳香族アミノ酸ヒドロキシラーゼ(AAAH)によって要求される必須の補因子である。この遺伝子内の突然変異は、悪性フェニルケトン尿症及び高フェニルアラニン血症に加え、L−DOPA反応性ジストニアに関連する。しかし、異なるアイソフォームをコードする複数の選択スプライシング転写産物の変異体が記載されており、それらの変異体の全てが、機能的酵素を生じるとは限らない。
GTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)は、酵素のGTPシクロヒドロラーゼファミリーのメンバーである。GCH1は、葉酸及びビオプテリン生合成経路の一部である。GCH1Dは、テトラヒドロビオプテリン(BH4)生合成の最初及び律速段階の酵素であり、GTPから7,8−DHNP−3’−TPへの変換を触媒する。BH4は、モノアミン神経伝達物質であるセロトニン(5−ヒドロキシトリプタミン(5−HT))、メラトニン、ドパミン、ノルアドレナリン、及びアドレナリンの生合成において芳香族アミノ酸ヒドロキシラーゼ(AAAH)によって要求される必須の補因子である。この遺伝子内の突然変異は、悪性フェニルケトン尿症及び高フェニルアラニン血症に加え、L−DOPA反応性ジストニアに関連する。しかし、異なるアイソフォームをコードする複数の選択スプライシング転写産物の変異体が記載されており、それらの変異体の全てが、機能的酵素を生じるとは限らない。
GCH1は、幾つか障害を含む複数の臨床的関わりを有する。GCH1の欠陥は、GTPシクロヒドロラーゼ1欠乏症(GCH1D)の原因であり、GTPシクロヒドロラーゼ1欠乏症による異型重度フェニルケトン尿症としても知られる。GCH1は、テトラヒドロビオプテリン欠乏による悪性高フェニルアラニン血症の原因の1つである。それはまた、神経伝達物質ドパミン及びセロトニンの枯渇による神経伝達物質の欠如を担い、パーキンソン病などの疾患を生じる。主要な症状としては、精神運動遅滞、緊張障害、痙攣、眠気、過敏性、異常運動、体温上昇、唾液分泌過多、及び嚥下困難が挙げられる。一部の患者は、重度の高フェニルアラニン血症と軽度ジストニア5型(日内変動を伴うジストニア・パーキンソン症候群)の間の中間的な重症度の表現型を呈する場合がある。この中間的表現型では、著しい運動遅延があるが、精神遅滞はなく、高フェニルアラニン血症があったとしても、非常に低い。GCH1の欠如は、ジストニア5型(DYT5)の原因であり、日内変動を伴う進行性ジストニア、常染色体優性瀬川症候群又は日内変動を伴うジストニア・パーキンソン症候群としても知られる。DYT5は、DOPA反応性ジストニアである。ジストニアは、持続的な不随意性筋肉収縮の存在により定義され、多くの場合、姿勢の異常を生じる。DYT5は、典型的には小児に存在し、下肢のジストニアによる歩行問題及び夜間に向かって増悪するジストニアを有する。それは、著しい日内変動を示す姿勢及び運動障害を特徴とする。胴体のねじれが、異常である。症状は、睡眠後に軽減し、疲労及び運動により悪化する。L−DOPAへは好適に応答し、副作用を起こさない。
本発明の構築物及び方法を用いて投与されるGCH1は、パーキンソン病を処置するのに用いられ得る。
本発明におけるGCH1をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号:30に示される。好ましい実施形態において、本発明は、配列番号:30、及び配列番号:30と少なくとも70%の配列同一性、より好ましくは75%の配列同一性、例えば少なくとも80%の配列同一性、少なくとも85%の配列同一性など、例えば少なくとも90%の配列同一性、少なくとも95%の配列同一性など、例えば少なくとも96%の配列同一性、少なくとも97%の配列同一性など、例えば少なくとも98%の配列同一性、少なくとも99%の配列同一性などを含むGCH1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列変異体に関する。
本発明の発現系構築物に含まれるGCH1をコードするポリヌクレオチドはまた、GCH1ポリペプチドの生物活性断片又は変異体をコードし得る。
好ましい実施形態において、本発明によりコードされるGCH1ポリヌクレオチドのそのような断片又は変異体は、少なくとも50の連続するアミノ酸、75の連続するアミノ酸など、例えば100の連続するアミノ酸、150の連続するアミノ酸など、例えば200の連続するアミノ酸、250の連続するアミノ酸などを含み、該当する配列内で指定された任意のアミノ酸は、異なるアミノ酸に改変されているが、但し、前記断片又は変異体内の15以下のアミノ酸がそのように改変されていることを条件とする。
配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6、並びに本発明のコードされたGCH1ポリペプチドの突然変異及び置換形態もまた、含まれる。一実施形態において、アミノ酸配列内の置換は、保存的であり、該アミノ酸が、類似の化学的及び/又は物理的特性を有する別のアミノ酸で置換されている。突然変異は、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6の1つ若しくは複数の部位で、並びに/又はコードされたGCH1ポリペプチド内で起こり得る。好ましい実施形態において、本発明は、例えば中立突然変異又はサイレント突然変異など、GCH1を生物活性にする任意の突然変異に関する。
一実施形態において、本発明による発現系構築物により発現された生物活性断片は、少なくとも50の連続するアミノ酸を含み、選択された配列内で指定された任意のアミノ酸は、異なるアミノ酸に改変されているが、但し、該配列内の15以下のアミノ酸残基が、そのように改変されていることを条件とする。
一実施形態において、本発明による発現系構築物によって発現されたGTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチドは、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも80%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも85%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも90%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも95%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも96%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも97%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも98%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも99%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと100%同一である。
6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)
6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)は、7,8−ジヒドロネオプテリン三リン酸塩から6−ピルボイルテトラヒドロプテリン及び三リン酸塩への変換を触媒する酵素である。この反応は、可逆性がある。6−ピルボイルテトラヒドロプテリンは、テトラヒドロビオプテリン(BH4)の生合成における中間体である。特にPTPSは、GCH1の産生及び活性を促進するようである。BH4は、フェニルアラニンヒドロラーゼの安定性及び活性において、そしてそれによりL−DOPAの生合成において役割を担うことが報告されている。PTPSは、肝臓において発現される。理論に束縛されるのを望むものではないが、肝臓内のPTPSのナイーブな内因性発現レベルが、L−DOPAの生合成を可能にするのに十分であると推定される。したがって、以下に詳述される宿主細胞内でトランスフェクトされる本発明の発現系は、発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)をコードするポリヌクレオチドをさらに含み得る。これは、宿主細胞が肝臓細胞でない、例えば宿主細胞が筋細胞などの筋肉細胞又は筋芽細胞などの筋肉細胞前駆体である実施形態において、特に関連する。
6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)は、7,8−ジヒドロネオプテリン三リン酸塩から6−ピルボイルテトラヒドロプテリン及び三リン酸塩への変換を触媒する酵素である。この反応は、可逆性がある。6−ピルボイルテトラヒドロプテリンは、テトラヒドロビオプテリン(BH4)の生合成における中間体である。特にPTPSは、GCH1の産生及び活性を促進するようである。BH4は、フェニルアラニンヒドロラーゼの安定性及び活性において、そしてそれによりL−DOPAの生合成において役割を担うことが報告されている。PTPSは、肝臓において発現される。理論に束縛されるのを望むものではないが、肝臓内のPTPSのナイーブな内因性発現レベルが、L−DOPAの生合成を可能にするのに十分であると推定される。したがって、以下に詳述される宿主細胞内でトランスフェクトされる本発明の発現系は、発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)をコードするポリヌクレオチドをさらに含み得る。これは、宿主細胞が肝臓細胞でない、例えば宿主細胞が筋細胞などの筋肉細胞又は筋芽細胞などの筋肉細胞前駆体である実施形態において、特に関連する。
本発明の構築物及び方法を用いて投与されるPTPSは、パーキンソン病を処置する際に用いられ得る。
本発明におけるPTPSをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号:41に示される。好ましい実施形態において、本発明は、配列番号:41、及び配列番号:41と少なくとも70%の配列同一性、より好ましくは配列番号:41と75%の配列同一性、例えば少なくとも80%の配列同一性、少なくとも85%の配列同一性など、例えば少なくとも90%の配列同一性、少なくとも95%の配列同一性など、例えば少なくとも96%の配列同一性、少なくとも97%の配列同一性など、例えば少なくとも98%の配列同一性、少なくとも99%の配列同一性などを含むPTPSポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列変異体に関する。
本発明の発現系構築物に含まれるPTPSをコードするポリヌクレオチドはまた、PTPSポリペプチドの生物活性断片又は変異体をコードし得る。
好ましい実施形態において、本発明によりコードされるPTPSポリヌクレオチドのそのような断片又は変異体は、少なくとも50の連続するアミノ酸、75の連続するアミノ酸など、例えば100の連続するアミノ酸、150の連続するアミノ酸など、例えば200の連続するアミノ酸、250の連続するアミノ酸などを含み、該当する配列内で指定された任意のアミノ酸は、異なるアミノ酸に改変されているが、但し、前記断片又は変異体内の15以下のアミノ酸が、そのように改変されていることを条件とする。
配列番号:41、及び本発明のコードされたPTPSポリペプチドの突然変異及び置換形態もまた、含まれる。一実施形態において、アミノ酸配列内の置換は、保存的であり、該アミノ酸が、類似の化学的及び/又は物理的特性を有する別のアミノ酸で置換されている。突然変異は、配列番号:41内の1つもしく複数の部位で、及び/又はコードされたPTPSポリペプチドで起こり得る。好ましい実施形態において、本発明は、例えば中立突然変異又はサイレント突然変異など、PTPSを生物活性にする任意の突然変異に関する。
一実施形態において、本発明による発現系構築物により発現された生物活性断片は、少なくとも50の連続するアミノ酸を含み、選択された配列内で指定された任意のアミノ酸は、異なるアミノ酸に改変されているが、但し、該配列内の15以下のアミノ酸残基が、そのように改変されていることを条件とする。
一実施形態において、本発明による発現系構築物によって発現されたPTPSポリペプチドは、配列番号:41と少なくとも70%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも75%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも80%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも85%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも90%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも95%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも96%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも97%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも98%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも99%同一であり、より好ましくは配列番号:41と100%同一である。
細胞株
一態様において、本発明は、本発明によるベクター/発現系を用いて遺伝子修飾されている、単離された宿主細胞に関する。
一態様において、本発明は、本発明によるベクター/発現系を用いて遺伝子修飾されている、単離された宿主細胞に関する。
本発明はまた、TH及び/又はGCH−1を過剰発現するように遺伝子修飾されていて、該当する末梢組織内で生物活性TH及び/又はGCH−1ポリペプチドを局所送達するために患者へ移植され得る、裸の細胞を介したTH及び/又はGCH−1の生体送達に適した細胞に関する。そのような細胞は、広範囲で治療細胞と称される場合がある。
エクスビボ遺伝子療法では、好ましい細胞群としては、本明細書の先に定義された発現系により形質導入又はトランスフェクトされている、単離された宿主細胞が挙げられる。該宿主細胞は、真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞、より好ましくは霊長類細胞、より好ましくはヒト細胞からなる群から選択される。
一実施形態において、該宿主細胞は、エクスビボでトランスフェクトされ、次に哺乳動物へ投与、例えば移植される。
一実施形態において、該宿主細胞は、肝細胞、筋細胞及び筋芽細胞からなる群から選択される。
一実施形態において、該宿主細胞は、肝細胞などの肝臓細胞である。
別の実施形態において、該哺乳動物細胞は、筋細胞などの筋肉細胞又は筋芽細胞などの筋肉細胞前駆体である。そのような実施形態において、該発現系は、好ましくはプロモーターに動作可能に結合された6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS)をコードするポリヌクレオチドを含む。
発現系の医療使用
本明細書で先に示された通り、本発明による発現系は、医療使用を意図するものである。
本明細書で先に示された通り、本発明による発現系は、医療使用を意図するものである。
非常に好ましい態様において、本発明による発現系は、カテコールアミン機能障害に関連する疾患又は障害の処置のための末梢投与での使用のためのものである。
したがって一実施形態において、本発明による発現系は、必要とするヒトへの前記発現系の末梢投与を含む、血中のL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法での使用に特に十分適する。
血漿L−DOPAのための治療有効量、又は言い換えれば治療範囲は通常、0.2〜1.5mg/Lの範囲内であるが、任意に時点での血漿レベルと治療状態との相関は、1日の間に変動する。この変動は、血漿への到達と血液脳関門の通過の間のラグ、並びに血液脳関門を通る能動輸送に関する他のアミノ酸との競合などの要因に関係する。
全身遺伝子療法は、妨害なく基礎レベルのL−DOPAを誘発し、L−DOPAの循環レベルで予防するが、そうでなく従来の経口L−DOPAが与えられればトラフが生じる。したがって本発明は、L−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)を処置及び/又は予防するのに有用である。
したがって該発現系は、パーキンソン病及びL−DOPA誘発性ジスキネジアなどのカテコールアミン機能障害に関連する状態又は疾患の処置を目的とした末梢投与のために設計及び配合される。
本発明は、必要とするヒトへの本明細書の先に定義された発現系の末梢投与(即ち、CNSの外部への投与)を含む、血中のL−DOPAの治療有効量を維持する方法に関係する。
別の態様において、本発明は、本明細書の先に定義された発現系の治療有効量を、必要とする患者へ末梢投与することを含む、カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置及び/又は予防の方法に関係する。
さらに別の態様において、本発明は、患者の血中のL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法であって、本明細書の先に定義された発現系を、前記患者へ投与することを含む、方法に関係する。
さらに別の態様において、本発明は、L−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)の発生を低減、遅延及び/又は予防する方法であって、本明細書に定義された発現系を必要とする患者へ末梢投与することを含む、方法に関係する。
さらに別の態様において、本発明は、発現の際に、少なくとも1種の治療性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクターを末梢投与することを含む、血中のL−DOPAの治療有効濃度を得る、そして/又は維持する方法であって、該少なくとも1種の治療性ポリペプチドがチロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体である、方法に関係する。
本発明により処置可能な適応症としては、カテコールアミン機能障害、特にドパミン欠乏などのカテコールアミン欠乏に関連する適応症が挙げられる。
一実施形態において、カテコールアミン機能障害に関連する疾患は、神経変性障害などの中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害又は損傷である。
一実施形態において、本発明により処置可能な疾患は、基底核の疾患である。
一実施形態において、本発明による発現系は、パーキンソン病(PD)、ジスキネジア、DOPA反応性ジストニア、ADHD、統合失調症、うつ病、血管性パーキンソン症候群、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝子性ドパミン受容体異常、慢性オピオイド、コカイン、アルコール又はマリファナ使用、副腎不全、高血圧、低血圧、ノルアドレナリン欠乏、心的外傷後ストレス障害、病的ギャンブル障害、認知症、レビー小体型認知症及び遺伝性チロシンヒドロキシラーゼ欠乏からなる群から選択される疾患の処置における使用のために末梢投与される。
一実施形態において、本発明による発現系及び/又は宿主細胞は、パーキンソン病、異型性パーキンソン病、例えば多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、血管性若しくは動脈硬化性パーキンソン病、薬物誘導性パーキンソン症候群及びGTPシクロヒドロラーゼ1欠乏並びに/又はドパミン欠乏による任意のジストニア性疾病などの疾病の処置方法における使用のためのものである。
特に該発現系は、パーキンソン病(PD)並びにそれに関連する症状及び状態の処置に有用である。
特に該発現系は、パーキンソン病(PD)並びにそれに関連する症状及び状態の処置に有用である。
一態様において、本発明は、患者の血中のL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法であって、本明細書の先に定義された発現系を、前記患者へ投与することを含む、方法に関係する。
一態様において、本発明は、L−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)の発生を低減、遅延及び/又は予防する方法であって、本明細書に定義された発現系を必要とする患者へ末梢投与することを含む、方法に関係する。
発現系の投与
本発明の適当な効果を実現するために、発現系を末梢へ、即ち局所又は全身へ、しかしCNSの外部へ投与することが必要であるが、発現系の一部は、最終的にCNSを透過し得る。
本発明の適当な効果を実現するために、発現系を末梢へ、即ち局所又は全身へ、しかしCNSの外部へ投与することが必要であるが、発現系の一部は、最終的にCNSを透過し得る。
本発明の発現系は一般に、適切な医薬組成物の形態で投与される。したがって本発明は、本明細書に定義された発現系を含む医薬組成物にも関する。そのような組成物は典型的には、該発現系及び医薬的に許容し得る担体を含有する。本明細書で用いられる言語「医薬的に許容し得る担体」は、医薬投与に適合性のあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などを包含するものとする。医薬活性物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体又は薬剤が該発現系に不適合性である場合を除き、該組成物中でのそれらの使用が、企図される。補足性活性化合物を、該組成物に組み入れることも可能である。
本発明の医薬組成物は、意図する投与経路に適合するように配合される。適切な投与経路の例としては、非経口、例えば筋肉内、静脈内、肝臓内、皮内、皮下及び経粘膜投与、又は分離式肢灌流が挙げられる。
注射可能な使用に適した医薬組成物は、滅菌水溶液(水溶性であれば)又は分散液、及び滅菌注射性溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与では、適切な担体としては、生理学的生理食塩水、静菌水、Cremophor EL(商標)(BASF、Parsippany, N.J.)又はリン酸緩衝生理食塩水(PBS)が挙げられる。全ての例で、該組成物は、滅菌されていなければならず、容易なシリンジ通過性が存在する程度に流体であるべきである。それは、製造及び貯蔵の条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から防御されなければならない。該担体は、例えば水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど)、及びそれらの適切な混合物を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。微生物作用の予防は、様々な抗菌及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより実現され得る。多くの例で、該組成物中に等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。
先に列挙された1種又は組み合わせでの原材料と共に、適切な溶媒に必要量の発現系を組み入れ、必要に応じて次に濾過滅菌することにより、滅菌注射可能溶液が調製され得る。
全身投与は、経粘膜又は経皮手段によるものでもあり得る。経粘膜又は経皮投与では、浸透されるバリアに適したペネトラントが、該配合剤中で用いられる。そのようなペネトラントは一般に、当業者に公知であり、例えば経粘膜投与用では、洗剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体がある。経粘膜投与は、鼻腔スプレー又は坐剤の使用により完遂され得る。経皮投与では、該活性化合物は、当該技術分野で概ね知られる軟膏、膏薬、ゲル、又はクリームの中に配合される。
一実施形態において、該薬剤は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムをはじめとする制御放出配合剤など、身体からの該化合物の急速な排出を防御する担体と共に調製される。生分解性で生体適合性のポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などが用いられ得る。そのような配合剤の調製方法は、当業者に明白であろう。該材料はまた、Alza Corporation及びNova Pharmaceuticals, Inc.から市販され得る。リポソーム懸濁液(ウイルス抗原へのモノクローナル抗体で感染細胞を標的化させるリポソームなど)もまた、医薬的に供し得る担体として用いられ得る。これらは、例えば米国特許第4,522,811号に記載される通り、当業者に公知の方法により調製され得る。
それは、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために投与剤型に非経口組成物を配合させるのに特に有利である。本明細書で用いられる単位投与剤型は、処置される対象のための単位投薬量として適した物理的に分離した単位であって、各単位が、必要となる医薬担体に関連する所望の治療効果を生成するように計算された活性化合物の所定の量を含有する、単位を指す。本発明の単位投与剤型の仕様は、活性化合物の特有の性質、実行される個々の治療効果、及び個体の処置のために活性化合物などを調合する場合の当該技術分野に生来からある制限によって規定され、それらに直接依存する。
したがって一態様において、本発明は、本明細書の先に定義された発現系を含む医薬組成物に関係する。
該医薬組成物は、投与のための使用説明書と共に容器、パック、又はディスペンサー中に含まれ得る。
したがって一態様において、本発明は、先に定義された医薬組成物及び使用説明書を含むキットに関係する。
本明細書の先に記載された通り、脳内への注射などの脳手術の利用を回避するために、CNSに関して末梢へ、即ちCNSの外部へ投与される、遺伝子療法のための発現系を提供することが、本発明の目的である。
一実施形態において、本発明による発現系は、静脈内投与により、末梢投与される。
一実施形態において、該投与は、門脈で行われる。そのような投与は、肝臓を標的とする。
本発明による発現系はまた、肝臓内投与により末梢投与され得る。
一実施形態において、本発明による発現系は、筋肉内投与により末梢投与される。
一実施形態において、本発明による発現系は、分離式肢灌流により投与される。この場合、裸のプラスミドDNAが、Hagstrom et al. (2004) Mol. Ther. 10(2): 386-398に記載された通り投与され得る。
治療効果を有する発現系では、反復投与が必要な場合がある。幾つかの実施形態において、該発現系は、少なくとも1回、例えば1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、又はそれを超える回数、投与される。
投与される投薬量は、処置される個体、発現系及びプロモーターをはじめとする複数の因子に依存し得る。本発明の幾つかの実施形態において、該発現系は、少なくとも1×1011vg/kg体重、例えば少なくとも1×1012vg/kgなどの投薬量で投与され得る。本発明の幾つかの実施形態において、該発現系は、少なくとも1×1011vg/kg筋肉、例えば少なくとも1×1012vg/kg筋肉などの投薬量で投与され得る。そのような投薬量は、例えばヒトのために適用可能であり得る。
併用処置
本明細書の先に定義された発現系による処置レジメンは、他の適切な化合物により補充され得る。1つのそのような実施形態において、本発明は、該発現系の投与を、L−DOPAの治療有効量の全身投与で補充することをさらに含む。
本明細書の先に定義された発現系による処置レジメンは、他の適切な化合物により補充され得る。1つのそのような実施形態において、本発明は、該発現系の投与を、L−DOPAの治療有効量の全身投与で補充することをさらに含む。
一実施形態において、テトラヒドロビオプテリン(BH4)又はその類似体の治療有効量は、本発明の発現系を通して遺伝子療法を受ける患者に投与される。
一実施形態において、該BH4類似体は、サプロプテリンである。
本発明の一実施形態において、末梢デカルボキシラーゼ阻害剤の治療有効量が、投与される。該デカルボキシラーゼ阻害剤は、典型的にはベンセラジン及びカルビドパからなる群から選択される。
更なる実施形態において、カテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤の治療有効量が、必要とする患者に投与される。
該カテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤は、典型的にはトルカポン、エンタカポン、及びニテカポンからなる群から選択される。
特定の実施形態において、BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/又はカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤は、経口投与される。
或いは、BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/又はカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤は、静脈内又は筋肉内投与される。
1つの併用処置において、BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/若しくはCOMT阻害剤、並びに/又はそれらの類似体の投与は、全身投与による。
1つの併用処置において、BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/若しくはCOMT阻害剤、並びにそれらの類似体の投与は、直腸又は非経口投与による。
1つの併用処置において、BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/若しくはCOMT阻害剤、並びにそれらの類似体の投与は、経口、静脈内又は筋肉内投与による。
実施例1:AAV生成プラスミドのベクター構築クローニング
モノシストロン性自己相補性AAV生成プラスミドの作製
手短に述べると、scAAV−LP1−hFIXcoをXbaI及びSpeIで消化して、それを、それぞれpLA100(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−TH−WPRE)及びpLA109(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−tTH)から単離されたGCH1又はtTH NheI/NheI PCR断片のいずれかとライゲートすることにより、それぞれ二本鎖rAAV2/8−LP1−GCH1及びrAAV2/8−LP1−tTHを生成するために用いられるAAV生成プラスミドのscAAV−LP1−GCH1(pAA009)及びscAAV−LP1−tH(pAA010)(配列番号:34)を構築した。scAAV−LP1−GCH1(pAA009)(配列番号:35)及びscAAV−LP1−tTH(pAA010)(配列番号:34)ベクターを、以下の通り構築した:適当な緩衝液中のテンプレートDNA 25ng、200μM dNTP(NEB)及びGoTaq Polymerase(Promega)と共に、0.75pmol/μlの濃度のプライマーAA16(NheI部位を含むフォワードプライマー、5’−ccaagctagcATGGAGAAGGGCCCTGTG−3’、配列番号:42)及びAA17(NheI部位を含むリバースプライマー、5’−ccaagctagcGGTCGACTAAAAAACCTCC−3’、配列番号:43)を用いて、pLA100(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−tH)の992bp GHC1断片を増幅させた。PCR増幅の条件は、以下の通りであった:95℃(2分)、続いて95℃(30秒)/65℃(30秒)/72℃(30秒)を30サイクル、そして72℃で5分間の最後の伸長。適当な緩衝液中の25ng DNA, 200μM dNTP(NEB)及びPhusion Polymerase(Thermo Scientific)と共に、0.4pmol/μlの濃度のプライマーAA33(NheI部位を含むフォワードプライマー、5’−CCAAgctagcATGAGCCCCGCGGGGCCCAAG−3’、配列番号:44)及びAA34(NheI部位を含むリバースプライマー、5’−CCAAgctagcGGGGGATCTTCGATGCTAGAC−3’、配列番号:45)を用いて、pLA109(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−tTH)の1858bpのtTH−WPRE断片を増幅させた。PCR増幅の条件は、以下の通りであった:98℃(30秒)、続いて98℃(10秒)/63℃(30秒)/72℃(1分)を30サイクル、そして72℃で10分間の最後の伸長。hFIXco遺伝子を除去するために、PCR産物(挿入物)をNheIにより37℃で3時間消化し、プラスミドAAV−LP1−hFIXco(ベクター)(配列番号:43)をXbaI/SpeIにより37℃で3時間消化した。消化物を、1%アガロースゲルにおいて100Vで1時間移動させた後、ゲル電気泳動により分析し、UVトランスイルミネーターで視覚化した。断片(CH1挿入物:992bp;tTH挿入物:1858;ベクター:3525bp)を、メス刃を用いてゲルから切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen)を用いてゲルから精製した。ベクターをいずれかの挿入物と16℃で一晩ライゲートして、SURE細菌内に形質転換した。コロニーを選別して、XcmI消化により分析し、GCH1又はtTH PCR断片のいずれかの存在をチェックして、続いて配列決定に送り、各構築物が予測される配列を含むことを確認した。
モノシストロン性自己相補性AAV生成プラスミドの作製
手短に述べると、scAAV−LP1−hFIXcoをXbaI及びSpeIで消化して、それを、それぞれpLA100(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−TH−WPRE)及びpLA109(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−tTH)から単離されたGCH1又はtTH NheI/NheI PCR断片のいずれかとライゲートすることにより、それぞれ二本鎖rAAV2/8−LP1−GCH1及びrAAV2/8−LP1−tTHを生成するために用いられるAAV生成プラスミドのscAAV−LP1−GCH1(pAA009)及びscAAV−LP1−tH(pAA010)(配列番号:34)を構築した。scAAV−LP1−GCH1(pAA009)(配列番号:35)及びscAAV−LP1−tTH(pAA010)(配列番号:34)ベクターを、以下の通り構築した:適当な緩衝液中のテンプレートDNA 25ng、200μM dNTP(NEB)及びGoTaq Polymerase(Promega)と共に、0.75pmol/μlの濃度のプライマーAA16(NheI部位を含むフォワードプライマー、5’−ccaagctagcATGGAGAAGGGCCCTGTG−3’、配列番号:42)及びAA17(NheI部位を含むリバースプライマー、5’−ccaagctagcGGTCGACTAAAAAACCTCC−3’、配列番号:43)を用いて、pLA100(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−tH)の992bp GHC1断片を増幅させた。PCR増幅の条件は、以下の通りであった:95℃(2分)、続いて95℃(30秒)/65℃(30秒)/72℃(30秒)を30サイクル、そして72℃で5分間の最後の伸長。適当な緩衝液中の25ng DNA, 200μM dNTP(NEB)及びPhusion Polymerase(Thermo Scientific)と共に、0.4pmol/μlの濃度のプライマーAA33(NheI部位を含むフォワードプライマー、5’−CCAAgctagcATGAGCCCCGCGGGGCCCAAG−3’、配列番号:44)及びAA34(NheI部位を含むリバースプライマー、5’−CCAAgctagcGGGGGATCTTCGATGCTAGAC−3’、配列番号:45)を用いて、pLA109(ssAAV−SYN−GCH1−SYN−tTH)の1858bpのtTH−WPRE断片を増幅させた。PCR増幅の条件は、以下の通りであった:98℃(30秒)、続いて98℃(10秒)/63℃(30秒)/72℃(1分)を30サイクル、そして72℃で10分間の最後の伸長。hFIXco遺伝子を除去するために、PCR産物(挿入物)をNheIにより37℃で3時間消化し、プラスミドAAV−LP1−hFIXco(ベクター)(配列番号:43)をXbaI/SpeIにより37℃で3時間消化した。消化物を、1%アガロースゲルにおいて100Vで1時間移動させた後、ゲル電気泳動により分析し、UVトランスイルミネーターで視覚化した。断片(CH1挿入物:992bp;tTH挿入物:1858;ベクター:3525bp)を、メス刃を用いてゲルから切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen)を用いてゲルから精製した。ベクターをいずれかの挿入物と16℃で一晩ライゲートして、SURE細菌内に形質転換した。コロニーを選別して、XcmI消化により分析し、GCH1又はtTH PCR断片のいずれかの存在をチェックして、続いて配列決定に送り、各構築物が予測される配列を含むことを確認した。
最後のトランスジーン構築物は、肝特異性LP1エンハンサー/プロモーターの制御下、ヒトGCH1又はトランケート型ヒトTH遺伝子(例えば、配列番号:40)のいずれかを含むdsAAV生成のための2つのプラスミドであり、全てがAAV2 ITRにより隣接されている。
pAA009及びpAA010中のHLPによるLP1プロモーターの置換
AAV生成プラスミドのscAAV−HLP−GCH1(pAA011)(配列番号:31)及びscAAV−HLP−tTH(pAA016)(配列番号:32)を用いて、それぞれ二本鎖rAAV2/8−HLP−GCH1及びrAAV2/8−HLP−tTHを生成した。手短に述べると、HLPプロモーターをAV−HLP−codop−hFVIII−V3(Amit Nathwaniにより贈与された)からプライマーセットAA43/AA44(それぞれ5’CCAATGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTCTAGATGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC3’/5’CCAAGAATTCGCTAGCGATTCACTGTCCCAGGTCAGTG3’、配列番号:46及び配列番号:47)を用いて増幅させ、それをMscI及びEcoRIで、LP1プロモーターの代わりにpAA009(配列番号:35)内にクローニングすることにより、pAA011(配列番号:35)を構築した。断片HLP−tTHをオーバーラッピングPCRで増幅することにより、pAA016(配列番号:32)を作製した。プライマー対AA57/AA67(それぞれ5’CCAAGCTAGCTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC3’/5’GATCCTTGCTACGAGCTTGAATGATTCACTGTCCCAGGTCAGT3’、配列番号:48及び配列番号:49)及びAA68/RmuscTHext2(それぞれ5’ACTGACCTGGGACAGTGAATCATTCAAGCTCGTAGCAAGGATC3’/5’AAAgctagcTTCGATGCTAGACGATCCAG3’、配列番号:50及び配列番号:51)を用いて、オーバーラッピング配列を含む、それぞれ断片HLP及びtTHを作製した。プライマーAA57/AA67を用いたオーバーラッピングPCRによりHLPをtTHに融合して、NheI制限エンドヌクレアーゼを用いてpcDNA3.1(+)にサブクローニングし、それによりpAA015を作製した。最後に、NheIを用いてHLP−tTH断片をpAA015から切り出し、制限部位NheI及びSpeIの間でベクターpAV−LP1−hFIXcoにライゲートし、それによりpAA016(配列番号:32)を作製した。
AAV生成プラスミドのscAAV−HLP−GCH1(pAA011)(配列番号:31)及びscAAV−HLP−tTH(pAA016)(配列番号:32)を用いて、それぞれ二本鎖rAAV2/8−HLP−GCH1及びrAAV2/8−HLP−tTHを生成した。手短に述べると、HLPプロモーターをAV−HLP−codop−hFVIII−V3(Amit Nathwaniにより贈与された)からプライマーセットAA43/AA44(それぞれ5’CCAATGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTCTAGATGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC3’/5’CCAAGAATTCGCTAGCGATTCACTGTCCCAGGTCAGTG3’、配列番号:46及び配列番号:47)を用いて増幅させ、それをMscI及びEcoRIで、LP1プロモーターの代わりにpAA009(配列番号:35)内にクローニングすることにより、pAA011(配列番号:35)を構築した。断片HLP−tTHをオーバーラッピングPCRで増幅することにより、pAA016(配列番号:32)を作製した。プライマー対AA57/AA67(それぞれ5’CCAAGCTAGCTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC3’/5’GATCCTTGCTACGAGCTTGAATGATTCACTGTCCCAGGTCAGT3’、配列番号:48及び配列番号:49)及びAA68/RmuscTHext2(それぞれ5’ACTGACCTGGGACAGTGAATCATTCAAGCTCGTAGCAAGGATC3’/5’AAAgctagcTTCGATGCTAGACGATCCAG3’、配列番号:50及び配列番号:51)を用いて、オーバーラッピング配列を含む、それぞれ断片HLP及びtTHを作製した。プライマーAA57/AA67を用いたオーバーラッピングPCRによりHLPをtTHに融合して、NheI制限エンドヌクレアーゼを用いてpcDNA3.1(+)にサブクローニングし、それによりpAA015を作製した。最後に、NheIを用いてHLP−tTH断片をpAA015から切り出し、制限部位NheI及びSpeIの間でベクターpAV−LP1−hFIXcoにライゲートし、それによりpAA016(配列番号:32)を作製した。
適当な緩衝液中の20ngテンプレートDNA、200μM dNTP(NEB)及びPhision High Fidelity Polymerase(Fischer Scientific)を用いて、298bpのHLP断片を20μl PCR反応物中で増幅させた。PCR増幅の条件は、以下の通りであった:98℃(30秒)、続いて98℃(10秒)/65℃(15秒)/72℃(60秒)の30サイクル、72℃で10分間の最後の伸長。
45ng HLPテンプレートDNA及び306ng tTHテンプレートDNA(それぞれ予めPCRにより作製)を用いて20μl PCR反応物中で、オーバーラッピングPCRにより作製された2.1kb HLP−tTH断片を増幅させた。200μM dNTP(NEB)及びPhision High Fidelity Polymerase(Fischer Scientific)を、適当な緩衝液中で用い、PCR増幅のサイクル条件は、以下の通りであった:98℃(30秒)、続いて98℃(10秒)/65℃(15秒)/72℃(60秒)の30サイクル、72℃で10分間の最後の伸長。
バイシストロン性一本鎖AAV生成プラスミドの作製
AAV生成プラスミドssAAV−LP11−GCH1−LP1−tTH (pAA019)(配列番号:33)を用いて、一本鎖rAAV2/8−LP1−GCH1−LP1−tTH及びその組換え副産物rAAV2/8−LP1−tTHを作製した。手短に述べると、発現カセットLP1−GCH1−LP1−tTH−WPREをpBluescriptII SK(+)にサブクローニングして、pAA018を生成した後、ITRを含有するAAVバックボーンpSUB201内にクローニングし、それによりpAA019(配列番号:33)を形成させた。
AAV生成プラスミドssAAV−LP11−GCH1−LP1−tTH (pAA019)(配列番号:33)を用いて、一本鎖rAAV2/8−LP1−GCH1−LP1−tTH及びその組換え副産物rAAV2/8−LP1−tTHを作製した。手短に述べると、発現カセットLP1−GCH1−LP1−tTH−WPREをpBluescriptII SK(+)にサブクローニングして、pAA018を生成した後、ITRを含有するAAVバックボーンpSUB201内にクローニングし、それによりpAA019(配列番号:33)を形成させた。
12.5ng scAAV−LP1−hFIXcoをテンプレートとして用いて、プロモーターLP1をプライマーAA01/AA02で増幅させ、BlpI及びSbfI制限部位を用いてpTRUF11内にクローニングし、それによりpAA001を作製した。次に、27ng pAAV−Syn−GCH1−Syn−THをテンプレートとして用いて、GCH1遺伝子をプライマーAA03/AA004で増幅させ、続いてSbfI及びTth111I部位を用いてpAA001にクローニングし、それによりpAA002を形成させた。次に、それぞれXbaI/BlpI及びXbaI/SphI/BstBI/Tth111I制限部位を有するオーバーハングを含むプライマー対AA37/AA38を用いて、LP1−GCH1断片をpAA002から増幅させて、モジュラーベクターの構築を可能にした。LP1−GCH1断片をXbaI制限部位によりAAVバックボーンpSub201内にライゲートし、それによりpAA003を形成させた。バックボーン内のITRの存在によるクローニングの難しさを回避するために、LP1−GCH1をXbaI部位によりクローニングベクターpUC18に転移させ、それによりpAA004を形成させた。プライマー対AA006/AA07でpAA010から第二のLP1プロモーターを増幅させ、BstBI及びTth111I制限部位を用いてそれをpAA004にクローニングし、それによりpAA005を形成させることにより、第二のLP1プロモーターを付加した。tTH遺伝子を該構築物に付加するために、LP1−GCH1−LP1断片を、pUC18内の余分なSphI部位の存在によりバックボーンpBluescriptII SK(+)内に変換しなければならなかった。これは、pAA005内のXbaI部位を用いて実施し、pBluescriptII SK(+)内にライゲートした後、新しい構築物をpAA006と命名した。次に、プライマー対AA53/AA65及び50ngテンプレートを用いて、tTH−WPRE断片をpLA109(AAV−Syn−GCH1−Syn−tTH)から増幅させた。該tTH遺伝子を、制限部位SphI及びBstBIを通してpAA006に挿入し、それによりpAA018を形成させた。pAA018の配列決定後、Tth111I部位の突然変異を見出し、これをGCH1−LP1配列の再クローニングにより固定した。ここでの新しいプライマーセットは、Ttth111I部位の直ぐ下流側にBglII制限部位を付加するように、そしてpLA100及びpLA109と厳密に同一のGCH1コザック配列の組み込みを可能にするように、設計された。プライマー対AA73/AA84及びAA85/AAA07を用いて、それぞれ新しいGCH1配列及び第二のLP1プロモーターを増幅させた。プライマー対AA73/AA07でのオーバーラッピングPCRを実施して、GCH1−LP1を融合し、続いて制限部位SbfI及びBstBIを用いてpAA017内にクローニングし、それによりpAA018を形成させた。最後に、バイシストロン性LP1−GCH1−LP1−tTH発現カセット全体を、AAVバックボーンpSub201に戻して、組換えAAV生成を可能にし、pAA019(配列番号:33)と命名した。
オーバーラッピングPCRによりHLPプロモーターをtTH遺伝子に融合することにより、モノシストロン性自己相補性AAV−HLP−tTHを作製した。HLP配列を、AV−HLP−codop−hFVIII−V3(Amit Nathwaniの実験室から提供されたプラスミド)から増幅させた。tTHの配列は、重要なセリンリン酸化部位を除去するように、N末端の160アミノ酸がトランケートされた(例えば、配列番号:40)THの配列であり、さもなければ該セリンリン酸化部位が、ドパミン又はL−DOPAによるTHのフィードバック阻害を可能にすることに関与する。HLP及びtTHが増幅されたら、それらをオーバーラッピングPCRにより融合し、NheI制限部位を用いてpcDNA3.1(+)にサブクローニングした。品質管理消化(quality control digestions)及び配列決定の後、発現カセットHLP−tTHを、Amit Nathwaniにより提供されたAAV自己相補性バックボーンにクローニングした(図2)。
該GCH1遺伝子をpGPT001(SYN−GCH1−SYN−TH)から増幅し、それを自己相補性AAVバックボーンpAV−LP1−hFIXco(配列番号:36)(Amit Nathwaniにより提供された)内にクローニングし、それによりAAV−LP1−GCH1を作製することにより、モノシストロン性自己相補性AAV−HLP−GCHを作製した。第二のステップにおいて、HLPプロモーター配列を、AV−HLP−codop−hFVIII−V3(配列番号:37)から増幅させて、scAAV−LP1−GCH1にライゲートし、それによりLP1をHLPで置換して、scAAV−HLP−GCH1を形成させた(図2)。
AAVプラスミドpSUB201をバックボーンとして用いて、バイシストロン性一本鎖AAV−LP1−GCH1−LP1−tTHを作製した。各エレメント(遺伝子又はプロモーター)が容易に除去又は置換され得るモジュラーベクターを生成するために、ITRに隣接する最適な制限部位を同定した。両方のLP1配列を、PCRによりpAV−LP1−hFIXcoから増幅して、pSUB201内にクローニングした。GCH1及びtTHを、脳の試験に用いられた既に存在するバイシストロン性ベクター(SYN−GCH1−SYN−tTH)から増幅させて、pSUB201内にクローニングし、ssAAV−LP1−GCH1−LP1−tTHを形成させた。クローニングの時系列は、最初にLP1−GCH1、二番目にLP1−tTHとした(図2)。
他のベクターは、当該技術分野公知の従来法によって構築した。該当する配列を、制限、ライゲーション及びギブソンアッセンブリによりベクターにサブクローニングした。AAVベクターを、接着HEK293細胞内でのトリプルトランスフェクションにより調製し、場合によりヨージキサノール勾配遠心分離により濃縮した。
実施例2:L−DOPA阻害
該遺伝子をGTPシクロヒドロラーゼ1及び/又はチロシンヒドロキシラーゼ(それぞれAAV2/8 GCH1又はAAV2/8 tTH)と共に運搬して、パーキンソン病(PD)患者の肝臓においてL−DOPAの生成を誘導するアデノ随伴ウイルスベクターの能力を評定するために、投薬レジメンを設計した。
該遺伝子をGTPシクロヒドロラーゼ1及び/又はチロシンヒドロキシラーゼ(それぞれAAV2/8 GCH1又はAAV2/8 tTH)と共に運搬して、パーキンソン病(PD)患者の肝臓においてL−DOPAの生成を誘導するアデノ随伴ウイルスベクターの能力を評定するために、投薬レジメンを設計した。
2つの試験を実施した。第一の試験では、18匹のCD1マウスを、動物6匹からなる群3つに無作為に割り付けた。1日目に、動物を以下の表に示される通り処置した:
ベクターscLP1−GCH1(配列番号:35)及びscLP1−tTH(配列番号:34)を、実施例1に記載された通り調製した。該ベクターを、ボーラス静脈内注射(尾静脈)により投与した。
第二の試験では、4匹のCD1マウスを、動物2匹からなる群2つに無作為に割り付けた。1日目に、動物を以下の表に示される通り処置した:
ベクターscHLP−GCH1(配列番号:31)及びscHLP−tTH(配列番号:32)を、実施例1に記載された通り調製した。
第一及び第二の試験の両方で、ベクターをボーラス静脈内(尾静脈)注射により投与した(図3)。
28日間、さらなる実験を行わずにマウスを観察した。有害事象は、認められなかった。28日目の殺処分の1時間前に、マウスに腹腔内注射により10mg/kgベンセラジドを、そして腹腔内注射により低用量のエンタカポンを投与した。エンタカポンの公称注射用量は、30mg/kgであった(図3)。
殺処分の際に、血液試料を心穿刺により得て、その後、動物をPBSと、その後PFAで灌流して、肝臓を採取した。
ヘパリンを含有するバイアルに血液を採取して、最後の動物が殺処分されるまで氷上に貯蔵し、その後、4℃でスピンし、次に抗酸化剤の非存在下、血漿を−70℃で凍結させた。
L−DOPAを、BioPark, Broadwater Road, Welwyn Garden City, Hertfordshire, AL7 3AX, United Kingdom所在のABS Laboratories Ltdにより、検証された方法を利用してアッセイし、適当な較正標準及び品質管理試料を用い、試料及び重水素内部標準で二重測定として、European Medicines Agencyの生物分析用ガイドラインに従って実施した。
結果を図5に示しているが、群A、B及びCは第一の動物試験のもので、D及びEは第二の動物試験のものである。
肝臓をPFA中に固定し、その後、パラフィンに包埋して、スライドガラスに載せて分析した。肝臓切片を、GCH1特異性抗体を使用してGCH1発現について分析した。有用なGCH1特異性抗体は、市販されており、Oxford, UK所在のSerotecのマウスIgG MCA3138Zなどがあり、それは1:2000 AbDで用いられ得る。
UK。第一の動物試験で得られた結果を、図4aに示す。形質導入は、1%未満であると決定された。第二の動物試験で得られた結果を、図4bに示す。形質導入は、約25%未満であると決定された。
THの発現は、Pel Freez及びAbcamにより製造されたものなどの複数の抗チロシンヒドロキシラーゼ抗体を用いて決定され得る。IHCに有用な希釈:
Pel Freez抗チロシンヒドロキシラーゼ・ウサギポリクローナル抗体 1:750
Abcam抗チロシンヒドロキシラーゼ・ウサギモノクローナル[EP1532Y] 1:1000
Pel Freez抗チロシンヒドロキシラーゼ・ウサギポリクローナル抗体 1:750
Abcam抗チロシンヒドロキシラーゼ・ウサギモノクローナル[EP1532Y] 1:1000
肝臓切片はまた、標準的手順を利用してヘマトキシリン及びエオジンで染色した。ヘマトキシリン及びエオジン染色では、組織損傷又は白血球浸潤の兆候は示されていない(図6参照)。
結論
第一の動物試験では、低用量のベクター(7.02×1010vg/マウス)が投与された。肝臓免疫組織化学的検査により示された通り、これにより1%未満の形質導入が得られた(図4a参照)。第二の動物試験では、高用量のベクター(3.6×1012vg/マウス)が投与され、形質導入が著しく高くなり、即ち約25%であった(図4b参照)。Hiroyuki Nakai et al J. Virol. 2005, 79(1):214では、70%を超える形質導入を実現するためには、AAV8ベクターの用量(vg/マウス)が2E12を超える必要があることが示唆されている。これと一致して、高い用量ほど、高い形質導入をもたらした。
第一の動物試験では、低用量のベクター(7.02×1010vg/マウス)が投与された。肝臓免疫組織化学的検査により示された通り、これにより1%未満の形質導入が得られた(図4a参照)。第二の動物試験では、高用量のベクター(3.6×1012vg/マウス)が投与され、形質導入が著しく高くなり、即ち約25%であった(図4b参照)。Hiroyuki Nakai et al J. Virol. 2005, 79(1):214では、70%を超える形質導入を実現するためには、AAV8ベクターの用量(vg/マウス)が2E12を超える必要があることが示唆されている。これと一致して、高い用量ほど、高い形質導入をもたらした。
HLPは、LP1と等しい強さの短い肝特異性プロモーターである(McIntosh J et al, Blood. 2013 Apr 25;121(17):3335-44)。L−DOPAアッセイでの内部対照から、動物試験1及び2を通して一致した感受性が確認された。
図5に示される通り、第一の動物試験での群2及び3のマウスにおける全身L−DOPAレベル(それぞれB及びCで表される)は、対照のレベルよりもわずかに高い。しかし、第二の動物試験での群1及び2の両群のマウスにおける全身L−DOPAレベル(それぞれD及びEで表される)は、対照よりも著しく高かった。2つの試験で観察された全身L−DOPAレベルの差は、異なる形質導入効率を生じた用量差が原因であると考えられる。
さらなる試験では、2又は3用量のベンセラジド及びエンタカポン又はトルカポンを投与し、その8時間後にL−DOPAアッセイ用に血液を採取して、血漿を抗酸化剤(水中の25%w/vメタ重亜硫酸ナトリウム)の存在下で貯蔵した後、アッセイした。
実施例3:ベクターの合成
一連のベクターを合成して、末梢組織にトランスフェクト及び形質導入し、L−dopaを一定速度で末梢循環に分泌させ、脳血液関門の通過を可能にし、ドパミン合成のプロドラッグとしての使用を可能にする。
一連のベクターを合成して、末梢組織にトランスフェクト及び形質導入し、L−dopaを一定速度で末梢循環に分泌させ、脳血液関門の通過を可能にし、ドパミン合成のプロドラッグとしての使用を可能にする。
これらは、以下の構成又はエレメントでのベクターを包含する:
・ 該ベクターは、ヒトチロシンヒドロキシラーゼアイソフォームをコードする核酸配列を含み、該核酸配列は、自己相補性ゲノムとして構成されている。
・ 一実施形態において、該核酸配列は、機能的酵素(配列番号:15)又は(配列番号:40)の約160のN末端アミノ酸が欠如したN末端トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ酵素をコードするようにトランケートされている。該N末端トランケート型酵素は機能的であるが、該酵素により触媒される反応の生成物によるフィードバック阻害を受けにくい。したがって所望のL−DOPA生成物の治療有効レベルまでの生成増加が実現される。
・ 一実施形態において、該構築物は、自己相補性ゲノムを使用しない。
・ ベクター構築物は、肝臓及び筋肉を標的とする種々のAAVセロタイプで生成されている。これらは、肝臓ではセロタイプ8、5、2及び7が、筋肉では5、1、6及び2がある。
・ ベクター構築物には、肝臓用のLP1など、種々の組織特異性プロモーターがある。
・ モデルベクター配列は、Nathwaniらによる論文(添付)からの以下の添付により提供される。本発明者らのベクターは、NathwaniらのFactor IXゲノムと類似の配列を有するが、FIXコードの代わりに挿入された自己相補性THコードを含む。
・ 該ベクターは、ヒトチロシンヒドロキシラーゼアイソフォームをコードする核酸配列を含み、該核酸配列は、自己相補性ゲノムとして構成されている。
・ 一実施形態において、該核酸配列は、機能的酵素(配列番号:15)又は(配列番号:40)の約160のN末端アミノ酸が欠如したN末端トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ酵素をコードするようにトランケートされている。該N末端トランケート型酵素は機能的であるが、該酵素により触媒される反応の生成物によるフィードバック阻害を受けにくい。したがって所望のL−DOPA生成物の治療有効レベルまでの生成増加が実現される。
・ 一実施形態において、該構築物は、自己相補性ゲノムを使用しない。
・ ベクター構築物は、肝臓及び筋肉を標的とする種々のAAVセロタイプで生成されている。これらは、肝臓ではセロタイプ8、5、2及び7が、筋肉では5、1、6及び2がある。
・ ベクター構築物には、肝臓用のLP1など、種々の組織特異性プロモーターがある。
・ モデルベクター配列は、Nathwaniらによる論文(添付)からの以下の添付により提供される。本発明者らのベクターは、NathwaniらのFactor IXゲノムと類似の配列を有するが、FIXコードの代わりに挿入された自己相補性THコードを含む。
実施例4:肝臓におけるGCH及びTHの発現
1日目に、マウスはいずれかを受ける:0.15mlのバイシストロン性ベクター調製物(ssAAV2/8−LP1−GCH1−LP1−トランケート型TH)3.60E+12vg/マウスのボーラス静脈内(尾静脈)注射(この調製物は相同組換えにより形成されたモノシストロン性ssLP1−tTHを一定割合、含む);0.15mlビヒクル調製物のボーラス静脈内(尾静脈)注射;又は10mg/kg経口L−DOPA。
1日目に、マウスはいずれかを受ける:0.15mlのバイシストロン性ベクター調製物(ssAAV2/8−LP1−GCH1−LP1−トランケート型TH)3.60E+12vg/マウスのボーラス静脈内(尾静脈)注射(この調製物は相同組換えにより形成されたモノシストロン性ssLP1−tTHを一定割合、含む);0.15mlビヒクル調製物のボーラス静脈内(尾静脈)注射;又は10mg/kg経口L−DOPA。
実施例3に記載された通り、マウスを10〜15日間観察した後、殺処分して、血漿を採取する。
肝臓におけるGCH1及びTHの発現の分析を、qPCRにより実施する。
免疫組織化学的分析を、実施例3に記載された通り実施し、バイシストロン性ベクターを受けたマウスから得られた肝臓切片中にGCH1の発現が示される。GCH1の発現は、ベクタートランスフェクションのマーカーとして用いられ得る。
ウェスタンブロット分析を実施して、GCH1がベクターのボーラス静脈内注射を受けたマウスの肝臓のみで発現されることが示される。
実施例5:肝臓におけるL−DOPAの合成
EDTA血漿中のタンパク質を0.4M過塩素酸で沈殿させることにより、L−DOPAレベルを該血漿中で測定する。遠心分離により沈殿したタンパク質を除去した後、過塩素酸層の一部を96ウェルプレートに移して、0.1%ギ酸で希釈する。L−DOPA(I)及びその安定した同位体標識内部標準L−DOPA−d3(II)を、LC−MS/MSにより分析する。
EDTA血漿中のタンパク質を0.4M過塩素酸で沈殿させることにより、L−DOPAレベルを該血漿中で測定する。遠心分離により沈殿したタンパク質を除去した後、過塩素酸層の一部を96ウェルプレートに移して、0.1%ギ酸で希釈する。L−DOPA(I)及びその安定した同位体標識内部標準L−DOPA−d3(II)を、LC−MS/MSにより分析する。
L−DOPAは、血漿中では不安定であるため、L−DOPAを含有する血漿は全て、1%メタ重亜硫酸ナトリウムの添加により安定化させて、公称温度−80℃で凍結貯蔵する。較正標準を、0(ブランク)、0.020、0.050、0.100、0.250、1.00、2.50、5.00及び10.0μg/mlで調製し、品質管理試料(QC)を、0.060、0.800及び8.00μg/mlで調製する。
この分析は、Agilent 1100シリーズバイナリーポンプ及びCTC Analytics(商標)CTC HTS-xt PALサンプラーを用い、ACE AQ 50mm×3mm液体クロマトグラフィーカラムでの0.1%ギ酸・アセトニトリル勾配を利用して実施する。質量分析は、TurboIonspray(商標)イオン源を取り付けられたApplied Biosystems(商標)API4000を使用して実施する。L−DOPA及びL−DOPA−d3についてモニタリングする複数の反応イオンは、それぞれm/z 198.2→152.1及び201.2→155.1であった。検量線を、1/×2で加重された線形回帰を利用して適合させる。
実施例6:スクリーニング
・ 本明細書の先に記載された通り調製された各ベクターを、1つのマウス群(1群あたりおよそ6匹)の尾静脈又は後脚の筋肉塊に注射する。マウスを、投与後2〜6週間観察する。末梢血を採取して、L−dopaについてアッセイする。
・ L−dopa合成に必要な補因子を提供するために、テトラヒドロビオプテリン(経口又は腹腔内)、又は肝臓若しくは筋肉内でGCH1及び/若しくはPTPS産生を形質導入するAAVベクターの同時投与を受ける。
・ 動物は、L−DOPAの異化を制限するために、全身投与される(経口又は腹腔内)デカルボキシラーゼ阻害剤(例えば、ベンセラジン)及びカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤を受ける。これらを投与し、最短で24時間後に試料を採取して、末梢L−DOPAレベルを評定する。
・ 対照群の動物を、ベクターの注射を行わないこと以外が同じ手法で処置する。この群を、ベクター処置動物からのL−DOPAレベルを比較する対照群とする。
・ 異なる比率のTH、GCH1及びPTPSを発現するモノシストロン性、バイシストロン性又はトリシストロン性ベクター、プラスミド又は発現系を比較して、最適なL−DOPA産生を実現することができる。
・ 異なる比率のベクター(それぞれ1つ又は複数の遺伝子を発現する)を比較して、最適なL−DOPA産生を実現することができる。
・ 本明細書の先に記載された通り調製された各ベクターを、1つのマウス群(1群あたりおよそ6匹)の尾静脈又は後脚の筋肉塊に注射する。マウスを、投与後2〜6週間観察する。末梢血を採取して、L−dopaについてアッセイする。
・ L−dopa合成に必要な補因子を提供するために、テトラヒドロビオプテリン(経口又は腹腔内)、又は肝臓若しくは筋肉内でGCH1及び/若しくはPTPS産生を形質導入するAAVベクターの同時投与を受ける。
・ 動物は、L−DOPAの異化を制限するために、全身投与される(経口又は腹腔内)デカルボキシラーゼ阻害剤(例えば、ベンセラジン)及びカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤を受ける。これらを投与し、最短で24時間後に試料を採取して、末梢L−DOPAレベルを評定する。
・ 対照群の動物を、ベクターの注射を行わないこと以外が同じ手法で処置する。この群を、ベクター処置動物からのL−DOPAレベルを比較する対照群とする。
・ 異なる比率のTH、GCH1及びPTPSを発現するモノシストロン性、バイシストロン性又はトリシストロン性ベクター、プラスミド又は発現系を比較して、最適なL−DOPA産生を実現することができる。
・ 異なる比率のベクター(それぞれ1つ又は複数の遺伝子を発現する)を比較して、最適なL−DOPA産生を実現することができる。
実施例7:前臨床試験
・ 最高の末梢L−dopaレベルを生成するベクターを、げっ歯類及び非ヒト霊長類における急性及び慢性試験でテストして、治療関連レベルでのL−dopaの持続的分泌を実証し、許容し得る耐容性及び安全性を実証する。
・ 急性試験では、ベクターをげっ歯類及び非ヒト霊長類の筋肉内又は静脈内へ(末梢静脈又は直接門脈へ)投与する。動物を、注射後28日間観察する。観察には、体重、摂食、任意の臨床徴候又は症状の観察、全血球計数、尿素及び電解質、肝機能検査、並びにクレアチンホスホキナーゼの測定がある。剖検後に、組織を任意の組織病理学的異常の証拠について検査して、ベクターの生体分布を評定する。
・ 慢性試験では、ベクターをげっ歯類及び非ヒト霊長類の筋肉内又は静脈内へ(末梢静脈又は直接門脈へ)投与する。動物を、注射後6〜12ヶ月観察する。観察には、体重、摂食、任意の臨床徴候又は症状の観察、全血球計数、尿素及び電解質、肝機能検査、並びにクレアチンホスホキナーゼの測定がある。剖検後に、組織を任意の組織病理学的異常の証拠について検査して、ベクターの生体分布を評定する。
・ 追加の前臨床試験には、変異原性試験、発癌性試験、及び臨床試験を可能にするのに必要となる他の試験(例えば、心臓QT間隔に及ぼすベクター又はベクター生成物の影響の評定)が含まれる。
・ 最高の末梢L−dopaレベルを生成するベクターを、げっ歯類及び非ヒト霊長類における急性及び慢性試験でテストして、治療関連レベルでのL−dopaの持続的分泌を実証し、許容し得る耐容性及び安全性を実証する。
・ 急性試験では、ベクターをげっ歯類及び非ヒト霊長類の筋肉内又は静脈内へ(末梢静脈又は直接門脈へ)投与する。動物を、注射後28日間観察する。観察には、体重、摂食、任意の臨床徴候又は症状の観察、全血球計数、尿素及び電解質、肝機能検査、並びにクレアチンホスホキナーゼの測定がある。剖検後に、組織を任意の組織病理学的異常の証拠について検査して、ベクターの生体分布を評定する。
・ 慢性試験では、ベクターをげっ歯類及び非ヒト霊長類の筋肉内又は静脈内へ(末梢静脈又は直接門脈へ)投与する。動物を、注射後6〜12ヶ月観察する。観察には、体重、摂食、任意の臨床徴候又は症状の観察、全血球計数、尿素及び電解質、肝機能検査、並びにクレアチンホスホキナーゼの測定がある。剖検後に、組織を任意の組織病理学的異常の証拠について検査して、ベクターの生体分布を評定する。
・ 追加の前臨床試験には、変異原性試験、発癌性試験、及び臨床試験を可能にするのに必要となる他の試験(例えば、心臓QT間隔に及ぼすベクター又はベクター生成物の影響の評定)が含まれる。
実施例8:臨床試験
・ 上記試験の十分な結果が得られたら、IM、IV、門脈への直接の輸液、又は分離式肢灌流のいずれかを利用して、最適な性能のベクターに基づいて臨床試験を設計する。
・ 臨床試験には、(経口又は腹腔内の)デカルボキシラーゼ阻害剤(例えば、ベンセラジン)及びカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤の同時投与を行った処置患者、及び行わなかった処置患者、並びにBH4又は経口L−DOPAの投与を行わなかった処置患者におけるL−DOPAの薬物動態の詳細な評定が含まれる。
・ 臨床試験では、急性L−DOPA生成(ベクター注射のおよそ4〜8週後)及びベクター注射の3、6、12、18及び24ヶ月後などの時点での慢性L−DOPA生成を評定する。
・ 臨床試験では、パーキンソン病の処置への補助剤としての本発明の急性及び慢性安全性及び有効性の評定が含まれる。
・ 上記試験の十分な結果が得られたら、IM、IV、門脈への直接の輸液、又は分離式肢灌流のいずれかを利用して、最適な性能のベクターに基づいて臨床試験を設計する。
・ 臨床試験には、(経口又は腹腔内の)デカルボキシラーゼ阻害剤(例えば、ベンセラジン)及びカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤の同時投与を行った処置患者、及び行わなかった処置患者、並びにBH4又は経口L−DOPAの投与を行わなかった処置患者におけるL−DOPAの薬物動態の詳細な評定が含まれる。
・ 臨床試験では、急性L−DOPA生成(ベクター注射のおよそ4〜8週後)及びベクター注射の3、6、12、18及び24ヶ月後などの時点での慢性L−DOPA生成を評定する。
・ 臨床試験では、パーキンソン病の処置への補助剤としての本発明の急性及び慢性安全性及び有効性の評定が含まれる。
実施例9:配列の概要
配列番号:1:GTPシクロヒドロラーゼ1(ヒト)
配列番号:2:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−2(ヒト)
配列番号:3:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−3(ヒト)
配列番号:4:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−4(ヒト)
配列番号:5:GTPシクロヒドロラーゼ1(ラット)
配列番号:6:GTPシクロヒドロラーゼ1(マウス)
配列番号:7:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ヒト)
配列番号:8:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
配列番号:9:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
配列番号:10:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
配列番号:11:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
配列番号:12:トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ、TH(触媒ドメインに対応;ヒト)
配列番号:13:ser40で突然変異したTH
配列番号:14:配列番号:14:ser19+ser40で突然変異したTH
配列番号:15:配列番号:15:Ser19+Ser31+Ser40で突然変異したTH
配列番号:16:配列番号:16:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ラット)
配列番号:17:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(マウス)
配列番号:18:アデノ随伴ウイルス2左末端ヌクレオチド配列
配列番号:19:アデノ随伴ウイルス2右末端ヌクレオチド配列
配列番号:20:ホモサピエンスGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)、転写産物変異体1
配列番号:21:シミアンウイルス40初期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
配列番号:22:シミアンウイルス40後期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
配列番号:23:ホモサピエンスチロシンヒドロキシラーゼ(TH)、転写産物変異体2ヌクレオチド配列
配列番号:24:トランケート型TH、触媒ドメインをコードするヌクレオチド配列
配列番号:25:ser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
配列番号:26:ser19及びser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
配列番号:27:ser19、ser31及びser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
配列番号:28:ウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
配列番号:29:突然変異したウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
配列番号:30:GCH−1をコードするヌクレオチド配列
配列番号:31:pAA011−scAAV−HLP−GCH1
配列番号:32:pAA016−scAAV−HLP−tTH
配列番号:33:pAAo19−scAAV−LP1−GCH1−LP1−tTH
配列番号:34:pAA010 scAAV−LP1−tTH
配列番号:35:pAA009 scAAV−LP1−GCH1
配列番号:36:scAAV−LP1−hFIXco
配列番号:37:pAV HLP FVIII V3 kan
配列番号:38:ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)
配列番号:39:肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)
配列番号:40:tTH=トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ
配列番号:41:PTPS=6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ
配列番号:42:プライマーAA16
配列番号:43:プライマーAA17
配列番号:44:プライマーAA33
配列番号:45:プライマーAA34
配列番号:46:プライマーAA43
配列番号:47:プライマーAA44
配列番号:48:プライマーAA57
配列番号:49:プライマーAA67
配列番号:50:プライマーAA68
配列番号:51:プライマーRmiscTHext2
配列番号:52:モノシストロン性送達プラスミドTH
配列番号:53:バイシストロン性送達プラスミドGCH1 PTPS
配列番号:1:GTPシクロヒドロラーゼ1(ヒト)
>sp|P30793|GCH1_ヒトGTPシクロヒドロラーゼ1 OS=ホモサピエンス GN=GCH1 PE=1 SV=1
EC=3.5.4.16
別の名称:
GTPシクロヒドロラーゼ1
ショートネーム=GTP−CH−I又はGCH−1又はGCH1又はGCH1
生物体:ホモサピエンス(ヒト)
http://www.uniprot.org/uniprot/P30793
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEATHMCMVMRGVQKMNSKTVTSTMLGVFREDPKTREEFLTLIRS
配列番号:2:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−2(ヒト)
>sp|P30793−2|GCH1_GTPシクロヒドロラーゼ1のヒトアイソフォームGCH−2 OS=ホモサピエンス GN=GCH1
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEATSAEP
配列番号:3:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−3(ヒト)
>sp|P30793−3|GCH1_GTPシクロヒドロラーゼ1のヒトアイソフォームGCH−3 OS=ホモサピエンス GN=GCH1
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEAT
配列番号:4:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−4(ヒト)
>sp|P30793−4|GCH1_GTPシクロヒドロラーゼ1のヒトアイソフォームGCH−4 OS=ホモサピエンス GN=GCH1
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEATKSNKYNKGLSPLLSSCHLFVAILK
配列番号:5:GTPシクロヒドロラーゼ1(ラット)
>sp|P22288|GCH1_ラットGTPシクロヒドロラーゼ1 OS=ドブネズミ GN=Gch1 PE=1 SV=1
MEKPRGVRCTNGFPERELPRPGASRPAEKSRPPEAKGAQPADAWKAGRPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILRSLGEDPQRQGLLKTPWRAATAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGRVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALQPAGVGVVIEATHMCMVMRGVQKMNSKTVTSTMLGVFREDPKTREEFLTLIRS
配列番号:6:GTPシクロヒドロラーゼ1(マウス)
>sp|Q05915|GCH1_マウスGTPシクロヒドロラーゼ1 OS=ハツカネズミ GN=Gch1 PE=2 SV=1
MEKPRGVRCTNGFSERELPRPGASPPAEKSRPPEAKGAQPADAWKAGRHRSEEENQVNLPKLAAAYSSILLSLGEDPQRQGLLKTPWRAATAMQYFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGRVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALQPAGVGVVIEATHMCMVMRGVQKMNSKTVTSTMLGVFREDPKTREEFLTLIRS
配列番号:7:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ヒト)
EC=1.14.16.2
別の名称:チロシン3−モノオキシゲナーゼ又はチロシン3−ヒドロキシラーゼ又はチロシンヒドロキシラーゼ
ショートネーム=TH
生物体:ホモサピエンス(ヒト)
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAI
配列番号:8:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
>sp|P07101|TY3H_ヒトチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ホモサピエンス GN=TH PE=1 SV=5
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMVRGQGAPGPSLTGSPWPGTAAPAASYTPTPRSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:9:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
>tr|Q2M3b4|Q2M3b4_ヒトチロシンヒドロキシラーゼ OS=ホモサピエンス GN=TH PE=2 SV=1
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAMLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:10:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
>tr|b7ZL73|b7ZL73_ヒトTHタンパク質 OS=ホモサピエンス GN=TH PE=2 SV=1
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMVRGQSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAMLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADHTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:11:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
>sp|P07101|TY3H_ヒトチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ホモサピエンス GN=TH PE=1 SV=5
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMVRGQGAPGPSLTGSPWPGTAAPAASYTPTPRSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:12:トランケート型TH(触媒ドメインに対応)
MPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:13:ser40で突然変異したTH
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMSPRFIGRRQELIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:14:ser19+ser40で突然変異したTH
MPTPDATTPQAKGFRRAVEELDAKQAEAIMSPRFIGRRQELIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:15:ser19+ser31+ser40で突然変異したTH
MPTPDATTPQAKGFRRAVEELDAKQAEAIMEPRFIGRRQELIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:16:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ラット)
>sp|P04177|TY3H_ラットチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ドブネズミ GN=Th PE=1 SV=3
MPTPSAPSPQPKGFRRAVSEQDAKQAEAVTSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAAAAAAAAVASSEPGNPLEAVVFEERDGNAVLNLLFSLRGTKPSSLSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPLAGSPHLEYFVRFEVPSGDLAALLSSVRRVSDDVRSAREDKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYKHGEPIPHVEYTAEEIATWKEVYVTLKGLYATHACREHLEGFQLLERYCGYREDSIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTVYWFTVEFGLCKQNGELKAYGAGLLSSYGELLHSLSEEPEVRAFDPDTAAVQPYQDQTYQPVYFVSESFNDAKDKLRNYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPHTIQRSLEGVQDELHTLAHALSAIS
配列番号:17:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(マウス)
>sp|P24529|TY3H_マウスチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ハツカネズミ GN=Th PE=1 SV=3
MPTPSASSPQPKGFRRAVSEQDTKQAEAVTSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAAAAAAAAVASAEPGNPLEAVVFEERDGNAVLNLLFSLRGTKPSSLSRALKVFETFEAKIHHLETRPAQRPLAGSPHLEYFVRFEVPSGDLAALLSSVRRVSDDVRSAREDKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQAYRQRRKLIAEIAFQYKQGEPIPHVEYTKEEIATWKEVYATLKGLYATHACREHLEAFQLLERYCGYREDSIPQLEDVSHFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTVYWFTVEFGLCKQNGELKAYGAGLLSSYGELLHSLSEEPEVRAFDPDTAAVQPYQDQTYQPVYFVSESFSDAKDKLRNYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPHTIRRSLEGVQDELHTLTQALSAIS
配列番号:18:アデノ随伴ウイルス2左末端ヌクレオチド配列
ttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcct
配列番号:19:アデノ随伴ウイルス2右末端ヌクレオチド配列
aggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaa
配列番号:20:ホモサピエンスGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)、転写産物変異体1
ATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAA
配列番号:21:シミアンウイルス40初期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
TTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAA
配列番号:22:シミアンウイルス40後期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
CAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTT
配列番号:23:ホモサピエンスチロシンヒドロキシラーゼ(TH)、転写産物変異体2ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGTCTGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGTCCCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGAGCCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGG
配列番号:24:トランケート型TH(触媒ドメインをコード)、ヌクレオチド配列
ATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAA
配列番号:25:ser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGTCTGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGTCCCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGGAGCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGC
配列番号:26:ser19及びser40として突然変異したTH、ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGGAGGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGTCCCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGGAGCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGC
配列番号:27:ser19、ser31及びser40として突然変異したTH、ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGGAGGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGGAGCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGGAGCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGC
配列番号:28:ウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
CGTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCT
配列番号:29:突然変異したウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
CGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCT
配列番号:30 GCH1ヌクレオチド配列
ATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGA
配列番号:31 pAA011−scAAV−HLP−GCH1:
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTCTAGATGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCGCTAGCGAATTCTAGCATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAATGCATCCCCATCGATGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAGTCGACCGCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:32:pAA016−scAAV−HLP−tTH:
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCGCTAGCTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCATTCAAGCTCGTAGCAAGGATCCACCGGTCACCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAACTAGTGGATCCGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCTCGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACTTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:33:pAAo19−scAAV−LP1−GCH1−LP1−tTH:
CAGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACGTAGCCATGCTCTAGAgctgagcCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAcctgcaggATTCAAGCTGCTAGCAAGGATCCACCGGTAACATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAATGCATCCCCATCGATGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAGTCGACCAGATCTGACAAGGTCCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGATTCGAAATTCAAGCTGCTAGCAAGGATCCACCGGTCACCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAACTAGTGGATCCGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCTCGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACTTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGCATGCTCTAGAGCATGGCTACGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGAATTCCAGACGATTGAGCGTCAAAATGTAGGTATTTCCATGAGCGTTTTTCCTGTTGCAATGGCTGGCGGTAATATTGTTCTGGATATTACCAGCAAGGCCGATAGTTTGAGTTCTTCTACTCAGGCAAGTGATGTTATTACTAATCAAAGAAGTATTGCGACAACGGTTAATTTGCGTGATGGACAGACTCTTTTACTCGGTGGCCTCACTGATTATAAAAACACTTCTCAGGATTCTGGCGTACCGTTCCTGTCTAAAATCCCTTTAATCGGCCTCCTGTTTAGCTCCCGCTCTGATTCTAACGAGGAAAGCACGTTATACGTGCTCGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTAAATATTTGCTTATACAATCTTCCTGTTTTTGGGGCTTTTCTGATTATCAACCGGGGTACATATGATTGACATGCTAGTTTTACGATTACCGTTCATCGATTCTCTTGTTTGCTCCAGACTCTCAGGCAATGACCTGATAGCCTTTGTAGAGACCTCTCAAAAATAGCTACCCTCTCCGGCATGAATTTATCAGCTAGAACGGTTGAATATCATATTGATGGTGATTTGACTGTCTCCGGCCTTTCTCACCCGTTTGAATCTTTACCTACACATTACTCAGGCATTGCATTTAAAATATATGAGGGTTCTAAAAATTTTTATCCTTGCGTTGAAATAAAGGCTTCTCCCGCAAAAGTATTACAGGGTCATAATGTTTTTGGTACAACCGATTTAGCTTTATGCTCTGAGGCTTTATTGCTTAATTTTGCTAATTCTTTGCCTTGCCTGTATGATTTATTGGATGTTGGAATTCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGC
配列番号:34:pAA010 scAAV−LP1−tTH
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAATTCTAGCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAACTAGTGGATCCGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCTCGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACTTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:35:pAA009 scAAV−LP1−GCH1
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAATTctagcATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAATGCATCCCCATCGATGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAGTCGACCgCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:36:scAAV−LP1−hFIXco
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAATTCTAGACCACCATGCAGAGGGTGAACATGATCATGGCTGAGAGCCCTGGCCTGATCACCATCTGCCTGCTGGGCTACCTGCTGTCTGCTGAGTGCACTGTGTTCCTGGACCATGAGAATGCCAACAAGATCCTGAACAGGCCCAAGAGATACAACTCTGGCAAGCTGGAGGAGTTTGTGCAGGGCAACCTGGAGAGGGAGTGCATGGAGGAGAAGTGCAGCTTTGAGGAGGCCAGGGAGGTGTTTGAGAACACTGAGAGGACCACTGAGTTCTGGAAGCAGTATGTGGATGGGGACCAGTGTGAGAGCAACCCCTGCCTGAATGGGGGCAGCTGCAAGGATGACATCAACAGCTATGAGTGCTGGTGCCCCTTTGGCTTTGAGGGCAAGAACTGTGAGCTGGATGTGACCTGCAACATCAAGAATGGCAGATGTGAGCAGTTCTGCAAGAACTCTGCTGACAACAAGGTGGTGTGCAGCTGCACTGAGGGCTACAGGCTGGCTGAGAACCAGAAGAGCTGTGAGCCTGCTGTGCCATTCCCATGTGGCAGAGTGTCTGTGAGCCAGACCAGCAAGCTGACCAGGGCTGAGGCTGTGTTCCCTGATGTGGACTATGTGAACAGCACTGAGGCTGAAACCATCCTGGACAACATCACCCAGAGCACCCAGAGCTTCAATGACTTCACCAGGGTGGTGGGGGGGGAGGATGCCAAGCCTGGCCAGTTCCCCTGGCAAGTGGTGCTGAATGGCAAGGTGGATGCCTTCTGTGGGGGCAGCATTGTGAATGAGAAGTGGATTGTGACTGCTGCCCACTGTGTGGAGACTGGGGTGAAGATCACTGTGGTGGCTGGGGAGCACAACATTGAGGAGACTGAGCACACTGAGCAGAAGAGGAATGTGATCAGGATCATCCCCCACCACAACTACAATGCTGCCATCAACAAGTACAACCATGACATTGCCCTGCTGGAGCTGGATGAGCCCCTGGTGCTGAACAGCTATGTGACCCCCATCTGCATTGCTGACAAGGAGTACACCAACATCTTCCTGAAGTTTGGCTCTGGCTATGTGTCTGGCTGGGGCAGGGTGTTCCACAAGGGCAGGTCTGCCCTGGTGCTGCAGTACCTGAGGGTGCCCCTGGTGGACAGGGCCACCTGCCTGAGGAGCACCAAGTTCACCATCTACAACAACATGTTCTGTGCTGGCTTCCATGAGGGGGGCAGGGACAGCTGCCAGGGGGACTCTGGGGGCCCCCATGTGACTGAGGTGGAGGGCACCAGCTTCCTGACTGGCATCATCAGCTGGGGGGAGGAGTGTGCCATGAAGGGCAAGTATGGCATCTACACCAAAGTCTCCAGATATGTGAACTGGATCAAGGAGAAGACCAAGCTGACCTGACTCGATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAACTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:37:pAV HLP FVIII V3 kan
AGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTCCCGGGGGGATCTTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCGGAGGGGTGGAGTCGTGACGTGAATTACGTCATAGGGTTAGGGAGGTCGTATACTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCGCGGCCGCCACCATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGATGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAATGCCACTAATGTGTCTAACAACAGCAACACCAGCAATGACAGCAATGTGTCTCCCCCAGTGCTGAAGAGGCACCAGAGGGAGATCACCAGGACCACCCTGCAGTCTGACCAGGAGGAGATTGACTATGATGACACCATCTCTGTGGAGATGAAGAAGGAGGACTTTGACATCTACGACGAGGACGAGAACCAGAGCCCCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGAAACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTGCAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGATCGCGAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTGATGCAGCCCAAGCTGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAAAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCATCCATCACACTGGCGGCCGCTCGAGCATGCATCTAGAGGGCCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATTCAGGGCGCAAGGGCTGCTAAAGGAAGCGGAACACGTAGAAAGCCAGTCCGCAGAAACGGTGCTGACCCCGGATGAATGTCAGCTACTGGGCTATCTGGACAAGGGAAAACGCAAGCGCAAAGAGAAAGCAGGTAGCTTGCAGTGGGCTTACATGGCGATAGCTAGACTGGGCGGTTTTATGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGTAAGGTTGGGAAGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAGGGGATCAAGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCCCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAG
配列番号:38:ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)
TGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATC
配列番号:39:肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)
CCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGA
配列番号:40:tTH=トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ
MSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:41:PTPS=6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ
>ENA|BAA04959|BAA04959.1 ホモサピエンス(ヒト) 6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ
ATGAGCACGGAAGGTGGTGGCCGTCGCTGCCAGGCACAAGTGTCCCGCCGCATCTCCTTCAGCGCGAGCCACCGATTGTACAGTAAATTTCTAAGTGATGAAGAAAACTTGAAACTGTTTGGGAAATGCAACAATCCAAATGGCCATGGGCACAATTATAAAGTTGTGGTGACAGTACATGGAGAGATTGACCCTGCTACGGGAATGGTTATGAATCTGGCTGATCTCAAAAAATATATGGAGGAGGCGATTATGCAGCCCCTTGATCATAAGAATCTGGATATGGATGTGCCATACTTTGCAGATGTGGTGAGCACGACTGAAAATGTAGCTGTTTATATCTGGGACAACCTCCAGAAAGTTCTTCCTGTAGGAGTTCTTTATAAAGTAAAAGTATACGAAACTGACAATAATATTGTGGTTTATAAAGGAGAATAG
配列番号:42:プライマーAA16
ccaagctagcATGGAGAAGGGCCCTGTG
配列番号:43:プライマーAA17
ccaagctagcGGTCGACTAAAAAACCTCC
配列番号:44:プライマーAA33
CCAAgctagcATGAGCCCCGCGGGGCCCAAG
配列番号:45:プライマーAA34
CCAAgctagcGGGGGATCTTCGATGCTAGAC
配列番号:46:プライマーAA43
CCAATGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTCTAGATGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC
配列番号:47:プライマーAA44
CCAAGAATTCGCTAGCGATTCACTGTCCCAGGTCAGTG
配列番号:48:プライマーAA57
CCAAGCTAGCTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC
配列番号:49:プライマーAA67
GATCCTTGCTACGAGCTTGAATGATTCACTGTCCCAGGTCAGT
配列番号:50:プライマーAA68
ACTGACCTGGGACAGTGAATCATTCAAGCTCGTAGCAAGGATC
配列番号:51:プライマーRmuscTHext2
AAAgctagcTTCGATGCTAGACGATCCAG
配列番号:52:MLF003noefgp
GCGATCGCGGCTCCCGACATCTTGGACCATTAGCTCCACAGGTATCTTCTTCCCTCTAGTGGTCATAACAGCAGCTTCAGCTACCTCTCAATTCAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTTAGAGGCCCCAAGGGGTTATGCTATCAATCGTTGCGTTACACACACAAAAAACCAACACACATCCATCTTCGATGGATAGCGATTTTATTATCTAACTGCTGATCGAGTGTAGCCAGATCTAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGCTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATCAGATCTTTGTCGATCCTACCATCCACTCGACACACCCGCCAGCTAGAGATCCCGGGACCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAAGACGCCACCTAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCCATCTTGACTGACTGAGATACAGCGTACCTTCAGCTCACAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATTGGCCCATCTCTATCGGTATCGTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGTGCCCCTCGGGCCGGATTGCTATCTACCGGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGGTCGTCAGCTATCCTGCAGGCGATCTCTCGATTTCGATCAAGACATTCCTTTAATGGTCTTTTCTGGACACCACTAGGGGTCAGAAGTAGTTCATCAAACTTTCTTCCCTCCCTAATCTCATTGGTTACCTTGGGCTATCGAAACTTAATTAACCAGTCAAGTCAGCTACTTGGCGAGATCGACTTGTCTGGGTTTCGACTACGCTCAGAATTGCGTCAGTCAAGTTCGATCTGGTCCTTGCTATTGCACCCGTTCTCCGATTACGAGTTTCATTTAAATCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCATTTAAATTTCCGAACTCTCCAAGGCCCTCGTCGGAAAATCTTCAAACCTTTCGTCCGATCCATCTTGCAGGCTACCTCTCGAACGAACTATCGCAAGTCTCTTGGCCGGCCTTGCGCCTTGGCTATTGCTTGGCAGCGCCTATCGCCAGGTATTACTCCAATCCCGAATATCCGAGATCGGGATCACCCGAGAGAAGTTCAACCTACATCCTCAATCCCGATCTATCCGAGATCCGAGGAATATCGAAATCGGGGCGCGCCTGGTGTACCGAGAACGATCCTCTCAGTGCGAGTCTCGACGATCCATATCGTTGCTTGGCAGTCAGCCAGTCGGAATCCAGCTTGGGACCCAGGAAGTCCAATCGTCAGATATTGTACTCAAGCCTGGTCACGGCAGCGTACCGATCTGTTTAAACCTAGATATTGATAGTCTGATCGGTCAACGTATAATCGAGTCCTAGCTTTTGCAAACATCTATCAAGAGACAGGATCAGCAGGAGGCTTTCGCATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCGCGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGCTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTATTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATTGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACCTTGCGTAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAGTTGATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACCGATTCTAGGTGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGATCCCGAATCGTTTAAACTCGACTCTGGCTCTATCGAATCTCCGTCGTTTCGAGCTTACGCGAACAGCCGTGGCGCTCATTTGCTCGTCGGGCATCGAATCTCGTCAGCTATCGTCAGCTTACCTTTTTGGCA
配列番号:53 MDL004
GCGATCGCGGCTCCCGACATCTTGGACCATTAGCTCCACAGGTATCTTCTTCCCTCTAGTGGTCATAACAGCAGCTTCAGCTACCTCTCAATTCAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTTAGAGGCCCCAAGGGGTTATGCTATCAATCGTTGCGTTACACACACAAAAAACCAACACACATCCATCTTCGATGGATAGCGATTTTATTATCTAACTGCTGATCGAGTGTAGCCAGATCTAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGCTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATCAGATCTTTGTCGATCCTACCATCCACTCGACACACCCGCCAGCAATATGGCCACAACCGCGGCCGTAGATCCCGGGACCATGGAGAAGCCGCGGGGAGTCAGGTGCACCAATGGGTTCTCCGAGCGGGAGCTGCCGCGGCCCGGGGCCAGCCCGCCTGCCGAGAAGTCCCGGCCGCCCGAGGCCAAGGGCGCACAGCCGGCCGACGCCTGGAAGGCAGGGCGGCACCGCAGCGAGGAGGAAAACCAGGTGAACCTCCCCAAACTGGCGGCTGCTTACTCGTCCATTCTGCTCTCGCTGGGCGAGGACCCCCAGCGGCAGGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCACCGCCATGCAGTACTTCACCAAGGGATACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTGAATGATGCTATATTTGATGAAGATCATGACGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGATATGTTCTCCATGTGTGAGCATCACCTTGTTCCATTTGTAGGAAGGGTCCATATTGGCTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGTCTCAGTAAACTTGCCAGGATTGTAGAAATCTACAGTAGACGACTACAAGTTCAAGAGCGCCTCACCAAACAGATTGCGGTGGCCATCACAGAAGCCTTGCAGCCTGCTGGCGTTGGAGTAGTGATTGAAGCGACACACATGTGCATGGTAATGCGAGGCGTGCAGAAAATGAACAGCAAGACTGTCACTAGCACCATGCTGGGCGTGTTCCGGGAAGACCCCAAGACTCGGGAGGAGTTCCTCACACTAATCAGGAGCTGAGACTATAGGGTGGGTATTATGTGTTCATCAACCATCCTAAAAATACCCGGTAAACAGGTGCAGCCCCAGATCTGGGCAGCAGGAGGGGGCAGTGGGAAGCTTAACGCGCCACGACTATAGGGTGGGTATTATGTGTTCATCAACCATCCTAAAAATACCCGGTAAACAGGTGCAGCCCCAGATCTGGGCAGCAGGAGGGGGCAGTGGGAAGCTTATCTAGTCTCGAGGTACCGAGCTCTTACGCGTGCTAGCTCGAGATCTGGATATCGACTATAGGGTGGGTATTATGTGTTCATCAACCATCCTAAAAATACCCGGTAAACAGGTGCAGCCCCAGATCTGGGCAGCAGGAGGGGGCAGTGGGTCTGTTCTATTTTTACCAGCCAGTTGCTGCTGGACACAGTTTTCATAGCCTCCCCTCGGCTCTGCCCCTCACAGTCTGCAGTCTACGGCGAGGCACAGGCCAGCCCAGCTCCACGAGGACTGAACAAGAAGCTTGATATCGAATTGGTACCATCGAGGAACTGAAAAACCAGAAAGTTAACTGGTAAGTTTAGTCTTTTTGTCTTTTATTTCAGGTCCCGGATCCGGTGGTGGTGCAAATCAAAGAACTGCTCCTCAGTGGATATCGCCTTTACTTCTAGGCCACCATGAGCGCGGCGGGTGACCTTCGTCGCCGCGCGCGACTGTCGCGCCTCGTGTCCTTCAGCGCGAGCCACCGGCTGCACAGCCCATCTCTGAGCGATGAAGAGAACTTAAGAGTGTTTGGGAAATGCAACAATCCGAATGGCCACGGGCACAACTATAAAGTTGTGGTGACAGTCCATGGAGAGATTGATCCTGTTACAGGAATGGTTATGAATTTGACCGACCTCAAAGAATACATGGAGGAGGCCATCATGAAGCCTCTTGATCACAAGAACCTGGACCTGGATGTGCCGTACTTTGCGGATGCTGTGAGCACGACAGAAAATGTAGCTGTCTACATCTGGGAAAGCCTCCAGAAACTTCTTCCAGTGGGAGCTCTTTATAAAGTAAAAGTGTTTGAAACCGACAACAACATCGTAGTCTATAAAGGAGAATAGTAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCCATCTTGACTGACTGAGATACAGCGTACCTTCAGCTCACAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATTGGCCCATCTCTATCGGTATCGTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGTGCCCCTCGGGCCGGATTGCTATCTACCGGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGGTCGTCAGCTATCCTGCAGGCGATCTCTCGATTTCGATCAAGACATTCCTTTAATGGTCTTTTCTGGACACCACTAGGGGTCAGAAGTAGTTCATCAAACTTTCTTCCCTCCCTAATCTCATTGGTTACCTTGGGCTATCGAAACTTAATTAACCAGTCAAGTCAGCTACTTGGCGAGATCGACTTGTCTGGGTTTCGACTACGCTCAGAATTGCGTCAGTCAAGTTCGATCTGGTCCTTGCTATTGCACCCGTTCTCCGATTACGAGTTTCATTTAAATCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCATTTAAATTTCCGAACTCTCCAAGGCCCTCGTCGGAAAATCTTCAAACCTTTCGTCCGATCCATCTTGCAGGCTACCTCTCGAACGAACTATCGCAAGTCTCTTGGCCGGCCTTGCGCCTTGGCTATTGCTTGGCAGCGCCTATCGCCAGGTATTACTCCAATCCCGAATATCCGAGATCGGGATCACCCGAGAGAAGTTCAACCTACATCCTCAATCCCGATCTATCCGAGATCCGAGGAATATCGAAATCGGGGCGCGCCTGGTGTACCGAGAACGATCCTCTCAGTGCGAGTCTCGACGATCCATATCGTTGCTTGGCAGTCAGCCAGTCGGAATCCAGCTTGGGACCCAGGAAGTCCAATCGTCAGATATTGTACTCAAGCCTGGTCACGGCAGCGTACCGATCTGTTTAAACCTAGATATTGATAGTCTGATCGGTCAACGTATAATCGAGTCCTAGCTTTTGCAAACATCTATCAAGAGACAGGATCAGCAGGAGGCTTTCGCATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCGCGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGCTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTATTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATTGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACCTTGCGTAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAGTTGATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACCGATTCTAGGTGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGATCCCGAATCGTTTAAACTCGACTCTGGCTCTATCGAATCTCCGTCGTTTCGAGCTTACGCGAACAGCCGTGGCGCTCATTTGCTCGTCGGGCATCGAATCTCGTCAGCTATCGTCAGCTTACCTTTTTGGCA
配列番号:1:GTPシクロヒドロラーゼ1(ヒト)
配列番号:2:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−2(ヒト)
配列番号:3:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−3(ヒト)
配列番号:4:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−4(ヒト)
配列番号:5:GTPシクロヒドロラーゼ1(ラット)
配列番号:6:GTPシクロヒドロラーゼ1(マウス)
配列番号:7:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ヒト)
配列番号:8:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
配列番号:9:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
配列番号:10:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
配列番号:11:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
配列番号:12:トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ、TH(触媒ドメインに対応;ヒト)
配列番号:13:ser40で突然変異したTH
配列番号:14:配列番号:14:ser19+ser40で突然変異したTH
配列番号:15:配列番号:15:Ser19+Ser31+Ser40で突然変異したTH
配列番号:16:配列番号:16:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ラット)
配列番号:17:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(マウス)
配列番号:18:アデノ随伴ウイルス2左末端ヌクレオチド配列
配列番号:19:アデノ随伴ウイルス2右末端ヌクレオチド配列
配列番号:20:ホモサピエンスGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)、転写産物変異体1
配列番号:21:シミアンウイルス40初期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
配列番号:22:シミアンウイルス40後期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
配列番号:23:ホモサピエンスチロシンヒドロキシラーゼ(TH)、転写産物変異体2ヌクレオチド配列
配列番号:24:トランケート型TH、触媒ドメインをコードするヌクレオチド配列
配列番号:25:ser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
配列番号:26:ser19及びser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
配列番号:27:ser19、ser31及びser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
配列番号:28:ウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
配列番号:29:突然変異したウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
配列番号:30:GCH−1をコードするヌクレオチド配列
配列番号:31:pAA011−scAAV−HLP−GCH1
配列番号:32:pAA016−scAAV−HLP−tTH
配列番号:33:pAAo19−scAAV−LP1−GCH1−LP1−tTH
配列番号:34:pAA010 scAAV−LP1−tTH
配列番号:35:pAA009 scAAV−LP1−GCH1
配列番号:36:scAAV−LP1−hFIXco
配列番号:37:pAV HLP FVIII V3 kan
配列番号:38:ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)
配列番号:39:肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)
配列番号:40:tTH=トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ
配列番号:41:PTPS=6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ
配列番号:42:プライマーAA16
配列番号:43:プライマーAA17
配列番号:44:プライマーAA33
配列番号:45:プライマーAA34
配列番号:46:プライマーAA43
配列番号:47:プライマーAA44
配列番号:48:プライマーAA57
配列番号:49:プライマーAA67
配列番号:50:プライマーAA68
配列番号:51:プライマーRmiscTHext2
配列番号:52:モノシストロン性送達プラスミドTH
配列番号:53:バイシストロン性送達プラスミドGCH1 PTPS
配列番号:1:GTPシクロヒドロラーゼ1(ヒト)
>sp|P30793|GCH1_ヒトGTPシクロヒドロラーゼ1 OS=ホモサピエンス GN=GCH1 PE=1 SV=1
EC=3.5.4.16
別の名称:
GTPシクロヒドロラーゼ1
ショートネーム=GTP−CH−I又はGCH−1又はGCH1又はGCH1
生物体:ホモサピエンス(ヒト)
http://www.uniprot.org/uniprot/P30793
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEATHMCMVMRGVQKMNSKTVTSTMLGVFREDPKTREEFLTLIRS
配列番号:2:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−2(ヒト)
>sp|P30793−2|GCH1_GTPシクロヒドロラーゼ1のヒトアイソフォームGCH−2 OS=ホモサピエンス GN=GCH1
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEATSAEP
配列番号:3:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−3(ヒト)
>sp|P30793−3|GCH1_GTPシクロヒドロラーゼ1のヒトアイソフォームGCH−3 OS=ホモサピエンス GN=GCH1
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEAT
配列番号:4:GTPシクロヒドロラーゼ1アイソフォームGCH−4(ヒト)
>sp|P30793−4|GCH1_GTPシクロヒドロラーゼ1のヒトアイソフォームGCH−4 OS=ホモサピエンス GN=GCH1
MEKGPVRAPAEKPRGARCSNGFPERDPPRPGPSRPAEKPPRPEAKSAQPADGWKGERPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILSSLGENPQRQGLLKTPWRAASAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGKVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALRPAGVGVVVEATKSNKYNKGLSPLLSSCHLFVAILK
配列番号:5:GTPシクロヒドロラーゼ1(ラット)
>sp|P22288|GCH1_ラットGTPシクロヒドロラーゼ1 OS=ドブネズミ GN=Gch1 PE=1 SV=1
MEKPRGVRCTNGFPERELPRPGASRPAEKSRPPEAKGAQPADAWKAGRPRSEEDNELNLPNLAAAYSSILRSLGEDPQRQGLLKTPWRAATAMQFFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGRVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALQPAGVGVVIEATHMCMVMRGVQKMNSKTVTSTMLGVFREDPKTREEFLTLIRS
配列番号:6:GTPシクロヒドロラーゼ1(マウス)
>sp|Q05915|GCH1_マウスGTPシクロヒドロラーゼ1 OS=ハツカネズミ GN=Gch1 PE=2 SV=1
MEKPRGVRCTNGFSERELPRPGASPPAEKSRPPEAKGAQPADAWKAGRHRSEEENQVNLPKLAAAYSSILLSLGEDPQRQGLLKTPWRAATAMQYFTKGYQETISDVLNDAIFDEDHDEMVIVKDIDMFSMCEHHLVPFVGRVHIGYLPNKQVLGLSKLARIVEIYSRRLQVQERLTKQIAVAITEALQPAGVGVVIEATHMCMVMRGVQKMNSKTVTSTMLGVFREDPKTREEFLTLIRS
配列番号:7:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ヒト)
EC=1.14.16.2
別の名称:チロシン3−モノオキシゲナーゼ又はチロシン3−ヒドロキシラーゼ又はチロシンヒドロキシラーゼ
ショートネーム=TH
生物体:ホモサピエンス(ヒト)
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAI
配列番号:8:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
>sp|P07101|TY3H_ヒトチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ホモサピエンス GN=TH PE=1 SV=5
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMVRGQGAPGPSLTGSPWPGTAAPAASYTPTPRSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:9:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
>tr|Q2M3b4|Q2M3b4_ヒトチロシンヒドロキシラーゼ OS=ホモサピエンス GN=TH PE=2 SV=1
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAMLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:10:チロシンヒドロキシラーゼ(ヒト)
>tr|b7ZL73|b7ZL73_ヒトTHタンパク質 OS=ホモサピエンス GN=TH PE=2 SV=1
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMVRGQSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAMLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADHTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:11:チロシン3−モノオキシゲナーゼ(ヒト)
>sp|P07101|TY3H_ヒトチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ホモサピエンス GN=TH PE=1 SV=5
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMVRGQGAPGPSLTGSPWPGTAAPAASYTPTPRSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:12:トランケート型TH(触媒ドメインに対応)
MPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:13:ser40で突然変異したTH
MPTPDATTPQAKGFRRAVSELDAKQAEAIMSPRFIGRRQELIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:14:ser19+ser40で突然変異したTH
MPTPDATTPQAKGFRRAVEELDAKQAEAIMSPRFIGRRQELIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:15:ser19+ser31+ser40で突然変異したTH
MPTPDATTPQAKGFRRAVEELDAKQAEAIMEPRFIGRRQELIEDARKEREAAVAAAAAAVPSEPGDPLEAVAFEEKEGKAVLNLLFSPRATKPSALSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPRAGGPHLEYFVRLEVRRGDLAALLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:16:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(ラット)
>sp|P04177|TY3H_ラットチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ドブネズミ GN=Th PE=1 SV=3
MPTPSAPSPQPKGFRRAVSEQDAKQAEAVTSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAAAAAAAAVASSEPGNPLEAVVFEERDGNAVLNLLFSLRGTKPSSLSRAVKVFETFEAKIHHLETRPAQRPLAGSPHLEYFVRFEVPSGDLAALLSSVRRVSDDVRSAREDKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYKHGEPIPHVEYTAEEIATWKEVYVTLKGLYATHACREHLEGFQLLERYCGYREDSIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTVYWFTVEFGLCKQNGELKAYGAGLLSSYGELLHSLSEEPEVRAFDPDTAAVQPYQDQTYQPVYFVSESFNDAKDKLRNYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPHTIQRSLEGVQDELHTLAHALSAIS
配列番号:17:チロシン3−ヒドロキシラーゼ(マウス)
>sp|P24529|TY3H_マウスチロシン3−モノオキシゲナーゼ OS=ハツカネズミ GN=Th PE=1 SV=3
MPTPSASSPQPKGFRRAVSEQDTKQAEAVTSPRFIGRRQSLIEDARKEREAAAAAAAAAVASAEPGNPLEAVVFEERDGNAVLNLLFSLRGTKPSSLSRALKVFETFEAKIHHLETRPAQRPLAGSPHLEYFVRFEVPSGDLAALLSSVRRVSDDVRSAREDKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQAYRQRRKLIAEIAFQYKQGEPIPHVEYTKEEIATWKEVYATLKGLYATHACREHLEAFQLLERYCGYREDSIPQLEDVSHFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTVYWFTVEFGLCKQNGELKAYGAGLLSSYGELLHSLSEEPEVRAFDPDTAAVQPYQDQTYQPVYFVSESFSDAKDKLRNYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPHTIRRSLEGVQDELHTLTQALSAIS
配列番号:18:アデノ随伴ウイルス2左末端ヌクレオチド配列
ttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcct
配列番号:19:アデノ随伴ウイルス2右末端ヌクレオチド配列
aggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaa
配列番号:20:ホモサピエンスGTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1)、転写産物変異体1
ATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAA
配列番号:21:シミアンウイルス40初期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
TTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAA
配列番号:22:シミアンウイルス40後期ポリアデニル化ヌクレオチド配列
CAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTT
配列番号:23:ホモサピエンスチロシンヒドロキシラーゼ(TH)、転写産物変異体2ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGTCTGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGTCCCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGAGCCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGG
配列番号:24:トランケート型TH(触媒ドメインをコード)、ヌクレオチド配列
ATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAA
配列番号:25:ser40で突然変異したTH、ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGTCTGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGTCCCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGGAGCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGC
配列番号:26:ser19及びser40として突然変異したTH、ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGGAGGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGTCCCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGGAGCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGC
配列番号:27:ser19、ser31及びser40として突然変異したTH、ヌクレオチド配列
ATGCCCACCCCCGACGCCACCACGCCACAGGCCAAGGGCTTCCGCAGGGCCGTGGAGGAGCTGGACGCCAAGCAGGCAGAGGCCATCATGGAGCCGCGGTTCATTGGGCGCAGGCAGGAGCTCATCGAGGACGCCCGCAAGGAGCGGGAGGCGGCGGTGGCAGCAGCGGCCGCTGCAGTCCCCTCGGAGCCCGGGGACCCCCTGGAGGCTGTGGCCTTTGAGGAGAAGGAGGGGAAGGCCGTGCTAAACCTGCTCTTCTCCCCGAGGGCCACCAAGCCCTCGGCGCTGTCCCGAGCTGTGAAGGTGTTTGAGACGTTTGAAGCCAAAATCCACCATCTAGAGACCCGGCCCGCCCAGAGGCCGCGAGCTGGGGGCCCCCACCTGGAGTACTTCGTGCGCCTCGAGGTGCGCCGAGGGGACCTGGCCGCCCTGCTCAGTGGTGTGCGCCAGGTGTCAGAGGACGTGCGCAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGC
配列番号:28:ウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
CGTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCT
配列番号:29:突然変異したウッドチャックB型肝炎ウイルス(WHV8)転写後調節エレメントヌクレオチド配列
CGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCT
配列番号:30 GCH1ヌクレオチド配列
ATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGA
配列番号:31 pAA011−scAAV−HLP−GCH1:
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTCTAGATGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCGCTAGCGAATTCTAGCATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAATGCATCCCCATCGATGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAGTCGACCGCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:32:pAA016−scAAV−HLP−tTH:
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCGCTAGCTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCATTCAAGCTCGTAGCAAGGATCCACCGGTCACCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAACTAGTGGATCCGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCTCGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACTTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:33:pAAo19−scAAV−LP1−GCH1−LP1−tTH:
CAGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACGTAGCCATGCTCTAGAgctgagcCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAcctgcaggATTCAAGCTGCTAGCAAGGATCCACCGGTAACATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAATGCATCCCCATCGATGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAGTCGACCAGATCTGACAAGGTCCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGATTCGAAATTCAAGCTGCTAGCAAGGATCCACCGGTCACCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAACTAGTGGATCCGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCTCGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACTTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGCATGCTCTAGAGCATGGCTACGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGAATTCCAGACGATTGAGCGTCAAAATGTAGGTATTTCCATGAGCGTTTTTCCTGTTGCAATGGCTGGCGGTAATATTGTTCTGGATATTACCAGCAAGGCCGATAGTTTGAGTTCTTCTACTCAGGCAAGTGATGTTATTACTAATCAAAGAAGTATTGCGACAACGGTTAATTTGCGTGATGGACAGACTCTTTTACTCGGTGGCCTCACTGATTATAAAAACACTTCTCAGGATTCTGGCGTACCGTTCCTGTCTAAAATCCCTTTAATCGGCCTCCTGTTTAGCTCCCGCTCTGATTCTAACGAGGAAAGCACGTTATACGTGCTCGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTAAATATTTGCTTATACAATCTTCCTGTTTTTGGGGCTTTTCTGATTATCAACCGGGGTACATATGATTGACATGCTAGTTTTACGATTACCGTTCATCGATTCTCTTGTTTGCTCCAGACTCTCAGGCAATGACCTGATAGCCTTTGTAGAGACCTCTCAAAAATAGCTACCCTCTCCGGCATGAATTTATCAGCTAGAACGGTTGAATATCATATTGATGGTGATTTGACTGTCTCCGGCCTTTCTCACCCGTTTGAATCTTTACCTACACATTACTCAGGCATTGCATTTAAAATATATGAGGGTTCTAAAAATTTTTATCCTTGCGTTGAAATAAAGGCTTCTCCCGCAAAAGTATTACAGGGTCATAATGTTTTTGGTACAACCGATTTAGCTTTATGCTCTGAGGCTTTATTGCTTAATTTTGCTAATTCTTTGCCTTGCCTGTATGATTTATTGGATGTTGGAATTCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGC
配列番号:34:pAA010 scAAV−LP1−tTH
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAATTCTAGCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAACTAGTGGATCCGTCGATAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAATTCGAGCTCGGTACAGCTTATCGATACCGTCGACTTCGAGCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGTCTAGCATCGAAGATCCCCCGCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:35:pAA009 scAAV−LP1−GCH1
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAATTctagcATGGAGAAGGGCCCTGTGCGGGCACCGGCGGAGAAGCCGCGGGGCGCCAGGTGCAGCAATGGGTTCCCCGAGCGGGATCCGCCGCGGCCCGGGCCCAGCAGGCCGGCGGAGAAGCCCCCGCGGCCCGAGGCCAAGAGCGCGCAGCCCGCGGACGGCTGGAAGGGCGAGCGGCCCCGCAGCGAGGAGGATAACGAGCTGAACCTCCCTAACCTGGCAGCCGCCTACTCGTCCATCCTGAGCTCGCTGGGCGAGAACCCCCAGCGGCAAGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCTCGGCCATGCAGTTCTTCACCAAGGGCTACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTAAACGATGCTATATTTGATGAAGATCATGATGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGACATGTTTTCCATGTGTGAGCATCACTTGGTTCCATTTGTTGGAAAGGTCCATATTGGTTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGCCTCAGCAAACTTGCGAGGATTGTAGAAATCTATAGTAGAAGACTACAAGTTCAGGAGCGCCTTACAAAACAAATTGCTGTAGCAATCACGGAAGCCTTGCGGCCTGCTGGAGTCGGGGTAGTGGTTGAAGCAACACACATGTGTATGGTAATGCGAGGTGTACAGAAAATGAACAGCAAAACTGTGACCAGCACAATGTTGGGTGTGTTCCGGGAGGATCCAAAGACTCGGGAAGAGTTCCTGACTCTCATTAGGAGCTAATGCATCCCCATCGATGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAGTCGACCgCTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:36:scAAV−LP1−hFIXco
AAAGCTTCCCGGGGGGATCTGGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGGAGGGGTGGAGTCGTGACCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGAATTCTAGACCACCATGCAGAGGGTGAACATGATCATGGCTGAGAGCCCTGGCCTGATCACCATCTGCCTGCTGGGCTACCTGCTGTCTGCTGAGTGCACTGTGTTCCTGGACCATGAGAATGCCAACAAGATCCTGAACAGGCCCAAGAGATACAACTCTGGCAAGCTGGAGGAGTTTGTGCAGGGCAACCTGGAGAGGGAGTGCATGGAGGAGAAGTGCAGCTTTGAGGAGGCCAGGGAGGTGTTTGAGAACACTGAGAGGACCACTGAGTTCTGGAAGCAGTATGTGGATGGGGACCAGTGTGAGAGCAACCCCTGCCTGAATGGGGGCAGCTGCAAGGATGACATCAACAGCTATGAGTGCTGGTGCCCCTTTGGCTTTGAGGGCAAGAACTGTGAGCTGGATGTGACCTGCAACATCAAGAATGGCAGATGTGAGCAGTTCTGCAAGAACTCTGCTGACAACAAGGTGGTGTGCAGCTGCACTGAGGGCTACAGGCTGGCTGAGAACCAGAAGAGCTGTGAGCCTGCTGTGCCATTCCCATGTGGCAGAGTGTCTGTGAGCCAGACCAGCAAGCTGACCAGGGCTGAGGCTGTGTTCCCTGATGTGGACTATGTGAACAGCACTGAGGCTGAAACCATCCTGGACAACATCACCCAGAGCACCCAGAGCTTCAATGACTTCACCAGGGTGGTGGGGGGGGAGGATGCCAAGCCTGGCCAGTTCCCCTGGCAAGTGGTGCTGAATGGCAAGGTGGATGCCTTCTGTGGGGGCAGCATTGTGAATGAGAAGTGGATTGTGACTGCTGCCCACTGTGTGGAGACTGGGGTGAAGATCACTGTGGTGGCTGGGGAGCACAACATTGAGGAGACTGAGCACACTGAGCAGAAGAGGAATGTGATCAGGATCATCCCCCACCACAACTACAATGCTGCCATCAACAAGTACAACCATGACATTGCCCTGCTGGAGCTGGATGAGCCCCTGGTGCTGAACAGCTATGTGACCCCCATCTGCATTGCTGACAAGGAGTACACCAACATCTTCCTGAAGTTTGGCTCTGGCTATGTGTCTGGCTGGGGCAGGGTGTTCCACAAGGGCAGGTCTGCCCTGGTGCTGCAGTACCTGAGGGTGCCCCTGGTGGACAGGGCCACCTGCCTGAGGAGCACCAAGTTCACCATCTACAACAACATGTTCTGTGCTGGCTTCCATGAGGGGGGCAGGGACAGCTGCCAGGGGGACTCTGGGGGCCCCCATGTGACTGAGGTGGAGGGCACCAGCTTCCTGACTGGCATCATCAGCTGGGGGGAGGAGTGTGCCATGAAGGGCAAGTATGGCATCTACACCAAAGTCTCCAGATATGTGAACTGGATCAAGGAGAAGACCAAGCTGACCTGACTCGATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAACTAGTCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGACAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTCGAGATCTAG
配列番号:37:pAV HLP FVIII V3 kan
AGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTCCCGGGGGGATCTTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCGGAGGGGTGGAGTCGTGACGTGAATTACGTCATAGGGTTAGGGAGGTCGTATACTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCGCGGCCGCCACCATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGATGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAATGCCACTAATGTGTCTAACAACAGCAACACCAGCAATGACAGCAATGTGTCTCCCCCAGTGCTGAAGAGGCACCAGAGGGAGATCACCAGGACCACCCTGCAGTCTGACCAGGAGGAGATTGACTATGATGACACCATCTCTGTGGAGATGAAGAAGGAGGACTTTGACATCTACGACGAGGACGAGAACCAGAGCCCCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGAAACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTGCAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGATCGCGAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTGATGCAGCCCAAGCTGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAAAGATCCGGGCCCGCATGCGTCGACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCATCCATCACACTGGCGGCCGCTCGAGCATGCATCTAGAGGGCCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATTCAGGGCGCAAGGGCTGCTAAAGGAAGCGGAACACGTAGAAAGCCAGTCCGCAGAAACGGTGCTGACCCCGGATGAATGTCAGCTACTGGGCTATCTGGACAAGGGAAAACGCAAGCGCAAAGAGAAAGCAGGTAGCTTGCAGTGGGCTTACATGGCGATAGCTAGACTGGGCGGTTTTATGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGTAAGGTTGGGAAGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAGGGGATCAAGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCCCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAG
配列番号:38:ハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)
TGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGCCCATTTTAGGGTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATC
配列番号:39:肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)
CCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATCCGGACTCTAAGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTTAGATTCCAACCTTTGGAACTGA
配列番号:40:tTH=トランケート型チロシンヒドロキシラーゼ
MSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLYWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG
配列番号:41:PTPS=6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ
>ENA|BAA04959|BAA04959.1 ホモサピエンス(ヒト) 6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ
ATGAGCACGGAAGGTGGTGGCCGTCGCTGCCAGGCACAAGTGTCCCGCCGCATCTCCTTCAGCGCGAGCCACCGATTGTACAGTAAATTTCTAAGTGATGAAGAAAACTTGAAACTGTTTGGGAAATGCAACAATCCAAATGGCCATGGGCACAATTATAAAGTTGTGGTGACAGTACATGGAGAGATTGACCCTGCTACGGGAATGGTTATGAATCTGGCTGATCTCAAAAAATATATGGAGGAGGCGATTATGCAGCCCCTTGATCATAAGAATCTGGATATGGATGTGCCATACTTTGCAGATGTGGTGAGCACGACTGAAAATGTAGCTGTTTATATCTGGGACAACCTCCAGAAAGTTCTTCCTGTAGGAGTTCTTTATAAAGTAAAAGTATACGAAACTGACAATAATATTGTGGTTTATAAAGGAGAATAG
配列番号:42:プライマーAA16
ccaagctagcATGGAGAAGGGCCCTGTG
配列番号:43:プライマーAA17
ccaagctagcGGTCGACTAAAAAACCTCC
配列番号:44:プライマーAA33
CCAAgctagcATGAGCCCCGCGGGGCCCAAG
配列番号:45:プライマーAA34
CCAAgctagcGGGGGATCTTCGATGCTAGAC
配列番号:46:プライマーAA43
CCAATGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTCTAGATGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC
配列番号:47:プライマーAA44
CCAAGAATTCGCTAGCGATTCACTGTCCCAGGTCAGTG
配列番号:48:プライマーAA57
CCAAGCTAGCTGTTTGCTGCTTGCAATGTTTGC
配列番号:49:プライマーAA67
GATCCTTGCTACGAGCTTGAATGATTCACTGTCCCAGGTCAGT
配列番号:50:プライマーAA68
ACTGACCTGGGACAGTGAATCATTCAAGCTCGTAGCAAGGATC
配列番号:51:プライマーRmuscTHext2
AAAgctagcTTCGATGCTAGACGATCCAG
配列番号:52:MLF003noefgp
GCGATCGCGGCTCCCGACATCTTGGACCATTAGCTCCACAGGTATCTTCTTCCCTCTAGTGGTCATAACAGCAGCTTCAGCTACCTCTCAATTCAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTTAGAGGCCCCAAGGGGTTATGCTATCAATCGTTGCGTTACACACACAAAAAACCAACACACATCCATCTTCGATGGATAGCGATTTTATTATCTAACTGCTGATCGAGTGTAGCCAGATCTAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGCTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATCAGATCTTTGTCGATCCTACCATCCACTCGACACACCCGCCAGCTAGAGATCCCGGGACCATGAGCCCCGCGGGGCCCAAGGTCCCCTGGTTCCCAAGAAAAGTGTCAGAGCTGGACAAGTGTCATCACCTGGTCACCAAGTTCGACCCTGACCTGGACTTGGACCACCCGGGCTTCTCGGACCAGGTGTACCGCCAGCGCAGGAAGCTGATTGCTGAGATCGCCTTCCAGTACAGGCACGGCGACCCGATTCCCCGTGTGGAGTACACCGCCGAGGAGATTGCCACCTGGAAGGAGGTCTACACCACGCTGAAGGGCCTCTACGCCACGCACGCCTGCGGGGAGCACCTGGAGGCCTTTGCTTTGCTGGAGCGCTTCAGCGGCTACCGGGAAGACAATATCCCCCAGCTGGAGGACGTCTCCCGCTTCCTGAAGGAGCGCACGGGCTTCCAGCTGCGGCCTGTGGCCGGCCTGCTGTCCGCCCGGGACTTCCTGGCCAGCCTGGCCTTCCGCGTGTTCCAGTGCACCCAGTATATCCGCCACGCGTCCTCGCCCATGCACTCCCCTGAGCCGGACTGCTGCCACGAGCTGCTGGGGCACGTGCCCATGCTGGCCGACCGCACCTTCGCGCAGTTCTCGCAGGACATTGGCCTGGCGTCCCTGGGGGCCTCGGATGAGGAAATTGAGAAGCTGTCCACGCTGTACTGGTTCACGGTGGAGTTCGGGCTGTGTAAGCAGAACGGGGAGGTGAAGGCCTATGGTGCCGGGCTGCTGTCCTCCTACGGGGAGCTCCTGCACTGCCTGTCTGAGGAGCCTGAGATTCGGGCCTTCGACCCTGAGGCTGCGGCCGTGCAGCCCTACCAAGACCAGACGTACCAGTCAGTCTACTTCGTGTCTGAGAGCTTCAGTGACGCCAAGGACAAGCTCAGGAGCTATGCCTCACGCATCCAGCGCCCCTTCTCCGTGAAGTTCGACCCGTACACGCTGGCCATCGACGTGCTGGACAGCCCCCAGGCCGTGCGGCGCTCCCTGGAGGGTGTCCAGGATGAGCTGGACACCCTTGCCCATGCGCTGAGTGCCATTGGCTAAGACGCCACCTAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCCATCTTGACTGACTGAGATACAGCGTACCTTCAGCTCACAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATTGGCCCATCTCTATCGGTATCGTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGTGCCCCTCGGGCCGGATTGCTATCTACCGGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGGTCGTCAGCTATCCTGCAGGCGATCTCTCGATTTCGATCAAGACATTCCTTTAATGGTCTTTTCTGGACACCACTAGGGGTCAGAAGTAGTTCATCAAACTTTCTTCCCTCCCTAATCTCATTGGTTACCTTGGGCTATCGAAACTTAATTAACCAGTCAAGTCAGCTACTTGGCGAGATCGACTTGTCTGGGTTTCGACTACGCTCAGAATTGCGTCAGTCAAGTTCGATCTGGTCCTTGCTATTGCACCCGTTCTCCGATTACGAGTTTCATTTAAATCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCATTTAAATTTCCGAACTCTCCAAGGCCCTCGTCGGAAAATCTTCAAACCTTTCGTCCGATCCATCTTGCAGGCTACCTCTCGAACGAACTATCGCAAGTCTCTTGGCCGGCCTTGCGCCTTGGCTATTGCTTGGCAGCGCCTATCGCCAGGTATTACTCCAATCCCGAATATCCGAGATCGGGATCACCCGAGAGAAGTTCAACCTACATCCTCAATCCCGATCTATCCGAGATCCGAGGAATATCGAAATCGGGGCGCGCCTGGTGTACCGAGAACGATCCTCTCAGTGCGAGTCTCGACGATCCATATCGTTGCTTGGCAGTCAGCCAGTCGGAATCCAGCTTGGGACCCAGGAAGTCCAATCGTCAGATATTGTACTCAAGCCTGGTCACGGCAGCGTACCGATCTGTTTAAACCTAGATATTGATAGTCTGATCGGTCAACGTATAATCGAGTCCTAGCTTTTGCAAACATCTATCAAGAGACAGGATCAGCAGGAGGCTTTCGCATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCGCGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGCTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTATTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATTGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACCTTGCGTAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAGTTGATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACCGATTCTAGGTGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGATCCCGAATCGTTTAAACTCGACTCTGGCTCTATCGAATCTCCGTCGTTTCGAGCTTACGCGAACAGCCGTGGCGCTCATTTGCTCGTCGGGCATCGAATCTCGTCAGCTATCGTCAGCTTACCTTTTTGGCA
配列番号:53 MDL004
GCGATCGCGGCTCCCGACATCTTGGACCATTAGCTCCACAGGTATCTTCTTCCCTCTAGTGGTCATAACAGCAGCTTCAGCTACCTCTCAATTCAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTTAGAGGCCCCAAGGGGTTATGCTATCAATCGTTGCGTTACACACACAAAAAACCAACACACATCCATCTTCGATGGATAGCGATTTTATTATCTAACTGCTGATCGAGTGTAGCCAGATCTAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGCTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATCAGATCTTTGTCGATCCTACCATCCACTCGACACACCCGCCAGCAATATGGCCACAACCGCGGCCGTAGATCCCGGGACCATGGAGAAGCCGCGGGGAGTCAGGTGCACCAATGGGTTCTCCGAGCGGGAGCTGCCGCGGCCCGGGGCCAGCCCGCCTGCCGAGAAGTCCCGGCCGCCCGAGGCCAAGGGCGCACAGCCGGCCGACGCCTGGAAGGCAGGGCGGCACCGCAGCGAGGAGGAAAACCAGGTGAACCTCCCCAAACTGGCGGCTGCTTACTCGTCCATTCTGCTCTCGCTGGGCGAGGACCCCCAGCGGCAGGGGCTGCTCAAGACGCCCTGGAGGGCGGCCACCGCCATGCAGTACTTCACCAAGGGATACCAGGAGACCATCTCAGATGTCCTGAATGATGCTATATTTGATGAAGATCATGACGAGATGGTGATTGTGAAGGACATAGATATGTTCTCCATGTGTGAGCATCACCTTGTTCCATTTGTAGGAAGGGTCCATATTGGCTATCTTCCTAACAAGCAAGTCCTTGGTCTCAGTAAACTTGCCAGGATTGTAGAAATCTACAGTAGACGACTACAAGTTCAAGAGCGCCTCACCAAACAGATTGCGGTGGCCATCACAGAAGCCTTGCAGCCTGCTGGCGTTGGAGTAGTGATTGAAGCGACACACATGTGCATGGTAATGCGAGGCGTGCAGAAAATGAACAGCAAGACTGTCACTAGCACCATGCTGGGCGTGTTCCGGGAAGACCCCAAGACTCGGGAGGAGTTCCTCACACTAATCAGGAGCTGAGACTATAGGGTGGGTATTATGTGTTCATCAACCATCCTAAAAATACCCGGTAAACAGGTGCAGCCCCAGATCTGGGCAGCAGGAGGGGGCAGTGGGAAGCTTAACGCGCCACGACTATAGGGTGGGTATTATGTGTTCATCAACCATCCTAAAAATACCCGGTAAACAGGTGCAGCCCCAGATCTGGGCAGCAGGAGGGGGCAGTGGGAAGCTTATCTAGTCTCGAGGTACCGAGCTCTTACGCGTGCTAGCTCGAGATCTGGATATCGACTATAGGGTGGGTATTATGTGTTCATCAACCATCCTAAAAATACCCGGTAAACAGGTGCAGCCCCAGATCTGGGCAGCAGGAGGGGGCAGTGGGTCTGTTCTATTTTTACCAGCCAGTTGCTGCTGGACACAGTTTTCATAGCCTCCCCTCGGCTCTGCCCCTCACAGTCTGCAGTCTACGGCGAGGCACAGGCCAGCCCAGCTCCACGAGGACTGAACAAGAAGCTTGATATCGAATTGGTACCATCGAGGAACTGAAAAACCAGAAAGTTAACTGGTAAGTTTAGTCTTTTTGTCTTTTATTTCAGGTCCCGGATCCGGTGGTGGTGCAAATCAAAGAACTGCTCCTCAGTGGATATCGCCTTTACTTCTAGGCCACCATGAGCGCGGCGGGTGACCTTCGTCGCCGCGCGCGACTGTCGCGCCTCGTGTCCTTCAGCGCGAGCCACCGGCTGCACAGCCCATCTCTGAGCGATGAAGAGAACTTAAGAGTGTTTGGGAAATGCAACAATCCGAATGGCCACGGGCACAACTATAAAGTTGTGGTGACAGTCCATGGAGAGATTGATCCTGTTACAGGAATGGTTATGAATTTGACCGACCTCAAAGAATACATGGAGGAGGCCATCATGAAGCCTCTTGATCACAAGAACCTGGACCTGGATGTGCCGTACTTTGCGGATGCTGTGAGCACGACAGAAAATGTAGCTGTCTACATCTGGGAAAGCCTCCAGAAACTTCTTCCAGTGGGAGCTCTTTATAAAGTAAAAGTGTTTGAAACCGACAACAACATCGTAGTCTATAAAGGAGAATAGTAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCCATCTTGACTGACTGAGATACAGCGTACCTTCAGCTCACAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTATTGGCCCATCTCTATCGGTATCGTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGTGCCCCTCGGGCCGGATTGCTATCTACCGGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGGTCGTCAGCTATCCTGCAGGCGATCTCTCGATTTCGATCAAGACATTCCTTTAATGGTCTTTTCTGGACACCACTAGGGGTCAGAAGTAGTTCATCAAACTTTCTTCCCTCCCTAATCTCATTGGTTACCTTGGGCTATCGAAACTTAATTAACCAGTCAAGTCAGCTACTTGGCGAGATCGACTTGTCTGGGTTTCGACTACGCTCAGAATTGCGTCAGTCAAGTTCGATCTGGTCCTTGCTATTGCACCCGTTCTCCGATTACGAGTTTCATTTAAATCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCATTTAAATTTCCGAACTCTCCAAGGCCCTCGTCGGAAAATCTTCAAACCTTTCGTCCGATCCATCTTGCAGGCTACCTCTCGAACGAACTATCGCAAGTCTCTTGGCCGGCCTTGCGCCTTGGCTATTGCTTGGCAGCGCCTATCGCCAGGTATTACTCCAATCCCGAATATCCGAGATCGGGATCACCCGAGAGAAGTTCAACCTACATCCTCAATCCCGATCTATCCGAGATCCGAGGAATATCGAAATCGGGGCGCGCCTGGTGTACCGAGAACGATCCTCTCAGTGCGAGTCTCGACGATCCATATCGTTGCTTGGCAGTCAGCCAGTCGGAATCCAGCTTGGGACCCAGGAAGTCCAATCGTCAGATATTGTACTCAAGCCTGGTCACGGCAGCGTACCGATCTGTTTAAACCTAGATATTGATAGTCTGATCGGTCAACGTATAATCGAGTCCTAGCTTTTGCAAACATCTATCAAGAGACAGGATCAGCAGGAGGCTTTCGCATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCGCGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGCTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTATTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATTGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACCTTGCGTAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAGTTGATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACCGATTCTAGGTGCATTGGCGCAGAAAAAAATGCCTGATGCGACGCTGCGCGTCTTATACTCCCACATATGCCAGATTCAGCAACGGATACGGCTTCCCCAACTTGCCCACTTCCATACGTGTCCTCCTTACCAGAAATTTATCCTTAAGATCCCGAATCGTTTAAACTCGACTCTGGCTCTATCGAATCTCCGTCGTTTCGAGCTTACGCGAACAGCCGTGGCGCTCATTTGCTCGTCGGGCATCGAATCTCGTCAGCTATCGTCAGCTTACCTTTTTGGCA
Claims (131)
- 発現の際に、GTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第一のポリヌクレオチド(N1)であって、前記ポリヌクレオチドは、第一のプロモーターに動作可能に結合され、前記生物活性がGCH1の酵素活性である、第一のポリヌクレオチド(N1)と、
発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第二のポリヌクレオチド(N2)であって、前記ポリヌクレオチドは、第二のプロモーターに動作可能に結合され、前記生物活性がTHの酵素活性である、第二のポリヌクレオチド(N2)と、
発現の際に、6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS,EC4.2.3.12)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする、第三のポリヌクレオチド(N3)であって、前記ポリヌクレオチドは、第三のプロモーターに動作可能に結合され、前記生物活性がPTPSの酵素活性である、第三のポリヌクレオチド(N3)と、
を含む発現系。 - 前記発現系が、
少なくとも1つの第一のプロモーターに動作可能に結合されるポリヌクレオチドであって、発現の際に第一のポリペプチド(P1)及び第二の異なるポリペプチド(P2)をコードする、ポリヌクレオチド(N’)と、
少なくとも1つの第二のプロモーターに動作可能に結合される第二のポリヌクレオチドであって、発現の際に第三のポリペプチド(P3)をコードする、第二のポリヌクレオチド(N’’)と、
を含み、
P1、P2及びP3が、異なっており、
P1、P2及びP3が、独立して、GCH1、TH及びPTPSポリペプチド、又はそれらの生物活性断片若しくは変異体からなる群から選択される、請求項1に記載の発現系。 - 前記少なくとも1つの第一のプロモーターが、2つのプロモーターである、請求項2に記載の発現系。
- 前記2つのプロモーターが、同一である、請求項3に記載の発現系。
- 前記2つのプロモーターが、異なっている、請求項3に記載の発現系。
- P1をコードするポリヌクレオチド配列と、P2をコードするポリヌクレオチド配列の間に内部リボソーム進入部位(IRES)をさらに含む、請求項2に記載の発現系。
- 前記発現系が、第一のプロモーターに動作可能に結合された第一のポリヌクレオチドを含み、
前記第一のポリヌクレオチドが発現の際に、
第一、
第二、及び
第三のポリペプチド
をコードし、
前記第一、第二及び第三のポリペプチドが、独立して、GCH1ポリペプチド、THポリペプチド及びPTPSポリペプチド、又はそれらの生物活性断片若しくは変異体からなる群から選択される、請求項1〜6のいずれか1項に記載の発現系。 - 前記GTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチドが、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも80%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも85%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも90%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも95%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも96%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも97%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも98%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも99%同一であり、より好ましくは配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと100%同一である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチドが、配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13及び配列番号:14からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも75%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも80%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも85%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも90%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも95%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも96%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも97%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも98%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも99%同一であり、より好ましくは配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと100%同一である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS)が、配列番号:41と少なくとも70%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも75%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも80%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも85%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも90%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも95%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも96%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも97%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも98%同一であり、より好ましくは配列番号:41と少なくとも99%同一であり、より好ましくは配列番号:41と100%同一である、請求項1〜9のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記GTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体が、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5及び配列番号:6からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体が、配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16、及び配列番号:17からなる群から選択されるポリペプチドと少なくとも70%同一である、請求項1〜11のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記6−ピルボイルテトラヒドロプテリンシンターゼ(PTPS)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体が、配列番号:41と少なくとも70%同一である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記断片又は前記変異体の生物活性が、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:40、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17及び配列番号:41からなる群から選択される前記対応する全長酵素の前記酵素活性である、請求項1〜13のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記生物活性断片が、チロシンヒドロキシラーゼの触媒ドメイン(配列番号:12)及び/又は(配列番号:40)である、請求項1〜14のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記生物活性変異体が、突然変異したチロシンヒドロキシラーゼポリペプチドであり、配列番号:7の残基S19、S31、S40又はS404のうちの1つ又は複数が、別のアミノ酸残基に改変されている、請求項1〜15のいずれか1項に記載の発現系。
- GTP−シクロヒドロラーゼ1(GCH1)ポリペプチド、又はそれらの生物活性断片若しくは変異体をコードする前記ヌクレオチド配列が、配列番号:20の配列を含む、請求項1〜16のいずれか1項に記載の発現系。
- チロシンヒドロキシラーゼ(TH)ポリペプチド、又はそれらの生物活性断片若しくは変異体をコードする前記第二のヌクレオチド配列が、配列番号:23、24、25、26及び27からなる群から選択される配列を含む、請求項1〜17のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記第一及び前記第二及び前記第三のプロモーターが、異なるプロモーター配列である、請求項1〜18のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記第一及び前記第二及び前記第三のプロモーターが、同一のプロモーター配列である、請求項1〜19のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、哺乳動物細胞に選択性のあるプロモーターである、請求項1〜20のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記哺乳動物細胞が、肝細胞、筋細胞及び筋芽細胞に選択性のあるプロモーターである、請求項1〜21のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、構成プロモーターである、請求項1〜22のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、例えばp−MCK1350などのMCK、複数のコピーのヒト・スロートロポニンI(slow troponin I)遺伝子エンハンサー、CAG、CBA、CMV、ヒトUbiC、RSV、EF−1α、SV40、Mt1、pGK、H1及び/又はU3からなる群から選択される構成的に活性のプロモーターである、請求項1〜23のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項1〜24のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、Tet−On、Tet−Off、Mo−MLV−LTR、Mx1、プロゲステロン、RU486及び/又はラパマイシン誘導性プロモーターからなる群から選択される誘導性プロモーターである、請求項1〜25のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、LP1、hAPO−HCR及び/又はhAATである、請求項1〜26のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、筋肉細胞に特異性がある、請求項1〜27のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、
a.前記CMVプロモーター及びSPc5−12のエレメントを用いた筋肉特異性組み合わせ又は二重プロモーターと、
b.SPc5−12合成筋肉特異性プロモーターと、
c.dMCK又はtMCK又はp−MCK1350又は複数のコピーのヒト・スロートロポニンI遺伝子エンハンサーなどの筋肉特異性クレアチンキナーゼプロモーター又はそれらの簡略型と、
d.CMVプロモーターと、
e.筋肉CATプロモーターと、
f.骨格αアクチン448プロモーターと、
g.a〜fのいずれか1つの任意の活性類似体又は断片と、
からなる群から選択される筋肉特異性プロモーターである、請求項1〜28のいずれか1項に記載の発現系。 - 発現の際に、チロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする前記ポリヌクレオチドが、肝特異性プロモーターに動作可能に結合されている、請求項1〜29のいずれか1項に記載の発現系。
- 発現の際に、GTPシクロヒドロラーゼ1(GCH1;EC3.5.4.16)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体をコードする前記ポリヌクレオチドが、肝特異性プロモーターに動作可能に結合されている、請求項1〜30のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、肝臓プロモーター/エンハンサー1(LP1)又はその生物活性断片若しくは変異体、及び/或いはハイブリッド肝特異性プロモーター(HLP)又はその生物活性断片若しくは変異体からなる群から選択される肝特異性プロモーターである、請求項1〜31のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターが、配列番号:38(HLP)及び/又は配列番号:39(LP1)からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも70%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも75%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも80%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも85%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも90%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも95%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも96%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも97%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも98%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも99%同一である、より好ましくは配列番号:38及び/又は配列番号:39からなる群から選択されるポリヌクレオチドと100%同一である、肝特異性プロモーターである、請求項1〜32のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記プロモーターの発現パターンが、全身投与可能な薬剤によって調節される、請求項1〜33のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、プラスミドである、請求項1〜34のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、裸のプラスミドDNAである、請求項1〜35のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、ベクター内にパッケージングされたプラスミドDNAである、請求項1〜36のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、ベクターである、請求項1〜37のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項1〜38のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、合成ベクターである、請求項1〜39のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、コスミドベクターである、請求項1〜40のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、人工染色体である、請求項1〜41のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ(AADC)ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含まない、請求項1〜42のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、例えば1〜30kb、1〜20kbなど、例えば1〜15kb、1〜10kbなど、例えば1〜8kb、2〜7kbなど、例えば3〜6kb、4〜5kbなど、1〜40kbのパッケージング能力を有する、請求項1〜43のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、4.5〜4.8kbのパッケージング能力を有する、請求項1〜44のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ウイルスベクターが、組み込み型及び非組み込み型ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項1〜45のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ベクター(AAV)、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター及びレトロウイルスベクターからなる群から選択される、請求項1〜46のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ベクター(AAV)、アデノウイルスベクター及びレトロウイルスベクターからなる群から選択される、請求項1〜47のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ベクター(AAV)である、請求項1〜48のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAVベクターが、自己相補性AAV(scAAV)ベクターである、請求項1〜49のいずれか1項に記載の発現系。
- チロシンヒドロキシラーゼをコードする前記ヌクレオチド配列が、自己相補性配列である、請求項1〜50のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記アデノ随伴ベクター(AAV)が、セロタイプAAV5、AAV1、AAV6及びAAV2ベクターからなる群から選択される、請求項1〜51のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記アデノ随伴ベクター(AAV)が、セロタイプAAV8、AAV5、AAV2、AAV9及びAAV7ベクターからなる群から選択される、請求項1〜52のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAV8ベクターのゲノムが、AAV5、AAV9、AAV7、AAV6、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV8カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる、請求項1〜53のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAV7ベクターのゲノムが、AAV8、AAV9、AAV5、AAV6、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV7カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる、請求項1〜54のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAV6ベクターのゲノムが、AAV8、AAV9、AAV7、AAV5、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV6カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる、請求項1〜55のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAV5ベクターのゲノムが、AAV8、AAV9、AAV7、AAV6、AAV2又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV5カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる、請求項1〜56のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAV2ベクターのゲノムが、AAV8、AAV9、AAV7、AAV6、AAV5又はAAV1カプシド内にパッケージングされるなど、AAV2カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる、請求項1〜57のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記AAV1ベクターのゲノムが、AAV8、AAV9、AAV7、AAV6、AAV2又はAAV5カプシド内にパッケージングされるなど、AAV1カプシド以外のAAVカプシド内にパッケージングされる、請求項1〜58のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系が、哺乳動物細胞を感染、トランスフェクト、又は形質導入することが可能なベクターである、請求項1〜59のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記哺乳動物細胞が、肝細胞などの肝臓細胞である、請求項1〜60のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記哺乳動物細胞が、筋細胞などの筋肉細胞又は筋芽細胞などの筋肉細胞前駆体である、請求項1〜61のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記生物活性断片が、少なくとも100の連続するアミノ酸を含み、前記選択された配列内で指定された任意のアミノ酸が、異なるアミノ酸に改変されているが、但し、前記配列内の10以下のアミノ酸がそのように改変されていることを条件とする、請求項1〜62のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記断片の酵素活性が、前記全長酵素の酵素活性の少なくとも10%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも20%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも30%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも40%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも50%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも60%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも70%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも80%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性の少なくとも95%、好ましくは前記全長酵素の酵素活性と実質的に同一である、請求項60に記載の発現系。
- 前記発現系が、配列番号:31、配列番号:32、配列番号:33、配列番号:34、配列番号:35、配列番号:36及び配列番号:37を含む群から選択されるベクターである、請求項1〜64のいずれか1項に記載の発現系。
- 1つ又は複数のポリアデニル化配列をさらに含む、請求項1〜65のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記1つ又は複数のポリアデニル化配列が、SV40ポリアデニル化配列である、請求項1〜66のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記SV40ポリアデニル化配列の1つ又は複数が、配列番号:21及び22からなる群から選択される配列を有する、請求項1〜67のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ポリアデニル化配列が、前記TH及び/又はGCH−1をコードする核酸配列の3’末端に動作可能に結合されている、請求項1〜68のいずれか1項に記載の発現系。
- 転写後調節エレメントをさらに含む、請求項1〜69のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記転写後調節エレメントが、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント(WPRE)である、請求項1〜70のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメントが、配列番号:28又は29の配列を含む、請求項1〜71のいずれか1項に記載の発現系。
- イントロンをさらに含む、請求項1〜72のいずれか1項に記載の発現系。
- イントロンをさらに含み、前記イントロンが、前記TH及び/又はGCH−1転写産物の5’末端に動作可能に結合されている、請求項1〜73のいずれか1項に記載の発現系。
- 請求項1〜74のいずれかに記載の発現系でトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中の前記発現されたTH及びGCH1の活性を測定することにより、前記比が決定される、請求項1〜74のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記TH:GCH1比が、請求項1〜75のいずれかに記載の発現系でトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中のテトラヒドロビオプテリン(BH4)の量を測定することにより決定される、請求項1〜75のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記TH:GCH1比が、請求項1〜76のいずれかに記載の発現系でトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中で転写されたmRNAの量により決定される、請求項1〜76のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記TH:GCH1比が、請求項1〜77のいずれかに記載の発現系でトランスフェクト又は形質導入された宿主試料からの試料中で発現されたタンパク質の量により決定される、請求項1〜77のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系は、最小限に組み込む発現系である、請求項1〜78のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記発現系は、例えば筋細胞などの筋肉細胞又は筋芽細胞などの筋肉細胞前駆体など、哺乳動物細胞を感染、トランスフェクト又は形質導入することが可能なベクターである、請求項1〜79のいずれか1項に記載の発現系。
- 第四のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜80のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記第四のポリヌクレオチドが発現の際、TH、GCH1又はPTPSをコードする前記ポリヌクレオチドの少なくとも1つの発現を報告することが可能なレポーターをコードする、請求項1〜81のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記レポーターが、GFP又はeGFPなどの蛍光タンパク質である、請求項1〜82のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記第四のポリヌクレオチドが発現の際、小胞モノアミントランスポーター(VMAT)などの輸送タンパク質をコードする、請求項1〜83のいずれか1項に記載の発現系。
- 前記第四のポリヌクレオチドが発現の際、VMAT阻害剤をコードする、請求項1〜84のいずれか1項に記載の発現系。
- 請求項1〜85のいずれか1つに記載の発現系により形質導入又はトランスフェクトされる単離された宿主細胞。
- 前記細胞が真核細胞である、請求項1〜86のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項1〜87のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記細胞が霊長類細胞である、請求項1〜88のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前期細胞がヒト細胞である、請求項1〜89のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 肝細胞、筋細胞及び筋芽細胞からなる群から選択される、請求項1〜90のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 請求項1〜91のいずれか1項に記載の発現系又は宿主細胞を含む医薬組成物。
- 医療使用のための、請求項1〜92のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- カテコールアミン機能障害に関連する疾患の処置方法における使用のための、前記発現系が末梢投与される、請求項1〜93のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記使用が、血中のL−DOPAの治療有効濃度を得ること及び/又は維持することを含む、請求項1〜94のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 血中のL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法における使用のための、それを必要とするヒトへの前記発現系の末梢投与を含む、請求項1〜95のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系又は前記宿主細胞の投与を、L−DOPAの治療有効量の全身投与で補充することをさらに含む、請求項1〜96のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- テトラヒドロビオプテリン(BH4)又はその類似体の治療有効量を投与することをさらに含む、請求項1〜97のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- テトラヒドロビオプテリン(BH4)類似体の治療有効量を投与することをさらに含み、前記類似体がサプロプテリンである、請求項1〜98のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 末梢デカルボキシラーゼ阻害剤の治療有効量を投与することをさらに含む、請求項1〜99のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- ベンセラジン(benserazine)及びカルビドパからなる群から選択される末梢デカルボキシラーゼ阻害剤の治療有効量を投与することをさらに含む、請求項1〜100のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- カテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)の治療有効量を投与することをさらに含む、請求項1〜101のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- トルカポン、エンタカポン及びニテカポンからなる群から選択されるカテコール−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)阻害剤の治療有効量を投与することをさらに含む、請求項1〜102のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/又はCOMT阻害剤、並びにそれらの類似体の前記投与が、全身投与による、請求項1〜103のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/又はCOMT阻害剤、並びにそれらの類似体の前記投与が、腸内又は非経口投与による、請求項1〜104のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/又はCOMT阻害剤、並びにそれらの類似体の前記投与が、経口、静脈内又は筋肉内投与による、請求項1〜105のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系の末梢投与が、CNSの外部への非経口投与である、請求項1〜106のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- BH4、デカルボキシラーゼ阻害剤及び/又はCOMT阻害剤、並びにそれらの類似体の前記投与が、分離式肢灌流による、請求項1〜107のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系の末梢投与が、筋肉内投与である、請求項1〜108のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系の末梢投与が、静脈内投与である、請求項1〜109のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系の静脈内投与が、門脈で行われる、請求項1〜110のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系の末梢投与が、肝臓内投与である、請求項1〜111のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記発現系の末梢投与が、皮下投与である、請求項1〜112のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記カテコールアミン機能障害が、カテコールアミン欠乏である、請求項1〜113のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記カテコールアミン欠乏が、ドパミン欠乏である、請求項1〜114のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記カテコールアミン機能障害に関連する前記疾患が、中枢及び/又は末梢神経系の疾患、障害又は損傷である、請求項1〜115のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記中枢及び/又は末梢神経系の前記疾患、障害又は損傷が、神経変性障害である、請求項1〜116のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記カテコールアミン機能障害に関連する前記疾患が、基底核の疾患である、請求項1〜117のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- パーキンソン病(PD)、L−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)などのジスキネジア、DOPA反応性ジストニア、ADHD、統合失調症、うつ病、血管性パーキンソン症候群、本態性振戦、慢性ストレス、遺伝子性ドパミン受容体異常、慢性オピオイド、コカイン、アルコール又はマリファナ使用、副腎不全、高血圧、低血圧、ノルアドレナリン欠乏、心的外傷後ストレス障害、病的ギャンブル障害、認知症、レビー小体型認知症及び遺伝性チロシンヒドロキシラーゼ欠乏からなる群から選択される疾患の処置方法における使用のための、請求項1〜118のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- パーキンソン病、例えば多系統萎縮症などの状態を含む異型性パーキンソン病、進行性核上性麻痺、血管性若しくは動脈硬化性パーキンソン病、薬物誘導性パーキンソン症候群及びGTPシクロヒドロラーゼ1欠乏並びに/又はドパミン欠乏による任意のジストニア性疾病などの疾病の処置方法における使用のための、請求項1〜119のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 前記神経変性障害が、パーキンソン病(PD)である、請求項1〜120のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物。
- 患者の血中でL−DOPAの治療有効濃度を維持する方法であって、前記方法は、請求項1〜121のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物を前記患者へ投与することを含む、方法。
- L−DOPA誘発性ジスキネジア(LID)の発生を低減、遅延及び/又は予防する方法であって、前記方法は、請求項1〜122のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物を、必要とする患者へ末梢投与することを含む、方法。
- 血中のL−DOPAの治療有効濃度を得る、そして/又は維持する方法であって、前記方法は、前記発現系、宿主細胞、又は医薬組成物を末梢投与することを含む、方法。
- 血中のL−DOPAの治療有効濃度を得る、そして/又は維持する方法であって、前記方法は、発現の際に、少なくとも1種の治療性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクターを末梢投与することを含み、前記少なくとも1種の治療性ポリペプチドがチロシンヒドロキシラーゼ(TH;EC1.14.16.2)ポリペプチド又はその生物活性断片若しくは変異体である、方法。
- パーキンソン病又はL−DOPA誘発性ジスキネジアなどのカテコールアミン機能障害の処置又は防護の方法であって、前記方法は、請求項1〜125のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞、又は医薬組成物発現系を末梢投与することを含む、方法。
- 前記発現系が、分離式肢灌流により投与される、請求項126に記載の方法。
- 前記分離式肢灌流が、筋肉内又は静脈内に前記発現系を注射する少なくとも1つのステップを含む、請求項127に記載の方法。
- 前記発現系、前記宿主細胞又は前記医薬組成物が、筋肉内へ少なくとも2回注射される、請求項125〜128のいずれか1項に記載の方法。
- 前記発現系、前記宿主細胞又は前記医薬組成物が、静脈へ少なくとも1回注射される、請求項125〜128のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜130のいずれか1項に記載の発現系、宿主細胞及び/又は医薬組成物を含むキット、及び使用説明書。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562200151P | 2015-08-03 | 2015-08-03 | |
US62/200,151 | 2015-08-03 | ||
PCT/EP2016/068315 WO2017021359A1 (en) | 2015-08-03 | 2016-08-01 | Systemic synthesis and regulation of l-dopa |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018522595A true JP2018522595A (ja) | 2018-08-16 |
JP2018522595A5 JP2018522595A5 (ja) | 2019-09-12 |
Family
ID=56682101
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018526302A Pending JP2018522595A (ja) | 2015-08-03 | 2016-08-01 | L−dopaの全身合成及び調節 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20190032079A1 (ja) |
EP (1) | EP3331570A1 (ja) |
JP (1) | JP2018522595A (ja) |
KR (1) | KR20180034467A (ja) |
CN (1) | CN108136048A (ja) |
CA (1) | CA2992511A1 (ja) |
RU (1) | RU2018104098A (ja) |
WO (1) | WO2017021359A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201420139D0 (en) | 2014-11-12 | 2014-12-24 | Ucl Business Plc | Factor IX gene therapy |
EP3810647A4 (en) * | 2018-04-26 | 2022-08-17 | The University of North Carolina at Chapel Hill | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF HEMOPHILIA |
WO2020023922A1 (en) * | 2018-07-27 | 2020-01-30 | The Regents Of The University Of California | Biomarker for thoracic aortic aneurysm |
US10842885B2 (en) | 2018-08-20 | 2020-11-24 | Ucl Business Ltd | Factor IX encoding nucleotides |
US20220177545A1 (en) * | 2019-03-13 | 2022-06-09 | Generation Bio Co. | Non-viral dna vectors and uses thereof for expressing fviii therapeutics |
GB2587319A (en) * | 2019-08-12 | 2021-03-31 | Healing Genes Llc | Genetic construct |
AU2021308425A1 (en) * | 2020-07-15 | 2023-02-02 | Danmarks Tekniske Universitet | Therapeutic microbes |
GB2601752A (en) * | 2020-12-08 | 2022-06-15 | Maavrx Ltd | Expression vector |
CA3226119A1 (en) * | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Giuseppe RONZITTI | Hybrid promoters for gene expression in muscles and in the cns |
WO2023049874A1 (en) * | 2021-09-24 | 2023-03-30 | Duke University | Compositions for and methods of treating and/or preventing glutaric aciduria type-i |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20020096181A (ko) * | 2001-06-18 | 2002-12-31 | 박영식 | 재조합 대장균에 의한 테리딘 화합물의 제조방법 |
JP2004520016A (ja) * | 2000-10-06 | 2004-07-08 | オックスフォード バイオメディカ(ユーケイ)リミテッド | ベクターシステム |
JP2013509890A (ja) * | 2009-11-09 | 2013-03-21 | ジーンポッド セラピューティクス アーベー | invivoでのニューロン特異的な最適化された連続DOPA合成用の新規ウイルスベクター構築物 |
JP2014532402A (ja) * | 2011-10-28 | 2014-12-08 | オックスフォード バイオメディカ (ユーケー) リミテッド | 構築物 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4522811A (en) | 1982-07-08 | 1985-06-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides |
DE3681787D1 (de) | 1985-07-05 | 1991-11-07 | Whitehead Biomedical Inst | Expression von fremdem genetischem material in epithelzellen. |
DE3852823T2 (de) | 1987-09-11 | 1995-05-24 | Whitehead Biomedical Inst | Transduktionsveränderte fibroblasten und ihre anwendung. |
US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
US5677158A (en) | 1995-06-07 | 1997-10-14 | Research Foundation Of State University Of New York | In vitro packaging of adeno-associated virus DNA |
US6451306B1 (en) | 1998-04-15 | 2002-09-17 | The Regents Of The University Of California | Methods for therapy of neurodegenerative disease of the brain |
DE69929600T2 (de) | 1998-05-27 | 2006-09-07 | Avigen Inc., Alameda | Konvektion-erhöhte verabreichung aadc-kodierende aav vektoren |
-
2016
- 2016-08-01 CA CA2992511A patent/CA2992511A1/en not_active Abandoned
- 2016-08-01 CN CN201680045737.2A patent/CN108136048A/zh active Pending
- 2016-08-01 KR KR1020187003356A patent/KR20180034467A/ko unknown
- 2016-08-01 JP JP2018526302A patent/JP2018522595A/ja active Pending
- 2016-08-01 US US15/748,145 patent/US20190032079A1/en not_active Abandoned
- 2016-08-01 WO PCT/EP2016/068315 patent/WO2017021359A1/en active Application Filing
- 2016-08-01 EP EP16750423.2A patent/EP3331570A1/en not_active Withdrawn
- 2016-08-01 RU RU2018104098A patent/RU2018104098A/ru not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004520016A (ja) * | 2000-10-06 | 2004-07-08 | オックスフォード バイオメディカ(ユーケイ)リミテッド | ベクターシステム |
KR20020096181A (ko) * | 2001-06-18 | 2002-12-31 | 박영식 | 재조합 대장균에 의한 테리딘 화합물의 제조방법 |
JP2013509890A (ja) * | 2009-11-09 | 2013-03-21 | ジーンポッド セラピューティクス アーベー | invivoでのニューロン特異的な最適化された連続DOPA合成用の新規ウイルスベクター構築物 |
JP2014532402A (ja) * | 2011-10-28 | 2014-12-08 | オックスフォード バイオメディカ (ユーケー) リミテッド | 構築物 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
GRIMA, B. ET AL. 'HUMAN MRNA FOR TYROSINE HYDROXYLASE (HTH-1)', GENBANK [ONLINE], 2005年4月18日, ACC, JPN6020033143, ISSN: 0004339610 * |
J. NEUROSCI., vol. vol.16, no.14, p.4449-4456, JPN6020033140, 1996, ISSN: 0004479062 * |
NOMURA, T. ET AL. 'HUMAN GTP CYCLOHYDROLASE I MRNA, COMPLETE CDS', GENBANK [ONLINE], 1996年10月9日,, JPN6020033144, ISSN: 0004339611 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20190032079A1 (en) | 2019-01-31 |
KR20180034467A (ko) | 2018-04-04 |
WO2017021359A1 (en) | 2017-02-09 |
EP3331570A1 (en) | 2018-06-13 |
CN108136048A (zh) | 2018-06-08 |
RU2018104098A3 (ja) | 2020-08-10 |
RU2018104098A (ru) | 2019-09-06 |
CA2992511A1 (en) | 2017-02-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2018522595A (ja) | L−dopaの全身合成及び調節 | |
AU2010316982B2 (en) | Novel viral vector construct for neuron specific continuous DOPA synthesis in vivo | |
JP2024009857A (ja) | 修飾された第ix因子、並びに、細胞、器官及び組織への遺伝子導入のための組成物、方法及び使用 | |
Choong et al. | Gene therapy for neurological disorders | |
US9265843B2 (en) | Treatment of metabolic-related disorders using hypothalamic gene transfer of BDNF and compositions therefor | |
Grisch-Chan et al. | State-of-the-art 2019 on gene therapy for phenylketonuria | |
EP3219801B1 (en) | Construct | |
KR20110086553A (ko) | 포르포빌리노겐 디아미나아제 유전자 치료 | |
Ding et al. | Correction of murine PKU following AAV-mediated intramuscular expression of a complete phenylalanine hydroxylating system | |
JP2005522517A (ja) | 組み換えアデノ随伴ウイルスビリオンを使用したアミノ酸代謝に関与する酵素を搬送するための組成物、およびそのようなアデノ随伴ウイルスビリオンを用いてアミノ酸代謝疾患を治療するための使用方法 | |
JP2022523632A (ja) | CRISPR-Casによる標的化された核内RNA切断及びポリアデニル化 | |
EP3126506A1 (en) | Gene expression system and regulation thereof | |
Gong et al. | Intrathecal adeno-associated viral vector-mediated gene delivery for adrenomyeloneuropathy | |
Björklund et al. | Scientific rationale for the development of gene therapy strategies for Parkinson's disease | |
Carlsson et al. | Restoration of the striatal dopamine synthesis for Parkinson's disease: viral vector-mediated enzyme replacement strategy | |
WO2010055290A1 (en) | Method | |
Fröhlich et al. | Dual-function AAV gene therapy reverses late-stage Canavan disease pathology in mice | |
US20200263206A1 (en) | Targeted integration systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies | |
US20100303790A1 (en) | Use of biliverdin reductase (bvr) and bvr peptide fragments to treat coronary disorders | |
Viecelli et al. | Challenges of experimental gene therapy for urea cycle disorders | |
WO2021064162A1 (en) | Treatment of diseases caused by frame shift mutations | |
Laufs et al. | Retrovirus‐Mediated Double Transduction of the GTPCH and PTPS Genes Allows 6‐Pyruvoyltetrahydropterin Synthase‐Deficient Human Fibroblasts to Synthesize and Release Tetrahydrobiopterin | |
KR20230044019A (ko) | 뇌건황색종증 치료용 cyp27a1 발현 유전자 치료 벡터 | |
WO2022232442A2 (en) | Multiplex crispr/cas9-mediated target gene activation system | |
CA3126886A1 (en) | Liver-specific inducible promoters and methods of use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190801 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190801 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200907 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210405 |