JP2013156262A - 生体サンプル処理用組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

【課題】効果的に生体サンプルを処理するために有用な方法及び組成物の提供。
【解決手段】組織片のような生体サンプルを、組織化学的方法を使用して処理し、それが顕微鏡により観察される時にサンプル中に観察可能な細胞及び非細胞質特徴物の鮮明度を強化するために、脂肪族化合物を包含するカバースリップ組成物及び、カバースリップ組成物を使用して、サンプルをカバースリップする方法。
【選択図】図１

Description

本発明は、顕微鏡検査のための細胞及び組織のような生体サンプルを処理するための組成物及び方法を対象にする。更に具体的には、本発明は、染色された細胞又は組織サンプル中に観察可能な細胞の詳細のコントラスト、カラー・バランス及び量を増加することができる組成物及び方法を対象にする。更に、本発明は、それらからの溶媒の蒸発を促進する条件下で、高温で処理される生体サンプルを保存しそして／又は回復することができる組成物及び方法を対象とする。

大部分の細胞及び組織はそれらの形態学の詳細な顕微鏡分析のための十分な固有の色彩及びコントラストが欠乏している。その結果、細胞及び組織は、細胞及び非細胞質間の特徴間のコントラストを高めるために、１種又は複数の着色染色剤で定常的に染色される。染色により示される特徴は、広範な疾患及び状態を診断するために使用される。

多数の典型的な染色法に対する随伴物として、細胞又は組織サンプルは種々の溶媒及び溶媒混合物（複数の溶媒）と接触される。溶媒は例えば、パラフィン包埋サンプルを脱パラフィン化し、非極性染色剤で処理するためのサンプルを作製し、又はカバースリップするためのサンプルを作製するために使用される。エタノール、リモネン、キシレン及び洗剤水溶液のような多数の溶媒は細胞膜から脂肪族化合物を抽出する傾向をもつ。その結果、それらが特に溶媒を蒸発させる補助のために高温で処理される場合に、処理期間中に細胞の形態が変化し、細胞が損傷をより受け易くなる可能性がある。従って、処理期間中に細胞及び組織サンプルを損傷から保護する補助をし、そして損傷し又は変化した細胞構造物を回復する補助をすることができる方法及び組成物の需要が存在する。更に、サンプル中に観察可能な細胞の細部のコントラスト、カラー・バランス及び量を増加することにより、組織学的染色サンプルの臨床利用性を増加する方法及び組成物の需要が存在する。

染色された生体サンプルの観察可能な細胞及び組織の形態の保存、回復及び／又は強化を容易にするための、脂肪族化合物を包含する組成物及び方法が開示される。例えば、当該組成物及び方法は、細胞及び非細胞質構造物の増加された明確度及び鮮明度を提供し、それにより観察者が、より容易に異なる組成物要素を識別し、サンプル中の微細な解剖学的細部を視覚化することができるようにさせる。膜及び核の特徴物のような細胞構造物は、脂肪族化合物と接触されたＨ＆Ｅ染色組織片において明白に可視的になることができる。更に、Ｈ＆Ｅ染色サンプルにおけるコントラスト及びカラー・バランスは、本開示に従って改善することができる。詳細の強化並びにコントラスト及びカラー・バランスにおける改善は、染色された生体サンプルからの診断を実施する際の補助になることができる。

１つのアスペクトにおいて、細胞及び非細胞質の鮮明度を増加し、そしてサンプルのコントラスト及びカラー・バランスを改善する、生体サンプルを処理するための方法が開示される。特定の態様において、該方法は、染色されたサンプルに、カバースリップ溶媒及び脂肪族化合物を包含するカバースリップ組成物を適用する方法を包含する。一旦カバースリップ組成物が適用されると、カバースリップがサンプル上に配置される。カバースリップ用組成物中に包含される脂肪族化合物により、カバースリップ溶媒単独を使用してカバースリップされる実質的に同様なサンプルに比較して、増加したコントラスト並びに細胞及び非細胞質の鮮明度、増加したコントラスト及び改善したカラー・バランスを認めることができる。染色される各スライドに対して新鮮な試薬を使用する自動化染色法と組み合わせて使用されるので、自動化工程期間（カバースリップ工程におけるような）中のサ
ンプルの脂肪族化合物との接触が、増加した臨床利用性をもつスライドを提供することができる。

もう１つのアスペクトにおいて、カバースリップ用溶媒及び脂肪族化合物を包含するカバースリップ用組成物が開示される。カバースリップ用組成物中の脂肪族化合物は洗剤の脂肪族化合物でも又は非洗剤脂肪族化合物であってもよい。有用な非洗剤の脂肪族化合物は、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドの１種又は複数を包含する。

まだ更なるアスペクトにおいて、サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下で、生体サンプルを高温にさらす、顕微鏡スライド上の生体サンプルを処理する方法が開示される。このアスペクトにおいて、該方法は、組織化学的工程によりサンプルを処理して、染色サンプルを提供し、サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらし、そしてサンプルを脂肪族化合物と接触させる方法を包含する。特定の態様において、サンプルは組織化学的工程中に１種又は複数の脂質抽出溶媒にさらされ、生体サンプルは脂肪族化合物で処理されて、工程中に除去されるサンプルの脂質含量の少なくとも一部を置き換える。サンプルの「再脂質化」は、処理期間に見えにくい組織の形態を回復し、そしてサンプルを高温及び蒸発条件に暴露することにより誘発される人口産物及び形態の変化の予防（及び／又は排除）を包含する多数の利点を提供する。脂肪族化合物の添加は更に、明視野顕微鏡により観察可能な細胞及び非細胞質の鮮明度を同時に増加することができる。

本発明の更なるアスペクトは、以下の概説後に提供される略語及び用語に関して進行する、以下の、限定しない説明及び実施例により具体的に示される。

Ｉ．概説
１つのアスペクトにおいて、染色された生体サンプルに観察可能な細胞及び非細胞質の鮮明度を強化し、そして／又は、特にサンプルがまた、サンプルからの溶媒の蒸発を促進条件にさらされる場合に、サンプルを高温に暴露する方法により誘発される人口産物の数を減少させるための方法が開示される。該方法は、サンプルを、洗剤の脂肪族化合物でも又は非洗剤の脂肪族化合物であってもよい脂肪族化合物と接触させる方法を包含する。

１つの態様においては、サンプルを１種又は複数の組織学的染色剤と接触させ、そして、サンプルを、本質的に脂肪族化合物及び低級アルカノール又はカバースリップ溶媒（幾つかの染色プロトコールにおいてはカバースリップ工程の代りに、例えば洗浄工程中でも使用することができると考えられる）のいずれかよりなる、脂肪族化合物の組成物と接触させる（カバースリップ工程期間のような）方法を包含する、生体サンプルを染色する方法が開示される。組成物中の脂肪族化合物は、特定の態様においては、約２０℃で約１．０ｇ／ｍＬ未満の水溶性をもち、そして更に特には非洗剤脂肪族化合物であることができる。他の特定の態様においては、生体サンプルはワックス包埋生体サンプルであってもよく、そしてサンプルを脂肪族化合物組成物と接触させる方法は、サンプルを脱ワックスした後に実施することができる。更に他の特定の態様においては、サンプルを１種又は複数の組織学的染色剤と接触させる方法は本質的には、生体サンプルをヘマトキシリン及びエオシンと接触させる方法よりなる。該方法は手動でも自動化されてもよく、複数のサンプルが染色される場合は、各サンプルに対して新鮮な試薬を使用することができる。脂肪族化合物の有用な群の特定の例は、洗剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドを包含する。特定の態様においては、脂肪族化合物は１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０脂肪アルコール、例えば１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０不飽和脂肪アルコールであることができる。典型的には、脂肪族化合物組成物は約０．５％〜約３５％の脂肪族化合物を包含するであろう。他の
特定の態様においては、脂肪族化合物は１種又は複数の脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素又はテルペン（リモネンのような）に溶解される。

もう１つの態様において、開示された方法は、サンプルに、強化されたコントラスト並びに細胞及び非細胞質の鮮明度を観察することができるように、顕微鏡スライド上に、染色された生体サンプル（組織学的染色組織又は細胞学的サンプルのような）をカバースリップする方法である。開示された方法の特定の態様においては、脂肪族化合物は１種又は複数の脂肪アルコール、洗剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドを含んでなる。特定の態様においては、脂肪族化合物は非洗剤の脂肪族化合物である。

開示されたカバースリップの態様は、サンプルにカバースリップ用組成物を適用し、そして組成物が適用されたサンプルをカバースリップする方法を包含する。カバースリップ用組成物はカバースリップ溶媒（脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素及びテルペンの１種又は複数のような）及び脂肪族化合物を含んでなる。この方法により処理されると、カバースリップされたサンプルは、カバースリップ溶媒単独を使用してカバースリップされる実質的に同様なサンプルに比較して、増加したコントラスト並びに細胞及び非細胞質の鮮明度を示す。特定の態様においては、カバースリップ用溶媒はアルカン、アルカン、リモネン、キシレン及びトルエンの１種又は複数の混合物を包含する。脂肪族化合物は約０．５％〜約５０％間のいずれの濃度でもカバースリップ用溶媒中に溶解することができるが、典型的には脂肪族化合物は約０．５％〜約３５％の濃度で、例えば約１％〜約２５％の濃度でカバースリップ溶媒に溶解される。特定の態様においては、脂肪族化合物は約２０℃において約１ｇ／Ｌ未満の水溶性をもつ脂肪族化合物であることができる。他の特定の態様においては、脂肪族化合物は約２００℃を超える沸点をもつことができる。

該方法は手動で実施することができ、１つの自動化工程又はそれらのあらゆる組み合わせ物に取り入れることができ、そして該方法は「前以て糊付けされた」カバースリップとともに使用することができるか又はカバースリップ用組成物が更に接着剤を包含することができる。典型的には、カバースリップ用組成物は組織の屈折率に近い屈折率をもつであろう。適したカバースリップ用接着剤はシアノアクリレート糊及び光線硬化性接着性ポリマー（可視光線及びＵＶ−硬化性接着剤のような）を包含する。市販されているカバースリップ糊は例えばＴｅｄ Ｐｅｌｌａ，Ｉｎｃ．（Ｒｅｄｄｉｎｇ，ＣＡ）から入手することができる。ＵＶ−硬化性接着剤はＩｎｓｔｒｕｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手できるＣｕｒｅＭｏｕｎｔ^ＴＭを包含し、そして種々のＵＶ−及び可視光線−硬化性ポリマーがＨｅｎｋｅｌ Ｌｏｃｔｉｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＣＴ）から入手できる。

もう１つのアスペクトにおいて、それぞれが前記の通りであることができるカバースリップ溶媒及び脂肪族化合物を包含するカバースリップ組成物が開示される。特定の態様において、カバースリップ組成物は本質的にカバースリップ溶媒及び脂肪族化合物よりなる。もう１つの特定の態様において、カバースリップ溶媒はカバースリップ接着剤を包含する。更にもう１つの特定の態様において、カバースリップ組成物は本質的にカバースリップ溶媒、脂肪族化合物及びカバースリップ糊よりなる。

もう１つのアスペクトにおいては、組織化学的方法（例えば、Ｈ＆Ｅ染色法のような組織学的染色法）を使用してサンプルを処理して、染色された生体サンプルを提供し、サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらし、そして、サンプルを高温及び蒸発条件下にさらす前、その間又はその後に、サンプルを脂肪族化合物と接触させる方法を包含する、生体サンプルを処理する方法が開示される。サンプルはサンプルの少なくとも一部の上に横たわる溶媒の少なくとも一部を除去するために十分な時間、暴露
することができ、そして／又はサンプルは、工程中サンプル中に吸収された溶媒の少なくとも一部を除去するために十分な時間暴露することができる。脂肪族化合物は前記のとおりであり、蒸発工程中の損傷を防止する補助をするためにサンプル上又はサンプル中に実質的に滞留することができるかあるいは、蒸発工程中にサンプルに対して与えられた損傷を修復するために蒸発工程後に添加することができる。脂肪族化合物は、エタノールのような低級アルコールのような揮発性溶媒がサンプルから急速に蒸発される高温において、蒸発工程中又はその後にサンプルを保護又は修復するために使用することができる。

サンプルから溶媒の蒸発を促進する高温及び条件は、顕微鏡スライド上に固定されたサンプル上の、ガス交換の受動的（対流空気流のような）又は能動的手段と組み合わせたあらゆるタイプのオーブン又は加熱装置により提供することができる。サンプルから溶媒の蒸発を促進する条件は、蒸発手段を通るサンプル中及び／又はサンプル上の溶媒量の正味の減少を提供する。特定の態様において、サンプルは、場合により蒸発工程に対する補助物として、サンプル表面上にガス流（空気流のような）を能動的に促進するための手段（ファン又は圧縮ガス源のような）と組み合わせて、対流オーブン中でそして／又は輻射ヒーターを使用して乾燥される。

典型的には、サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらす方法は、サンプルから少なくとも２５％の溶媒、例えば少なくとも５０％の溶媒、少なくとも９０％の溶媒、又は少なくとも９５％の溶媒、を除去する方法を包含する。サンプル上に横たわる液相中の溶媒は実質的に除去することができるが、サンプルにより吸収された溶媒は一部のみが除去される。溶媒が蒸発工程によりサンプル自体から有意に除去される場合に（サンプル及び恐らくは関連人工産物の「乾燥」をもたらす）、サンプルを脂肪族化合物と接触させる方法は、サンプルの細胞及び非細胞質構造物を保護又は回復するために特に有用であることができる。サンプルから一定量の溶媒を除去するために有用な温度及び加熱時間は実証的方法により容易に決定することができる。

特定の態様において、蒸発工程中にサンプルから蒸発される溶媒は、低級アルカノール（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノール又はネオ−ペンタノールのようなＣ１−Ｃ５第一級、第二級又は第三級アルコール）及び／又はテルペン（リモネンのような揮発性テルペンのような）を含んでなることができる。多数の特定の溶媒化合物がサンプル中及び／又は上に存在する時は、それらの相対的揮発性（蒸発圧）に従って、１種又は複数の特定の溶媒を優先的に除去することができ、ここで、より高い揮発性（及び一定の温度における蒸気圧）をもつ溶媒が優先的に除去される。サンプルに含有される水もまた、このような工程により除去することができるが、典型的には、多数のサンプル処理プロトコールにおいては、より揮発性の溶媒が利用されるので、除去される程度は低いであろう。脂肪族化合物自体は典型的には、水より実質的に低い蒸気圧を有し、除去される溶媒及び、従って、蒸発工程中に存在する場合はサンプル上及び／又は中に滞留するであろう。

高温及び溶媒の蒸発を促進する条件にさらされるサンプルを保護又は回復するために使用される脂肪族化合物は典型的には、溶液中に、例えば、アルカノール（例えばエタノール）、脂肪族炭化水素（例えばアルカン）、テルペン（リモネンのような）又は芳香族炭化水素（例えばトルエン又はキシレン）のような有機溶媒中の脂肪族化合物の溶液中に適用される。揮発性エーテル及びエステルのような他の有機溶媒は特定の態様に使用することができる。

概括的に、種々の理由のために、サンプルの被覆並びに保護、回復及び鮮明度の１種又は複数の強化を提供するが、カバースリップ硬化工程（例えば、カバースリップ用糊が適当に硬化することを妨げることにより）、又はスライド上に望ましくない油状残留物を残
すことを妨げない、サンプル上に一定料の脂肪族化合物を残す工程を使用することが望ましい。従って、特定の態様において、本開示に従う方法は、脂肪族化合物がカバースリップの前又はその期間中に添加される工程の場所及びその量にかかわらず、カバースリップ時にスライド上に少なくとも約１μＬ未満、しかし約３０μＬ未満（例えば、約１０μＬ未満、又は約５μＬ未満のような約２０μＬ未満）を残すであろう。従って、より大量の脂肪族化合物が染色工程のある地点で添加される場合は、エタノール／水の溶液、界面活性剤溶液、エタノール、リモネン等のような脂肪族化合物が可溶性である溶媒を使用して、１回又は数回のすすぎ工程により、いくらかの脂肪族化合物を除去することが望ましいかも知れない。脱パラフィン化を包含する工程においては、脱パラフィン化溶媒がサンプルから脂肪族化合物を除去する傾向をもつため、脱パラフィン化後にサンプルを脂肪族化合物と接触させることが望ましいかも知れない。同様に、サンプルがエタノールで脱水される工程においては、添加される脂肪族化合物が脱水溶媒により除去されないように、脱水工程後にサンプルを脂肪族化合物と接触させることが望ましいかも知れない。特定の態様において、サンプルに対する脂肪族化合物の適用は、パラフィン包埋サンプルを脱パラフィン化後に、脱パラフィン化サンプルが脱パラフィン化溶媒（洗剤溶液、リモネン、アルカン又はアルカンの混合物によるような）を除去された後に、サンプルを組織化学的方法を使用して染色された後に、カバースリップ直前又はカバースリップ期間中の溶媒交換工程中に、実施することができる。

サンプルが蒸発工程中に暴露される高温は典型的には、約３５℃〜約１４０℃の間、より典型的には約４５℃〜約１００℃、例えば約４５℃〜約７０℃の間である。脂肪族化合物は典型的には、高温で低い蒸気圧（例えば、約２００トール未満の蒸気圧、約１００トール未満の蒸気圧又は約５０トール未満の蒸気圧）をもつであろう。

更にもう１つのアスペクトにおいて、組織サンプルを組織学的染色溶液と接触させ、そしてサンプルを脂肪族化合物と接触させる方法を包含する、脱パラフィン化（以前にパラフィン包埋された）組織サンプルの強化された組織学的染色の方法が開示される。１つの態様において、サンプルを組織学的染色溶液と接触させる方法は、サンプルを本質的にヘマトキシリン染色剤よりなる溶液と接触させ、そしてサンプルを本質的にエオシンよりなる溶液と接触させる方法よりなる。

開示された方法のいくつかの態様に認められる増加した鮮明度は、観察者に組織要素をよりよく識別させ、そして微細な微細解剖学的細部を可視化させる。更に、組織特徴物に鮮明な輪郭を与えて、明瞭な視覚的効果を形成する染色のコントラスト及びカラー・バランスにおける全体的改善をもたらすことができる。増加した鮮明度の効果はすべての組織及び細胞タイプで明白であることができるが、特に、Ｈ＆Ｅ染色に対する以下の組織学的背景において特に著しい：
１． 細胞膜：すべての細胞の細胞膜が強調され、明確に鮮明化され、細胞の境界の明白な識別を可能にする。その効果は前立腺細葉及びエクリン汗腺及び胆管上皮細胞の分泌細胞のような上皮細胞で特に顕著である。
診断的適用：パラガングリオン細胞腫及び褐色細胞腫、腎臓色素嫌性癌。
２．核の細部：核特徴物を、微細な詳細を示すクロマチン及びヘテロクロマチンで強化する。核小体は、存在する時は、適当な染色性を伴い鮮明で明白である（例えばホジキンリンパ腫における好酸性の核小体）。有糸分裂は明白に可視であり、顕著である。
診断的適用：高度の前立腺上皮内腫瘍形成（ＰＩＮ）、前立腺癌、形成不全（食道形成不全及び頸部形成不全）の評価及び等級化、甲状腺乳頭状癌。
３．平滑筋及びコラーゲン繊維：平滑筋及びコラーゲンが個々の繊維（例えば胃腸平滑筋、皮膚の毛嚢周囲の緩いコラーゲン状ストロマ）の明確な可視化を許す光沢をもつ強調を示す。基底膜のコラーゲンが目立って強調され、明確に鮮明にされる（例えばエクリン腺基底膜）。
診断的適用：インサイチューの癌からの微細浸潤癌の分染（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）。
４．ケラチン：ケラチンの好酸球性染色及び視覚化が強化される。染色は早期ケラチン化のより感受性の検出を提供する。
診断的適用：分染の弱い偏平上皮細胞癌の診断。
５．非細胞質構造物：以下の非細胞質構造が強調され、他の細胞成分と明確に識別されて見える：
ａ．繊毛
診断的適用：ファロピウス管癌、卵管化生性癌。
ｂ．ブラシ縁
診断的適用：十二指腸生検の評価。
ｃ．偏平上皮内細胞ブリッジ
診断的適用：区別の乏しい偏平上皮細胞癌。
ｄ．核溝
診断的適用：乳頭状甲状腺癌及び卵巣顆粒膜細胞腫瘍。

ＩＩ．略語及び用語
Ｈ＆Ｅ−ヘマトキシリン及びエオシン
ＴＮＣ−多すぎて計数不能
用語「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈がそれ以外を明記しない限り、単数及び複数の対象双方を包含する。

用語「生体サンプル」は、動物のような生体学的実体から得られる又は由来するあらゆるサンプルを表す。生体サンプルの例は、細胞学的サンプル、組織サンプル及び体液を包含する。生体サンプルの限定しない特定の例は、血液、尿、射精前精液、乳頭吸引物、精液、乳、喀痰、粘液、胸膜液、骨盤液、洞液（ｓｉｎｏｖｉａｌ ｆｌｕｉｄｓ）、腹水、体腔洗浄物、眼の洗浄液、皮膚削り屑、頬内塗抹標本、膣内塗抹標本、パップスメア、直腸塗抹標本、吸引物、針生検、例えば手術又は生検により得られる組織片、血漿、血清、髄液、リンパ液、汗、涙、唾液、腫瘍、器官及びインビトロの細胞又は組織培養物から得たサンプルを包含する。典型的にはサンプルは、固定され、処理されて水を除去され、そして組織片に切断するためのパラフィン又はその他の適切なワックス状物質中に包埋された生検サンプルであろう。

用語「カバースリップする方法」は手動の又は自動化された方法のいずれかで顕微鏡のスライドに付着されたサンプル上にカバースリップを配置する動作を表す。

用語「カバースリップ用液」は、顕微鏡スライドの表面にカバースリップを接着させるために使用される接着剤を溶解する液体（実質的には非極性の有機液体）を表す。幾つかの態様において、カバースリップ溶媒は更に、カバースリップ接着剤（糊あるいは可視光線−又はＵＶ−硬化性ポリマーの接着剤のような光線硬化性ポリマーのような）を包含して、カバースリップ組成物（特定の態様においては、更に液体の化合物を包含することができる）を形成することができるが、「前以て糊付けされた」カバースリップが使用される場合は、カバースリップ溶媒が前以て糊付けされたカバースリップ上の接着剤を溶解して、インサイチューでカバースリップ用組成物を形成するので、カバースリップ用溶媒中に前以て接着剤を包含する必要はないかも知れない。カバースリップ溶媒の例は、芳香族炭化水素（キシレン及びトルエンのような）、脂肪族炭化水素（例えば、Ｃ６〜Ｃ１０アルカン及びアルケン及びそれらの混合物のようなアルカン及びアルケン）、テルペン（リモネンのような）並びにそれらの組み合わせ物を包含する。有利には、カバースリップ溶媒は揮発性であり、それが室温以上で有意な蒸気圧を有し、そのため、接着剤（それは溶媒中に包含されても、又は前以て糊付けされたカバースリップに接着された接着剤との溶
媒の接触時に形成されてもよい）を包含するカバースリップ組成物から蒸発し、その接着剤がカバースリップを基材に接着させるカバースリップ接着剤（及びいくつかの態様においては、脂肪族化合物）を残すであろうことを意味する。カバースリップ溶媒の前記の例はすべて揮発性である。

用語「洗剤」は実質的な水溶性（２０℃で約０．０５ｇ／Ｌを超える、例えば２０℃で約０．５ｇ／Ｌを超える、又は２０℃で約１ｇ／Ｌを超えるような）を有し、有意な洗浄力（有意な量の、水中の油のような非極性物質を可溶化する洗浄性又は洗浄力）を示すセッケン（脂肪酸のアルカリ金属塩である）以外の界面活性化合物を表す。セッケンと異なり、洗剤は「硬水」中で見られるようなカルシウムイオンの存在下で典型的には沈殿しない。洗剤は非イオン性、カチオン性、アニオン性又は両性イオン性であってもよく、幾つかの洗剤の混合物であってもよい。洗剤の代表的群は、アルコールエーテルスルフェート、アルコールスルフェート、アルカノールアミド、アルキルスルホネート、アミンオキシド、両性洗剤、アニオン洗剤、ベタイン誘導体、カチオン洗剤、ジスルホネート、ドデシルベンゼンスルホン酸、エトキシル化アルコール、エトキシル化アルキルフェノール、エトキシル化脂肪酸、グリセロールエステル屈水性誘発物質、ラウリルスルフェート、モノ及びジグリセリド、非イオン洗剤、ホスフェートエステル、第四級洗剤及びソルビタン誘導体を包含する。代表的非イオン洗剤はＢｉｇＣＨＡＰ（Ｎ，Ｎ−ビス（３−（Ｄ−グルコンアミド）プロピル］コールアミド）、ビス（ポリエチレングリコールビス［イミダゾイルカルボニル］）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）３０（ポリオキシエチレン４ラウリルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）３５（ポリオキシエチレン２３ラウリルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）５２（ポリオキシエチレン２セチルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）５６（ポリオキシエチレン１０セチルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）５８（ポリオキシエチレン２０セチルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）７２（ポリオキシエチレン２ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）７６（ポリオキシエチレン１０ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）７８（ポリオキシエチレン２０ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）９２（ポリオキシエチレン２オレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）９７（ポリオキシエチレン１０オレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）９８（ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ^（Ｒ）７００（ポリオキシエチレン１００ステアリルエーテル）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ^（Ｒ）ＥＬ（ヒマシ油／エチレンオキシドポリエーテル）、デカエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＣＡ−８）、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＣＡ−１０）、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、イソトリデシル−ポリ（エチレングリコールエーテル）_ｎ、Ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、ｎ−デシル−α−Ｄ−グルコピラノシド、デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−ドデカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ｎ−ドデシル−α−Ｄ−マルトシド、ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトシド、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ｎ−ヘキサデシル−β−Ｄ−マルトシド、ヘキサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノオクダデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＡ−６３０（オクチルフェニル−ポリエチレングリコール）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＡ−２１０（ポリオキシエチレン（２）イソオクチルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＡ−５２０（ポリオキシエチレン（５）イソオクチルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＯ−６３０（ポリオキシエチレン（９）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＯ−７２０（ポリオキシエチレン（１２）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＯ−８９０（ポリオキシエチレン（４０）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＣＯ−９９０（ポリオキシエチレン（１００）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ^（Ｒ）ＤＭ−９７０（ポリオキシエチレン（１５０）ジノニルフェニルエーテル）、メチル−６−Ｏ−（Ｎ−ヘプチルカルバモイル−）−．アルファ−．Ｄ−グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミン、オクタエ
チレングリコール・モノデシルエーテル、オクタエチレングリコール・モノドデシルエーテル、オクタエチレングリコール・モノヘキサデシルエーテル、オクタエチレングリコール・モノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコール・モノテトラデシルエーテル、オクチル−．ベータ．−Ｄ−グルコピラノシド、ペンタエチレングリコール・モノデシルエーテル、ペンタエチレングリコール・モノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコール・モノヘキサデシルエーテル、ペンタエチレングリコール・モノヘキシルエーテル、ペンタエチレングリコール・モノオクダデシルエーテル、ペンタエチレングリコール・モノオクチルエーテル、ポリエチレングリコール・ジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルＷ−１、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン１００ステアレート、ポリオキシエチレン２０イソヘキサデシルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアレート、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリオキシエチレン８ステアレート、ポリオキシエチレンビス（イミダゾリルカルボニル）、ポリオキシエチレン２５プロピレングリコールステアレート、サポニン、Ｓｐａｎ^（Ｒ）２０（ソルビタンモノラウレート）、Ｓｐａｎ^（Ｒ）４０（ソルビタンモノパルミテート）、Ｓｐａｎ^（Ｒ）６０（ソルビタンモノステアレート）、Ｓｐａｎ^（Ｒ）６５（ソルビタントリステアレート）、Ｓｐａｎ^（Ｒ）８０（ソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ^（Ｒ）８５（ソルビタントリオレエート）、あらゆる形態のＴｅｒｇｉｔｏｌ（テルギトール）［１５−Ｓ−５型、１５−Ｓ−７、１５−Ｓ−９、１５−Ｓ−１２、１５−Ｓ−３０、ＮＰ−４、ＮＰ−７、ＮＰ−９、ＮＰ−１０、ＮＰ−４０、ＮＰＸ（Ｉｍｂｅｎｔｉｎ−Ｎ／６３）、ＴＭＮ−３（ポリエチレングリコールトリメチルノニルエーテル）、ＴＭＮ−６（ポリエチレングリコール・トリメチルノニルエーテル）、ＴＭＮ−１０（ポリエチレングリコールトリメチルノニルエーテル）、ＭＩＮ
ＦＯＡＭ １ｘ及びＭＩＮ ＦＯＡＭ ２ｘを包含する］、テトラデシル−．ベータ．−Ｄ−マルトシド、テトラエチレングリコール・モノデシルエーテル、テトラエチレングリコール・モノドデシルエーテル、テトラエチレングリコール・モノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコール・モノデシルエーテル、トリエチレングリコール・モノドデシルエーテル、トリエチレングリコール・モノヘキサデシルエーテル、トリエチレングリコール・モノオクチルエーテル、トリエチレングリコール・モノテトラデシルエーテル、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＣＦ−２１、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＣＦ−３２、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＤＦ−１２、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＤＦ−１６、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＧＲ−５Ｍ、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｎ−１０１（ポリオキシエチレン分枝ノニルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＱＳ−１５、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＱＳ−４４、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）ＲＷ−７５（ポリエチレングリコール２６０モノ（ヘキサデシル／オクタデシル）エーテル及び１−オクタデカノール）、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−１００（ポリエチレングリコール・ｔｅｒｔ−オクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−１０２、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−１５、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−１５１、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−２００、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−２０７、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−１６５、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−３０５、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−４０５（ポリオキシエチレン（４０）イソオクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−４０５還元（ポリオキシエチレン（４０）イソオクチルシクロヘキシルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−４５（ポリエチレングリコール４−ｔｅｒｔ−オクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ^（Ｒ）Ｘ−７０５−７０、あらゆる形態のＴＷＥＥＮ^（Ｒ）（ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）２０（ポリオキシエチレンソルビタン・モノラウレート）を包含する）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）２１（ポリオキシエチレンソルビタン・モノラウレート）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン・モノパルミテート）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）６０（ポリエチレングリコールソルビタン・モノステアレート）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）６１（ポリエチレングリコールソルビタン・モノステアレート）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）６５（ポリオキシエチレンソルビタン・トリステアレート）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）８０（ポリオキシエチレンソルビタン・モノオレエート）、ＴＷＥＥＮ^（Ｒ）８１（ポリオキシエチレンソルビタン・モノオレエート）並びにＴＷＥＥＮ^（Ｒ）８５（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン・トリオレ
エート）、チロキサポール（ホルムアルデヒド及びオキシランとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノールポリマー）並びにｎ−ウンデシルβ−Ｄ−グルコピラノシドを包含する。代表的アニオン洗剤は、ケノデオキシコール酸、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、ジギトニン、ジギトキシゲニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミンＮ−オキシド、ドキュセート・ナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリソコール酸３−スルフェート二ナトリウム塩、グリコリソコール酸エチルエステル、Ｎ−ラウロイルサルコシン、リチウムドデシルスルフェート、ルゴール（ヨウ素ヨウ化カリウム）、Ｎｉａｐｒｏｏｆ（２−エチルヘキシルスルフェートナトリウム塩）、Ｎｉａｐｒｏｏｆ４（７−エチル−２−メチル−４−ウンデシルスルフェーナトリウム塩）、場合により置換されていてもよいアルキルスルホネート塩（１−ブタンスルホネート、ペンタンスルホネート、ヘキサンスルホネート、１−オクタンスルホネート、１−デカンスルホネート、１−ドデカンスルホネート、１−ヘプタンスルホネート、１−ヘプタンスルホネート、１−ノナンスルホネート、１−プロパンスルホネート及び２−ブロモエタンスルホネートの塩、特にナトリウム塩を包含する）、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、場合により置換されていてもよいナトリウムドデシルスルフェート、ナトリウムオクチルスルフェート、ナトリウムタウロコレート、ナトリウムタウロケノデオキシコレート、ナトリウムタウロヒオデオキシコレート、タウロリソコール酸３−スルフェート二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、Ｔｒｉｚｍａ^（Ｒ）ドデシルスルフェート、ウルソデオキシコール酸を包含する。アニオン洗剤は酸又は塩形態あるいは２種の組み合わせ物で提供することができる。代表的なカチオン洗剤は、アルキルトリメチルアンモニウム・ブロミド、ベンズアルコニウム・クロリド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム・クロリド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム・クロリド、ベンジルドデシルジメチルアンモニウム・ブロミド、ベンジルトリメチルアンモニウム・テトラクロロヨーデート、ジメチルジオクタデシルアンモニウム・ブロミド、

ドデシルエチルジメチルアンモニウム・ブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウム・ブロミド、エチルヘキサデシルジメチルアンモニウム・ブロミド、Ｇｉｒａｒｄ’ｓ試薬Ｔ、ヘキサデシルトリメチルアンモニウム・ブロミド、Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−タロー−１，３−ジアミノプロパン、トンゾニウム・ブロミド及びトリメチル（テトラデシル）アンモニウム・ブロミドを包含する。代表的な両性イオン洗剤はＣＨＡＰＳ（３−｛（３−コールアミドプロピル）−ジメチルアンモニオ｝−１−プロパン−スルホネート）、ＣＨＡＰＳＯ（３−｛（３−コールアミドプロピル）ジメチル−アンモニオ｝−２−ヒドロキシ−１−プロパン−スルホネート）、３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホネート、３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホネート、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルミリスチルアンモニオ）プロパンスルホネート、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタデシルアンモニオ）プロパンスルホネート、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルオクチルアンモニオ）プロパンスルホネート及び３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルパルミチルアンモニオ）プロパンスルホネートを包含する。２種以上の洗剤の組み合わせ物並びに１種以上の洗剤及び１種以上の他の脂肪族化合物の組み合わせ物もまた想定される。洗剤は知られた方法を使用して合成することができるか又は例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．から購入することができる。

用語「高温」は約２５℃を超える温度、より典型的には約４０℃でを超える温度又は約４５℃を超える温度すら、のような約３５℃を超える温度を表す。特定の態様においては、高温は約３５℃〜約１４０℃の温度、例えば約４０℃〜約１２０℃の温度を表す。特定の態様においては、高温は約４０℃〜約９０℃の温度である。

語句「サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらす方法」は、サンプルからの溶媒の除去を促進する高温及びガス流（例えば、サンプル表面上の強制
された又は受動的空気流）の組み合わせを表す。このような条件下でサンプルを高温に暴露する方法はサンプル上に横たわる溶媒の少なくとも一部を除去し、そして／又は処理中サンプル中を貫通した溶媒の少なくとも一部を除去するために十分な時間（特定の高温において）実施することができる。サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下におけるサンプルの高温への暴露は、例えば輻射ヒーター又は対流オーブンにより達成することができる。サンプルからの溶媒の蒸発を促進するために使用される輻射ヒーター又は対流オーブンはサンプルの表面上の受動的対流ガス流を促進し、そして／又はサンプル上にガス流を強制的に流す手段（ファン又は圧縮ガス源のような）を包含することができる。

用語「脂肪酸」は約６〜約３５個の炭素原子（酸素又は窒素のような更なるヘテロ原子を伴っても又は伴わなくてもよい線状、分枝及び／又は環状構造物に配列することができる）を有する脂肪族カルボン酸又はその塩（そのうち、アルカリ金属塩がセッケンである）を表す。脂肪酸は、飽和及び不飽和脂肪酸を包含する。不飽和脂肪酸は、モノエン脂肪酸、ポリエン脂肪酸（メチレン−妨害、ポリメチレン−妨害、共役及びアレン酸を包含する）及びアセチレン脂肪酸（タリル酸、ステアロール酸、サンタルビン酸、キシメニン酸、６，９−オクタデセニン酸、ピルリン酸、クレペニン酸及びヘイステリン酸のような）を包含する。脂肪酸の例は、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸、ウンデシレン酸、水素化動物脂肪酸、水素化植物脂肪酸及び三重プレス（ｔｒｉｐｌｅ−ｐｒｅｓｓ）脂肪酸を包含する。包含脂肪酸の例はオクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ノナデカン酸、エイコサン酸、ドコサン酸、テトラコサン酸、ヘキサコサン酸、ヘプタコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸、ドトリアコンタン酸、トリトリアコンタン酸、テトラトリアコンタン酸及びペンタトリアコンタン酸を包含する。不飽和脂肪酸の例は、オブツシリン酸、リノール酸、γ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、７，１０，１３，１６−ドコサテトラエン酸、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸、ＥＰＡ、ＤＰＡ、ＤＨＡ、Ｍｅａｄ酸、カプロレン酸、ラウロレン酸、リンデル酸、ミリトレン酸、フィセテリン酸、ツズ酸、オレイン酸、パルミトレン酸、ペテロセリン酸、バクセン酸、ゴドレン酸、ゴンドイン酸（ｇｏｎｄｏｉｃ ａｃｉｄ）、セトレン酸、エルカ酸、ネルボン酸、エライジン酸、ｔ−バクセン酸を包含する。脂肪酸のその他の例は、ヒドロキシ脂肪酸、ジカルボン酸、脂肪酸カルボネート、ジビニルエーテル脂肪酸、硫黄含有脂肪酸、脂肪酸アミド、メトキシ脂肪酸、アルデヒド脂肪酸、ハロゲン化脂肪酸及び硝酸化脂肪酸を包含する。分枝鎖脂肪酸は、モノ又は多分枝鎖脂肪酸（ツベルキュロステアリン酸、フィトモン酸（ｐｈｙｔｏｍｏｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、レチポリン酸、ミコセラン酸、ミコセロン酸、フチオセラン酸、フィタン酸、プリスタン酸、レチノイン酸のような）、分枝メトキシ脂肪酸（２−メトキシ−１４−メチルペンタデカン酸及び２−メトキシ−１３−メチルペンタデカン酸のような）及び分枝ヒドロキシ脂肪酸（ミコール酸）を包含する。環含有脂肪酸はシクロプロパン酸（マジュスキュロン酸のような）、シクロプロペン酸（ステルキュリン酸及びマルバリン酸のような）、シクロペンチル酸及びシクロペンテニル酸、フラノイド酸、シクロヘキシル酸、エポキシ酸、環式脂肪過酸化物及びリポ酸を包含する。２種以上の脂肪酸の組み合わせ物並びに１種以上の脂肪酸及び１種以上の他の脂肪族化合物の組み合わせ物もまた、想定される。脂肪酸は合成され、天然原料から単離され、又は購入することができる。典型的には、本明細書で使用される脂肪酸は、その非塩形態が有機溶媒、特にリモネンのような非極性溶媒中でより高い溶解度を有するので、その非塩形態で存在するであろう。

用語「脂肪アルコール」は６〜３５個の炭素原子（例えば、１２〜２４個の間の炭素原子のような、８〜３０個の間の炭素原子）を有する脂肪族第一級又は第二級アルコールを表し、そのアルコールは飽和でも不飽和でもよく、そして分枝でも又はシクロプロパン環
のような環構造物を含有してもよく、そして更に、更なるメチル、アルコキシ、サルフェート及び／又はヒドロキシル基置換物を包含してもよい。飽和脂肪アルコールの特定の例は、ｎ−オクタノール、ｎ−ノナノール、ｎ−デカノール、ｎ−ウンデカノール、ｎ−ドデカノール、ｎ−トリデカノール、ｎ−テトラデカノール、ｎ−ペンタデカノール、ｎ−ヘキサデカノール、ｎ−ヘプタデカノール、ｎ−オクタデカノール、ｎ−ノナデカノール及びｎ−エイコサノール、ベヘニルアルコール、イソオクタノール、イソノナノール、イソデカノール、イソウンデカノール、イソドデカノール、イソトリデカノール、イソテトラデカノール、イソペンタデカノール、イソヘキサデカノール、イソヘプタデカノール、イソオクタデカノール、イソノナデカノール、イソエイコサノール、イソベヘニルアルコール、２−オクタノール、２−デカノール、２−ドデカノール、２−トリデカノール、２−テトラデカノール、２−ペンタデカノール、２−ヘキサデカノール、２−ヘプタデカノール、２−オクタデカノール、２−ノナデカノール及び２−エイコサノールを包含する。不飽和アルコールの特定の例は、アラキジルアルコール、エルシルアルコール、イソアラキジルアルコール、オレイルアルコール、イソオレイルアルコール、リノレイルアルコール、イソリノレイルアルコール、リノレニルアルコール、イソリノレニルアルコール、オブツシリルアルコール、カプロレイルアルコール、ラウロレイルアルコール、リンデリルアルコール、ミリストレイルアルコール、フィセテリルアルコール、ツズイルアルコール、パルミトレイルアルコール、ペトロセリニルアルコール、バクセニルアルコール、ガドレイルアルコール、ゴンドイルアルコール、セトレイルアルコール、エルシルアルコール、ネルボイルアルコール、エライジルアルコール及びｔ−バクセニルアルコールを包含する。分枝鎖脂肪アルコールの特定の例は、２−ブチル−１−デカノール、２−ブチル−１−オクタノール、２−デシル−１−テトラデカノール、２−ドデシル−１−ヘキサデカノール、２−ヘキサデシル−１−エイコサノール、２−ヘキサデシル−１−オクタデカノール、２−ヘキシル−１−オクタノール、２−ヘキシル−１−デカノール、２−ヘキシル−１−ドデカノール、２−オクチル−１−デカノール、２−オクチル−ドデカノール、２−テトラデシル−１−エイコサノール及び２−テトラデシル−１−オクタデカノール（例えばＪａｒｃｈｅｍ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，ＮＪから利用可能な）を包含する。環含有脂肪アルコールの例は、シクロプロパン環、シクロプロペン環又はシクロペンテン環を含有するアルコールを包含する。環含有脂肪アルコールの特定の例はマジュスキュリルアルコール、ステルキュリルアルコール、マルバリルアルコール、ショールムーグリルアルコール及びベルノリルアルコールを包含する。脂肪アルコールは更に、コロナリルアルコール及びベルノリルアルコールのようなエポキシアルコールを包含する。更に、脂肪アルコールはタリリルアルコール、サンタルビルアルコール、ピルリルアルコール、クレペニニルアルコール、ヘイステリルアルコール及びオルフェニルアルコールのようなエチニルアルコールを包含する。脂肪アルコールはモノ−メチル化アルコール（フチオセロール）、ポリイソプレノイドアルコール（プリスタノール及びフィタノールのようなイソプラノールのような）、ポリプレノール（ゲラニノール、ファルネソール、ゲラニルゲラニオール、ゲラニルファルネソール、ソラネソール、カスタプレノール、フィカプレノール、ドリコール及びフィトールのような）並びに芳香族ポリイソプレノイドアルコール（トコフェロール、ステロイド、トリテルペノイド、フラバノイド、カルテノイド及びデラタノイドのような）を包含する。２種以上の脂肪アルコールの組み合わせ物並びに１種以上の脂肪アルコール及び１種以上の他の脂肪族化合物の組み合わせ物もまた想定される。脂肪アルコールは対応する脂肪酸から還元により調製され、天然原料から単離され、又は市販品を購入することができる。

用語「脂肪アミン」は６〜３５個間の炭素原子を有する脂肪族アミン又はその塩を表す。脂肪アミンは第一級、第二級、第三級及びエトキシル化又はプロポキシル化アミンを包含する。例は、オレイルアミン、１−ドデシルアミン、ジ−ｎ−オクタデシルアミン、トリ（イソデシル）アミン、ジメチル−ｎ−デシルアミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）ドデシルアミン、ビス（２−ヒドロキシプロピル）ドデシルアミン、ビス（２−ヒドロキ
シエチル）タローアミンを包含する。更なる例は、ｎ−オクチルアミン、ｎ−デシルアミン、ｎ−テトラデシルアミン、ｎ−ヘキサデシルアミン、ｎ−オクタデシルアミンを包含する。脂肪アミンの他の例はＡｋｚｏのＡｒｍｅｅｎ Ｃ、Ａｒｍｅｅｎ Ｏ、Ａｒｍｅｅｎ ＯＬ、Ａｒｍｅｅｎ Ｔ、Ａｒｍｅｅｎ ＨＴ、Ａｒｍｅｅｎ Ｓ及びＡｒｍｅｅｎ ＳＤのようなＡｒｍｅｅｎ^（Ｒ）アミン（Ａｋｚｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌ．から入手可能）のような市販の脂肪アミンを包含し、そこで文字の記号標記はココ、オレイル、タロー又はステアリル基のような脂肪基に関する。脂肪アミンは、有機合成の技術分野で周知の方法に従って対応する脂肪酸又は脂肪アルコールから調製することができる。従って、他の特別に引用された脂肪アルコール及び脂肪酸から誘導されるアミンが想定される。２種以上の脂肪アミンの組み合わせ並びに１種以上の脂肪アミン及び１種以上の他の脂肪族化合物の組み合わせ物も想定される。典型的には、本明細書において使用される脂肪アミンは、非塩形態が有機溶媒、特にリモネンのような非極性溶媒中でより高い溶解度を有するので、その非塩形態で存在するであろう。

用語「脂肪エステル」は、合計約６〜約１００個の炭素原子、例えば、約１０〜約３５個の炭素原子のような約８〜約５０個の炭素原子を有するアルコール（脂肪アルコール等）及びカルボン酸（脂肪酸等）のエステルを表す。アルコール部分は第一級又は第二級アルコール、あるいはグリセロール又は糖のようなポリオールであってもよい。脂肪酸部分はモノカルボン酸又は、アジピン酸のようなジカルボン酸のようなポリカルボン酸であってもよい。アルコール及びカルボン酸は双方とも飽和又は不飽和で、線状又は分枝であってもよく、そしてヒドロキシル基及びアルコキシ基（例えばメトキシ又はエトキシ基）のような更なる基で置換されても又は未置換でもよい。本明細書に開示される特定の脂肪アルコールはいずれも酢酸、プロピオン酸、ｎ−ブタン酸、イソブタン酸、ｎ−ペンタン酸、イソペンタン酸又はネオペンタン酸のようなカルボン酸と合わせて脂肪エステルを提供することができる。同様に、本明細書に開示される特定の脂肪酸はいずれも、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール又はネオペンタノールのようなアルコールと合わせて、脂肪エステルを提供することができる。このようなエステルを調製する方法は当該技術分野で周知である。特定の態様において、脂肪エステルは直鎖脂肪族第一級アルコール及び式ＲＣＯＯＲ’（ここでＲ及びＲ’はアルキル又はアルケニル基のような脂肪族基であり、そしてＲ及びＲ’は独立して１〜５０個の炭素原子、例えば１〜２０個の炭素原子のような１〜３０個の炭素原子をもつ）を有する直鎖脂肪酸のエステルである。脂肪エステルの特定の例は、アスコルビルパルミテート、セチルラクテート、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、プロピレングリコールジカプリレート／ジカプレート、ミリスチルラクテート、ミリスチルミリステート、ペンタエリスリチルテトラオレエート、ペンタエリスリチルテトラステアレート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、セチルエステル、ステアリルステアレート、ブチルステアレート、ミレス−３ミリステート、ペンタエリスリチルテトラベヘネート、ジイソプロピルアジペート、ジペンタエリスリチルヘキサカプリレート／ヘキサカプレート、ネオペンチルグリコールジカプリレート／ジカプレート、トリデシルステアレート、トリデシルトリメリテート、ＰＥＧ−４ジヘプタノエート、ペンタエリスリチル・テトラカプリレート／テトラカプレート、イソセチルステアレート、エチルヘキシルパルミテート、Ｃ１２〜１５アルキルベンゾエート、セチルリチノールエート、グリコールステアレート、グリコールジステアレート、プロピレングリコールステアレート、グリセリルステアレート、グリセリルココエート、トリゲヘニン、トリラウリン、ステアリルアセテート、パルミチルジ−ラクテート、ココイルイソブチレート、オレイルマレエート、オレイルジマレエート、タロウイルプロピオネート、２−エチルヘキシルパルミテート、２−エチルヘキシルステアレート、セチルオクタノエート、ヘキシルラウレート、イソブチルタロウェート、イソステアリルパルミテート、ｎ−ブチルオレエート、ｎ−ブチルステアレート、ｎ−プロピルオレエート、トリデシルステアレート、イソブチルミリステート、イソプロピルパルミテート、イソプロピルス
テアレート、イソプロピルイソステアレート、イソブチルステアレート、リナリルアセテートを包含する。更なる脂肪エステルはキシリトールモノパルミテート、ペンタエリスリトールモノステアレート、スクロースモノステアレート、グリセロールモノステアレート、エチレングリコールモノステアレート、ソルビタンエステルを包含する。適したソルビタンエステルはソルビタン・モノステアレート、ソルビタン・パルミテート、ソルビタン・モノラウレート、ソルビタン・モノミリステート、ソルビタン・モノベヘネート、ソルビタン・モノオレエート、ソルビタン・ジラウレート、ソルビタン・ジステアレート、ソルビタン・ジベヘネート、ソルビタン・ジオレエート及び更に混合タローアルキルソルビタン・モノ−及びジ−エステルを包含する。２種以上の脂肪エステルの組み合わせ物並びに１種以上の脂肪エステル及び１種以上の他の脂肪族化合物の組み合わせ物も想定される。脂肪エステルは合成しても、天然原料から単離しても又は購入することもできる。Ｌｉｐｏｎａｔｅ^（Ｒ）エステルのような皮膚軟化性エステルはＬｉｐｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，ＮＪから入手することができる。

語句「実質的に同様なサンプルに比較して増加したコントラスト並びに細胞及び非細胞質鮮明度」は、実質的に同様な方法で処理された２種の実質的に同様な生体サンプルが顕微鏡により比較される状況を表す。しかし、サンプルの一方は本開示に従う脂肪族化合物と接触され、そして他方は接触されておらず、そして脂肪族化合物と接触したサンプルが細胞及び非細胞質特徴物のより大きな視覚的鮮明度を示す。幾つかの態様においては、サンプルにおける細胞及び非細胞質特徴物の増加した視覚的鮮明度のみならずまた、脂肪族化合物で処理されたサンプルは全体的により明白なコントラストを示し、観察者により、更に容易に観察されることができる。他の態様においては、鮮明度の増加及び増加したコントラストは特に、離散した局在信号（離散蛍光信号のような）の増加と反対に、サンプルに対する全体的増加を表す。特定の態様において、組織学的染色剤で染色され、脂肪族化合物で処理されたサンプルは明視野顕微鏡で観察されると増加した細胞及び非細胞質鮮明度及びコントラストを示すであろう。１つのアスペクトにおいて、増加した鮮明度は病理学者が診断する際の補助になることができる。もう１つのアスペクトにおいて、増加した鮮明度は、脂肪族化合物で処理されないＨ＆Ｅ染色サンプルと比較すると、脂肪族化合物で処理されたＨ＆Ｅ染色サンプルにおけるコントラスト及び細胞の鮮明度の程度の全体的増加を包含する。

用語「組織化学的」は、組織片又は細胞サンプルのような生体サンプルにおける特定の分子又は構造及び／又はそれらの位置を検出するために使用することができる信号又はパターンを提供するために使用されるあらゆる方法を表す。組織化学的方法は、免疫組織化学的方法、細胞化学的方法、組織学的方法、酵素組織化学的方法、特別染色法及びインサイチューハイブリッド法を包含する。組織化学的方法により提供されるパターン及び信号は、限定せずに、白色光がサンプルを通過し、そして幾らかが吸収される時に形成される補色のパターン、サンプル中の発蛍光団の励起後に検出される蛍光信号、酵素反応により付着される着色物質のパターン並びに抗体のような放射能標識プローブ及び核酸プローブにより形成されるシンチレーション信号を包含する。

本明細書で使用される用語「組織学的染色剤」（「組織学的染色」）は、特定のタイプの細胞及び／又は細胞成分に優先的に結合する染色剤又は物質（あるいは染色剤又は物質の適用）を表す。細胞又は細胞成分に対する組織学的染色剤の優先的結合は、抗原抗体結合相互反応（例えば、免疫組織化学的染色における）又は相補的核酸のハイブリッド形成（例えば、インサイチューのハイブリッド形成における）におけるような特定の分子認識事象を伴わない。組織学的染色剤は広域光線がサンプルを通過する（又はサンプルから反射する）時に特定の波長の広域光線（可視白色光のスペクトルのような）を吸収して、それにより検出される補色を残す（例えば、明視界光顕微鏡において視覚的に）ことによりサンプルに色彩を与えることができる。組織学的染色剤は、アクリジン染色剤、アントラキノン染色剤、アリールメタン染色剤、アゾ染色剤、ジアゾニウム染色剤、ニトロ染色剤、フタロシアニン染色剤、キニンイミン染色剤、テトラゾリウム染色剤、チアゾール染色剤及びキサンテン染色剤のような染色剤を包含する。組織学的染色液はヘマトキシリン及びエオシンを包含し、それらは一緒に、一般的目的の組織学的染色剤であり、特定の診断環境に使用される「特定染色剤」である。組織学的染色に有用な染色剤の例は、アセチルイエロー、アシドブラック１、アシドブルー２２、アシドブルー９３、アシドフクシン、アシドグリーン、アシドグリーン１、アシドグリーン５、アシドマゼンタ、アシドオレンジ１０、アシドレッド４、アシドレッド２６、アシドレッド２９、アシドレッド４４、アシドレッド５１、アシドレッド６６、アシドレッド７３、アシドレッド８７、アシドレッド９１、アシドレッド９２、アシドレッド９４、アシドレッド１０１、アシドレッド１０３、アシドロゼイン、アシドルビン、アシドバイオレット１９、アシドイエロー１、アシドイエロー９、アシドイエロー２３、アシドイエロー２４、アシドイエロー３６、アシドイエロー７３、アシドイエローＳ、アシドイエローＴ、アクリジンオレンジ、アクリフラビン、アルシアンブルー、アルシアンイエロー、アルコール可溶性エオシン、アリザリン、アリザリンブルー、アリザリンブルー２ＲＣ、アリザリンカーマイン、アリザリンシアニンＢＢＳ、アリザロールシアニンＲ、アリザリンレッドＳ、アリザリンパープリン、アルミノン、アミドブラック１０Ｂ、アミドナフトールレッド、アミドシュワルツ、アニリンブルーＷＳ、アニリンパープル、アントラセンブルーＳＷＲ、アントラセンブルーＳＷＸ、オーラミンＯ、アゾ−エオシン、アゾカーマインＢ、アゾカーマインＧ、アゾエオシンＧ、アゾイックジアゾ５、アゾイックジアゾ４８、アゾフロキシン、アゾバンブルー、アズレＡ、アズレＢ、アズレＣ、ベーシックブルー８、ベーシックブルー９、ベーシックブルー１２、ベーシックブルー１５、ベーシックブルー１７、ベーシックブルー２０、ベーシックブルー２６、ベーシックブラウン１、ベーシックフクシン、ベーシックグリーン４、ベーシックグリーン５、ベーシックオレンジ１４、ベーシックレッド２、ベーシックレッド５、ベーシックレッド９、ベーシックバイオレット２、ベーシックバイオレット４、ベーシックバイオレット１０、ベーシックバイオレット１４、ベーシックイエロー１、ベーシックイエロー２、ビーブリッヒ（Ｂｉｅｂｒｉｃｈ）スカーレット、ビーブリッヒスカーレットＲ、ビスマルクブラウンＹ、ブラジレイン、ブラジリン、ブリリアントクロセイン、ブリリアントクリスタルスカーレット６Ｒ、カルシウムレッド、カーマイン、カルミン酸カルモイシン６Ｒ、セレスチンブルーＢ、チャイナブルー、クロランチンファストレッド５Ｂ、コチニール、コエレスチンブルー、シカゴブルー４Ｂ、クロムバイオレットＣＧ、クロモトロープ２Ｒ、クロモキサンシアニンＲ、コンゴコリント、コンゴレッド、コットンブルー、コットンレッド、クロセインスカーレット、クロセインスカーレット３Ｂ、クロセインスカーレットＭＯＯ、クロシン、クリスタルポンソー６Ｒ、クリスタルスカーレット、クリスタルバイオレット、ダーリア、ダイアモンドグリーンＢ、ダイレクトブルー１４、ダイレクトブルー５８、ダイレクトレッド、ダイレクトレッド１０、ダイレクトレッド２８、ダイレクトレッド８０、ダイレクトレッド８１、ダイレクトイエロー７、ドラゾールブルー４Ｒ、ドラゾールブルー８Ｇ、エオシンＢ、エオシンブルーイッシュ、エオシン、エオシンＹ、エオシンイエローイッシュ、エオシノール、エリーガーネットＢ、エリオクロムシアニンＲ、エリスロシンＢエチルエオシン、エチルグリーン、エチルバイオレット、エバンズブルー、ファストブルーＢ、ファストグリーンＦＣＦ、ファストレッドＢ、ファストイエロー、ファストイエローエクトラ、ファストイエローＧ、ファストブラックＨＢ、フルオレセイン、フードグリーン３、ガレオン、ガラミンブルー、ガロシアニン、ゲンチアンバイオレット、ヘマテイン、ヘマチン、ヘマトキシリン、ヘリオファストルビンＢＢＬ、ヘルベチアブルー、ホフマンズバイオレット、ヒドラジンイエロー、インペリアルレッド、イングレインブルー１、イングレインイエロー１、ＩＮＴ、ケルメス、ケルメス酸、ケルネクトロート、Ｌａｃ、ラッカイン酸（ｌａｃｃａｉｃ ａｃｉｄ），ラウススバイオレット、ライトグリーン、リッサミンファストイエロー、リッサミングリーンＳＦ、ルクソールファストブルー、マゼンタ０、マゼンタＩ、マゼンタＩＩ、マゼンタＩＩＩ、マラカイトグリーン、マンチェスターブラウン、マルチウスイエロー、モーブ、モーベイン、メルブロミン、マーキュロクロム、メタニルイエロー、メチレンアズレＡ、メチレンアズレＢ、メチレンアズレＣ、メチレンブルー、メチレングリーン、メチルブルー、メチルグリーン、メチルバイオレット、メチルバイオレット２Ｂ、メチルバイオレット１０Ｂ、ミリングイエロー３Ｇ、モルダントブルー３、モルダントブルー１０、モルダントブルー１４、モルダントブルー２３、モルダントブルー３２、モルダントブルー４５、モルダントレッド３、モルダントレッド１１、モルダントバイオレット２５、モルダントバイオレット３９、ナフタレンブルーブラック、ナフトールブルーブラック、ナフトールグリーンＢ、ナフトールイエローＳ、ナチュラルブラック１、ナチュラルレッド、ナチュラルレッド３、ナチュラルレッド４、ナチュラルレッド８、ナチュラルレッド１６、ナチュラルレッド２４、ナチュラルレッド２５、ナチュラルレッド２８、ナチュラルイエロー６、ＮＢＴ、ニュートラルレッド、ニューフクシン、ナイアガラブルー３Ｂ、ナイトブルー、ナイルブルー、ナイルブルーＡ、ナイルブルースルフェート、ナイルレッド、ニトロＢＴ、ニトロブルーテトラゾリウム、ニュクリアファストレッド、オイルレッドＯ、オレンジＧ、オルセイン、パラロザニリン（ｐａｒａｒｏｓａｎｉｌｉｎ）、パーキンズバイオレット、フロキシンＢ、ピクリン酸、ポンソー２Ｒ、ポンソー６Ｒ、ポンソーＢ、ポンソーデキシリジン、ポンソーＳ、ポンタミンスカイブルー５Ｂ、プリムラ、プリムリン、パープリン、ピロニンＢ、ピロニンＧ、ピロニンＹ、ローダミンＢ、ロサニリン、ローズベンガル、サフロン、サフラニンＯ、スカーレットＲ、スカーレットレッド、シャーラッハ（Ｓｃｈａｒｌａｃｈ）Ｒ、セラック、シリウスレッドＦ３Ｂ、シリウスレッド４Ｂ、シリウススプラブルーＦ３Ｒ、ソロクロムシアニンＲ、ソリュブルブルー、ソルベントブラック３、ソルベントブルー３８、ソルベントレッド２３、ソルベントレッド２４、ソルベントレッド２７、ソルベントレッド４５、ソルベントイエロー９４、スピリットソリュブルエオシン、スダンＩＩＩ、スダンＩＶ、スダンブラックＢ、スダンレッドＢＫ、サルファーイエローＳ、スイスブルー、タートラジン、チオフラビンＳ、チオフラビンＴ、チオニン、トルイジンブルー、トルイリンレッド、トロペオリンＧ、トリパフラビン、トリパンブルー、ウラニン、ビクトリアブルー４Ｒ、ビクトリアブルーＢ、ビクトリアブルーＲ、ビクトリアグリーンＢ、ウオーターブルーＩ、水溶性エオシン、ウッドステインスカーレット、キシリジンポンソー及びイエロイッシュエオシン並びにそれらの組み合わせ物を包含する。ミョウバンに媒染されたヘマトキシリン組織学的染色剤の特定の例は、アンダーソンズ（Ａｎｄｅｒｓｏｎ’ｓ）、アパシーズ（Ａｐａｔｈｙ’ｓ）、ベーカーズ（Ｂａｋｅｒ’ｓ）、ベネッツ（Ｂｅｎｎｅｔｔ’ｓ）、ボーマーズ（Ｂｏｈｍｅｒ’ｓ）、ボスマズ（Ｂｏｓｍａ’ｓ）、バラーズ（Ｂｕｌｌａｒｄ’ｓ）、カラッツィズ（Ｃａｒａｚｚｉ’ｓ）、コールズ（Ｃｏｌｅ’ｓ）、デビデンズ（Ｄｅｂｉｄｅｎ’ｓ）、デグルーツ（ｄｅ Ｇｒｏｏｔ’ｓ）、デラフィールズ（Ｄｅｌａｆｉｅｌｄ’ｓ）、デュバールズ（Ｄｕｖａｌ’ｓ）、エールリッヒス（Ｅｈｒｌｉｓｈ’ｓ）、フリードランダーズ（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ’ｓ）、ガズドンズ（Ｇａｄｓｄｏｎ’ｓ）、ゲージズ（Ｇａｇｅ’ｓ）、ガリヒャーズ（Ｇａｌｉｇｈｅｒ’ｓ）、ガルベイズ（Ｇａｒｖｅｙ’ｓ）、ギルズ（Ｇｉｌｌ’ｓ）、グラハムズ（Ｇｒａｈａｍ’ｓ）、ハミルトンズ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ’ｓ）、ハリス（Ｈａｒｒｉｓ’）、ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）＆パワーズ（Ｐｏｗｅｒ’ｓ）、ハウグス（Ｈａｕｇ’ｓ）、ホーニーオールズ（Ｈｏｅｎｅｙｏｌｄ’ｓ）、クライネンベルグズ（Ｋｌｅｉｎｅｎｂｅｒｇ’ｓ）、クラッツェイズ（Ｋｒｕｔｓａｙ’ｓ）、ランゲロンズ（Ｌａｎｇｅｒｏｎ’ｓ）、ラウノイズ（Ｌａｕｎｏｙ’ｓ）、リーズ（Ｌｅｅ’ｓ）、リリーズ（Ｌｉｌｌｉｅ’ｓ）、ルゴールズ（Ｌｕｇｏｌ’ｓ）、マクラクランズ（ＭｃＬａｃｈｌａｎ’ｓ）、マロリーズ（Ｍａｌｌｏｒｙ’ｓ）、マンズ（Ｍａｎｎ’ｓ）、マルチノティズ（Ｍａｒｔｉｎｏｔｔｉ’ｓ）、マッソンズ（Ｍａｓｓｏｎ’ｓ）、メヤーズ（Ｍａｙｅｒ’ｓ）、ミッチェルズ（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ’ｓ）、モルナールズ（Ｍｏｌｎａｒ’ｓ）、パパミルティアーデス（Ｐａｐａｍｉｌｔｉａｄｅｓ’）、プセイズ（Ｐｕｓｅｙ’ｓ）、ラウイッツ（Ｒａｗｉｔｚ’）、レディーズ（Ｒｅｄｄｙ’ｓ）、サッス（Ｓａｓｓ’）、シュモールズ（Ｓｃｈｍｏｒｌ’ｓ）、スリッダーズ（Ｓｌｉｄｄｅｒｓ’）、ウンナズ（Ｕｎｎａ’ｓ）、ワトソンズ（Ｗａｔｓｏｎ’ｓ）及びワイゲルト（Ｗｅｉｇｅｒｔ）＆ライツ（Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ）を包含する。鉄媒染ヘマトキシリン染色剤の特定の例は、アンダーソンズ（Ａｍｄｅｒｓｏｎ’ｓ）、クレチンズ（Ｃｒｅｔｉｎ’ｓ）、フォーレズ（Ｆａｕｒｅ’ｓ）、ゴールドマンズ（Ｇｏｌｄｍａｎ’ｓ）、ハンセンズ（Ｈａｎｓｅｎ’ｓ）、ハイデンハインズ（Ｈｅｉｄｅｎｈａｉｎ’ｓ）、ジャンセンズ（Ｊａｎｓｓｅｎ’ｓ）、ケファラス（Ｋｅｆａｌａｓ’）、クラジアンズ（Ｋｒａｊｉａｎ’ｓ）、クルッツェイズ（Ｋｒｕｔｓａｙ’ｓ）、ラマンナズ（Ｌａ Ｍａｎｎａ’ｓ）、リリーズ、リリー＆アールズ（Ｅａｒｌｅ’ｓ）、マッソンズ（Ｍａｓｓｏｎ’ｓ），モア（Ｍｏｒｅ）＆バッサルズ（Ｂａｓｓａｌ’ｓ）、ムレイズ（Ｍｕｒｒａｙ’ｓ）、パクイン（Ｐａｑｕｉｎ）＆ゴッダルズ（Ｇｏｄｄａｒｄ’ｓ）、ルゴーズ（Ｒｅｇａｕｄ’ｓ）、ロザス（Ｒｏｚａｓ’），セイデリンズ（Ｓｅｉｄｅｌｉｎ’ｓ）、トマス（Ｔｈｏｍａｓ’）、ワイゲルツ（Ｗｅｉｇｅｒｔ’ｓ）及びヤスボインズ（Ｙａｓｂｏｙｎ’ｓ）を包含する。ビスマス媒染ヘマトキシリンはローチ（Ｒｏａｃｈ）＆スミスス（Ｓｍｉｔｈ’ｓ）である。銅媒染ヘマトキシリンはベンスレーズ（Ｂｅｎｓｌｅｙ’ｓ）、クックス（Ｃｏｏｋ’ｓ）
及びフォーレズを包含する。モリブデン媒染ヘマトキシリンはヘルズ（Ｈｅｌｄ’ｓ）である。バナジウム媒染ヘマトキシリンはヘデンハインズ（Ｈｅｄｅｎｈａｉｎ’ｓ）及びスミスス（Ｓｍｉｔｈ’ｓ）を包含する。ジルコニウム媒染ヘマトキシリンはマックナルティ（ＭｃＮｕｌｔｙ）＆スミスス（Ｓｍｉｔｈ’ｓ）である。１種又は複数の特定の染色剤を使用する組織学的染色法の例は、限定せずに、スコットのＣＥＣ；ヘール（Ｈａｌｅ）のコロイド状鉄；マウリー（Ｍｏｗｒｙ）のコロイド状鉄；リッター（Ｒｉｔｔｅｒ）＆オルソン（Ｏｌｅｓｏｎ）のコロイド状鉄；スミス＆マクナルツィのジルコニルヘマトキシリン；マクファーランド（ＭａｃＦａｒｌａｎｄ）及びダベンポルト（Ｄａｖｅｎｐｏｒｔ）の銀プロテイネート；アキタ＆カネコのハムミョウバン（ｈａｍａｌｕｍ）；レンドルム（Ｌｅｎｄｒｕｍ），スリダース（Ｓｌｉｄｄｅｒｓ）＆フレーザー（Ｆｒａｓｅｒ）アルシアンブルー；ゲイブ（Ｇａｂｅ）のアルデヒドフクシン；ゴモリ（Ｇｏｍｏｒｉ）アルデヒドフクシン；ルウエリン（Ｌｅｗｅｌｙｎ）のアルデヒドトルイジンブルー；カルシウムのためのマギーラッセル（ＭａＧｈｅｅ Ｒｕｓｓｅｌ）アリザリンレッドＳ；ショケイア（Ｓｈｏｋｅｉｒ）＆エルバゴーリ（Ｅｌｂａｇｏｕｒｙ）のアロキサンシッフ；ベンホルド（Ｂｅｎｈｏｌｄ）のコンゴレッド；バーンズ（Ｂｕｒｎｓ），ペンノック（Ｐｅｎｎｏｃｋ）＆ストワルド（Ｓｔｏｗａｒｄ）のチオフラビンＴ；イーストウッド（Ｅａｓｔｗｏｏｄ）及びコール（Ｃｏｌｅ）のコンゴレッド；ハイマン（Ｈｉｆｈｍａｎ）のコンゴレッド；レウエリン（Ｌｌｅｗｅｌｌｙｎ）のシリウスレッド；プフトラー（Ｐｕｃｈｔｌｅｒ），スウエット（Ｓｗｅａｔ）及びレビン（Ｌｅｖｉｎｅ）のコンゴレッド；ストローク（Ｓｔｒｏｋｅ）のコンゴレッド；スウェット（Ｓｗｅａｔ）及びプフトラーのシリウスレッド；ヴァッサー（Ｖａｓｓａｒ）及びカリング（Ｃｕｌｌｉｎｇ）のチオフラビンＴ；ローチ（Ｒｏａｃｈ）＆スミスのビスマスヘマトキシリン；アルクシュ（Ａｒｋｕｓｈ）＆プロエシャーの鉄ミョウバン−セレスチンブルー；ノッチングハム（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ）法；フルキアン−シェンク（Ｆｕｒｕｋｉａｎ−Ｓｃｈｅｎｋ）のグラム染色剤；ベーカー（Ｂａｋｅｒ）のミョウバンヘマトキシリン；スミスのバナジウムヘマトキシリン；バウレ（Ｂａｕｒｅ）反応；ベネット（Ｂｅｎｎｅｔｔ）のミョウバンヘマトキシリン；ベンホールド（Ｂｅｎｎｈｏｌｄ）のコンゴレッド；ベンスレイ（Ｂｅｎｓｌｅｙ）；ブーン（Ｂｏｏｎｅ）＆ドリジヴェル（Ｄｒｉｊｖｅｒ）のトリクロム；ベンスレー（Ｂｅｎｓｌｅｙ）のＰＴＡＢ；ブリルメイヤー（Ｂｒｉｌｌｍｅｙｅｒ）のトリクローム；バーンズ（Ｂｕｒｎｓ），ペンノック（Ｐｅｎｎｏｃｋ）＆ストワード（Ｓｔｏｗａｒｄ）のチオフラビンＴ；ＣＡＢ；フォンコッサ（Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ）；カラッツィズ（Ｃａｒｒａｚｚｉ’ｓ）；リリーのロングＰＡＳ；リリーのショートＰＡＳ；スタンダードＰＡＳ；周期的アシドチオセミカルバジド；ケーソン（Ｃａｓｏｎ）のトリクロム；シフェル（Ｃｈｉｆｆｅｌｌｅ）＆パット（Ｐｕｔｔ）；アイナルソン（Ｅｉｎａｒｓｏｎ）；ヘロビチ（Ｈｅｒｏｖｉｃｉ）；ピクロ−フクシン；プフトラーズ（Ｐｕｃｈｔｌｅｒ’ｓ）；ファンギーソンズ（ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ’ｓ）；ホハシ（Ｈｏｈａｓｈｉ）のトリクロム；モリエル（Ｍｏｌｌｉｅｒ）のトリクロム；パクイン（Ｐａｑｕｉ）＆ゴッダルド（Ｇｏｄｄａｒｄ）のトリクロム；パシニ（Ｐａｓｉｎｉ）のトリクロム；ワルター（Ｗａｌｔｅｒ）のトリクロム；ガーベイ（Ｇａｒｖｅｙ）；ガルベイ−モヴァト（Ｇａｒｖｅｙ−Ｍｏｖａｔ）ペンタクロム；ロク（Ｒｏｑｕｅ）のトリクロム；シルバーマン−モバト（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ−Ｍｏｖａｔ）ペンタクロム；ホランデ（Ｈｏｌｏｌａｎｄｅ）のトリクローム；ベンスレイ（Ｂｅｎｓｌｅｙ）のトリクロム；ケーソン（Ｃａｓｏｎ）のトリクロム；ゴモリ（Ｇｏｍｏｒｉ）のトリクロム；ヘデンハイン（Ｈｄｅｎｈａｉｎ）のアザントリクロム；クリチェスキ（Ｋｒｉｃｈｅｓｋｉ）のトリクロム；ラデウィッグ（Ｌａｄｅｗｉｇ）のトリクロム；リーブラウン（Ｌｅｅ−Ｂｒｏｗｎ）のトリクロム；リリー（Ｌｉｌｌｉｅ）のトリクロム；マロリー（Ｍａｌｌｏｒｙ）のトリクロム；マッソン（Ｍａｓｓｏｎ）のトリクロム及び改変化物；ミリガン（Ｍｉｌｌｉｇａｎ）のトリクロム；モレンドル（Ｍｏｌｌｅｎｄｏｒ）のトリクロム；パテイ（Ｐａｔａｙ）のトリクロム；シューブリッジ（Ｓｈｏｏｂｒｉｄｇｅ）のポリクロム；クロスマン（Ｃｒｏｓｓｍａｎ）のトリクロム；ホウェル（Ｈｏｗｅｌｌ）のルベアン酸；カリング（Ｃｕｌｌｉｎｇ）＆バッサー（Ｖａｓｓａｒ）のチオフラビンＴ；カニングハム（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ）＆エンジェルズ（Ｅｎｇｅｌ’ｓ）；パパニコロウ（Ｐａｐａｎｉｃｏｌｏｕ）のアルコール性トリクロム；パパニコロウのトリクロム；ドーズ（Ｄａｗｓ）トリクロム；フォイルゲンズ（Ｆｅｕｌｇｅｎ’ｓ）；デュプレス（Ｄｕｐｒｅｓ）マゼンタ；エナルソン（Ｅｎａｒｓｏｎ）のガロシアニンクロム；ハート（Ｈａｒｔ）の鉄レソルシンフクシン；ハンバーストン（Ｈｕｍｂｅｒｓｔｏｎｅ）の鉄レソルシン；テンゼル−ウンナ（Ｔａｅｎｚｅｒ−Ｕｎｎａ）オルセイン；ウンナ（Ｕｎｎａ）のオルセイン−アニリンブルー；ワイグヘルト（Ｗｅｉｇｈｅｒｔ）の鉄レソルシンフクシン；コハシ（Ｋｏｈａｓｈｉ）のトリクロム；パクイン（Ｐａｑｕｉｎ）＆ゴッダルド（Ｇｏｄｄａｒｄ）のトリクロム；ウォルターズ（Ｗａｌｔｅｒｓ）トリクロム；ドー（Ｄａｗｅ）のトリクロム；メーター（Ｍｅｔｅｒ）のエオシン；シフェル（Ｃｈｅｆｆｅｌｅ）＆パット（Ｐａｔｔ）；パールス（Ｐｅｒｌｓ）プロシャンブルー；ディルマンシュメルツァーターナル（Ｄｉｒｍａｎｎ Ｓｃｈｍｅｌｚｅｒ Ｔｕｒｎｕｌｌ）のブルーブルー；ＭＳＢ；マッソン（Ｍａｓｓｏｎ）４４／４１；オバディア（Ｏｂａｄｉａ）；ピクロ−マロリー（Ｐｉｃｒｏ−Ｍａｌｌｏｒｙ）；グリズリー（Ｇｒｉｄｌｅｙ）；ロウェリン（Ｌｅｗｅｌｌｙｎ）の二重酸化チオセミカルバジドシュモール（Ｓｃｈｍｏｒｌ）；バンダービルト（Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ）；ヘイソーン（Ｈａｙｔｈｏｒｎｅ）のトリクロム；ハイデンハイン（Ｈａｉｄｅｎｈａｉｎ）のアザントリクロム；ルング（Ｌｅｕｎｇ）＆ギボン（Ｇｉｂｂｏｎ）のアルシアンイエロートルイジンブルー；サイード（Ｓａｙｅｅｄ）のＰＡＳ−トルイジンブルー；トルイジンブルー；コネフ（Ｋｏｎｅｆｆ）のトリクロム；コストビエスキー（Ｋｏｓｔｏｗｉｅｃｋｉ）のトリクロム；リー−ブラウン（Ｌｅｅ−Ｂｒｏｗｎ）のトリクロム；レンドラム（Ｌｅｎｄｒｕｍ）のフロキシンタルトラジン；ロークス（Ｒｏｑｕｅｓ）のトリクロム；メヤー（Ｍａｙｅｒ）のムシカルミン；メヤーのムシヘルナテイン；レウェリン（Ｌｌｅｗｅｌｌｙｎ）の媒染ブルー３；ノッチングハム（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ）法；ニュクリアファストレッド対比染色剤；スリダース（Ｓｌｉｄｄｅｒｓ）ＯＦＧ；プロピレングリコール中のシフェル（Ｃｈｅｆｆｅｌｌｅ）＆パット（Ｐｕｔｔ）オイルレッドＯ；パルムグレン（Ｐａｌｍｇｒｅｎ）の銀含浸物；パテイ（Ｐａｔａｙ）のトリクロム；ルイス＆ミラーのトリクロム；ヴァンギーソン（ｖａｎ Ｇｉｓｏｎ）；及び前記の特定のヘマトキシリンを利用する方法を包含する。特定の細胞及び細胞成分を染色するために使用される染色プロトコール、染色剤及び染色液は当業者に周知であり、そして更なる例はＳｔａｉｎｓｆｉｌｅ（Ｂｒｙａｎ Ｌｌｅｗｅｌｌｙｎにより維持される組織工学者のためのインターネット資料）；Ｋｉｅｒｎａｎ，“Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｚａｌ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（「組織学的及び組織化学的方法：理論及び方法」），”３ｒｄ Ｅｄ．Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ中；そして、本明細書に引用することにより編入されている、Ｈｏｒｏｂｉｎ ａｎｄ Ｋｉｅｒｎａｎ，“Ｃｏｎｎ’ｓ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔａｉｎｓ：ａ ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｄｙｅｓ，ｓｔａｉｎｓ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｏｃｈｒｏｍｅｓ ｆｏｒ ｕｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｃｏｎｎの生物学的染色剤：生物学及び医学者のための染色剤、染色液及びフルオロクロムのハンドブック），”１０ｔｈ ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ：ＢＩＯＳ，ＩＳＢＮ１８５９９６０９９５，２００２中に認めることができる。染色は前進性にも退行性にも実施することができる。媒染染色剤はオンクロム、メタクロム又はアフタークロムで適用することができる。

本明細書で使用される用語「脂肪族化合物」は広義には、有機溶媒（ジエチルエーテル、アセトン、クロロホルム、リモネン、メタノール又はエタノールのような）中で有意な溶解度（約０．１ｇ／Ｌを超える、２０℃で約０．５ｇ／Ｌを超える、又は２０℃で約１．０ｇ／Ｌを超える２０℃における溶解度のような）を有する化合物を表す。更に具体的には、脂肪族化合物は水中におけるより、リモネンのような有機溶媒中により溶解性であることができる。幾つかの態様において、脂肪族化合物は２０℃において約５．０ｇ／Ｌ未満（２０℃において約１．０ｇ／Ｌ、２０℃において約０．５ｇ／Ｌ又は２０℃において約０．１ｇ／Ｌ未満すらのような）水溶性を有する。特定の態様において、脂肪族化合物は実質的に水中に不溶性である。脂肪族化合物は洗剤の脂肪族化合物又は非洗剤の脂肪族化合物であってもよい。脂肪族化合物は、脂肪アルコール、脂肪アミン（及びそれらの塩）、脂肪酸（及びそれらの塩）、脂肪酸エステル、イソプレノイド（トリテルペン及びテルペノール並びにより高い分子量をもつテルペン及びテルペノールのような、テルペン及びテルペノールを包含する）、膜脂質、糖脂質（ホスファチジルコリンのようなグリセロリン脂質のような）、リン脂質（スフィンゴミエリンのようなスフィンゴ脂質のような）、ステロール（コレステロールのような）、パラフィン（Ｃ８〜Ｃ２０アルカン及びアルケンのような）並びに洗剤（アニオン、カチオン、両性イオン又は非イオン性）を包含する。更なる脂肪族化合物は、アシルグリセロール（モノアシルグリレロール、ジアシルグリセロール、トリアシルグリセロール、脂肪及び油、ポリグリセロールエステル及びそれらの混合物のような）、アシルグリセロール又はリン脂質のプラスマロゲン類似体、アミノ化合物−含有脂質（アミノ酸、カルニチン、ドパミンと組み合わせた脂肪酸又はエタノールアミンのようなアミノアルコールのような）、アミノアルコール、カロテノイド、セラミド、シアノ脂質、フェノール脂質、プロタノイド及び関連化合物、キニン、ステロイド（例えば、コレステロールのようなステロール、ブラシノステロイド、ブファジエノリド、カルデノリド、キューカルビタアシン、エクジステロイド、サポゲニン、ステロイドアルカロイド、ウィタステロイド及び胆汁酸）、ホペノイド、ミコリン酸、エイコサノイド、コーラノイド、エーテル−含有脂質、ビタミンアルコール（ビタミンＡ、Ｄ及びＥのような）、ビタミンＫ、レシチン、炭化水素（Ｃ６〜Ｃ３０アルカン及びアルケンのような）並びにワックスを包含する。特定の脂肪族化合物の例は例えば、Ｃｙｂｅｒｌｉｐｉｄ ウェブサイト及びウェブのための脂質バンク上に認めることができる。脂肪族化合物は合成しても、天然原料から単離しても、又は例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯから購入してもよい。用語「脂肪族化合物」はまた、２種以上の脂肪族化合物の組み合わせ物を表す。

用語「低級アルカノール」はそのＲが１〜５個の炭素を有するアルキル基である、構造Ｒ−ＯＨを有する化合物を表す。低級アルカノールは第一級、第二級又は第三級アルコールであってもよい。低級アルカノールの例は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール及びネオ−ペンタノールを包含する。

用語「ポリエーテル」は多数のエーテル結合を含有する化合物、そしてより具体的には、非官能化されることができる（ポリエーテルグリコールのような）、モノ官能化されることができる（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル等のようなアルキル基とともにモノ官能化されてポリエーテルを形成する）あるいは多官能化されることができる（例えば、アルキル基及び、オレエートのような脂肪酸とともに多官能化されて、ポリエーテルエステルを形成する）ポリアルキレンオキシド化合物（ポリエチレングリコール化合物、ポリプロピレングリコール化合物又はポリブチレングリコール化合物又はそれらのコポリマーのような）を表す。従って、幾つかの態様において、ポリエーテルは式Ｒ_１−（ｘ）_ｙ−Ｒ_２を有し、そこでＲ_１及びＲ_２は独立して水素、アルキル基又は脂肪酸であり、Ｘは反復ポリアルキレンモノマー単位（エチレングリコール単位、プロピレングリコール単位、ポリブチレングリコール単位又はそれらの組み合わせ物のような）を表し、そしてｙ＝２〜５０（例えば、ｙ＝３〜２０のような、ｙ＝２〜３０）である。

用語「ポリシロキサン」は各ケイ素原子に１種又は複数の有機基を結合された線状、分枝又は環状配列の、交互のケイ素及び酸素原子を含有する種々の化合物のいずれかを表す。ポリシロキサン化合物の例は、ジメチルポリシロキサン、メチル水素ポリシロキサン、メチルアルキルポリシロキサン、メチルアリールポリシロキサン、メチルフルオロアルキルポリシロキサン並びにアミノアルキルメチルポリシロキサン、シアノアルキルメチルポリシロキサン、ハロアルキルメチルポリシロキサン及びビニルメチルポリシロキサンのような有機官能性メチルポリシロキサンを包含する非官能性及び有機官能性ポリシロキサンを包含する。環状ポリシロキサンの例は、ヘキサメチルシクロトリシロキサン（Ｄ_３）、オクタメチルシクロテトラシロキサン（Ｄ_４）、デカメチルシクロペンタシロキサン（Ｄ_５）及びドデカメチルシクロヘキサシロキサン（Ｄ_６）を包含する。ポリシロキサンの更なる具体的な例は、ヘキサメチルジシロキサン（Ｌ_２）、オクタメチルトリシロキサン（Ｌ_３）、デカメチルテトラシロキサン（Ｌ_４）及びドデカメチルペンタシロキサン（Ｌ_５）、１，３，５−トリメチル−１，３，５−トリ（３，３，３−トリフルオロプロピル）シクロトリシロキサン及び１，３，５，７−テトラメチル−１，３，５，７−テトラ（３，３，３−トリフルオロプロピル）シクロテトラシロキサンを包含する。更なる例は、シリコーン油（ジメチルポリシロキサン、メチル水素ポリシロキサン及びメチルフェニルシリコーン油のような）、フッ素改質シリコーン油、アミノ改質シリコーン油、エポキシ改質シリコーン油、アルコール改質シリコーン油及び、アルキル改質シリコーン油のような有機物質改質シリコーン油を包含する。ポリシロキサンは単一のポリシロキサンでも又は２種以上のポリシロキサンの混合物でもよく、そして各ポリシロキサンは線状、環状、分枝状又はそれらの組み合わせのようなシロキサン単位のあらゆる配列をもつことができる。ポリシロキサンは例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯから市販されている。２種以上のポリシロキサンの組み合わせ物並びに１種以上のポリシロキサン及び１種以上の他の脂肪族化合物の組み合わせ物もまた想定される。

用語「ワックス」は例えば、炭化水素（通常の又は分枝アルカン及びアルケン）、ケトン、ジケトン、第一級及び第二級アルコール、アルデヒド、ステロールエステル、アルカン酸、テルペン（スクアレンのような）及びモノエステル（ワックスエステル）及びそれらから誘動される個々の成分を包含する種々の物質からなる非水溶性物質を表す。より具体的には、ワックスはグリセロール（脂肪アルコール、ステロール、ヒドロキシカロテノイド又はビタミンＡのような）及び脂肪酸以外のアルコールのエステルであることができる。ワックスの例は、クチン、スベリン、エピキュティクラー（ｅｐｉｃｕｔｉｃｌａｒ）ワックス、フチオセロールワックス（ジミコセロセートエステルのような）、蜜蝋、チャイニーズワックス、セラックワックス、鯨蝋、ラノリン、カルナバワックス、ウリキュリワックス、ジョジョバ油、カンデリリアワックス、エスパルトワックス、ジャパンワックス、米糠油、オゾセライト、モンタンワックス及び合成ワックス（及び、脂肪エステル及びそれらの混合物のようなワックス成分）を包含する。２種以上のワックスの組み合わ
せ物並びに１種以上の他のワックス及び１種以上の他の脂質成分の組み合わせ物もまた想定される。

与えられるすべての百分率は、室温で固体である物質が液体に溶解される時は重量／容量百分率を、そして、室温で液体である物質がもう１つの液体に溶解される時は容量／容量百分率を表す。成分はサンプルにそれらを適用する前に混合してもよいし、又は別々にサンプルに適用して、次に受動的に又は能動的のいずれでも、それらを混合してもよい。

カバースリップ工程で脂肪族化合物をとりいれる自動化Ｈ＆Ｅ法を示すスキーム図である。 対照用の、脂肪族化合物と接触されなかったＨ＆Ｅ染色サンプルと一緒に（２Ａ）、カバースリップ工程中に脂肪族化合物と接触された、自動化Ｈ＆Ｅ染色肝組織サンプルにおける増加された鮮明度及び減少された核乾燥人口産物を示す一連の顕微鏡写真である。 アルコール又はリモネン溶液のいずれか又は双方中に脂肪族化合物を取り入れる、自動化Ｈ＆Ｅ染色工程を示すスキーム図である。 カバースリップ液中に脂肪アルコールを取り入れる自動化Ｈ＆Ｅ染色工程を表すスキーム図である。 Ｈ＆Ｅ染色サンプルを脂肪アルコールと接触させることにより提供される細胞及び非細胞質特徴物の強化された鮮明度を表す一対の顕微鏡写真である。 開示された方法の１つの態様における使用のための種々の脂肪族化合物／組成物を評価するために使用される自動化Ｈ＆Ｅ染色工程を表すスキーム図である。 開示された方法の１つの態様により与えられる強化された鮮明度、コントラスト及びカラー・バランスを表す一連の代表的顕微鏡写真である。

ＩＶ．実施例
本明細の比較的一般的な特徴物の幾つかを説明したので、更なる特徴物及びアスペクトが以下の、限定しない実施例に示される。

カバースリップ工程中の脂肪族化合物の包含
本実施例において、自動化Ｈ＆Ｅ工程における脂肪族化合物の使用が示される。顕微鏡スライド上に固定されたパラフィン包埋肝組織サンプルを、カバースリップ溶媒に溶解された脂肪族化合物を取り入れた自動化Ｈ＆Ｅ染色法を使用して染色した。異なる化学群を代表する幾つかの脂肪族化合物を、組織サンプルをカバースリップするために使用されるカバースリップ溶媒に添加した。カバースリップをスライドに添加し、カバースリップがその場に硬化されると、病理学者はスライドを研究し、サンプルに認められる鮮明度を評価した。病理学者はまた、高温でサンプルを乾燥することにより生成される人工産物の存在につきスライドを検査し、評価した。この実施例は、溶媒の蒸発を促進する条件下で高温にさらされる組織サンプルの形態が回復され、視覚的に強化され、そして高温及び蒸発条件により誘動される人工産物が、カバースリップ工程中にサンプルを脂肪族化合物と接触させることにより抑制又は回避することができることを示す。

本発明の方法及び組成物は、本実施例においてはあらゆる組織学的染色法（手動又は自動化）又はあらゆるスライド染色装置に適用することができるが、その方法及び組成物は、米国特許出願第２００４０００２１６３号及び第２００５０１８６１１４号明細書（どちらの出願書も本明細書に引用することにより編入されている）に記載されている高容量
スライド処理システム中への使用のために開発された、自動化Ｈ＆Ｅ染色法中に取り入れられる。端的には、前記の出願物に記載される自動化スライド処理システムは、スライド上で種々のスライド処理操作を実施する作業ステーション間を実質的に水平位置（交差汚染を最少にするために）で複数のスライドを保持するトレイを入れ替える高容量スライド処理システムである。処理期間中各スライドに新鮮な試薬を適用することができ、そしてスライドがトレイ中で、空間を明けた方法で別々に処理されるために、試薬によるスライドの交差汚染を実質的に排除することができる。１つの形態において、システムは輻射ヒーター、組み合わせ脱パラフィン装置／染色装置／溶媒交換作業ステーション、対流オーブン及びカバースリップ装置を包含する。パラフィン包埋組織サンプルを担持するスライドのトレイはシステムの輻射ヒーター下で加熱されて、容易に除去するためにサンプル中にパラフィンを広げ、そしてスライドにサンプルを付着させることができる。次にトレイを多機能性脱パラフィン化装置／染色装置／溶媒交換作業ステーションに移動し、そこでスライドを脱パラフィンし、染色し、溶媒を交換することができる。次にカバースリップの準備ができた染色されたスライドのトレイをシステムのカバースリップ装置に移動して、そこでスライドにカバースリップを添加する。次にスライドをカバースリップ後に、トレイを対流オーブンに移動して、染色スライド上のカバースリップを硬化させることができる。

今説明された染色システムはあらゆる組織学的染色法を実施するように形成することができるが、本実施例において、システムは退行性Ｈ＆Ｅ染色を実施するように形成された。全体的方法を示すスキームが図１に示され、その方法は、サンプルをスライドに接着させる焼き付け工程、パラフィン包埋サンプルからパラフィンを除去するための脱パラフィン工程、ヘマトキシリン染色工程、ｐＨを上昇させ、ヘマトキシリンをブルーに変えて下流で添加されるエオシンとのより明白なコントラストを提供するブルー化工程、エオシン染色工程、過剰エオシンを除去し、エオシンをより赤くさせる分染化工程、１００％エタノールを使用してサンプルから水を除去する脱水工程、高温及び空気流にスライドをさらしてエタノールを除去する工程、サンプルにリモネンを分配する（場合によりそれに脂肪族化合物が添加される）カバースリップ工程並びに硬化工程を包含する。

本実施例に使用されるＨ＆Ｅ工程において、カバースリップ直前の溶媒交換工程の程度を排除又は減少させるために対流オーブンもまた使用された。トレイを数分間対流オーブンに移して、サンプルから過剰なアルコールを蒸発させ、次にトレイをカバースリップ装置に移して、カバースリップ溶媒（その中に脂肪族化合物を溶解させた又は溶解させない）をスライドに添加して、スライドをカバースリップさせる。

図１に示すように、各脂肪族化合物をリモネン中に２０％の濃度に溶解させ、リモネン混合物（約３０μＬ／スライド１枚）をカバースリップに使用した。種々の化学物質を代表する幾つかの脂肪族化合物それぞれを、２０％濃度で自動化法に使用した。Ｈ＆Ｅ染色スライドの明視野顕微鏡写真を異なる脂肪族化合物それぞれを使用して得て、リモネンに脂肪族化合物を溶解せずに作製された対照スライド（図２Ａ）と一緒に図２Ｂ〜Ｉに示される。特に図２Ａは対照スライドを示し、図２Ｂはリモネン中２０％のデカメチルシクロペンタシロキサン（ポリシロキサン）を使用して作製された組織サンプルを示し、図２Ｃはリモネン中２０％ジオクチルエーテル（脂肪エーテル）を使用して作製された組織サンプルを示し、図２Ｄはリモネン中２０％のセダーウッド油［テルペンの混合物；特にセドロール（テルペノール）及びセデレン（テルペン）及びそれらのエステルのようなそれらの誘導体の混合物］を使用して作製された組織サンプルを示し、図２Ｅはリモネン中２０％のオクタン酸（脂肪酸）を使用して作製された組織サンプルを示し、図２Ｆはリモネン中２０％のリナリルアセテート（脂肪エステル）を使用して作製された組織サンプルを示し、図２Ｇはリモネン中２０％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（洗剤）を使用して作製された組織サンプルを示し、図２Ｈはリモネン中２０％のスクアレン（イソプレノイド）を使
用して作製された組織サンプルを示し、そして図２Ｉはリモネン中２０％のｌ−ウンデカノール（脂肪アルコール）を使用して作製された組織サンプルを示す。

図２のそれぞれの画像の比較は、図２Ａに示した対照スライドに比較して、脂肪族化合物はそれぞれ、細胞及び非細胞質特徴物のコントラスト、カラー・バランス及び鮮明度を増加し、サンプルからエタノールの蒸発を促進した条件下で高温処理することにより誘発される核乾燥人工産物（図２Ａにおいて矢印により２種のこのような人工産物が示される）の数を減少させたことを示す。３人の病理学者のパネルにより、脂肪族化合物により処理されなかったサンプルに比較すると、脂肪族化合物により処理されたすべてのサンプルにおいて著明な鮮明度が存在したことに一致された。

病理学者はまた、ある脂肪族化合物で処理された数枚のスライドそれぞれの上の核乾燥人工産物の数を測定し、平均を計算した。核乾燥人工産物の数の結果は以下の表１に示される。比較のために、サンプルを脂肪族化合物と接触させずに高温におけるエタノールの蒸発を伴う自動化法を使用して作製された肝組織サンプルに認められた人工産物の数は、多すぎて計測できなかった。概括的に、組織片上に５００以上のこのような核乾燥人工産物をもつサンプルは、多すぎて計測できない人工産物を有する。

Ｈ＆Ｅ染色プロトコールにおけるアルコール及び／又はリモネンに添加された脂肪族化合物
本実施例において、オレイルアルコール（不飽和脂肪アルコール）を１００％エタノール及びリモネンのいずれか又は双方中に種々の濃度で溶解し、これらの試薬をそれぞれ、乾燥前、又は自動化Ｈ＆Ｅ染色法のカバースリップ工程中に組織サンプルに適用した。実
施例１におけるように、肝組織片を使用し、前記の自動化スライド処理システムを使用して染色した。

図３は本実施例のための自動化法のスキームを示し、高温におけるアルコールの蒸発のための対流オーブンにスライドを移動する前にアルコール中で、そして／又はカバースリップのために使用されるリモネン中のいずれかにおいて、オレイルアルコールをスライドに分配する工程の時点を示す。実施例１におけるように、高温に対するサンプルの暴露（この場合は、異なる時点に対して種々の温度）を使用して、カバースリップの前に組織サンプルから過剰アルコールを除去した（アルコール―とりわけエタノール―はオレイルアルコールよりずっと低い沸点を有し、そしてスライドから選択的に除去される、アルコール中に添加されたあらゆるオレイルアルコールは残留する）。

核乾燥人工産物の平均数は病理学者により計測された。結果は表２に示される。表２において、１００％エタノール中のオレイルアルコールの濃度は「前濃度」として記載され、カバースリップ溶媒（リモネン）中のオレイルアルコールの濃度は「カバースリップ溶媒」として記載される。カバースリップ溶媒の量（オレイルアルコールを含む又は含まない）並びに、サンプルを乾燥するために使用されたオーブンの温度及びカバースリップの前にスライドが乾燥される時間量も与えられる。

表２に示されるように、オレイルアルコールと接触されなかった正の対照に比較して、乾燥前に１００％のアルコール中又はカバースリップ期間中にリモネン中のいずれかのオレイルアルコールの使用はすべての例において乾燥人工産物を減少させるのに有効であった。本実施例は、核乾燥人工産物を、工程に対する脂肪族化合物の添加により実質的に減少又は回避することができることを示す。更に、脂肪族化合物は溶媒の蒸発を促進する条件下における高温に対する暴露による損傷から組織サンプルを保護することができ、そして／又は脂肪族化合物が高温でサンプルから溶媒を蒸発させることにより改変されたサンプルを回復する補助をすることができることを示す。

オレイルアルコールによるカバースリップ
本実施例において、リモネンに溶解されたオレイルアルコールの種々の異なる濃度及び量の使用が自動化Ｈ＆Ｅ染色法におけるカバースリップに対して示される。肝臓及び前立腺組織片を、実施例１に記載の自動化スライド処理システムを使用してＨ＆Ｅ染色した。本実施例に対する特定の方法は図４にスキームで示される。

リモネン中のオレイルアルコールは表３に示す濃度及び量でカバースリップ工程中に適用された。染色肝組織サンプルは病理学者により検査されて、核乾燥人工産物の数を計測され、前立腺組織サンプルは該方法により提供される鮮明度の量につき評価された（０は脂肪族化合物を取り込まない典型的なＨ＆Ｅ染色法により生成された鮮明度を表す、０〜３の評価で）。

表３に示すように、カバースリップ期間中のリモネン中オレイルアルコールの使用は、リモネン単独と接触された典型的な正の対照（典型的に、多すぎて計測不可能な核乾燥人工産物を生成する）に比較して、乾燥人工産物数を減少させるのに有効であった。図５において、明視野顕微鏡画像の顕微鏡写真は、３０μＬの２０％リモネンで処理された代表的スライド（図５Ｂ）との正の対照スライド（図５Ａ）の比較を示す。観察された鮮明度の増加及び脂肪族化合物により提供される人工産物数の減少が図５Ｂの顕微鏡写真に示される。核乾燥人工産物は図５Ａ中の矢印により示される。

特殊染色剤
本実施例において、リモネンに溶解されたオレイルアルコールの使用が種々の特殊染色剤を使用して染色されるカバースリップサンプルについて示される。肝組織片を担持するスライドをトリクロムＩＩＩブルー染色剤（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）により、ＮｅｓＥＳ^（Ｒ）自動化スライド染色システム（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）に対する標準プロトコールを使用して染色する。同様に、ＮｅｓＥＳ^（Ｒ）装置及び標準プロトコールを使用して、カビ・真菌を含有する肺組織サンプルを担持するスライドをＧＭＳカビ・真菌染色剤（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）で染色し、骨髄サンプルを担持するスライドをＧｉｓｍｓａ染色剤（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）を使用して染色し、そして心臓組織片を担持するスライドをコンゴレッド（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）で染色する。

肝臓、肺、骨髄及び心臓組織片を担持する染色スライドをトレイ中に充填し、本実施例ではスライドのトレイをカバースリップ装置に直接もたらすようにプログラムされている、実施例１に記載のシステムを使用してカバースリップする。カバースリップ装置において、リモネン溶液中２０％のオレイルアルコールがスライドに適用され、前以て糊付けされたカバースリップがスライドの両側に添加される。染色されたサンプルを病理学者によ
り検査される。

自動化Ｈ＆Ｅ染色法に脂肪族化合物を使用する、増加した鮮明度、カラー・バランス及びコントラストの効果
本実施例において、Ｈ＆Ｅ染色スライドの鮮明度、カラー・バランス及びコントラストを増加するための種々の脂肪族化合物の使用が示される。「高い鮮明度」効果は、染色スライドが自動化カバースリップ工程において脂肪族化合物で処理される、実施例１に記載の自動化染色システムの市販の態様を使用して染色されたスライド上で観察された。基底の正の対照として働く、２０％のオレイルアルコール／８０％のリモネン混合物（実施例３参照）により、合計１７種の脂肪族化合物を試験した。各試薬を、高い鮮明度効果を示すために有用な特徴物を包含する組織片を含有する３種の多組織ブロックにつき実験した。これらの多組織ブロックは甲状腺乳頭状癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、正常な肺及び乳癌を包含した。正の対照により高められる甲状腺乳頭状癌特徴物は「すりガラス」様の核の外観、核の溝及び核の擬性封入体を含む。正の対照で処理された前立腺癌は、基底膜及び基底細胞のよりよい可視化のみならずまた、巨大核小体の改善された可視化を示す。扁平上皮細胞癌における正の対照により高められる特徴物は核の鮮明化、細胞角質化、扁平上皮パール、細胞内ブリッジ及び細胞死細胞と分裂細胞間の識別である。正常な肺においては、正の対照は気管支上皮を裏打ちする繊毛の可視化を改善する。正の対照により促進される乳癌特徴物はクロマチン組織、核小体隆起及び有糸分裂特徴物の鮮明化、乳癌の分類に重要な核詳細を包含する。

材料及び方法：
染色システム：
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ^(R) 染色システム， Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅ
ｍｓ， Ｉｎｃ， Ｔｕｃｓｏｎ， ＡＺ．

使用試薬 （すべてがＶｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ， Ｔｕｃｓｏｎ， ＡＺから市販されている）：
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ^(R) Ｎ１ Ｐ／Ｎ ９００−２０１
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｂ Ｐ／Ｎ ９００−２０４
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｗ Ｐ／Ｎ ９００−２０３
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｃ Ｐ／Ｎ ９００−２０２
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｃｌｅａｒ Ｐ／Ｎ ９００−２０９
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｅ Ｐ／Ｎ ９００−２１２
試薬等級アルコール
Ｏｐｔｉｓｕｒｅ^(R) カバースリップ Ｐ／Ｎ ９００−５０１

使用された多組織ブロック：
ＭＴＢ １：
甲状腺ブロック＃ ０２０４−１９２−０２９２９ 商品 ＃９
甲状腺ブロック ＃ ０２０６−３４１−０１３０９ １−２
甲状腺ブロック＃ ０１０４−１９２−００５０４ 商品 ＃６
前立腺ブロック＃ ０２０５−３４１−０１９５４ ２−２
前立腺ブロック＃ ０２０５−３４１−００１９５４−１−２
前立腺ブロック＃ ０２０７−３１５−０１３２９ 商品 ＃３
ＭＴＢ ２：
扁平上皮細胞癌Ａ６０３
扁平上皮細胞癌Ａ３９５
扁平上皮細胞癌０１０６−１９２−０１５３１ 商品 ＃３
扁平上皮細胞癌Ｂ６０３
肺 Ｂ７６３
肺 Ｂ７５０
肺 Ｂ６６６
ＭＴＢ ３：
乳房 ０１１２−１９２−０１６４９ 商品 ＃６
乳房 ０２０６−１９２−０２１０８ 商品 ＃７
乳房 ０１１２−１９２−１５６７ 商品 ＃６
乳房 （インサイチュー） ０２０４−１９２−０２８９７ 商品 ＃７
乳房 （インサイチュー） ０２０４−１９２−０２８８７ 商品 ＃７
乳房 （インサイチュー） ０２０４−１９２−０２８５９ 商品 ＃７

試験された試薬 （ｄ−リモネン中に２０％ ｖ／ｖ 又は ｗ／ｖ 溶解Ｄｅｇｕｓｓａ ＧｍｂＨ， Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ， Ｇｅｒｍａｎｙから入手できる化合物Ｊを除き、すべての試薬成分がＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ から購入できる）：
Ａ： デカメチルシクロペンタシロキサン［シロキサン］
Ｂ： オクチルエーテル［Ｃ１６ エーテル］
Ｃ： セダーウッド油［必須油／天然油］
Ｄ： オレイルアミン［Ｃ１８ アミン］
Ｅ： トコフェロール［フェノール性］
Ｆ： オクタン酸［Ｃ１８ カルボン酸］
Ｇ： Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ ［非イオン洗剤］
Ｈ： リナリルアセテート［エステル］
Ｉ： スクアレン［不飽和脂肪族］
Ｊ： ＡＢＩＬ ＥＭ９０ ［シロキサンポリマー］
Ｋ： ポリ（プロピレングリコール） ［ポリエーテルグリコール］
Ｌ： テルギトール［洗剤］
Ｍ： トリ（プロピレングリコール） ブチルエーテル［ポリエーテル］
Ｎ： メチルオレエート［Ｃ１８ エステル］
Ｏ： オレアミド［Ｃ１８ アミド］
Ｐ： ポリ（エチレングリコール） モノオレエート［ポリエーテルエステル］
正の対照： オレイルアルコール
負の対照： 生の ｄ−リモネン

染色法：
本実施例で使用される最適化Ｓｙｍｐｈｏｎｙ^（Ｒ）法は図６にスキームで示される。前記の通りに、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ法は各スライドに新鮮な試薬を使用することができる。各脂肪族化合物は染色工程のカバースリップ工程で試験された。試験の試薬はカバースリップの適用前にスライドに適用された。スライドを、以下に詳述するように、Ｓｙｍｐｈｏｎｙシステム上で全染色工程を処理した。

スライドをＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｌｉｄｅ Ｔｒａｙ上に充填し、装置の侵入口に配置する。適当な染色法を選択し（標準核染色、標準細胞染色）、タッチスクリーンインターフェース（Ｔｏｕｃｈｓｃｒｅｅｎ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ）を使用して実験を開始する。Ｓｙｍｐｈｏｎｙ染色システム上で、スライドをＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｌｉｄｅ Ｔｒａｙにおけるそれらの位置を決定するためにスキャンする。組織の接着のためにスライド乾燥モジュール（Ｓｌｉｄｅ Ｄｒｙｉｎｇ Ｍｏｄｕｌｅ）中でスライドを焼き付ける。焼き付け工程後に、脱パラフィン化、染色及び洗浄のために染色モジュールにスライドを移動する。脱パラフィン化はＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｃｌｅａｒ試薬を使用し、次に過剰
な試薬を除去するためにアルコールリンスが続く。脱パラフィン化後の標準核及び細胞染色強化プロトコールの工程は以下に記載される：
１．Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｗ試薬をスライドに適用する。
２．Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｎ１試薬を適用し、次に培養期間が続く。
３．スライドをＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｗ液ですすぐ。
４．Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｂ試薬をスライドに適用し、インキュベートする。
５．スライドをＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｗ液ですすぐ。
６．勾配アルコールをスライド上に付着させる。
７．Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｃ液を分配し、インキュベートする。
８．スライドを勾配アルコール添加物及び試薬等級アルコールの双方ですすぐ。
９．スライドをＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｃｌｅａｒ試薬により洗浄し、最後の脱水工程のためにＳｌｉｄｅ作製モジュールに移動する。
１０．スライドをＯｐｔｉＳｕｒｅカバースリップモジュールに移す。
１１．Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｃｌｅａｒを光学的鮮明化及びカバースリップの付着のためにＯｐｔｉＳｕｒｅカバースリップの前にスライド上に付着させる。
１２．カバースリップを固定するためにスライドをＳスライド硬化モジュールに移す。
１３．Ｕｎｉｖｅｒｓａｌスライドトレイを、冷却期間中そして次のトレイの射出のためにＩｎｔｅｌｌｉＱｕｅ中に配置する。

工程１１において、カバースリップ工程の一部として、種々の脂肪族化合物組成物を組織サンプルと接触させた。

評価法：
すべての評価を二人の委員会に認定された病理学者により実施された。代替化合物それぞれで作製されたスライドを評価した。５種の組織タイプ（扁平上皮細胞癌、正常な肺、前立腺癌、乳頭状甲状腺癌、乳癌）を前記の組織／癌特異的測定基準に従って評価した。すべての測定を以下のようにオレイルアルコールにより作製された正の対照のスライドに比較して実施された：
「＞」は測定基準が正の対照に比較して増加されたことを示す。
「＜」は測定基準が正の対照に比較して減少されたことを示す。
「０」は測定基準が正の対照と同等であることを示す。

二人の病理学者により決定された評価の結果は以下の表４及び表５に別々に示される。

本発明に従って処理された前立腺癌サンプルの増加したコントラスト及び改善されたカラー・バランスのみならず、膜及び核の詳細の強化を示す代表的な明視野顕微鏡画像（６０Ｘ）が図７に示される。図７Ａは負の対照であり、図７Ｂは正の対照（オレイルアルコール、脂肪アルコール）であり、図７Ｃは化合物Ｈ（リナリルアセテート、脂肪エステル）であり、そして図７Ｄは化合物Ｏ（オレアミド、脂肪アミド）である。

結論：
全体として、正の対照のオレイルアルコールに比較すると、１６種の代替化合物はそれぞれ同等な性能を示した。特定の病理学者により個々の組織／癌のタイプに対して幾らかの差異が認められたが、いずれの代替化合物に対してもすべての組織／癌タイプにわたり一定した変化は認めなかった。

本発明の原理は幾つかの例示された態様に関連して説明されてきたが、態様の詳細はこのような原理から逸脱せずに修飾することができることは当業者には明白であるにちがいない。例えば、例示された実施例は染色法の特定の工程でサンプルと接触された脂肪族化合物を包含するが、脂肪族化合物は染色法のいずれの工程中にサンプルと接触させてもよい。更に、開示された方法及び組成物は、いずれの自動化染色法又はいずれの手動染色法とともに使用してもよい。特別に例示された染色法の変法は異なるアルコール試薬（イソプロパノールのような）及び他のカバースリップ溶媒（キシレン又はアルカン溶媒のような）を使用することができる。

本発明の特徴及び主要な態様は、次のとおりである。
態様１： サンプルを１種又は複数の組織学的染色剤と接触させ、そしてサンプルを脂肪
族化合物の組成物と接触させる方法を含んでなり、かつ脂肪族化合物の組成物が脂肪族化合物及び低級アルコール又はカバースリップ溶媒のいずれかより本質的になる、生体サンプルを染色する方法。
態様２： 脂肪族化合物が約２０℃で約１．０ｇ／Ｌ未満の水溶性を有する、態様１の方法。
態様３： 脂肪族化合物が非洗剤の脂肪族化合物を含んでなる、態様１の方法。
態様４： 生体サンプルがワックス包埋生体サンプルを含んでなり、そしてサンプルを脂肪族化合物の組成物と接触させる方法が、サンプルが脱ワックスされた後に実施される、態様１の方法。
態様５： 生体サンプルを１種又は複数の組織学的染色剤と接触させる方法が、生体サンプルをヘマトキシリン及びエオシンと接触させる方法より本質的になる、態様１の方法。態様６： 方法が自動化されている、態様１の方法。
態様７： 複数のサンプルが染色され、そして新鮮な試薬が各サンプルに対して使用される、態様６の方法。
態様８： 脂肪族化合物が洗剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドの１種又は複数を含んでなる、態様１の方法。
態様９： 脂肪族化合物が脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン及び脂肪エーテルの１種又は複数を含んでなる、態様１の方法。
態様１０： 脂肪族化合物が脂肪エーテル、脂肪アミン、脂肪酸エステル及び脂肪アルコールの１種又は複数を含んでなる、態様１の方法。
態様１１： 脂肪族化合物が脂肪アルコール、脂肪エーテル及び脂肪アミンの１種又は複数を含んでなる、態様１の方法。
態様１２： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０脂肪アルコールを含んでなる、態様１の方法。
態様１３： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０不飽和脂肪アルコールを含んでなる、態様１の方法。
態様１４： 脂肪族化合物の組成物が約０．５％〜約３５％の脂肪族化合物を含んでなる、態様１の方法。
態様１５： カバースリップ溶媒が脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素又はテルペンの１種又は複数である、態様１の方法。
態様１６： カバースリップ溶媒がリモネンである、態様１の方法。
態様１７： サンプルを脂肪族化合物の組成物で処理する方法がサンプルをカバースリップする方法よりなる、態様１の方法。
態様１８： カバースリップ溶媒、カバースリップ溶媒中に溶解された脂肪族化合物及び、場合により、カバースリップ溶媒中に溶解された接着剤より本質的になるカバースリップ組成物をサンプルに適用し、そして
カバースリップされたサンプルがカバースリップ溶媒単独を使用してカバースリップされる実質的に同様なサンプルに比較して、増加したコントラスト並びに細胞及び非細胞質（ｓｕｂ−ｃｅｌｌｕｌａｒ）の鮮明度（ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）を示す、カバースリップ組成物が適用されたサンプルをカバースリップする方法を含んでなる、
顕微鏡スライド上の染色された生体サンプルのカバースリップ方法。
態様１９： 脂肪族化合物が洗剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドの１種又は複数を含んでなる、態様１８の方法。
態様２０： 脂肪族化合物が脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン及び脂肪エーテルの１種又は複数を含んでなる、態様１８の方法。
態様２１： 脂肪族化合物が脂肪エーテル、脂肪アミン、脂肪酸エステル及び脂肪アルコールの１種又は複数を含んでなる、態様１８の方法。
態様２２： 脂肪族化合物が脂肪アルコール、脂肪エーテル及び脂肪アミンの１種又は複
数を含んでなる、態様１８の方法。
態様２３： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０脂肪アルコールを含んでなる、態様１８の方法。
態様２４： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０不飽和脂肪アルコールを含んでなる、態様１８の方法。
態様２５： 脂肪族化合物が約２０℃で約１ｇ／Ｌ未満の水溶性を有する、態様１８の方法。
態様２６： カバースリップ組成物が約０．５％〜約３５％の脂肪族化合物を含んでなる、態様１８の方法。
態様２７： カバースリップ溶媒が脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素又はテルペンの１種又は複数を含んでなる、態様１８の方法。
態様２８： カバースリップ溶媒がリモネンを含んでなる、態様１８の方法。
態様２９： カバースリップの自動化された方法である、態様１８の方法。
態様３０： サンプルが組織学的に染色されたサンプルを含んでなる、態様１８の方法。態様３１： カバースリップする方法が前以て接着された（ｐｒｅ−ｇｌｕｅｄ）カバースリップでカバースリップする方法を含んでなる、態様１８の方法。
態様３２： 組成物が更に、本質的にカバースリップ用接着剤よりなる、態様１８の方法。
態様３３： 増加されたコントラスト並びに細胞及び非細胞質の鮮明度が明視野顕微鏡を使用して観察される、態様１８の方法。
態様３４： カバースリップ溶媒及び脂肪族化合物を含んでなる、カバースリップ組成物。
態様３５： 脂肪族化合物が洗剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドの１種又は複数を含んでなる、態様３４の組成物。
態様３６： 脂肪族化合物が脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン及び脂肪エーテルの１種又は複数を含んでなる、態様３４の組成物。
態様３７： 脂肪族化合物が脂肪エーテル、脂肪アミン、脂肪酸エステル及び脂肪アルコールの１種又は複数を含んでなる、態様３４の組成物。
態様３８： 脂肪族化合物が脂肪アルコール、脂肪エーテル及び脂肪アミンのうちの１種又は複数を含んでなる、態様３４の組成物。
態様３９： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０脂肪アルコールを含んでなる、態様３４の組成物。
態様４０： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０不飽和脂肪アルコールを含んでなる、態様３４の組成物。
態様４１： 脂肪族化合物が約２０℃で約１ｇ／Ｌ未満の水溶性を有する、態様３４の組成物。
態様４２： カバースリップ組成物が本質的にカバースリップ溶媒、カバースリップ溶媒中に溶解された脂肪族化合物及び、場合により、カバースリップ溶媒中に溶解されたカバースリップ用接着剤よりなる、態様３４の組成物。
態様４３： カバースリップ溶媒がリモネン、キシレン、アルカン及びトルエンの１種又は複数を含んでなる、態様３４の組成物。
態様４４： 組織化学的技法を使用してサンプルを処理して、染色されたサンプルを提供し、
サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらし、そして
サンプルからの溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらす前、その期間中又はその後に、サンプルを脂肪族化合物と接触させる方法を含んでなる、
顕微鏡スライド上の生体サンプルの処理方法。
態様４５： 溶媒の蒸発を促進する条件下でサンプルを高温にさらす方法が、対流式オーブンでサンプルを加熱する方法又は輻射ヒーターでサンプルを加熱する方法を含んでなる
、態様４４の方法。
態様４６： サンプルを脂肪族化合物と接触させる方法が、脂肪族化合物と接触されなかった実質的に同様なサンプルに比較して、サンプルをさらす方法により生成される人口産物（ａｒｔｉｆａｃｔｓ）を減少させる、態様４４の方法。
態様４７： サンプルを脂肪族化合物と接触させる方法がサンプル中に認められる細胞及び非細胞質の鮮明度を増加する、態様４４の方法。
態様４８： 組織化学的方法が組織学的染色法を含んでなる、態様４４の方法。
態様４９： 組織学的染色法が本質的に、サンプルをヘマトキシリン及びエオシンと接触させる方法よりなる、態様３１の方法。
態様５０： 少なくとも２５％の溶媒がサンプルから蒸発される、態様４４の方法。
態様５１： 溶媒が低級アルカノールを含んでなる、態様４４の方法。
態様５２： 脂肪族化合物の沸点が約２００℃を超える、態様４４の方法。
態様５３： 脂肪族化合物が洗剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル及びイソプレノイドの１種又は複数を含んでなる、態様４４の方法。
態様５４： 脂肪族化合物が脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン及び脂肪エーテルの１種又は複数を含んでなる、態様４４の組成物。
態様５５： 脂肪族化合物が脂肪エーテル、脂肪アミン、脂肪酸エステル及び脂肪アルコールの１種又は複数を含んでなる、態様４４の組成物。
態様５６： 脂肪族化合物が脂肪アルコール、脂肪エーテル及び脂肪アミンのうちの１種又は複数を含んでなる、態様４４の方法。
態様５７： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０脂肪アルコールを含んでなる、態様４４の方法。
態様５８： 脂肪族化合物が１種又は複数のＣ８〜Ｃ２０不飽和脂肪アルコールを含んでなる、態様４４の方法。
態様５９： 脂肪族化合物が約２０℃で約１ｇ／Ｌ未満の水溶性を有する、態様４４の方法。
態様６０： サンプルを暴露した後に、サンプルを脂肪族化合物と接触させる、態様４４の方法。
態様６１： 高温が約３５℃〜約１４０℃の間の温度を含んでなる、態様４４の方法。
態様６２： 脂肪族化合物が有機溶媒中に溶解される、態様４４の方法。
態様６３： 脂肪族化合物が約０．５％〜約３５％の濃度で有機溶媒中に溶解される、態様６２の方法。
態様６４： 有機溶媒が低級アルカノールを含んでなる、態様６２の方法。
態様６５： 低級アルカノールがエタノールを含んでなる、態様６４の方法。
態様６６： 有機溶媒がテルペンである、態様６２の方法。
態様６７： テルペンがリモネンを含んでなる、態様６６の方法。
態様６８： 工程が自動化されている、態様４４の方法。
態様６９： 複数のサンプルが処理され、そして各サンプルが新鮮な試薬で処理される、態様６８の方法。
態様７０： サンプルが脱パラフィン化溶媒を使用して脱パラフィン化された後に、サンプルを脂肪族化合物と接触させる、態様４４の方法。
態様７１： 脱パラフィン化溶媒がサンプルから実質的に除去された後に、サンプルを脂肪族化合物と接触させる、態様７０の方法。
態様７２： サンプルが組織化学的方法で処理された後に、サンプルを脂肪族化合物と接触させる、態様４４の方法。
態様７３： 組織化学的方法が組織学的染色法を含んでなる、態様４４の方法。
態様７４： サンプルがカバースリップされる時にサンプル上に存在する脂肪族化合物の量が約１μＬ〜約３０μＬである、態様４４の方法。
態様７５： 人口産物が、サンプルから溶媒の蒸発を促進する条件下で、サンプルを高温
にさらす方法により誘発される核乾燥人口産物を含んでなる、態様４６の方法。

本発明によれば、細胞及び非細胞質の鮮明度を増加し、そしてサンプルのコントラスト及びカラー・バランスを改善するように、生体サンプルを処理するための方法及び組成物が提供される。したがって、生物学的サンプルを処理又は検出するための手段を利用する産業において利用される。

Claims (8)

1. カバースリップ溶媒及びカバースリップ溶媒中に溶解された脂肪族化合物より本質的に成り、さらに、カバースリップ溶媒中に溶解された接着剤を含んでいてもよいカバースリップ組成物をサンプルに適用する工程、及び
   カバースリップされたサンプルがカバースリップ溶媒単独を使用してカバースリップされる実質的に同様なサンプルに比較して、増加したコントラスト並びに細胞及び非細胞質（ｓｕｂ−ｃｅｌｌｕｌａｒ）の鮮明度（ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）を示す、カバースリップ組成物が適用されたサンプルをカバースリップする工程を、順に含んでなり、かつ、脂肪族化合物が脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン、ポリエーテル、イソプレノイド、膜脂質、糖脂質、リン脂質、ステロール及び洗剤からなる群より選択される１種又は２以上であることを特徴とする、顕微鏡スライド上の染色された生体サンプルのカバースリップ方法。
2. カバースリップ組成物が０．５％〜３５％の脂肪族化合物を含んでなる、請求項１記載の方法。
3. カバースリップ溶媒が脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素又はテルペンの１種又は複数を含んでなる、請求項１記載の方法。
4. 方法がカバースリップの自動化された操作である、請求項１記載の方法。
5. カバースリップする工程が前以て接着された（ｐｒｅ−ｇｌｕｅｄ）カバースリップでカバースリップする工程を含んでなる、請求項１記載の方法。
6. 組成物が更に、カバースリップ用接着剤より本質的になる、請求項１記載の方法。
7. 脂肪族化合物が脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪アミン、脂肪エーテル、ポリシロキサン及びポリエーテルの１種又は複数を含んでなる、請求項１記載の方法。
8. 脂肪族化合物が２０℃で１ｇ／Ｌ未満の水溶性を有する、請求項１記載の方法。

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