JP2013050356A - 抗体を用いて口蹄疫ウイルスを検出する方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明の方法は、口蹄疫ウイルスの血清型Asia1と特異的に結合する抗体、または口蹄疫ウイルスの血清型Cと特異的に結合する抗体を用いたELISA法にしたがって、口蹄疫ウイルスを血清型について特異的に検出する。
【選択図】なし
Description
(ハイブリドーマの作製)
口蹄疫ウイルスのAsia1 Shamir株およびC/PHI/7/84株をIB−SR−2細胞に接種し、一晩にわたって回転培養した。回収した培養液を4000Gにおいて30分間にわたって遠心した後に、上清を回収した。上清を飽和硫化アンモニウム溶液と等量混和し、一晩にわたって4℃において撹拌することによってウイルスを析出させた。析出させたウイルスを、4000Gにおいて30分間にわたって遠心して沈殿させ、上清を捨ててから適量のPBSを用いて懸濁した。再び170000G(32000rpm)において2時間にわたって遠心し、上清を除去し、1mlのPBSを用いてウイルスを懸濁した。シュークロース密度勾配(15〜45%)にウイルスの懸濁液を乗せ、270000G(41000rpm)において1.5時間にわたって遠心を行い、所定の位置にあらわれた目的のバンドを回収することによって、146Sの完全粒子を精製した。
(1)ELISA法、(2)ウイルス中和試験および(3)口蹄疫感染細胞の免疫染色によって、得られたモノクローナル抗体の抗原特性および中和活性について調べた。(1)〜(3)は、以下の材料および手順を用いて行った。
スクリーニングにおけるELISAと同様の手順で行った。比較対象のモノクローナル抗体として、血清型Oおよび血清型Asia1の口蹄疫ウイルスと交差反応性を示す抗体(7C2)を使用した。以下の(2)および(3)についても同様に、7C2を比較対象として使用した。7C2については、JOUNAL OF CLINICAL Microbiology, NOV. 2009, p.3663-3668を参照すればよい。
感染用の細胞としてIB−SR−2細胞を使用した。定法にしたがって、ハイブリドーマの培養上清もしくは増殖用の培地のみ、およびウイルス液の混合液をインキュベートした後に、細胞に接種した。感染後5日目に染色して、培養上清とのウイルス液の混合およびインキュベーションによって、ウイルスの増殖を抑制したか否かを評価した。
スクリーニングにおける免疫染色と同様の手順で行った。
(使用する抗体)
本アッセイには、以下の6種の抗体を使用する。以降の記載において、抗体の種類は下記の番号と対応している。
1.血清型Oの口蹄疫ウイルスを特異的に認識するモノクローナル抗体(70C4)
2.血清型Aの口蹄疫ウイルスを特異的に認識するモノクローナル抗体(16C6)
3.血清型Cの口蹄疫ウイルスを特異的に認識するモノクローナル抗体(13F1)
4.血清型Asia1の口蹄疫ウイルスを特異的に認識するモノクローナル抗体(12C7)
5.血清型O、A、CおよびAsia1のいずれの口蹄疫ウイルスも認識するモノクローナル抗体(71F2)
6.血清型OおよびAsia1の口蹄疫ウイルスと交差反応するモノクローナル抗体(7C2)
7.すべての血清型の口蹄疫ウイルスを特異的に認識するモノクローナル抗体(1H5)
抗体1、2および5〜7については、JOUNAL OF CLINICAL Microbiology, NOV. 2009, p.3663-3668を参照すればよい。
使用するモノクローナル抗体をプロテインGアフィニティーカラム(MAb Trap Kit; GH Healthcare 17-1128-01)にかけて、アッセイに使用するためのIgG画分のみを精製した。
抗体の精製によって得られたIgG画分を含んでいる抗体懸濁液における緩衝液を、Amicon ultra Centrifugal filter units(Millipore社、商品コード:UFC805024)を用いて、0.01MのPBSに置換した。
Peroxidase Labeling Kit-SH(同仁化学、商品コード:LK09)を用いて、抗体1〜6をペルオキシダーゼによって標識した。
捕捉抗体としての抗体7を0.05Mの炭酸バッファー(pH9.6)によって0.2μg/50μlに希釈し、96ウェルプレート(Immulon II HB Thermo)の各ウェルに50μlずつを分注し、4℃において一晩にわたって固相化させた。洗浄液(300μl/ウェルの0.002MのPBS)を用いて4回にわたって洗浄した後、異なる血清型の口蹄疫ウイルスを含んでいるサンプルを50μlずつ各ウェルに加え、100rpmにおいて振とうしながら37℃において1時間にわたって反応させた。ここで、0.01MのPBS(pH7.4)に0.05%(v/v)のTween20を加えたA液を、陰性対照として1つのウェルに入れておいた。固相化後の洗浄と同様に洗浄した後、B液(A液に8%のスキムミルクが加えられている溶液)を各ウェルに加えて、室温において20分間にわたって各ウェルをブロッキングした。B液を捨ててから洗浄せずに、B液を用いて500倍に希釈したペルオキシダーゼ標識した抗体1〜6の50μlをウェルに加え、37℃において45分間にわたって反応させた。上記洗浄液を用いて8回にわたって洗浄した後、50mLの0.05Mのリン酸クエン酸バッファー(pH5.0)に30mgのOPDおよび3%(w/v)の過酸化水素を加えた発色基質を各ウェルに対して50μlずつ加えた。室温の暗所において15分間にわたって反応させた後に、50μlの1.25Mの硫酸を用いて反応を停止させ、ELISAプレートリーダーによって492nmおよび690nmの波長を測定した。結果を図2に示す。
Claims (7)
- 口蹄疫ウイルスの血清型Asia1と特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびCと特異的に結合しない抗体、または口蹄疫ウイルスの血清型Cと特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびAsia1と特異的に結合しない抗体を用いたELISA法にしたがって、口蹄疫ウイルスを血清型について特異的に検出する、方法。
- 口蹄疫ウイルスの血清型Cと特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびAsia1と特異的に結合しない抗体、口蹄疫ウイルスの血清型Asia1と特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびCと特異的に結合しない抗体、口蹄疫ウイルスの血清型Oと特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型A、CおよびAsia1と特異的に結合しない抗体、ならびに口蹄疫ウイルスの血清型Aと特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、CおよびAsia1と特異的に結合しない抗体を用いたELISA法にしたがって、口蹄疫ウイルスを血清型について特異的に検出する、請求項1に記載の方法。
- 上記抗体のいずれもがモノクローナル抗体である、請求項1または2に記載の方法。
- 上記抗体のいずれもがポリクローナル抗体である、請求項1または2に記載の方法。
- 口蹄疫ウイルスの血清型Cと特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびAsia1と特異的に結合しない上記抗体が、ハイブリドーマの抗口蹄疫ウイルス血清型C hybridoma 13F1(自己寄託株)によって産生される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 口蹄疫ウイルスの血清型Asia1と特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびCと特異的に結合しない上記抗体が、ハイブリドーマの抗口蹄疫ウイルス血清型Asia1 hybridoma 12C7(自己寄託株)によって産生される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 口蹄疫ウイルスの血清型Cと特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびAsia1と特異的に結合しない抗体、または口蹄疫ウイルスの血清型Asia1と特異的に結合し、口蹄疫ウイルスの血清型O、AおよびCと特異的に結合しない抗体が固定されている基材を備えている、ELISAキット。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016132629A (ja) * | 2015-01-16 | 2016-07-25 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 口蹄疫ウイルスと反応する抗体 |
JP2016132628A (ja) * | 2015-01-16 | 2016-07-25 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 口蹄疫ウイルスと反応する抗体 |
CN109765365A (zh) * | 2019-01-31 | 2019-05-17 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种Asia1型口蹄疫病毒抗体的检测试剂盒 |
CN110187105A (zh) * | 2019-06-25 | 2019-08-30 | 艾军 | 一种检测牛、羊口蹄疫病毒o型抗体的b-elisa试剂盒及制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08320324A (ja) * | 1995-05-24 | 1996-12-03 | Norin Suisansyo Kachiku Eisei Shikenjo | 口蹄疫診断用ペプチドおよび当該ペプチドを含有する口蹄疫診断用抗原 |
US20110014639A1 (en) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | Tsu-Han Chen | Hybridoma cell line producing monoclonal antibody against foot-and-mouth disease virus, the monoclonal antibody therefrom, immunoassay reagent and kit, and immunoassay method |
WO2011054011A2 (en) * | 2009-11-02 | 2011-05-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Foot and mouth disease virus (fmdv) consensus proteins, coding sequences therefor and vaccines made therefrom |
JP2013049645A (ja) * | 2011-08-30 | 2013-03-14 | National Agriculture & Food Research Organization | 口蹄疫ウイルスと反応する抗体、当該抗体を用いて口蹄疫ウイルスを検出する方法、および当該抗体を含んでいるストリップ |
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2011
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08320324A (ja) * | 1995-05-24 | 1996-12-03 | Norin Suisansyo Kachiku Eisei Shikenjo | 口蹄疫診断用ペプチドおよび当該ペプチドを含有する口蹄疫診断用抗原 |
US20110014639A1 (en) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | Tsu-Han Chen | Hybridoma cell line producing monoclonal antibody against foot-and-mouth disease virus, the monoclonal antibody therefrom, immunoassay reagent and kit, and immunoassay method |
WO2011054011A2 (en) * | 2009-11-02 | 2011-05-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Foot and mouth disease virus (fmdv) consensus proteins, coding sequences therefor and vaccines made therefrom |
JP2013049645A (ja) * | 2011-08-30 | 2013-03-14 | National Agriculture & Food Research Organization | 口蹄疫ウイルスと反応する抗体、当該抗体を用いて口蹄疫ウイルスを検出する方法、および当該抗体を含んでいるストリップ |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6014054469; Morioka,K.: 'Foot-and-Mouth Disease Virus Antigen Detection Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Using Multiserotype' J. CLIN. MICROBIOL. 47/11, 200911, 3663-3668 * |
JPN6015019878; Freiberg B.et al.,: 'Type-independent detection of foot-and-mouth disease virus by monoclonal antibodies that bind to ami' J Virol Methods. 92(2), 200104, p.199-205. * |
JPN6015019880; Mateu MG.et al.,: 'A single amino acid substitution affects multiple overlapping epitopes in the major antigenic site o' J Gen Virol. 71 ( Pt 3), 199003, p.629-37. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016132629A (ja) * | 2015-01-16 | 2016-07-25 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 口蹄疫ウイルスと反応する抗体 |
JP2016132628A (ja) * | 2015-01-16 | 2016-07-25 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 口蹄疫ウイルスと反応する抗体 |
CN109765365A (zh) * | 2019-01-31 | 2019-05-17 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种Asia1型口蹄疫病毒抗体的检测试剂盒 |
CN110187105A (zh) * | 2019-06-25 | 2019-08-30 | 艾军 | 一种检测牛、羊口蹄疫病毒o型抗体的b-elisa试剂盒及制备方法 |
CN110187105B (zh) * | 2019-06-25 | 2022-03-22 | 艾军 | 一种检测牛、羊口蹄疫病毒o型抗体的b-elisa试剂盒及制备方法 |
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