JP2013040136A - ４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩、その製造方法およびそれを用いる核酸の検出方法 - Google Patents

４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩、その製造方法およびそれを用いる核酸の検出方法 Download PDF

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Munenobu Inoue
宗宣 井上
Masahiro Shiozaki
雅宏 潮崎
Noriko Tabuchi
典子 田淵
Akio Okizaki
章夫 沖崎
Takaya Tawarada
隆哉 俵田
Akinori Kobuna
昭徳 小鮒
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Abstract

【課題】 ストークスシフトが大きく、蛍光強度値が大きく、さらに蛍光増感率も大きい、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素を提供すること。
【解決手段】 一般式（２）
【化１】
Figure 2013040136

で表される４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩により前記課題を解決する。
【選択図】 なし

Description

本発明は、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素として有用な、４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩、その製造方法およびそれを用いた核酸の検出方法に関する。
近年、遺伝子診断技術の発達に伴い、遺伝子を検出する技術の重要性が増している。二本鎖ＤＮＡやＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド等の二本鎖核酸の検出には、従来よりエチジウムブロミドやオキサゾールイエロー等の蛍光色素を用いた検出が用いられている（非特許文献１）。また、それらの蛍光色素をオリゴヌクレオチドに結合させて得られるオリゴヌクレオチドプローブは、癌遺伝子やウイルス等の遺伝子診断に用いられている（特許文献１）。
本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩はこれまでに全く報告されておらず、新規の化合物である。なお非特許文献２には、本発明の類似化合物である２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩が開示されているが、本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩とは、少なくともベンゾチアゾール環４位にアルコキシ基を有している点で異なる。
特開２００１−０１３１４７号公報
Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ；３１５−４１２（２００５） Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｐｉｇｍｅｎｔｓ，６７，４７−５４（２００５） Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｐｉｇｍｅｎｔｓ，１１，２１−３５（１９８９）
エチジウムブロミドやオキサゾールイエロー等二本鎖核酸を検出するのに用いられる従来の蛍光色素は、ストークスシフトが小さい、蛍光強度が弱いといった問題があった。具体的には、エチジウムブロミドには、蛍光強度値が低く、当該色素と核酸との接触による蛍光強度値の増加の割合、いわゆる蛍光増感率が小さいという問題があった。オキサゾールイエローには、ストークスシフトが小さいという問題があった。
また非特許文献２に開示の２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩は、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素として用いることができるが、ストークスシフトが小さく、蛍光強度値が低く、蛍光増感率も小さいため、実用には十分ではないという問題があった。
本発明の課題は、ストークスシフトが大きく、蛍光強度値が大きく、さらに蛍光増感率も大きい、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を鑑み鋭意検討を重ねた結果、本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩が、ストークスシフトが大きく、蛍光強度値が大きく、さらに蛍光増感率も大きい、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、一般式（２）
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ１は炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ２は炭素数１から８のアルキル基または炭素数１から８のハロアルキル基を表し、Ｒ３は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ４は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ３とＲ４は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基または炭素数１から３のアルコキシ基を表し、Ｘはハロゲン原子、炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。）で表される４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩に関し、その具体例として、下記一般式（２ａ）
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ２ａは３−ヨードプロピル基、４−ヨードブチル基、５−ヨードペンチル基または６−ヨードヘキシル基を表す。）、および下記式（２ｂ）
Figure 2013040136
 がある。
また本発明は、一般式（４）
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ１は炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ２は炭素数１から８のアルキル基または炭素数１から８のハロアルキル基を表し、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基または炭素数１から３のアルコキシ基を表し、Ｘはハロゲン原子、炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。）で表される４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム塩を、縮合剤の存在下、一般式（５）
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ３は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ４は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ３とＲ４は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表す。）で表されるベンズアルデヒド誘導体と反応させる、一般式（２）
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３、Ｒ５−４、Ｒ６−１、Ｒ６−２、Ｒ６−３およびＸは前記と同じ意味を表す。）で表される４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩の製造方法に関する。
さらに本発明は、一般式（２）
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ１は炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ２は炭素数１から８のアルキル基または炭素数１から８のハロアルキル基を表し、Ｒ３は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ４は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ３とＲ４は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基または炭素数１から３のアルコキシ基を表し、Ｘはハロゲン原子、炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。）で表される４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、該４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩の蛍光増感を観測することにより、二本鎖核酸を検出する方法に関する。
本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩は、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素として用いることができる。また本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩は、非特許文献２で開示の２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩と比較し、大きなストークスシフト、強い蛍光強度、および高い蛍光増感を示すため、遺伝子検査、遺伝子診断、遺伝子研究の分野等で極めて有用である。
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩（以下、本発明の蛍光色素という）中、Ｒ１で表される炭素数１から３のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、メチル基がＲ１として好ましい。
本発明の蛍光色素中、Ｒ２で表される炭素数１から８のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基を例示することができる。また、Ｒ２で表される炭素数１から８のハロアルキル基としては、ブロモメチル基、２−ブロモエチル基、３−ブロモプロピル基、４−ブロモブチル基、５−ブロモペンチル基、６−ブロモヘキシル基、７−ブロモヘプチル基、８−ブロモオクチル基、ヨードメチル基、２−ヨードエチル基、３−ヨードプロピル基、４−ヨードブチル基、５−ヨードペンチル基、６−ヨードヘキシル基、７−ヨードヘプチル基、８−ヨードオクチル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、エチル基、３−ヨードプロピル基、４−ヨードブチル基、５−ヨードペンチル基または６−ヨードヘキシル基がＲ２として好ましい。
本発明の蛍光色素中、Ｒ３およびＲ４で表される炭素数１から３のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基を例示することができる。また、Ｒ３とＲ４が結合している窒素原子と一体となって形成される複素環としては、該窒素原子を含む複素環の名称で例示すると、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、メチル基がＲ３およびＲ４として好ましい。
本発明の蛍光色素中、Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４で表される炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基としては、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、水素原子がＲ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４として好ましい。
本発明の蛍光色素中、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３で表される炭素数１から３のアルキル基としては、直鎖状または分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基を例示することができる。また、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３で表される炭素数１から３のアルコキシ基としては、直鎖状または分岐状のいずれであってもよく、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロピルオキシ基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、水素原子、メチル基またはメトキシ基がＲ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３として好ましい。
本発明の蛍光色素中、Ｘで表されるハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を例示することができる。またＸで表される炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基としては、メトキシスルホニルオキシ基、エトキシスルホニルオキシ基、プロポキシスルホニルオキシ基、ブトキシスルホニルオキシ基、ペントキシスルホニルオキシ基、ヘキサノキシスルホニルオキシ基、ヘプタノキシスルホニルオキシ基、オクタノキシスルホニルオキシ基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、ヨウ素原子またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ（ＴｆＯ）基がＸとして好ましい。
次に、本発明の蛍光色素の製造方法（以下、単に本発明の製造方法という）について詳細に説明する。本発明の蛍光色素（２）は、下記スキームにより製造することができる。
Figure 2013040136
 （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３、Ｒ５−４、Ｒ６−１、Ｒ６−２、Ｒ６−３およびＸは前記と同じ意味を表す。）
本発明の製造方法は、４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム塩（４）とベンズアルデヒド誘導体（５）を縮合させ、本発明の蛍光色素（２）を製造する方法である。本発明の製造方法の原料である４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム塩（４）は、例えば文献記載の方法（Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｐｉｇｍｅｎｔｓ，１１，２１−３５（１９８９）：非特許文献３）を参考に、対応する４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾール誘導体から調製することができる。
なお本発明の製造方法は、縮合剤の存在下に行なうことが必須であり、縮合剤としては塩基または脱水剤を用いることができる。本工程の縮合剤として用いることのできる塩基としては、ピペリジン、ピロリジン、モルフォリン等の有機塩基を例示することができる。また、本工程の縮合剤で用いることのできる脱水剤としては、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸等の酸無水物を例示することができる。中でも収率が良い点で、ピペリジンまたは無水酢酸が縮合剤として好ましい。
本工程の反応は反応を阻害しない溶媒であれば、溶媒中で行なってもよい。本工程で用いることができる溶媒として、具体的には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、シクロペンチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン等の炭化水素系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン等の非プロトン性極性溶媒、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール等のアルコール系溶媒、水等を例示することができ、これらの溶媒の中から２種類以上を混合して用いてもよい。また前述した縮合剤である、ピペリジン、ピロリジン、モルフォリン等の有機塩基、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸等の酸無水物を溶媒として用いてもよい。
４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム塩（４）とベンズアルデヒド誘導体（５）とのモル比に特に制限はないが、１：１から１：１０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：１から１：３がさらに好ましい。また、４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム塩（４）と縮合剤とのモル比も特に制限はないが、縮合剤を溶媒として用いない場合には、１：１から１：１０が好ましく、中でも収率が良い点で１：１から１：３がさらに好ましい。
本工程の反応温度は、−７８℃から１５０℃の範囲から適宜選ばれた温度で行なうことができる。中でも収率が良い点で室温から１２０℃の範囲が好ましい。
本工程で得られた、本発明の蛍光色素（２）は、必要に応じて反応終了後、反応溶液から精製することで得ることができる。精製する方法には特に限定はないが、溶媒抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、分取液体クロマトグラフィー、再結晶または昇華等の汎用的な方法で目的物を精製することができる。
本発明の蛍光色素（２）は、二本鎖核酸と分子間相互作用することにより顕著な蛍光増感を示すので、二本鎖核酸の検出に用いることができる。分子間相互作用の方法に特に制限はないが、例えば、インターカレーション、マイナーグルーブバインディング、メジャーグルーブバインディング等があげられる。好ましくはインターカレーションまたはマイナーグルーブバインディングであり、さらに好ましくはインターカレーションである。検出対象の二本鎖核酸は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドのいずれであってもよく、ＰＣＲ等に代表される核酸増幅反応により合成された二本鎖核酸、化学的に合成された二本鎖核酸、血液、組織、細胞等の生体由来試料から抽出された二本鎖核酸、食品、土壌、排水等から分離された微生物由来試料から抽出された二本鎖核酸等を用いることができる。
本発明の蛍光色素（２）と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、該蛍光色素（２）の蛍光増感を観測する溶媒に特に制限はないが、緩衝液を用いると好ましい。該緩衝液としては、トリス−塩酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液を例示することができる。また、検出対象の二本鎖核酸の熱的安定性の向上を目的に、前述の緩衝液に任意の濃度で無機塩を添加してもよい。用いることのできる無機塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化マグネシウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム等を例示することができ、これらの無機塩の中から２種類以上を混合して用いてもよい。なお、無機塩の添加濃度は０Ｍから５Ｍの範囲が好ましい。前述の緩衝液に、さらに０％から８０％の割合で該緩衝液と混和可能な有機溶媒を添加してもよい。該有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、ヘキサメチルリン酸トリアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフランを例示することができ、これらの有機溶媒の中から２種類以上を混合して用いてもよい。有機溶媒の添加割合は、検出対象の二本鎖核酸が安定して存在する点で、０％から２０％の範囲が好ましい。
本発明の蛍光色素（２）と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、本発明の蛍光色素（２）の蛍光増感を観測する温度に特に制限はないが、検出対象の二本鎖核酸の融解温度（Ｔｍ値）以下である０℃から８０℃が好ましく、０℃から６０℃の範囲が特に好ましい。
次に本発明を実施例および参考例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（９３１ｍｇ，２．６０ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（４２０ｍｇ，２．８２ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（５．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−エチル−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１．１７ｇ，収率９２％）を紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０２（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９８（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），３．１１（ｓ，６Ｈ），１．４７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例２
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−（３−ヨードプロピル）−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（３５．９ｍｇ，０．０７６ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（１４．０ｍｇ，０．０９４ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（５．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（３−ヨードプロピル）−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１６．７ｍｇ，収率３６％）を黒紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０４（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），５．１０−４．９０（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，６Ｈ），２．４１−２．３７（ｍ，２Ｈ）．
実施例３
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−（４−ヨードブチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１．３６ｇ，２．７８ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（４１６．６ｍｇ，２．７９ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１２．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（５．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（４−ヨードブチル）−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１．４１ｇ，収率８２％）を紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０７（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）５．１０−５．００（ｍ，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．４０−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｓ，６Ｈ），２．００−１．９０（ｍ，４Ｈ）．
実施例４
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−（５−ヨードペンチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（３９．６ｍｇ，０．０７３ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（２０．２ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（２．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（５−ヨードペンチル）ベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１１．２ｍｇ，収率２４％）を黒紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），４．９６−４．９３（ｍ，２Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），３．３０−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｓ，６Ｈ），１．９０−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．６０−１．５０（ｍ，２Ｈ）．
実施例５
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−（６−ヨードヘキシル）−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（３８．６ｍｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（１６．６ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（２．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（６−ヨードヘキシル）ベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１２．９ｍｇ，収率２７％）を黒紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０３（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，６Ｈ），１．９０−１．７０（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．４０（ｍ，４Ｈ）．
実施例６
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（２３８．６ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロベンズアルデヒド（１２２．８ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（２．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロスチリル］−３−エチル−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（３５６．６ｍｇ，収率９０％）を紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０５（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，６Ｈ），１．４８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −７７．７（ｓ，３Ｆ），−１２３．１（ｓ，１Ｆ）．
実施例７
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１０１．８ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）−２−フルオロベンズアルデヒド（４７．５ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（２．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）−２−フルオロスチリル］−３−エチル−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１１１．７ｍｇ，収率７４％）を紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０６（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝２．５，９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝２．５，１５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．１１（ｓ，６Ｈ），１．４８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −７７．７（ｓ，３Ｆ），−１２２．２（ｓ，１Ｆ）．
実施例８
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１０４．３ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）、４−（ジエチルアミノ）−３−メトキシベンズアルデヒド（６０．５ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（２．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジエチルアミノ）−３−メトキシスチリル］−３−エチル−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１１３．９ｍｇ，収率９０％）を黒紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０７（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｓ，３Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．５３（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −７７．７（ｓ，３Ｆ）．
実施例９
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１２８．９ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）、４−（１−ピロリジニル）ベンズアルデヒド（６９．４ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１．０ｍＬ）の混合物を、１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物にトルエン（２．０ｍＬ）を加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、（Ｅ）−３−エチル−４−メトキシ−２−［４−（１−ピロリジニル）スチリル］ベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１８４．４ｍｇ，収率９９％）を紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０１（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．９７（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），３．４２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），２．０２−１．９８（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −７７．７（ｓ，３Ｆ）．
実施例１０
Figure 2013040136
 実施例１と同様な方法で、３−エチル−４，７−ジメトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナートと４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒドを反応させ、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−エチル−４，７−ジメトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナートの緑色固体（７０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９５（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．１１（ｓ，６Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −７７．７（ｓ，３Ｆ）．
実施例１１
Figure 2013040136
 実施例１と同様な方法で、３−エチル−４，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージドと４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒドを反応させ、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−エチル−４，６−ジメトキシベンゾチアゾリウム＝ヨージドの赤褐色固体（８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．９３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９３（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．０９（ｓ，６Ｈ），１．４４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例１２
Figure 2013040136
 実施例１と同様な方法で、３−エチル−４，５，６，７−テトラメトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナートと４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒドを反応させ、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−エチル−４，５，６，７−テトラメトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナートの緑色固体（５５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．３４（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．８７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｓ，３Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．１２（ｓ，６Ｈ），１．４６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −７７．７（ｓ，３Ｆ）．
実施例１３
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１０７ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（５１．８ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）とピペリジン（９．０μＬ，０．０９０ｍｍｏｌ）のエタノール（２．０ｍＬ）溶液を、９０℃で一晩撹拌を行なった。反応混合物を室温に戻した後減圧濃縮を行ない、得られた粗成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］により精製することで、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−エチル−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（５０ｍｇ，収率３４％）を紫色の固体として得た。
実施例１４
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−（４−ヨードブチル）−４，７−ジメトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（２０１ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）と４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（５９．０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１．０ｍＬ）懸濁液を、１１０℃で一晩撹拌を行なった。反応混合物を室温に戻した後減圧濃縮を行ない、得られた粗成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］により精製することで、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（４−ヨードブチル）−４，７−ジメトキシベンゾチアゾリウム＝ヨージド（２２５ｍｇ，収率８９％）を暗赤色粉状として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）／１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９４（ｍ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．３８−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｓ、６Ｈ），１．９６−１．８０（ｍ，４Ｈ）．
実施例１５
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、３−（４−ヨードブチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１３３ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）と４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロベンズアルデヒド（４５．４ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）の無水酢酸（２．０ｍＬ）溶液を、１１０℃で一晩撹拌を行なった。反応混合物を室温に戻した後減圧濃縮を行ない、得られた粗成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］により精製することで、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロスチリル］−３−（４−ヨードブチル）−４−メトキシベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（１１２．９ｍｇ，収率６５％）を紫色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．０７（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０４−５．０１（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．３８−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），１．９６−１．９４（ｍ，４Ｈ）．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ −１２３．１（ｓ，１Ｆ）．
参考例１
Figure 2013040136
 ２−アミノ−４−メトキシベンゾチアゾール（５．０ｇ，２７．７ｍｍｏｌ）と水酸化カリウム（３０ｇ，１５．３ｍｍｏｌ）の水−エチレングリコール（５：１，３６ｍＬ）混合溶液を二日間加熱還流した。反応混合物にトルエン（１００ｍＬ）と酢酸（３０ｍＬ）を加え、トルエン（３０ｍＬ×３）にて抽出した。あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮を行なうことで２−アミノ−３−メトキシチオフェノール（３．７９ｇ，収率８８％）を黄色液体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ６．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．５４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）．
参考例２
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、２−アミノ−３−メトキシチオフェノール（３．７９ｇ，２４．４ｍｍｏｌ）のピリジン（３０ｍＬ）溶液にパラアセトアルデヒド（１６．２ｍＬ，１２２ｍｍｏｌ）と酢酸（７．０ｍＬ）を加えた後、７０℃で一晩撹拌した。反応混合溶液に飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）にて抽出した。あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮を行なった。得られた粗生成物のエタノール（４０ｍＬ）溶液に塩化鉄（ＩＩＩ）（３．９５ｇ，２４．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応混合溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）にて抽出した。あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮を行なった。得られた粗生成物を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン−酢酸エチル（３：１）］で精製することにより、４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール（２．３６ｇ，収率５４％）を黄色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．４０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），２．８５（ｓ，３Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １６５．０，１５２．９，１４３．３，１２５．６，１１３．４，１０６．３，５５．８，２０．０．
参考例３
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール（５０９ｍｇ，２．８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸エチル（０．５ｍＬ，３．８７ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、得られた粗生成物を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（１０：１）］で精製することにより、３−エチル−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝トリフルオロメタンスルホナート（９４９ｍｇ，収率９４％）を白色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ７．９５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｑ．Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １７５．５，１４９．５，１３１．１，１３０．１，１２９．１，１１６．０，１１１．７，５７．１，４８．１，１６．５，１４．３．
１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ −７７．７．
参考例４
Figure 2013040136
 アルゴン雰囲気下、４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール（５２４ｍｇ，２．９２ｍｍｏｌ）と１，４−ジヨードブタン（１．９０ｍＬ，１４．６ｍｍｏｌ）の混合物を、１０５℃にて一晩撹拌した。反応溶液に酢酸エチル加えた後、濾過を行なうことで３−（４−ヨードブチル）−４−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム＝ヨージド（１．３６ｇ，９６％）を黄土色の固体として得た。
ｍｐ：１４５から１４７℃．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ７．９６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８３−４．７９（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．３０（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｓ，３Ｈ），１．９７−１．９４（ｍ，４Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １７５．８，１４９．４，１３１．１，１３０．２，１２９．１，１１６．０，１１１．７，５７．２，５１．３，３０．０，２９．８，１６．８，７．６０．
以上、実施例１から１５および参考例１から４に例示した方法により製造可能な、本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩の例を表１から７に示す。ただし、本発明はこれらの例示に限定されるものではない。
Figure 2013040136
Figure 2013040136
Figure 2013040136
Figure 2013040136
Figure 2013040136
Figure 2013040136
Figure 2013040136
Figure 2013040136
 実施例１６
４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩（２）に二本鎖核酸（二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ−ＤＮＡ）またはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド）を添加した時の蛍光特性を評価した。
（ａ）方法
以下の条件で、本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）に二本鎖ＤＮＡまたはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを添加して蛍光スペクトルを測定した。なお対照化合物として下記の対照色素Ａを用いて、同様の測定を行なった。
Figure 2013040136
 二本鎖ＤＮＡ：
５’−ｄ（ＣＧＡＣＧＣＡＧＧＧＡＴＧＴＴＡＡＧＴＡＴＡＡＣＡＴＴＴＧＣ）−
３’（配列番号１）と５’−ｄ（ＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＡＣＴＴＡＡＣＡＴＣＣ
ＣＴＧＣＧＴＣＧ）−３’（配列番号２）からなる二本鎖ＤＮＡ
ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド：
５’−ｄ（ＣＧＡＣＧＣＡＧＧＧＡＴＧＴＴＡＡＧＴＡＴＡＡＣＡＴＴＴＧＣ）−
３’（配列番号１）と５’−ｒ（ＧＣＡＡＡＵＧＵＵＡＵＡＣＵＵＡＡＣＡＵＣＣ
ＣＵＧＣＧＵＣＧ）−３’（配列番号３）からなるＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド
測定溶液：
リン酸バッファー（１３７ｍＭ ＮａＣｌ，２．６８ｍＭ ＫＣｌ，８．１ｍＭ
Ｎａ２ＨＰＯ４，１．４７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４），０．１％ ＤＭＳ
Ｏ
色素濃度：１．０μＭ
二本鎖核酸の濃度：０．５μＭ
測定温度：４３℃
（ｂ）結果
本発明の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩（本発明の蛍光色素）（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）および対照色素Ａ（対照Ａ）のみでの最大励起波長、最大蛍光波長および蛍光強度、ならびに二本鎖核酸（二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ−ＤＮＡ）またはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド）添加時の各化合物の最大蛍光波長、蛍光強度、蛍光増感率（二本鎖核酸添加時の蛍光強度値を色素のみでの蛍光強度値で割った値）を表８に示す。
Figure 2013040136
 本発明の蛍光色素（２）は、二本鎖核酸の添加により大きな蛍光増感を示すことがわかる。具体的には、二本鎖ＤＮＡを添加したときの、本発明の蛍光色素（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）における蛍光増感率は、それぞれ１０．７倍、１３．１倍、１９．７倍を示す一方、対照色素Ａの蛍光増感率は６．３倍であり、本発明の色素が二本鎖ＤＮＡに対し蛍光増感率の有意な増大が確認できた。また、本発明の蛍光色素（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）に二本鎖ＤＮＡ添加した時の蛍光強度値は、対照色素Ａに二本鎖ＤＮＡ添加した時の値と比較し、１．２倍から１．６倍あり、蛍光強度絶対値の増大も確認できた。さらに、二本鎖ＤＮＡの添加による本発明の蛍光色素（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）のストークスシフトも、対照色素Ａ（５０ｎｍ）に対し３ｎｍから１７ｎｍ増大した。同様に、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを添加したときの、本発明の蛍光色素（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）における蛍光増感率は、それぞれ３．５倍、８．０倍、３．２倍を示す一方、対照色素Ａの蛍光増感率は２．３倍であり、本発明の色素がＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドに対し蛍光増感率の有意な増大が確認できた。また、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドによる本発明の蛍光色素（２）（化合物１、化合物１０、化合物１８）のストークスシフトも、対照色素Ａ（５３ｎｍ）に対し４ｎｍから１９ｎｍ増大した。
以上の結果より、対照色素Ａのベンゾチアゾール環４位をアルコキシ基に置換した、本発明の蛍光色素（２）は、対照色素Ａと比較し、二本鎖核酸添加による、ストークスシフトの有意な増大、蛍光強度値の増大および蛍光増感率の有意な増加が確認できる。

Claims (11)

  1. 一般式（２）
    Figure 2013040136
     （式中、Ｒ１は炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ２は炭素数１から８のアルキル基または炭素数１から８のハロアルキル基を表し、Ｒ３は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ４は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ３とＲ４は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基または炭素数１から３のアルコキシ基を表し、Ｘはハロゲン原子、炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。）で表される、４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  2. Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３が各々独立に水素原子またはメトキシ基である、請求項１に記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  3. Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３、Ｒ５−４、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３が水素原子である、請求項１に記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  4. Ｒ１がメチル基である、請求項１から３のいずれかに記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  5. Ｒ３およびＲ４がメチル基である、請求項１から４のいずれかに記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  6. Ｒ２がエチル基、３−ヨードプロピル基、４−ヨードブチル基、５−ヨードペンチル基または６−ヨードヘキシル基である、請求項１から５のいずれかに記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  7. Ｘがヨウ素原子またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基である、請求項１から６のいずれかに記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  8. 一般式（２）が、下記一般式（２ａ）
    Figure 2013040136
     （式中、Ｒ２ａは３−ヨードプロピル基、４−ヨードブチル基、５−ヨードペンチル基または６−ヨードヘキシル基を表す。）である請求項１に記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  9. 一般式（２）が、下記式（２ｂ）
    Figure 2013040136
     である、請求項１に記載の４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩。
  10. 一般式（４）
    Figure 2013040136
     （式中、Ｒ１は炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ２は炭素数１から８のアルキル基または炭素数１から８のハロアルキル基を表し、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基または炭素数１から３のアルコキシ基を表し、Ｘはハロゲン原子、炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。）で表される４−アルコキシ−２−メチルベンゾチアゾリウム塩を、縮合剤の存在下、一般式（５）
    Figure 2013040136
     （式中、Ｒ３は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ４は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ３とＲ４は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表す。）で表されるベンズアルデヒド誘導体と反応させる、一般式（２）
    Figure 2013040136
     （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３、Ｒ５−４、Ｒ６−１、Ｒ６−２、Ｒ６−３およびＸは前記と同じ意味を表す。）で表される４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩の製造方法。
  11. 一般式（２）
    Figure 2013040136
     （式中、Ｒ１は炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ２は炭素数１から８のアルキル基または炭素数１から８のハロアルキル基を表し、Ｒ３は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表し、Ｒ４は水素原子または炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ３とＲ４は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。Ｒ５−１、Ｒ５−２、Ｒ５−３およびＲ５−４は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、Ｒ６−１、Ｒ６−２およびＲ６−３は各々独立に水素原子、炭素数１から３のアルキル基または炭素数１から３のアルコキシ基を表し、Ｘはハロゲン原子、炭素数１から８のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。）で表される４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、該４−アルコキシ−２−（４−アミノスチリル）ベンゾチアゾリウム塩の蛍光増感を観測することにより、二本鎖核酸を検出する方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107216293A (zh) * 2017-07-19 2017-09-29 河南理工大学 一种邻香兰素衍生物及其制备方法和应用
CN114163398A (zh) * 2021-10-31 2022-03-11 南京碳硅人工智能生物医药技术研究院有限公司 一种基于ict原理用于监测活细胞氧化应激中半胱氨酸波动的生物传感工具的设计合成

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS56158944A (en) * 1980-04-21 1981-12-08 Abbott Lab Coloring agents for fluorescent nucleic acid
JPH09507879A (ja) * 1994-10-27 1997-08-12 モレキュラー プローブス，インコーポレイテッド 選択された透過性を有する置換非対称シアニン色素
JP2000509412A (ja) * 1996-02-01 2000-07-25 アボツト・ラボラトリーズ 疎水性の立体配座制限的微細環境を提供する部分によって強化された重合フルオロホア
JP2007507238A (ja) * 2003-09-30 2007-03-29 モレキュラー プローブス， インコーポレイテッド 固定化された核酸の検出

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS56158944A (en) * 1980-04-21 1981-12-08 Abbott Lab Coloring agents for fluorescent nucleic acid
JPH09507879A (ja) * 1994-10-27 1997-08-12 モレキュラー プローブス，インコーポレイテッド 選択された透過性を有する置換非対称シアニン色素
JP2000509412A (ja) * 1996-02-01 2000-07-25 アボツト・ラボラトリーズ 疎水性の立体配座制限的微細環境を提供する部分によって強化された重合フルオロホア
JP2007507238A (ja) * 2003-09-30 2007-03-29 モレキュラー プローブス， インコーポレイテッド 固定化された核酸の検出

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6015020376; Ｖ．　Ｂ．　Ｋｏｖａｌｓｋａ　ｅｔ　ａｌ．: 'Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ　ｓｔｙｒｙｌｃｙａｎｉｎｅｓ：　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒａｌ-ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　ａｎ' Ｄｙｅｓ　ａｎｄ　Ｐｉｇｍｅｎｔｓ ６７, 2005, ４７-５４ *
JPN6015020377; Ｉｋｅｄａ，　Ｓｈｕｊｉ；　Ｋｕｂｏｔａ，　Ｔａｋｅｓｈｉ；　Ｙｕｋｉ，　Ｍｉｚｕｅ；　Ｏｋａｍｏｔｏ，　Ａｋｉｍｉｔｓｕ: 'Ｅｘｃｉｔｏｎ-Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ-Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　Ｐｒｏｂｅｓ：' Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ　Ｃｈｅｍｉｅ，　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｄｉｔｉｏｎ ４８（３５）, 2009, ６４８０-６４８４ *
JPN6015020378; Ｄｏｊａ，　Ｍ．　Ｑ．；　Ｂａｎｅｒｊｅｅ，　Ｊｏｇｅｓｈ　Ｃｈａｎｄｒａ: 'Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｃｙａｎｉｎｅ　ｄｙｅｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ-ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ　ｗｉｔｈ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｈｅｔｅｒｏｃ' Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎｄｉａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ ２８, 1951, ７-１１ *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107216293A (zh) * 2017-07-19 2017-09-29 河南理工大学 一种邻香兰素衍生物及其制备方法和应用
CN107216293B (zh) * 2017-07-19 2020-04-17 河南理工大学 一种邻香兰素衍生物及其制备方法和应用
CN114163398A (zh) * 2021-10-31 2022-03-11 南京碳硅人工智能生物医药技术研究院有限公司 一种基于ict原理用于监测活细胞氧化应激中半胱氨酸波动的生物传感工具的设计合成

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