JP2012519473A - ケト化合物の立体選択的酵素還元法 - Google Patents
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Abstract
(i)N-末端ロスマンフォールド(GxxxGxG)
(ii)87位におけるNAGモチーフ
(iii)S 139、Y 152、およびK 156から成る触媒三元構造
(iv)37位における負に帯電したアミノ酸成分
(v)二量体化ドメインにおける2つのC-末端モチーフ:[A;S]-S-Fおよび[V;I]-DG-[G;A]-Y-[T;C;L]-[A;T;S]-[Q;V;R;L;P]
(vi)159位におけるValまたはLeu(K 156の4位下流)
(vii)178位におけるAsn、および
(viii)188位におけるプロリン成分
Description
- 37位における負に帯電したアミノ酸成分
- 二量体化ドメインにおける2つのC-末端モチーフ:[A;S]-S-Fおよび[V;I]-DG-[G;A]-Y-[T;C;L]-[A;T;S]-[Q;V;R;L;P]
- 204から208位におけるR-ADH-シグニチャー:H-[P;A]-[I;A;Q;V;L]-[G;K]-R
- 159位におけるValまたはLeu(K156の4位下流)
- 178位におけるAsn
- 188位におけるプロリン成分
(i)N-末端ロスマンフォールド(GxxxGxG)
(ii)87位におけるNAGモチーフ
(iii)S 139、Y 152、およびK 156から成る触媒三元構造
(iv)37位における負に帯電したアミノ酸成分
(v)二量体化ドメインにおける2つのC-末端モチーフ:[A;S]-S-Fおよび[V;I]-DG-[G;A]-Y-[T;C;L]-[A;T;S]-[Q;V;R;L;P]
(vi)159位におけるValまたはLeu(K 156の4位下流)
(vii)178位におけるAsn
(viii)188位におけるプロリン成分。
(a)アミノ酸配列SEQ ID NO:1からSEQ ID NO:7の1つを含有する;または
(b)少なくとも70%のアミノ酸がアミノ酸配列SEQ ID NO:1からSEQ ID NO:7の1つと同一である;または
(c)SEQ ID NO:8からSEQ ID NO:14から成る群から選択される核酸配列によってコードされる;または
(d)ストリンジェントな条件下で(c)に記載する核酸配列の1つにハイブリダイズする核酸配列によってコードされる、
のポリペプチドを使用してケト化合物を還元する。
1)-H(ただしR1はHではない);
2)-(C1-C20)-アルキル(式中、アルキルは直鎖または分枝鎖である);
3)-(C2-C20)-アルケニル(式中、アルケニルは直鎖または分枝鎖であり、場合により4個までの二重結合を含有する);
4)-(C2-C20)-アルキニル(式中、アルキニルは直鎖または分枝鎖であり、場合により4個までの三重結合を含有する);
5)-(C6-C24)-アリール;
6)-(C1-C8)-アルキル-(C6-C14)-アリール;
7)-(C5-C14)-複素環;
8)-(C3-C7)-シクロアルキル
(式中、上記2)から8)に記載される成分は未置換であるか、あるいは1、2、または3箇所がそれぞれ独立して-OH、ハロゲン、-NO2、NH2、NHP、および/または-Mで置換されており、式中、Pは-(C1-C7)-アルキル、-(C2-C7)-アルケニル、-(C2-C7)-アルキニル、-(C6-C14)-アリール、または、ベンジルオキシカルボニル、トリフェニルメチル、およびt-ブチルカルボニルから成る群から選択される保護基であり、Mは-(C1-C7)-アルキル、-(C2-C7)-アルケニル、-(C2-C7)-アルキニル、-(C6-C14)-アリール、もしくは-(C1-C8)-アルキル-(C6-C14)-アリールであり、ここで、-(C1-C8)-アルキル-(C6-C14)-アリール中の-(C6-C14)-アリールは未置換であるか、または1、2、もしくは3箇所がハロゲンで置換されている);および
9)-CH2-X-R(式中、XはOまたはSであり、Rは-(C1-C7)-アルキル、フェニル、およびベンジルから選択され、ここで、フェニルおよびベンジルは1、2、または3箇所が-(C1-C7)-アルキル、-S(C1-C3)-アルキル、-O(C1-C3)-アルキル、-NO2、-SCF3、ハロゲン、-C(O)(C1-C3)-アルキル、および/または-CNで置換されている)
から成る群から選択されるか、または、
R1とR2、R1とR3、もしくはR2とR3は3-6個の炭素原子を含む環を形成し、ここで環は未置換であるか、または1、2、もしくは3箇所がそれぞれ独立して-OH、ハロゲン、-NO2、-NH2、-NHP、および/もしくは-Mで置換されており、それ以外の成分は上記1)から9)に記載される成分から選択される)
のケト化合物を使用する。
R4およびR6はそれぞれ独立して-(C1-C20)-アルキルまたはエステル基であり、ここで、R4、R5、およびR6は未置換であるか、または1、2、もしくは3箇所がそれぞれ独立して-(C1-C4)-アルキル、-OH、ハロゲン、-NO2、および/もしくは-NH2で置換されている)
のジケトンを使用する。
- 酸化還元酵素/脱水素酵素によって生成される酸化型補助因子NADが連続的に再生される、そして
- 式RXRYCHOHの第二級アルコールを補助因子の再生に使用する(式中、RXおよびRYはそれぞれ独立して分枝鎖または非分枝鎖のC1-C8-アルキル基であり、Ctotal > 3である)。
A)ラルストニア・ユートロファ(Ralstonia eutropha)JMP134の培養
ラルストニア・ユートロファDSM4048細胞を、以下の培地(pH7.0)中、微生物培養器内(30℃)で培養した:0.5%ペプトン、0.3%肉エキス。培養3日目に、遠心分離によって細胞を培養液から分離し、-80℃で保存した。
ManniatisおよびSambrookの“Molecular Cloning”(上記参照)の方法に従ってゲノムDNAを抽出した。得られた核酸をテンプレートとして使用し、NCBIデータベースの遺伝子配列(No.53760931)から誘導した特定のプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を行った。ここでは、その後の発現ベクターへのクローニングのために、プライマーの5'末端にエンドヌクレアーゼNdeIおよびXhoI制限酵素部位をそれぞれ施与した。
サイクル1:94℃、2分間
サイクル2x30:94℃、30秒間;55℃、30秒間;68℃、60秒間
サイクル3:68℃、7分間;4℃、∞
発現コンストラクトを形質導入した大腸菌BL21 Star(Invitrogen社、ドイツ、カールスルーエ)およびRB791(大腸菌遺伝子ストック、米国エール)を200mlのLB培地(1%トリプトン、0.5%酵母エキス、1% NaCl)(アンピシリン(50μg/ml)またはカルベニシリン(50μg/ml)含有)中、550nmでの光学密度が0.5に達するまで培養した。濃度0.1mMのイソプロピルチオガラクトシド(IPTG)を添加して組み換えタンパク質の発現を誘導した。それぞれ誘導の8時間後および16時間後に、遠心分離(25℃、220rpm)によって細胞を回収し、-20℃で凍結した。活性試験を行うため、10mgの細胞を500μlの100mM TEAバッファー(pH7.0)および500μlのガラスビーズと混合し、グローブミルを用いて10分間消化した。その後、得られたライセートを希釈した状態で各測定に使用した。活性試験は以下のように行った:870μlの100mM TEAバッファー(pH7.0)、160μgのNAD(H)、10μlの希釈した細胞ライセート。反応混液に100mMの基質溶液100μlを添加して反応を開始させた。
3a:至適pH
表4に示すバッファーを調製した。各バッファー成分の濃度はそれぞれ50mMである。
表3に記載する各バッファー系 890μl
10mM NADH 20μl
希釈した酵素 10μl
約2-3分間のインキュベーション後、
基質溶液(100mM) 100μl
を添加した。
組換え酸化還元酵素の安定性の試験を、それらを表4に示すバッファー系中に保存して行った。このために、種々のバッファー(50mM)をpH4-11の範囲に調製し、実施例4で得た酸化還元酵素をこれに希釈した。30、60、および120分のインキュベーション後、試験溶液から10μlを採取し、実施例3aに従って活性試験を行った。
至適試験温度を決定するために、本発明で使用する酸化還元酵素の酵素活性を、15℃から70℃の温度範囲で標準的な測定溶液中で測定した。確認された至適温度を表7に示す。
実施例3cの記載と同様に、15℃から70℃の範囲で温度安定性を確認した。このために、本発明で使用する酸化還元酵素の希釈液をそれぞれの場合について各温度で60分間および180分間インキュベートした後、上記の試験溶液中、30℃で測定した。表8に、120分間のインキュベーションで酵素が初期活性の50%以上を示した温度範囲を、酸化還元酵素名と共に示す。
被験酸化還元酵素の2-プロパノールに対する安定性を試験するために、実施例2で(組換え発現から)得られたライセートを相当するパーセンテージの2-プロパノールを含有するバッファー(KPP 100mM、pH=7.0)に希釈した(約10ユニット/mlバッファー)。試験溶液を持続的に撹拌しながら(サーモミキサー、170rpm)室温でインキュベートした。24時間のインキュベーション後、水相から10μlを採取し、これを用いて標準的な試験溶液(リン酸カリウムバッファー(KPP) 100mM、pH=7.0、0.2mM NADH、10mM基質)中で酵素活性を測定した。この場合も、バッファーに希釈した直後の初期値を100%とし、その後の全ての値はこれとの相関とした。
キャラクタライズすべき配列の基質スペクトルを確認するために、多くのケトンおよびアルコールで還元および酸化に関する酵素活性を測定した。これを行うために、実施例2の標準的な試験溶液を種々の基質と共に使用した。
160μl バッファー
100μl NAD(0.4mg/ml)
20-50μl 2-プロパノール
50μl 酵素溶液
2mg 基質
反応条件:28℃、24時間
ee(%)=((R-アルコール- S-アルコール)/(R-アルコール + S-アルコール))x100
以下に記載する実施例に基づき、特定の方法において、酵素SEQ ID NO:1-7によって具体的な疑問に対する解決が与えられ、これは既存の従来技術より明らかに優れていることを示す。
3,6-オクタンジオンをR,R-3,6-オクタンジオールに還元するための基質結合型補酵素再生を伴う方法の構築に好適な酵素をスクリーニングするために、全ての酵素を以下の反応溶液で試験した:
450μl バッファー、pH=7.0
0.05mg NAD
50μl 2-プロパノール
10mg 3,6-オクタンジオン
25℃で24時間インキュベートした後、サンプルをジクロロメタン法で抽出し、GC分析を行った。
2,7-ジメチル-3,6-オクタンジオンを(S,S)-2,7-ジメチルオクタン-3,6-ジオールに還元するための基質結合型補酵素再生を伴う方法に好適な酵素をスクリーニングするために、酵素を以下の反応溶液で試験した:
450μl バッファー、pH=7.0
0.05mg NAD
50μl 2-プロパノール
10mg 2,7-ジメチル-3,6-オクタンジオン
25℃で24時間インキュベートした後、サンプルをジクロロメタン法で抽出し、GC分析を行った。
2,4-ペンタンジオンをR,R-2,4-ペンタンジオールに還元するための基質結合型補酵素再生を伴う方法に好適な酵素をスクリーニングするために、酵素を以下の反応溶液で試験した:
450μl バッファー、pH=7.0
0.05mg NAD
50μl 2-プロパノール
10mg 2,4-ペンタンジオン
1,1,1-トリフルオロアセトンをR-1,1,1,-トリフルオロプロパノールに還元するための基質結合型補酵素再生を伴う方法に好適な酵素をスクリーニングするために、酵素を以下の反応溶液中で試験した。
450μl バッファー、pH=7.0
0.05mg NAD
500μl 2-メチル-4-ペンタノール
20μl 1,1,1-トリフルオロアセトン
2-クロロ-1-(3-ヒドロキシフェニル)エタン-1-オンを(1S)-2-クロロ-1-(3-ヒドロキシフェニル)エタン-1-オールに還元するための基質結合型補酵素再生を伴う方法に好適な酵素をスクリーニングするために、酵素を以下の反応溶液で試験した:
400μl バッファー、pH=7.0
0.02mg NAD
100μl 2-プロパノール
25mg 2-クロロ-1-(3-ヒドロキシフェニル)エタン-1-オン
以下において、エチル-4-クロロアセトアセテートを(S)-エチル-4-クロロ-3-ヒドロキシブチレートに還元するための工業プロセスで被験酵素SEQ ID NO:1-7を試験し、従来技術と比較する。
600μl バッファー、pH=8.0
0.2mg NAD
200μl 2-プロパノール
200μl エチル-4-クロロアセトアセテート
240μl 大腸菌由来組換え酵素(20-60ユニット)
Claims (10)
- ケト化合物を対応するキラルヒドロキシ化合物に立体選択的、特にエナンチオ選択的に酵素還元する方法であって、ケト化合物をエナンチオ選択的NADH特異的酸化還元酵素で還元し、ここでケト化合物の還元にポリペプチドを使用することを特徴とし、該ポリペプチドはR-ADHシグニチャー H-[P;A]-[I;A;Q;V;L]-[G;K]-Rを204-208位に有し、以下の更なる構造的特徴の全て:
(i)N-末端ロスマンフォールド(GxxxGxG)
(ii)87位におけるNAGモチーフ
(iii)S 139、Y 152、およびK 156から成る触媒三元構造
(iv)37位における負に帯電したアミノ酸成分
(v)二量体化ドメインにおける2つのC-末端モチーフ:[A;S]-S-Fおよび[V;I]-DG-[G;A]-Y-[T;C;L]-[A;T;S]-[Q;V;R;L;P]
(vi)159位におけるValまたはLeu(K 156の4位下流)
(vii)178位におけるAsn、および
(viii)188位におけるプロリン成分
を示す、上記方法。 - ポリペプチドを用いてケト化合物を還元することを特徴とし、該ポリペプチドは、
(a)アミノ酸配列SEQ ID NO:1からSEQ ID NO:7の1つを含有する、または
(b)少なくとも70%のアミノ酸がアミノ酸配列SEQ ID NO:1からSEQ ID NO:7の1つと同一である、または
(c)SEQ ID NO:8からSEQ ID NO:14から成る群から選択される核酸配列によってコードされる、または
(d)ストリンジェントな条件下で(c)に記載する核酸配列の1つとハイブリダイズする核酸配列によってコードされる、
請求項1記載の方法。 - 式Iのケト化合物:
1)-H(ただしR1はHではない);
2)-(C1-C20)-アルキル(式中、アルキルは直鎖または分枝鎖である);
3)-(C2-C20)-アルケニル(式中、アルケニルは直鎖または分枝鎖であり、場合により4個までの二重結合を含有する);
4)-(C2-C20)-アルキニル(式中、アルキニルは直鎖または分枝鎖であり、場合により4個までの三重結合を含有する);
5)-(C6-C24)-アリール;
6)-(C1-C8)-アルキル-(C6-C14)-アリール;
7)-(C5-C14)-複素環;
8)-(C3-C7)-シクロアルキル
(式中、上記2)から8)に記載される成分は未置換であるか、あるいは1、2、または3箇所がそれぞれ独立して-OH、ハロゲン、-NO2、NH2、NHP、および/または-Mで置換されており、式中、Pは-(C1-C7)-アルキル、-(C2-C7)-アルケニル、-(C2-C7)-アルキニル、-(C6-C14)-アリール、または、ベンジルオキシカルボニル、トリフェニルメチル、およびt-ブチルカルボニルから成る群から選択される保護基であり、Mは-(C1-C7)-アルキル、-(C2-C7)-アルケニル、-(C2-C7)-アルキニル、-(C6-C14)-アリール、もしくは-(C1-C8)-アルキル-(C6-C14)-アリールであり、ここで、-(C1-C8)-アルキル-(C6-C14)-アリール中の-(C6-C14)-アリールは未置換であるか、または1、2、もしくは3箇所がハロゲンで置換されている);および
9)-CH2-X-R(式中、XはOまたはSであり、Rは-(C1-C7)-アルキル、フェニル、およびベンジルから選択され、ここで、フェニルおよびベンジルは1、2、または3箇所が-(C1-C7)-アルキル、-S(C1-C3)-アルキル、-O(C1-C3)-アルキル、-NO2、-SCF3、ハロゲン、-C(O)(C1-C3)-アルキル、および/または-CNで置換されている);
から成る群から選択されるか、または、
R1とR2、R1とR3、もしくはR2とR3は3-6個の炭素原子を含む環を形成し、ここで環は未置換であるか、または1、2、もしくは3箇所がそれぞれ独立して-OH、ハロゲン、-NO2、-NH2、-NHP、および/もしくは-Mで置換されており、それ以外の成分は上記1)から9)に記載される成分から選択される)
を使用することを特徴とする、請求項1または2記載の方法。 - ケト化合物として式IIのジケトン:
R4およびR6はそれぞれ独立して-(C1-C20)-アルキルまたはエステル基であり、ここで、R4、R5、およびR6は未置換であるか、または1、2、もしくは3箇所がそれぞれ独立して-(C1-C4)-アルキル、-OH、ハロゲン、-NO2、および/もしくは-NH2で置換されている)
を使用することを特徴とする、請求項1または2記載の方法。 - - 酸化還元酵素/脱水素酵素によって生成される酸化型補助因子NADが連続的に再生され;かつ
- 式RXRYCHOHの第二級アルコールを補助因子の再生に使用し、ここで、RXおよびRYはそれぞれ独立して分枝鎖または非分枝鎖のC1-C8-アルキル基であり、Ctotal > 3である、
ことを特徴とする、請求項1から4のいずれかに記載される方法。 - 2-プロパノール、2-ブタノール、2-ペンタノール、4-メチル-2-ペンタノール、2-ヘプタノール、および2-オクタノールから成る群から選択されるアルコール、好ましくは2-プロパノールを、補助基質または第二級アルコールとして使用することを特徴とする、請求項5記載の方法。
- ケト化合物を総容量に対して3%から50%の範囲、好ましくは5%から40%の範囲、特に10%から30%の範囲の量で使用する、請求項1から6のいずれかに記載される方法。
- TTN(総ターンオーバー数=ケト化合物のモル数/使用した補助因子のモル数)は103以上である、請求項1から7のいずれかに記載される方法。
- 水相/有機相の二相系で実施することを特徴とする、請求項1から8のいずれかに記載される方法。
- 更にジエチルエーテル、tert-ブチルメチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸ブチル、ヘプタン、ヘキサン、およびシクロヘキサンから選択される有機溶媒を使用することを特徴とする、請求項1から9のいずれかに記載される方法。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002012544A2 (en) * | 2000-08-07 | 2002-02-14 | Bionetworks Gmbh | Identification of short chain dehydrogenases/reductases (sdr) |
JP2004527251A (ja) * | 2001-04-20 | 2004-09-09 | ユーリッヒ・エンツィーメ・プロダクツ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 酵素を用いてケト化合物をエナンチオ選択的に還元する方法 |
JP2008529542A (ja) * | 2005-02-21 | 2008-08-07 | アイイーピー ゲーエムベーハー | ケト化合物のエナンチオ選択的酵素還元のプロセス |
JP2009502148A (ja) * | 2005-07-27 | 2009-01-29 | アイイーピー ゲーエムベーハー | ケト化合物の立体選択的還元に用いる酸化還元酵素 |
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DE19610984A1 (de) | 1996-03-21 | 1997-09-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Alkohol-Dehydrogenase und deren Verwendung zur enzymatischen Herstellung chiraler Hydroxyverbindungen |
AU1551701A (en) | 1999-12-03 | 2001-06-12 | Kaneka Corporation | Novel carbonyl reductase, gene thereof and method of using the same |
TWI275645B (en) | 2000-02-16 | 2007-03-11 | Daicel Chemical Industries Ltd. | (R)-2-octanol dehydrogenases, methods for producing the enzymes, DNA encoding the enzymes, and methods for producing alcohols using the enzymes |
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DE10327454A1 (de) | 2003-06-18 | 2005-01-20 | Juelich Enzyme Products Gmbh | Oxidoreduktase aus Pichia capsulata |
DE10345772A1 (de) | 2003-10-01 | 2005-04-21 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von 3-Methylamino-1-(thien-2-yl)-propan-1-ol |
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AT502185B1 (de) | 2005-09-23 | 2007-02-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur enantioselektiven enzymatischen reduktion von ketoverbindungen |
AT503017B1 (de) * | 2005-12-19 | 2007-07-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur enantioselektiven enzymatischen reduktion von hydroxyketoverbindungen |
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Patent Citations (4)
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---|---|---|---|---|
WO2002012544A2 (en) * | 2000-08-07 | 2002-02-14 | Bionetworks Gmbh | Identification of short chain dehydrogenases/reductases (sdr) |
JP2004527251A (ja) * | 2001-04-20 | 2004-09-09 | ユーリッヒ・エンツィーメ・プロダクツ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 酵素を用いてケト化合物をエナンチオ選択的に還元する方法 |
JP2008529542A (ja) * | 2005-02-21 | 2008-08-07 | アイイーピー ゲーエムベーハー | ケト化合物のエナンチオ選択的酵素還元のプロセス |
JP2009502148A (ja) * | 2005-07-27 | 2009-01-29 | アイイーピー ゲーエムベーハー | ケト化合物の立体選択的還元に用いる酸化還元酵素 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
JPN5012009010; OPPERMANN U C: 'STRUCTURE-FUNCTION RELATIONSHIPS OF SDR HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASES' ADVANCES IN EXPERIMENTAL MEDICINE AND BIOLOGY V414, 19970101, P403-415, SPRINGER * |
JPN5012009012; JOERNWALL H: 'SHORT-CHAIN DEHYDROGENASES/REDUCTASES(SDR)' BIOCHEMISTRY V34 N18, 19950509, P6003-6013, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY * |
JPN6014012392; FEBS Letters vol.445, 1999, pp.261-264 * |
JPN6014012393; Database UNIPROT , 20030601, Q81AU6 * |
JPN6014012395; Database UNIPROT , 20060822, Q11G59 * |
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