JP2012517820A - 改良型抗血清アルブミン結合変異体 - Google Patents
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Abstract
Description
この目的のために、本願発明者らは、意外なことだが、DOM7h−11のFW2/CDR2接合部(49位〜51位、Kabatによるナンバリング)を標的にすることにより、有益な変異が得られることを見出した。
49位=L、
50位=AまたはW、
51位=FまたはN、
87位=H、および
91位=T。
(a)変異体は、表面プラズモン共鳴法で決定された場合、0.1(またはおよそ0.1)〜10000(またはおよそ10000)nM、任意に1(またはおよそ1)〜6000(またはおよそ6000)nMの解離定数(KD)で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(b)変異体は、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、1.5×10−4(またはおよそ)〜0.1sec−1(またはおよそ)、任意に3×10−4(またはおよそ)〜0.1sec−1(またはおよそ)の解離速度定数(Kd)でヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(c)変異体は、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、2×106(またはおよそ)〜1×104M−1sec−1(またはおよそ)、任意に1×106(またはおよそ)〜2×104M−1sec−1(またはおよそ)の会合速度定数(Ka)でヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(d)変異体は、表面プラズモン共鳴法で決定された場合、0.1(またはおよそ0.1)〜10000(またはおよそ)nM、任意に1(またはおよそ1)〜6000(またはおよそ6000)nMの解離定数(KD)で、カニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(e)変異体が、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、1.5×10−4(またはおよそ)〜0.1sec−1(またはおよそ)、任意に3×10−4(またはおよそ)〜0.1sec−1(またはおよそ)の解離速度定数(Kd)でカニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、前述の請求項のいずれかに記載の変異体;
(f)変異体が、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、2×106(またはおよそ)〜1×104M−1sec−1(またはおよそ)、任意に1×106(またはおよそ)〜5×103M−1sec−1(またはおよそ)の会合速度定数(Ka)でカニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、前述の請求項のいずれかに記載の変異体;
(g)変異体は、表面プラズモン共鳴法で決定された場合、0.1(またはおよそ0.1)〜10000(またはおよそ)nM、任意に1(またはおよそ1)〜6000(またはおよそ6000)nMの解離定数(KD)で、ラットSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(h)変異体は、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、2×10−3(またはおよそ)〜0.15sec−1(またはおよそ)、任意に9×10−3(またはおよそ)〜0.14sec−1(またはおよそ)の解離速度定数(Kd)で、ラットSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(i)変異体は、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、2×106(またはおよそ)〜1×104M−1sec−1(またはおよそ)、任意に1×106(またはおよそ)〜3×104M−1sec−1(またはおよそ)の会合速度定数(Ka)で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(j)変異体は、表面プラズモン共鳴法で決定された場合、1(またはおよそ1)〜10000(またはおよそ)nMの解離定数(KD)で、マウスSAに特異的に結合する結合部位を含む;
(k)変異体は、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、2×10−3(またはおよそ)〜0.15sec−1(またはおよそ)の解離速度定数(Kd)で、マウスSAに特異的に結合する結合部位を含む;および/または
(l)変異体は、表面プラズモン共鳴法によって決定された場合、2×106(またはおよそ)〜1×104M−1sec−1(またはおよそ)、任意に2×106(またはおよそ)〜1.5×104M−1sec−1(またはおよそ)の会合速度定数(Ka)で、マウスSAに特異的に結合する結合部位を含む。
I:(a)および(d)によるKD、(b)および(e)によるKd、ならびに(c)および(f)によるKa;または
II:(a)および(g)によるKD、(b)および(h)によるKd、ならびに(c)および(i)によるKa;または
III:(a)および(j)によるKD、(b)および(k)によるKd、ならびに(c)および(l)によるKa;または
IV:IおよびIIによる反応速度;または
V:IおよびIIIによる反応速度;または
VI:I、IIおよびIIIによる反応速度。
mycタグが付いてない配列が表示されている場合、実施例でのPK試験はmycタグが付いた材料で行われなかった。すなわち、試験は、表示した非タグが付いた構築体で行われた。
選択:
HSA(ヒト血清アルブミン)およびRSA(ラット血清アルブミン)の抗原をSigmaから入手した(基本的に脂肪酸フリー、約99%(アガロースゲル電気泳動法)、凍結乾燥した粉末、それぞれカタログ番号A3782およびA6414)。
エラープローンおよびCDRの両ライブラリーを、DOM7h−11およびDIM7h−14親dAbを用いて作製した(DOM7h−11およびDOM7h−14の配列に関しては国際公開番号第WO2008/09158号を参照されたい)。CDRライブラリーをpDOM4ベクター中で作製し、エラープローンライブラリーをpDOM33ベクター中で作製した(プロテア−ゼ処理の要否選択を可能にするために)。ベクターpDOM4は、遺伝子IIIシグナルペプチド配列が酵母糖脂質アンカー型表面(GAS)タンパク質シグナルペプチドに置き換えられているFdファージベクターの誘導体である。また、ベクターpDOM4は、リーダー配列と遺伝子IIIの間にc−mycタグを含み、このタグによって遺伝子IIIがインフレームに戻る。このリーダー配列は、ファージディスプレイベクターだけでなく他の原核生物発現ベクターでも十分に機能し、広く一般に使用することができる。pDOM33は、c−mycタグが取り除かれているpDOM4ベクターの修飾型バージョンであり、dAb−ファージ融合体をプロテアーゼトリプシンに耐性にする。これは、プロテアーゼに対してより安定なdAbを選択するファージ選択内で、トリプシンの使用を可能にする(国際公開番号第WO2008/149143号を参照されたい)。
3つのファージ選択戦略をVk AlbudAb(商標)(抗血清アルブミンdAb)親和性成熟に対して採用した。
1)HSAのみに対する選択:
HSAに対する選択を3回行った。すべての回でエラープローンライブラリーおよび各CDRライブラリーを個別のプールとして選択した。1回目の選択は、1mg/mLをイムノチューブ上に受動的にコーティングしたHSAに対して行った。2回目は、100nMのHSAに対して行い、および3回目は10nM(CDR選択)または20nMまたは100nM(エラープローンの選択)のHSAに対して行った。両選択は、可溶性ライブラリーの選択としてを行った。続いて可溶性ライブラリーの選択として1.5nMのHSAに対するエラープローンライブラリーを用いて4回目の選択を行った。エラープローンライブラリーを0.1Mのグリシン、pH2.0で溶出して、1MのTris、pH8.0で中和した。およびCDRライブラリーを1mg/mLのトリプシンで溶出して、対数期TG1細胞に感染させた。各選択の3回目にスクリーニングのためにpDOM5にサブクローニングした。可溶性ライブラリーの選択には、ビオチン化HSAを使用した。
親クローンと比較するとプロテアーゼ耐性が増加し、かつ潜在的に生物物理学的特性が改善したdAbを選択するために、ファージ選択でトリプシンを使用した(国際公開番号第WO2008/149143号を参照されたい)。4回の選択をHSAに対して行った。エラープローンライブラリーの1回目の選択を、トリプシンなしで1mg/mLを受動的にコーティングしたHSAに対して行い、2回目の選択を、20μg/mLのトリプシンとともに1mg/mLを受動的にコーティングしたHSAに対して37℃で1時間行い、3回目の選択を、ビオチン化HSAを用いる可溶性選択によって、20μg/mLまたは100μg/mLのトリプシンとともに100nMのHSAに対して37℃で1時間行った。選択の最終回を、ビオチン化HSAを用いる可溶性選択によって、100μg/mLのトリプシンとともに100nMのHSAに対して37℃で終夜行った。
1回目の選択は、1mg/mLを受動的にコーティングしたHSAに対して、または1μMのHSA(可溶性選択)に対して行い、続いてビオチン化RSAに対する可溶性選択をさらに3回(1回目は1μMの濃度で、2回目は100nMで、3回目は20nM、10nMまたは1nMで)行った。
いずれの場合も選択後、適切な選択の回に由来するファージDNAのプールを、QIAfilter Midiprepキット(Qiagen)を使用して調製し、このファージDNAを制限酵素Sal1およびNot1を用いて消化させ、次いで濃縮したV遺伝子をpDOM5可溶性発現ベクター内の対応する部位に連結する。pDOM5はmycタグを有するdAbを発現する(国際出願番号PCT/EP2008/067789を参照されたい)。連結したDNAを用いて、大腸菌(E.coli)HB2151細胞を電気形質転換させ、次いでこれらの細胞を、抗生物質カルベニシリンを含有する寒天板上で終夜、増殖させる。結果として得たコロニーを抗原結合に関して個別に評価する。いずれの場合にも、HSA、CSA(カニクイザル血清アルブミン)、MSA(マウス血清アルブミン)およびRSAとの結合に関して、少なくとも96コロニーをBIAcore(商標)(表面プラズモン共鳴法)によって調べた。MSA抗原はSigmaから入手し(基本的に脂肪酸フリー、約99%(アガロースゲル電気泳動法)、凍結乾燥粉末カタログ番号A3559)、およびCSAはPrometic blue樹脂(Amersham)を使用して、カニクイザル(Cynomolgus)の血清アルブミンから精製した。可溶性dAb断片を、96ウェルプレート中のONEX培地(Novagen)の細菌培養で、37℃で終夜生成した。高密度HSA,CSA、MSA、およびRSAのCM5チップに結合させるために、可溶性dAbを含む培養上清を遠心して、BIAcoreで分析した。解離速度スクリーニングによって、クローンがこれらすべての種の血清アルブミンに結合することがわかった。クローンを配列決定して、ユニークなdAb配列を明らかにした。
DOM7h−11−3:CDR2ライブラリー(Y49、A50、A51、S53)を使用して、HSAに対して行った親和性成熟に由来する。10nMのHSAでの3回の回収。
DOM7h−14−19:エラープローンライブラリーを使用して、HSAに対して行った親和性成熟に由来する。100μg/mLのトリプシンとともに3回の回収(100nM,HSA)。
DOM7h−14−10、DOM7h−14−18、DOM7h−14−28、DOM7h−14−36:CDR3ライブラリー(Y92、Y93、T94、N96)を使用してHSAに対して行った親和性成熟に由来する。3回の回収。
2.5Lの振盪フラスコ内のOnex培地で、250rpmで振盪しながら30℃で48時間培養した後、通常の細菌発現レベルを決定した。生物物理学的特性をSEC MALLSおよびDSCによって決定した。SEC MALLS(多角度レーザー光散乱による分子ふるいクロマトグラフィー)は、溶液中の巨大分子の特徴づけのための非侵襲性手法である。手短に言えば、タンパク質(0.5mL/minのダルベッコPBSバッファ中1mg/mLの濃度)を、それらの流体力学的性質によって、分子ふるいクロマトグラフィー(カラム:TOSOH Biosciences製のTSK3000、Pharmacia製のS200)を用いて分離する。分離の後に、光を散乱させるタンパク質の性質を、多角度レーザー光散乱(MALLS)検出器を使用して測定する。タンパク質が検出器を通る間に、散乱した光の強度を、角度関数として測定する。屈折率(RI)検出器を使用して決定されるタンパク質濃度とこの測定との組み合わせは、適切な式(解析ソフトウェアAstra v.5.3.4.12の整数部)を用いてモル質量の算出を可能にする。
DOM7h−14−10、DOM7h−14−18、DOM7h−14−19,DOM7h−11、DOM7h−11−12およびDOM7h−11−15のAlbudAbをpDOM5ベクターにクローン化した。各AlbudAb(商標)に対して20〜50mgの量を大腸菌(E.coli)内で発現させ、タンパク質L親和性樹脂を使用して細菌培養上清から精製し、次いで100mMのグリシン、pH2を用いて溶出した。これらのタンパク質をQスピンカラム(Vivascience)を使用して、1mg/mLを超えるまで濃縮し、PBSにバッファ交換し、次いでエンドトキシンを枯渇させた。ラットの薬物動態解析(PK)のために、1化合物あたり3匹のラットを用いて、AlbudAbを2.5mg/kgで単回静脈注入として投与した。血清試料を、0.16時間、1時間、4時間、12時間、24時間、48時間、72時間、120時間、168時間で採取した。血清レベルの分析を、下述の方法により抗myc ELISAによって行った。
血清中のAlbudAb濃度を抗myc ELISAによって測定した。手短に言えば、ヤギ抗mycポリクローナル抗体(1:500;Abcamカタログ番号ab9132)を,Nunc96ウェルMaxisorpプレート上に終夜コ−ティングし、5%BAS/PBS+1%Tweenでブロックした。血清試料を、既知の濃度の標準溶液と一緒に希釈剤の範囲で加えた。次いで、ウサギポリクローナル抗Vk(1:1000;社内試薬、血液試料をプールし、使用する前にタンパク質A精製を行った)、さらに抗ウサギIgG HRP抗体(1:10,000;Sigma、カタログ番号A2074)を用いて、結合したmycタグ付きAlbudAbを検出した。アッセイの各段階の間に、プレートを3×PBS+0.1%Tween20で、続いて3×PBSで洗浄した。最終的な洗浄の後、TMB(SureBlue TMB1−コンポーネントマイクロウェルペルオキシダーゼ基質、KPL、カタログ番号52−00−00)を加えて、発現を可能にした。この発現を1MのHClで停止させ、次いで450nmでの吸光度を使用してシグナルを測定した。
ラット、マウスおよびカニクイザルの試験に由来する薬物動態パラメータを、ノンコンパートメントモデルを使用して、フィッティングさせた。キー:AUC:投与時間から無限大へ補外される曲線の下面積:CL:クリアランス;t1/2:血中濃度が半減する時間;Vz:終末相に基づく分布量。
クローン化および発現
単一AlbudAbならびに親和性成熟したVk AlbudAbをインターフェロンα2b(IFNα2b)に連結させて、AlbudAbの有用なPKが融合タンパク質として維持されているかどうかを決定した。
インターフェロンα2bアミノ酸配列:
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRRISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE(配列番号374)
インターフェロンα2bヌクレオチド配列:
TGTGATCTGCCTCAAACCCACAGCCTGGGTAGCAGGAGGACCTTGATGCTCCTGGCACAGATGAGGAGAATCTCTCTTTTCTCCTGCTTGAAGGACAGACATGACTTTGGATTTCCCCAGGAGGAGTTTGGCAACCAGTTCCAAAAGGCTGAAACCATCCCTGTCCTCCATGAGATGATCCAGCAGATCTTCAATCTCTTCAGCACAAAGGACTCATCTGCTGCTTGGGATGAGACCCTCCTAGACAAATTCTACACTGAACTCTACCAGCAGCTGAATGACCTGGAAGCCTGTGTGATACAGGGGGTGGGGGTGACAGAGACTCCCCTGATGAAGGAGGACTCCATTCTGGCTGTGAGGAAATACTTCCAAAGAATCACTCTCTATCTGAAAGAGAAGAAATACAGCCCTTGTGCCTGGGAGGTTGTCAGAGCAGAAATCATGAGATCTTTTTCTTTGTCAACAAACTTGCAAGAAAGTTTAAGAAGTAAGGAA (配列番号375)
リーダー配列(アミノ酸):
METDTLLLWVLLLWVPGSTG (配列番号382)
リーダー配列(ヌクレオチド):
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCCGGATCCACCGGGC (配列番号383)
AlbudAb−IFNα2b融合タンパク質の各血清アルブミンに対する結合親和性(KD)を決定するために、HBS−EP BIAcoreバッファ中、5000nM〜39nM(5000nM、2500nM、1250nM、625nM、312nM、156nM、78nM、39nM)の濃度の融合タンパク質を使用することによって、アルブミン(一級アミンカップリングによってCM5チップ上に固定化した;BIAcore)上で、精製した融合タンパク質をBIAcoreによって分析した。
IFNα2b−DOM7h−14およびIFNα2b−DOM7h−11の変異体の場合、好ましい生物物理学的パラメータおよび発現レベルが親和性成熟の間、維持された。
AlbudAb−IFNα2b融合体であるDMS7321(IFNα2b−DOM7h−14)、DM7322(IFNα2b−DOM7h−14−10)、DMS7323(IFNα2b−DOM7h−14−18)、DM7324(IFNα2b−DOM7h−14−19)、DMS7325(IFNα2b−DOM7h−11)、DM7326(IFNα2b−DOM7h−11−12)、DM7327(IFNα2b−DOM7h−11−15)を、HEK293細胞中で20〜50mgの量でmycタグを用いて発現させ、次いでタンパク質L親和性樹脂を用いて培養上清から精製して、100mMグリシン、pH2を用いて溶出した。Qスピンカラム(Vivascience)を使用して、これらのタンパク質を1mg/mLを超えるまで濃縮して、ダルベッコPBSにバッファ交換し、次いでエンドトキシンを枯渇させた。
他の化学物質、すなわち、ドメイン抗体(dAB)、ペプチドおよびNCEに融合した種々のAlbudAbを試験した。結果を表18に示す。
新規化学物質(NCE)のAlbudAb融合体を試験した。NCE、小分子ADAMTS−4阻害剤をPEGリンカー(PEG4リンカー、すなわち、マレイミドの前の4PEG分子)と、AlbudAbへの抱合のためのマレイミド基とを用いて合成した。AlbudAbへのNCEの抱合は、アミノ酸のR108C位で設計されたシスチン残基、またはAlbudAbの末端で設計された5アミノ酸(GGGGSC)もしくは6アミノ酸(TVAAPSC)スペーサを介して行った。手短に言えば、このAlbudAbをTCEP(Pierce、カタログ番号77720)で還元し、PD10カラム(GE Healthcare)を使用して25mMのBis−Tris、5mMのEDTA、10%(v/v)グリセロール、pH6.5により脱塩した。5倍モル過剰のマレイミド活性NCEを、10%(v/v)最終濃度を超えないようにDMSOに加えた。この反応を室温で終夜、インキュベートし、20mMのTris、pH7.4になるように徹底的に透析した。
PEGリンカー:
DOM7h−14R108C:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGSQLSWYQQKPGKAPKLLIMWRSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQGLRHPKTFGQGTKVEIKC (配列番号412)
ヌクレオチド:
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACCGTGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGTGGATTGGGTCTCAGTTATCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCATGTGGCGTTCCTCGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCACGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCTACGTACTACTGTGCTCAGGGTTTGAGGCATCCTAAGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAATGC (配列番号413)
DOM7h−14−10/TVAAPSCおよびDOM7h−14−10/GGGGSC(すなわち、DOM7h−14−10/G4SC)の配列については表5を参照されたい。
DOM7h−11−15S12Pのアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLPASVGDRVTITCRASRPIGTMLSWYQQKPGKAPKLLILAFSRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQAGTHPTTFGQGTKVEIKR (配列番号414)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGCCTGCATCTGTAGGAGACCGTGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCGTCCGATTGGGACGATGTTAAGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCCTTGCTTTTTCCCGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCACGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCTACGTACTACTGCGCGCAGGCTGGGACGCATCCTACGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG (配列番号415)
GCAACAGCGTCGACGGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGCCTGCATCTGTAGG (配列番号416).
Claims (28)
- DOM7h−11(図1に示すDOM7h−11)の抗血清アルブミン(SA)免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体であって、DOM7h−11と比較して、FW2/CDR2接合部(49位〜51位、Kabatによるナンバリング)に少なくとも1個の変異を含み、かつ、DOM7h−11のアミノ酸配列と比較して2〜8個の変化を有する、変異体。
- 49位(Kabatによる)がLeuである、請求項1に記載の変異体。
- 50位(Kabatによる)がAlaまたはTrpである、請求項1または2に記載の変異体。
- 51位(Kabatによる)がPheまたはAsnである、請求項1、2または3に記載の変異体。
- DOM7h−11−3(配列番号5)、DOM7h−11−15(配列番号2)、DOM7h−11−12(配列番号1)およびDOM7h−11−19(配列番号4)から選択される単一可変ドメインのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、あるいは、選択されたアミノ酸配列と比較して最高4個までの変化を有するアミノ酸配列を含み、ここで、そのアミノ酸配列が請求項1〜4のいずれか一項に定義される変異をFW2/CDR2接合部に少なくとも1個有する、請求項1に記載の変異体。
- DOM7h−11−15S12P(配列番号414)のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、あるいは、DOM7h−11−15S12Pのアミノ酸配列と比較して最高4個までの変化を有するアミノ酸配列を含み、ここで、そのアミノ酸配列が請求項1〜4のいずれか一項に定義される変異をFW2/CDR2接合部に少なくとも1個有する、請求項1に記載の変異体。
- DOM7h−11の抗血清アルブミン(SA)免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体であって、DOM7h−11(図1に示す)と比較して32位(Kabatによるナンバリング)にMetを含み、かつ、DOM7h−11のアミノ酸配列と比較して0〜4個の変化をさらに有する、変異体。
- DOM7h−11(図1に示す)と比較して、FW2/CDR2接合部(49位〜51位、Kabatによるナンバリング)に少なくとも1個の変異を含む、請求項7に記載の変異体。
- DOM7h−11(図1に示す)と比較して、
49位=L、
50位=AまたはW、
51位=FまたはN、
87位=H、および
91位=T
から選択される少なくとも1個の変異を含む、請求項7に記載の変異体。 - DOM7h−11−12(配列番号1)、DOM7h−11−15(配列番号2)、DOM7h−11−18(配列番号3)およびDOM7h−11−19(配列番号4)から選択される単一可変ドメインのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、あるいは、選択されたアミノ酸配列と比較して最高4個までの変化を有するアミノ酸配列を含み、ここで、そのアミノ酸配列が32位にMetを有する、請求項7に記載の変異体。
- DOM7h−11−15S12P(配列番号414)のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、あるいは、選択されたアミノ酸配列と比較して最高4個までの変化を有するアミノ酸配列を含み、ここで、そのアミノ酸配列が32位にMetを有する、請求項7に記載の変異体。
- 表面プラズモン共鳴法で測定される、約0.1〜約10000nM、任意に約1〜約6000nMの解離定数(KD)で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の変異体。
- 表面プラズモン共鳴法によって測定される、約1.5×10−4〜約0.1sec−1、任意に約3×10−4〜約0.1sec−1の解離速度定数(Kd)で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の変異体。
- 表面プラズモン共鳴法によって測定される、約2×106〜約1×104M−1sec−1、任意に約1×106〜約2×104M−1sec−1の会合速度定数(Ka)で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の変異体。
- 表面プラズモン共鳴法で測定される、約0.1〜約10000nM、任意に約1〜約6000nMの解離定数(KD)で、カニクイザル(Cynomolgus monkey)SAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1〜14のいずれか一項に記載の変異体。
- 表面プラズモン共鳴法によって測定される、約1.5×10−4〜約0.1sec−1、任意に約3×10−4〜約0.1sec−1の解離速度定数(Kd)で、カニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の変異体。
- 表面プラズモン共鳴法によって測定される、約2×106〜約1×104M−1sec−1、任意に約1×106〜約5×103M−1sec−1の会合速度定数(Ka)で、カニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の変異体。
- 請求項1〜17のいずれか一項に記載の抗SA変異体と、SA以外の標的抗原に特異的に結合する結合部分とを含んでなる、多重特異性リガンド。
- 薬物(任意にNCE薬物)に抱合されており、任意に、前記選択された変異体がDOM7h−11−15(配列番号2)、DOM7h−11−15S12P(配列番号414)またはDOM7h−11−12(配列番号1)であってもよい、請求項1〜17のいずれか一項に記載の抗SA変異体単一可変ドメイン。
- 請求項1〜17のいずれか一項に記載の変異体に融合されたポリペプチド薬物またはペプチド薬物を含んでなる融合タンパク質であって、任意に、前記選択された変異体がDOM7h−11−15(配列番号2)、DOM7h−11−15S12P(配列番号414)またはDOM7h−11−12(配列番号1)であってもよい、融合タンパク質。
- 前記変異体と前記薬物の間にリンカー(例えば、アミノ酸配列TVA、任意にTVAAPSを含むリンカー)を含む、請求項20に記載の融合タンパク質。
- 請求項1〜21のいずれか一項に記載の変異体、融合タンパク質またはリガンド、および薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤もしくはビヒクルを含む、組成物。
- 請求項1〜17のいずれか一項に記載の変異体、請求項18に記載の多重特異性リガンド、または請求項20もしくは21に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでなる、核酸。
- DOM7h−11−3(配列番号5)、DOM7h−11−15(配列番号2)、DOM7h−11−12(配列番号1)、DOM7h−11−18(配列番号3)およびDOM7h−11−19(配列番号4)のヌクレオチド配列から選択されるDOM7h−11変異体のヌクレオチド配列、または前記選択された配列と少なくとも80%同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、核酸。
- DOM7h−11−15S12P(配列番号414)のヌクレオチド配列、または前記選択された配列と少なくとも80%同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、核酸。
- 請求項23、24または25に記載の核酸を含んでなる、ベクター。
- 請求項26に記載のベクターを含んでなる、単離された宿主細胞。
- 患者における疾患または障害を治療または予防する方法であって、請求項1〜22のいずれか一項に記載の変異体の少なくとも1用量を前記患者に投与することを含んでなる、方法。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013529080A (ja) * | 2010-05-20 | 2013-07-18 | グラクソ グループ リミテッド | 改良された抗血清アルブミン結合変異体 |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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WO2011008814A2 (en) | 2009-07-14 | 2011-01-20 | Immune Tolerance Institute, Inc., A California Not-For-Profit Corporation | Multiplexed measurement of exogenous and endogenous dna |
AU2010303112A1 (en) * | 2009-09-30 | 2012-04-26 | Glaxo Group Limited | Drug fusions and conjugates with extended half life |
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WO2018224439A1 (en) * | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Numab Innovation Ag | Novel anti-hsa antibodies |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008096158A2 (en) * | 2007-02-08 | 2008-08-14 | Domantis Limited | Antibody single variable domains against serum albumin |
WO2008149149A2 (en) * | 2007-06-06 | 2008-12-11 | Domantis Limited | Polypeptides, antibody variable domains and antagonists |
Family Cites Families (17)
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US20100081792A1 (en) * | 2001-06-28 | 2010-04-01 | Smithkline Beecham Corporation | Ligand |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008096158A2 (en) * | 2007-02-08 | 2008-08-14 | Domantis Limited | Antibody single variable domains against serum albumin |
WO2008149149A2 (en) * | 2007-06-06 | 2008-12-11 | Domantis Limited | Polypeptides, antibody variable domains and antagonists |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013529080A (ja) * | 2010-05-20 | 2013-07-18 | グラクソ グループ リミテッド | 改良された抗血清アルブミン結合変異体 |
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