JP2012513980A5

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Info

Publication number: JP2012513980A5
Application number: JP2011542921A
Authority: JP
Filing date: 2009-12-28
Publication date: 2013-02-07
Anticipated expiration: 2029-12-28

Claims

ａ）Ｘ_aＸ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ_bＸ_c（配列番号３７）、
ここで、
‐Ｘ_a又はＸ_cは、存在するとき、少なくとも２つのアミノ酸を含み、ペプチドタグを興味ある蛋白質に結合させ、
‐Ｘ_bは、存在するとき、ペプチド配列ＲＲＭＱＹＮＲＲ（配列番号３８）を含み、前記残基の少なくとも１つは、置き換えられる本来の残基中に存在する少なくとも１つの側鎖が存在しない非天然又は天然アミノ酸で置き換えられ、
‐Ｘ₁は、その側鎖にＯＨ基を含む任意のアミノ酸からなり、
‐Ｘ₂は、システインを除く任意のアミノ酸からなり、
‐Ｘ₃は、アルギニン、グリシン、リジンからなる群より選択されるアミノ酸からなり、
‐Ｘ₄は、アラニン、グリシン、リジン又はアルギニンのいずれかである少なくとも１つのアミノ酸からなり、
‐Ｘ₅は、システインを除く少なくとも１つのアミノ酸を含む；
ｂ）群ａ）に記載のペプチドタグのレトロインベルソ型；
からなる群より選択される、興味ある蛋白質をＴｃ又はＲｅ放射性核種で放射能標識化するためのペプチドタグの使用。
Ｘ₅が、ノルロイシンを含む請求項１に記載の使用。
Ｘ₁が、スレオニン、セリン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸を含む群より選択される請求項１又は２に記載の使用。
Ｘ₂が、グリシンからなる請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
ペプチドタグが：
（配列番号１４）；（配列番号１５）；（配列番号１６）；（配列番号１７）；（配列番号１８）；（配列番号１９）；（配列番号２０）；（配列番号２１）；（配列番号２２）；（配列番号２３）；（配列番号２４）；（配列番号２５）；（配列番号２６）；（配列番号２７）；（配列番号３４）；（配列番号３９）；（配列番号２）；（配列番号３）；（配列番号４）；（配列番号５）；（配列番号６）；（配列番号７）；（配列番号８）；（配列番号９）；（配列番号１０）；（配列番号１１）；（配列番号１２）；（配列番号１３）
からなる群より選択される請求項１に記載の使用。
前記ペプチドタグが、遊離Ｎ末端をＮ末端残基上に含む請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
前記ペプチドタグが、遊離カルボキシレートをＣ末端残基上に含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
前記Ｔｃ放射性核種が、^99mＴｃである請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
前記Ｒｅ放射性核種が、¹⁸⁶Ｒｅ又は¹⁸⁸Ｒｅである請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
請求項１〜５のいずれか１項に規定されるペプチドタグのコード配列と、前記ペプチドタグにインフレームで蛋白質コード配列が導入され、融合蛋白質を形成するように配置されたクローニングサイトと、標的細胞又は無細胞発現系において前記融合蛋白質を発現するのに必要な転写因子とを含むことを特徴とするベクター。
前記蛋白質が、液相合成又は固相合成によって合成される、請求項１〜９のいずれか１項に規定されるペプチドタグを含む蛋白質を合成する方法。
ａ）前記標的蛋白質の精製サンプルを活性化剤で活性化する工程と、
ｂ）前記ペプチドタグの精製サンプルを活性化剤で活性化する工程と、
ｃ）工程ａ）及び工程ｂ）の生成物をインキュベートし、ペプチドタグ‐標的蛋白質複合体を精製する工程と
を含む、請求項１〜９のいずれか１項に規定されるペプチドタグを標的蛋白質に化学的に結合させる方法。
ａ）前記興味ある蛋白質を含む水溶液に
（i）塩基性ｐＨ条件下の還元剤の水溶液と、
（ii）テクネチウム酸（VII）の塩（ペルテクネテート塩）の水溶液と
を逐次的に加える工程と、
ｂ）１〜１０分間室温にて、工程ａ）からの溶液をインキュベートする工程と
を含む、請求項１〜９のいずれか１項に規定されるペプチドタグを含む興味ある蛋白質をＴｃ核で標識化する方法。
工程ａ）中、（iii）ＮＨ₄ＴｃＯ₄の水溶液も加える請求項１３に記載の方法。