JP2012512822A - ピリミジン−2−イルアミノ誘導体および炎症を治療するためのその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
[式中
X1およびX2は、各々同時にNまたはCHであり;
X3は、CH−R2またはN−SO2R(式中、Rは低級アルキル基である)であり;
R1は、0〜3個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり;
R2は、
特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲を含む本願で使用される以下の用語は、以下に示す定義を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の「a」、「an」、及び「the」は、文脈上特に断りのない限り、複数の対象を含むことに留意しなければならない。
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸とともに形成される酸付加塩;または、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸(hydroxynaphtoic acid)、2−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、2−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸、p−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸などの有機酸とともに形成される酸付加塩;
あるいは、親化合物の中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオンにより置換されたときに形成される塩;あるいは有機または無機塩基が配位した塩。許容しうる有機塩基は、ジエタノールアミン、エタノールアミン、N−メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどを含む。許容しうる無機塩基は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどを含む。
(i)病状の予防、すなわち、病状に曝されるか、または病状に罹患しやすい可能性があるが、未だ病状を経験していないか、または病状の病徴を示していない被験体において病状の臨床症状を発生させないこと、
(ii)病状の阻害、すなわち、病状またはその臨床症状の発生を妨げること、あるいは
(iii)病状の軽減、すなわち、病状またはその臨床症状を一時的または永続的に後退させること。
一般的に、本願の中で使用される命名法は、IUPACの体系的命名法を作成するためにBeilstein Instituteによりコンピュータ化されたシステムであるAUTONOM(商標)v.4.0に基づく。本明細書に示される化学構造は、ISIS(登録商標)バージョン2.2を使用して作成した。本明細書における構造中の炭素、酸素または窒素原子に出現する任意の空の結合価(open valency)は、水素原子の存在を示す。
本発明の1つの局面は、式I:
[式中
X1およびX2は、各々同時にNまたはCHであり;
X3は、CH−R2またはN−SO2R(式中、Rは低級アルキルである)であり;
R1は、0〜3個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり;
R2は、
であり、R3はHである。さらなる態様では、R1は、0〜3個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、R1は、0〜3個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
であり、R3はHである。さらなる態様では、R1は、0〜3個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、R1は、0〜3個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
などのR1のボロン酸誘導体、ならびにこれらのエステルおよび塩から選択される第1の試薬と、式Pd[P(C6H5)3]4を有する第2の試薬とで処理することにより、本発明の化合物を調製するためのプロセスである。
本発明の化合物は、以下の実施例の項に示す実例となる例において記載される様々な方法によって作製することができる。これらの化合物の調製に用いられる出発物質および試薬は、一般的に、Aldrich Chemical Co.などの商業的供給元から入手可能であるか、またはFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplements; and Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40などの参照文献に記載されている手順に従って当業者に公知の方法により調製される。以下の合成反応スキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例証であり、これらの合成反応スキームに対して様々な変更を行ってもよく、前記変更は、本明細書に含まれる開示を参照した当業者に示唆される。
本発明の化合物は、JNK調節剤であり、したがって広範囲にわたるJNK介在性障害の治療に有効であると予想される。例示的なJNK介在性障害は、自己免疫障害、炎症性障害、代謝性障害、神経系疾患、および癌を含むが、これらに限定されない。したがって、本発明の化合物を用いて、このような障害のうち1つ以上を治療することができる。いくつかの態様では、本発明の化合物を用いて、関節リウマチ、喘息、II型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病または卒中などのJNK介在性障害を治療することができる。
本発明は、本発明の少なくとも1つの化合物、あるいはその個々の異性体、異性体のラセミ混合物もしくは非ラセミ混合物、または薬学的に許容しうる塩もしくは溶媒和物とともに、薬学的に許容しうる担体、場合により他の治療成分および/または予防成分を含む薬学的組成物を含む。
本発明のさらなる目的、利点および新規特徴は、これらに限定することを意図するものではないが、以下の本発明の実施例を検討することにより当業者に明らかになるであろう。
AcOH(酢酸);Bn(ベンジル);BOP(ベンゾトリアゾール−1−イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート);(BOC)2O(ジ−tert−ブチルジカーボネート;CSI(クロロスルホニルイソシアネート);DBU(1,8−ジアザビシクロ[5.4.0]−ウンデカ−7−エン;DCM(ジクロロメタン(塩化メチレン));DEA(ジエチルアミン);DIPEA(ジイソプロピルエチルアミン);DMF(N,N−ジメチルホルムアミド);EDCI(1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩;Et2O(ジエチルエーテル);EtOH(エタノール);EtOAc(酢酸エチル);HOBt(1−ヒドロキシベンゾトリアゾール);i−PrOH(イソプロパノール);LAH(水素化アルミニウムリチウム);m−CPBA(また、MCPBA)(3−クロロペルオキシ安息香酸);MeOH(メタノール);MW(マイクロ波);NCS(N−クロロスクシンイミド);NMP(1−メチル−2−ピロリジノン);p−TSA(p−トルエンスルホン酸);RT(室温);TEA(トリエチルアミン);THF(テトラヒドロフラン);TLC(薄層クロマトグラフィー)。
AcOH(100mL)中の3−ニトロベンゼン−1,2−ジアミン(15.0g)の混合物に、NaNO2(7.0g)を添加した。RTで15分間反応混合物を撹拌し、次いで、約2時間60℃で加熱したところ、その間に反応混合物は赤色になった。混合物をRTに冷却し、氷水で希釈し、得られた沈殿物を濾過し、氷水で洗浄し、次いで真空下で乾燥させて、薄茶色の固体として4−ニトロ−1H−ベンゾトリアゾール(13.45g、収率83.6%)を得た。さらに精製することなく、生成物を使用した。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(0.4g)、o−トリルボロン酸(0.104g)およびNa2CO3(2M、1.1mL、脱気)の混合物をアルゴンで5分間脱気し、次いで、15分間N2下でRTにて撹拌した。これに、トルエン(13mL、脱気)およびEtOH(1mL)とともにPd(PPh3)4(0.025g)を添加し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−o−トリル−ベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロへキシル}−メタノン(化合物2、0.272g、73%)を得た。Mp=224〜226℃;M+H=512。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(0.31g)、4−メチル−ピリジン−3−ボロン酸(0.086g)、およびNa2CO3(2M、0.86mL、脱気)の混合物をアルゴンで5分間脱気し、次いで、15分間N2下でRTにて撹拌した。これに、トルエン(13mL、脱気)およびEtOH(1mL)とともにPd(PPh3)4(0.025g)を添加し、混合物を110℃で一晩撹拌した。TLCが出発物質の存在を示したので、4−メチル−ピリジン−3−ボロン酸(0.086g)およびPd(PPh3)4(20mg)のさらなるアリコートを添加し、混合物を110℃でさらに7時間撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(4−メチルピリン−3−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン(化合物3、0.108g、37%)を得た。Mp=194.3〜218.2℃;M+H=513。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(0.31g)、(3,5−ジメチルイソオキサゾール−4−イル)ボロン酸(0.088g)、およびNa2CO3(2M、0.86mL、脱気)の混合物を、15分間N2下でRTにて撹拌した。これに、トルエン(10mL、脱気)およびEtOH(1mL)とともにPd(PPh3)4(0.019g)を添加し、混合物を110℃で一晩撹拌した。TLCが出発物質の存在を示したので、(3,5−ジメチルイソオキサゾール4−イル)ボロン酸(0.088g)およびPd(PPh3)4(20mg)のさらなる部分を添加し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄灰色の固体を得た。前記固体を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末(0.21g)を得た。Et2O(25mL)に粉末を溶解させ、水浴中で加熱し、水浴から取り出し、消火し(extinguished)、白色粉末として(4−{4−[4−(3,5−ジメチルイソオキサゾール−4−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(化合物4、0.129g、44%)を回収した。Mp=>300℃;M+H=517。
1,4−ジオキサン(20mL)中の4−ヨード−1−(2−メタンスルフィニル−ピリミジン−4−イル)−1H−ベンゾトリアゾール(700mg)および1−メタンスルホニル−ピペリジン−4−イルアミン(642mg)の混合物をアルゴン下で撹拌し、次いで、110℃で4.5時間加熱した。次いで、反応混合物を冷却し、減圧下で溶媒を除去して、固体を得た。0〜100%のEtOAc/ヘキサンを使用して、前記固体をシリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イル]−(1−メタンスルホニル−ピペリジン−4−イル)−アミン(731mg)を得た。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(274mg)および3−チオフェンボロン酸(67mg)の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Na2CO3(2Mの水溶液、0.7mL、脱気)、トルエン(5mL、脱気)およびEtOH(5mL)を添加した。これに、Pd(PPh3)4(20mg)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をRTに冷却し、水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体(0.25g)を得た。粗生成物を、0〜70%のMagic Base/DCMで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、Et2O中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−チオフェン−3−イルベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(化合物6、201mg)を得た。mp=233〜234℃;M+H=504。
NaH(7.59g、60%)のDMF(200mL)懸濁液に、N2下で4−ブロモインドールを少しずつ添加し、混合物を0℃で15分間撹拌した。これに、4−クロロ−2−メチルスルファニル−ピリミジン(15.45mL)を少しずつ添加し、0℃で30分間反応混合物を撹拌し、次いで、更に30分間撹拌しながらRTに加温した。次いで、反応混合物を0℃の冷水でクエンチし、得られた懸濁液を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、粗生成物(41.01g)を得た。前記粗生成物(21.90g)を、ヘキサン:EtOAc(900:100)で溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体(16.4g)を得た。蒸気浴上のEtOH中で固体を加熱し、結晶化させ、濾過し、乾燥させて、4−ブロモ−1−(2−メチルスルファニル−ピリミジン−4−イル)−1H−インドールを得た。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(274mg)および4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキキソボロラン−2−イル)−ピリジン(108mg)の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Na2CO3(2Mの水溶液、0.7mL、脱気)、トルエン(5mL、脱気)およびEtOH(5mL)を添加した。これに、Pd(PPh3)4(20mg)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をRTに冷却し、水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体(0.29g)を得た。粗生成物を、0〜70%のMagic Base/DCMで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Et2O中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ピリジン−4−イル−ベンジルトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(化合物8、130mg)を得た。mp=266.0〜267.0℃;M+H=499。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(274mg)および3−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキキソボロラン−2−イル)−フラン(102mg)の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Na2CO3(2Mの水溶液、0.7mL、脱気)、トルエン(5mL、脱気)およびEtOH(5mL)を添加した。これに、Pd(PPh3)4(20mg)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をRTに冷却し、水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体を得た。粗生成物を、0〜60%のMagic Base/DCMで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Et2O中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、{4−[4−(4−フラン−3−イル−ベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(化合物9、103mg)を得た。mp=243.0〜244.0℃;M+H=488。
[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イル]−(1−メタンスルホニル−ピペリジン−4−イル)−アミン(250mg)、3−メチル−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコールエステル(109mg)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、0.7mL、脱気)、トルエン(9mL、脱気)およびEtOH(0.7mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(20mg)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をRTに冷却し、3−メチル−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコールエステル(109mg)、Pd(PPh3)4(20mg)およびEtOH(5mL)のさらなる部分を添加した。再度フラスコを密閉し、110℃で一晩加熱した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体(0.34g)を得た。固体を、0〜60%のMagic Base/DCMで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、次いで、0〜60%のMagic Base/DCMを使用して、再度シリカを用いたクロマトグラフィーで分離した。Et2Oとともに生成物を粉砕し、濾過し、減圧下で一晩乾燥させて、(1−メタンスルホニル−ピペリジン−4−イル)−{4−[4−(3−メチル−1H−ピラゾール−4−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イル}−アミン(化合物10、39mg)を得た。Mp=231〜232℃;M+H=454。
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ヨードベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン(274mg)および3−メチル−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコールエステル(109mg)、Na2CO3(2Mの水溶液、0.7mL、脱気)、トルエン(9mL、脱気)およびEtOH(0.7mL)の混合物に、10分間ねじ蓋圧力フラスコ内にてアルゴンを通気した。これに、Pd(PPh3)4(18mg)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。反応混合物をRTに冷却し、次いで、3−メチル−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコールエステル(109mg)、Pd(PPh3)4(20mg)およびEtOH(5mL)のさらなる部分を添加し、フラスコを密閉し、110℃で6時間再度加熱した。3−メチル−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコールエステル(109mg)およびPd(PPh3)4(20mg)のさらなる部分を添加し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をRTに冷却し、水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体(311mg)を得た。粗生成物(52mg)を、0〜60%のMagic Base/DCMで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Et2O中で粉砕し、濾過し、乾燥させて、(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(3−メチル−1H−ピラゾール4−イル)−ベンジルトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン(化合物11、28mg)を得た。mp=190〜195℃;M+H=502。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.51g)、3−メチル−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコールエステル(0.234g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、1.53mL、脱気)、トルエン(18mL、脱気)およびEtOH(4mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.035g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄黄色の固体(0.45g)を得た。前記固体を、0〜60%のMagic Base/DCMで溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、次いで、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:50)で溶出して、シリカを用いた再度クロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(3−メチル−1H−ピラゾール−4−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン(化合物12、0.11g、22%)を得た。Mp=215〜220℃。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.51g)、3,5−ジメチル−イソオキサゾール−4−イル−ボロン酸(0.176g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、1.53mL、脱気)、トルエン(18mL、脱気)およびEtOH(4mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.035g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄黄色の固体(0.61g)を得た。前記固体を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(900:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(3,5−ジメチル−イソオキサゾール−4−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン(化合物13、0.32g、62%)を得た。Mp=203〜204℃。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.3g)、4−メチルピリジン−3−ボロン酸(0.09g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、0.9mL、脱気)、トルエン(10mL、脱気)およびEtOH(2mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.02g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、暗褐色の油(0.38g)を得た。前記油を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:25〜1000:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(4−メチル−ピリジン−3−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン(化合物14、0.15g、29%)を得た。Mp=176〜178℃。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.3g)、o−トリル−ボロン酸(0.089g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、0.9mL、脱気)、トルエン(12mL、脱気)およびEtOH(3mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.02g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、油(0.41g)を得た。前記油を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:25)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−o−トリル−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロへキシル}−メタノン(化合物15、0.23g、46%)を得た。Mp=158〜160℃。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.3g)、4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサ−ボロラン−2−イル)−ピリジン(0.135g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、0.9mL、脱気)、トルエン(12mL、脱気)およびEtOH(3mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.02g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、油を得た。前記油を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ピリジン−4−イル−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロへキシル}−メタノン(化合物16、0.112g、30%)を得た。Mp=258〜259℃;M+H=497。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.3g)、ベンゼン−ボロン酸(0.086g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、0.9mL、脱気)、トルエン(12mL、脱気)およびEtOH(4mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.02g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、10%のMeOH−DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄茶色の固体を得た。前記固体を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:25)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−フェニル−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロへキシル}−メタノン(化合物17、0.171g、58%)を得た。Mp=190〜191℃;M+H=496。
{4−[4−(4−ブロモ−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン(0.51g)、3−チオフェン−ボロン酸(0.16g)、ならびにNa2CO3(2Mの水溶液、1.53mL、脱気)、トルエン(12mL、脱気)およびEtOH(12mL)の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Pd(PPh3)4(0.035g)を添加し、フラスコを密閉し、混合物を110℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、DCMで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を揮散させて、黄色の固体を得た。前記固体を、DCM:1%のNH4OH−MeOH(1000:50)で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、薄黄色の粉末として(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−チオフェン−3−イル−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロへキシル}−メタノン(化合物18、0.32g、63%)を得た。Mp=171〜172℃;M+H=502。
以下の表に示すように、様々な経路によって送達するための薬学的調製品を製剤する。以下の表で用いられるとき、「活性成分」または「活性化合物」は、式Iで示される化合物のうち1つ以上を意味する。
鼻内噴霧製剤として約0.025〜0.5パーセントの活性化合物を含有しているいくつかの水懸濁剤を調製する。前記製剤は、場合により、例えば、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロースなどの非活性成分を含有してもよい。塩酸を添加してpHを調節してもよい。鼻内噴霧製剤は、典型的には、1回の作動当たり約50〜100μLの製剤が鼻内噴霧定量ポンプを介して送達され得る。典型的な投与スケジュールは、4〜12時間毎に2〜4回噴霧である。
[γ−33P]ATPを用いたGST−ATF2(19−96)のリン酸化によりJNK活性を測定した。Km濃度のATPと基質を用い、25mMのHEPES(pH7.5)、2mMのジチオスレイトール、150mMのNaCl、20mMのMgCl2、0.001%のTween(登録商標)20、0.1%のBSAおよび10%のDMSOを含有するバッファ中の最終体積40μLで酵素反応を行った。ヒトJNK2α2アッセイは、1nMの酵素、1μMのATF2、1μCiの[γ−33P]ATPを含む8μMのATPを含有する。ヒトJNK1α1アッセイは、2nMのnM酵素、1μMのATF2、1μCiのCi[γ−33P]ATPを含む6μMのATPを含有する。ヒトJNK3(Upstate Biotech #14-501M)アッセイは、2nMの酵素、1μMのATF2、1μCiの[γ-33P]ATPを含む4μMのATPを含有する。いくつかの濃度の化合物の存在下または非存在下で酵素アッセイを実行した。JNKおよび化合物を10分間プレインキュベーションし、次いでATPおよび基質を添加することにより酵素反応を開始させた。30分間30℃で反応混合物をインキュベーションした。インキュベーションの終わりに、反応混合物25μLを、135mMのEDTAを含有している10%のグルタチオンSepharose(登録商標)スラリー(Amersham # 27-4574-01)スラリー150μLに移すことにより反応を終了させた。親和性樹脂に反応生成物を捕捉させ、濾過プレート(Millipore, MABVNOB50)上においてリン酸緩衝生理食塩水で6回洗浄して、遊離放射性ヌクレオチドを除去した。マイクロプレートシンチレーションカウンター(Packard Topcount)を用いて、33PのATF2への取込みを定量した。3パラメータモデルに適合させた10本の濃度阻害曲線から得られたIC50値により、JNKに対する化合物の阻害効力を測定した:阻害(%)=最大/(1+(IC50/[インヒビター])勾配)。パラメータ推定のためにMicrosoft Excelでデータを解析した。結果を以下の表2に示す:
炎症は、炎症経路の他の遺伝子に対するc−Junの作用によって部分的にレギュレーションされる。したがって、リン酸化c−Junの核への移行阻害は、化合物の抗炎症作用の指標を提供する。American Tissue Culture CollectionからSW1353細胞を購入し、培養条件(37℃、5%のCO2)下で、10%のウシ胎児血清(Invitrogen)、アスコルビン酸(Sigma)およびペニシリン/ストレプトマイシン/グルタメート(Invitrogen)を含むDMEM培地(Invitrogen)を含有する成長培地中で維持した。化合物処理の24時間前に、100μLの成長培地中に8,000細胞/ウェルの密度で細胞をプレーティングした。化合物処理直前に、成長培地を90μLの新たな培地に交換した。まず、10mMの化合物原液を化合物ビヒクル(DMSO)で3mMに希釈し、次いで、無血清培地で希釈し、各ウェルに10×濃縮溶液として10μLの体積を添加し、混合し、5% CO2中、37℃で30分間、細胞とともにプレインキュベーションした。すべてのサンプルについて、1%の終末濃度で化合物ビヒクル(DMSO)を維持した。30分間インキュベーションした後、20分間TNFα(1ng/mL、Roche Biochem)で細胞を活性化させた。次いで、細胞を固定し、透過性にし、製造業者の指示に従って、抗−リン酸化c−Jun抗体(Santa Cruz)、次いでAlexa Fluor 488で標識した二次抗体およびHoechet 33342色素(Invitrogen)で染色した。ArrayScan HCSシステム(Cellomic)により、1ウェル当り400個の細胞についてリン酸化c−Junのシグナルを測定した。ActivityBaseプログラム(IDBS)において4つのパラメータ適合関数を使用して、対照値の50%までリン酸化c−Jun活性が阻害される化合物の濃度としてIC50値を計算した。結果を以下の表3に示す:
Charles River Laboratoriesから入手したメスのWistar-Hanラットを、使用前に1週間順化させ、そして体重を95〜130gにする。ラットに、経口強制飼養を介して試験化合物を投与し、その30分後0.5μgの組み換えラットTNF−α(Biosource)を腹腔内投与する。TNF−α投与の90分後、心臓穿刺を介して血液を回収する。リチウムヘパリン分離管(BD microtainer)を使用して血漿を調製し、分析するまで−80℃で凍結させる。ラット特異的IL−6 ELISAキット(Biosource)を使用して、IL−6濃度を決定する。阻害率およびED50値(TNF−α産生が対照値の50%である化合物の投与量として計算)を決定する。結果は、本発明の化合物が、TNF−α誘導性IL−6産生を阻害することを実証する。
Harlan Laboratoriesから入手した7〜8週齢のメスのLewisラットを、使用前に1週間順化させ、そして体重を120〜140gにする。実験0日目に、不完全フロイントアジュバント(IFA;2〜3部位で合計0.1mL)中100μgのウシII型コラーゲン(Chondrex)のエマルションで、ラットの背中数部位に皮内(i.d.)感作させる。一般に、初回抗原刺激から12〜14日で関節炎誘導が観察されるが;尾の基部又は背中の別の部位に約7〜10日目に、100μgのコラーゲン/IFAを追加免疫注射(i.d.、合計0.1mL以内)して、疾患の誘導を同期させる。化合物投与は、予防的(追加免疫時又は1〜2日前に開始)であっても、治療的(追加免疫後、1〜2の初期疾患スコア(以下の臨床スコアを参照されたい)と同時に開始)であってもよい。次の21日間、疾患の発生および進行について動物を評価する。
1=足または1本の指における腫脹および/または発赤、
2=2つ以上の関節における腫脹、
3=2つを超える関節が関与している足全体の腫脹、
4=足および指全てにおける重篤な関節炎。
American Tissue Culture CollectionからSW1353細胞を購入し、37℃、5%のCO2の培養条件下で、10%のウシ胎児血清(Invitrogen)、アスコルビン酸(Sigma)およびペニシリン(Invitrogen)を含むDMEM培地(Invitrogen)からなる成長培地中で維持する。化合物処理の48時間前に、100μLの培地に、1ウェル当り1×104細胞の密度で細胞をプレーティングする。化合物処理直前に、培地を160μLの新たな培地に交換する。化合物原液(10mM)を成長培地で希釈し、各ウェルに10×濃縮溶液として20μLの体積を添加し、混合し、30分間細胞とともにプレインキュベーションする。すべてのサンプル中1%の終末濃度で化合物ビヒクル(DMSO)を維持する。30分後、10ng/mLのTNF−α(Roche Biochem)で細胞を活性化させる。TNF−αを、成長培地で作成した10×濃縮溶液として添加し、1ウェル当り20μLの体積を添加する。細胞プレートを5時間培養する。細胞培地を回収し、−20℃で保存する。製造業者(BD Bioscience)の指示に従い、IL−8の存在についてサンドイッチELISAにより培地のアリコートを分析する。Microsoft ExcelプログラムのXlfit3を用いて、IL−8産生が対照値の50%に減少した化合物の濃度としてIC50値を計算する。特定の化合物は、このアッセイにおいて0.1〜20μMの範囲のIC50値を有する。
(A) オスのBrown-Norway ラットを、3週間にわたって週1回(0日目、7日目、および14日目)、0.2mLのミョウバン中100μgのOA(オボアルブミン)でi.p.感作する。最後の感作後の週、ラットを試験する準備が整う。抗原投与の1〜2日前、動物の体重を測る。21日目、OAのエアロゾル抗原投与(45分間、1%OA)の30分前に、ビヒクルまたは化合物製剤のいずれかをラットの皮下にq.d.投与し、抗原投与の4時間後または24時間後に屠殺する(terminated)。屠殺時に、ラットに麻酔をかける(ウレタン、およそ2g/kg、i.p.)。屠殺時にPKのためにラットから血漿を回収する。屠殺時に腹大動脈から血液を採取する。気管カニューレを挿入し、3×3mLのPBSで肺を洗浄する。総白血球数および白血球百分率についてBAL流体を分析する。Coulter計数機を使用して、細胞(20〜100μL)のアリコート中の総白血球数を決定する。白血球百分率については、50〜200μLのサンプルをCytospinで遠心分離し、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を使用して光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球およびリンパ球の比率をカウントし、百分率として表す。残りのBAL流体を遠心分離して(1500rpm、10分間)、上清を−80℃で保存する。また、タンパク質および/またはRNA分析のために肺を摘出する。
Charles River LaboratoriesからオスのWistarラット(約200g)を購入する。実験前、自由に食物および水を与える。0日目、イソフルラン麻酔下で右後足の足底側に、50μL(1.0mg/mL)の100%完全フロイントアジュバント(CFA;Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA)を注射する。麻酔からの回復した後、熱痛覚過敏試験を行う実験室にラットを移動させ、30分間透明な矩形プラスチック箱に入れる。馴化の後、通常のケースにラットを戻す。
Claims (15)
- X1およびX2が各々Nである、請求項1記載の化合物。
- X1およびX2が各々CHである、請求項1記載の化合物。
- X3がN−SO2Rであり、Rがメチルである、請求項1〜4のいずれか1項記載の化合物。
- R1が、0〜3個のメチル基で置換されたフェニルである、請求項1〜5のいずれか1項記載の化合物。
- R1が、0〜3個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである、請求項1〜5のいずれか1項記載の化合物。
- ヘテロアリールが、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリルおよびピラゾリルからなる群より選択される、請求項7記載の化合物。
- (4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(4−メチル−チオフェン−3−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−ヒドロキシピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−o−トリル−ベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}メタノン;
(4−ヒドロキシピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(4−メチルピリジン−3−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−{4−[4−(3,5−ジメチル−イソオキサゾール−4−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン;
(1−メタンスルホニル−ピペリジン−4−イル)−{4−[4−(4−メチル−チオフェン−3−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イル}−アミン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(チオフェン−3−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(4−メチルチオフェン−3−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ピリジン−4−イル−ベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン;
{4−[4−(4−フラン−3−イル−ベンゾトリアゾール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−(4−ヒドロキシピペリジン−1−イル)−メタノン;
(1−メタンスルホニル−ピペリジン−4−イル)−{4−[4−(3−メチル−1H−ピラゾール−4−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イル}−アミン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(3−メチル−1H−ピラゾール−4−イル)−ベンゾトリアゾール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(3−メチル−1H−ピラゾール−4−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−{4−[4−(3,5−ジメチル−イソオキサゾール−4−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−(4−{4−[4−(4−メチル−ピリジン−3−イル)−インドール−1−イル]−ピリミジン−2−イルアミノ}−シクロヘキシル)−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−o−トリル−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−ピリジン−4−イルインドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン;
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−フェニル−インドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノン;及び
(4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−イル)−{4−[4−(4−チオフェン−3−イルインドール−1−イル)−ピリミジン−2−イルアミノ]−シクロヘキシル}−メタノンからなる群より選択される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩。 - 炎症性障害を治療するための医薬の製造における請求項1〜9のいずれか1項記載の化合物の使用。
- 炎症性障害の治療において使用するための請求項1〜9のいずれか1項記載の化合物。
- 式I
[式中、
X1およびX2は、各々同時にNまたはCHであり;
X3は、CH−R2またはN−SO2R(式中、Rは低級アルキルである)であり;
R1は、0〜3個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり;
R2は、
(式中、R3は、H、低級アシル、またはアミノ酸である)である]
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を作製するための方法であって、
式
(式中、Xはハロである)で示される第1の中間体を提供することと、
前記第1の中間体を、R1−B(OH)2、
およびこれらのエステルから選択される第1の試薬、ならびに式Pd[P(C6H5)3]4を有する第2の試薬と、嫌気性雰囲気、高pH、および高温条件下で、式Iで示される化合物を生成するのに十分な時間接触させることと、
を含む方法。 - 上記のような本発明。
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